CN112189765A - 含透明质酸的宠物磨牙棒组合物、制法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含透明质酸的宠物磨牙棒组合物、制法及其应用，其包括肉粉和含菌体破碎物的透明质酸或其盐，所述的组合物利用透明质酸本身具有的粘性以及菌体破碎物代替淀粉、凝胶等粘合剂或成形剂，并且在制成磨牙棒后，由于含有丰富的透明质酸，能够抑菌消炎、去除口臭、保护牙龈和口腔粘膜，消化吸收后还具有亮泽毛发、强壮骨骼的保健作用，改进了传统磨牙棒功能的单一性，在制备过程中未去除菌体，不仅节约成本、充分利用资源，使磨牙棒具有更好的营养性和适口性；而且能够起到粘合剂的作用；更为重要的是，菌体破碎物在干燥后会形成较为坚硬的颗粒，能够有效的去除宠物牙齿上的残渣、牙垢或牙菌斑。

Description

含透明质酸的宠物磨牙棒组合物、制法及其应用
技术领域
本发明涉及宠物食品技术领域，尤其涉及一种含透明质酸的宠物磨牙棒组合物、制法及其应用。
背景技术
随着我国居民生活水平的持续提高和家庭规模的缩小，饲养宠物已经成为越来越多都市人生活的一部分，人们对宠物的日益喜爱促使宠物数量快速上升，进而促使宠物食品产业逐渐成长壮大。在宠物食品中，磨牙棒的需求量日益增长，磨牙棒可以避免或减少宠物破环家具，更重要的是磨牙棒可以帮助清除宠物牙齿上的食物残渣，控制住牙垢的堆积，扫除宠物狗的牙菌斑，保持牙龈的健康，有助于消除宠物狗的口臭，保持洁白的牙齿，减少潜在的牙齿严重风险。
专利申请号为CN201710688478.1公开了一种宠物磨牙棒的制造方法，以变性淀粉、食用甘油、骨原胶、动物骨钙粉为主要原料，包括内芯和呈螺旋状卷绕于所述内芯外的牛皮层。该磨牙棒外硬内软、口感好，胶棒的磨牙功能和洁齿功能结合完美，但其制作过程繁琐、耗时长。
专利申请号为CN201910366035.X公开了一种组合宠物洁齿骨，由肉粉、马铃薯淀粉、谷朊粉、植物蛋白粉和甘油等组合而成，虽然具有高适口性，但与普通狗粮的成分较为相似，在清洁牙齿和消除口臭等方面也不具有突出优点。
专利申请号为CN202010069791.9公开了一种魔芋葡甘聚糖仿生宠物磨牙棒的制备方法，以魔芋葡甘聚糖为主要原料，添加鸡胸肉粉和鸭胸肉粉，利用凝胶优异的超轻性、压缩弹回性、耐热性以及天然材料易降解的特质，制作了弹性好耐用且环保的魔芋葡甘聚糖仿生宠物磨牙棒，但该发明营养成分单一、制作过程繁琐且适口性较差。
透明质酸钠(HA)是构成关节软骨和滑液的主要成分，对关节生理功能的发挥起着至关重要的作用，当滑液中HA浓度降低时，软骨易发生降解和破坏，导致关节生理功能障碍。因此，预期将透明质酸钠添加到磨牙棒中，在清洁牙齿的同时还能用于预防及改善宠物的关节疾病；另外，HA具有促进皮肤创伤愈合、调节细胞代谢、促进营养吸收、改善动物毛发发质等作用，并且，HA粘度高，使饲料更易成形，可替代粘合剂或成形剂的使用。
目前市场上多采用微生物发酵法制备透明质酸，多选用链球菌、乳酸球菌类、谷氨酸棒杆菌等非致病菌，以葡萄糖作为碳源，在培养基中发酵48小时，发酵结束后，过滤除去菌体，然后经过复杂的纯化步骤得到纯度较高的透明质酸，国内外大部分企业主要通过此方法生产食品级、化妆品级及医药级透明质酸钠，纯度在90％-99％之间，市场价在1000元/kg以上，成本高，若作为添加剂添加到磨牙棒中会造成不必要的浪费。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种含有透明质酸的宠物磨牙棒组合物，其是以透明质酸发酵液为原料降解后得到一定分子量的透明质酸或其盐，无需去除菌体，将含菌体的透明质酸与肉粉混合，经烘干得到软硬适中的磨牙棒，工艺简单、充分利用资源的同时能够使其营养丰富，在洁牙去除口臭的同时补充透明质酸。
本发明具体技术方案如下：
1.一种含透明质酸的宠物磨牙棒组合物，其包括肉粉和含菌体破碎物的透明质酸或其盐。
2.根据项1所述的宠物磨牙棒组合物，其中，以在组合物中所占的质量百分比计，所述肉粉为10-90％，优选为30-70％，进一步优选为40-60％；所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐为10-90％，优选为30-70％，进一步优选为40-60％。
3.根据项1或2所述的宠物磨牙棒组合物，其中，所述肉粉选自鸡肉粉、鸭肉粉、猪肉粉、牛肉粉和鱼肉粉中的一种或两种以上。
4.根据项1-3中任一项所述的宠物磨牙棒组合物，其中，所述透明质酸或其盐的分子量为200k-2000kDa，优选为400k-1800kDa，进一步优选为800k-1500kDa。
5.根据项1-4中任一项所述的宠物磨牙棒组合物，其中，所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐是由发酵生产透明质酸的发酵液制备而成，优选的，发酵液中的发酵菌种选自马链球菌马亚种、马链球菌兽疫亚种和谷氨酸棒状杆菌中的一种或两种以上。
6.根据项1-5中任一项所述的宠物磨牙棒组合物，其中，所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐包含透明质酸或其盐、菌体破碎物和水分，以在所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，所述透明质酸或其盐为30-80％，优选为40-75％，进一步优选为50-70％；所述水分为1-25％，余量为菌体破碎物。
7.一种宠物磨牙棒组合物的制备方法，其包括下述步骤：
向用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液中加入透明质酸酶、酸或碱进行降解，得到降解液；
将所述降解液进行沉淀得沉淀物，并对沉淀物进行干燥，干燥后得到含菌体破碎物的透明质酸或其盐；
将所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐与肉粉混合得到所述宠物磨牙棒组合物。
8.根据项7所述的制备方法，其中，所述透明质酸酶选自于牛或绵羊睾丸来源的透明质酸酶、微生物来源的透明质酸酶、重组人透明质酸酶和硫酸软骨素酶ABC中的一种或两种以上。
9.根据项7所述的制备方法，其中，所述酸为有机酸或无机酸，优选为无机酸；优选的，所述无机酸为醋酸或者盐酸；
优选的，所述碱为有机碱或者无机碱，优选为无机碱；优选的，所述无机碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或者碳酸氢钠。
10.根据项7-9中任一项所述的制备方法，其中，当加入透明质酸酶、酸或碱进行降解后的运动粘度为50-45000mm2/s时结束降解得到降解液，优选为100-35000mm2/s，进一步优选为1000-20000mm2/s。
11.根据项7-10中任一项所述的制备方法，其中，在降解液中加入乙醇进行沉淀，优选的，所述乙醇在降解液中的体积浓度为45-80％。
12.根据项7-11中任一项所述的制备方法，其中，沉淀物的干燥温度为20-60℃，优选的，所述沉淀物干燥后所含水分的质量百分比为1-25％。
13.根据项7-12中任一项所述的制备方法，其中，在将所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐与肉粉混合之前，将所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐过3-200目的筛网，优选为40-80目，收集筛下粉末。
14.一种含透明质酸的宠物磨牙棒，其包括将项1-6中任一项所述的含透明质酸的宠物磨牙棒组合物或者项7-13中任一项所述的制备方法制备得到的含透明质酸的宠物磨牙棒组合物通过宠物磨牙棒的模型得到。
15.一种含透明质酸的宠物磨牙棒的制备方法，其包括将项1-6中任一项所述的含透明质酸的宠物磨牙棒组合物或者项7-13中任一项所述的制备方法制备得到的含透明质酸的宠物磨牙棒组合物加入水以及任选的防腐剂，然后放入宠物磨牙棒的模型中，接着烘干得到所述的含透明质酸的宠物磨牙棒。
16.根据项15所述的制备方法，其中，烘干的温度为30-100℃，优选的，以在宠物磨牙棒中所占的质量百分比计，水分为1-25％，优选为5-20％，进一步优选为8-15％。
发明的效果
1、本发明提供了一种含有透明质酸的宠物磨牙棒的制备方法，利用透明质酸本身具有的粘性以及菌体破碎物代替淀粉、凝胶等粘合剂或成形剂。
2、本发明制备的宠物磨牙棒含有丰富的透明质酸，能够抑菌消炎、去除口臭、保护牙龈和口腔粘膜，消化吸收后还具有亮泽毛发、强壮骨骼的保健作用，改进了传统磨牙棒功能的单一性。
3、本发明在制备透明质酸的工艺过程中未去除菌体，不仅节约成本、充分利用资源，使磨牙棒具有更好的营养性和适口性；而且能够起到粘合剂的作用；更为重要的是，菌体破碎物在干燥后会形成较为坚硬的颗粒，能够有效的去除宠物牙齿上的残渣、牙垢或牙菌斑。
4、本发明采用酶解法或酸降法或碱降法得到分子量适中的透明质酸，可以通过控制发酵液运动粘度来获得所需分子量的透明质酸，以适应不同体形或不同种类的宠物而便于吸收和发挥作用；并且，降解至适宜分子量能够便于混合物的搅匀以及磨牙棒的成形性和硬度。
具体实施方式
下面对本发明做以详细说明。虽然显示了本发明的具体实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
需要说明的是，在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然而所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
本发明提供了一种含透明质酸的宠物磨牙棒组合物，其包括肉粉和含菌体破碎物的透明质酸或其盐。
所述肉粉是采用新鲜的动物皮、肌肉、内脏组织等等，经过特殊的工艺从而加工成的动物饲料添加剂。肉粉蛋白含量高，营养丰富，利于饲养动物的吸收利用，不同程度地刺激生长和繁殖，是其他营养物质所不能代替的。
本发明对肉粉的来源不受限制，例如可以为鸡肉粉、鸭肉粉、猪肉粉、牛肉粉或鱼肉粉中的一种或两种以上的混合物。
所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐是由发酵生产透明质酸的发酵液制备而成，优选的，发酵液中的发酵菌种选自马链球菌马亚种、马链球菌兽疫亚种和谷氨酸棒状杆菌中的一种或两种以上。
例如，将选自链球菌马亚种、马链球菌兽疫亚种、谷氨酸棒状杆菌等任意一种菌种接入含有碳源、氮源、无机盐、维生素和其它生长因子的培养基中，在适宜的温度、pH值下发酵适当的时间得到含透明质酸和菌体的发酵液。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，以在组合物中所占的重量百分比计，所述肉粉为10-90％，优选为30-70％，进一步优选为40-60％；所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐为10-90％，优选为30-70％，进一步优选为40-60％。
例如，以在组合物中所占的重量百分计，所述肉粉可以为10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或其之间的任意范围；
所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐可以为10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或其之间的任意范围；
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述透明质酸或其盐的分子量为200k-2000kDa，优选为400k-1800kDa，进一步优选为800k-1500kDa。
例如，所述透明质酸或其盐的分子量可以为200kDa、260kDa、300kDa、400kDa、500kDa、600kDa、700kDa、800kDa、900kDa、1000kDa、1100kDa、1200kDa、1300kDa、1400kDa、1500kDa、1600kDa、1700kDa、1800kDa、1900kDa、2000kDa或其之间的任意范围。
本发明对透明质酸盐不受限制，例如可以为透明质酸钠、透明质酸镁、透明质酸锌、透明质酸钙等。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述宠物磨牙棒组合物由肉粉和含菌体破碎物的透明质酸或其盐组成，优选的，以在组合物中所占的质量百分比计，所述肉粉为10-90％，优选为30-70％，进一步优选为40-60％；所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐为10-90％，优选为30-70％，进一步优选为40-60％。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐包含透明质酸或其盐、菌体破碎物和水分，以在所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，所述透明质酸或其盐为30-80％，优选为40-75％，进一步优选为50-70％；所述水分为1-25％，余量为菌体破碎物。
例如，以在所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，所述透明质酸或其盐为30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％或其之间的任意范围；
所述水分为1％、5％、15％、20％、25％或其之间的任意范围。
在本发明优选的一种具体实施方式中，所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐由透明质酸或其盐、菌体破碎物和水分组成，以在所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，所述透明质酸或其盐为30-80％，优选为40-75％，进一步优选为50-70％；所述水分为1-25％，余量为菌体破碎物。
本发明提供了一种宠物磨牙棒组合物的制备方法，其包括下述步骤：
向用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液中加入透明质酸酶、酸或碱进行降解，得到降解液；
将所述降解液进行沉淀得沉淀物，并对沉淀物进行干燥，干燥后得到含菌体破碎物的透明质酸或其盐；
将所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐与肉粉混合得到所述宠物磨牙棒组合物。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述透明质酸酶选自于牛睾丸来源的透明质酸酶、绵阳睾丸来源的透明质酸酶、微生物来源的透明质酸酶、重组人透明质酸酶和硫酸软骨素酶ABC中的一种或两种以上；
所述微生物来源的透明质酸酶例如可以为Streptomyces hyalurolyticus来源的透明质酸酶、马链球菌来源的透明质酸酶。
所述酸例如可以为食品行业使用的有机酸或无机酸，例如可以为柠檬酸、苹果酸、枸椽酸、抗坏血酸、醋酸、盐酸、硼酸、磷酸等。
所述碱例如可以为食品行业使用的有机碱或无机碱，例如可以为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠等。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，当加入透明质酸酶、酸或碱进行降解后的运动粘度为50-45000mm2/s时结束降解得到降解液，优选为100-35000mm2/s，进一步优选为1000-20000mm2/s。
例如，运动粘度可以为50mm2/s、100mm2/s、500mm2/s、1000mm2/s、5000mm2/s、10000mm2/s、20000mm2/s、40000mm2/s、45000mm2/s或其之间的任意范围。
本发明对结束降解的具体参数没有限制，酶解法一般通过加热或加金属离子结束酶解反应，酸法和碱法则采用中和法来结束降解。
在本发明优选的一种具体实施方式中，采用链球菌马亚种、马链球菌兽疫亚种、谷氨酸棒状杆菌等任意一种用于发酵生产透明质酸的菌种，将菌种接入含有碳源、氮源、无机盐、维生素和其它生长因子的培养基中，在适宜的温度、pH值下发酵适当的时间得到含透明质酸和菌体的发酵液。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，将所述降解液加入乙醇进行沉淀得到沉淀物，优选的，所述乙醇的体积浓度为45-80％，例如，所述乙醇的体积浓度可以为45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％或其之间的任意范围；优选的，在所述沉淀物中加入乙醇，使乙醇的体积浓度为85-95％，以得到较纯的沉淀物。
在本发明较优选的一种具体实施方式中，其中，将所述降解液进行沉淀得沉淀物的步骤为：将所述降解液中加入乙醇至乙醇体积浓度达45-80％产生沉淀，搅拌0.5-1h后静置，沉淀完全沉降后吸去上清；向上述沉淀中加入乙醇至乙醇体积浓度达85-95％，搅拌一段时间后过滤除去乙醇，保留沉淀。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，沉淀物的干燥在温度为20-60℃的条件下干燥，所述沉淀物所含水分的质量百分比为1-25％。
在本发明优选的一种具体实施方式中，所述沉淀物干燥后粉碎制成粉末，得到含菌体破碎物的透明质酸或其盐，优选的，在将所其与肉粉混合之前，将其过3-200目的筛网，优选为40-80目，收集筛下粉末。
本发明通过采用酶解法或酸法或者碱法得到分子量适中的透明质酸，可以通过控制降解液的粘度来获得所需分子量的透明质酸，以适应不同体形或不同种类的宠物而便于吸收和发挥作用；并且，降解至适宜分子量能够便于混合物的搅匀以及磨牙棒的成形性和硬度。
此外，本发明在制备透明质酸的工艺过程中未去除菌体，不仅节约成本，充分利用资源，使宠物磨牙棒具有更好的营养性和适口性；而且能够起到粘合剂的作用；更为重要的是，菌体破碎物在干燥后会形成较为坚硬的颗粒，能够有效的去除宠物牙齿上的残渣、牙垢或牙菌斑。
本发明提供了一种含有透明质酸的宠物磨牙棒，其包括将上述所述的宠物磨牙棒组合物或者上述所述的制备方法制备得到的宠物磨牙棒组合物通过宠物磨牙棒的模型得到。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，以在宠物磨牙棒中所占的质量百分比计，水分为1-25％，优选为5-20％，进一步优选为8-15％。
例如，以在宠物磨牙棒中所占的质量百分比计，水分可以为1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％或其之间的任意范围。
本发明提供了一种含透明质酸的宠物磨牙棒的制备方法，其包括将上述所述的宠物磨牙棒组合物或者上述所述的制备方法制备得到的宠物磨牙棒组合物加入水以及任选的防腐剂，然后放入宠物磨牙棒的模型中，接着烘干得到所述的宠物磨牙棒。
本发明对磨牙棒组合物与水的混合比例没有要求，只要能调至合适的粘度方便入模即可。
本发明对添加的防腐剂没有要求，按照食品行业的添加习惯进行添加即可。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，烘干的温度为30-100℃，优选的，以在宠物磨牙棒中所占的质量百分比计，所述宠物磨牙棒中所含的水分为1-25％，优选为5-20％，进一步优选为8-15％。
本发明所述的宠物磨牙棒，利用透明质酸本身具有的粘性以及菌体破碎物代替淀粉、凝胶等粘合剂或成形剂，并且透明质酸能够抑菌消炎、去除口臭、保护牙龈和口腔粘膜，消化吸收后还具有亮泽毛发、强壮骨骼的保健作用，改进了传统磨牙棒功能的单一性；
菌体破碎物在干燥后会形成较为坚硬的颗粒，能够有效的去除宠物牙齿上的残渣、牙垢或牙菌斑。
本发明对试验中所用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述，在下面的实施例中，如果无其他特别的说明，％表示wt％，即重量百分数。以下实施例与对比例所用透明质酸发酵液和透明质酸酶均来自于华熙生物科技股份有限公司，其中透明质酸发酵液中所含菌体为马链球菌兽疫亚种，透明质酸酶则来源于芽孢杆菌来源，其他所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
以下实施例与对比例中运动粘度测定方法使用运动粘度计进行测量，其具体操作方法参见专利申请号为CN201911356484.2测定运动粘度的方法；
透明质酸分子量测定方法为高效液相色谱法，其具体操作方法参见专利申请号为CN201910122772.5中公开的方法进行测定。
透明质酸含量测定方法为硫酸-咔唑法，具体操作方法参见李敏等人的改良咔唑法测定重组人溶菌酶滴眼液中透明质酸钠的含量中的方法(李敏等人.改良咔唑法测定重组人溶菌酶滴眼液中透明质酸钠的含量[J].化学分析计量,2019,28(1):95-98.)。
水分测定方法为称取粉末0.3-1g粉末，放入市售的水分仪中，在规定的时间内读取水分仪中显示的数值即为粉末中所含的水分。
实施例1
(1)取用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液10L，初始运动粘度50000mm2/s，搅拌下加入300μL透明质酸酶(酶活6000IU/mL)，水浴37℃酶解2h，加热至60℃灭活0.5h，最终降解液运动粘度为138mm2/s，测得透明质酸分子量为400kDa。
(2)将所述降解液中加入30L乙醇至体积浓度为70％产生沉淀，搅拌0.5h，静置0.5h，倒掉上清，沉淀用乙醇脱水至体积浓度为90％，脱水后沉淀置于50℃烘箱干燥至水分约18％后，放入粉碎机内粉碎成粉末，得到含菌体破碎物的透明质酸粉末，其中，以在含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，透明质酸为40％，水分为18％，菌体破碎物为42％。
(3)将含菌体破碎物的透明质酸过40目标准筛，收集筛下粉末，取70g筛下粉末，与30g鸡肉粉混合均匀，得到肉粉占比30％、含菌体破碎物的透明质酸占比70％的宠物磨牙棒组合物。
(4)向上述宠物磨牙棒组合物加入100g纯净水搅拌至均匀粘稠的混合物，倒入宠物磨牙棒的模型中，60℃烘干至水分为5％，得到宠物磨牙棒。
实施例2
(1)取用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液1L，初始运动粘度50000mm2/s，搅拌下加入20％氢氧化钠溶液调pH至11，搅拌下降解至运动粘度为35000mm2/s，用盐酸中和至pH 6-7得到降解液，测得透明质酸分子量为1800kDa。
(2)将所述降解液中加入1L乙醇，使乙醇体积浓度为47％产生沉淀，搅拌0.5h，静置0.5h，倒掉上清，沉淀用乙醇脱水至体积浓度为95％，脱水后沉淀置于45℃烘箱干燥至水分约3％后，放入粉碎机内粉碎成粉末，得到含菌体破碎物的透明质酸粉末，按照与实施例1相同的方法进行测定，以在含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，透明质酸为75％，水分为3％，菌体破碎物为22％。
(3)将含菌体破碎物的透明质酸过80目标准筛，收集筛下粉末，取30g筛下粉末，与70g猪肉粉混合均匀，得到肉粉占比70％、含菌体破碎物的透明质酸占比30％的宠物磨牙棒组合物。
(4)向上述宠物磨牙棒组合物加入50g纯净水搅拌均匀，然后倒入宠物磨牙棒的模型中，45℃烘干至水分为20％，得到宠物磨牙棒。
实施例3
(1)取用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液3L，初始运动粘度50000mm2/s，搅拌下加入100μL透明质酸酶(酶活6000IU/mL)，水浴40℃酶解1.0h，运动粘度为1000mm2/s，加入乳酸锌48g(200mM)，搅拌均匀后可立刻结束酶解得到降解液，测得透明质酸分子量为800kDa。
(2)将所述降解液中加入12L乙醇，使乙醇浓度为76％产生沉淀，搅拌0.5h，静置0.5h，倒掉上清，沉淀用乙醇脱水至乙醇体积浓度为85％，脱水后沉淀置于50℃烘箱干燥至水分约14％后，放入粉碎机内粉碎成粉末，得到含菌体破碎物的透明质酸粉末，按照与实施例1相同的方法进行测定，以在含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，透明质酸为55％，水分为14％，菌体破碎物为31％。
(3)将含菌体破碎物的透明质酸过80目标准筛，收集筛下粉末，取60g筛下粉末，与40g牛肉粉混合均匀，得到肉粉占比40％、含菌体破碎物的透明质酸占比60％的宠物磨牙棒组合物。
(4)向上述宠物磨牙棒组合物加入80g纯净水搅拌均匀，然后倒入宠物磨牙棒的模型中，50℃烘干至水分为8％，得到宠物磨牙棒。
实施例4
(1)取用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液5L，初始运动粘度50000mm2/s，搅拌下加入40％氢氧化钠溶液调pH至12，搅拌下降解至运动粘度为8000mm2/s，加入醋酸中和至pH 6-7得到降解液，测得透明质酸分子量为1000kDa。
(2)将所述降解液中加入7.5L乙醇，使乙醇体积浓度为57％产生沉淀，搅拌0.5h，静置0.5h，倒掉上清，沉淀用乙醇脱水至乙醇体积浓度为90％，脱水后沉淀置于45℃烘箱干燥至水分约10％后，放入粉碎机内粉碎成粉末，得到含菌体破碎物的透明质酸粉末，按照与实施例1相同的方法进行测定，以在含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，透明质酸为60％，水分为10％，菌体破碎物为30％。
(3)将含菌体破碎物的透明质酸过60目标准筛，收集筛下粉末，取50g筛下粉末，与50g牛肉粉混合均匀，得到肉粉占比50％、含菌体破碎物的透明质酸占比50％的宠物磨牙棒组合物
(4)向上述宠物磨牙棒组合物加入70g纯净水搅拌均匀，然后倒入宠物磨牙棒的模型中，55℃烘干至水分为11％，得到宠物磨牙棒。
实施例5
(1)取用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液3L，初始运动粘度50000mm2/s，搅拌下加入盐酸调pH至3，搅拌下降解至运动粘度为20000mm2/s，用40％氢氧化钠中和至pH 6-7，得到降解液，测得透明质酸分子量为1500kDa。
(2)将所述降解液中加入4L乙醇，使乙醇体积浓度为54％产生沉淀，搅拌0.5h，静置0.5h，倒掉上清，沉淀用乙醇脱水至乙醇体积浓度为90％，脱水后沉淀置于40℃烘箱干燥至水分约5％后，放入粉碎机内粉碎成粉末，得到含菌体破碎物的透明质酸粉末，按照与实施例1相同的方法进行测定，以在含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，透明质酸为68％，水分为5％，菌体破碎物为27％。
(3)将含菌体破碎物的透明质酸过60目标准筛，收集筛下粉末，取40g筛下粉末，与60g牛肉粉和猪肉粉的混合粉混合均匀，得到肉粉占比60％、含菌体破碎物的透明质酸占比40％的宠物磨牙棒组合物
(4)向上述宠物磨牙棒组合物加入60g纯净水搅拌均匀，然后倒入宠物磨牙棒的模型中，60℃烘干至水分为15％，得到宠物磨牙棒。
实施例6
(1)取用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液3L，初始运动粘度50000mm2/s，搅拌下加入1000μL透明质酸酶(酶活6000IU/mL)，水浴30℃酶解0.5h至运动粘度为50mm2/s，加热至60℃灭活0.5h，结束酶解得到降解液，测得透明质酸分子量为200kDa。
(2)将所述降解液中加入15L乙醇至体积浓度为80％产生沉淀，搅拌0.5h，静置0.5h，倒掉上清，沉淀用乙醇脱水至体积浓度为90％，脱水后沉淀置于40℃烘箱干燥至水分约25％后，放入粉碎机内粉碎成粉末，得到含菌体破碎物的透明质酸粉末，按照与实施例1相同的方法进行测定，以在含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，透明质酸为30％，水分为25％，菌体破碎物为45％。
(3)将含菌体破碎物的透明质酸过80目标准筛，收集筛下粉末，取45g筛下粉末，与5g牛肉粉混合均匀，得到肉粉占比10％、含菌体破碎物的透明质酸占比90％的宠物磨牙棒组合物。
(4)向上述宠物磨牙棒组合物加入100g纯净水搅拌均匀，然后倒入宠物磨牙棒的模型中，70℃烘干至水分为1％，得到宠物磨牙棒。
实施例7
(1)取用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液1L，初始运动粘度50000mm2/s，搅拌下加入20％氢氧化钠溶液调pH至10.5，搅拌降解至运动粘度为45000mm2/s，加入盐酸中和至pH 6-7得到降解液，测得透明质酸分子量为2000kDa。
(2)将所述降解液中加入1L乙醇，使乙醇体积浓度为47％产生沉淀，搅拌0.5h，静置0.5h，倒掉上清，沉淀用乙醇脱水至体积浓度为95％，脱水后沉淀置于55℃烘箱干燥至水分约1％后，放入粉碎机内粉碎成粉末，得到含菌体破碎物的透明质酸粉末，按照与实施例1相同的方法进行测定，以在含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，透明质酸为80％，水分为1％，菌体破碎物为19％。
(3)将含菌体破碎物的透明质酸过40目标准筛，收集筛下粉末，取5g筛下粉末，与45g牛肉粉与鱼肉粉的混合粉混合均匀，得到肉粉占比90％、含菌体破碎物的透明质酸占比10％的宠物磨牙棒组合物
(4)向上述宠物磨牙棒组合物加入30g纯净水搅拌均匀，然后倒入宠物磨牙棒的模型中，50℃烘干至水分为25％，得到宠物磨牙棒。
实施例8
(1)取用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液5L，初始运动粘度50000mm2/s，搅拌下加入100μL透明质酸酶(酶活6000IU/mL)，水浴40℃酶解3.0h，运动粘度为10mm2/s，加入乳酸锌48g(200mM)，搅拌均匀后可立刻结束酶解得到降解液，测得透明质酸分子量为100kDa。
(2)将所述降解液中加入10L乙醇，使乙醇浓度为63％产生沉淀，搅拌0.5h，静置0.5h，倒掉上清，沉淀用乙醇脱水至乙醇体积浓度为85％，脱水后沉淀置于50℃烘箱干燥至水分约14％后，放入粉碎机内粉碎成粉末，得到含菌体破碎物的透明质酸粉末，按照与实施例1相同的方法进行测定，以在含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，透明质酸为55％，水分为14％，菌体破碎物为31％。
(3)将含菌体破碎物的透明质酸过80目标准筛，收集筛下粉末，取60g筛下粉末，与40g牛肉粉混合均匀，得到肉粉占比40％、含菌体破碎物的透明质酸占比60％的宠物磨牙棒组合物。
(4)向上述宠物磨牙棒组合物加入80g纯净水搅拌均匀，然后倒入宠物磨牙棒的模型中，50℃烘干至水分为8％，得到宠物磨牙棒。
实施例9
(1)取用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液5L，初始运动粘度50000mm2/s，搅拌下加入100μL透明质酸酶(酶活6000IU/mL)，水浴40℃酶解0h，立刻加入乳酸锌48g(200mM)，搅拌均匀后可立刻结束酶解得到降解液，运动粘度基本不不变，测得透明质酸分子量为3000kDa。
(2)将所述降解液中加入10L乙醇，使乙醇浓度为63％产生沉淀，搅拌0.5h，静置0.5h，倒掉上清，沉淀用乙醇脱水至乙醇体积浓度为85％，脱水后沉淀置于50℃烘箱干燥至水分约14％后，放入粉碎机内粉碎成粉末，得到含菌体破碎物的透明质酸粉末，按照与实施例1相同的方法进行测定，以在含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，透明质酸为55％，水分为14％，菌体破碎物为31％。
(3)将含菌体破碎物的透明质酸过80目标准筛，收集筛下粉末，取60g筛下粉末，与40g牛肉粉混合均匀，得到肉粉占比40％、含菌体破碎物的透明质酸占比60％的宠物磨牙棒组合物。
(4)向上述宠物磨牙棒组合物加入80g纯净水搅拌均匀，然后倒入宠物磨牙棒的模型中，50℃烘干至水分为8％，得到宠物磨牙棒。
对比例1
一种市售宠物磨牙棒，由鸡肉、大米粉、淀粉、大豆蛋白粉和山梨酸钾组成。
对比例2
(1)取用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液10L，初始运动粘度50000mm2/s，搅拌下加入300μL透明质酸酶(酶活6000IU/mL)，水浴37℃酶解2h，加热至60℃灭活0.5h，最终降解液运动粘度为138mm2/s，测得透明质酸分子量为400kDa。
(2)将上述降解液使用过滤布除去菌体，滤液中加入30L乙醇至体积浓度为70％产生沉淀，搅拌0.5h，静置0.5h，倒掉上清，沉淀用乙醇脱水至体积浓度为90％，脱水后沉淀置于50℃烘箱干燥至水分约18％后，放入粉碎机内粉碎成粉末，得到含菌体破碎物的透明质酸粉末，其中，以在含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，透明质酸为40％，水分为18％，菌体破碎物为42％。
(3)将含菌体破碎物的透明质酸过40目标准筛，收集筛下粉末，取70g筛下粉末，与30g鸡肉粉混合均匀，得到肉粉占比30％、含菌体破碎物的透明质酸占比70％的宠物磨牙棒组合物。
(4)向上述宠物磨牙棒组合物加入100g纯净水搅拌至均匀粘稠的混合物，倒入宠物磨牙棒的模型中，60℃烘干至水分为5％，得到宠物磨牙棒。
对比例2与实施例1比较，由于对比例2去除菌体，入模时不易成形，成品磨牙棒硬度较低，颗粒均匀且细，清洁度较差，而且去除菌体后得到的透明质酸粉末收率降低，会提高成本。
对比例3
不添加含菌体破碎物的透明质酸，只用肉粉制作磨牙棒，取100％猪肉粉的宠物磨牙棒组合物，加入适量水搅拌，混合物松散，不易粘合和成形，干燥后易碎。
表1实施例以及对比例中宠物磨牙棒组合物的制备
Figure BDA0002713368420000151
Figure BDA0002713368420000161
实验例1感官实验
选取12只毛色亮泽度相近的实验犬泰迪，每只狗每天喂食一根实施例1-9和对比例1-3的磨牙棒，一个月后观察其毛发亮泽度。
结果：如表2所示，进食本发明磨牙棒的实验犬，毛发亮泽度均有所增加，说明磨牙棒中含有的透明质酸起到了作用，而对比例1和3不含有透明质酸，故没有亮泽毛发的作用。
表2感官实验结果
毛发亮泽度是否增加
实施例1 是
实施例2 是
实施例3 是
实施例4 是
实施例5 是
实施例6 是
实施例7 是
实施例8 是
实施例9 是
对比例1 否
对比例2 是
对比例3 否
实验例2成形性及硬度测试
对实施例1-9和对比例1-3的加工过程进行跟踪，观察制作过程中是否易搅拌、是否易成形和成品硬度。结果：如表3所示。
表3成形性及硬度测试结果
是否易搅拌 成形性 成品硬度
实施例1 是 很好 适中
实施例2 是 很好 适中
实施例3 是 非常好 适中
实施例4 是 非常好 适中
实施例5 是 非常好 适中
实施例6 是 好 微软
实施例7 是 好 微硬
实施例8 是 不易 一般
实施例9 否 不易 过硬且不均匀
对比例1 是 很好 微软
对比例2 是 一般 易碎
对比例3 是 不易 松散
从表3可以看出，实施例1-7在加工过程中容易搅拌，成形性非常好，并且成品硬度适中。
实施例8由于透明质酸的分子量较低，入模时不易成形，成品磨牙棒较松散。
实施例9由于没有降低透明质酸的分子量，混合粉末加水调整粘稠度时，由于分子量太大，不易混合均匀，容易成团，成品硬度不均匀，颗粒较大。
对比例2与实施例1比较，对比例2去除菌体，粉末收率低，入模时不易成形，成品磨牙棒硬度较低，颗粒均匀且细，清洁度较差。
对比例3与实施例1-9相比，不添加含菌体破碎物的透明质酸或其盐，结果磨牙棒无法成形。
实验例3短期清洁实验
选取12只牙齿清洁度相近的同一品种实验犬，观察进食前的牙齿清洁度，喂食同样重量的狗粮后，分别喂食一根实施例1-9和对比例1-3的磨牙棒，吃完磨牙棒后再次观察食物残渣剩余量，由此来判定清洁度。
结果：如表4所示，含有菌体的磨牙棒(实施例1-9)比不含有菌体的磨牙棒(对比例1-3)清洁度好；其中分子量适中的磨牙棒具有更好的清洁度(实施例3-5)，而分子量过低或者过高(实施例8-9)也会使磨牙棒硬度有所变化而使清洁度变差。
表4清洁实验结果
清洁度
实施例1 很好
实施例2 很好
实施例3 非常好
实施例4 非常好
实施例5 非常好
实施例6 好
实施例7 好
实施例8 较差
实施例9 较差
对比例1 很差
对比例2 很差
对比例3 很差
实验例4长期牙菌斑实验
对上述实验例1中的实验犬在食用本发明宠物磨牙棒前进行牙菌斑测试，让实验犬饮用部分饮水后采用无菌软棉签蘸取市售牙菌斑显示剂对三个指标牙位：中上门牙、左上中间磨牙、右下中间磨牙进行涂覆显示剂，涂覆显示剂时动作需要轻柔，避免刮擦，涂覆显示剂1min后牙面上深色部分即为牙菌斑，采用可视口腔镜观察并记录指标牙位，并用Turesky菌斑指数改良法记录实验犬指标牙位菌斑指数，作为实验前菌斑指数；实验犬食用本发明宠物磨牙棒一个月后，对宠物喂食饮用水或者诱食饮用水以后，采用无菌软棉签蘸取市售牙菌斑显示剂对相同的三个指标牙位进行相同的涂覆显示剂动作，涂覆显示剂1min后采用可视口腔镜观察并记录指标牙位，并用Turesky菌斑指数改良法记录实验犬指标牙位菌斑指数，作为实验后菌斑指数。
菌斑指数的记录标准为：
牙面无菌斑，菌斑指数为0；
牙颈部龈缘处有散在的点状菌斑存在，菌斑指数为1；
牙颈部有连续薄带状菌斑存在，宽度不超过1mm，菌斑指数为2；
牙颈部菌斑覆盖面积超过1mm，但在牙面1/3以下，菌斑指数为3；
菌斑覆盖面积至少是牙面1/3，但不超过1/2，菌斑指数为4；
菌斑覆盖面积占牙面2/3或2/3以上，菌斑指数为5。
表5牙菌斑指数结果
菌斑指数
实施例1 1
实施例2 1
实施例3 0
实施例4 0
实施例5 0
实施例6 2
实施例7 2
实施例8 3
实施例9 3
对比例1 5
对比例2 4
对比例3 5
从上表可以看出，食用实施例1-9所述的宠物磨牙棒后，实验犬的牙菌斑的数量较少，牙菌斑指数低，清洁度高，而食用对比例所述的宠物磨牙棒后，实验犬的牙菌斑的数量较多，牙菌斑指数高，清洁度较低，说明本发明所述的宠物磨牙棒能够有效地去除宠物牙齿上的残渣、牙垢或牙菌斑。
综上所述，本发明以透明质酸发酵液为原料采用降解法得到一定分子量的透明质酸钠，无需去除菌体，将含菌体的透明质酸与肉粉混合，经烘干得到软硬适中的磨牙棒，工艺简单、充分利用资源的同时能够使其营养丰富，在洁牙去除口臭的同时补充透明质酸。
此外，本发明利用透明质酸本身具有的粘性以及菌体破碎物代替淀粉、凝胶等粘合剂或成形剂，且含有的透明质酸能够抑菌消炎、去除口臭、保护牙龈和口腔粘膜，消化吸收后还具有亮泽毛发、强壮骨骼的保健作用，改进了传统磨牙棒功能的单一性。
菌体破碎物在干燥后会形成较为坚硬的颗粒，能够有效的去除宠物牙齿上的残渣、牙垢或牙菌斑。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.一种含透明质酸的宠物磨牙棒组合物，其包括肉粉和含菌体破碎物的透明质酸或其盐。
2.根据权利要求1所述的宠物磨牙棒组合物，其中，以在组合物中所占的质量百分比计，所述肉粉为10-90％，优选为30-70％，进一步优选为40-60％；所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐为10-90％，优选为30-70％，进一步优选为40-60％。
3.根据权利要求1或2所述的宠物磨牙棒组合物，其中，所述肉粉选自鸡肉粉、鸭肉粉、猪肉粉、牛肉粉和鱼肉粉中的一种或两种以上。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的宠物磨牙棒组合物，其中，所述透明质酸或其盐的分子量为200k-2000kDa，优选为400k-1800kDa，进一步优选为800k-1500kDa。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的宠物磨牙棒组合物，其中，所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐是由发酵生产透明质酸的发酵液制备而成，优选的，发酵液中的发酵菌种选自马链球菌马亚种、马链球菌兽疫亚种和谷氨酸棒状杆菌中的一种或两种以上。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的宠物磨牙棒组合物，其中，所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐包含透明质酸或其盐、菌体破碎物和水分，以在所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐中所占的质量百分比计，所述透明质酸或其盐为30-80％，优选为40-75％，进一步优选为50-70％；所述水分为1-25％，余量为菌体破碎物。
7.一种宠物磨牙棒组合物的制备方法，其包括下述步骤：
向用于发酵生产透明质酸的含有菌体的透明质酸发酵液中加入透明质酸酶、酸或碱进行降解，得到降解液；
将所述降解液进行沉淀得沉淀物，并对沉淀物进行干燥，干燥后得到含菌体破碎物的透明质酸或其盐；
将所述含菌体破碎物的透明质酸或其盐与肉粉混合得到所述宠物磨牙棒组合物。
8.一种含透明质酸的宠物磨牙棒，其包括将权利要求1-6中任一项所述的含透明质酸的宠物磨牙棒组合物或者权利要求7所述的制备方法制备得到的含透明质酸的宠物磨牙棒组合物通过宠物磨牙棒的模型得到。
9.一种含透明质酸的宠物磨牙棒的制备方法，其包括将权利要求1-6中任一项所述的含透明质酸的宠物磨牙棒组合物或者权利要求7所述的制备方法制备得到的含透明质酸的宠物磨牙棒组合物加入水以及任选的防腐剂，然后放入宠物磨牙棒的模型中，接着烘干得到所述的含透明质酸的宠物磨牙棒。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其中，烘干的温度为30-100℃，优选的，以在宠物磨牙棒中所占的质量百分比计，水分为1-25％，优选为5-20％，进一步优选为8-15％。
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