CN111999492A - 一种联合检验covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡 - Google Patents
一种联合检验covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111999492A CN111999492A CN202010749827.8A CN202010749827A CN111999492A CN 111999492 A CN111999492 A CN 111999492A CN 202010749827 A CN202010749827 A CN 202010749827A CN 111999492 A CN111999492 A CN 111999492A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- covid
- protein
- novel coronavirus
- detection
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 204
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 94
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 92
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 91
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 91
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 title claims abstract description 64
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 title claims abstract description 64
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims abstract description 121
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 67
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 claims abstract description 40
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 37
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims abstract description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 82
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 64
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 48
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 21
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims description 9
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 7
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 7
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 6
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims description 6
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 5
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- 102000044437 S1 domains Human genes 0.000 claims description 3
- 108700036684 S1 domains Proteins 0.000 claims description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 3
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 claims description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 7
- 108700002099 Coronavirus Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 abstract description 6
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 3
- 208000010444 Acidosis Diseases 0.000 description 2
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 2
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 208000006083 Hypokinesia Diseases 0.000 description 2
- 206010027417 Metabolic acidosis Diseases 0.000 description 2
- 206010028748 Nasal obstruction Diseases 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 2
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 208000017574 dry cough Diseases 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920002538 Polyethylene Glycol 20000 Polymers 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 102000029301 Protein S Human genes 0.000 description 1
- 108010066124 Protein S Proteins 0.000 description 1
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- MUUGCDGGIVCSDT-UHFFFAOYSA-N [NH4+].[NH4+].[O-]S([O-])(=O)=O.CCCCCCCC(O)=O Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S([O-])(=O)=O.CCCCCCCC(O)=O MUUGCDGGIVCSDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000010460 detection of virus Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种联合检验新型冠状病毒COVID‑19 N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，由卡壳、设置于卡壳上的两个加样孔和含有N抗原检测试纸条或S蛋白抗体检测试纸条的两个观察窗构成，其中所述检测试纸条由依次相连的样品垫、结合垫、反应垫和吸水垫构成；本发明通过同时检测新型冠状病毒N抗原及S蛋白抗体的IgM抗体和IgG抗体，能够快速确定被检者是否感染新型冠状病毒COVID‑19，避免了“假阴性”结果，为临床诊治新型冠状病毒肺炎提供了帮助。本发明的胶体金免疫层析检测卡特异性强，检测速度快、操作简便，无需专门设备，也不需要专业人员的操作，可广泛应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等多种场所的辅助筛查。
Description
技术领域
本发明涉及一种联合检测病毒抗原和抗体的检测卡，尤其涉及一种联合检验新型冠状病 毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，属于生物检测技术领域。
背景技术
新型冠状病毒COVID-19感染的肺炎以发热、乏力、干咳等症状为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等上呼吸道和消化道症状。重症病例多在1周后出现呼吸困 难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒 和出凝血功能障碍。迄今COVID-19还没有针对性的特效药。一些个案报道的治疗药物 仍需更多的临床实践证明效果，相关疫苗的研发也在开展中，但距离临床应用尚需时 间。眼下当务之急应是尽快研究有效的诊断试剂，采取早诊断、早隔离、切断传播途 径，控制疫情蔓延。
目前针对新型冠状病毒COVID-19的检测主要是以PCR为基础的病毒核酸检测，其 检测原理是以病毒独特的基因序列为检测靶标，通过PCR扩增，使靶标DNA序列指数 级增加，每一个扩增出来的DNA序列，都可与预先加入的一段荧光标记探针结合，产 生荧光信号，扩增出来的靶基因越多，累积的荧光信号就越强，意味着有被检病毒。 而没有病毒的样本中，由于没有靶标DNA序列扩增，因此就检测不到荧光信号增强。 所以，核酸检测，其实就是通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否有病毒核酸。
新型冠状病毒COVID-19感染的肺炎以发热、乏力、干咳等症状为主要表现，少数患者 伴有鼻塞、流涕、腹泻等上呼吸道和消化道症状。重症病例多在1周后出现呼吸困难，严重 者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障 碍。迄今COVID-19还没有针对性的特效药。一些个案报道的治疗药物仍需更多的临床实践 证明效果，相关疫苗的研发也在开展中，但距离临床应用尚需时间。眼下当务之急应是尽快 研究有效的诊断试剂，采取早诊断、早隔离、切断传播途径，控制疫情蔓延。
目前针对新型冠状病毒COVID-19的检测主要是以PCR为基础的病毒核酸检测，其检测 原理是以病毒独特的基因序列为检测靶标，通过PCR扩增，使靶标DNA序列指数级增加，每 一个扩增出来的DNA序列，都可与预先加入的一段荧光标记探针结合，产生荧光信号，扩 增出来的靶基因越多，累积的荧光信号就越强，意味着有被检病毒。而没有病毒的样本中， 由于没有靶标DNA序列扩增，因此就检测不到荧光信号增强。所以，核酸检测，其实就是 通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否有病毒核酸。
新型冠状病毒COVID-19核酸检测有较高的特异性和灵敏度，但是该检测方法对技术要 求高，对新型冠状病毒的检测用时长，容易出现假阴性，标本需要特殊处理，还要求具备PCR 扩增仪及凝胶电泳等专业的仪器设备，需专业技术人员操作和判断才能给出检测结果。不便 应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等基层对新型冠状病毒COVID-19的早期初步 筛查。基于此，亟需一种更早期、更准确、更快捷、更有效的检测新型冠状病毒COVID-19 的诊断试剂或试剂盒，以便于进行早期鉴别辅助诊断。胶体金免疫层析技术是近年来发展迅 速的一种简便、快速的免疫学检测方法，但是目前国内关于胶体金免疫层析技术检测新型冠 状病毒COVID-19的研究报道较少，经检索目前市面上还没有通过同时检测新型冠状病毒 COVID-19N抗原及S蛋白抗体的IgM抗体和IgG抗体，能够准确的判断机体的免疫学反应状 态的有关联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡的 报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种联合检验新型冠状病毒COVID-19 N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡。
本发明所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析 检测卡，所述检测卡由卡壳、设置于卡壳上的两个加样孔和含有COVID-19N抗原检测试纸 条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条的两个观察窗构成，其特征在于：
所述卡壳上的加样孔与观察窗间隔状直线排列，每组加样孔与观察窗同方向设置且间隔 状平行排列；所述COVID-19N抗原检测试纸条由依次相连的第一样品垫、第一结合垫、第 一反应垫和第一吸水垫构成；其中所述第一结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒 COVID-19N蛋白单克隆抗体，所述第一反应垫上沿样品流动方向依次设有第一检测线和第 一质控线，第一检测线上包被有新型冠状病毒COVID-19N蛋白捕获抗体，第一质控线上包 被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19S蛋白抗体检测试纸条由依次相连的第二样品垫、第二结合垫、第二反应垫和第二吸水垫构成；其中所述第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠 状病毒COVID-19重组S蛋白抗原；所述第二反应垫上沿样品流动方向依次设有第二检测线、 第三检测线和第二质控线，第二检测线上包被有抗人IgM抗体，所述第三检测线上包被有抗 人IgG抗体，第二质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19N抗原检测试纸条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条分别设置在卡壳上的每组加样孔与观察窗所在的位置，每组 中的加样孔与所述第一样品垫或第二样品垫相对应，组中相应的观察窗与所述第一反应垫或 第二反应垫相对应；所述第一反应垫上的第一检测线与第一质控线的间距不少于1cm，所述 第二反应垫上第二检测线、第三检测线和第二质控线之间的距离不少于1cm。
本发明中对胶体金的具体的制备方法没有特别的限制，为本领域技术人员熟知的制备方 法即可，例如：采用柠檬酸三钠还原法制备等方法，可以通过调节氯金酸和柠檬酸三钠的加 入比例来改变和控制胶体金的粒径大小。对胶体金具体的标记过程不作特别限定，采用本领 域技术人员熟知的方法即可。
上述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡， 优选的实施方式是：所述胶体金标记中所采用的胶体金的粒径为20-30nm；胶体金的质量比 浓度为万分之六。
针对新型冠状病毒COVID-19这种新型冠状病毒的检测，如何提高检测的灵敏度仍然是 技术难题。发明人在研究中发现，即使参照现有的冠状病毒胶体金免疫层析试纸条制备新型 冠状病毒COVID-19胶体金免疫层析试纸条，检测的灵敏度不高。为了解决现有技术中针对 新型冠状病毒COVID-19检测N抗原时的胶体金免疫层析试纸条灵敏度低的技术问题，发 明人进一步深入研究发现，通过在胶体金标记中采用粒径为20-30nm的胶体金，使所述胶 体金的浓度为万分之六，检测N抗原时，采用喷有胶体金标记的新型冠状病毒N蛋白单克 隆抗体作为检测抗体，并在第一检测线上包被新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体，可以提高N 抗原检测时的灵敏度。
上述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡， 优选的实施方式是：所述新型冠状病毒COVID-19N蛋白单克隆抗体与胶体金的结合浓度为 每100ml体金浓液加入0.8mg N蛋白单克隆抗体；所述新型冠状病毒COVID-19重组S蛋 白抗原与胶体金的结合浓度为每100ml体金浓液加入0.8mg重组S蛋白抗原。
进一步优选的实施方式是：第一检测线上包被有浓度为1.2mg/ml的新型冠状病毒COVID-19N蛋白捕获抗体；第二检测线上包被有浓度为1.8mg/ml的抗人IgM抗体，所述 第三检测线上包被有浓度为1.6mg/ml的抗人IgG抗体。
上述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡， 优选的实施方式是：所述第一或第二样品垫采用玻纤SB06，所述第一或第二结合垫为玻纤 8965，所述第一或第二反应垫为赛多利斯CN140。
上述优选的实施方式可以大大提高胶体金免疫层析检测新型冠状病毒COVID-19的灵 敏度及特异度，并能达到最好的性价比。
上述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡， 优选的实施方式是：第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白抗 原及鼠IgG，其中重组S蛋白抗原与鼠IgG的体积比为2:1。
本发明中，所述新型冠状病毒COVID-19N蛋白和S蛋白可按照本领域常规技术制备， 不作特别限定。
上述联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡中， 所述新型冠状病毒COVID-19N蛋白优选以如下方法制得：
克隆新型冠状病毒COVID-19N蛋白基因序列，将其连入表达载体pET-28，构建重组表达载体pET-28-N，经测序鉴定正确后转化至表达菌E.coli Rosetta中，以IPTG诱导蛋白表达，收集发酵产物进行超声破碎，经Ni柱纯化即制得新型冠状病毒COVID-19N蛋白； 其中，所述表达载体pET-28的N端、C端均带有6×His标签。
上述联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡中， 所述新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白优选以如下方法制得：
克隆新型冠状病毒COVID-19S蛋白中S1域RBD的基因序列；将该基因序列插入带有pPICZα的表达载体中构建重组表达载体，经测序鉴定正确后以此表达载体转染酵母GS115细胞，收集发酵产物进行超声破碎，再通过Ni亲和纯化柱进行蛋白纯化制得新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白。
本发明所述第二反应垫上的抗人IgG抗体和抗人IgM抗体均为市售产品或可按照本领 域常规技术制备。
本发明所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析 检测卡作为判定新型冠状病毒COVID-19有无测试装置的应用。
上述应用中，所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免 疫层析检测卡的使用方法是：
将被测样品溶液分别滴加到COVID-19N抗原检测试纸条和COVID-19S蛋白抗体检测 试纸条的样品垫上，其中所述被测样品是人血清、血浆或全血样本；待5～20分钟后，根据检 测线和质控线的显色情况，判断样品中是否含有新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗 体，判断方法如下：
对于COVID-19N抗原检测试纸条，1)阳性：第一质控线、第一检测线均呈现红色条带， 说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19N抗原；2)阴性：第一质控线呈现红色条带，第一 检测线不呈现红色条带，说明样品中不含新型冠状病毒COVID-19N抗原；3)失效：第一质控线、第一检测线均不呈现红色条带或仅有第一检测线呈现红色条带，说明COVID-19N抗原检测试纸条失效；
对于和COVID-19S蛋白抗体检测试纸条，1)阳性：第二质控线、第二检测线均呈现红 色条带，第三检测线不呈现红色条带，说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19IgM抗体；第二质控线、第三检测线均呈现红色条带，第二检测线不呈现红色条带，说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19IgG抗体；2)阴性：第二质控线呈现红色条带，第二检测线和第三检 测线均不呈现红色条带，说明样品中不含新型冠状病毒COVID-19S蛋白抗体；3)失效：无 论第二检测线、第三检测线是否呈现红色条带，第二质控线不呈现红色条带时，说明COVID-19抗体检测试纸条失效。
本发明公开了一种联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫 层析检测卡。新型冠状病毒COVID-19N抗原检测可以缩短窗口期，S蛋白检测可以反应病 毒的攻击力及传染性。通过同时检测新型冠状病毒COVID-19N抗原及S蛋白抗体的IgM抗体和IgG抗体，能够准确的判断该机体的免疫学反应状态，准确性高、特异性强，而且检测速度快、操作简便，无需专门设备，也不需要专业人员的操作，可应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等多种场所的初步筛查，能够在数分钟内判断结果，为疑似患者排查和无症状感染者筛查提供更简便、更快速的现场检测手段，从而及早预防疫情扩散。
本发明的COVID-19N抗原检测试纸条的检测原理为：试纸条根据双抗体夹心法原理检 测样品中是否含有新型冠状病毒COVID-19N抗原。在试纸条的样品垫上滴加样品后，在层 析作用下，样品溶液向结合垫移动，流经结合垫时，金标抗体即被溶解。当样品中含有新型 冠状病毒COVID-19N抗原时，新型冠状病毒COVID-19N抗原将和金标抗体结合，形成金标抗体-抗原复合物，由于层析作用反应复合物移至反应垫的检测线时形成金标抗体-抗原- 抗体复合物，金标抗体被固定下来，在检测线上显示红色线条，呈阳性反应，多余的金标抗 体移至质控线被羊抗鼠IgG捕获，呈现红色质控线条。不论检测样品中是否含有COVID-19 S蛋白抗体，第二质控线包被的羊抗鼠IgG都会与随待测样品移动的胶体金标记的鼠IgG反 应形成一条红色反应线作为质控。
本发明的COVID-19S蛋白抗体检测试纸条检测样品中是否含有COVID-19S蛋白IgG抗体及IgM抗体的原理为：在试纸条的样品垫上滴加样品后，在层析作用下，样品溶液向 结合垫移动，流经结合垫时，金标抗体即被溶解。当样品中含有新型冠状病毒COVID-19 抗体时，新型冠状病毒COVID-19抗体即和金标抗原结合，形成金标抗原-抗体复合物，由 于层析作用反应复合物移至反应垫的检测线；当样品中含有的新型冠状病毒COVID-19抗体 为IgM抗体时，在第二检测线上形成金标抗原-抗体-抗人IgM抗体复合物，金标抗体被固 定下来，在第二检测线上显示红色线条；或者当样品中含有的新型冠状病毒COVID-19抗体 为IgG抗体时，在第三检测线上形成金标抗原-抗体-抗人IgG抗体复合物，金标抗体被固定 下来，在第三检测线上显示红色线条。
综上，本发明所具有的有益效果是：
本发明中，通过同时检测新型冠状病毒COVID-19N抗原及S蛋白特异性的IgM抗体和IgG抗体，能够准确的判断该机体的免疫学反应状态及病毒的传染性，从而根据检测结果，给出准确的检测结果，有助于提高新冠病毒检出率，避免“假阴性”结果，防止漏检，进一步提升检查准确性，为临床诊治新型冠状病毒肺炎提供帮助。本发明的胶体金免疫层析检 测卡特异性强，而且检测速度快、操作简便，无需专门设备，也不需要专业人员的操作，可 应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等多种场所的初步筛查，能够在数分钟内判断 结果，为疑似患者排查和无症状感染者筛查提供更简便、更快速的现场辅助检测手段，从而 及早预防疫情扩散。
附图说明
图1为本发明胶体金免疫层析检测卡的结构示意图。
图2为本发明COVID-19N抗原检测试纸条的结构示意图。
图3为本发明COVID-19S蛋白抗体检测试纸条的结构示意图。
上述图中：1、卡壳，2、加样孔，3、观察窗，4、第一样品垫，5、第一结合垫，6、第 一反应垫，7、第一吸水垫，8、第一检测线，9、第一质控线，10、第一底板，11、第二样 品垫，12、第二结合垫，13、第二反应垫，14、第二吸水垫，15、第二检测线，16、第三检 测线，17、第二质控线，18、第二底板。
图4为N蛋白的SDS-PAGE结果。
图5为S蛋白RBD区蛋白的SDS-PAGE结果。
具体实施方式
下面结合具体附图和实施例对本发明内容进行详细说明。如下所述例子仅是本发明的较 佳实施方式而已，应该说明的是，下述说明仅仅是为了解释本发明，并非对本发明作任何形 式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰， 均属于本发明技术方案的范围内。
下述实施例中，所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均从商业途径得到。
实施例1：
一种联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡， 所述检测卡由卡壳、设置于卡壳上的两个加样孔和含有COVID-19N抗原检测试纸条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条的两个观察窗构成，其中：
所述卡壳上的加样孔与观察窗间隔状直线排列，每组加样孔与观察窗同方向设置且间隔 状平行排列；所述COVID-19N抗原检测试纸条由依次相连的第一样品垫、第一结合垫、第 一反应垫和第一吸水垫构成；其中所述第一结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒 COVID-19N蛋白单克隆抗体，所述第一反应垫上沿样品流动方向依次设有第一检测线和第 一质控线，第一检测线上包被有新型冠状病毒COVID-19N蛋白捕获抗体，第一质控线上包 被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19S蛋白抗体检测试纸条由依次相连的第二样品垫、第二结合垫、第二反应垫和第二吸水垫构成；其中所述第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠 状病毒COVID-19重组S蛋白抗原；所述第二反应垫上沿样品流动方向依次设有第二检测线、 第三检测线和第二质控线，第二检测线上包被有抗人IgM抗体，所述第三检测线上包被有抗 人IgG抗体，第二质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19N抗原检测试纸条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条分别设置在卡壳上的每组加样孔与观察窗所在的位置，每组 中的加样孔与所述第一样品垫或第二样品垫相对应，组中相应的观察窗与所述第一反应垫或 第二反应垫相对应；所述第一反应垫上的第一检测线与第一质控线的间距不少于1cm，所述 第二反应垫上第二检测线、第三检测线和第二质控线之间的距离不少于1cm。
本实施例中对胶体金的具体的制备方法没有特别的限制，为本领域技术人员熟知的制备 方法即可，例如：采用柠檬酸三钠还原法制备等方法，可以通过调节氯金酸和柠檬酸三钠的 加入比例来改变和控制胶体金的粒径大小。对胶体金具体的标记过程不作特别限定，采用本 领域技术人员熟知的方法即可。
上述检测卡中，优选的实施方式是：
所述胶体金标记中所采用的胶体金的粒径为20-30nm；胶体金的质量比浓度为万分之六。
所述新型冠状病毒COVID-19N蛋白单克隆抗体与胶体金的结合浓度为每100ml体金浓 液加入0.8mg N蛋白单克隆抗体；所述新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白抗原与胶体金的 结合浓度为每100ml体金浓液加入0.8mg重组S蛋白抗原。
进一步优选的实施方式是：第一检测线上包被有浓度为1.2mg/ml的新型冠状病毒COVID-19N蛋白捕获抗体；第二检测线上包被有浓度为1.8mg/ml的抗人IgM抗体，所述 第三检测线上包被有浓度为1.6mg/ml的抗人IgG抗体。
上述检测卡中，所述第一或第二样品垫优选采用玻纤SB06，所述第一或第二结合垫优 选为玻纤8965，所述第一或第二反应垫优选为赛多利斯CN140可以大大提高胶体金免疫层 析检测新型冠状病毒COVID-19的灵敏度及特异度，并能达到最好的性价比。
上述检测卡还可以采用：第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19重组 S蛋白抗原及鼠IgG，其中重组S蛋白抗原与鼠IgG的体积比为2:1。
本发明中，所述新型冠状病毒COVID-19N蛋白和S蛋白可按照本领域常规技术制备， 不作特别限定。
上述检测卡中，所述新型冠状病毒COVID-19N蛋白优选以如下方法制得：
克隆新型冠状病毒COVID-19N蛋白基因序列，将其连入表达载体pET-28，构建重组表 达载体pET-28-N，经测序鉴定正确后转化至表达菌E.coli Rosetta中，以IPTG诱导蛋白表 达，收集发酵产物进行超声破碎，经Ni柱纯化即制得新型冠状病毒COVID-19N蛋白；其中，所述表达载体pET-28的N端、C端均带有6×His标签。
上述检测卡中，所述新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白优选以如下方法制得：
克隆新型冠状病毒COVID-19S蛋白中S1域RBD的基因序列；将该基因序列插入带有pPICZα的表达载体中构建重组表达载体，经测序鉴定正确后以此表达载体转染酵母GS115细胞，收集发酵产物进行超声破碎，再通过Ni亲和纯化柱进行蛋白纯化制得新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白。
上述检测卡中，所述新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备方法为：采用制备的新型冠 状病毒N蛋白，免疫的Balb/c小鼠，无菌取出已免疫的Balb/c小鼠脾脏，分离脾细胞，将 脾细胞与骨髓瘤细胞按9：1的比例混合，PEG促融合，于HAT培养液(20％胎牛血清/DMEM1XHAT)上融合成杂交瘤细胞，然后进行杂交瘤细胞筛选，获得阳性杂交瘤细胞后，进行 亚克隆，取细胞进行培养至对数生长期，接种于Balb/c小鼠体内，并产生腹水。采集腹水 后，离心去除细胞成分和其他的沉淀物，收集上清，先经辛酸-硫酸铵法粗纯化，再上SepHadexG-50层析柱进行离子交换层析，用0.01M PBS(pH7.2)洗脱，收集第一洗脱峰，洗脱液用PEG20000浓缩20分钟，浓缩液即为纯化出的抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体。
本实施例中第二反应垫上的抗人IgG抗体和抗人IgM抗体均为市售产品或可按照本领 域常规技术制备。
实施例2：
本发明所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析 检测卡作为判定新型冠状病毒COVID-19有无测试装置的应用，其中所述检测卡的使用方法 是：
将被测样品溶液分别滴加到COVID-19N抗原检测试纸条和COVID-19S蛋白抗体检测 试纸条的样品垫上，其中所述被测样品是人血清、血浆或全血样本；待5～20分钟后，根据检 测线和质控线的显色情况，判断样品中是否含有新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗 体，判断方法如下：
对于COVID-19N抗原检测试纸条，1)阳性：第一质控线、第一检测线均呈现红色条带， 说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19N抗原；2)阴性：第一质控线呈现红色条带，第一 检测线不呈现红色条带，说明样品中不含新型冠状病毒COVID-19N抗原；3)失效：第一质控线、第一检测线均不呈现红色条带或仅有第一检测线呈现红色条带，说明COVID-19N抗原检测试纸条失效；
对于和COVID-19S蛋白抗体检测试纸条，1)阳性：第二质控线、第二检测线均呈现红 色条带，第三检测线不呈现红色条带，说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19IgM抗体；第二质控线、第三检测线均呈现红色条带，第二检测线不呈现红色条带，说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19IgG抗体；2)阴性：第二质控线呈现红色条带，第二检测线和第三检 测线均不呈现红色条带，说明样品中不含新型冠状病毒COVID-19S蛋白抗体；3)失效：无 论第二检测线、第三检测线是否呈现红色条带，第二质控线不呈现红色条带时，说明COVID-19抗体检测试纸条失效。
本发明所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析 检测卡检测样品为血液，避免了目前核酸检测采集上呼吸道样品对医护人员暴露风险大的问 题，相对安全性高。
实施例3：
本发明所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析 检测卡性能评价。
临床样品检测：实验开展的临床样品数是200例，其中包括23例确诊病例，这13例确 诊病例核酸检测结果是阳性，本发明的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗 体的胶体金免疫层析检测卡检测结果也是阳性，一致率达到100％。其中1例在出院复查是 其核酸及抗原为阴性，但是S蛋白IgG仍为阳性。证明本发明所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡可以作为判定新型冠状病毒COVID-19有无测试装置应用。
以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而 理解为对本发明专利范围的限制，但凡采用等同替换或等效变换的形式所获得的技术方案， 均应落在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，所述检测卡由卡壳、设置于卡壳上的两个加样孔和含有COVID-19N抗原检测试纸条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条的两个观察窗构成，其特征在于：
所述卡壳上的加样孔与观察窗间隔状直线排列，每组加样孔与观察窗同方向设置且间隔状平行排列；所述COVID-19N抗原检测试纸条由依次相连的第一样品垫、第一结合垫、第一反应垫和第一吸水垫构成；其中所述第一结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19N蛋白单克隆抗体，所述第一反应垫上沿样品流动方向依次设有第一检测线和第一质控线，第一检测线上包被有新型冠状病毒COVID-19N蛋白捕获抗体，第一质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19S蛋白抗体检测试纸条由依次相连的第二样品垫、第二结合垫、第二反应垫和第二吸水垫构成；其中所述第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白抗原；所述第二反应垫上沿样品流动方向依次设有第二检测线、第三检测线和第二质控线，第二检测线上包被有抗人IgM抗体，所述第三检测线上包被有抗人IgG抗体，第二质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述COVID-19N抗原检测试纸条或COVID-19S蛋白抗体检测试纸条分别设置在卡壳上的每组加样孔与观察窗所在的位置，每组中的加样孔与所述第一样品垫或第二样品垫相对应，组中相应的观察窗与所述第一反应垫或第二反应垫相对应；所述第一反应垫上的第一检测线与第一质控线的间距不少于1cm，所述第二反应垫上第二检测线、第三检测线和第二质控线之间的距离不少于1cm。
2.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，其特征在于：所述胶体金标记中所采用的胶体金的粒径为20-30nm；胶体金的质量比浓度为万分之六。
3.根据权利要求1或2所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，其特征在于：所述新型冠状病毒COVID-19N蛋白单克隆抗体与胶体金的结合浓度为每100ml体金浓液加入0.8mg N蛋白单克隆抗体；所述新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白抗原与胶体金的结合浓度为每100ml体金浓液加入0.8mg重组S蛋白抗原。
4.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，其特征在于：第一检测线上包被有浓度为1.2mg/ml的新型冠状病毒COVID-19N蛋白捕获抗体；第二检测线上包被有浓度为1.8mg/ml的抗人IgM抗体，所述第三检测线上包被有浓度为1.6mg/ml的抗人IgG抗体。
5.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，其特征在于：第二结合垫上喷有胶体金标记的新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白抗原及鼠IgG，其中重组S蛋白抗原与鼠IgG的体积比为2:1。
6.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，其特征在于：所述第一或第二样品垫采用玻纤SB06，所述第一或第二结合垫为玻纤8965，所述第一或第二反应垫为赛多利斯CN140。
7.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，其特征在于，所述新型冠状病毒COVID-19N蛋白以如下方法制得：
克隆新型冠状病毒COVID-19N蛋白基因序列，将其连入表达载体pET-28，构建重组表达载体pET-28-N，经测序鉴定正确后转化至表达菌E.coli Rosetta中，以IPTG诱导蛋白表达，收集发酵产物进行超声破碎，经Ni柱纯化即制得新型冠状病毒COVID-19N蛋白；其中，所述表达载体pET-28的N端、C端均带有6×His标签。
8.根据权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡，其特征在于，所述新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白以如下方法制得：
克隆新型冠状病毒COVID-19S蛋白中S1域RBD的基因序列；将该基因序列插入带有pPICZα的表达载体中构建重组表达载体，经测序鉴定正确后以此表达载体转染酵母GS115细胞，收集发酵产物进行超声破碎，再通过Ni亲和纯化柱进行蛋白纯化制得新型冠状病毒COVID-19重组S蛋白。
9.权利要求1所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡作为判定新型冠状病毒COVID-19有无测试装置的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的联合检验新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡的使用方法是：
将被测样品溶液分别滴加到COVID-19N抗原检测试纸条和COVID-19S蛋白抗体检测试纸条的样品垫上，其中所述被测样品是人血清、血浆或全血样本；待5～20分钟后，根据检测线和质控线的显色情况，判断样品中是否含有新型冠状病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗体，判断方法如下：
对于COVID-19N抗原检测试纸条，1)阳性：第一质控线、第一检测线均呈现红色条带，说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19N抗原；2)阴性：第一质控线呈现红色条带，第一检测线不呈现红色条带，说明样品中不含新型冠状病毒COVID-19N抗原；3)失效：第一质控线、第一检测线均不呈现红色条带或仅有第一检测线呈现红色条带，说明COVID-19N抗原检测试纸条失效；
对于和COVID-19S蛋白抗体检测试纸条，1)阳性：第二质控线、第二检测线均呈现红色条带，第三检测线不呈现红色条带，说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19IgM抗体；第二质控线、第三检测线均呈现红色条带，第二检测线不呈现红色条带，说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19IgG抗体；2)阴性：第二质控线呈现红色条带，第二检测线和第三检测线均不呈现红色条带，说明样品中不含新型冠状病毒COVID-19S蛋白抗体；3)失效：无论第二检测线、第三检测线是否呈现红色条带，第二质控线不呈现红色条带时，说明COVID-19抗体检测试纸条失效。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010749827.8A CN111999492B (zh) | 2020-07-30 | 2020-07-30 | 一种联合检验covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010749827.8A CN111999492B (zh) | 2020-07-30 | 2020-07-30 | 一种联合检验covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111999492A true CN111999492A (zh) | 2020-11-27 |
| CN111999492B CN111999492B (zh) | 2023-12-15 |
Family
ID=73462567
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010749827.8A Active CN111999492B (zh) | 2020-07-30 | 2020-07-30 | 一种联合检验covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111999492B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112611869A (zh) * | 2020-12-21 | 2021-04-06 | 杭州宝临生物科技有限公司 | 新型冠状病毒检测试剂条以及包括其的新型冠状病毒检测试剂盒 |
| CN112858675A (zh) * | 2021-01-05 | 2021-05-28 | 杭州奥泰生物技术股份有限公司 | 一种新型冠状病毒抗原、抗体联合智能化检测装置 |
| CN113009153A (zh) * | 2021-02-25 | 2021-06-22 | 山东莱博生物科技有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新冠病毒中和抗体检测试剂盒及其应用 |
| CN114236120A (zh) * | 2021-11-29 | 2022-03-25 | 桂林理工大学 | 一种新型冠状病毒n抗原的背景荧光免疫层析试纸条及制备方法 |
| CN115398235A (zh) * | 2021-02-04 | 2022-11-25 | 株式会社Icst | 检测器具、检测套件以及检测方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011057475A1 (zh) * | 2009-11-12 | 2011-05-19 | 上海科新生物技术股份有限公司 | 胶体金层析法肝病检测试纸及其制备方法 |
| CN111024954A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-04-17 | 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 | 联合检测covid-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置及其使用法 |
| CN111308072A (zh) * | 2020-03-25 | 2020-06-19 | 中山生物工程有限公司 | 快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒及其制备方法 |
| CN111426830A (zh) * | 2020-03-19 | 2020-07-17 | 杭州奥泰生物技术股份有限公司 | 联合诊断covid-19和肺炎支原体的胶体金免疫层析检测试纸及其制备方法 |
| CN111426831A (zh) * | 2020-03-24 | 2020-07-17 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒及其制备方法 |
-
2020
- 2020-07-30 CN CN202010749827.8A patent/CN111999492B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011057475A1 (zh) * | 2009-11-12 | 2011-05-19 | 上海科新生物技术股份有限公司 | 胶体金层析法肝病检测试纸及其制备方法 |
| CN111024954A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-04-17 | 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 | 联合检测covid-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置及其使用法 |
| CN111426830A (zh) * | 2020-03-19 | 2020-07-17 | 杭州奥泰生物技术股份有限公司 | 联合诊断covid-19和肺炎支原体的胶体金免疫层析检测试纸及其制备方法 |
| CN111426831A (zh) * | 2020-03-24 | 2020-07-17 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒及其制备方法 |
| CN111308072A (zh) * | 2020-03-25 | 2020-06-19 | 中山生物工程有限公司 | 快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒及其制备方法 |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112611869A (zh) * | 2020-12-21 | 2021-04-06 | 杭州宝临生物科技有限公司 | 新型冠状病毒检测试剂条以及包括其的新型冠状病毒检测试剂盒 |
| CN112858675A (zh) * | 2021-01-05 | 2021-05-28 | 杭州奥泰生物技术股份有限公司 | 一种新型冠状病毒抗原、抗体联合智能化检测装置 |
| CN115398235A (zh) * | 2021-02-04 | 2022-11-25 | 株式会社Icst | 检测器具、检测套件以及检测方法 |
| CN115398235B (zh) * | 2021-02-04 | 2024-01-02 | 株式会社Icst | 检测器具、检测套件以及检测方法 |
| EP4289973A4 (en) * | 2021-02-04 | 2024-03-27 | Icst Corporation | TEST INSTRUMENT, TEST KIT AND TEST METHOD |
| CN113009153A (zh) * | 2021-02-25 | 2021-06-22 | 山东莱博生物科技有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新冠病毒中和抗体检测试剂盒及其应用 |
| CN113009153B (zh) * | 2021-02-25 | 2023-12-15 | 山东莱博生物科技有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新冠病毒中和抗体检测试剂盒及其应用 |
| CN114236120A (zh) * | 2021-11-29 | 2022-03-25 | 桂林理工大学 | 一种新型冠状病毒n抗原的背景荧光免疫层析试纸条及制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111999492B (zh) | 2023-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111024954A (zh) | 联合检测covid-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置及其使用法 | |
| CN111999492B (zh) | 一种联合检验covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡 | |
| CN111366728A (zh) | 一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的免疫层析试剂盒 | |
| CN111060691A (zh) | 检测covid-19的荧光免疫层析装置及其使用方法 | |
| CN111879933A (zh) | 检测新型冠状病毒的免疫层析试纸 | |
| CN211148669U (zh) | 一种基于S抗原的新型冠状病毒2019-nCoV抗体快速检测试剂盒 | |
| CN112858675B (zh) | 一种新型冠状病毒抗原、抗体联合智能化检测装置 | |
| CN102023211A (zh) | 一种全程定量检测c反应蛋白的免疫层析试纸条及其制备方法 | |
| CN101735319B (zh) | 一种抗gp73蛋白的单克隆抗体、其制备方法和应用 | |
| CN105277693A (zh) | 人副流感病毒量子点免疫层析分型检测卡及其制备方法和应用 | |
| CN111647055B (zh) | 一种用于新型冠状病毒检测的n蛋白及其制备与应用 | |
| CN113092755A (zh) | 一种夹心法检测布鲁氏菌抗原的胶体金检测试纸条 | |
| CN106645750B (zh) | 一种人源性asprosin蛋白的ELISA检测试剂盒及其用途 | |
| CN114076825A (zh) | 检测SARS-Cov-2病毒的检测试剂条、试剂盒和方法 | |
| CN214750354U (zh) | 一种新型冠状病毒抗原、抗体联合智能化检测装置 | |
| EP3640644B1 (en) | Target marker gp73 for detecting steatohepatitis and detection application method | |
| CN114058593A (zh) | SARS-CoV-2的N抗原的单克隆抗体、检测方法及其用途 | |
| CN204028084U (zh) | 人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡 | |
| CN102980997B (zh) | EB病毒衣壳抗原IgM抗体胶体金法检测试剂及其制备方法 | |
| CN105891193A (zh) | 呼吸道合胞病毒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| ES2334972T3 (es) | Inmunoensayo para medulasina humana y metodo de diagnostico de la esclerosis multiple. | |
| CN113624977A (zh) | SARS-CoV-2感染诊断方法 | |
| JP2021172642A (ja) | ＳＡＲＳ−ＣｏＶ−２由来ヌクレオカプシド断片および該断片を用いて抗ＳＡＲＳ−ＣｏＶ−２抗体を検出する方法およびキット | |
| CN106153925A (zh) | 幽门螺杆菌IgA抗体检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN113848319B (zh) | 免疫法检测冠状病毒的横向流动检测装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |