CN111965294B - 一种鼠料中烟酸的定量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种鼠料中烟酸的定量检测方法，包括以下步骤：(1)将定量的待测鼠料样品与定量的三氟乙酸水溶液混合后进行固液提取，提取后固液分离收集提取液，三氟乙酸水溶液的质量浓度为0.08％～0.12％；待测鼠料样品与三氟乙酸水溶液的比例为0.1～0.2g待测鼠料样品/mL三氟乙酸水溶液；(2)利用液相色谱对所述提取液的浓度进行定量，所述液相色谱的色谱柱为C8色谱柱，液相色谱的流动相为乙酸铵水溶液和甲醇体系，或者所述液相色谱的流动相为乙酸铵水溶液和乙腈体系。本发明的鼠料中烟酸的定量检测方法以三氟乙酸水溶液作为烟酸的提取剂，发明人通过研究发现三氟乙酸水溶液的烟酸提取液在检测时响应信号峰形好，定量准确，而且能够与杂质分离，灵敏度高。

Description

一种鼠料中烟酸的定量检测方法

技术领域

本发明涉及饲料化验方法领域，具体涉及一种鼠料中烟酸的定量检测方法。

背景技术

烟酸也称作维生素B3，或维生素PP，分子式：C₆H₅NO₂，耐热，能升华。烟酸又名尼克酸、抗癞皮病因子。在人体内还包括其衍生物烟酰胺或尼克酰胺。它是人体必需的13种维生素之一，是一种水溶性维生素，属于维生素B族。

GB/T 17813-2018公开了一种添加剂预混合饲料中烟酸与叶酸的测定高效液相色谱法，但是添加剂预混合饲料中的烟酸含量高，GB/T 17813-2018公开的方法应用于低烟酸含量的配合饲料中时，由于配合饲料和添加剂预混合饲料的基准不一样，GB/T 17813-2018公开的方法对烟酸的提取率很低，会导致定量的准确性下降，甚至存在无法提取配合饲料中烟酸的情形。因此，为了对配合饲料中的烟酸进行定量，需要一种快速、简洁的高效液相检测方法来定量配合饲料中烟酸的含量。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种鼠料中烟酸的定量检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种鼠料中烟酸的定量检测方法，所述方法包括以下步骤：

（1）将定量的待测鼠料样品与定量的三氟乙酸水溶液混合后进行固液提取，提取后固液分离收集提取液，所述三氟乙酸水溶液的质量浓度为0.08%~0.12%；所述待测鼠料样品与三氟乙酸水溶液的比例为0.1~0.2g待测鼠料样品/mL三氟乙酸水溶液；

（2）利用液相色谱对所述提取液的浓度进行定量，衡算得到所述待测鼠料样品中烟酸的含量，所述液相色谱的色谱柱为C8色谱柱或者C8色谱柱的相当柱，所述液相色谱的流动相为乙酸铵水溶液和甲醇体系，或者所述液相色谱的流动相为乙酸铵水溶液和乙腈体系。

上述的鼠料中烟酸的定量检测方法以三氟乙酸水溶液作为烟酸的提取剂，发明人通过研究发现三氟乙酸水溶液的烟酸提取液在检测时响应信号峰形好，定量准确，而且能够与杂质分离，而利用盐酸水溶液作为提取剂时则存在无法提取出烟酸或者目标峰和杂质峰无法分离重叠的情形，无法定量；而且发明人研究发现利用质量浓度为0.08%~0.12%的三氟乙酸水溶液进行提取，烟酸的提取率更高，定量更准确。

优选地，所述步骤（1）中，所述三氟乙酸水溶液的质量浓度为0.10%。

优选地，所述步骤（1）中，所述固液提取的方法为超声提取，所述超声提取的时间为15~25 min。

发明人通过研究三氟乙酸水溶液提取鼠料的固液提取方法，发现超声提取时，提取率高，提取时间更短。

优选地，所述步骤（2）中，利用液相色谱对所述提取液的浓度进行定量的标准品的浓度为1~20 μg/mL。

发明人通过研究发现，用于定量的标准品的浓度为1~20 μg/mL时，对待测鼠料样品中烟酸的定量准确度更高。

优选地，所述烟酸标准品的溶剂为去离子水。

发明人通过研究发现，用盐酸溶液作为配置烟酸标准品的溶剂时，标准品的液相色谱检测有两个峰，不能够进行定量，烟酸标准品的溶剂为去离子水时，标准品峰形好，定量准确。

优选地，所述步骤（1）中，所述待测鼠料样品与三氟乙酸水溶液的比例为0.12~0.18g待测鼠料样品/mL三氟乙酸水溶液。

优选地，所述步骤（2）中，将所述提取液定容后利用液相色谱对所述定容后的提取液的浓度定量；

所述液相定量的色谱条件包括：色谱柱：4.6*250 mm，5 μm的ZORBAX SB-C8；流动相为90%体积的0.025mol/L乙酸铵水溶液和10%体积的甲醇，流动相的流速为0.8~1.2 mL/min，检测波长为260 nm，柱温为28~32℃。

本发明的有益效果在于：本发明提供了一种鼠料中烟酸的定量检测方法，本发明的鼠料中烟酸的定量检测方法以三氟乙酸水溶液作为烟酸的提取剂，发明人通过研究发现三氟乙酸水溶液的烟酸提取液在检测时响应信号峰形好，定量准确，而且能够与杂质分离，而利用盐酸水溶液作为提取剂时则存在无法提取出烟酸或者目标峰和杂质峰无法分离重叠的情形，无法定量；而且发明人研究发现利用质量浓度为0.08%~0.12%的三氟乙酸水溶液进行提取，烟酸的提取率更高，定量更准确。本发明方法的定量结果准确，检出限低，灵敏度高。

附图说明

图1 为本发明实施例的鼠料中烟酸的定量检测方法中标准品的检测色谱图。

图2 为本发明实施例的鼠料中烟酸的定量检测方法中待测鼠料样品的检测色谱图。

图3 为本发明对比例的鼠料中烟酸的定量检测方法的检测色谱图。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

一种鼠料中烟酸的定量检测方法，所述方法包括以下步骤：

（1）将定量的待测鼠料样品与定量的三氟乙酸水溶液混合后进行固液提取，提取后固液分离收集提取液，所述三氟乙酸水溶液的质量浓度为0.08%~0.12%；所述待测鼠料样品与三氟乙酸水溶液的比例为0.1~0.2g待测鼠料样品/mL三氟乙酸水溶液；

（2）利用液相色谱对所述提取液的浓度进行定量，衡算得到所述待测鼠料样品中烟酸的含量，所述液相色谱的色谱柱为C8色谱柱或者C8色谱柱的相当柱，所述液相色谱的流动相为乙酸铵水溶液和甲醇体系，或者所述液相色谱的流动相为乙酸铵水溶液和乙腈体系。

实施例1

作为本发明实施例的一种鼠料中烟酸的定量检测方法，所述方法包括以下步骤：

（1）取1 g的待测鼠料样品于10 mL比色管中，加入质量浓度为0.10%的三氟乙酸水溶液6mL，超声提取20 min，冷却后用质量浓度为0.10%的三氟乙酸水溶液定容至10 mL，用0.45 μm滤膜过滤收集提取液；

（2）利用液相色谱对所述提取液的浓度进行定量，衡算得到所述待测鼠料样品中烟酸的含量；

所述液相定量的色谱条件包括：色谱柱：4.6*250 mm，5 μm的ZORBAX SB-C8；流动相为90%体积的0.025mol/L乙酸铵水溶液和10%体积的甲醇，流动相的流速为1 mL/min，检测波长为260 nm，柱温为30℃，进样量20 μL；

（3）用与步骤（2）相同的色谱方法检测烟酸标准品溶液，烟酸标准品溶液的浓度分别为1 μg/mL、2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL；烟酸标准品溶液的溶剂为去离子水。

如图1所示为1 μg/mL烟酸标准品溶液的色谱图，如图2（a）、2（b）所示为按照本实施例的方法检测获得的待测鼠料样品的色谱图，由图2（a）、2（b）可知鼠料中烟酸的定量检测方法的待测样品的峰形好，不存在分峰现象，也不存在与杂质峰的交叠现象，有利于准确定量。烟酸含量=(试样上机浓度×定容体积)/试样质量，定量计算后待测鼠料样品中烟酸的含量为52.9 mg/kg。

本实施例方法的定量结果准确，检出限低，灵敏度高。

对比例1

作为本发明对比例的一种鼠料中烟酸的定量检测方法，本对比例与实施例1的唯一区别为：步骤（1）中，加入质量浓度为0.10%的盐酸，超声提取20 min，冷却后用质量浓度为0.10%的盐酸定容至10 mL。

本对比例的检测样品色谱图如图3所示，目标峰的色谱存在交叠和分峰，无法定量。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (4)

1.一种鼠料中烟酸的定量检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）将定量的待测鼠料样品与定量的三氟乙酸水溶液混合后进行固液超声提取15~25min，提取后固液分离收集提取液，所述三氟乙酸水溶液的质量浓度为0.08%~0.12%；所述待测鼠料样品与三氟乙酸水溶液的比例为0.12~0.18g待测鼠料样品/mL三氟乙酸水溶液；

（2）利用液相色谱对所述提取液的浓度进行定量，衡算得到所述待测鼠料样品中烟酸的含量；

所述液相色谱的色谱条件包括：色谱柱：4.6*250 mm，5 μm的ZORBAX SB-C8；流动相为90%体积的0.025mol/L乙酸铵水溶液和10%体积的甲醇，流动相的流速为0.8~1.2 mL/min，检测波长为260 nm，柱温为28~32℃。

2.根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述三氟乙酸水溶液的质量浓度为0.10%。

3.根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，所述步骤（2）中，利用液相色谱对所述提取液的浓度进行定量的烟酸标准品的浓度为1~20 μg/mL。

4.根据权利要求3所述的定量检测方法，其特征在于，所述烟酸标准品的溶剂为去离子水。

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