CN106769278B - 一种细胞蜡块制备试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于分析技术领域，具体涉及一种细胞蜡块制备试剂盒及其制备方法。本发明提供的细胞蜡块制备试剂盒包括试剂A和试剂B；所述试剂A为聚阴离子纤维素、聚阴离子纤维素钠、聚阴离子纤维素钾、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羧甲基纤维素钾中任意一种配成的水溶液，所述试剂B为有机溶剂。通过本发明提供的试剂进行细胞蜡块的制作，需要的组织液等样品少，成功率高，且对细胞无不良影响，降低了细胞的损失量同时保留尽量多的细胞，提高检测的准确性，对于临床上用于细胞穿刺物、切割针活检、体液以及其他细胞学制备的残余沉积物和各种微小碎片的细胞蜡块的制备具有巨大的应用价值，能够满足日益增长的科研和临床病理诊断的要求。
Description
技术领域
本发明属于分析技术领域，具体涉及一种细胞蜡块制备试剂盒及其制备方法。
背景技术
细胞蜡块技术随着细胞学免疫组化和分子生物学的发展，在细胞学诊断、判断愈后以及靶向药物治疗的应用中越来越重要，如何方便、快捷的制作细胞蜡块，是细胞蜡块技术普遍存在的难题。
现有技术中，细胞蜡块的制作大概存在以下几种方法：（一）胸腹水载玻片细胞聚集制备法；（二）细针穿刺液细胞蜡块直接制备法；（三）蛋清细胞蜡块制备法；上述方法中，方法（一）及方法（二）所需细胞量大，且制备过程繁琐，成功率低；方法（三）虽然适合于细胞量较少的细胞蜡块的制作，但是，采用鸡蛋清制备的细胞蜡块，在后期使用过程中易染色，增加无效背景影响检测结果；现有技术中，还采用琼脂进行细胞蜡块的制备，但琼脂糖遇高温即溶，温度下降后又会重新凝固，难以控制，且封片后会有水珠状空炮，且无色，难以观察。因此，研发一种能够快速有效制备细胞蜡块的试剂盒成为了亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术中存在的细胞蜡块制备工序繁琐、时间长等问题，本发明提供了一种能够快速有效的细胞蜡块制备试剂盒。
本发明还提供了利用上述细胞蜡块制备试剂盒制备细胞蜡块的制备方法。
本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：
本发明提供了一种细胞蜡块制备试剂盒，包括试剂A和试剂B；
所述试剂A为聚阴离子纤维素、聚阴离子纤维素钠、聚阴离子纤维素钾、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羧甲基纤维素钾任意一种配成的水溶液，所述试剂B为有机溶剂。
进一步的，所述细胞蜡块制备试剂盒还包括一次性滴管及包埋盒。
进一步的，上述聚阴离子纤维素、聚阴离子纤维素钠、聚阴离子纤维素钾的粘度为1400-1500 mpas，取代度为0.8-0.9；所述羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钾的分子量为6400±1000，取代度为0.8～1.2。
上述试剂A为将聚阴离子纤维素、聚阴离子纤维素钠、聚阴离子纤维素钾、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羧甲基纤维素钾任意一种配成质量分数为0.4-1.2%水溶液。
进一步的，所述有机溶剂为乙醇、丙酮中的任意一种或两种。
本发明还提供了一种利用上述细胞蜡块制备试剂盒制备细胞蜡块的方法，包括以下步骤：
（1）将试剂A滴入离心浓缩后的细胞溶液中，震荡混匀，然后加入试剂B，轻轻摇动混匀后，离心沉淀或直接取出沉淀物；
（2）按组织病理进行固定、脱水后进行石蜡包埋即可。
进一步的，所述细胞溶液同试剂A的体积比为1：0.8-1.2。
进一步的，所述试剂A同试剂B的体积比为1:10-20。
本发明利用聚阴离子纤维素高粘度的特性，能够利用较少的组织液从而快速有效的吸附、粘合细胞，并从醇类、酮类试剂中快速析出，制备出细胞蜡块，且制备的蜡块软度及韧性适宜，细胞各种成分均能保存正常，反差适中，且膜性结构清晰，且对细胞结构无不良影响，能够提高膜性结构的清晰度及对比度，能够满足当今科研和临床诊断的特殊需求。
本发明制备细胞蜡块的后期过程可以按照现有技术中公开的方案进行选择。
本发明的有益效果为：
（1）本发明提供的细胞蜡块制备试剂盒能够快捷有效的制备细胞蜡块，制作过程简单，时间短，全过程仅需8-10h，制备的细胞团块不破碎，细胞之间紧密贴合、排除染色中的可能产生的边缘效应所导致的假阳性结果；
（2）通过本发明提供的试剂进行细胞蜡块的制作，需要的组织液等样品少，成功率高，且对细胞无不良影响，降低了细胞的损失量同时保留尽量多的细胞，提高检测的准确性，对于临床上用于细胞穿刺物、切割针活检、体液以及其他细胞学制备的残余沉积物和各种微小碎片的细胞蜡块的制备具有巨大的应用价值，能够满足日益增长的科研和临床病理诊断的要求。
附图说明
图1为实施例1制备的细胞蜡块切片经巴氏染色。
图2为实施例2制备的细胞蜡块切片免疫组化染色CK7。
图3为实施例4制备的细胞蜡块切片免疫组化染色TTF-1。
图4为对比例1制备的细胞蜡块切片。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面通过具体的实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种细胞蜡块制备试剂盒，包括试剂A、试剂B、一次性滴管及脱水盒；
所述试剂A为质量分数为0.4%的聚阴离子纤维素水溶液（粘度为1400mpas，取代度为0.8），所述试剂B为乙醇和丙酮的混合液（乙醇同丙酮的体积比为85：15）；所述一次性滴管为1-2ml；所述包埋盒的规格为37×25×6mm；
细胞蜡块制备试剂盒制备细胞蜡块的方法，包括以下步骤：
（1）将试剂A按1:1体积比滴入离心浓缩后的细胞溶液中，震荡混匀，1:10加入试剂B，轻轻摇动混匀后，离心沉淀或直接取出沉淀物；
（2）按组织病理进行固定、脱水等步骤进行石蜡包埋即可。
实施例2
一种细胞蜡块制备试剂盒，包括试剂A、试剂B、一次性滴管及包埋盒；
所述试剂A为质量浓度为1.2%的聚阴离子纤维素钠水溶液（粘度为1500 mpas，取代度为0.9），所述试剂B为乙醇和丙酮混合液（乙醇和丙酮的体积比为95:5）；所述一次性滴管为1ml；所述包埋盒的规格为37×25×6mm；
细胞蜡块制备试剂盒制备细胞蜡块的方法，包括以下步骤：
（1）将试剂A按1:1体积比滴入离心浓缩后的细胞溶液中，震荡混匀，1:15加入试剂B，轻轻摇动混匀后，离心沉淀或直接取出沉淀物；
（2）按组织病理进行固定、脱水等步骤进行石蜡包埋即可。
实施例3
一种细胞蜡块制备试剂盒，包括试剂A、试剂B、一次性滴管及包埋盒；
所述试剂A为质量浓度为0.8%的聚阴离子纤维素钾水溶液（粘度为1500 mpas，取代度为0.9），所述试剂B为乙醇；所述一次性滴管为2ml；所述包埋盒的规格为37×25×6mm；
细胞蜡块制备方法同实施例2。
实施例4
一种细胞蜡块制备试剂盒，包括试剂A、试剂B、一次性吸管及脱水盒；
所述试剂A为质量浓度为0.8%的羧甲基纤维素水溶液（分子量：6400，取代度为0.8），所述试剂B为丙酮；所述一次性吸管为1ml；所述脱水盒（包埋盒）的规格为37×25×6mm；
细胞蜡块制备试剂盒制备细胞蜡块的方法，包括以下步骤：
（1）将试剂A按1:1.2体积比滴入离心浓缩后的细胞溶液中，震荡混匀，1:20加入试剂B，轻轻摇动混匀后，离心沉淀或直接取出沉淀物；
（2）按组织病理进行固定、脱水等步骤进行石蜡包埋即可。
实施例5
一种细胞蜡块制备试剂盒，包括试剂A、试剂B、一次性吸管及脱水盒；
所述试剂A为质量浓度为1.0%的羧甲基纤维素钠水溶液（分子量：6400，取代度为0.8），所述试剂B为乙醇和丙酮的混合液（乙醇同丙酮的体积比为85:15）；所述一次性吸管为1ml；所述脱水盒（包埋盒）的规格为37×25×6mm；
细胞蜡块的制备方法同实施例4。
实施例6
一种细胞蜡块制备试剂盒，包括试剂A、试剂B、一次性吸管及脱水盒；
所述试剂A为质量浓度为0.8%的羧甲基纤维素钾水溶液（分子量：6400，取代度为0.8），所述试剂B为乙醇；所述一次性吸管为1ml；所述脱水盒（包埋盒）的规格为37×25×6mm；
细胞蜡块的制备方法同实施例4。
对比例1
一种细胞蜡块制备试剂盒，包括试剂A、试剂B、一次性吸管及脱水盒；
所述试剂A为质量浓度为0.8%的聚阴离子纤维素（粘度为1300mpas，取代度为0.8），所述试剂B为乙醇；所述一次性吸管为1ml；所述脱水盒的规格为37×25×6mm；
细胞蜡块的制备方法同实施例1。
对比例2
一种细胞蜡块制备试剂盒，包括试剂A、试剂B、一次性吸管及脱水盒；
所述试剂A为质量浓度为0.8%的聚阴离子纤维素（粘度为1600mpas，取代度为1.0），所述试剂B为丙酮；所述一次性吸管为1ml；所述脱水盒的规格为37×25×6mm；
细胞蜡块的制备方法同实施例1。
效果实施例
1、将患者送检的胸腹水标本，按照本发明提供的细胞蜡块制备试剂盒及提供的利用该细胞蜡块制备试剂盒制备细胞蜡块的方法制备细胞蜡块，设置对照组，对照组采用的方法为：将送检的胸腹水静置（或离心沉淀）后弃上清液，留取底层胸腹水制作细胞涂片，然后乙醇固定后染色，离心后再次弃掉上清液，然后加入福尔马林固定液，最终制备出细胞蜡块，重复10次进行制备，对于制备成功率及检测准确率进行统计，具体结果见表1。
表1
同时检测实施例4-6发现，成功率及准确率均为100%。若试剂A的质量分数过小时，则制备的细胞蜡块细胞散在，聚集度小，过大则成本增加的同时，影响检测结果。
2、通过观察制备的细胞蜡块：如图1-图3中所示，本发明制备的细胞蜡块细胞集中，分布均匀，形态清晰，图4为对比例1制备的细胞蜡块切片，从图4中可以看出，对比例1则细胞聚集度小，细胞散在，细胞总量少；对比例2制备的细胞蜡块切片也存在同样的问题。
Claims (7)
1.一种细胞蜡块制备试剂盒，其特征在于，包括试剂A和试剂B；
所述试剂A为聚阴离子纤维素、聚阴离子纤维素钠、聚阴离子纤维素钾、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羧甲基纤维素钾中任意一种配成的水溶液，所述试剂B为有机溶剂；
所述聚阴离子纤维素、聚阴离子纤维素钠、聚阴离子纤维素钾的粘度为1400-1500mpas，取代度为0.8-0.9；所述羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钾的分子量为6400±1000，取代度为0.8～1.2。
2.根据权利要求1所述的细胞蜡块制备试剂盒，其特征在于，还包括一次性滴管及包埋盒。
3.根据权利要求1所述的细胞蜡块制备试剂盒，其特征在于，所述试剂A为将聚阴离子纤维素、聚阴离子纤维素钠、聚阴离子纤维素钾、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羧甲基纤维素钾任意一种配成质量分数为0.4-1.2%水溶液。
4.根据权利要求1所述的细胞蜡块制备试剂盒，其特征在于，所述有机溶剂为乙醇、丙酮中的任意一种或两种。
5.一种利用权利要求1-4任一项所述的细胞蜡块制备试剂盒制备细胞蜡块的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将试剂A滴入离心浓缩后的细胞溶液中，震荡混匀，然后加入试剂B，轻轻摇动混匀后，离心沉淀或直接取出沉淀物；
（2）按组织病理进行固定、脱水后进行石蜡包埋即可。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述细胞溶液同试剂A的体积比为1：0.8-1.2。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述试剂A同试剂B的体积比为1:10-20。
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| JPS5867147A (ja) * | 1981-10-16 | 1983-04-21 | Lotte Co Ltd | サポジラの組織培養により得られる樹脂を用いたチユ−インガム |
| CN102816401A (zh) * | 2012-08-20 | 2012-12-12 | 湖南科技大学 | 一种适合植物组织冰冻切片的包埋剂和冰冻切片的方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2811281B1 (en) * | 2012-01-31 | 2017-10-25 | National Cancer Center | Composition for aggregating biological sample, method for preparing paraffin block using same, and method for analysing paraffin blocks by microscopy |
-
2016
- 2016-11-18 CN CN201611016373.3A patent/CN106769278B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5867147A (ja) * | 1981-10-16 | 1983-04-21 | Lotte Co Ltd | サポジラの組織培養により得られる樹脂を用いたチユ−インガム |
| CN102816401A (zh) * | 2012-08-20 | 2012-12-12 | 湖南科技大学 | 一种适合植物组织冰冻切片的包埋剂和冰冻切片的方法 |
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