CN112014479A - 一种缬沙坦中正戊酰氯的检测方法 - Google Patents

一种缬沙坦中正戊酰氯的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯的检测方法，采用液相色谱‑质谱联用法的技术，用苯胺对缬沙坦中的潜在杂质正戊酰氯进行柱前衍生化生成正戊酰苯胺，从而实现采用普通C18色谱柱进行缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯杂质的分离测定。所采用的方法在系统适用性、专属性、精密度、定量限、检测限、线性和范围及耐用性等方面符合中国药典方法验证的指导原则，可用于缬沙坦原料药的质量控制。

Description

一种缬沙坦中正戊酰氯的检测方法
技术领域
本发明涉及一种LCMS/MS法测定缬沙坦中正戊酰氯的方法，属于药物分析技术领域。
背景技术
缬沙坦(Valsartan)是一种临床上使用广泛的抗高血压药，具有副作用小，耐受性好的优势，同时可以用于糖尿病、肾病患者的高血压症治疗。其化学名为：N-(1-戊酰基)-N-[4-[2-(1H-四氮唑-5-基)苯基]苄基]-L-缬氨酸，结构式如下式I：
Figure 589413DEST_PATH_IMAGE001
其结构中侧链戊酰基团通常是以正戊酰氯为反应物引入，因此正戊酰氯是潜在的杂质。而酰氯为基因毒杂质警示结构，近年来，随着国内外药政部门相关法规的逐步健全，基因毒性杂质研究已经成为保证产品质量的关键之一。目前，USP、EP、JP和中国药典及相关文献、专利均未见正戊酰氯杂质的报道。
发明内容
本发明提供一种缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯的检测方法，采用苯胺对缬沙坦中的潜在杂质正戊酰氯进行柱前衍生化生成正戊酰苯胺，从而实现采用普通C18色谱柱进行缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯杂质的分离测定，所采用的方法在系统适用性、专属性、精密度、定量限、检测限、线性和范围及耐用性等方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于缬沙坦原料药的质量控制。
Figure 403785DEST_PATH_IMAGE002
本发明提供一种缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯的检测方法，该方法包括以下步骤：
（1）配制溶液：分别配制样品空白溶液、正戊酰苯胺储备液、参比溶液和测试溶液；
其中所述的样品空白溶液为苯胺溶液；所述的正戊酰苯胺储备液为正戊酰苯胺溶液；所述的参比溶液为正戊酰苯胺溶液；所述的测试溶液为缬沙坦溶液。
（2）测定方法：分别将空白溶液、样品空白溶液、参比溶液和测试溶液注入液相色谱-质谱联用仪，记录色谱图。其中色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速0.5±0.1mL/min；柱温：35±2℃；进样量：0.2μl；流动相为甲酸-甲醇-水体系，进行梯度洗脱。
所述样品空白溶液的配制方法为：向容量瓶中加入苯胺，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密量取适量上述溶液置于另一容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得样品空白溶液；
所述正戊酰苯胺储备液的配制方法为：精密称取正戊酰氯对照品适量于容量瓶中，并移取适量苯胺置于同一容量瓶中，室温振摇混匀，放置，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液适量置另一容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得正戊酰苯胺储备液；
所述参比溶液的配制方法为：精密量取正戊酰苯胺储备液适量置于容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得参比溶液；
所述测试溶液的配制方法为：精密称取缬沙坦样品适量于容量瓶中，并移取适量苯胺置于同一容量瓶中，室温超声振摇溶解，放置，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液适量置于另一容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得测试溶液。
所述的空白溶液为稀释液；所述的稀释液为乙腈。
所述乙腈为HPLC级；所述甲醇为HPLC级；所述水为超纯水；所述苯胺为AR及以上；所述正戊酰氯对照品为AR及以上；所述甲酸为AR及以上。
所述样品空白溶液中苯胺体积百分比浓度为1%~2%；正戊酰苯胺储备液中正戊酰苯胺的质量体积浓度为1μg/ml；参比溶液中正戊酰苯胺的质量体积浓度为8ng/ml~11ng/ml；测试溶液中缬沙坦质量体积浓度为1mg/ml~3 mg/ml；
所述色谱柱为Agilent Poroshell SB 50mm×4.6mm,2.7µm或效能相当的色谱柱。
所述的流动相包括流动相A和流动相B；所述的流动相A为甲酸-水体系；所述的流动相B为甲醇；所述甲酸-水体系中甲酸与水的体积比为1:800~1200，优选1:1000。
其中，流动相梯度过程如表1所示：
Figure 163931DEST_PATH_IMAGE003
质谱的条件如表2所示：
Figure 430964DEST_PATH_IMAGE004
更优选的，本发明所述的检测方法，包括以下步骤：
（1）配制溶液，分别配制样品空白溶液、正戊酰苯胺储备液、参比溶液和测试溶液；
所述样品空白溶液的配制方法为：取10ml容量瓶，加入2ml苯胺，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml置于另一10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得样品空白溶液；
所述正戊酰苯胺储备液的配制方法为：精密称取正戊酰氯对照品约40mg于200ml容量瓶中，并移取2ml苯胺置于同一容量瓶中，室温振摇混匀，放置约5分钟，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml置另一200ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得正戊酰苯胺储备液；
所述参比溶液的配制方法为：精密量取正戊酰苯胺储备液1.0ml 置于100ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得参比溶液；
所述测试溶液的配制方法为：精密称取缬沙坦样品约200mg于10ml容量瓶中，并移取2ml苯胺置于同一容量瓶中，室温超声振摇溶解，放置约5分钟，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml置于另一10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得测试溶液；
（2）测定方法：待系统稳定后，分别将空白溶液1针，样品空白溶液1针，参比溶液5针，测试溶液1针注入液相色谱-质谱联用仪，记录色谱图。其中色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速0.5±0.1mL/min；柱温：35±2℃；进样量：0.2μl；流动相为甲酸-甲醇-水体系，进行梯度洗脱；
所述的空白溶液为稀释液；所述的稀释液为乙腈；所述乙腈为HPLC级；所述甲醇为HPLC级；所述水为超纯水；所述苯胺为AR及以上；所述正戊酰氯对照品为AR及以上，所述正戊酰氯的纯度为98%；所述甲酸为AR及以上。所述色谱柱为Agilent Poroshell SB 50mm×4.6mm,2.7µm或效能相当的色谱柱；所述的流动相包括流动相A和流动相B；所述的流动相A为甲酸-水体系；所述的流动相B为甲醇；所述甲酸-水体系中甲酸与水的体积比为1:800~1200，优选1:1000。
其中流动相梯度过程如表1所示；其中质谱的条件如表2所示。
潜在杂质正戊酰氯含量可根据公式结果（ppm）=(Ru/Rs) ×(Cs/Cu)计算；
其中：Ru：测试溶液谱图中正戊酰苯胺峰面积；Rs：5针参比溶液谱图中正戊酰苯胺的平均峰面积；Cs：参比溶液中正戊酰苯胺的浓度(ng/ml)；Cu：测试溶液中的缬沙坦浓度(mg/ml)。
本发明中若无特殊说明，所述的正戊酰苯胺浓度是以正戊酰氯的质量进行计算，本发明中正戊酰氯的纯度为98%。
对所述的缬沙坦潜在杂质正戊酰氯含量的检测方法进行方法验证，验证结果显示该方法符合验证要求，具体验证结果见表3。
Figure 629864DEST_PATH_IMAGE005
由上可知，本发明所述的检测方法对缬沙坦的潜在杂质正戊酰氯杂质的色谱峰分离度高，在系统适用性、专属性、精密度、定量限、LOQ精密度、检测限、线性和范围及耐用性均符合要求。本发明利用液质联用色谱法，对缬沙坦的潜在杂质正戊酰氯杂质的检测，可用于监测缬沙坦原料药及制剂的质量。本发明首次提出了缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯杂质的检测方法，具有准确度高、精密度高、重现性好、稳定性好、专属性强等特点，同时本发明的测定方法操作简单，所用时间比较短，成本低，耗时短。
附图说明
图1缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯检测空白溶液质谱图
图2缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯检测参比溶液质谱图
图3缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯检测样品空白溶液质谱图
图4缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯检测正戊酰苯胺定位溶液质谱图
图5缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯检测缬沙坦定位溶液质谱图
图6缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯检测缬沙坦选择性溶液质谱图
图7为缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯检测精密度溶液质谱图
图8缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯检测定量限溶液质谱图
图9缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯检测检测限溶液质谱图
具体实施方式
下面通过具体实施例来进一步说明本发明。应当理解为：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制。在本发明技术方案的基础上对本发明的简单改进或者采用惯用手段或成分进行等同替换所得得到的技术方案均属于本发明的保护范围。
实施例1
(1)仪器条件及试剂
仪器及条件：超高效液相色谱仪，色谱柱：Agilent Poroshell SB 50mm×4.6mm,2.7µm；进样量：0.2μl；柱温：35℃；流速：0.5ml/min；流动相A：甲酸：水=1:1000（V/V）；流动相B：甲醇；Agilent QQQ配备ESI（+）MS检测器、电子分析天平。
梯度洗脱条件如表1所示，质谱仪条件如表2所示。
试剂及对照品：甲酸：AR及以上；超纯水：HPLC；甲醇：HPLC；苯胺：AR及以上；乙腈：HPLC；正戊酰氯对照品：AR及以上
（2）试验操作
①稀释液：乙腈；
②空白溶液：稀释液；
③样品空白溶液：取10ml容量瓶，加入2ml苯胺，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml置于10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，作为样品空白溶液；
④正戊酰苯胺储备液：精密称取正戊酰氯对照品约40mg，并移取2ml苯胺置于同一200ml容量瓶中，室温振摇混匀，放置约5分钟，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml置200ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；
⑤参比溶液：精密量取正戊酰苯胺储备液1.0ml 置于100ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
⑥测试溶液：精密称取缬沙坦样品约200mg，并移取2ml苯胺置于同一10ml容量瓶中，室温超声振摇溶解，放置约5分钟，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml置于10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。
待系统稳定后，进空白溶液1针，样品空白溶液1针，参比溶液5针，测试溶液1针，记录谱图。5针参比溶液以正戊酰苯胺峰面积计RSD应不大于10.0%。缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯含量采用该公式计算：结果（ppm）=(RU/Rs) ×(Cs/CU) ；其中：RU：测试溶液谱图中正戊酰苯胺峰面积； Rs：5针参比溶液谱图中正戊酰苯胺的平均峰面积；Cs：参比溶液中正戊酰苯胺的浓度(ng/ml)；CU：测试溶液中的缬沙坦浓度(mg/ml)。
Figure DEST_PATH_IMAGE006
实施例2系统适用性
系统适用性是通过5针参比溶液中正戊酰苯胺峰面积的RSD而实现的，要求5针参比溶液以正戊酰苯胺峰面积的RSD应不得大于10.0%。
（1）配制溶液
正戊酰苯胺储备液的配制：参考实施例1中正戊酰苯胺储备液配制，其浓度为986.3700ng/ml。
参比溶液的配制：参考实施例1中参比溶液配制，其浓度为9.8637 ng/ml；
（2）测定方法
按照实施例1的色谱条件进行测定，进样5针参比溶液，记录谱图。
（3）测定结果
Figure 236426DEST_PATH_IMAGE007
结论：5针参比溶液中的正戊酰苯胺的峰面积RSD为3.8%,符合标准。
实施例3专属性
专属性是通过测定样品空白溶液对正戊酰苯胺检测有无干扰；加样前后，选择性溶液中正戊酰苯胺的分离度和回收率而实现的，要求样品空白溶液对正戊酰苯胺检测应无干扰；选择性溶液中正戊酰苯胺与相邻峰的分离度应不小于1.5；加样前后，选择性溶液中正戊酰苯胺的回收率应在80.0%～120.0%之间。
（1）配制溶液
样品空白溶液的配制：同实施例1中样品空白溶液。
正戊酰苯胺定位溶液（参比溶液）的配制：参考实施例1中参比溶液配制，其浓度为9.8637 ng/ml；
测试溶液的配制：参考实施例1中测试溶液配制，其浓度为2.0037mg/ml；
缬沙坦选择性溶液的配制：精密称取缬沙坦样品203.80mg于10ml容量瓶中，精密量取1.0ml参考实施例1制备的正戊酰苯胺储备液于同一容量瓶中，并移取2ml苯胺，室温超声振摇溶解并放置约5min，乙腈稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml置于另一10ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得缬沙坦选择性溶液，其中缬沙坦浓度为2.0380mg/ml，正戊酰苯胺的浓度为9.8637ng/ml。
（2）测定方法
按照实施例1的色谱条件进行测定，进样空白溶液1针、样品空白溶液1针、参比溶液1针、选择性溶液3针，记录谱图。
（3）测定结果
Figure DEST_PATH_IMAGE008
结论：样品空白溶液对正戊酰苯胺检测无干扰；选择性溶液中正戊酰苯胺与相邻峰的分离度为4.9，符合标准规定。
Figure 167473DEST_PATH_IMAGE009
结论：加样前后，正戊酰苯胺的回收率在99.4%~106.9%之间，符合标准规定。
其中参比溶液引用系统适用性项下前3针参比溶液；选择性溶液中缬沙坦带入正戊酰苯胺的峰面积=选择性溶液中缬沙坦浓度/测试溶液中缬沙坦浓度×测试溶液中缬沙坦的正戊酰苯胺峰面积；回收率（%）=（选择性溶液峰面积-选择性溶液中缬沙坦带入正戊酰苯胺的峰面积）/参比溶液平均峰面积×100
实施例4精密度
精密度是通过6份测试溶液（加标）中正戊酰苯胺测定结果的RSD而实现的，要求6份缬沙坦测试溶液（加标）中，正戊酰苯胺测定结果的RSD应不大于10.0%。
（1）配制溶液
样品空白溶液的配制：同实施例1中样品空白溶液。
参比溶液的配制：参考实施例1中参比溶液配制，其浓度为9.8637 ng/ml；
精密度溶液的配制：参考实施例3中缬沙坦选择性溶液的配制6份溶液，所得溶液分别为精密度溶液1（缬沙坦浓度为：1.9990mg/ml，正戊酰苯胺浓度为：9.8637ng/ml）、精密度溶液2（缬沙坦浓度为：2.0124 mg/ml，正戊酰苯胺浓度为：9.8637ng/ml）、精密度溶液3（缬沙坦浓度为：2.0013 mg/ml，正戊酰苯胺浓度为：9.8637ng/ml）、精密度溶液4（缬沙坦浓度为：2.0197 mg/ml，正戊酰苯胺浓度为：9.8637ng/ml）、精密度溶液5（缬沙坦浓度为：2.0296mg/ml，正戊酰苯胺浓度为：9.8637ng/ml）、精密度溶液6（缬沙坦浓度为：2.0247 mg/ml，正戊酰苯胺浓度为：9.8637ng/ml）。
（2）测定方法
按照实施例1的色谱条件进行测定，进样精密度溶液1、精密度溶液2、精密度溶液3、精密度溶液4、精密度溶液5、精密度溶液6个1针，记录谱图。
（3）测定结果
Figure DEST_PATH_IMAGE010
结论：6份测试溶液（加标）中，正戊酰苯胺测定结果的RSD为4.1%，符合要求。
其中参比溶液谱图引用实施2系统适用性项下的5针参比溶液结果。
实施例5 定量限和检测限
检测限（LOD）是通过检测其响应信号与噪声之比大于3:1而得到；定量限(LOQ)是通过检测其响应信号与噪声之比大于10:1而得到的。在定量限浓度水平下，重复考察6个测试溶液，要求6次所得的谱图中，正戊酰苯胺单位浓度峰面积的RSD应不大于10.0%，LOQ应不大于1.5ppm，S/N值应大于10，LOD应小于LOQ，S/N值应大于3。
（1）配制溶液
正戊酰苯胺储备液的配制：参考实施例1中正戊酰苯胺储备液配制，其浓度为986.3700ng/ml；
测试溶液（a）配制：精密量取正戊酰苯胺储备液1.0ml于100ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml置于5ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得测试溶液（a），其浓度为1.9727ng/ml。
LOQ储备液的配制：参考实施例1中正戊酰苯胺储备液配制方法配制6份LOQ储备液，分别为LOQ-1储备液（浓度：986.3700ng/ml）、LOQ-2储备液（浓度：989.3100ng/ml）、LOQ-3储备液（浓度：987.8400ng/ml）、LOQ-4储备液（浓度：990.5350ng/ml）、LOQ-5储备液（浓度：990.5350ng/ml）、LOQ-6储备液（浓度：991.0250ng/ml）；
定量限溶液（LOQ-1）的配制：参考测试溶液（a）的配制方法配制，其浓度为1.9727ng/ml。
检测限溶液（LOD）的配制：将定量限溶液稀释，得到其浓度为0.5918ng/ml。
LOQ精密度溶液配制：参考测试溶液（a）的配制方法配制5份溶液，分别为LOQ-2(浓度：1.9786ng/ml)、LOQ-3(浓度：1.9757ng/ml)、LOQ-4(浓度：1.9811ng/ml)、LOQ-5(浓度：1.9811ng/ml)、LOQ-6(浓度：1.9821ng/ml)；
（2）测定方法
按照实施例1的色谱条件进行测定，进样6份LOQ溶液，每份1针，LOD溶液1针，记录谱图。
（3）测定结果
Figure 921802DEST_PATH_IMAGE011
结论：LOQ=1.0ppmS/N为21.39；LOD=0.3ppm，S/N为5.19；符合要求。
Figure DEST_PATH_IMAGE012
结论：6份LOQ的正戊酰苯胺单位浓度峰面积的RSD为5.7%，符合方案要求。
实施例6 线性和范围
在LOQ浓度~150%限度浓度范围内均匀的取6个点，以浓度为横坐标，正戊酰苯胺峰面积为纵坐标画曲线。要求正戊酰苯胺峰面积在LOQ浓度~150%限度浓度范围内应呈线性，线性相关系数的平方R2应不小于0.99。
（1）溶液配制;
线性溶液-LOQ-1：同实施例5 LOQ-1溶液配制，其浓度为1.9727ng/ml；
线性溶液-LOQ-2：同实施例5 LOQ-2溶液配制，其浓度为1.9786ng/ml；
线性溶液-LOQ-3：同实施例5 LOQ-3溶液配制，其浓度为1.9757ng/ml；
线性溶液-100%：同实施例2参比溶液的配制，其浓度为9.8637 ng/ml；
线性溶液配制：参考实施例1参比溶液的配制，分别配制线性溶液-50%（浓度：4.9564ng/ml）、线性溶液-80%（浓度：8.0042ng/ml）、线性溶液-120%（浓度：11.9144ng/ml）、线性溶液-150%（浓度：14.8201ng/ml）；
（2）测定方法
按照实施例1的色谱条件进行测定，线性溶液-LOQ-1、线性溶液-LOQ-2、线性溶液-LOQ-3各进样1针，线性溶液-50%、线性溶液-80%、线性溶液-100%、线性溶液-120%、线性溶液-150%各进样3针，记录谱图。
（3）测定结果
Figure 393235DEST_PATH_IMAGE013
结论：正戊酰苯胺在1.9727ng/ml~14.8201ng/ml浓度范围内应呈线性，斜率为24.167，截距为5.6235，线性相关系数的平方（R2）为0.9992；符合标准规定。
实施例7 耐用性（溶液稳定性）
考察参比溶液和选择性溶液在室温放置一段时间后，检测结果随时间变化的规律，为检测时参比溶液和测试溶液的放置时间提供参考。与0时参比溶液相比较，参比溶液在室温放置一段时间，正戊酰苯胺的回收率在80.0%～120.0%之间，且正戊酰苯胺无明显变化趋势，则参比溶液在室温考察期间稳定。选择性溶液在室温放置一段时间，正戊酰苯胺的回收率在80.0%～120.0%之间，且选择性溶液正戊酰苯胺无明显变化趋势，则选择性溶液在室温考察期间稳定。
（1）溶液配制
参比溶液配制：参考实施例1中参比溶液的配制，配制四份参比溶液，分别为参比溶液-1（浓度：9.9960ng/ml）、参比溶液-2（浓度：9.9201ng/ml）、参比溶液-3（浓度：9.8931ng/ml）、参比溶液-4（浓度：9.8637ng/ml）；
缬沙坦测试溶液的配制：参考实施例1中测试溶液的配制方法，得到溶液浓度为2.0037。
缬沙坦选择性溶液的配制：参考实施例3中缬沙坦选择性溶液的配制方法，分别配制缬沙坦选择性溶液-1（缬沙坦浓度：2.0232mg/ml；正戊酰苯胺浓度：9.9960ng/ml）、缬沙坦选择性溶液-2（缬沙坦浓度：2.1044mg/ml；正戊酰苯胺浓度：9.9201ng/ml）、缬沙坦选择性溶液-3（缬沙坦浓度：2.0038mg/ml；正戊酰苯胺浓度：9.8931ng/ml）、缬沙坦选择性溶液-4（缬沙坦浓度：2.0380mg/ml；正戊酰苯胺浓度：9.8637ng/ml）；
（2）测定方法
按照实施例1的色谱条件进行测定，参比溶液-1、参比溶液-2、参比溶液-3、参比溶液-4、缬沙坦选择性溶液-1、缬沙坦选择性溶液-2、缬沙坦选择性溶液-3、缬沙坦选择性溶液-4各进样1针，记录谱图。
（3）测定结果
Figure DEST_PATH_IMAGE014
结论：与0h相比较，参比溶液在室温放置43h内，正戊酰苯胺的回收率在98.7%～100.0%之间，且正戊酰苯胺无明显变化趋势，故参比溶液在室温放置43h内稳定。
其中，参比溶液-0h：引用系统适用性项下的参比溶液-1；参比溶液-4：考察时间约为22h；参比溶液-3：考察时间约为24h；参比溶液-2：考察时间约为31h；参比溶液-1：考察时间约为43h；回收率（%）=稳定性参比溶液峰面积/参比溶液0h峰面积×参比溶液0h浓度/稳定性参比溶液浓度×100
Figure 916620DEST_PATH_IMAGE015
结论：缬沙坦选择性溶液在室温放置43h内，正戊酰苯胺的回收率在97.2%～105.4%之间，且正戊酰苯胺无明显变化趋势，故缬沙坦选择性溶液在室温放置43h内稳定。
其中，.缬沙坦选择性溶液-0h：引用专属性项下选择性溶液-1；缬沙坦选择性溶液-4：考察时间约为22h；缬沙坦选择性溶液-3：考察时间约为24h；缬沙坦选择性溶液-2：考察时间约为31h；缬沙坦选择性溶液-1：考察时间约为43h；选择性溶液中缬沙坦带入正戊酰苯胺的峰面积=选择性溶液中缬沙坦浓度/测试溶液中缬沙坦浓度×测试溶液中缬沙坦的正戊酰苯胺峰面积；回收率（%）=（选择性溶液峰面积-选择性溶液中缬沙坦带入正戊酰苯胺的峰面积）/参比溶液0h峰面积×参比溶液0h浓度/选择性溶液中正戊酰苯胺浓度×100。

Claims (10)

1.一种缬沙坦中杂质正戊酰氯的检测方法，其特征在于，采用苯胺对缬沙坦中潜在杂质正戊酰氯进行衍生化，使用液相色谱-质谱联用法对衍生物正戊酰苯胺进行检测，以确定缬沙坦中正戊酰氯的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：
（1）配制溶液：分别配制样品空白溶液、参比溶液和测试溶液；所述的样品空白溶液为苯胺溶液；所述的参比溶液为正戊酰苯胺溶液；所述的测试溶液为缬沙坦溶液；
（2）进样：分别将空白溶液、样品空白溶液、参比溶液和测试溶液注入液相色谱-质谱联用仪，记录色谱图；其中色谱条件如下，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速0.4mL/min ~0.6mL/min；柱温：33℃~37℃；进样量：0.15μl~0.25μl；流动相为甲酸-甲醇-水体系，进行梯度洗脱。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其特征在于，质谱的条件如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其中所述的空白溶液为乙腈。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述样品空白溶液的配制方法为：向容量瓶中加入苯胺，加稀释液稀释至刻度，摇匀，量取适量上述溶液置于另一容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得样品空白溶液；所述参比溶液的配制方法为：量取正戊酰苯胺储备液适量置于容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得参比溶液；所述正戊酰苯胺储备液的配制方法为：称取正戊酰氯对照品适量于容量瓶中，并移取适量苯胺置于同一容量瓶中，室温振摇混匀，放置，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，量取上述溶液适量置另一容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得正戊酰苯胺储备液；所述测试溶液的配制方法为：称取缬沙坦样品适量于容量瓶中，并移取适量苯胺置于同一容量瓶中，室温超声振摇溶解，放置，加稀释液稀释至刻度，摇匀，量取上述溶液适量置于另一容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得测试溶液；
所述的稀释液为乙腈。
6.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其特征在于，流动相包括流动相A和流动相B；所述的流动相A为甲酸-水体系；所述的流动相B为甲醇。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，流动相梯度如下所示：
Figure 634426DEST_PATH_IMAGE002
。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的十八烷基硅烷键合硅胶柱长度为50mm，内径为4.6mm，粒径为2.7μm。
9.根据权利要求2或权利要求5所述的方法，其特征在于，所述样品空白溶液苯胺的体积百分比浓度为1%~3%；所述参比溶液正戊酰苯胺的质量体积浓度为8~11ng/ml；所述测试溶液中缬沙坦质量体积浓度为1mg/ml~3 mg/ml。
10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述甲酸-水体系中甲酸与水的体积比为1:800~1200，优选1:1000。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115389650A (zh) * 2022-07-22 2022-11-25 四川大学华西医院 Uplc-ms/ms法同时测定人血浆中缬沙坦、沙库巴曲及其代谢物浓度的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050224415A1 (en) * 1999-01-29 2005-10-13 Amersham Biosciences Kk Temperature-responsive polymer compound and process for producing the same
CN101153027A (zh) * 2002-09-23 2008-04-02 诺瓦提斯公司 缬沙坦的制备方法
CN103901117A (zh) * 2012-12-27 2014-07-02 江苏康缘药业股份有限公司 一种检测盐酸决奈达隆的方法
CN105301137A (zh) * 2015-11-23 2016-02-03 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 采用高效液相色谱法分析烷基酰氯类化合物的方法
CN107014944A (zh) * 2017-03-26 2017-08-04 中国药科大学 衍生化hplc‑dad法测定药物或其合成中间体中酰氯的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050224415A1 (en) * 1999-01-29 2005-10-13 Amersham Biosciences Kk Temperature-responsive polymer compound and process for producing the same
CN101153027A (zh) * 2002-09-23 2008-04-02 诺瓦提斯公司 缬沙坦的制备方法
CN103901117A (zh) * 2012-12-27 2014-07-02 江苏康缘药业股份有限公司 一种检测盐酸决奈达隆的方法
CN105301137A (zh) * 2015-11-23 2016-02-03 中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司 采用高效液相色谱法分析烷基酰氯类化合物的方法
CN107014944A (zh) * 2017-03-26 2017-08-04 中国药科大学 衍生化hplc‑dad法测定药物或其合成中间体中酰氯的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
C. M. MACHADO 等: "Development of an Indirect Reverse Phase Method for the Quality Assessment of an Acyl Halide", 《JOURNAL OF LIQUID CHROMATOGRAPHY & RELATED TECHNOLOGIES》 *
FRANK W 等: "On-Line HPLC-UV-mass spectrometry and tandem mass spectrometry for the rapid delineation and characterization of differences in complex mixtures: a case study using toxic oil variants", 《BIOMEDICAL CHROMATOGRAPHY》 *
李学敏 等: "2,3-二溴丙酰氯定量分析方法", 《染料与染色》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115389650A (zh) * 2022-07-22 2022-11-25 四川大学华西医院 Uplc-ms/ms法同时测定人血浆中缬沙坦、沙库巴曲及其代谢物浓度的方法

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