CN112082836A - 一种临床血性胸水细胞蜡块及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，包括取血性胸水离心获得沉淀物；往沉淀物加入红细胞裂解液，混匀后静止获得红色透明胶体状液体，红细胞裂解液由氯化铵，碳酸氢钠和乙二胺四乙酸二钠组成；经过二次离心至沉淀表面变浅或无红色沉淀产生，获得第二沉淀物；加入乙醇溶液，混匀后静止使沉淀成团，再离心获得第三沉淀物；加入海藻酸钠溶液，搅拌混匀，离心后加入氯化钙溶液，直至细胞团凝结成凝胶块，取出凝胶块包裹并脱水处理后，用石蜡包埋沉淀物获得细胞蜡块。本方法制备的细胞蜡块经HE染色显示无红细胞残留，癌细胞无变形，核质染色红蓝分明，核膜核仁清晰，核内染色均质状，癌细胞团形态保存好，可见腺样结构排列，背景干净。
Description
技术领域
本发明涉及医疗生物技术领域，尤其涉及一种临床血性胸水细胞蜡块及其制备方法。
背景技术
临床细胞病理工作中，常规的胸水涂片因制作简单可快速进行临床诊断，利用细胞蜡块进行免疫组织化学及分子生物学方法鉴别使细胞病理诊断更加精准化。然而细胞蜡块的制作要求严格，尤其是临床血性胸水，如果标本前期血细胞处理不好，制成的细胞蜡块含红细胞过多，肿瘤细胞占比低数量少，不利于常规HE染色病理诊断；红细胞同时也将导致免疫组织化学染色背景过高造成判读困难；切片肿瘤细胞含量少，所提取的DNA浓度低，不利分子病理诊断。
现有的标本处理所用红细胞裂解液一般为15-50％乙醇溶液、1-3％乙酸溶液或前两者不同比例的混合，如专利CN201711341745.4公开了一种基于血性细胞样本的细胞蜡块的制备方法及细胞蜡块，将血性细胞样本清洗后，离心收集第一沉淀样本，加入第二固定液，混合均匀后二次离心得第二沉淀，将第二沉淀脱水透明、浸蜡以及包埋。其中固定液为乙醇乙酸液，乙醇乙酸液由体积分数为24-25.5％的乙醇与乙酸按照体积比为18-19：1混合而得。但实际使用中发现该裂解液在裂解红细胞的同时可使部分红细胞膜表面蛋白质变性，使得红细胞凝结成褐色凝块，残留在细胞沉淀中。因此存在红细胞裂解不彻底，将造成免疫组织化学染色非特异性着色，肿瘤细胞比例少，从而影响结果判读。另外由于红细胞裂解较彻底，沉淀物量较少，剩余有核细胞浓度高，不易凝结成团且易碎，用工具挖取难度大大增加，而利用传统方法如琼脂法或明胶法，其操作繁琐且过程需要加温，造成细胞损伤；鸡蛋清法其原材料不易保存，且其含有的蛋白成分会影响免疫组织化学的染色。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，解决了现有制备方法在裂解红细胞时容易引起细胞膜表面蛋白质变性，使得红细胞凝结成褐色凝块且沉淀不易提取，从而影响结果判读的问题。
本发明采用的技术手段如下：一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S101：取血性胸水标本，第一次离心获得第一次沉淀物；
S102：往第一次沉淀物加入红细胞裂解液，混匀后静止获得红色透明胶体状液体，所述红细胞裂解液由氯化铵，碳酸氢钠和乙二胺四乙酸二钠组成；
S103：经过第二次离心至沉淀表面变浅或无红色沉淀产生，若有较多红色沉淀可重复S102直至无红色沉淀即可，获得第二次沉淀物；
S104：往第二次沉淀物加入乙醇溶液，充分混匀后静止使细胞沉淀成团，第三次离心获得第三沉淀物；
S105：往第三沉淀物加入海藻酸钠溶液，搅拌混匀，第四次离心后缓慢加入氯化钙水溶液，直至细胞团凝结成凝胶块，将凝胶块取出脱水、浸蜡及包埋获得细胞蜡块。
优选地，红细胞裂解液由8g氯化铵，0.84g碳酸氢钠和0.37g乙二胺四乙酸二钠，加水至1000mL定容获得。
优选地，海藻酸钠水溶液由0.5g海藻酸钠和50mL蒸馏水，加入离心管在60℃水浴过夜至完全溶解获得。
优选地，氯化钙水溶液通过称取5.5g氯化钙和50mL蒸馏水配置获得。
优选地，S104步骤中，乙醇溶液用量为10mL，体积分数为95％。
优选地，第一次离心、第二次离心和第三次离心转速为2500r/min。
优选地，第四次离心转速为3500r/min。
采用本发明所提供的一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，利用特定配制的氯化铵钠盐溶液，可彻底裂解红细胞，且裂解过程红细胞包膜无蛋白质变性，裂解彻底，后利用特定海藻酸钠溶液配合氯化钙溶液形成凝胶状海藻酸钠钙盐，将细胞块包裹于底部，便于完整提取碎片的沉淀物并脱水保存。通过本发明的方法制备获得的细胞蜡块，切片后苏木素-伊红(HE)染色，光镜观察无红细胞背景，肿瘤细胞形态学保存完整，不破坏其癌细胞团形态学结构；免疫组织化学抗体CK、TTF1、KI67表达清晰，提取的DNA片段大小及浓度满足分子病理诊断要求。
附图说明
图1为本发明实施例一的一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法的过程示意图，其中左侧图为血性胸腹水标本照片，右侧图为裂解红细胞后使用海藻酸钠-氯化钙提取的凝胶块示意图，由图1中可见血性胸腹水在经处理后，细胞沉淀几乎无红细胞残留，使用海藻酸钠-氯化钙凝胶可以很好将沉淀包裹后便于提取；
图2为对比例四、实施例一、对比例三和对比例二的血性胸水细胞蜡块切片经HE染色后的光学显微镜照片，图2从左到右依次为未经过细胞裂解液处理、本发明的氯化铵红细胞裂解液、3％乙酸和50％乙醇分别处理后的肺癌血性胸腹水，由图2可见使用本发明红细胞裂解液处理过的细胞蜡块，其HE染色显示，无明显红细胞残留，癌细胞无变形，核质染色红蓝分明，核染色清晰，核膜清晰，核内染色均质状，核仁清晰，癌细胞团形态保存好，可见腺样结构排列，背景干净；
图3为对比例四、实施例一、对比例三和对比例二的血性胸水细胞蜡块经免疫组织化学染色后的光学显微镜照片，图3从左到右依次为未经过细胞裂解液处理、本发明的氯化铵红细胞裂解液、3％乙酸和50％乙醇，由图3可见使用本发明红细胞裂解液处理过的细胞蜡块CK(人类角蛋白)抗体呈膜表达，轮廓清晰均匀，染色背景干净，无黄色非特异性背景着色(彩色图片更清晰)。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例一：一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，包括以下步骤：
S101取40mL肺癌患者血性胸水标本，在2500r/min的转速下离心5min获得第一次沉淀物；
S102往第一次沉淀物加入40mL红细胞裂解液，充分混匀后静止5min，期间轻轻摇晃几次，此时液体为红色透明胶体状；
S103在2500r/min的转速下第二次离心3min，观察沉淀表面变浅或无红色沉淀产生即可获得第二次沉淀物；
S104往第二次沉淀物加入40mL体积分数为95％的乙醇溶液，充分混匀后静止1min，使细胞沉淀成团，在2500r/min第三次离心3min，弃上清获得第三沉淀物；
S105往第三沉淀物加入0.5mL海藻酸钠溶液，用滴管轻轻搅拌混匀，在3500r/min第四次离心3min；沿着管壁缓慢加入氯化钙水溶液，直至细胞团凝结成凝胶块，将沉淀取出放入全自动脱水机处理，处理后包埋获得细胞蜡块。
其中本实施例一所使用的红细胞裂解液通过称取8g氯化铵，0.84g碳酸氢钠和0.37g乙二胺四乙酸二钠(EDTA)，加水至1000mL定容获得；
本实施例一所使用的海藻酸钠水溶液通过称取0.5g海藻酸钠和50mL蒸馏水加入离心管，在60℃水浴过夜至完全溶解获得；
本实施例一所使用的氯化钙水溶液通过称取5.5g氯化钙和50mL蒸馏水配置获得。
对比例一：对比例一和实施例一的区别在于，S102步骤所使用的红细胞裂解液为体积分数为50％的乙醇溶液。
对比例二：对比例二和实施例一的区别在于，S102步骤所使用的红细胞裂解液为体积分数为3％的乙酸溶液。
对比例三：对比例三和实施例一的区别在于，省略S102和S103步骤，未经过红细胞裂解步骤，直接往第一次沉淀物乙醇溶液离心沉淀。
对比例四：对比例四和实施例一的区别在于，省略S105步骤，未经过海藻酸钠和氯化钙水溶液配合提取沉淀，采取琼脂法提取细胞沉淀，将质量分数1％的琼脂水溶液加热至100℃，至完全溶解，取1ml融化后的琼脂液加入离心管中，60℃水浴离心管使得琼脂保持液体凝胶状，与沉淀充分混合后置于4℃冰箱中20min，取出琼脂凝胶。
将实施例一、对比例一至四所获得的胸水细胞蜡块进行切片并HE染色，在光学显微镜下观察实验结果如图1-图3及表1。
表1不同细胞蜡块制备方法对实验结果的影响
综上所述，采用本发明所提供的一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，利用特定配制的氯化铵钠盐溶液，可彻底裂解红细胞，裂解过程红细胞包膜无蛋白质变性，裂解彻底，后利用特定海藻酸钠溶液配合氯化钙溶液形成凝胶状海藻酸钠钙盐，将细胞块包裹于底部，便于提取碎片的沉淀物并脱水保存。通过本发明的方法制备获得的细胞蜡块，切片后HE染色，光镜观察无红细胞背景，肿瘤细胞形态学保存完整，不破坏其癌细胞团形态学结构；免疫组织化学抗体CK、TTF1、KI67表达清晰，提取的DNA片段大小及浓度满足分子病理诊断要求。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。
Claims (8)
1.一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S101：取血性胸水标本的底部沉淀混合物，第一次离心获得第一次沉淀物；
S102：往第一次沉淀物加入红细胞裂解液，混匀后获得红色透明胶体状液体，所述红细胞裂解液由氯化铵，碳酸氢钠和乙二胺四乙酸二钠组成；
S103：经过第二次离心至沉淀表面变浅或无红色沉淀产生，获得第二次沉淀物；
S104：往第二次沉淀物加入乙醇溶液，充分混匀后静止使细胞沉淀成团，第三次离心获得第三沉淀物；
S105：往第三沉淀物加入海藻酸钠溶液，搅拌混匀，第四次离心后缓慢加入氯化钙水溶液，直至细胞团凝结成凝胶块，取出凝胶块用包埋纸包裹，放置对应包埋盒中，放入全自动脱水机处理过夜后，将沉淀物用石蜡包埋获得细胞蜡块。
2.根据权利要求1所述的一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，其特征在于，所述红细胞裂解液由8g氯化铵，0.84g碳酸氢钠和0.37g乙二胺四乙酸二钠，加水至1000mL定容获得。
3.根据权利要求1所述的一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，其特征在于，所述海藻酸钠水溶液由0.5g海藻酸钠和50mL蒸馏水，60℃水浴过夜至完全溶解获得。
4.根据权利要求1所述的一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，其特征在于，所述氯化钙水溶液通过称取5.5g氯化钙和50mL蒸馏水配置获得。
5.根据权利要求1所述的一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，其特征在于，所述S104步骤中，乙醇溶液用量为25mL，体积分数为95％。
6.根据权利要求1所述的一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，其特征在于，所述第一次离心、第二次离心和第三次离心转速均为2500r/min。
7.根据权利要求1所述的一种临床血性胸水细胞蜡块的制备方法，其特征在于，所述第四次离心转速为3500r/min。
8.一种临床血性胸水细胞蜡块，由权利要求1-7任一项所述的方法制备而得。
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Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0833486A (ja) * | 1994-07-25 | 1996-02-06 | Res Dev Corp Of Japan | 細胞培養担体と、細胞培養方法 |
| WO2015034178A1 (ko) * | 2013-09-09 | 2015-03-12 | 국립암센터 | 파라핀블록 제조용 혈중 세포 응집제 및 이를 이용한 파라핀블록 제조방법 |
| CN108020452A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-05-11 | 漳州卫生职业学院 | 基于血性胸腹水的细胞蜡块及其制备方法 |
| CN108132176A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-06-08 | 漳州卫生职业学院 | 细胞蜡块及其直接制备方法 |
| CN108956221A (zh) * | 2018-04-10 | 2018-12-07 | 上海交通大学附属第人民医院松江分院 | 一种采用海藻酸钠进行病理制片的方法 |
| US20190390162A1 (en) * | 2018-06-21 | 2019-12-26 | Asia University | Methods of Manufacturing and Assembling Cell-Containing Blocks |
-
2020
- 2020-09-15 CN CN202010968047.2A patent/CN112082836A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0833486A (ja) * | 1994-07-25 | 1996-02-06 | Res Dev Corp Of Japan | 細胞培養担体と、細胞培養方法 |
| WO2015034178A1 (ko) * | 2013-09-09 | 2015-03-12 | 국립암센터 | 파라핀블록 제조용 혈중 세포 응집제 및 이를 이용한 파라핀블록 제조방법 |
| CN108020452A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-05-11 | 漳州卫生职业学院 | 基于血性胸腹水的细胞蜡块及其制备方法 |
| CN108132176A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-06-08 | 漳州卫生职业学院 | 细胞蜡块及其直接制备方法 |
| CN108956221A (zh) * | 2018-04-10 | 2018-12-07 | 上海交通大学附属第人民医院松江分院 | 一种采用海藻酸钠进行病理制片的方法 |
| US20190390162A1 (en) * | 2018-06-21 | 2019-12-26 | Asia University | Methods of Manufacturing and Assembling Cell-Containing Blocks |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 林旭: "血性胸水细胞蜡块制作的体会", 《黑龙江医学》, no. 02 * |
| 阙惠林: "苯并a芘对小鼠脾细胞凋亡率的影响", 《延边大学医学学报》, pages 1 - 4 * |
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