CN112175047A - 替考拉宁的提纯方法 - Google Patents

替考拉宁的提纯方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112175047A
CN112175047A CN202011082690.1A CN202011082690A CN112175047A CN 112175047 A CN112175047 A CN 112175047A CN 202011082690 A CN202011082690 A CN 202011082690A CN 112175047 A CN112175047 A CN 112175047A
Authority
CN
China
Prior art keywords
teicoplanin
eluent
purification
chromatography
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011082690.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112175047B (zh
Inventor
林东态
徐文灿
刘文锋
何鹏
王为民
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LIVZON GROUP FUZHOU FUXING PHARMACEUTICAL CO Ltd
Original Assignee
LIVZON GROUP FUZHOU FUXING PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by LIVZON GROUP FUZHOU FUXING PHARMACEUTICAL CO Ltd filed Critical LIVZON GROUP FUZHOU FUXING PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority to CN202011082690.1A priority Critical patent/CN112175047B/zh
Publication of CN112175047A publication Critical patent/CN112175047A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112175047B publication Critical patent/CN112175047B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K9/006—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure
    • C07K9/008—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure directly attached to a hetero atom of the saccharide radical, e.g. actaplanin, avoparcin, ristomycin, vancomycin

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种替考拉宁的提纯方法，属于微生物制药技术领域，该提纯方法包括以下步骤：通过强酸、强碱型Q‑F层析填料来对替考拉宁粗品进行层析，层析后使用乙醇和氯化钠溶液作为洗脱液进行两次洗脱，合并两次洗脱的洗脱液依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。本发明提供的替考拉宁的提纯方法，通过层析纯化去杂的方式从替考拉宁粗品得到替考拉宁成品，通过对离子交换树脂、洗脱液的特定选择和组合，使得所得替考拉宁成能够满足替考拉宁EP9.8标准；整个纯化过程中不使用丙酮等有毒溶剂，避免了对作业人员的危害，纯化过程简单易于操作，整体纯化时间仅需12h左右，大幅提升了替考拉宁的纯化效率。

Description

替考拉宁的提纯方法
技术领域
本发明属于微生物制药技术领域，具体涉及一种替考拉宁的提纯方法。
背景技术
替考拉宁，又名太古霉素，是游动放线菌(Actinoplanes teichomyceticus)经发酵、提取后得到的一种万古霉素族糖肽类抗生素，为多个化学结构非常相似的化合物组成的抗生素混合物。替考拉宁对革兰阳性菌如葡萄球菌、链球菌、肠球菌和大多厌氧性阳性菌敏感，临床上主要用于金葡菌及链球菌属等敏感菌所致的严重感染，如心内膜炎、骨髓炎、败血症及呼吸道、泌尿道、皮肤、软组织等的感染。
替考拉宁EP9.8标准是替考拉宁最新的最高标准，现有技术通过丙酮除杂，碳脱结晶的方法得到的产品，其各个单组分的纯度已经无法达到替考拉宁EP9.8的标准。而通过凝胶层析、大孔树脂分离等方法进行提纯时，多数只能控制其中部分单组分的纯度，也无法达到替考拉宁EP9.8标准。如申请号为200710107185.6的中国发明专利，根据其步骤能够控制A2组比例，但未提及到对其他组分的比例控制。如何得到满足替考拉宁EP9.8标准的替考拉宁成品成为了目前亟待解决的问题。
发明内容
为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：如何通过对提纯方法的改进，在不使用有毒溶剂的前提下制备得到符合替考拉宁EP9.8标准的替考拉宁。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：替考拉宁的提纯方法，包括以下步骤：
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至强酸、强碱型Q-F层析填料的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂由0.5mol/L的氯化钠溶液和30％的乙醇溶液组成；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。
本发明的有益效果在于：本发明提供的替考拉宁的提纯方法，通过层析纯化去杂的方式从替考拉宁粗品得到替考拉宁成品，通过对离子交换树脂、洗脱液的特定选择和组合，使得所得替考拉宁成能够满足替考拉宁EP9.8标准；整个纯化过程中不使用丙酮等有毒溶剂，避免了对作业人员的危害，纯化过程简单易于操作，整体纯化时间仅需12h左右，大幅提升了替考拉宁的纯化(提纯)效率。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
本发明提供一种替考拉宁的提纯方法，包括以下步骤：
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至强酸、强碱型Q-F层析填料的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂为：由0.5mol/L的氯化钠溶液和95％的乙醇配制成的30％的乙醇溶液；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：本发明提供的替考拉宁的提纯方法，通过层析纯化去杂的方式从替考拉宁粗品得到替考拉宁成品，通过对交换树脂、洗脱液的特定选择和组合，利用强酸、强碱型Q-F层析填料进行吸附，在于预洗中去除大量杂质，在洗脱中除去剩余一部分未去除的杂质，解吸得到替考拉宁，使得所得替考拉宁成能够满足替考拉宁EP9.8标准；整个纯化过程中不使用丙酮等有毒溶剂，避免了对作业人员的危害，纯化仅需层析、洗脱、过滤浓缩和冻干几个步骤，过程简单易于操作，整体纯化时间仅需12h左右，大幅提升了替考拉宁的提纯效率。
进一步的，所述强酸、强碱型Q-F层析填料为Q Focurose 6FF。
进一步的，所述步骤3中使用10％的乙醇溶液预洗3bv。
进一步的，所述步骤4中的滤膜浓缩为用300分子量的纳滤膜进行纳滤浓缩。
进一步的，所述步骤4中的冷冻干燥的曲线为：第一阶段温度为-70℃，预时间为24H，第二阶段为20℃，时间为40H。
温度低只对冷冻时间有影响，温度高会导致组分A2-2转变为A3，无法满足替考拉宁EP9.8标准。
实施例1：
替考拉宁的提纯方法，包括以下步骤：
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至Q Focurose 6FF的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂为：由0.5mol/L的氯化钠溶液和95％的乙醇配制成的30％的乙醇溶液；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品；
所述步骤4中的滤膜浓缩为用300分子量的纳滤膜进行纳滤浓缩；
所述步骤4中的冷冻干燥的曲线为：第一阶段温度为-70℃，预时间为24H，第二阶段为20℃，时间为40H。
对比例1：
对比例1与实施例1的不同在于，使用HZ-S-02为填料进行层析。
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至HZ-S-02层析填料的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用20％的乙醇溶液预洗5bv，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂为50％的乙醇pH10溶液；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。
对比例2：
对比例2与实施例1的不同在于，对比例2使用C18为填料进行层析。
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至C18层析填料的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用20％的乙醇溶液预洗5bv，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂为45％的乙醇pH9.0溶液；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。
其中，实施例1和对比例1-2使用的替考拉宁粗品为同一批次产品。
对实施例1、对比例1-2，以及一种市售的替考拉宁成品样品进行测定，并与替考拉宁EP9.8标准对比，结果见表1所示。
表1
Figure BDA0002719257770000041
Figure BDA0002719257770000051
从表1中可以看出，对比例1的结果当中A3系和A2-1系及RS2不满足EP9.8的要求，对比例2结果当中Z10和I3不满足要求，而本发明提供的方法制备得到的替考拉能成品能够满足替考拉宁EP9.8标准。
综上所述，本发明提供的替考拉宁的提纯方法，通过层析纯化去杂的方式从替考拉宁粗品得到替考拉宁成品，通过对离子交换树脂、洗脱液的特定选择和组合，使得所得替考拉宁成能够满足替考拉宁EP9.8标准；整个纯化过程中不使用丙酮等有毒溶剂，避免了对作业人员的危害，纯化仅需层析、洗脱、过滤浓缩和冻干几个步骤，过程简单易于操作，整体纯化时间仅需12h左右，大幅提升了替考拉宁的提纯效率。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (5)

1.替考拉宁的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、将替考拉宁粗品溶解于水或缓冲盐溶液中，得到替考拉宁粗粉溶液；
步骤2、将替考拉宁粗粉溶液加样至强酸、强碱型Q-F层析填料的色谱柱中进行层析；
步骤3、层析后使用10％的乙醇溶液预洗，得到第一洗脱液；再使用洗脱剂进行洗脱，得到第二洗脱液；
所述洗脱剂为：由0.5mol/L的氯化钠溶液和95％乙醇配制成的30％的乙醇溶液；
步骤4、合并第一洗脱液和第二洗脱液，然后依次经滤膜浓缩和冻干后得到替考拉宁成品。
2.根据权利要求1所述的替考拉宁的提纯方法，其特征在于，所述强酸、强碱型Q-F层析填料为Q Focurose 6FF。
3.根据权利要求1所述的替考拉宁的提纯方法，其特征在于，所述步骤3中使用10％的乙醇溶液预洗3bv。
4.根据权利要求1所述的替考拉宁的提纯方法，其特征在于，所述步骤4中的滤膜浓缩为用300分子量的纳滤膜进行纳滤浓缩。
5.根据权利要求1所述的替考拉宁的提纯方法，其特征在于，所述步骤4中的冷冻干燥的曲线为：第一阶段温度为-70℃，预时间为24H，第二阶段为20℃，时间为40H。
CN202011082690.1A 2020-10-12 2020-10-12 替考拉宁的提纯方法 Active CN112175047B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011082690.1A CN112175047B (zh) 2020-10-12 2020-10-12 替考拉宁的提纯方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011082690.1A CN112175047B (zh) 2020-10-12 2020-10-12 替考拉宁的提纯方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112175047A true CN112175047A (zh) 2021-01-05
CN112175047B CN112175047B (zh) 2022-06-10

Family

ID=73948173

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011082690.1A Active CN112175047B (zh) 2020-10-12 2020-10-12 替考拉宁的提纯方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112175047B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114112612A (zh) * 2021-10-28 2022-03-01 丽珠集团福州福兴医药有限公司 一种替考拉宁i5杂质的分离纯化方法及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101031582A (zh) * 2004-10-27 2007-09-05 阿尔法马股份公司 糖肽类的纯化
CN101302248A (zh) * 2007-05-09 2008-11-12 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 高纯度替考拉宁的生产方法
CN106589075A (zh) * 2017-01-23 2017-04-26 福建省微生物研究所 一种替考拉宁的提纯方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101031582A (zh) * 2004-10-27 2007-09-05 阿尔法马股份公司 糖肽类的纯化
CN101302248A (zh) * 2007-05-09 2008-11-12 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 高纯度替考拉宁的生产方法
CN106589075A (zh) * 2017-01-23 2017-04-26 福建省微生物研究所 一种替考拉宁的提纯方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杨西建等: "替考拉宁的快速纯化工艺", 《中国医药工业杂志》 *
蔡望伟等主编: "《生物化学与分子生物学实验》", 31 October 2013, 华中科技大学出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114112612A (zh) * 2021-10-28 2022-03-01 丽珠集团福州福兴医药有限公司 一种替考拉宁i5杂质的分离纯化方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112175047B (zh) 2022-06-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101925695B1 (ko) 고순도 반코마이신 염산염의 분리 정제방법
KR101514904B1 (ko) 사이클릭 리포펩타이드 화합물 또는 그의 염의 정제방법
DK2470555T3 (en) A process for the purification of colistin and purified colistinkomponenter
CN112175047B (zh) 替考拉宁的提纯方法
CN109180779B (zh) 一种纯化制备抗菌肽的方法
WO2020182203A1 (zh) 一种万古霉素类似物的分离纯化方法
JP2659388B2 (ja) 糖ペプチド回収方法
CN108218681B (zh) 一种辅酶q10的纯化方法
CN102718843A (zh) 一种替考拉宁单组份的制备方法
CN106518978B (zh) 一种加压素[4-Glu，5-Asp]的制备方法
CN109438561B (zh) 一种曲普瑞林的纯化方法
CN113004373A (zh) 一种达托霉素的纯化方法
CN112979756A (zh) 达托霉素的提纯方法
CN114907449A (zh) 一种醋酸去氨加压素的纯化精制方法
CN113563426B (zh) 奥利万星母核a82846b的分离纯化方法
CN110885359B (zh) 一种嗜酸乳杆菌产细菌素及其分离纯化方法
CN112409426B (zh) 一种硫酸西索米星的制备方法
CN113801203A (zh) 一种醋酸卡泊芬净杂质d的制备方法
CN102690333A (zh) 一种高纯度替考拉宁的制备方法
KR101844833B1 (ko) 테이코플라닌 정제방법
KR100652320B1 (ko) 테이코플라닌의 분리 및 정제 방법
CN109320527B (zh) 鹿色霉素(cervinomycin)B1、B2、B3、B4及其生产方法及应用
CN111004298A (zh) 一种高纯度硫酸核糖霉素的制备方法
CN113801201A (zh) 一种醋酸卡泊芬净杂质b的制备方法
CN106749540B (zh) 一种加压素[4-Glu]的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant