KR101034993B1 - 말론디알데히드 검출 약제, 그것의 제조 방법 및 그것의이용을 위한 시험 키트 - Google Patents

Abstract

메타아황산수소나트륨, 인산, 염기성 푹신(BA 130) 및 탈염수로 된 용액으로 구성되어 있는, 특히 수용액, 요 또는 기타 체액 내 알데히드의 존재를 검출하는데 사용되는 약제. 메타아황산수소나트륨은 8 내지 12 그램으로 존재하고, 인산은 10 밀리리터로 존재하고 염기성 푹신은 4.8 내지 5.2 그램으로 존재하고 탈염수는 약 995 내지 1005 밀리리터로 존재한다. 시험 키트는, 그 안에 소정량의 시약을 갖고 있는 밀봉 용기, 시험될 소정량의 시료를 얻어 그것을 용기 내에 주가하기 위한 디스펜서 및 2 내지 5 분의 대기 시간 후 시약과 시료가 합해진 것의 색을 비교하기 위한 색표를 포함한다. 성분들을 합하고 그것을 적어도 10 분간 혼합하고 그런 뒤 28 내지 32 그램의 동물 골탄을 가하고 그런 다음 혼합물을 잘 교반하여 적어도 24 시간으로부터 36 시간까지의 기간 동안 방치하며 그런 후에는 골탄을 제거하고 혼합물에 인산을 서서히 가하고 그 과정 중 그것을 잘 혼합하고 탈색된 용액을 1.75 내지 1,93의 pH로 조정함에 의해 시약을 제조하는 방법이 기재되어 있다.

Description

말론디알데히드 검출 약제, 그것의 제조 방법 및 그것의 이용을 위한 시험 키트{AGENT FOR DETECTING MALONDIALDEHYDE, METHOD OF MAKING THE SAME, AND TEST KIT FOR USE THEREOF}

본 발명은 일반적으로 수용액, 혈액, 요 및 기타 체액과 같은 매질 내에 있는 알데히드를 검출하는 것 그리고 보다 상세하게는 시약, 시약을 제조하는 방법 및 알데히드, 보다 상세하게는 말론디알데히드를 검출하는 데에 시약을 사용하기 위한 시험 키트에 관한 것이다.

포유동물 피검체에 있어 스트레스는 직접 또는 간접으로 산소화 활동의 표시(증상)로 발전하고, 이것은 급속히 신체의 평상적인 환원 상태를 변화시킨다. 이 고 산소화 상태는 심한 신체적 불균형 및 실제의 신체적 손상을 야기하고 그것은 병리적 상태로 변할 수 있고 그 상태는 다시 아테롬성 동맥경화 플라크(뱐점)가 생기게 발전한다. 그런 플라크로 인해 고 수준의 지질이 침적하게 되어 특히 동맥이 폐색하게 하여 심장으로의 혈류를 차단할 수 있고 결과적으로 심장 마비를 야기할 수 있다. 이것은, 스트레스에 의해 야기된 고 산소화 상태로부터의 유리 래디칼 공격으로 야기되는 엄청나게 많은 인간 질병 상태들 중의 하나이다.

산화성 스트레스 상태는, 장쇄 다중 불포화 지방산의 절단으로 인한 특히 디 알데히드로서의 알데히드의 방출에 의해 측정될 수 있다.

본 발명자들은, 푹신에 기초를 둔 비색 시험에 의해, 소량의 요로 하기 시약을 사용함에 의해 신속하고 용이하게 수행되는 가정용 시험 키트에서 방출된 알데히드를 측정할 수 있다는 것을 발견했다. 형성된 결과적 색은, 부의 값에서 +1 내지 +3의 수준으로부터 스트레스의 수준을 평가하기 위해 검정된 시험 스트립과 비교될 수 있다.

알데히드에 대한 여러 시험은 물론 공지이다. 예를 들면 F. Feigl에 의해 저작되고 Elsevier 출판사에 의해 출판된 "스폿 시험에 의한 정성 분석", 제 3 판 395 페이지에 기재되어 있는 것과 같이, 알데히드를 함유한 시료 용액 한 방울이 시험관 내에서 72 퍼센트 황산 2ml와 혼합된 것이 있다. 그 경우, 그 다음에는 거기에 소량의 고체 크로마트롭 산(1, 8-디히드로옥시나프티아넨-3,6-디설페이트)을 가하고 그 시험관을 섭씨 60도 워터 바스 내에서 약 10 분 가열한다. 알데히드의 존재시 밝은 보라색이 나타나는데, 시험의 감도는 약 알데히드 3 ppm로 보고되어 있다.

Feigl 출판물 339-340 페이지에 기재되어 있는 다른 알데히드 시험에서는, 알데히드를 포함한 것으로 의심되는 수(또는 알코올) 용액의 한 방울을 스폿 접시 위에서 아황산 한 방울과 푹신/황산의 한 방울로 처리하고 방치한다. 시험되고 있는 시험 용액 내에 존재하는 알데히드의 양에 따라, 적색 내지 청색이 약 2 내지 30 분 내에 나타난다. 그런 시험은 보고되어 있는 대로 시험되고 있는 용액 한 방울 내에 든 약 1 마이크로그램의 포름알데히드에 감응한다. 그런 시험 및 기타 공 지의 알데히드 시험에서의 문제점은 시험이 신속하지 않고 수행하기 용이하지 않다는 것이다. 첫째의 상기 시험에서는 예컨대 항온 워터 바스 내에서 10 분간 용액 시험관을 가열할 필요가 있다. 신속하고 용이하게 수행되지 않는 알데히드 시험의 결과로서, 알데히드 시험이 의당 행해야 할 또는 통상적으로 행하는 시험 회수만큼 자주 행해지지 않는 경향이 있다.

추가의 알데히드 시험이 미국 특허 6,165,797 호에 기재되어 있다. 거기에 기재된 것에 의하면, 요를 약 90 내지 110 부의 20% 아세트산, 약 13.5 내지 16.5 부의 성분 A 및 4.5 내지 5.5 부의 성분 B로 구성된 시약과 혼합함에 의해 말론디알데히드의 존재 여부에 관해 요를 시험하는데, 성분 A는 약 18-22 그램의 메타아황산수소나트륨, 9-11 ml의 농 인산 및 약 450-550 ml의 탈이온수의 비율로 된 메타아황산수소나트륨, 인산 및 탈이온수로 구성되어있고, 성분 B는 약 0.45-0.55 그램의 염기성 푹신 대 약 90-110 ml의 성분 A의 비로 된 염기성 푹신과 성분 A로 구성되어 있다. 그렇게 하여 형성된 시약은 아세트산의 사용으로 인해 많이 산성 쪽이고, 요를 거기에 가했을 때의 반응 시간은 극히 신속하고 요의 pH의 결과로서 색 변화를 야기한다. 그래서 가짜 양성이 나타나고 그러면 일관되고 신뢰성 있게 요 중에 있는 알데히드의 존재를 검출하는 것이 설사 불가능하지는 않더라도 대단히 어렵게 된다.

이들 및 기타 이유로, 불리한 생물학적 산화를 검출할 수 있도록 따라서 의료 비용을 감소할 수 있도록, 생물학적 유체 내에 있는 극소량의 알데히드의 존재를 신뢰성 있게 검출하기 위한 개량된 시약이 요구되고 있다. 또한 개인이 가정에 서의 자기 시험에서 그것을 쉽게 이용할 수 있게 하는 방식으로 그런 시약을 포장할 필요가 있다.

본 발명의 목적은 시험 시료에 있는 알데히드의 존재를 판정하기 위한 간단한 시험을 제공하는 것이다.

다른 목적은 알데히드를 포함하고 있는 시험 시료와 혼합될 때 색 변화를 일으키는 시험 시약을 제공하는 것이다.

본 발명에 의하면, 특히 수용액, 요 및 기타 체액 내 알데히드의 존재를 검출할 시험 용액 또는 시약은 인산, 메타아황산수소나트륨, 염기성 푹신 및 탈이온수를 포함한다. 1 리터 뱃치를 위한 바람직한 요소들의 비율은 10 그램의 메타아황산수소나트륨, 10 ml의 농 인산, 5 그램의 염기성 푹신 및 약 1000 ml의 물이다.

염기성 푹신은 시험되고 있는 시료 내에 존재하는 알데히드의 양에 상관하여 산성 용액에서 색을 변화시킨다. 염기성 푹신은 피부, 요 또는 혈장 중의 알데히드와 반응하는 자주색 분말이다. 알데히드가 적거나 존재하지 않으면 색 발현이 없다. 적정 또는 고 수준의 알데히드가 존재하면 대략 존재하는 알데히드의 준위(양)에 따라 ?? 등급이 있게 된다. 푹신의 아미노 기가 알데히드와 결합하여, 혈액이나 요와 같은 생물학적 유체 중에 존재하는 알데히드의 양에 대략 의존하여 핑크 색 내지 자주색을 발생한다. 발현되는 색은 존재하는 산의 양에 의해 조절되는 pH에 좌우된다.

메타아황산수소나트륨은 공기로부터의 산소의 개입을 정지시키는 환원제이 다. 단지 알데히드만이 푹신 기와 반응하도록, 메타아황산수소 염은 유리 산소를 불활화시킨다.

시약 혼합물 위에 질소 덮개를 설치하면(질소 분위기를 유지하면) 시약과 어떤 산소 반응도 못하게 함으로써 시약의 저장 수명을 크게 연장할 수 있다. 인산은 pH를 안정화시킨다.

유리 래디칼 공격에 의해, 장쇄 다중 불포화 지방산의 파단으로 알데히드들이 방출된다.

고 수준의 알데히드는 관상 동맥 질환, 당뇨 및 파킨슨씨 병과 같은 각종 질병 및 신진대사 이상에서 발견된다.

수용액, 요, 혈액 및 기타 체액 내에 있는 알데히드에 대한 시험 방법은 미량의 알데히드를 함유할 것으로 의심되는 요와 같은 시험 시료를 상기한 시험 시약 내에 혼합하고 적어도 2 분, 바람직하게는 2-5 분 후 색 형성을 관찰하는 것이다. 바람직한 비율은 약 0.1-0.2 ml의 시험 시약에 대해 약 0.9 내지 1.1 ml의 시험 시료이다. 그런 시간 내에 혼합물이 착색하지 않으면 시험 시료는 알데히드 약 2 ppm 미만을 함유하는 것이다. 그러나 혼합물이 규정된 시간 이내 또는 그보다 일찍 예컨대 핑크-자주색으로 착색하게 되면, 시험 시료 내에 2 ppm 초과의 알데히드가 존재하는 것으로 추단하는데, 색이 더 강할수록 알데히드 농도는 더 높다.

바람직하게는, 시험 시약은 밀봉된 앰풀 또는 바이알 내에 수용한다. 시험 시료를 스냅형 앰풀 내에 있는 시약에 도입한다. 그럼으로써 수용액 중 알데히드 존재 여부에 대한 간단하고 효율적이고 신속한 시험이 이루어진다. 전형적으로는 앰풀을 주사기 또는 피펫과 같은 적당한 디스펜서 및 시료 채집용 용기와 함께 ??표가 들어 있는 포장 내에 수용한다. 이렇게 하면 개인이 자신의 요 중에 알데히드가 존재하는가를 시험할 수 있게 하는 용이하고 신뢰성 있는 방법이 얻어지는 것이다.

본 발명에 의하면 시약의 제조 방법은 다음과 같다: 먼저 약 8-12 그램의 메타아황산수소나트륨을 약 995-1005 ml의 탈이온수 중에 용해하고, 그런 뒤 10 ml의 인산과 약 4.8 내지 5.2 그램의 염기성 푹신을 가한다. 염기성 푹신은 Spectrum Chemical 사의 BA 130인 것으로 확인할 수 있다. 혼합물은 적어도 10 분간 혼합해야되고 그런 뒤 28-32 그램의 동물 골탄을 가한다. 그런 뒤 혼합물은 잘 혼합되어야하고 적어도 24 시간 그리고 36 시간까지 방치되어야 한다. 그런 뒤 혼합물을 원심분리 및 여과함에 의해 동물 골탄을 제거한다. 동물 골탄은 혼합물에서 색을 제거하여 무색 용액을 얻게 한다. 그런 뒤 혼합물에 인산을 서서히 가하고 이 과정 동안에 그것을 잘 혼합함에 의해 탈색된 용액을 1.75 내지 1.93의 pH에 조정한다.

본 발명에 의한, 바람직한 시약 제조 방법은 다음과 같다: 먼저 10 그램의 메타아황산수소나트륨을 1000 ml의 탈이온수 중에 녹인다. 그런 뒤 10 ml의 인산과 5 그램의 염기성 푹신(BA 130)을 첨가한다.

혼합물은 적어도 10 분간 혼합해야한다. 그런 뒤 30 그램의 동물 골탄을 가한다. 그런 뒤 혼합물을 잘 섞고 적어도 24 시간 동안 방치해야한다. 이때 혼합물을 원심분리 및 여과함에 의해 동물 골탄을 제거한다.

이때 탈색된 용액을 pH에 대해 조정해야한다. pH는 1.88 수순에 도달하기까지 인산을 가함에 의해 점차적으로 조정해야한다. 인산은 서서히 가하고 이 첨가 중 잘 혼합해야하는 것이 중요하다.

상기한 시험 용액은 바람직하게는 개인적 밀봉 시험 크기의 앰플 또는 통상적 의학 용액 형의 바이알 내에 저장해야한다. 그런 식으로 포장하고 냉 건조 장소에 저장하면 밀봉된 병 또는 바이알은 최단 12 개월의 기대 저장 수명을 갖는다. 적극적 알데히드 시험 절차에 의해 하기와 같이 정확한 시험 용액의 보장을 달성할 수 있다.

그런 후 수용액 중에 있는 알데히드의 존재에 대한 시험은, 약 0.9 ml의 시료 용액(흔적량의 알데히드를 함유)을 상기와 같이 처방된 약 0.1 ml의 시약 용액 중에 혼합함에 의해 이루어진다. 바람직한 시험 키트의 실시예에 있어서는, 앰풀은 밀봉되어 들어있는 0.1 ml의 시약을 포함하고 있는 1 ml 용적의 앰풀이다. 앰풀의 두부는 대략 새김 줄 근방에서 깨트려 버린다. 디스펜서는 앰풀에 약 0.9 ml의 요를 채우는데 사용된다. 시료와 시험 용액의 혼합물이 약 2-5 분의 대기 시간 후에도 무색인 채로 있으면, 시험은 음성이고 따라서 시료는 2 ppm 미만의 알데히드를 함유한다. 혼합물의 변색이 있기만 하면 약 2 ppm 이상의 농도로 알데히드가 시험 용액 중에 존재함을 나타낸다.

시험 용액이 적절히 처방되었다는 것 또는 예컨대 시약 병이 시험 용액이 아닌 것을 수용하고 있는 다른 병과 바뀌어진 것이 아닌 것을 확실히 하기 위해, 시험 용액을 시험하기 전에, 품질 관리 기법에 의해 적극적 알데히드 시험을 행하는 것 이 바람직하다.

적극적(확정) 알데히드 시험은 바람직하게는 1 ml의 가용 "적극적 알데히드 시험(시약) 용액(표준)"을 약 0.2-0.6 ml의 시료 용액을 수용하는 병 내에 주입함에 의해 수행된다. 병이 적당히 처방된 알데히드 시험(시약) 용액을 포함하고 있으면, 약 2-5 분이 되면 병 내 용액은 핑크 - 자색을 노정할 것이다. 그렇지 않으면 시험을 위해 선택되어 사용된 "시험(시약) 용액" 병은 폐기해야한다. 상기한 알데히드에 대한 적극적 시험은 10 ppm 이상의 알데히드에 대해 감응한다. 5 ppm의 경우에는, 알데히드에 대한 적극적 시험에서는 0.5 l의 탈이온수가 사용된다. 5 ppm 알데히드 시험의 경우에는 10 ppm 알데히드의 색 보다 더 강도가 약한 색이 얻어진다.

이상과 같이 생물학적 유체 중 알데히드의 존재를 검출하는데 사용될 시약, 그 시약의 제조 방법 및 개인이 사용할 수 있는 상기 시약 함유 시험 키트가 개시되었다.

Claims (14)

1. 소정량의 시약이 내재된 밀봉 용기;

   8-12 그램의 메타아황산수소나트륨, 995 내지 1005 밀리리터의 탈이온수, 10 밀리리터의 인산 및 4.8 내지 5.2 그램의 염기성 푹신(BA 130)을 포함하고 있고 1.75 내지 1.93의 pH를 갖고 있는 1 리터의 뱃치(회분)를 위한 시약;

   요(urine) 시료를 수집하기 위한 수용기;

   상기 수용기로부터 소정량의 상기 요를 취출하고 상기 용기의 밀봉부를 파괴한 후 그 요를 상기 용기 내에 투입하기 위한 디스펜서; 및

   시약과 시료가 합해진 혼합물의 색은 요 내 알데히드의 부존재 또는 존재를 나타내는데, 2-5 분의 대기 시간 후 시약과 시료가 합해진 것의 색을 비교하기 위한 색표를 포함하고 있는,

   요 내 말론디알데히드의 존재를 검출하기 위한 개인 사용을 위한 시험 키트.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 밀봉된 용기는 1 ml 용적의 용량을 갖고 그 안에 수용된 상기 소정량의 시약은 0.1 ml인 시험 키트.
3. 제 1 항에 있어서, 상기 메타아황산수소나트륨은 10 그램의 양으로 존재하는 시험 키트.
4. 제 1 항에 있어서, 상기 염기성 푹신(BA 130)은 5.0 그램의 양으로 존재하는 시험 키트.
5. 제 1 항에 있어서, 상기 시약의 pH는 1.88인 시험 키트.
6. 8 내지 12 그램의 메타아황산수소나트륨, 999 내지 1005 밀리리터의 탈이온수, 10 밀리리터의 인산 및 4.8 내지 5.2 그램의 염기성 푹신(BA 130)을 포함하고 있고 1.75 내지 1.93의 pH를 갖고 있는, 요 내 알데히드의 존재의 검출 용 시약.
7. 제 6 항에 있어서, 메타아황산수소나트륨은 10 그램으로 존재하는 시약.
8. 제 7 항에 있어서, 염기성 푹신(BA 130)은 5 그램으로 존재하는 시약.
9. 제 8 항에 있어서, pH는 1.88인 시약.
10. 8-12 그램의 메타아황산수소나트륨을 995-1005 ml의 탈이온수 중에 용해하고, 10 ml의 인산을 가하고, 4.8 내지 5.2 그램의 염기성 푹신(BA 130)을 가하고, 상기 성분들을 적어도 10 분간 혼합하고, 28-32 그램의 동물 골탄을 가하고, 골탄이 잘 분포될 때까지 혼합하고, 얻어진 혼합물을 24 내지 36 시간 동안 방치시키고, 골탄을 제거하고, 혼합물이 1.75 내지 1.93의 pH에 도달하기까지 인산을 가함에 의해 혼합물의 pH를 조정하는 단계들로 되어 있는, 1 리터의 뱃치 중에서 요 중 알데히드의 존재를 검출하는데 사용될 시약을 제조하는 방법.
11. 제 10 항에 있어서, 상기 메타아황산수소나트륨은 10 그램으로 존재하는 방법.
12. 제 10 항에 있어서, 상기 염기성 푹신(BA 130)은 5 그램으로 존재하는 방법.
13. 제 10 항에 있어서, 상기 동물 골탄은 30 그램으로 존재하는 방법.
14. 제 10 항에 있어서, 서서히 인산을 가하고 잘 교반함에 의해 상기 pH 수준을 1.88에 조정하는 방법.