CN111999272A - 一种卡那霉素的检测方法 - Google Patents

一种卡那霉素的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111999272A
CN111999272A CN202010812847.5A CN202010812847A CN111999272A CN 111999272 A CN111999272 A CN 111999272A CN 202010812847 A CN202010812847 A CN 202010812847A CN 111999272 A CN111999272 A CN 111999272A
Authority
CN
China
Prior art keywords
kanamycin
detecting
water
reaction
soluble carbon
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010812847.5A
Other languages
English (en)
Inventor
王晓华
冯婷婷
王峥
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University ZJU
Shanxi University of Chinese Mediciine
Guilin Medical University
Original Assignee
Zhejiang University ZJU
Shanxi University of Chinese Mediciine
Guilin Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University ZJU, Shanxi University of Chinese Mediciine, Guilin Medical University filed Critical Zhejiang University ZJU
Priority to CN202010812847.5A priority Critical patent/CN111999272A/zh
Publication of CN111999272A publication Critical patent/CN111999272A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N21/643—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes" non-biological material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/02—Food
    • G01N33/04—Dairy products
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6432—Quenching

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明公开了一种卡那霉素的检测方法，包括如下步骤：取一定量的卡那霉素适配体与待测样品混合，室温反应0.8～1.2h后加入DNA互补序列和信号探针，室温反应20～40min后得到反应液，向反应液中加入核酸外切酶III进行酶解反应，酶解反应完全后加热终止酶解反应；最后加入水溶性碳纳米颗粒得到检测液，测定检测液的荧光强度，根据测得的荧光强度和相应的标准曲线计算卡那霉素的浓度。本发明所述卡那霉素的检测方法，具有高的灵敏度和选择性，线性范围为50～100nM，检测限为2.5nM，可用于牛奶中卡那霉素的检测。

Description

一种卡那霉素的检测方法
技术领域
本发明涉及抗生素检测领域，具体涉及一种卡那霉素的检测方法。
背景技术
卡那霉素(KAN)是一种由卡那链霉菌产生的碱性氨基糖苷类抗生素，具有广谱抗菌性，是我国畜禽和水产养殖中的一种常用兽药。不合理或过量使用卡那霉素会导致其残留在动物源食品中，最终通过食物链进入人体，对人体产生不同程度的危害。因而多个地区和国家都制定了严格的最大残留量(maximum residue limits,MRLs)。例如欧盟，美国和日本等国家规定了该类化合物在动物组织及牛奶中的最大残留限量(0.1mg/L)，我国农业部也明确规定了在牛奶中的最大残留限量150μg/kg。因此，建立卡那霉素准确可靠的检测分析手段具有重要的现实需要。
目前，有多种检测KAN的方法，比如酶联免疫法、拉曼光谱法、色谱法、电化学法等。
公开号为CN111307768A的中国发明专利申请记载了一种快速检测样品中卡那霉素的方法：首先，向单壁碳纳米管与卡那霉素适配体的均匀混合物中加入甲醇溶液，异丙醇溶液得到碳纳米管-卡那霉素适配体复合物，再向复合物中加水或者适配体溶液重新分散得到检测溶液。利用检测溶液中的适配体与待测成分特异性结合的特点，根据成分与适配体结合前后样品近红外荧光光谱变化，来对目标成分含量进行测定。
公开号为CN108760853A的中国发明专利申请记载了一种检测牛奶中卡那霉素残留的适配体传感器的制备方法：基于有序介孔碳-壳聚糖(OMC-CS)和金纳米颗粒-链霉亲和素(AuNPs-SA)的超灵敏电化学传感器，检测KAN。
上述方法普遍存在费时费力，需要大量试剂，成本高等缺点。因此，亟需建立一种高效率，特异性强和灵敏度高的KAN检测方法。
发明内容
本发明提供了一种基于水溶性碳纳米颗粒和核酸外切酶Ⅲ信号放大技术的卡那霉素的检测方法，具有高的灵敏度和选择性，线性范围为50～100nM，检测限为2.5nM，可用于牛奶中卡那霉素的检测。
本发明的技术方案为：
一种卡那霉素的检测方法，包括如下步骤：
取卡那霉素适配体与待测样品混合，室温反应0.8～1.2h后加入DNA互补序列和信号探针，室温反应20～40min后得到反应液；
向反应液中加入核酸外切酶III进行酶解反应，酶解反应完全后加热终止酶解反应，最后加入水溶性碳纳米颗粒后得到检测液，测定检测液的荧光强度，根据测得的荧光强度和相应的标准曲线计算卡那霉素的浓度。
核酸外切酶Ⅲ(ExoⅢ)是从核酸分子链的3’-末端开始作用于磷酸二酯键水解生成短的核酸单链，且水解具有特异性，只作用于粘性末端碱基数量3个以下的核酸双链。
碳纳米颗粒具有无毒、生物相容性良好等优点，目前关于大尺寸的碳纳米颗粒的报道较少。本发明制备的水溶性碳纳米颗粒(carbon nanoparticles,CNPs)同时具有碳材料性质和纳米尺寸效应，与具有平面结构的染料分子作用较强，并且可以通过电子转移或能量转移等过程引起荧光淬灭。
本发明所述的卡那霉素的检测方法主要依赖于水溶性和核酸外切酶III辅助的循环信号放大技术，原理如图1所示。
本发明设计了信号探针(FAM-DNA)、卡那霉素适配体(Apt)、DNA互补序列(cDNA)三段引物序列。
所述的信号探针(FAM-DNA)的的序列为5’-FAM-AGG CTA AGC CGT-3’。
所述卡那霉素适配体(Apt)的序列为5’-TGG GGG TTG AGG CTA AGC CGA TTTT-3’。Apt可以与KAN特异性结合。
所述DNA互补序列(cDNA)的序列为5’-ACG GCT TAG CCT CAT TTT-3’。
所述Apt与cDNA经过特殊设计，在3’-端带有四个胸腺嘧啶，可以防止被ExoⅢ水解。
当体系中没有KAN时，Apt可以与cDNA形成互补双链，此时FAM-DNA以单链形式存在，加入CNPs后，FAM-DNA被CNPs吸附后发生荧光淬灭作用。
当体系中存在KAN时，Apt与KAN特异性结合，此时cDNA与FAM-DNA互补形成双链DNA，由于CNPs对双链DNA吸附较弱，DNA探针的荧光不发生淬灭；并且同时ExoⅢ可以特异性的从3’-端对FAM-DNA进行降解，释放FAM荧光团和cDNA；释放出的cDNA将与另一条FAM-DNA杂交，开始下一个降解过程。通过不断的降解-杂交循环，最终释放出大量的FAM荧光团。
由于CNPs对FAM具有较低的亲和力，释放出的FAM不能吸附在CNPs表面，FAM荧光不会发生淬灭，致使体系实现荧光信号放大扩增作用。据此，通过监测荧光信号的变化，可以实现对KAN的检测。
DNA互补序列与信号探针的投料摩尔比为1：4～6；进一步优选为1：5。
cDNA与FAM-DNA的摩尔比为1：4～6时，F/F0达到最大值(F和F0分别为体系存在或不存在卡那霉素时的荧光强度)，进一步增大cDNA与信号探针的摩尔比，F/F0的比值减小，其原因可能是增加cDNA的用量影响了碳纳米颗粒对信号探针的吸附，使荧光的背景信号增加。
所述的DNA互补序列与卡那霉素适配体的投料摩尔比为1：1～1.2。
信号探针和水溶性碳纳米颗粒的投料比为：每1nmol的信号探针，水溶性碳纳米颗粒的投料量为80μg～120μg。
碳纳米颗粒的用量对分析性能至关重要，CNPs与FAM-DNA之间有强烈的相互作用，CNPs可以淬灭FAM的荧光。随着CNPs用量的增加，探针的荧光强度逐渐降低并达到一个平台，在含有100nM FAM-DNA的溶液中，当CNPs用量达到10μg/mL时，体系的荧光强度降低超过95％。
所述的核酸外切酶III的用量为18～30U；所述酶解反应的时间为1.8～2.2h。
当ExoIII的用量达到20U时，荧光强度达到最大且基本不再变化；另外，当循环时间达到2h，荧光强度达到最大。
本发明与现有技术相比，具有以下效果：
本发明所述的卡那霉素的检测方法具有操作简单，灵敏度高，特异性强的特点，线性范围为50～100nM，检测限为2.5nM。此外，该方法可用于实际样品牛奶中卡那霉素的检测，检出限满足牛奶中MRL的要求。
附图说明
图1为本发明所述的卡那霉素的检测方法的原理示意图。
图2为实施例1制得的水溶性碳纳米颗粒表征图，其中，A为碳纳米颗粒的TEM图，B为粒径分布图。
图3为本发明所述的卡那霉素的检测方法对不同浓度的KAN响应的荧光光谱图，KAN浓度依次为：(a)0nM，(b)50nM，(c)100nM，(d)150nM，(e)200nM，(f)250nM，(g)300nM，内插图为荧光强度与KAN浓度的线性关系图。
图4为实施例3可行性验证实验中荧光强度对比图。
图5为实施例4选择性研究结果图。
具体实施方式
下文中提供的实施例和制备例进一步阐明和举例说明本发明化合物及其制备方法。应当理解，下述实例和制备例的范围并不以任何方式限制本发明的范围。本发明的原料可以从商业途径获得或通过本领域已知的方法制备。
本发明使用的试剂如下：
蜡烛、牛奶购于学校超市。
HNO3、DMF，分析纯，阿拉丁试剂公司。
卡那霉素(KAN)、链霉素、金霉素、四环素、多西环素、环丙沙星、土霉素，分析纯，J&K Chemical。
卡那霉素适配体：5’-TGG GGG TTG AGG CTA AGC CGA TTTT-3’，上海生工生物技术有限公司合成。
信号探针：5’-FAM-AGG CTA AGC CGT-3’，上海生工生物技术有限公司合成。
DNA互补序列：5’-ACG GCT TAG CCT CAT TTT-3’，上海生工生物技术有限公司合成。
核酸外切酶Ⅲ，分析纯，Sigma-Aldrich。
实验中使用缓冲溶液为Tris-HCl缓冲液(20mM，pH 8.0，50mM NaCl，5mM KCl，5mMMgCl2)。
实验中所用的烧瓶用王水清洗干净。
实验中使用的水为Milli-Q超纯水(电导率超过18MΩ·cm)；所用的其它试剂均为分析纯。
实施例1水溶性碳纳米颗粒的制备
碳纳米颗粒(carbon nanoparticles,CNPs)通过燃烧蜡烛的方法制备。水溶性碳纳米颗粒的制备步骤为：
称取3.0mg～5.0mg干燥的蜡烛灰放10mL的圆底烧瓶中，在圆底烧瓶上接上直形冷凝管，直形冷凝管的上端接一个气球，防止反应中硝酸分解产生气体形成气压而使冷凝管与圆底烧瓶脱离或爆裂。
加入2mL的浓硝酸(HNO3)和2mL的DMF，在50～60℃油浴锅中加热回流10h～14h，得到反应液；然后把反应液倒入10mL离心管内离心，离心后分成上层黄褐色液体和下层黑色固体，去掉上层液体后再加入Milli-Q超纯水，混匀再离心去掉上层液体，如此反复多次，尽可能除去反应中残留的硝酸，以免干扰后续的应用，冷冻干燥即得氧化的水溶性碳纳米颗粒。
准确称量一定的水溶性碳纳米颗粒，加入一定量的Milli-Q超纯水于室温超声5min，配制0.3mg/mL的水溶性碳纳米颗粒的水溶液，备用。然后对得到的水溶性碳纳米颗粒进行了TEM表征，如图2所示，从图2中可以看出水溶性碳纳米颗粒的平均粒径范围在20到70nm之间，而其中大多数尺寸大小为30～40nm左右，大小分布均一。
测定水溶性碳纳米颗粒的动态光散射知其电动电势为-35.4±5.42mV，明显为负电动势，这说明水溶性碳纳米颗粒上面带负电的基团增多。这可能是通过硝酸氧化处理后的碳纳米颗粒表面产生了许多亲水性的基团(主要是羟基和羧基增多)，所以能够很容易溶于水中且分散性很好。
进一步考察水溶性碳纳米颗粒的结构和性质，通过傅里叶变换近红外光谱来确定羧基化纳米颗粒的化学基团。3423cm-1处的既强又宽的近红外峰归结于氧化碳纳米颗粒上-COOH中-OH的伸缩振动，而1630cm-1处的近红外峰归结于-COOH中C＝O的伸缩振动，说明水溶性碳纳米颗粒表面上的羧基基团增加。
实施例2卡那霉素的检测方法
KAN储备液的制备：称取0.1166g的KAN粉末于试剂瓶中，溶于200mL 20mM Tris-HCl缓冲液，超声5分钟，得到储备液浓度为1mM，将溶液保存于4～8℃。
DNA储备液的制备：分别取1OD的Apt，FAM-DNA，cDNA于10000rmp离心5分钟，分别加20mM Tris-HCl缓冲液418μL，720μL和637μL，分别得到10μM的储备液，取三种DNA储备液，于90℃加热3min，并冷却至室温备用。
核酸外切酶Ⅲ储备液的制备：取2μL ExoⅢ，用Tris-HCl稀释至2mL，得到浓度为20U/mL的储备液，把酶分装，保存于-20℃，以确保酶的活性不受影响。
首先，取2μL Apt(10μM)与不同体积的KAN储备液混合，最终体系中KAN的浓度分别为(a)0nM，(b)50nM，(c)100nM，(d)150nM，(e)200nM，(f)250nM，(g)300nM，室温反应1h。
然后，分别取2μL cDNA(10μM)和10μL FAM-DNA(10μM)加入上述混合物中，室温反应30分钟。
最后，加入ExoⅢ于上述体系中，37℃反应2h；待酶解完全后，体系加热至75℃反应5min使反应终止；随后加入CNPs，使最终体积为1mL(Apt：20nM；cDNA：20nM；FAM-DNA：100nM；CNPs：10μg/mL；ExoⅢ：20U.)。
转移至1mL比色皿中测定荧光光谱，激发波长为470nm，实验结果如图3所示。从图3中可以看出，荧光强度随着KAN浓度的增加逐渐增强。
体系荧光强度与KAN浓度在50nM～300nM之间呈线性关系。线性方程为：F＝0.58[KAN](nM)+36.18(R2＝0.9945)。检测限(3S/m，S是试剂空白的标准偏差，测量次数n＝11，m是线性方程中的斜率)为2.5nM。卡那霉素在一些食品如牛奶样品的限量标准为150μg/mL，换算约为258nM，而本方法的检出限明显小于卡那霉素限量标准，说明方法能满足限量标准的需要。
实施例3卡那霉素的检测方法的可行性验证
参照实施例2的卡那霉素的检测方法，不同之处在于，对照1中不加入Exo III和KAN；对照2中不加入Exo III，KAN浓度为300nM；背景组不加入KAN；检测组中KAN浓度为300nM。
通过测定体系中有或无Exo III存在情况下的荧光信号来验证本方法的可行性，其结果如图4所示。在不存在Exo III时，加入KAN的荧光信号(对照2)与没加KAN的荧光信号(对照1)相比只有较小程度的增加。
而当体系引入Exo III后，加入同样浓度的KAN，荧光信号显著增强(检测组)，更重要的是背景荧光(背景组)没有显著增加。此时的信号与背景的比值约为4倍。
这些结果表明，Exo III循环放大技术可以显著增强荧光信号，为高灵敏度测定KAN提供了可能性。
实施例4选择性研究
参照实施例2的卡那霉素的检测方法，不同之处在于，将KAN储备液替换为浓度均为300nM的6种抗生素金霉素、四环素、环丙沙星、多西环素、土霉素、链霉素，实验结果如图5所示。
卡那霉素的加入使荧光增加约5倍，链霉素增加约1.5倍，而其他抗生素对该传感器荧光强度的影响很小。其中，链霉素能增加荧光强度是因为链霉素与卡那霉素均为氨基糖苷类抗生素，分子结构非常接近。但与卡那霉素对传感器的增强程度相比，链霉素的荧光增强小很多。证明本发明所述的卡那霉素的检测方法具有很好的选择性。
应用例1检测牛奶中的卡那霉素含量
准确量取1mL牛奶样品，加入1M NaOH溶液调节样品pH至8，充分混匀后超声10min，滴加乙酸溶液，至白色絮状沉降不再增加。混合物转移至离心管中，以10 000r/min的速度离心5min(温度低于15℃)；过滤后再以5000r/min离心10min；收集上层清液备用。
参照实施例2卡那霉素的检测方法，不同之处在于，取30μL上述牛奶代替KAN储备液进行荧光强度测定，根据建立的工作曲线F＝0.58[KAN](nM)+36.18(R2＝0.9945)计算得到待测样品溶液中卡那霉素的浓度，牛奶中未检出卡那霉素，如表1中的A(Contro)所示。
通过标准加入法，进一步验证：
分别进行10，50，100nM浓度水平的加标，测得回收率在98％～105％，相对标准偏差不超过±10％，实验结果如表1所示。
表1
样品 KAN添加(nM) KAN检出(nM)<sup>a</sup> 回收率(％)<sup>a</sup>
A(control) 0 <1(检出限) -
B 10 10.5±3.00 105±3.0
C 50 49±2.50 98±5.0
D 100 102±7.50 102±7.5
a三次测定的平均值±标准偏差。
结果表明该方法具有良好的检测准确度和精密度，适用于牛奶中卡那霉素的检测。
序列表
<110> 桂林医学院
山西中医药大学
浙江大学
<120> 一种卡那霉素的检测方法
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tgggggttga ggctaagccg atttt 25
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
acggcttagc ctcatttt 18
<210> 4
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
aggctaagcc gt 12

Claims (10)

1.一种卡那霉素的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
取卡那霉素适配体与待测样品混合，室温反应0.8～1.2h后加入DNA互补序列和信号探针，室温反应20～40min后得到反应液；向反应液中加入核酸外切酶III进行酶解反应，酶解反应完全后加热终止酶解反应，最后加入水溶性碳纳米颗粒后得到检测液，测定检测液的荧光强度，根据测得的荧光强度和相应的标准曲线计算卡那霉素的浓度。
2.根据权利要求1所述的卡那霉素的检测方法，其特征在于，所述卡那霉素适配体的序列为5’-TGG GGG TTG AGG CTA AGC CGATTTT-3’。
3.根据权利要求1所述的卡那霉素的检测方法，其特征在于，所述的DNA互补序列的序列为5’-ACG GCT TAG CCT CAT TTT-3’。
4.根据权利要求1所述的卡那霉素的检测方法，其特征在于，所述的信号探针的序列为5’-FAM-AGG CTA AGC CGT-3’。
5.根据权利要求1、3或4任意一项所述的卡那霉素的检测方法，其特征在于，DNA互补序列与信号探针的投料摩尔比为1：4～6。
6.根据权利要求1所述的卡那霉素的检测方法，其特征在于，所述的DNA互补序列与卡那霉素适配体的投料摩尔比为1：1～1.2。
7.根据权利要求1所述的卡那霉素的检测方法，其特征在于，所述的水溶性碳纳米颗粒的制备方法包括如下步骤：在浓硝酸和DMF的溶液中加入蜡烛灰，加热回流，离心取黑色固体，多次水洗去除硝酸，加水超声复溶后冷冻干燥得到水溶性碳纳米颗粒。
8.根据权利要求1或7所述的卡那霉素的检测方法，其特征在于，信号探针和水溶性碳纳米颗粒的投料比为：每1nmol的信号探针，水溶性碳纳米颗粒的投料量为80μg～120μg。
9.根据权利要求1所述的卡那霉素的检测方法，其特征在于，所述的核酸外切酶III的用量为18～30U；所述酶解反应的时间为1.8～2.2h。
10.根据权利要求1所述的卡那霉素的检测方法，其特征在于，所述的待测样品为经过前处理的牛奶，所述的前处理的具体步骤如下：NaOH溶液将牛奶调节pH至7.5～8.5，超声后滴加乙酸溶液至白色絮状沉降不再增加，离心，收集上层清液备用。
CN202010812847.5A 2020-08-13 2020-08-13 一种卡那霉素的检测方法 Pending CN111999272A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010812847.5A CN111999272A (zh) 2020-08-13 2020-08-13 一种卡那霉素的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010812847.5A CN111999272A (zh) 2020-08-13 2020-08-13 一种卡那霉素的检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111999272A true CN111999272A (zh) 2020-11-27

Family

ID=73472208

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010812847.5A Pending CN111999272A (zh) 2020-08-13 2020-08-13 一种卡那霉素的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111999272A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112697761A (zh) * 2021-01-06 2021-04-23 江苏大学 一种基于上转换、bhq3特异性体系的牛奶中卡那霉素含量检测方法
CN113138269A (zh) * 2021-04-20 2021-07-20 江南大学 一种检测卡那霉素的适配体胶体金侧向层析试纸
CN114032289A (zh) * 2021-11-17 2022-02-11 广东省科学院生态环境与土壤研究所 一种抗生素残留检测方法及其检测试剂盒
CN114134212A (zh) * 2021-12-16 2022-03-04 青岛汉唐生物科技有限公司 用于质粒定量的引物探针组合和试剂盒
CN114487381A (zh) * 2022-02-18 2022-05-13 河南工业大学 一种基于雪花状碳氮复合材料及核酸外切酶iii的荧光适体传感器检测黄曲霉毒素b1

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003050265A2 (en) * 2001-12-10 2003-06-19 Diversa Corporation Compositions and methods for normalizing assays
CN108196044A (zh) * 2017-12-27 2018-06-22 西安交通大学 一种基于上转换荧光适配体的侧流试纸检测方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003050265A2 (en) * 2001-12-10 2003-06-19 Diversa Corporation Compositions and methods for normalizing assays
CN108196044A (zh) * 2017-12-27 2018-06-22 西安交通大学 一种基于上转换荧光适配体的侧流试纸检测方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QIE GEN LIAO ET AL.，: ""Aptamer based fluorometric determination of kanamycin using double-stranded DNA and carbon nanotubes"" *
汪石 等: ""基于核酸外切酶 III 辅助信号放大的荧光法检测四环素"" *
迟旭 等: ""基于CNPs的荧光DNA生物传感器对EV71的检测分析"" *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112697761A (zh) * 2021-01-06 2021-04-23 江苏大学 一种基于上转换、bhq3特异性体系的牛奶中卡那霉素含量检测方法
CN112697761B (zh) * 2021-01-06 2023-02-17 江苏大学 一种基于上转换、bhq3特异性体系的牛奶中卡那霉素含量检测方法
CN113138269A (zh) * 2021-04-20 2021-07-20 江南大学 一种检测卡那霉素的适配体胶体金侧向层析试纸
CN113138269B (zh) * 2021-04-20 2024-03-26 江南大学 一种检测卡那霉素的适配体胶体金侧向层析试纸
CN114032289A (zh) * 2021-11-17 2022-02-11 广东省科学院生态环境与土壤研究所 一种抗生素残留检测方法及其检测试剂盒
CN114032289B (zh) * 2021-11-17 2024-02-13 广东省科学院生态环境与土壤研究所 一种抗生素残留检测方法及其检测试剂盒
CN114134212A (zh) * 2021-12-16 2022-03-04 青岛汉唐生物科技有限公司 用于质粒定量的引物探针组合和试剂盒
CN114487381A (zh) * 2022-02-18 2022-05-13 河南工业大学 一种基于雪花状碳氮复合材料及核酸外切酶iii的荧光适体传感器检测黄曲霉毒素b1

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111999272A (zh) 一种卡那霉素的检测方法
Luo et al. A novel colorimetric aptasensor using cysteamine-stabilized gold nanoparticles as probe for rapid and specific detection of tetracycline in raw milk
CN108535236B (zh) 一种基于双重放大SERS信号系统超灵敏检测miRNA的方法
KR102203280B1 (ko) 탄소 양자점 기반 형광 나노센서 및 이를 이용한 핵산 검출 방법
CN105695473B (zh) 真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测方法及检测试剂盒
CN110672569A (zh) 一种dna或rna检测体系、检测方法和它们的应用
Wang et al. Allosteric probe-triggered isothermal amplification to activate CRISPR/Cas12a for sensitive electrochemiluminescence detection of Salmonella
Gao et al. A sensitive colorimetric aptasensor for chloramphenicol detection in fish and pork based on the amplification of a nano-peroxidase-polymer
CN107796864B (zh) 一种纳米颗粒耦合探针体系在ctDNA高灵敏检测中的应用
CN102719520B (zh) 一种核酸的检测方法和一种试剂盒及应用
Gao et al. Sensitive fluorescence detection of DNA using isothermal exponential amplification coupled quantum dots coated silica nanospheres as label
CN108760695B (zh) 一种基于pret的磷光探针定量检测凝血酶的方法
CN113667720B (zh) 一种检测miRNA-182的生物传感器及其制备方法和应用
CN107219208B (zh) 一种基于核酸适配体的双荧光探针的制备方法和应用
Hao et al. Highly sensitive and specific detection of silver ions using a dual-color fluorescence co-localization strategy
CN113607947B (zh) 基于聚集诱导发射标记的核酸适配体和叠氮官能化单壁碳纳米管对甲胎蛋白的检测方法
CN112304914B (zh) 基于荧光光谱法检测四环素类抗生素的方法
CN114317820A (zh) 基于不同散射光纳米颗粒构建的多种肝炎病毒标志物单颗粒可视化传感器
CN110320356B (zh) 一种牛奶中多重抗生素残留的比色检测方法
CN113151584A (zh) 一种SARS-CoV-2检测试剂盒及检测方法
CN111077198B (zh) 基于sda的电化学发光适配体传感器及其三价砷离子的检测方法
CN111707829A (zh) 一种基于非标记核酸适配体的可视化盐酸克伦特罗检测方法
CN117402939B (zh) 基于抗体修饰褶皱硅球联合核酸功能化量子点的同时检测多种miRNAs的方法及应用
CN114236124B (zh) 一种基于等温扩增和Cas14a双重放大的检测肌酸激酶同工酶的试剂盒
CN115029418B (zh) AuNPs-DNA水凝胶及应用与基于CRISPR-Cas12a的靶基因检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination