CN112004417A

CN112004417A - 动物饲料组合物及其用途

Info

Publication number: CN112004417A
Application number: CN201980027001.6A
Authority: CN
Inventors: R·洛佩兹-乌里巴里; E·佩雷兹·卡尔沃; W·施利夫卡
Original assignee: Novozymes AS; DSM IP Assets BV
Current assignee: Novozymes AS; DSM IP Assets BV
Priority date: 2018-04-25
Filing date: 2019-04-25
Publication date: 2020-11-27
Also published as: MX2020011133A; WO2019207053A1; EP3784048A1; BR112020021365A2; US20210112827A1

Abstract

本发明涉及包含至少一种益生菌和具有胞壁质酶活性的多肽的动物饲料组合物。

Description

动物饲料组合物及其用途

序列表的引用

本申请含有处于计算机可读形式的序列表，将其通过引用并入本文。

发明背景

技术领域

本发明涉及包含具有胞壁质酶活性的多肽和益生菌的动物饲料组合物及其用途。

背景技术

胞壁质酶是一种由许多生物作为对抗细菌的防御性机制而产生的O-糖基水解酶。该酶通过切割肽聚糖的糖苷键引起细菌细胞壁的水解；肽聚糖是细菌中的一种重要的结构分子。在细菌的细胞壁被胞壁质酶作用弱化后，由不平衡的渗透压导致细菌细胞溶解。

胞壁质酶天然存在于许多生物中，例如病毒、植物、昆虫、鸟类、爬行动物以及哺乳动物。在哺乳动物中，已经从鼻腔分泌物、唾液、眼泪、肠内容物、尿和乳中分离出胞壁质酶。该酶切割N-乙酰胞壁酸的1号碳与N-乙酰-D-葡糖胺的4号碳之间的糖苷键。在体内，这两种碳水化合物聚合以形成许多微生物的细胞壁多糖。

已经将胞壁质酶分类为五种不同的糖苷水解酶(GH)家族(CAZy，www.cazy.org)：鸡蛋清溶菌酶(GH22)、鹅蛋清溶菌酶(GH23)、噬菌体T4胞壁质酶(GH24)、鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas)鞭毛蛋白(GH73)以及拟鞘孢属(Chalaropsis)胞壁质酶(GH25)。从鸡蛋清提取的溶菌酶(GH22胞壁质酶)是在商业市场可获得的主要产品，并且即使当今存在许多其他已知的溶菌酶，传统上也称其为溶菌酶。

益生菌是活微生物，当以合适的量施用时，它们会对宿主产生健康益处。益生菌可防御肠中的病原体以提供健康益处。益生菌可与病原体竞争相同的必需营养素，从而使病原体可利用的必需营养素减少。可替代地，它们可与粘附位点结合，通过减少可用于病原体定殖的表面积来防止病原体附着。一个假设机制包括益生菌对免疫细胞的信号传导可导致细胞因子的分泌，从而靶向病原体进行破坏。最后，有人提出益生菌可通过释放细菌素来攻击病原生物，从而直接杀死它们。

在WO 2017/001703中已显示，微生物胞壁质酶改善动物性能。然而，组合不同类型的酶通常不会对单一酶产生任何有益的结果，参见T.T.dos Santos等人,“Protease,protease and superdosing phytase interactions in broiler performance,carcassyield and digesta transit time[蛋白酶、蛋白酶和超剂量植酸酶相互作用对肉鸡性能、屠体产量和消化运送时间的影响]”,Animal Nutrition[动物营养](2017),3,121-126，以及Adeola和Cowieson,“Opportunities and challenges in using exogenous enzymesto improve nonruminant animal production[利用外源酶改善非反刍动物生产的机会和挑战]”,J Anim Sci[动物科学杂志],(2011),89,189-3218。

在这一人口不断增长且人们食用更多动物蛋白的世界中，需要改善农场动物的生长性能，并且本发明的目的是设计有助于解决这一挑战的解决方案。

发明内容

本申请的发明人惊奇地发现，具有胞壁质酶活性的多肽与至少一种益生菌的组合具有用于动物营养的巨大潜力，例如用于改善饲料转化率(FCR)和/或增重和/或用于调节肠道菌群和/或用于改善益生菌的生物利用度。另外，发明人惊奇地发现，新型饲料组合物同样具有针对革兰氏+微生物的活性，从而导致死亡率降低。

本发明涉及包含一种或多种具有胞壁质酶活性的多肽和至少一种益生菌的组合物、动物饲料添加剂或动物饲料。此外，本发明涉及包含动物饲料添加剂、一种或多种蛋白质源和一种或多种能源的动物饲料，其特征在于该动物饲料还包含一种或多种益生菌和一种或多种具有胞壁质酶活性的真菌多肽。

本发明进一步涉及改善动物中一个或多个性能参数的方法，该方法包括向一种或多种动物施用包含至少一种益生菌和一种或多种具有胞壁质酶活性的多肽的动物饲料或动物饲料添加剂，其中该一个或多个性能参数选自由欧洲生产效率因子(EPEF)和饲料转化率(FCR)组成的组。

本发明还涉及改善动物的欧洲生产效率因子(EPEF)和/或饲料转化率(FCR)的方法，该方法包括向该动物施用本发明的动物饲料或动物饲料添加剂；本发明的动物饲料或动物饲料添加剂用于改善欧洲生产效率因子(EPEF)和/或饲料转化率(FCR)的用途；本发明的动物饲料或动物饲料添加剂，用于在治疗产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)感染中使用；以及增加动物的胃肠道微生物群中的栖粪杆菌(Faecalibacterium)属细菌群体的方法，该方法包括向该动物施用本发明的动物饲料或动物饲料添加剂。

本发明的另一个方面涉及改善单胃动物的欧洲生产效率因子(EPEF)、体重增加(BWG)和/或饲料转化率(FCR)的方法，该方法包括：

(a)制备包含动物饲料添加剂、一种或多种蛋白质源和一种或多种能源的动物饲料，其特征在于该动物饲料还包含一种或多种益生菌和一种或多种具有胞壁质酶活性的真菌多肽；和

(b)向该单胃动物提供该动物饲料。

本发明涉及饲料组合物中至少一种益生菌与具有胞壁质酶活性的多肽组合用于改善饲料转化率和/或每日增重和/或用于调节肠道菌群和/或用于改善益生菌的生物利用度的用途，其中该具有胞壁质酶活性的多肽是真菌GH24胞壁质酶或GH25胞壁质酶，并且其中该益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、肠球菌、链球菌、片球菌、明串珠菌、乳球菌、酒球菌、芽孢杆菌、肉食杆菌、丙酸杆菌、梭菌、巨型球菌和埃希氏菌、或其组合。

本发明的另一个方面涉及一种用于动物的饲料组合物或预混组合物或饲料添加剂，该饲料组合物或预混组合物或饲料添加剂包含至少一种具有胞壁质酶活性的多肽和至少一种益生菌，其中该具有胞壁质酶活性的多肽是真菌GH24胞壁质酶或GH25胞壁质酶，并且其中该益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、肠球菌、链球菌、片球菌、明串珠菌、乳球菌、酒球菌、芽孢杆菌、肉食杆菌、丙酸杆菌、梭菌、巨型球菌和埃希氏菌、或其组合。

序列表综述

SEQ ID NO:1是如在WO 2013/076253(SEQ ID NO:4)中描述的来自嗜碱枝顶孢(Acremonium alcalophilum)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:2是如在WO 2013/076253(SEQ ID NO:8)中描述的来自嗜碱枝顶孢的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:3是如在WO 2011/104339(SEQ ID NO:3)中描述的来自烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:4是如在WO 2009/102755(SEQ ID NO:4)中描述的来自里氏木霉(Trichoderma reesei)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:5是如在WO 2005/080559(SEQ ID NO:2)中描述的来自朱红栓菌(Trametes cinnabarina)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:6是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:3)中描述的来自Sporormiafimetaria的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:7是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:6)中描述的来自点孔座壳(Poronia punctata)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:8是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:9)中描述的来自点孔座壳的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:9是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:12)中描述的来自轮枝菌属物种(Lecanicillium sp.)WMM742的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:10是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:15)中描述的来自轮枝菌属物种WMM742的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:11是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:18)中描述的来自马爪甲团囊菌(Onygena equina)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:12是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:21)中描述的来自淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:13是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:24)中描述的来自Trichobolus zukalii的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:14是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:27)中描述的来自桔青霉(Penicillium citrinum)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:15是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:30)中描述的来自珠芽枝鼻菌(Cladorrhinum bulbillosum)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:16是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:33)中描述的来自西部伞状霉(Umbelopsis westeae)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:17是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:36)中描述的来自接合菌属物种(Zygomycetes sp.)XZ2655的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:18是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:39)中描述的来自毛壳菌(Chaetomium cupreum)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:19是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:42)中描述的来自深红虫草(Cordyceps cardinalis)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:20是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:45)中描述的来自青霉属物种(Penicillium sp.)'qii'的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:21是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:48)中描述的来自曲霉属新物种(Aspergillus sp.nov)XZ2609的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:22是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:51)中描述的来自拟青霉属物种(Paecilomyces sp.)XZ2658的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:23是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:54)中描述的来自拟青霉属物种XZ2658的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:24是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:60)中描述的来自Pycnidiophora cf dispera的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:25是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:63)中描述的来自Thermomucor indicae-seudaticae的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:26是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:66)中描述的来自虫草棒束孢(Isaria farinosa)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:27是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:69)中描述的来自轮枝菌属物种WMM742的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:28是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:72)中描述的来自柄孢壳属物种(Zopfiella sp.)t180-6的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:29是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:75)中描述的来自黄色樟绒枝霉(Malbranchea flava)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:30是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:80)中描述的来自多毛垂幕菇(Hypholoma polytrichi)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:31是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:83)中描述的来自弯头曲霉(Aspergillus deflectus)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:32是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:86)中描述的来自Ascobolus stictoideus的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:33是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:89)中描述的来自锥毛壳属物种(Coniochaeta sp.)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:34是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:92)中描述的来自开裂轮层炭壳菌(Daldinia fissa)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:35是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:95)中描述的来自座坚壳属物种(Rosellinia sp.)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:36是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:98)中描述的来自粪盘菌属物种(Ascobolus sp.)ZY179的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:37是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:101)中描述的来自Curreya属物种(Curreya sp.)XZ2623的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:38是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:104)中描述的来自盾壳霉属物种(Coniothyrium sp.)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:39是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:107)中描述的来自炭团菌属物种(Hypoxylon sp.)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:40是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:110)中描述的来自炭角菌属物种(Xylariaceae sp.)1653h的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:41是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:113)中描述的来自炭团菌属物种的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:42是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:116)中描述的来自帚状云南螺(Yunnania penicillata)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:43是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:119)中描述的来自白色侧齿霉(Engyodontium album)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:44是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:122)中描述的来自球芽泛普可尼亚菌(Metapochonia bulbillosa)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:45是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:125)中描述的来自副榛色半内果菌(Hamigera paravellanea)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:46是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:128)中描述的来自翠绿绿僵菌(Metarhizium iadini)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:47是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:131)中描述的来自金黄色嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:48是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:134)中描述的来自罗斯曼枝穗霉(Clonostachys rossmaniae)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:49是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:137)中描述的来自棒状简枝霉(Simplicillium obclavatum)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:50是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:140)中描述的来自膨胀曲霉(Aspergillus inflatus)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:51是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:143)中描述的来自Paracremonium inflatum的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:52是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:146)中描述的来自韦斯特壳属物种(Westerdykella sp.)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:53是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:155)中描述的来自半球球盖菇(Stropharia semiglobata)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:54是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:158)中描述的来自Gelasinospora cratophora的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:55是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:221)中描述的来自金针菇(Flammulina velutipes)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:56是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:224)中描述的来自Deconica coprophila的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:57是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:227)中描述的来自微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:58是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:230)中描述的来自半球球盖菇的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:59是如在PCT/CN2017/075978(SEQ ID NO:233)中描述的来自半球球盖菇的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:60是如在PCT/CN2017/075960(SEQ ID NO:3)中描述的来自弗格斯毁丝霉(Myceliophthora fergusii)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:61是如在PCT/CN2017/075960(SEQ ID NO:15)中描述的来自高山被孢霉(Mortierella alpina)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:62是如在PCT/CN2017/075960(SEQ ID NO:27)中描述的来自深酒色青霉(Penicillium atrovenetum)的GH25胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:63是如在WO 2017/000922(SEQ ID NO:257)中描述的来自褐孢长毛盘菌(Trichophaea saccata)的GH24胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:64是如在WO 2017/000922(SEQ ID NO:264)中描述的来自嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)的GH24胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:65是如在WO 2017/000922(SEQ ID NO:267)中描述的来自哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的GH24胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:66是如在WO 2017/000922(SEQ ID NO:291)中描述的来自微小长毛盘菌(Trichophaea minuta)的GH24胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:67是如在WO 2017/000922(SEQ ID NO:294)中描述的来自毛壳属物种(Chaetomium sp.)ZY287的GH24胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:68是如在WO 2017/000922(SEQ ID NO:297)中描述的来自被孢霉属物种(Mortierella sp.)ZY002的GH24胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:69是如在WO 2017/000922(SEQ ID NO:300)中描述的来自绿僵菌属物种(Metarhizium sp.)XZ2431的GH24胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:70是如在WO 2017/000922(SEQ ID NO:303)中描述的来自金黄色地丝霉(Geomyces auratus)的GH24胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

SEQ ID NO:71是如在WO 2017/000922(SEQ ID NO:306)中描述的来自Ilyonectria rufa的GH24胞壁质酶的成熟氨基酸序列。

定义

动物：术语“动物”是指除人以外的任何动物。动物的实例是单胃动物，包括但不限于猪(pig或swine)(包括但不限于仔猪、成长猪、和母猪)；家禽，例如火鸡、鸭、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子(包括乳鸽)和鸡(包括但不限于肉用仔鸡(本文称为肉鸡)、小鸡、下蛋鸡(本文称为蛋鸡))；马(包括但不限于热血马、冷血马和温血马)，甲壳类动物(包括但不限于河虾和对虾)，以及鱼(包括但不限于琥珀鱼、巨滑舌鱼、魮鱼、鲈鱼、蓝鱼、菖鲉(bocachico)、鲤科鱼、鲶鱼、卡叉马鱼(cachama)、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉鱼、遮目鱼、嘉鱼、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、小翻车鱼、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、瓜波特鱼(guapote)、大比目鱼、爪哇鱼(java)、野鲮属鱼、莱鱼(lai)、泥鳅、鲭鱼、牛奶鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕高鱼(paco)、珍珠斑点鱼(pearlspot)、佩杰瑞鱼(pejerrey)、河鲈鱼、狗鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、鲑鱼、虾米鱼(sampa)、加拿大鰤鲈、黑鲈、海鲤、发光鱼(shiner)、睡鲨(sleeper)、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、比目鱼、刺足鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼(sweetfish)、丁鲷、特罗尔鱼(terror)、罗非鱼、鳟鱼、鲔鱼、多宝鱼、白鳟鱼、白斑鱼和白鱼)。

动物饲料：术语“动物饲料”是指适合于或旨在用于由动物摄入的任何化合物、制剂或混合物。单胃动物的动物饲料通常包括浓缩物连同维生素、矿物质、酶、直接饲养的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(例如在预混物中)，而反刍动物的动物饲料通常包括草料(包括粗粮和青贮)，并且可以进一步包括浓缩物连同维生素、矿物质、酶、直接饲养的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(例如在预混物中)。

体重增加：术语“体重增加”意指在给定时间段期间动物的活重的增加，例如从第1天到第21天的体重增加。

浓缩物：术语“浓缩物”意指具有高蛋白和能量浓度的饲料，例如鱼粉、糖蜜、低聚糖、高粱、种子和谷物(例如来自玉米、燕麦、黑麦、大麦、小麦的整体或由破碎、碾磨等制备的)、油籽滤饼(例如来自棉籽、红花、向日葵、大豆(例如豆粕)、油菜籽/卡诺拉(canola)、花生或落花生)、棕榈仁饼、酵母衍生材料和酒糟(例如湿酒糟(WDS)和具有可溶物的干酒糟(DDGS))。

欧洲生产效率因子(EPEF)：欧洲生产效率因子是一种比较动物性能的方法。这种单一数字有助于比较农场内部和农场之间的性能，并可用于评估环境、气候和动物管理变量。EPEF计算为[(存活率(％)×活体重(kg))/(耗竭时的年龄(天)×FCR)]×100，其中存活率是出栏时存活的动物的百分比，活体重是出栏时动物的平均体重，耗竭年龄是出栏时动物的年龄，并且FCR是出栏时的饲料转化率。

饲料转化率(FCR)：FCR是动物将饲料质量转换为所需输出增加的效率的量度。饲养肉用动物-例如猪、家禽和鱼-输出是动物获得的质量。具体而言，FCR是遍及指定的时间段内，按照饲料摄入量除以增重计算的。FCR的改善意指FCR值的降低。FCR改善2％意为FCR降低2％。

饲料效率：术语“饲料效率”意指当动物在一段时间内被任意(ad-libitum)喂养或喂养指定量的食物时每单位饲料的增重量。“增加的饲料效率”意味着根据本发明的饲料添加剂组合物在饲料中的使用导致与不用所存在的所述饲料添加剂组合物喂养的动物相比，每单位饲料摄入的增重增加。

草料：如本文定义的术语“草料”还包括粗粮。草料是新鲜的植物物料，例如来自草料植物(禾草)和其他草料植物(海草、发芽谷物和豆类植物)或其任何组合的干草和青贮。草料植物的实例是紫花苜蓿(Alfalfa、lucerne)、百脉根、芸苔属植物(例如，羽衣甘蓝、油菜籽(卡诺拉、芜菁甘蓝(瑞典芜菁)、萝卜)、三叶草(例如，杂三叶、红三叶、地三叶、白三叶)、禾草(例如，百慕大草、雀麦、伪燕麦草、羊茅、石南草(heath grass)、草地早熟禾、鸭茅(orchard grass)、黑麦草、梯牧草(Timothy-grass))、玉米(玉蜀黍)、粟、大麦、燕麦、黑麦、高粱、大豆和小麦和蔬菜(例如甜菜)。草料进一步包括来自谷物生产的作物残余物(例如玉米秸秆；来自小麦、大麦、燕麦、黑麦和其他谷物的稻草)；来自蔬菜像甜菜缨(beet top)的残余物；来自油籽生产像来自大豆、油菜籽和其他豆科作物的茎和叶的残余物；以及来自用于动物或人消耗的谷物的精制或来自燃料生产或其他行业的部分。

片段：术语“片段”意指具有从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基末端缺失的一个或多个(例如，几个)氨基酸的多肽或催化结构域；其中片段具有胞壁质酶活性。

在一方面，GH24胞壁质酶(例如SEQ ID NO:63至71中之一)的片段包含至少230个氨基酸，例如至少235个氨基酸、至少240个氨基酸、或至少245个氨基酸，并且具有胞壁质酶活性。在另一方面，GH24胞壁质酶(例如SEQ ID NO:63至71中之一)的片段包含成熟多肽长度的至少90％，例如成熟多肽长度的至少92％、至少94％、至少96％、至少98％或至少99％，并且具有胞壁质酶活性。

在一方面，GH25胞壁质酶(例如SEQ ID NO:1至72中之一)的片段包含至少180个氨基酸，例如至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸、至少200个氨基酸、至少205个氨基酸、或至少210个氨基酸，并且具有胞壁质酶活性。在另一方面，GH25胞壁质酶(例如SEQ ID NO:1至72中之一)的片段包含成熟多肽长度的至少90％，例如成熟多肽长度的至少92％、至少94％、至少96％、至少98％或至少99％，并且具有胞壁质酶活性。

分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分，增加该物质的量而修饰的任何物质(例如，编码该物质的基因的多个拷贝；比与编码该物质的基因天然相关联的启动子更强的启动子的使用)。分离的物质可以存在于发酵液样品中。

胞壁质酶活性：术语“胞壁质酶活性”意指肽聚糖中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰-D-葡糖胺残基之间或壳糊精中N-乙酰-D-葡糖胺残基之间的1,4-β-键的酶促水解，由于渗透压导致溶菌作用。胞壁质酶属于EC 3.2.1.17酶类。通常通过比浊测定来测量胞壁质酶活性。该方法是基于由胞壁质酶溶菌作用诱导的藤黄微球菌(Micrococcus luteus)ATCC 4698悬浮液的浊度变化。在适当的实验条件下，这些变化与培养基中胞壁质酶的量成比例(c.f.联合国粮食及农业组织联合食品添加剂规格综合纲要(the Combined Compendium of FoodAdditive Specifications of the Food and Agriculture Organisation of the UN)的INS 1105(www.fao.org))。出于本发明的目的，根据实例3中描述的浊度测定法(“胞壁质酶活性的确定”)来确定胞壁质酶活性，并且如果多肽示出针对一种或多种细菌如藤黄微球菌ATCC 4698和/或不死微小杆菌(Exiguobacterium undea)(DSM14481)的活性，则该多肽具有胞壁质酶活性。在一方面，本发明的GH25胞壁质酶具有SEQ ID NO:1的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％的胞壁质酶活性。在一方面，本发明的GH24胞壁质酶具有SEQ ID NO:63的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％的胞壁质酶活性。

成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。

获得自或可获得自：术语“获得自或可获得自”是指多肽可以在来自特定分类等级的生物中发现。在一个实施例中，该多肽获得自或可获得自真菌界，其中术语界是分类等级。在优选的实施例中，该多肽获得自或可获得自子囊菌门(Ascomycota)，其中术语门是分类等级。在另一个优选的实施例中，该多肽获得自或可获得自盘菌亚门(Pezizomycotina)，其中术语亚门是分类等级。在另一个优选的实施例中，该多肽获得自或可获得自散囊菌纲(Eurotiomycetes)，其中术语纲是分类等级。

如果多肽的分类等级未知，则它可以容易地由本领域普通技术人员通过进行多肽的BLASTP检索(使用例如国家生物技术信息中心(the National Center forBiotechnology Information，NCIB)网站http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)并将其与最接近的同系物进行比较来确定。技术人员还可以将序列与所提交的申请的序列进行比较。作为已知多肽的片段的未知多肽被认为是属于相同的分类物种。包含在多达10个位置中的取代、缺失和/或插入的未知天然多肽或人工变体被认为来自与已知多肽相同的分类物种。

粗粮：术语“粗粮”意指具有高水平纤维的干植物物料，例如来自种子和谷物以及作物残余物(例如秸秆、干椰肉(copra)、稻草、谷壳、甜菜废料)的纤维、麸、苞叶。

序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。

出于本发明的目的，使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的Needle的输出(使用非简化选项(nobrief option)获得)用作同一性百分比并且计算如下：

(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)

基本上纯的多肽：术语“基本上纯的多肽”意指含有按重量计至多10％、至多8％、至多6％、至多5％、至多4％、至多3％、至多2％、至多1％和至多0.5％的与其天然或重组地相关的其他多肽材料的制剂。优选地，该多肽按存在于制剂中的总多肽材料的重量计是至少92％纯的，例如至少94％纯的、至少95％纯的、至少96％纯的、至少97％纯的、至少98％纯的、至少99％纯的、至少99.5％纯的以及100％纯的。本发明的多肽优选处于基本上纯的形式。这可以例如通过熟知的重组方法或通过经典纯化方法制备该多肽来实现。

变体：术语“变体”意指包含在一个或多个(例如，几个)位置处的一个或多个(几个)氨基酸残基的改变(即，取代、插入、和/或缺失)的具有胞壁质酶活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占据某一位置的氨基酸；缺失意指去除占据某一位置的氨基酸；并且插入意指邻近于并且紧跟着占据该位置的氨基酸之后添加1、2、或3个氨基酸。

在一方面，胞壁质酶变体可包含从1到10的改变，即1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变，并且具有亲本胞壁质酶(例如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:63)的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％的胞壁质酶活性。

具体实施方式

包含具有胞壁质酶活性的多肽和至少一种益生菌的动物饲料和动物饲料添加剂

已经出人意料地发现，与未添加本发明的胞壁质酶的相同动物饲料相比，向包含动物饲料添加剂、一种或多种蛋白质源和一种或多种能源的动物饲料中补充胞壁质酶(优选真菌胞壁质酶)和益生菌在动物中提供了额外的性能益处。

因此，在第一个方面，本发明涉及包含动物饲料添加剂、一种或多种蛋白质源和一种或多种能源的动物饲料，其特征在于该动物饲料还包含一种或多种益生菌和一种或多种具有胞壁质酶活性的真菌多肽。

在一个实施例中，该胞壁质酶是GH24胞壁质酶，优选真菌GH24胞壁质酶，优选获得自或可获得自子囊菌门，更优选获得自或可获得自散囊菌纲。在一个实施例中，该胞壁质酶是GH25胞壁质酶，优选真菌GH25胞壁质酶，优选获得自或可获得自子囊菌门，更优选获得自或可获得自散囊菌纲。在优选的实施例中，该胞壁质酶是GH25胞壁质酶。

在一个实施例中，本发明涉及包含动物饲料添加剂、一种或多种蛋白质源和一种或多种能源的动物饲料，其特征在于该动物饲料或饲料添加剂还包含一种或多种益生菌和一种或多种具有胞壁质酶活性的真菌多肽，其中该具有胞壁质酶活性的真菌多肽选自由以下组成的组：

(a)与SEQ ID NO:1具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(b)与SEQ ID NO:2具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(c)与SEQ ID NO:3具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(d)与SEQ ID NO:4具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(e)与SEQ ID NO:5具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(f)与SEQ ID NO:6具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(g)与SEQ ID NO:7具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(h)与SEQ ID NO:8具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(i)与SEQ ID NO:9具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(j)与SEQ ID NO:10具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(k)与SEQ ID NO:11具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(l)与SEQ ID NO:12具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(m)与SEQ ID NO:13具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(n)与SEQ ID NO:14具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(o)与SEQ ID NO:15具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(p)与SEQ ID NO:16具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(q)与SEQ ID NO:17具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(r)与SEQ ID NO:18具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(s)与SEQ ID NO:19具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(t)与SEQ ID NO:20具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(u)与SEQ ID NO:21具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(v)与SEQ ID NO:22具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(w)与SEQ ID NO:23具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(x)与SEQ ID NO:24具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(y)与SEQ ID NO:25具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(z)与SEQ ID NO:26具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(aa)与SEQ ID NO:27具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ab)与SEQ ID NO:28具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ac)与SEQ ID NO:29具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ad)与SEQ ID NO:30具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ae)与SEQ ID NO:31具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(af)与SEQ ID NO:32具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ag)与SEQ ID NO:33具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ah)与SEQ ID NO:34具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ai)与SEQ ID NO:35具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(aj)与SEQ ID NO:36具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ak)与SEQ ID NO:37具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(al)与SEQ ID NO:38具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(am)与SEQ ID NO:39具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(an)与SEQ ID NO:40具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ao)与SEQ ID NO:41具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ap)与SEQ ID NO:42具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(aq)与SEQ ID NO:43具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ar)与SEQ ID NO:44具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(as)与SEQ ID NO:45具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(at)与SEQ ID NO:46具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(au)与SEQ ID NO:47具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(av)与SEQ ID NO:48具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(aw)与SEQ ID NO:49具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ax)与SEQ ID NO:50具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ay)与SEQ ID NO:51具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(az)与SEQ ID NO:52具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(ba)与SEQ ID NO:53具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bb)与SEQ ID NO:54具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bc)与SEQ ID NO:55具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bd)与SEQ ID NO:56具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(be)与SEQ ID NO:57具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bf)与SEQ ID NO:58具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bg)与SEQ ID NO:59具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bh)与SEQ ID NO:60具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bi)与SEQ ID NO:61具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bj)与SEQ ID NO:62具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bk)与SEQ ID NO:63具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bl)与SEQ ID NO:64具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bm)与SEQ ID NO:65具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bn)与SEQ ID NO:66具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bo)与SEQ ID NO:67具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bp)与SEQ ID NO:68具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bq)与SEQ ID NO:69具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(br)与SEQ ID NO:70具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bs)与SEQ ID NO:71具有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的多肽；

(bt)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41、SEQ IDNO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、或SEQ ID NO:71的变体，该变体在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个位置中包含一个或多个氨基酸取代(优选保守取代)和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；

(bu)如下多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)、(bf)、(bg)、(bh)、(bi)、(bj)、(bk)、(bl)、(bm)、(bn)、(bo)、(bp)、(bq)、(br)、(bs)或(bt)的多肽以及1和10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；以及

(bv)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)、(bf)、(bg)、(bh)、(bi)、(bj)、(bk)、(bl)、(bm)、(bn)、(bo)、(bp)、(bq)、(br)、(bs)或(bt)的多肽的片段，该片段具有胞壁质酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含如下或由如下组成：SEQ ID NO:1的氨基酸1至208、SEQ ID NO:2的氨基酸1至213、SEQ ID NO:3的氨基酸1至218、SEQ ID NO:4的氨基酸1至208、SEQ ID NO:5的氨基酸1至215、SEQ ID NO:6的氨基酸1至207、SEQ ID NO:7的氨基酸1至201、SEQ ID NO:8的氨基酸1至201、SEQ ID NO:9的氨基酸1至203、SEQ ID NO:10的氨基酸1至208、SEQ ID NO:11的氨基酸1至207、SEQ ID NO:12的氨基酸1至208、SEQ ID NO:13的氨基酸1至207、SEQ ID NO:14的氨基酸1至207、SEQ ID NO:15的氨基酸1至207、SEQ ID NO:16的氨基酸1至208、SEQ ID NO:17的氨基酸1至208、SEQ ID NO:18的氨基酸1至206、SEQ IDNO:19的氨基酸1至207、SEQ ID NO:20的氨基酸1至216、SEQ ID NO:21的氨基酸1至218、SEQID NO:22的氨基酸1至204、SEQ ID NO:23的氨基酸1至203、SEQ ID NO:24的氨基酸1至208、SEQ ID NO:25的氨基酸1至210、SEQ ID NO:26的氨基酸1至207、SEQ ID NO:27的氨基酸1至207、SEQ ID NO:28的氨基酸1至208、SEQ ID NO:29的氨基酸1至217、SEQ ID NO:30的氨基酸1至208、SEQ ID NO:31的氨基酸1至201、SEQ ID NO:32的氨基酸1至202、SEQ ID NO:33的氨基酸1至207、SEQ ID NO:34的氨基酸1至202、SEQ ID NO:35的氨基酸1至201、SEQ ID NO:36的氨基酸1至202、SEQ ID NO:37的氨基酸1至206、SEQ ID NO:38的氨基酸1至202、SEQ IDNO:39的氨基酸1至202、SEQ ID NO:40的氨基酸1至202、SEQ ID NO:41的氨基酸1至202、SEQID NO:42的氨基酸1至206、SEQ ID NO:43的氨基酸1至207、SEQ ID NO:44的氨基酸1至208、SEQ ID NO:45的氨基酸1至215、SEQ ID NO:46的氨基酸1至217、SEQ ID NO:47的氨基酸1至214、SEQ ID NO:48的氨基酸1至208、SEQ ID NO:49的氨基酸1至203、SEQ ID NO:50的氨基酸1至216、SEQ ID NO:51的氨基酸1至207、SEQ ID NO:52的氨基酸1至208、SEQ ID NO:53的氨基酸1至207、SEQ ID NO:54的氨基酸1至208、SEQ ID NO:55的氨基酸1至207、SEQ ID NO:56的氨基酸1至207、SEQ ID NO:57的氨基酸1至208、SEQ ID NO:58的氨基酸1至207、SEQ IDNO:59的氨基酸1至207、SEQ ID NO:60的氨基酸1至207、SEQ ID NO:61的氨基酸1至204、SEQID NO:62的氨基酸1至216、SEQ ID NO:63的氨基酸1至245、SEQ ID NO:64的氨基酸1至249、SEQ ID NO:65的氨基酸1至248、SEQ ID NO:66的氨基酸1至245、SEQ ID NO:67的氨基酸1至249、SEQ ID NO:68的氨基酸1至245、SEQ ID NO:69的氨基酸1至247、SEQ ID NO:70的氨基酸1至250、或SEQ ID NO:71的氨基酸1至240。

在本发明的实施例中，该胞壁质酶与商业产品Balancius^TM的酶具有至少90％的序列同一性。典型地，该胞壁质酶与商业产品Balancius^TM的酶具有至少95％的序列同一性，例如至少98％的序列同一性或至少99％的序列同一性。Balancius^TM在本文中由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO.2限定。

保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。保守取代的其他实例是G至A；A至G、S；V至I、L、A、T、S；I至V、L、M；L至I、M、V；M至L、I、V；P至A、S、N；F至Y、W、H；Y至F、W、H；W至Y、F、H；R至K、E、D；K至R、E、D；H至Q、N、S；D至N、E、K、R、Q；E至Q、D、K、R、N；S至T、A；T至S、V、A；C至S、T、A；N至D、Q、H、S；Q至E、N、H、K、R。

可以根据本领域中已知的程序，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一种技术中，在分子中的每个残基处引入单一丙氨酸突变，并且测试所得突变分子的胞壁质酶活性以鉴定对分子的活性关键的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。也可以结合假定接触位点氨基酸的突变，如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记进行确定的对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。

WO 2013/076253披露了WO 2013/076253的SEQ ID NO:8的氨基酸残基D95和E97是催化残基。PCT/CN2017/075960披露了12种GH25胞壁质酶的催化氨基酸。该比对可用于确定要求保护的胞壁质酶中催化氨基酸的位置。在一个实施例中，当使用SEQ ID NO:39进行编号时，不对对应于E97和D95的氨基酸进行改变。用于GH24胞壁质酶的催化氨基酸可通过将序列与已知序列进行比对来确定，在已知序列中已经确定了一个或多个催化氨基酸(参见www.uniprot.org)。

本发明涉及包含动物饲料添加剂、一种或多种蛋白质源和一种或多种能源的动物饲料或动物饲料添加剂，其特征在于该动物饲料或饲料添加剂还包含一种或多种益生菌、一种或多种具有胞壁质酶活性的真菌多肽，其中该益生菌选自对宿主产生健康益处的任何微生物。

在典型的实施例中，一种或多种益生菌可选自由以下组成的组：乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、肠球菌、链球菌、片球菌、明串珠菌、乳球菌、酒球菌、芽孢杆菌、肉食杆菌、丙酸杆菌、梭菌、巨型球菌和埃希氏菌、或其组合。

在合适的实施例中，动物饲料组合物包含一种或多种益生菌，该一种或多种益生菌选自由以下组成的组：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双歧杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌(Pediococsus acidilactici)、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特氏丙酸杆菌(Propionibacterium thoenii)、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminus)、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双歧杆菌动物亚种(Bifidobacterium animalis ssp.animalis)、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius ssp.salivarius)、埃氏巨型球菌(Megasphaera elsdenii)、和丙酸杆菌属物种。

在另一个合适的实施例中，乳杆菌菌株可选自由以下组成的组：嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、格氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌、瑞士乳杆菌、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、淀粉乳杆菌(Lactobacillusamylovorus)、禾口鸡乳杆菌(Lactobacillus gallinarum)、清酒乳杆菌(Lactobacillussakei)、弯曲乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、戊糖乳杆菌和约氏乳杆菌、及其组合。

乳杆菌的优选实施例可选自由以下组成的组：嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌、瑞士乳杆菌和约氏乳杆菌、及其组合。

双歧杆菌可包括多种革兰氏阳性非能动厌氧细菌。双歧杆菌属的菌株也经常用作益生菌，因为已知它们对胆盐具有多种抗性机制，这是很重要的，因为益生菌的有益作用通常是在这种生物流体的存在下产生的。双歧杆菌可选自由以下组成的组：两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、青春双歧杆菌、长双歧杆菌和短双歧杆菌。

酵母菌可选自由以下组成的组：酿酒酵母、贝酵母、嗜热酵母(Saccharomycesthermophilus)和布拉酵母，特别是嗜热酵母和布拉酵母。

合适的乳球菌乳酸乳球菌。

在合适的实施例中，肠球菌选自由耐久肠球菌和屎肠球菌组成的组。

在合适的实施例中，链球菌是嗜热链球菌。

在合适的实施例中，芽孢杆菌选自由以下组成的组：枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌。蜡样芽孢杆菌，即蜡样芽孢杆菌NVH 75/95是一种用于动物的有效益生菌。

在典型的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料包含来自以下一种或多种枯草芽孢杆菌菌株的益生菌：3A-P4(PTA-6506)、15A-P4(PTA-6507)、22C-P1(PTA-6508)、2084(NRRL B-500130)、LSSA01(NRRL-B-50104)、BS27(NRRL B-501 05)、BS 18(NRRL B-50633)、BS 278(NRRL B-50634)、DSM 29870、DSM 29871、DSM 32315、NRRL B-50136、NRRLB-50605、NRRL B-50606、NRRL B-50622以及PTA-7547。

合适地，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料还包含来自以下一种或多种短小芽孢杆菌菌株的益生菌：NRRL B-50016、ATCC 700385、NRRL B-50885或NRRL B-50886。

在另一个典型的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料包含来自以下一种或多种地衣芽孢杆菌菌株的益生菌：NRRL B50015、NRRL B-50621或NRRL B-50623。

在另一个合适的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料包含来自以下一种或多种解淀粉芽孢杆菌菌株的益生菌：DSM29869、DSM 29869、NRRL B 50607、PTA-7543、PTA-7549、NRRL B-50349、NRRL B-50606、NRRL B-50013、NRRL B-50151、NRRL B-50141、NRRL B-50147或NRRL B-50888。

在合适的实施例中，埃希氏菌选自由以下组成的组：尼氏大肠杆菌(Escherichiacoli Nissle)，例如尼氏大肠杆菌1917。

在有趣的实施例中，本发明的动物饲料或动物饲料添加剂的特征在于，一种或多种益生菌为包含枯草芽孢杆菌菌株2084登录号NRRI B-50013、枯草芽孢杆菌菌株LSSAO1登录号NRRL B-50104和枯草芽孢杆菌菌株15A-P4 ATCC登录号PTA-65的组合。

在另一个有趣的实施例中，本发明的动物饲料或动物饲料添加剂的特征在于，一种或多种益生菌为枯草芽孢杆菌菌株C3102。

如上所述，在典型的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料包含选自下组的益生菌的组合，该组由以下组成：

乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、肠球菌、链球菌、片球菌、明串珠菌、乳球菌、酒球菌、芽孢杆菌、肉食杆菌、丙酸杆菌、梭菌、巨型球菌和埃希氏菌。优选的组合包括如下组合：一种或多种乳杆菌和一种或多种酵母菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种链球菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种链球菌、一种或多种酵母菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种链球菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种链球菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种芽孢杆菌和一种或多种双歧杆菌。

在另一个典型的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料包含乳杆菌菌株的组合，例如如下组合：嗜酸乳杆菌和约氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌和鼠李糖乳杆菌、约氏乳杆菌和嗜酸乳杆菌、约氏乳杆菌和干酪乳杆菌、以及约氏乳杆菌和鼠李糖乳杆菌。

在另一个实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料包含嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的组合。另一个合适的组合可选自由以下组成的组：嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、布拉酵母、两歧双歧杆菌和凝结芽孢杆菌。

在另一个实施例中，作为益生菌的一种或多种细菌菌株以稳定的孢子形式存在。

该动物饲料组合物中作为益生菌的每种细菌菌株的细菌计数典型地在1x 10⁴和1x 10¹⁴CFU/kg的干物质之间，优选在1x 10⁶和1x10¹²CFU/kg的干物质之间，并且更优选在1x10⁷和1x 10¹¹CFU/kg的干物质之间。在更优选的实施例中，该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 10⁸和1x 10¹⁰CFU/kg的干物质之间。

该动物饲料组合物中作为益生菌的每种细菌菌株的细菌计数在1x 10⁵和1x10¹⁵CFU/动物/天之间，优选在1x 10⁷和1x 10¹³CFU/动物/天之间，并且更优选在1x 10⁸和1x10¹²CFU/动物/天之间。在更优选的实施例中，该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 10⁹和1x 10¹¹CFU/动物/天之间。在一个实施例中，益生菌的量按重量计为组合物的0.001％至10％。

作为益生菌的商业产品的实例是

(帝斯曼营养产品公司(DSMNutritional Products))、Alterion(安迪苏公司(Adisseo))、Enviva PRO(杜邦动物营养公司(DuPont Animal Nutrition))、

(混合酶+益生菌，杜邦动物营养公司)、

和

(Norel/Evonik)、

和

PY1(赢创公司(Evonik))。在合适的实施例中，该益生菌选自由以下组成的组：

(帝斯曼营养产品公司)、Alterion(安迪苏公司)、Enviva PRO(杜邦动物营养公司)、

(混合酶+益生菌，DuPont动物营养)、

和

(Norel/Evonik)、

和

PY1(赢创公司)中的任一种，并且该胞壁质酶是与具有至少90％序列同一性的胞壁质酶。

如上所述，在优选的实施例中，该胞壁质酶是GH25胞壁质酶。已经出人意料地发现，GH25胞壁质酶可通过减少动物消化道中死亡的约氏乳杆菌细胞的量来改善所述动物的肠道健康。在本发明有趣的实施例的组合中，该胞壁质酶是GH25胞壁质酶，并且该一种或多种益生菌包含约氏乳杆菌。不受特定理论的束缚，包含GH25胞壁质酶和一种或多种益生菌(例如约氏乳杆菌)的组合物、动物饲料添加剂或动物饲料改善动物的肠道健康。

益生元是诱导微生物(例如，细菌和真菌)生长或活动的物质，其有助于宿主的健康。益生元通常是不可消化的纤维化合物，其未消化地通过胃肠道的上部并刺激通过充当它们的底物而定殖大肠的有利细菌的生长或活动。通常，益生元增加胃肠(GI)道中双歧杆菌和乳酸菌的数量或活动。

酵母衍生物(灭活的整个酵母或酵母细胞壁)也可以被认为是益生元。它们通常包含甘露寡糖、酵母β-葡聚糖或蛋白质内容物，并且通常衍生自酵母(酿酒酵母)的细胞壁。

在一个实施例中，益生元的量按重量计为组合物的0.001％至10％。酵母产品的实例是

和Agrimos(拉曼动物营养公司(Lallemand Animal Nutrition))。

在另一个典型的实施例中，本发明的组合物、动物饲料添加剂或动物饲料、或方法包含商业产品Balancius^TM、或与商业产品Balancius^TM的酶具有至少90％序列同一性的胞壁质酶，与来自以下一种或多种地衣芽孢杆菌菌株的益生菌组合：NRRL B 50015、NRRL B-50621或NRRL B-50623。典型地，该组合包含与商业产品Balancius^TM的酶具有至少95％序列同一性，例如至少98％序列同一性或至少99％序列同一性的胞壁质酶。

在另一个合适的实施例中，本发明的组合物、动物饲料添加剂或动物饲料、或方法包含商业产品Balancius^TM、或与商业产品Balancius^TM的酶具有至少90％序列同一性的胞壁质酶，与来自以下一种或多种解淀粉芽孢杆菌菌株的益生菌组合：DSM 29869、DSM29869、NRRL B 50607、PTA-7543、PTA-7549、NRRL B-50349、NRRL B-50606、NRRL B-50013、NRRL B-50151、NRRL B-50141、NRRL B-50147或NRRL B-50888。典型地，该组合包含与商业产品Balancius^TM的酶具有至少95％序列同一性，例如至少98％序列同一性或至少99％序列同一性的胞壁质酶。

在合适的实施例中，本发明的组合物、动物饲料添加剂或动物饲料、或方法包含商业产品Balancius^TM、或与商业产品Balancius^TM的酶具有至少90％序列同一性的胞壁质酶，与选自由尼氏大肠杆菌(例如尼氏大肠杆菌1917)组成的组的埃希氏菌组合。典型地，该组合包含与商业产品Balancius^TM的酶具有至少95％序列同一性，例如至少98％序列同一性或至少99％序列同一性的胞壁质酶。

在有趣的实施例中，本发明的组合物、动物饲料添加剂或动物饲料、或方法包含商业产品Balancius^TM、或与商业产品Balancius^TM的酶具有至少90％序列同一性的胞壁质酶，与益生菌的组合进行组合，所述组合包含枯草芽孢杆菌菌株2084登录号NRRI B-50013、枯草芽孢杆菌菌株LSSAO1登录号NRRL B-50104和枯草芽孢杆菌菌株15A-P4 ATCC登录号PTA-65。典型地，该组合包含与商业产品Balancius^TM的酶具有至少95％序列同一性，例如至少98％序列同一性或至少99％序列同一性的胞壁质酶。

在另一个有趣的实施例中，本发明的组合物、动物饲料添加剂或动物饲料、或方法包含商业产品Balancius^TM、或与商业产品Balancius^TM的酶具有至少90％序列同一性的胞壁质酶，与益生菌枯草芽孢杆菌菌株C3102组合。典型地，该组合包含与商业产品Balancius^TM的酶具有至少95％序列同一性，例如至少98％序列同一性或至少99％序列同一性的胞壁质酶。

在合适的实施例中，该益生菌选自由以下组成的组：

(混合酶+益生菌，杜邦动物营养公司)、

和

(Norel/Evonik)、

和

PY1(赢创公司)中的任一种，并且该胞壁质酶选自由以下组成的组：商业产品Balancius^TM、或与商业产品Balancius^TM的酶具有至少90％序列同一性，例如与商业产品Balancius^TM的酶具有至少95％序列同一性，例如至少98％序列同一性或至少99％序列同一性的胞壁质酶。

Balancius^TM在本文中由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO.2限定。

在一个实施例中，BWG增加至少1％，例如至少1.5％、至少2.0％、至少2.5％、至少3％、至少3.5％、至少4％或至少5％。在另一个实施例中，BWG增加率在1％和15％之间，例如1％和12％之间、1％和10％之间、1.5％和8％之间、2.0％和7％之间、或这些区间的任何组合。

在一个实施例中，FCR改善至少1％，例如至少1.25％、至少1.5％或至少1.75％。在另一个实施例中，FCR改善率在1％和5％之间，例如1％和4％之间、1％和3％之间、1.25％和2.5％之间、1.5％和2％之间、或这些区间的任何组合。胞壁质酶

在一个实施例中，具有胞壁质酶活性的多肽是按下述水平给予：0.1至150ppm酶蛋白/kg动物饲料，例如0.5至100ppm、1至75ppm、2至50ppm、3至25ppm、2至80ppm、5至60ppm、8至40ppm、10至30ppm、13至75ppm、15至50ppm、17.5至40ppm、25至75ppm或30至60ppm酶蛋白/kg动物饲料、或这些区间的任何组合。

在一个实施例中，动物是单胃动物，例如猪(pig或swine)(包括但不限于仔猪、成长猪、和母猪)；家禽(包括但不限于家禽、火鸡、鸭、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子、乳鸽、鸡、肉鸡、下蛋鸡、小母鸡和小鸡)；鱼(包括但不限于琥珀鱼、巨滑舌鱼、魮鱼、鲈鱼、蓝鱼、菖鲉、鲤科鱼、鲶鱼、卡叉马鱼、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉鱼、遮目鱼、嘉鱼、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、小翻车鱼、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、瓜波特鱼、大比目鱼、爪哇鱼、野鲮属鱼、莱鱼、泥鳅、鲭鱼、牛奶鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕高鱼、珍珠斑点鱼、佩杰瑞鱼、河鲈鱼、狗鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、鲑鱼、虾米鱼、加拿大鰤鲈、黑鲈、海鲤、发光鱼、睡鲨、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、比目鱼、刺足鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼、丁鲷、特罗尔鱼、罗非鱼、鳟鱼、鲔鱼、多宝鱼、白鳟鱼、白斑鱼和白鱼)；以及甲壳类动物(包括但不限于河虾和对虾)。在更优选的实施例中，动物选自由以下组成的组：猪、家禽、甲壳类动物和鱼。在甚至更优选的实施例中，动物选自由以下组成的组：猪、仔猪、成长猪、母猪、鸡、肉鸡、下蛋鸡、小母鸡和小鸡。

在一个实施例中，具有胞壁质酶活性的多肽按如下给予：0.001％至25％w/w的液体配制品，优选0.01％至25％w/w，更优选0.05％至20％w/w，更优选0.2％至15％w/w，甚至更优选0.5％至15％w/w，或最优选1.0％至10％w/w多肽。

在一个实施例中，该液体配制品还包含20％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，优选25％-75％多元醇，更优选30％-70％多元醇，更优选35％-65％多元醇，或最优选40％-60％多元醇。在一个实施例中，该液体配制品包含20％-80％的多元醇，优选25％-75％多元醇，更优选30％-70％多元醇，更优选35％-65％多元醇或最优选40％-60％多元醇，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨糖醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)。在一个实施例中，该液体配制品包含20％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，优选25％-75％多元醇，更优选30％-70％多元醇，更优选35％-65％多元醇或最优选40％-60％多元醇，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨糖醇和丙二醇(MPG)。

在一个实施例中，该液体配制品还包含防腐剂，优选选自由以下组成的组：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。在一个实施例中，该液体配制品包含0.02％至1.5％w/w的防腐剂，更优选0.05％至1.0％w/w的防腐剂，或最优选0.1％至0.5％w/w的防腐剂。在一个实施例中，该液体配制品包含0.001％至2.0％w/w的防腐剂(即防腐剂的总量)，优选0.02％至1.5％w/w的防腐剂，更优选0.05％至1.0％w/w的防腐剂，或最优选0.1％至0.5％w/w的防腐剂，其中该防腐剂选自下组，该组由以下组成：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。

在一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种配制剂(如本文所述的那些)，优选选自由甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、PVA、乙酸盐和磷酸盐组成的列表，优选选自由1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙组成的列表的配制剂。

在一个实施例中，该蛋白质源选自由以下组成的组：大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、胡豆(蚕豆)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、葵花籽、棉籽、油菜籽(油菜)或豌豆，或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)、葵花粉、棉籽粉、油菜籽粉、鱼粉、骨粉、羽毛粉、乳清、或其任何组合。

在一个实施例中，该能源选自由以下组成的组：玉蜀黍、玉米、高粱、大麦、小麦、燕麦、稻、黑小麦、黑麦、甜菜、糖甜菜、菠菜、马铃薯、木薯、藜麦、卷心菜、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子，或处于其加工形式例如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、马铃薯淀粉、木薯淀粉、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。

在一个实施例中，该动物饲料添加剂还包含一种或多种选自由以下组成的列表的组分：一种或多种另外的酶；一种或多种微生物；一种或多种维生素；一种或多种矿物质；一种或多种氨基酸；以及一种或多种其他饲料成分，如本文所述。

在一个实施例中，该动物饲料添加剂还包含一种或多种另外的酶，优选其中该酶选自由以下组成的组：植酸酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、蛋白酶、木聚糖酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、溶血磷脂酶、磷脂酶C、磷脂酶D、淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、β-木糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、纤维素酶、纤维二糖水解酶、β-葡糖苷酶、支链淀粉酶、甘露糖苷酶、甘露聚糖酶和β-葡聚糖酶、或其任何组合。

在一个实施例中，该动物饲料添加剂还包含一种或多种微生物，优选其中该微生物选自由以下组成的组：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种、以及链球菌属物种或其任何组合。

在一个实施例中，该动物饲料添加剂还包含如本文所述的一种或多种维生素。在一个实施例中，该动物饲料添加剂还包含如本文所述的一种或多种矿物质。在一个实施例中，该动物饲料添加剂还包含如本文所述的一种或多种摄生品(eubiotic)。在一个实施例中，该动物饲料添加剂还包含如本文所述的一种或多种益生元。在一个实施例中，该动物饲料添加剂还包含如本文所述的一种或多种有机酸。在一个实施例中，该动物饲料添加剂还包含如本文所述的一种或多种摄生品。

本发明的酶可以配制为液体或固体。针对液体配制品，该配制剂可以包含多元醇(像例如，甘油、乙二醇或丙二醇)、盐(像例如，氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾)或糖或糖衍生物(像例如，糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨糖醇)。因此，在一个实施例中，该组合物是液体组合物，其包含本发明的多肽和一种或多种选自以下列表的配制剂，该列表由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨糖醇。液体配制品可以喷洒在已经丸粒化(pelleted)的饲料上，或可以添加至供给动物的饮用水中。

针对固体配制品，该配制品可以例如作为颗粒、喷雾干燥粉末或凝集物(例如，如在WO 2000/70034中所披露)。配制剂可以包含盐(有机的或无机的锌、钠、钾或钙盐，像例如，如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或者糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)。

在一个实施例中，该组合物是一种固体组合物，例如喷雾干燥组合物，该固体组合物包含本发明的胞壁质酶和一种或多种选自以下列表的配制剂，该列表由以下组成：氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉和纤维素。在优选的实施例中，配制剂选自以下化合物中的一种或多种：硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、硫酸镁和碳酸钙。

本发明还涉及包含本发明的胞壁质酶的酶颗粒/粒子任选地与一种或多种另外的酶的组合。该颗粒由核心以及任选地包围该核心的一种或多种包衣(外层)构成。

典型地，该颗粒的粒度(granule/particle size)(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。

该核心可以通过粒化成分的共混物来制备，例如通过包括造粒技术的方法，例如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床凝集、旋转雾化、挤出、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。

用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册]；C.E.Capes的Particle size enlargement[粒度增大]；第1卷；1980；Elsevier[爱思唯尔]。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制技术，例如：

a)喷雾干燥产品，其中在喷雾干燥塔中雾化液体含酶溶液以形成小液滴，在它们在沿干燥塔下降的过程中干燥形成含酶的颗粒状材料；

b)层状产品，其中酶在预形成的惰性核心粒子周围包衣成层，其中含酶溶液通常在流化床装置中被雾化，在该流化床装置中预形成的核心粒子被流体化并且含酶溶液附着到核心粒子上并干燥，直到使得干的酶层留在核心粒子的表面上。如果可以发现具有希望粒度的有用核心粒子，则通过这种方式能够获得具有希望粒度的粒子。这种类型的产品描述于例如WO 97/23606中；

c)吸收的核心粒子，其中不是将该酶在核心周围包衣成层，而是在核心的表面上和/或表面中吸收该酶。这样的方法描述于WO 97/39116中。

d)挤出或丸粒化的产品，其中将含酶的糊剂压成丸粒(pellet)或在压力下通过小的开口挤出并切割为粒子，随后干燥这些粒子。此类粒子通常具有相当大的粒度，因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外，当使用小开口时，非常高的挤出压力增加了酶糊料中的热发生，这对酶是有害的；

e)颗粒化的产品，其中含酶的粉末悬浮于熔化的蜡中并且例如通过转盘喷雾器将悬浮液喷洒到冷却室中，在此液滴快速地固化(Michael S.Showell(编辑)；Powdereddetergents[粉状洗涤剂]；Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列]；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。所获得产物是酶均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上的产物。此外，US 4,016,040和US 4,713,245是与此技术有关的文献；

f)混合造粒产品，其中将液体添加至例如常用造粒组分的干燥粉末组合物中，经由液体或粉末或二者引入该酶。将液体和粉末混合，并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收，干燥粉末的组分开始附着并凝集，并且粒子将累积，形成包含酶的颗粒。此种方法描述于US 4,106,991和有关的文献EP 170360、EP 304332、EP 304331、WO 90/09440和WO 90/09428中。在其中可以用各种高剪切混合器作为造粒机的此方法的具体产品中，将由作为酶的酶、填料和粘合剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以强化粒子，而得到所谓的T-颗粒(T-granulate)。经强化的粒子更加坚固，酶粉尘释放更少。

g)粒度减小，其中通过碾磨或压碎含酶的较大的粒子、丸粒、平片体、坯块(briquette)等产生核心。通过将碾磨或压碎的产物过筛获得所需要的核心粒子部分。可以回收粒度过大和粒度过小的粒子。粒度减小描述于(Martin Rhodes(编辑)；Principles ofPowder Technology[粉末技术原理]；1990；第10章；John Wiley&Sons[约翰威利父子公司])中；

h)流化床造粒，其涉及将颗粒悬浮于空气流中并经喷嘴喷洒液体到流态化粒子上。被喷洒的液滴击中的粒子湿润并发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并附着于其上并形成颗粒；

i)这些核心可经受干燥，例如在流化床干燥器中。本领域技术人员可以使用其他已知的在饲料或洗涤剂工业中用于干燥颗粒的方法。干燥优选在从25℃至90℃的产物温度下进行。对于一些酶来说，重要的是包含酶的核心在包衣之前含有少量的水。如果在过量水除去之前水敏性酶被包衣，则水分会截留在核心中并可能消极地影响酶的活性。干燥之后，这些核心优选含有0.1-10％w/w的水。

该核心可以包含另外的材料如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。

该核心可以包含粘合剂，例如合成聚合物、蜡、脂肪或碳水化合物。

该核心通常作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧化剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。

在一个实施例中，该核心包含选自由以下组成的组的材料：盐(例如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或者糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)、糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)、有机小分子、淀粉、面粉、纤维素和矿物质以及粘土矿物质(也称作水性页硅酸铝)。在一个实施例中，该核心包含粘土矿物质，例如高岭石或高岭土。

该核心可以包含惰性粒子，其中酶被吸附到该惰性粒子之内，或者被施加(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。

该核心的直径可以是20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。

该核心可以被至少一种包衣包围，例如以改善储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。任选的一种或多种包衣可以包括盐和/或蜡和/或面粉包衣或其他合适的包衣材料。

可以将该包衣按核心的重量计以至少0.1％(例如，至少0.5％、1％或5％)的量施加。该量至多可以是100％、70％、50％、40％或30％。

该包衣优选是至少0.1μm厚，特别是至少0.5μm、至少1μm或至少5μm厚。在一些实施例中，该包衣的厚度低于100μm，例如低于60μm或低于40μm。

该包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣，使得密封或封闭的核心单元具有极少或没有未包衣的区域。层或包衣特别应在厚度上是均匀的。

该包衣可以进一步含有其他本领域已知的材料，例如填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂，例如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。

盐包衣可以包含按重量计至少60％的盐，例如按重量计至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。

该盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加，或者从盐悬浮液(其中这些细粒子是少于50μm，例如少于10μm或少于5μm)中添加。

该盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的，具体地具有在20℃在100g水中至少0.1g的溶解度，优选至少0.5g/100g水，例如至少1g/100g水、例如至少5g/100g水。

该盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子，例如6个或更少的碳原子)的盐例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子，例如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、山梨酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。具体而言，可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。

在包衣中的盐可以在20℃下具有超过60％的恒定湿度，特别是超过70％、超过80％或超过85％，或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如，无水物)。该盐包衣可以如WO 1997/05245、WO 1998/54980、WO 1998/55599、WO 2000/70034、WO 2006/034710、WO2008/017661、WO 2008/017659、WO 2000/020569、WO 2001/004279、WO 1997/05245、WO2000/01793、WO 2003/059086、WO 2003/059087、WO 2007/031483、WO 2007/031485、WO2007/044968、WO 2013/192043、WO 2014/014647和WO 2015/197719在所述或是如WO 2001/00042中所述的聚合物包衣。

合适的盐的具体实例是NaCl(CH20℃＝76％)、Na2CO3(CH20℃＝92％)、NaNO3(CH20℃＝73％)、Na2HPO4(CH20℃＝95％)、Na3PO4(CH25℃＝92％)、NH4Cl(CH20℃＝79.5％)、(NH4)2HPO4(CH20℃＝93,0％)、NH4H2PO4(CH20℃＝93.1％)、(NH4)2SO4(CH20℃＝81.1％)、KCl(CH20℃＝85％)、K2HPO4(CH20℃＝92％)、KH2PO4(CH20℃＝96.5％)、KNO3(CH20℃＝93.5％)、Na2SO4(CH20℃＝93％)、K2SO4(CH20℃＝98％)、KHSO4(CH20℃＝86％)、MgSO4(CH20℃＝90％)、ZnSO4(CH20℃＝90％)和柠檬酸钠(CH25℃＝86％)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2、乙酸镁、乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌和山梨酸锌。

该盐可以处于无水形式，或者它可以是水合盐，即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物，例如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4.7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4.7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4.7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。

优选地，作为盐溶液施加该盐，例如使用流化床。

蜡包衣可以包含按重量计至少60％的蜡，例如按重量计至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。

蜡的具体实例是聚乙二醇；聚丙烯；巴西棕榈蜡；小烛树蜡；蜂蜡；氢化植物油或动物脂油例如聚乙二醇(PEG)、甲基羟丙基纤维素(MHPC)、聚乙烯醇(PVA)、氢化牛脂、氢化棕榈油、氢化棉籽油和/或氢化大豆油；脂肪酸醇；单甘油酯和/或二甘油酯，例如甘油硬脂酸酯，其中硬脂酸酯是硬脂酸和棕榈酸的混合物；微晶蜡；石蜡；以及脂肪酸，如氢化的线性长链脂肪酸和其衍生物。优选的蜡是棕榈油或氢化棕榈油。

该颗粒可以包含核心(其包含本发明的胞壁质酶)、一种或多种盐包衣和一种或多种蜡包衣。具有多个包衣的酶颗粒的实例示于WO 1993/07263、WO 1997/23606和WO 2016/149636中。

可以产生非粉尘颗粒，例如如美国专利号4,106,991和4,661,452中所披露，并且这些颗粒可以任选地通过本领域已知的方法来包衣。这些包衣材料可以是蜡状包衣材料和成膜包衣材料。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中醇含有12至20个碳原子，并且其中存在15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。

该颗粒可以进一步包含一种或多种另外的酶。然后，每种酶将存在于更多颗粒中，确保酶的更均匀分布，并且还由于不同的粒度而减少不同酶的物理分离。用于产生多酶共颗粒的方法披露于ip.com公开内容IPCOM000200739D中。

通过使用共颗粒配制酶的另一个实例披露于WO 2013/188331中。

本发明还涉及根据EP 238,216中披露的方法制备的受保护的酶。

动物饲料组合物或饮食具有相对高的蛋白质含量。家禽和猪饮食可以如WO 01/58275的表B第2-3栏所示来表征。鱼饮食可以如表B第4栏所示来表征。此外，此类鱼饮食通常具有200-310g/kg的粗脂肪含量。

根据本发明的动物饲料组合物具有50-800g/kg的粗蛋白含量，并且另外包含如本文所述的一种或多种益生菌和一种或多种具有胞壁质酶活性的多肽。

此外或在(上述粗蛋白含量)的替代方案中，本发明的动物饲料组合物具有10-30MJ/kg的可代谢能量；和/或0.1-200g/kg的钙含量；和/或0.1-200g/kg的有效磷含量；和/或0.1-100g/kg的甲硫氨酸含量；和/或0.1-150g/kg的甲硫氨酸加半胱氨酸含量；和/或0.5-50g/kg的赖氨酸含量。

在具体实施例中，可代谢能量、粗蛋白、钙、磷、甲硫氨酸、甲硫氨酸加半胱氨酸和/或赖氨酸的含量落入WO 01/58275表B中的范围2、3、4或5(R.2-5)中的任何一个内。

粗蛋白以氮(N)乘以系数6.25计算，即粗蛋白(g/kg)＝N(g/kg)x 6.25。通过凯氏定氮法(Kjeldahl method)测定氮含量(A.O.A.C.,1984,Official Methods of Analysis[官方分析方法]第14版,Association of Official Analytical Chemists[官方分析化学家集],华盛顿特区)。

可代谢能量可根据如下进行计算：NRC出版物Nutrient requirements in swine[猪的营养需求],第九次再版1988,subcommittee on swine nutrition,committee onanimal nutrition,board of agriculture,national research council[美国国家研究委员会农业部动物营养协会猪营养分会].美国国家科学院出版社[National AcademyPress],华盛顿特区,第2-6页；以及欧洲家禽饲养材料能量值表(European Table ofEnergy Values for Poultry Feed-stuffs),斯克得霍特家禽研究与推广中心[Spelderholt centre for poultry research and extension],7361DA贝克贝亨,荷兰,Grafisch bedrijf Ponsen&looijen bv,瓦赫宁恩[Wageningen].ISBN 90-71463-12-5。

根据诸如Veevoedertabel 1997,gegevens over chemische samenstelling,verteerbaarheid en voederwaarde van voedermiddelen,Central Veevoederbureau,Runderweg 6,8219pk Lelystad.ISBN90-72839-13-7等饲料表计算在动物全饮食中的钙、有效磷和氨基酸的膳食含量。

在具体实施例中，本发明的动物饲料组合物包含如上定义的至少一种植物性蛋白质。

本发明的动物饲料组合物还可以含有动物蛋白，如肉和骨粉、羽毛粉和/或鱼粉，典型地量为0-25％。本发明的动物饲料组合物还可以包含具有可溶物的干酒糟(DriedDistillers Grains with Solubles，DDGS)，典型地量为0-30％。

在仍另外的具体实施例中，本发明的动物饲料组合物含有0-80％玉蜀黍；和/或0-80％高粱；和/或0-70％小麦；和/或0-70％大麦；和/或0-30％燕麦；和/或0-40％大豆粉；和/或0-25％鱼粉；和/或0-25％肉和骨粉；和/或0-20％乳清。

该动物饲料可以包含植物性蛋白质。在具体实施例中，植物性蛋白质的蛋白质含量是至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％(w/w)。植物性蛋白质可以衍生自植物性蛋白质源，如豆类和谷类，例如来自蝶形花科(豆科)、十字花科、藜科和早熟禾科植物的材料，如大豆粉、羽扇豆粉、油菜籽粉及其组合。

在具体实施例中，植物性蛋白质源是来自豆科的一种或多种植物(例如大豆、羽扇豆、豌豆或菜豆)的材料。在另一个具体实施例中，植物性蛋白质源是来自藜科的一种或多种植物(例如甜菜、糖甜菜、菠菜或藜麦)的材料。植物性蛋白质源的其他实例是油菜和卷心菜。在另一个具体实施例中，大豆是优选的植物性蛋白质源。植物性蛋白质源的其他实例是谷物，如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉蜀黍(玉米)、稻和高粱。

可以将动物饮食制成例如粉状饲料(非丸粒化)或丸粒状饲料。典型地，混合研磨的饲料并根据所讨论的种类的说明添加充足量的必需维生素和矿物质。作为固体或液体酶配制品添加酶。例如，对于粉状饲料，在成分混合步骤前或期间可以添加固体或液体酶配制品。对于丸粒化饲料，在饲料成分步骤前或期间还可添加该(固体或液体)胞壁质酶酶制剂。

在另一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种另外的酶。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种微生物。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种维生素。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽和一种或多种矿物质。在一个实施例中，该组合物包括本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种氨基酸。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种其他饲料成分。

在另一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种调配剂和一种或多种选自由以下组成的列表的组分：一种或多种另外的酶；一种或多种微生物；一种或多种维生素；一种或多种矿物质；一种或多种氨基酸；以及一种或多种其他饲料成分。

最终胞壁质酶在饮食中的浓度是在下述范围内：0.01-200ppm酶蛋白/kg动物饲料，例如0.1至150ppm、0.5至100ppm、1至75ppm、2至50ppm、3至25ppm、2至80ppm、5至60ppm、8至40ppm或10至30ppm酶蛋白/kg动物饲料，或这些区间的任何组合。

在具体实施例中，本发明的动物饲料添加剂意欲以0.01％至10.0％，更特别地0.05％至5.0％或0.2％至1.0％(％意指g添加剂/100g饲料)的水平包含(或规定为必须包含)在动物饮食或饲料中。特别地，对预混物也是如此。

在另一个实施例中，本文描述的组合物任选地包含一种或多种酶。可以根据handbook Enzyme Nomenclature[酶命名手册](来自NC-IUBMB,1992)对酶进行分类，还参见因特网上的ENZYME网站：http://www.expasy.ch/enzyme/。ENZYME是关于酶命名法的信息储库。它主要基于国际生物化学和分子生物学联合会命名委员会(IUB-MB),AcademicPress,Inc.[学术出版社公司],1992的推荐并且描述了所表征的酶的每种类型，为该酶提供EC(酶委员会)编号(Bairoch A.The ENZYME database[酶数据库],2000,Nucleic AcidsRes[核酸研究]28:304-305)。这种IUB-MB酶命名法是基于它们的底物特异性，有时基于它们的分子机制；这种分类不反映这些酶的结构特征。

在Henrissat等人的“The carbohydrate-active enzymes database(CAZy)in2013[2013年的碳水化合物活性酶数据库(CAZy)]”,Nucl.Acids Res.[核酸研究](2014年1月1日)42(D1):D490-D495中描述了某些糖苷水解酶(例如内切葡聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、胞壁质酶和半乳糖苷酶)的另一种分类；还参见www.cazy.org。

因此，本发明的组合物还可以包含至少一种选自下组的其他酶，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶(EC 3.1.1.23)、酰基甘油脂肪酶(EC 3.1.1.72)、α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)、β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)、阿拉伯呋喃糖苷酶(EC 3.2.1.55)、纤维二糖水解酶(EC3.2.1.91)、纤维素酶(EC 3.2.1.4)、阿魏酸酯酶(EC 3.1.1.73)、半乳聚糖酶(EC3.2.1.89)、α-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22)、β-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23)、β-葡聚糖酶(EC3.2.1.6)、β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.21)、三酰基甘油脂肪酶(EC 3.1.1.3)、溶血磷脂酶(EC3.1.1.5)、胞壁质酶(EC 3.2.1.17)、α-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.24)、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)(EC 3.2.1.25)、植酸酶(EC 3.1.3.8，EC 3.1.3.26，EC 3.1.3.72)、磷脂酶A1(EC3.1.1.32)、磷脂酶A2(EC 3.1.1.4)、磷脂酶D(EC 3.1.4.4)、支链淀粉酶(EC 3.2.1.41)、果胶酯酶(EC 3.1.1.11)、β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)、或其任何组合。

在具体实施例中，本发明的组合物包含半乳聚糖酶(EC 3.2.1.89)和β-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23)。

在具体实施例中，本发明的组合物包含植酸酶(EC 3.1.3.8或3.1.3.26)。可商购的植酸酶的实例包括Bio-Feed^TM植酸酶(诺维信公司(Novozymes))、

P、

NP和

HiPhos(帝斯曼营养产品公司)、Natuphos^TM(巴斯夫公司(BASF))、Natuphos^TM E(巴斯夫公司)、

和

Blue(AB酶公司(ABEnzymes))、

(浩卫制药公司(Huvepharma))、

Phytase(AveveBiochem公司)、

XP(范恩尼姆/杜邦公司(Verenium/DuPont))以及

PHY(杜邦公司(DuPont))。其他优选的植酸酶包括描述于例如WO 98/28408、WO 00/43503和WO 03/066847中的那些。

在具体实施例中，本发明的组合物包含α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)。可商购的α-淀粉酶的实例包括

A和

RumiStar^TM(帝斯曼营养产品公司)。

在一个实施例中，本发明的组合物包含多组分酶产品，如

Octazyme(Framelco公司)、

G2、

VP和

MultiGrain(帝斯曼营养产品公司)、

Excel或

Advance(安迪苏公司)。

摄生品

摄生品是意欲在胃肠道中提供微生物菌群的健康平衡的化合物。摄生品包括许多不同的饲料添加剂，例如益生菌、益生元、植生素(精油)和有机酸，其在下面更详细地描述。

植生素

植生素是一组来自草药、香料或其他植物的用作饲料添加剂的天然生长促进剂或非抗生素生长促进剂。植生素可以是由精油/提取物、精油/提取物、单一植物和植物混合物(草药产品)或精油/提取物/植物的混合物(专门产品)制备的单一物质。

植生素的实例是迷迭香、鼠尾草、牛至、百里香、丁香和柠檬草。精油的实例是百里酚、丁香酚、间甲酚、香草醛、水杨酸酯、间苯二酚、邻甲氧基苯酚(guajacol)、姜酚、薰衣草油、紫罗酮、鸢尾酮、桉叶油素、薄荷醇、薄荷油、α-蒎烯、柠檬烯、茴香脑、芳樟醇、二氢茉莉酸甲酯、香芹酚、丙酸/丙酸酯、乙酸/乙酸酯、丁酸/丁酸酯、迷迭香油、丁香油、香叶醇、萜品醇、香茅醇、水杨酸戊酯和/或水杨酸苄酯、肉桂醛、植物多酚(单宁)、姜黄和姜黄提取物。

在一个实施例中，植生素的量按重量计为组合物的0.001％至10％。商业产品的实例是

(帝斯曼营养产品公司)、Cinergy^TM、Biacid^TM、ProHacidTM Classic和ProHacidTM Advance^TM(all Promivi公司/嘉吉公司(Cargill))以及Envivo EO(杜邦动物营养公司)。

有机酸

有机酸(C1-C7)在自然界中作为植物或动物组织的正常成分广泛分布。它们也通过主要在大肠中的碳水化合物的微生物发酵形成。它们通常在猪和家禽生产中用作抗生素生长促进剂的替代品，因为它们对鸡的坏死性肠炎和小猪的大肠杆菌感染等肠道问题具有预防作用。有机酸可以作为单组分或通常2或3种不同有机酸的混合物出售。有机酸的实例为短链脂肪酸(例如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸)、中链脂肪酸(例如己酸、辛酸、癸酸、月桂酸)、二/三羧酸(例如反丁烯二酸)、羟基酸(例如乳酸)、芳香酸(例如苯甲酸)、柠檬酸、山梨酸、苹果酸、酒石酸或其盐(通常为钠或钾盐，如二甲酸钾或丁酸钠)。

在一个实施例中，有机酸的量按重量计为组合物的0.001％至10％。商业产品的实例是

(帝斯曼营养产品公司)、

(巴斯夫公司)、正丁酸AF(OXEA)以及Adimix Precision(Nutriad公司)。

预混物

将如上文示例的饲料添加剂的组合物掺入动物饲料(例如家禽饲料)中在实践中是使用浓缩剂或预混物进行的。预混物是指一种或多种微小成分与稀释剂和/或载体的优选均匀的混合物。预混物用于促进微小成分在较大混合物中均匀分散。根据本发明的预混物可以作为固体(例如作为水溶性粉末)或液体添加至饲料成分或饮用水中。

氨基酸

本发明的组合物可以进一步包含一种或多种氨基酸。用于动物饲料的氨基酸的实例是赖氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。在一个实施例中，氨基酸的量按重量计为组合物的0.001％至10％。

维生素和矿物质

在另一个实施例中，该动物饲料可以包含一种或多种维生素，如一种或多种脂溶性维生素和/或一种或多种水溶性维生素。在另一个实施例中，该动物饲料可以任选地包含一种或多种矿物质，如一种或多种痕量矿物质和/或一种或多种常量矿物质。

通常，脂溶性维生素和水溶性维生素以及痕量矿物质形成所谓的旨在添加到饲料中的预混物的一部分，而常量矿物质通常被分开地添加到饲料中。

脂溶性维生素的非限制性实例包括维生素A、维生素D3、维生素E和维生素K，例如维生素K3。

水溶性维生素的非限制性实例包括维生素C、维生素B12、生物素和胆碱、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、叶酸和泛酸盐，例如Ca-D-泛酸盐。

痕量矿物质的非限制性实例包括硼、钴、氯化物、铬、铜、氟化物、碘、铁、锰、钼、碘、硒和锌。

常量矿物质的非限制性实例包括钙、镁、磷、钾和钠。

在一个实施例中，维生素的量按重量计为组合物的0.001％至10％。在一个实施例中，矿物质的量按重量计为组合物的0.001％至10％。

这些组分的营养需求(以家禽和仔猪/猪为例)列于WO 01/58275的表A中。营养需求意指应在饮食中提供指定浓度的这些组分。

在替代方案中，本发明的动物饲料添加剂包含WO 01/58275的表A中指定的单独组分中的至少一种。至少一种意指一种或两种或三种或四种等直至所有十三种或直至所有十五种单独组分中的任一种、一种或多种。更具体地，此至少一种单独组分以提供在表A的第四栏或第五栏或第六栏说明的范围内的饲料中浓度(in-feed-concentration)的量包含在本发明的添加剂内。

在仍另外的实施例中，本发明的动物饲料添加剂包含以下维生素中的至少一种，优选以提供落入下表1中所限定的范围之内(分别针对仔猪饮食和肉鸡饮食)的饲料中浓度。

表1：典型维生素推荐

其他饲料成分

本发明的组合物可以进一步包含另外的着色剂、稳定剂、生长改善添加剂和芳香化合物/调味品、多不饱和脂肪酸(PUFA)；活性氧产生物质、抗氧化剂、抗微生物肽、抗真菌多肽以及霉菌毒素控制化合物。

芳香化合物/调味品的实例是甲氧甲酚，茴香脑，十、十一和/或十二内酯、紫罗酮、鸢尾酮、姜酚、哌啶、亚丙基苯酞(propylidene phatalide)、亚丁基苯酞(butylidenephatalide)、辣椒素和单宁。

抗微生物肽(AMP)的实例是CAP18、林可霉素(Leucocin)A、三色肽(Tritrpticin)、Protegrin-1、死亡素(Thanatin)、防卫素、乳铁蛋白、乳铁蛋白肽和奥维司匹林(Ovispirin)如诺维司匹林(Novispirin)(Robert Lehrer,2000)、菌丝霉素(Plectasin)和他汀(包括在WO 03/044049和WO 03/048148中披露的化合物和多肽)以及以上的保留抗微生物活性的变体或片段。

抗真菌多肽(AFP)的实例是巨大曲霉和黑曲霉的肽连同其保留抗真菌活性的变体和片段，如在WO 94/01459和WO 02/090384中披露的。

多不饱和脂肪酸的实例为C18、C20和C22多不饱和脂肪酸，例如花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和γ-亚油酸。

活性氧产生物质的实例为例如过硼酸盐、过硫酸盐或过碳酸盐等化学品；以及例如氧化酶、氧合酶或合成酶等酶。

抗氧化剂可以用于限制可产生的活性氧物质的数量，使得活性氧物质的水平与抗氧化剂平衡。

霉菌毒素(例如脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和伏马菌素)可以在动物饲料中发现，并且可以导致消极的动物性能或疾病。可以将能够例如通过霉菌毒素的失活或通过霉菌毒素的结合控制霉菌毒素水平的化合物添加至饲料中以改善这些负面影响。霉菌毒素控制化合物的实例是

Vitafix Ultra(核科学公司(Nuscience))、

Secure、

BBSH、

MTV(百奥明公司(Biomin))、

以及

Plus(Nutriad公司)。

制备动物饲料的方法

在第五方面，本发明涉及制备如第一方面所述的动物饲料的方法，该方法包括以下步骤：

(a)将动物饲料添加剂与一种或多种蛋白质源和一种或多种能源混合；

(b)任选地蒸汽处理(a)的动物饲料，随后压制该经蒸汽处理的混合物以形成丸粒；以及

(c)任选地将液体配制品喷雾到(a)或(b)的动物饲料上。

在一个实施例中，在步骤(a)中添加具有胞壁质酶活性的多肽和至少一种益生菌。在一个实施例中，在步骤(c)中添加具有胞壁质酶活性的多肽并且在步骤(a)中添加至少一种益生菌。

在一个实施例中，通过如下丸粒化动物饲料：蒸汽处理(a)的混合物以获得按混合物重量计20％以下的水分含量，并且压制该经蒸汽处理的混合物以形成丸粒。在一个实施例中，通过如下丸粒化动物饲料：蒸汽处理(a)的混合物以获得按混合物重量计20％以下的水分含量，其中当在调节器的出口处测量时，蒸汽处理在60℃和100℃之间，并且压制该经蒸汽处理的混合物以形成丸粒。在一个实施例中，步骤b)中的总停留时间在1秒和10分钟之间。在一个实施例中，经蒸汽处理的混合物丸粒化后丸粒的温度在70℃和105℃之间。

本发明的优选实施例

1.一种动物饲料添加剂，其包含一种或多种益生菌和一种或多种具有胞壁质酶活性的真菌多肽。

2.如实施例1所述的动物饲料，其中该具有胞壁质酶活性的多肽是真菌GH24胞壁质酶或GH25胞壁质酶。

3.如实施例1至2中任一项所述的动物饲料添加剂，其中该益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、肠球菌、链球菌、片球菌、明串珠菌、乳球菌、酒球菌、芽孢杆菌、肉食杆菌、丙酸杆菌、梭菌、巨型球菌和埃希氏菌、或其组合。

4.如实施例1至3中任一项所述的动物饲料添加剂，其中该具有胞壁质酶活性的多肽降解来自约氏乳杆菌的细胞壁碎片。

5.如实施例1至4中任一项所述的动物饲料添加剂，其中该具有胞壁质酶活性的多肽选自由以下组成的组：

6.如实施例1至5中任一项所述的动物饲料添加剂，其中该益生菌选自由以下组成的组：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双歧杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双歧杆菌动物亚种、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种、埃氏巨型球菌、和丙酸杆菌属物种。

7.如实施例1至5中任一项所述的动物饲料添加剂，其中该益生菌选自由以下组合组成的组：一种或多种乳杆菌和一种或多种酵母菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种链球菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种链球菌、一种或多种酵母菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种链球菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种链球菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种芽孢杆菌和一种或多种双歧杆菌。

8.如实施例1至7中任一项所述的动物饲料添加剂，用于添加至蛋白质源中，其中该蛋白质源选自由以下组成的组：大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、胡豆(蚕豆)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、葵花籽、棉籽、油菜籽(油菜)或豌豆，或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)、葵花粉、棉籽粉、油菜籽粉、鱼粉、骨粉、羽毛粉、乳清、或其任何组合。

9.如实施例1至8中任一项所述的动物饲料添加剂，用于添加至能源中，其中该能源选自由以下组成的组：玉蜀黍、玉米、高粱、大麦、小麦、燕麦、稻、黑小麦、黑麦、甜菜、糖甜菜、菠菜、马铃薯、木薯、藜麦、卷心菜、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子，或处于其加工形式例如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、马铃薯淀粉、木薯淀粉、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。

10.如实施例1至9中任一项所述的动物饲料添加剂，其中该动物饲料添加剂还包含一种或多种选自由以下组成的列表的组分：

一种或多种另外的酶；

一种或多种微生物；

一种或多种维生素；

一种或多种矿物质；

一种或多种氨基酸；以及

一种或多种其他饲料成分。

11.如实施例1至10中任一项所述的动物饲料添加剂，其中将该具有胞壁质酶活性的多肽配制为颗粒。

12.一种改善单胃动物的欧洲生产效率因子(EPEF)、体重增加(BWG)和/或饲料转化率(FCR)的方法，该方法包括：

(a)制备如实施例1至11中任一项所述的动物饲料添加剂；和

(b)向单胃动物提供动物饲料添加剂。

13.饲料组合物中至少一种益生菌与具有胞壁质酶活性的多肽组合用于改善饲料转化率和/或每日增重和/或用于调节肠道菌群和/或用于改善益生菌的生物利用度的用途，其中该具有胞壁质酶活性的多肽是真菌GH24胞壁质酶或GH25胞壁质酶，并且其中该益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、肠球菌、链球菌、片球菌、明串珠菌、乳球菌、酒球菌、芽孢杆菌、肉食杆菌、丙酸杆菌、梭菌、巨型球菌和埃希氏菌、或其组合。

14.一种用于动物的饲料组合物或预混组合物或饲料添加剂，该饲料组合物或预混组合物或饲料添加剂包含至少一种具有胞壁质酶活性的多肽和至少一种益生菌，其中该具有胞壁质酶活性的多肽是真菌GH24胞壁质酶或GH25胞壁质酶，并且其中该益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、肠球菌、链球菌、片球菌、明串珠菌、乳球菌、酒球菌、芽孢杆菌、肉食杆菌、丙酸杆菌、梭菌、巨型球菌和埃希氏菌、或其组合。

15.一种动物饲料，该动物饲料包含动物饲料添加剂、一种或多种蛋白质源和一种或多种能源，其特征在于该动物饲料还包含一种或多种益生菌和一种或多种具有胞壁质酶活性的真菌多肽。

16.如实施例15所述的动物饲料或如权利要求2所述的动物饲料添加剂，其中该具有胞壁质酶活性的多肽是真菌GH24胞壁质酶或GH25胞壁质酶。

17.如实施例15至16中任一项所述的动物饲料，其中该益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、肠球菌、链球菌、片球菌、明串珠菌、乳球菌、酒球菌、芽孢杆菌、肉食杆菌、丙酸杆菌、梭菌、巨型球菌和埃希氏菌、或其组合。

18.如实施例15至17中任一项所述的动物饲料，其中该具有胞壁质酶活性的多肽降解来自约氏乳杆菌的细胞壁碎片。

19.如权利要求15至18中任一项所述的动物饲料，其中该具有胞壁质酶活性的多肽选自由以下组成的组：

1.如实施例15至19中任一项所述的动物饲料，其中该益生菌选自由以下组成的组：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双歧杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双歧杆菌动物亚种、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种、埃氏巨型球菌、和丙酸杆菌属物种。

2.如实施例15至20中任一项所述的动物饲料，其中该益生菌选自由以下组合组成的组：一种或多种乳杆菌和一种或多种酵母菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种链球菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种链球菌、一种或多种酵母菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种链球菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种链球菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种芽孢杆菌和一种或多种双歧杆菌。

3.如实施例15至21中任一项所述的动物饲料，其中该蛋白质源选自由以下组成的组：大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、胡豆(蚕豆)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、葵花籽、棉籽、油菜籽(油菜)或豌豆，或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)、葵花粉、棉籽粉、油菜籽粉、鱼粉、骨粉、羽毛粉、乳清、或其任何组合。

4.如实施例15至22中任一项所述的动物饲料，其中该能源选自由以下组成的组：玉蜀黍、玉米、高粱、大麦、小麦、燕麦、稻、黑小麦、黑麦、甜菜、糖甜菜、菠菜、马铃薯、木薯、藜麦、卷心菜、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子，或处于其加工形式例如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、马铃薯淀粉、木薯淀粉、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。

5.如实施例15至23中任一项所述的动物饲料，其中该动物饲料添加剂还包含一种或多种选自由以下组成的列表的组分：

一种或多种另外的酶；

一种或多种微生物；

一种或多种维生素；

一种或多种矿物质；

一种或多种氨基酸；以及

一种或多种其他饲料成分。

1.如实施例15至24中任一项所述的动物饲料，其中将该具有胞壁质酶活性的多肽配制为颗粒。

2.一种改善单胃动物的欧洲生产效率因子(EPEF)、体重增加(BWG)和/或饲料转化率(FCR)的方法，该方法包括：

(a)制备如实施例15至25中任一项所述的动物饲料；和

(b)向该单胃动物提供该动物饲料。

1.饲料组合物中至少一种益生菌与具有胞壁质酶活性的多肽组合用于改善饲料转化率和/或每日增重和/或用于调节肠道菌群和/或用于改善益生菌的生物利用度的用途，其中该具有胞壁质酶活性的多肽是真菌GH24胞壁质酶或GH25胞壁质酶，并且其中该益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、肠球菌、链球菌、片球菌、明串珠菌、乳球菌、酒球菌、芽孢杆菌、肉食杆菌、丙酸杆菌、梭菌、巨型球菌和埃希氏菌、或其组合。

2.一种用于动物的饲料组合物或预混组合物或饲料添加剂，该饲料组合物或预混组合物或饲料添加剂包含至少一种具有胞壁质酶活性的多肽和至少一种益生菌，其中该具有胞壁质酶活性的多肽是真菌GH24胞壁质酶或GH25胞壁质酶，并且其中该益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、肠球菌、链球菌、片球菌、明串珠菌、乳球菌、酒球菌、芽孢杆菌、肉食杆菌、丙酸杆菌、梭菌、巨型球菌和埃希氏菌、或其组合。

3.如实施例1至10中任一项所述的动物饲料添加剂，其中该具有胞壁质酶活性的多肽选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:1具有至少85％序列同一性的多肽和与SEQ IDNO:2具有至少85％序列同一性的多肽，例如选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:1具有至少90％序列同一性的多肽和与SEQ ID NO:2具有至少90％序列同一性的多肽，例如选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:1具有至少95％序列同一性的多肽和与SEQ ID NO:2具有至少95％序列同一性的多肽，例如选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:1具有至少98％序列同一性的多肽和与SEQ ID NO:2具有至少98％序列同一性的多肽，例如选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:1具有至少99％序列同一性的多肽和与SEQ ID NO:2具有至少99％序列同一性的多肽。

4.如实施例15至24中任一项所述的动物饲料，其中该具有胞壁质酶活性的多肽选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:1具有至少85％序列同一性的多肽和与SEQ ID NO:2具有至少85％序列同一性的多肽，例如选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:1具有至少90％序列同一性的多肽和与SEQ ID NO:2具有至少90％序列同一性的多肽，例如选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:1具有至少95％序列同一性的多肽和与SEQ ID NO:2具有至少95％序列同一性的多肽，例如选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:1具有至少98％序列同一性的多肽和与SEQ ID NO:2具有至少98％序列同一性的多肽，例如选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:1具有至少99％序列同一性的多肽和与SEQ ID NO:2具有至少99％序列同一性的多肽。

5.

实例

实例1：胞壁质酶活性的确定

通过测量在酶标仪(Tecan Infinite M200)中在450nm处测量的悬浮的溶壁微球菌ATTC No.4698(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich M3770)溶液的吸光度/光密度的降低(下降)来确定胞壁质酶的活性。

溶壁微球菌底物的制备

使用前，将细胞悬浮于去离子水中至浓度为10mg细胞/mL，测量450nm处的吸光度/光密度(OD)。然后调节细胞悬浮液，使得浊度测定中的细胞浓度(180μL缓冲液+20μL样品+20μL底物)等于OD450＝1.0。然后将调整的细胞悬浮液在使用前储存在环境温度下。在3小时内使用悬浮的细胞。

柠檬酸–磷酸盐缓冲液(pH 4)的制备

将61.45mL 0.1M柠檬酸与38.55mL 0.2M磷酸氢二钠混合，并用盐酸或氢氧化钠调节pH至pH 4。

在浊度测定中测量胞壁质酶抗微生物活性

将待测胞壁质酶样品在去离子水中稀释至50mg酶蛋白/L的浓度，并保持在冰上直至使用。在96孔微量滴定板(Nunc)中，添加180μL柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 4和20μL稀释的胞壁质酶样品并保持冷(5℃)。为了开始活性测量，向每个孔中添加20μL底物(溶壁微球菌)，并在酶标仪中在37℃开始在450nm处吸光度的动力学测量1小时。监测每个孔在450nm处的测量的吸光度并且如果该胞壁质酶具有胞壁质酶活性，那么看到吸光度随着时间下降。

温育后，将针对溶壁微球菌的胞壁质酶活性测定为1小时后每个孔的450nm处的Δ吸光度(起始值-终值)。使用Dunnett(使用SAS机构公司(SAS Institute Inc)的

版本12.1.0统计软件包中的对照测试p水平0.05)计算显著性。

实例2：胞壁质酶的克隆、表达和纯化

如WO 2013/076253的实例2中所述的将SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:2的GH25胞壁质酶克隆并表达。可以使用基础分子技术克隆SEQ ID NO:3的GH25胞壁质酶(Ausubel等人,2003,Curr.Prot.Mol.Biol.[当前蛋白质与分子生物学],John Wiley&Sons[约翰威利父子公司],Cambridge[坎布里奇],美国；Christgau等人1995,Curr.Genet.[当前基因组学]27,135-141)。如WO 2009/102755中所述的将SEQ ID NO:4的GH25胞壁质酶克隆并表达。如WO2005/080559中所述的将SEQ ID NO:5的GH25胞壁质酶克隆并表达。如PCT/CN2017/075978中所述的将SEQ ID NO:6至SEQ ID NO:59的GH25胞壁质酶克隆并表达。如PCT/CN2017/075960中所述的将SEQ ID NO:60至SEQ ID NO:62的GH25胞壁质酶克隆并表达。如WO 2017/000922中所述的将SEQ ID NO:63至SEQ ID NO:71的GH24胞壁质酶克隆并表达。

实例3：消化率研究

当Balancius^TM在包含

(帝斯曼营养产品公司)、Alterion(安迪苏公司)、Enviva PRO(杜邦动物营养公司)和

中任一个的饮食中补充含益生菌的动物饲料饮食时，与阴性对照的水平相比，能量消化率(AME)显著增加。当用Balancius^TM补充DFM中的任一个时，AME的显著增加大于单独的胞壁质酶或任一DFM的增加之和。

Claims

1.一种动物饲料，该动物饲料包含动物饲料添加剂、一种或多种蛋白质源和一种或多种能源，其特征在于该动物饲料还包含一种或多种益生菌和一种或多种具有胞壁质酶活性的真菌多肽。

2.如权利要求1所述的动物饲料，其中该具有胞壁质酶活性的多肽是真菌GH24胞壁质酶或GH25胞壁质酶。

3.如权利要求1至2中任一项所述的动物饲料，其中该益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌、双歧杆菌、酵母菌、肠球菌、链球菌、片球菌、明串珠菌、乳球菌、酒球菌、芽孢杆菌、肉食杆菌、丙酸杆菌、梭菌、巨型球菌和埃希氏菌、或其组合。

4.如权利要求1至3中任一项所述的动物饲料，其中该具有胞壁质酶活性的多肽降解来自约氏乳杆菌的细胞壁碎片。

5.如权利要求1至4中任一项所述的动物饲料，其中该具有胞壁质酶活性的多肽选自由以下组成的组：

(bt)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41、SEQ IDNO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、或SEQ ID NO:71的变体，该变体在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个位置中包含一个或多个氨基酸取代(优选保守取代)和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；

6.如权利要求1至5中任一项所述的动物饲料，其中该益生菌选自由以下组成的组：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双歧杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双歧杆菌动物亚种、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种、埃氏巨型球菌、和丙酸杆菌属物种。

7.如权利要求1至5中任一项所述的动物饲料，其中该益生菌选自由以下组合组成的组：一种或多种乳杆菌和一种或多种酵母菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种链球菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种乳杆菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种链球菌、一种或多种酵母菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种酵母菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种链球菌和一种或多种双歧杆菌、一种或多种链球菌和一种或多种芽孢杆菌、一种或多种芽孢杆菌和一种或多种双歧杆菌。

8.如权利要求1至7中任一项所述的动物饲料，其中该蛋白质源选自由以下组成的组：大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、胡豆(蚕豆)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、葵花籽、棉籽、油菜籽(油菜)或豌豆，或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)、葵花粉、棉籽粉、油菜籽粉、鱼粉、骨粉、羽毛粉、乳清、或其任何组合。

9.如权利要求1至8中任一项所述的动物饲料，其中该能源选自由以下组成的组：玉蜀黍、玉米、高粱、大麦、小麦、燕麦、稻、黑小麦、黑麦、甜菜、糖甜菜、菠菜、马铃薯、木薯、藜麦、卷心菜、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子，或处于其加工形式例如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、马铃薯淀粉、木薯淀粉、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。

10.如权利要求1至9中任一项所述的动物饲料，其中该动物饲料添加剂还包含一种或多种选自由以下组成的列表的组分：

一种或多种另外的酶；

一种或多种微生物；

一种或多种维生素；

一种或多种矿物质；

一种或多种氨基酸；以及

一种或多种其他饲料成分。

11.如权利要求1至10中任一项所述的动物饲料，其中将该具有胞壁质酶活性的多肽配制为颗粒。

(a)制备如权利要求1至11中任一项所述的动物饲料；和

(b)向该单胃动物提供该动物饲料。