CN111937680A - 一种卵孢小奥德蘑新菌种及其人工栽培方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种新菌种及其人工栽培方法和用途，尤其涉及一种生长周期短的卵孢小奥德蘑新菌种及其人工栽培方法和用途。本发明的卵孢小奥德蘑新菌种采自福建梅花山，经鉴定为卵孢小奥德蘑，并且组织分离获得原始菌株，命名为卵孢小奥德蘑(Oudemansiella raphanipes)HMGIM—W160136，保藏编号为GDMCC NO：61004。综上所述，本发明提供一种新的卵孢小奥德蘑新菌种及其人工栽培方法，具有很高的蛋白质含量、粗多糖含量、钾含量和钙含量，是一种生长周期短、栽培产量高和营养成分丰富的具有开发前景的新菌种。

Description

一种卵孢小奥德蘑新菌种及其人工栽培方法和用途
技术领域
本发明涉及一种新菌种及其人工栽培方法和用途，尤其涉及一种卵孢小奥德蘑新菌种及其人工栽培方法和用途。
背景技术
食用菌是一类高蛋白、低脂肪的大型真菌的统称，因营养价值高、味道鲜美而深受消费者喜爱。目前，食用菌产业发展迅猛，据中国食用菌协会统计，2017年我国食用菌产量达到 3712万吨，比2016年增长了3.21％，产值为2721.92亿元，我国占全球产量的75％以上，从业人员超过2000万人。食用菌在种植业中排在粮、菜、果、油之后的第五位，超过了茶叶和蚕桑，具有重要地位。
目前世界上约有300多万种真菌物种，仅仅有1％的物种被认识，其中已知的大型真菌约16万种以上，国内已确认的食用菌有1789种，药用菌798种，当中只有不到100种的野生食用菌被人类驯化，规模化栽培的品种只有30多种，还有大量珍惜品种亟待开发与利用。
卵孢小奥德蘑(Oudemansiella raphanipes(Berk.)Pegler&T.W.K.Young,Trans.Br.mycol. Soc.879(4):596 1987(1986))，商品名为“黑皮鸡枞菌”，隶属于担子菌门(Basidiomycota)，伞菌纲(Agaricomycetes)，伞菌目(Agaricales)，膨瑚菌科(Physalacriceae)，小奥德蘑属 (Oudemansiella)。
分类如下
Oudemansiella raphanipes(Berk.)Pegler&T.W.K.Young,Trans.Br.mycol.Soc.879(4): 596 1987(1986)
同物异名：Agaricus raphanipes Berk.,Hooker’s J.Bot.Kew Gard.Misc.2:48,1850；
＝Xerula raphanipes(Berk.)
Figure BDA0002543615170000011
Feddes Repert.Spec.Nov.Regni Veg.94(7–8):557,1983；
＝Xerula chiangmaiae R.H. Petersen & Nagas., Rep. Tottori Mycol.Inst. 43: 17 2006 (2005)；
＝Xerula chiangmaiae var.raphanipes(Berk.)R.H.Petersen&Nagas.,Rep.Tottori Mycol.Inst. 43:20,2006(2005)；
＝Oudemansiella chiangmaiae Zhu L.Yang,G.M.Muell.,G.Kost&Rexer,Mycosystema 28(1): 7,2009；
＝Hymenopellis raphanipes(Berk.)R.H.Petersen&Hughes,Nova Hedwigia,Beih.137:213, 2010.
卵孢小奥德蘑具有很高的食用和药用价值，富含较高的鲜味氨基酸，味道鲜美、香味馥郁；还含有人体必需的主要矿物质，其中钾元素含量较高，是典型的高钾低钠食品；蛋白质含量在30％以上，比香菇、平菇和金针菇的含量更高，已经逐渐得到消费者的认同和喜爱。卵孢小奥德蘑的多糖具有抗氧化能力，还能预防肠道菌群失调导致的相关疾病；另外，卵孢小奥德蘑的石油醚萃取物对人参立枯病菌有较高的抑制活性能力。因此，对于，卵孢小奥德蘑的探索具有积极意义。
卵孢小奥德蘑为腐生菌或者土生菌，适宜微酸性或中性环境中生长；菌丝最佳温度20℃～ 25℃，生长周期长，菌丝发满袋一般需45天左右，再经45天培养，可达到生理成熟；属于较典型的中高温型食用菌品种，一般可安排冬春季节两次制作菌棒，春夏秋三季栽培出菇。自然界中野生分布在我国大部分地区及澳大利亚、印度、日本、泰国和韩国等地，人工栽培历史较短。目前，卵孢小奥德蘑在我国山东、四川、广东、湖南、江苏和山西等有少量栽培，但生长周期长、产量不高且质量不稳定。
发明内容
针对以上不足，本发明提供一种生长周期短的卵孢小奥德蘑新菌种及其人工驯化栽培方法和用途。
本发明通过以下方案达到上述目的：
第一方面，本发明的卵孢小奥德蘑新菌种采自福建梅花山，经鉴定为卵孢小奥德蘑，并且组织分离获得原始菌株，命名为卵孢小奥德蘑(Oudemansiella raphanipes)HMGIM-W160136，于2020年4月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC NO：61004。
第二方面，本发明提供一种上述卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004的人工栽培方法，包括制作母种，制作生产母种，制作生产种，栽培培养及栽培管理，以重量百分比计，所述栽培料包括43-46％棉籽壳、28-30％木屑、18-20％麸皮、1-3％玉米粉、1-2％过磷酸钙、 1-2％石膏。
在第三方面，本发明提供一种卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004或其提取物在提高免疫力方面的应用。
在第四方面，本发明提供一种卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004或其提取物在保健品方面的应用。
在第五方面，本发明提供一种保健品，包括卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004或其提取物。
本发明的新菌种，实现人工驯化栽培，具有很高的蛋白质含量、粗多糖含量、钾含量和钙含量，是一种生长周期短、栽培产量高和营养成分丰富的具有开发前景的新种。
附图说明
图1为实施例1的卵孢小奥德蘑Oudemansiella raphanipes HMGIM-W160136的野生子实体图。
图2为实施例1的卵孢小奥德蘑Oudemansiella raphanipes HMGIM-W160136的野生子实体另一图。
图3为实施例2卵孢小奥德蘑Oudemansiella raphanipes HMGIM-W160136的ITS序列。
图4为实施例3的人工驯化的所有卵孢小奥德蘑子实体图。
图5为实施例2卵孢小奥德蘑HMGIM-W160136与野生菌株HMGIM-W150719和市场流通的菌株HMGIM-MC-OR-0002、菌株HMGIM-MC-OR-0001、菌株HMGIM-I170004之间的拮抗试验结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
第一方面，本发明的卵孢小奥德蘑新菌种采自福建梅花山，经鉴定为卵孢小奥德蘑新菌种，并且组织分离获得原始菌株，命名为卵孢小奥德蘑(Oudemansiellaraphanipes) HMGIM-W160136，于2020年4月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC NO：61004。
对采集的原始菌株进行基因组DNA提取并且进行ITS测序，将测序结果在GenBank进行序列Blast，发现与卵孢小奥德蘑Oudemansiella raphanipes相似性高达近98.83％，结合形态学鉴定，该真菌标本宏观特征和显微特征与Oudemansiella raphanipes描述一致，鉴定结果为新菌种Oudemansiella raphanipes。
卵孢小奥德蘑Oudemansiella raphanipes属于担子菌门，伞菌纲，伞菌目，珊瑚菌科，小奥德蘑属，子实体中等至稍大。菌盖直径2.5～11.5cm，幼时半球状，成熟后菌盖逐渐平展，中部突起或似脐状并有深色辐射状条纹，光滑，湿润时胶黏，菌盖为浅褐色或深褐色至暗褐色。菌肉薄，白色。菌褶白色，直生至弯生，稍密，较宽，不等长。菌柄长5～18cm，直径0.3～1cm，浅褐色，近圆柱形，有纵条纹，表皮脆骨质，肉部纤维质且松软，基部稍膨大且向下延伸成假根。孢子印白色。孢子无色，光滑，卵圆形至宽圆形，13～18μm×10～15μm。囊体近梭形，75～175μm×10～29μm。褶缘囊体无色，近梭形，顶端稍钝，87～100μm×10～25μm。春夏秋季在阔叶林中地上单生或群生，其假根着生在地下腐木上。食用。全国大部分地区均有分布。
第二方面，本发明提供一种卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004的人工栽培方法，包括制作母种，制作生产母种，制作生产种，栽培培养及栽培管理，以重量百分比计，所述栽培料包括43-46％棉籽壳、28-30％木屑、18-20％麸皮、1-3％玉米粉、1-2％过磷酸钙、1-2％石膏。
优选的，上述栽培料的水分含量为60％-65％。
优选的，以重量百分比计，所述栽培料包括45％棉籽壳、30％木屑、20％麸皮、3％玉米粉、1％过磷酸钙、1％石膏，所述栽培料的水分含量为60％-65％。
优选的，所述栽培培养包括：将生产种转接至栽培料中，25-26℃恒温、遮光培养，湿度 60％-70％，菌丝长满菌袋进入栽培管理。
优选的，所述栽培管理包括：
待栽培袋中的菌丝长满袋中栽培料后，继续遮光后熟培养30天，进入出菇阶段，控制温度在24-26℃，并加大通风量，保持空间二氧化碳含量在1％以下，空气相对湿度调整至85％-90％之间，去除菌盖，经12天后，菌丝开始扭结并形成黑褐色米柆状原基；原基生长至0.5cm后，继续控制温度在26-28℃，空气相对湿度90％-95％之间，每天光照10-12小时，光照强度300-500lx，并保持空气中二氧化碳浓度350～1500ppm，保持空气湿润，经7天左右，在此期间，每天向幼菇喷施水雾1-2次，直至子实体菌柄长到6-8cm时采收。
优选的，所述制作母种包括：将分离的菌种转接至母种培养基，置于25℃恒温暗培养，待菌丝生长而细菌尚未生长时进行尖端菌丝的挑取，得到母种。
优选的，所述母种培养基为孟加拉红培养基
进一步优选的，以重量百分比计，所述孟加拉红培养基包括：蛋白胨5g/L、葡萄糖10g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁(MgSO4 .7H2O)0.5g/L、琼脂20g/L、1/3000孟加拉红溶液100mL、氯霉素0.1g/L。
优选的，所述制作生产母种包括：将母种转接至生产母种培养基，置于25℃恒温暗培养，待菌丝长满斜面得到生产母种。
优选的，所述生产母种培养基为加富综合PDA。
进一步优选的，以重量百分比计，所述加富综合PDA包括：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂20g/L、蛋白胨10g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1.5g/L、VB10.01g/L。
优选的，所述制作生产种包括：向生产种培养基中无菌接入生产母种，接种时确保生产母种料块埋入原种料中，置于25℃恒温暗培养，待菌丝吃满料后得到生产种。
优选的，以重量百分比计，所述生产种培养基包括：98-99％高粱和1-2％碳酸钙。
进一步优选的，以重量百分比计，所述生产种培养基包括：98％高粱和2％碳酸钙。
优选的，所述人工栽培方法的制作母种前还包括组织分离菌种。
一种卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004的人工栽培方法，包括组织分离菌种后制作母种，制作生产母种，制作生产种，栽培培养及栽培管理，以重量百分比计，所述栽培料包括43-46％棉籽壳、28-30％木屑、18-20％麸皮、1-3％玉米粉、1-2％过磷酸钙、1-2％石膏。
优选的，所述组织分离菌种包括：采集回来的卵孢小奥德蘑子实体在无菌条件下酒精擦拭表面后，撕开，以无菌操作方式接入0.2-0.5mm×0.2-0.5mm的内部菌肉组织，置于25℃中恒温暗培养，待菌丝长满斜面后得到分离的菌种。
优选的，所述组织分离培养基为综合PDA培养基。
进一步优选的，以重量百分比计，所述综合PDA培养基包括：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂20g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1.5g/L、VB10.01g/L。
本发明的栽培方法采用袋栽出菇，更加适用于工厂化生产，并且，与现有的卵孢小奥德蘑菌种相比，该菌种的栽培周期是更短，缩短了6-20天。
在第三方面，本发明提供一种卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004或其提取物在提高免疫力方面的应用。
例如，在提高免疫力的保健品方面的应用。
在第四方面，本发明提供一种卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004或其提取物在制备保健品方面的应用。
在第五方面，本发明提供一种保健品，包括卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004或其提取物。
上述保健品为富含蛋白质、和/或粗多糖、和/或钾含量、和/或钙含量的保健品。
所述卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004提取物包括卵孢小奥德蘑新菌种GDMCCNO：61004子实体的水提取物、或醇(如乙醇)提取物、或醚(如乙醚)提取物、或酯提取物等。
实施例1
2016年5月15日胡惠萍、苏观龙等在福建梅花山进行大型真菌资源采集和调查，在腐殖土上采集到一份奥德蘑属品种标本，如图1和图2所示，并且组织分离获得原始菌株，命名为卵孢小奥德蘑(Oudemansiella raphanipes)HMGIM-W160136，于2020年4月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC NO：61004。
实施例2
对野生采集的子实体取样，得到其PDA纯培养物，对纯培养物用塞珞酚膜-PDA培养基培养，得到新鲜菌丝体，低温(40℃)烘干，使用液氮研磨，利用Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒(生工生物工程(上海)股份有限公司)进行DNA基因组的提取，得到的DNA溶液(DNA模板)-20℃冷藏备用。
通过真菌核糖体基因间隔区通用引物ITS1/ITS4(ITS1:TCCGTAGGTGAACCTGCGG，ITS4:TCCTCCGCTTATTGATATGC，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成)进行ITS-PCR 实验，扩增在Biometra PCR仪上进行，PCR反应液组成(共50μl)如下：
Figure BDA0002543615170000061
ITS-PCR反应条件为：94℃反应5min；94℃反应1min，55℃反应1min，72℃反应1min， 30个循环；72℃反应10min。PCR产物直接送检进行双向测序，由华大基因完成。
测序得到的ITS序列如图3所示。
将测序结果在GenBank进行序列Blast，ITS-DNA片段与卵孢小奥德蘑Oudemansiella raphanipes相似性高达近98.83％，结合形态学鉴定，该真菌标本宏观特征和显微特征与 Oudemansiella raphanipes描述一致，鉴定结果为新菌种Oudemansiellaraphanipes。该菌种 HMGIM-W160136于2020年4月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC NO：61004。
实施例3人工栽培
对野外采集的卵孢小奥德蘑(Oudemansiella raphanipes)HMGIM-W160136进行了人工驯化栽培。
以卵孢小奥德蘑HMGIM-W150719、HMGIM-MC-OR-0001、HMGIM-MC-OR-0002和HMGIM-I170004作为对照，不同菌株的生育期调查结果表1所示，不同菌株的产量结果表2所示。
一、培养基(以重量百分比计)
1、组织分离培养基(综合PDA)：
马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂20g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1.5g/L、VB10.01g/L。
2、母种培养基(孟加拉红培养基)：
蛋白胨5g/L、葡萄糖10g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁(MgSO4 .7H2O)0.5g/L、琼脂20g/L、1/3000孟加拉红溶液100mL、氯霉素0.1g/L。
3、生产母种培养基(加富综合PDA)：
马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂20g/L、蛋白胨10g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1.5g/L、 VB10.01g/L。
4、生产种培养基：
98-99％高粱、1-2％碳酸钙。
5、栽培料：
45％棉籽壳、30％木屑、20％麸皮、3％玉米粉、1％过磷酸钙、1％石膏；栽培料的水分含量为60％-65％、pH自然。
二、方法：
1、组织分离菌种：制作组织分离培养基，分装试管，在0.11MPa大气压、121℃高温高压湿热灭菌30min，取出冷却摆成斜面。采集回来的野生卵孢小奥德蘑子实体在无菌条件下用75％酒精擦拭表面后，撕开，以无菌操作方式接入0.2-0.5mm×0.2-0.5mm的内部菌肉组织。置于25℃培养箱中恒温暗培养，待菌丝长满斜面后后则可进行转接，其长满的时间大概在10 天-15天之间。
2、制作母种：
按配方制作母钟培养基，分装试管，在0.11MPa大气压、121℃高温高压湿热灭菌30min，对于分离的菌种进行转接。置于25℃恒温暗培养，待菌丝生长而细菌尚未生长时进行尖端菌丝的挑取，得到母种。
3、制作生产母种：
制作生产母种培养基，分装试管，在0.11MPa大气压、121℃高温高压湿热灭菌
30min，取出冷却无菌操作接入分离成功的纯化母种。置于25℃培养箱中恒温暗培养，待菌丝长满斜面后后得到生产母种则可进行转接。生产母种长满的时间大概在15天-20天之间。
4、制作生产种
称取所需比例的高粱，经水泡湿过夜，按比例混入碳酸钙，装入17cm×35cm耐高温的透明聚丙烯菌种袋中，折合每瓶装干料80-100g，得到生产种培养基，在0.147MPa大气压、126℃高温高压湿热灭菌90min，取出冷却后将培养基抖散后无菌操作接入生产母种。接种时确保生产母种料块埋入生产种料中。置于25℃培养箱中恒温暗培养，待菌丝吃满料后(20天左右) 则可作为生产种使用接入栽培袋中。
5、栽培培养
称人工驯化栽培料所需比例的培养料，备料当天将不同碳源原料如木屑，棉籽壳混合，以及石膏，过磷酸钙，加入4成水进行预湿搅拌10分钟；第二天加入氮源原料如麸皮和玉米粉，加入搅拌10分钟，用仪器测试培养基的含水量(含水量为60％-65％)，继续搅拌20分钟；装入17cm×35cm耐高温的透明聚丙烯菌种袋，折合每袋装干料400g-420g。装好料后用小木棒在袋料中打洞，洞深至袋底，然后在袋口套上塑料环，扣上配套的盖子，既得一个制好的栽培料袋。在0.147MPa大气压，126℃高温高压湿热灭菌90min，取出冷却后无菌操作接入生产种。接种时确保种料块埋入栽培料中。接种后在25℃±1℃、空气相对湿度65-75％，二氧化碳浓度2500-3000ppm的培养室中避光培养。待菌丝吃满料后(28天左右)则可进入栽培管理。
6、栽培管理(包括后熟管理、原基形成、子实体生长)
(1)后熟管理
待栽培袋中的菌丝长满袋中栽培料后，继续遮光后熟培养30天，进入出菇阶段。
(2)原基形成
每天光照10-12小时，光照强度300-500lx，控制温度在24-26℃，并加大通风量，保持空间二氧化碳含量在1％以下，空气相对湿度调整至85％-90％以上，去除菌盖，把栽培袋竖排放置(袋与袋之间应留有空隙)，约经过12天，菌丝开始扭结并形成黑褐色米柆状原基。
(3)子实体生长期
原基生长至0.5cm后，继续控制温度在26-28℃，空气相对湿度90-95％之间，每天光照10-12 小时，光照强度300-500lx，并保持空气中二氧化碳浓度350～1500ppm，保持空气湿润。经8 天左右，在此期间，每天向幼菇喷施水雾1-2次，直至子实体菌柄长到6-8cm时采收。从出菇管理到出原基约经过12天，再到子实体采摘约经过7天。
三、出菇情况
1、出菇期：头潮菇出菇周期为79天，头潮菇出菇期72天。
2、产量：平均袋产量为99.58克。
3、子实体性状：菌盖直径2.5～11.5cm，幼时半球状，成熟后菌盖逐渐平展，中部突起或似脐状并有深色辐射状条纹，光滑，湿润时胶黏，菌盖为浅褐色或深褐色至暗褐色。菌肉薄，白色。菌褶直生至弯生，稍密，较宽，不等长。菌柄长5～18cm，直径0.3～1cm，浅褐色，近圆柱形，有纵条纹或无条纹，肉部纤维质且松软，基部稍膨大且向下延伸成假根。
子实体形态如图4所示，(a)HMGIM-W150719，(b)HMGIM-W160136，(c) HMGIM-MC-OR-0002，(d)HMGIM-I170004和(e)HMGIM-MC-OR-0001菌株的人工栽培子实体外观。
表1不同菌株的生育期调查
Figure BDA0002543615170000091
注：HMGIM-MC-OR-0002、HMGIM-MC-OR-0001、HMGIM-I170004这三个菌种是现有的市场菌种。
本发明的菌种HMGIM-W160136比现有的菌种缩短了6-20天。
表2不同菌株子实体的产量
Figure BDA0002543615170000092
从表1的现原基时间来看，HMGIM-W160136显示的原基时间最短为12天，与 HMGIM-W150719、HMGIM-MC-OR-0002、HMGIM-MC-OR-0001和HMGIM-I170004相比缩短了9-27天，整个生长周期时间HMGIM-W160136比其他菌株缩短了6-31天。
从表2子实体的产量可以看出，HMGIM-W160136第一、二潮菇总产量最高，达到99.58±15.60g/袋。另外，其生物学效率高达23.71±3.72％，这在本发明对比的栽培菌株中是最高的。
实施例4营养成分测定
对实施例3栽培的卵孢小奥德蘑新菌株GDMCC NO：61004子实体进行了营养成分的测定，包括水解氨基酸、多糖、蛋白质及重要的微量元素等。以卵孢小奥德蘑HMGIM-W150719和HMGIM-MC-OR-0002作为对照，测定结果表4所示。
表4：营养成分测定表
Figure BDA0002543615170000101
Figure BDA0002543615170000111
Figure BDA0002543615170000121
注：“—”表示未测定。
注2：带*为必需氨基酸
注3：碳水化合物(g/1OOg)＝100-(蛋白质+脂肪+水分+灰分+膳食纤维)
从表4的卵孢小奥德蘑新菌株GDMCC NO：61004的营养成分来看，其具有全部的必需氨基酸，谷氨酸含量较高。医学上谷氨酸主要用于治疗肝性昏迷，还用于改善儿童智力发育。食品工业上，味精是常用的食品增鲜剂，其主要成分是谷氨酸钠盐。所以组氨酸也是重要的一类氨基酸。经过与《中国食药用菌学》中的食药用的营养成分比较，其谷胺氨酸的含量高于99％以上的食药用菌，含量很高。
另外，从表4还可以看出，本发明新菌种GDMCC NO：61004粗多糖含量也比 HMGIM-W150719和HMGIM-MC-OR-0002高出许多。
与HMGIM-W150719和HMGIM-MC-OR-0002菌株相比，本发明的新菌种GDMCC NO：61004含有丰富的钾，钾含量高出HMGIM-W150719 2倍以上。
综上所述，本发明所述生长周期短的卵孢小奥德蘑是一个尚未报道，还没有人研究的的新品种，是一种高蛋白、低脂肪、高多糖且含有丰富的钾钙元素的食药用菌，其人工驯化栽培与研究对于食用菌的发展与利用具有积极的意义。
试验例1
用普通PDA培养基制作平板培养基(直径9cm)，所述的普通PDA培养基配方：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂20g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1.5g/L、VB10.01g/L。按两两接种法分别接入本发明的卵孢小奥德蘑菌株HMGIM-W160136，以及3个收集自全国各地的卵孢小奥德蘑野生菌株HMGIM--W150719和市场现有菌株HMGIM-MC-OR-0002、菌株HMGIM-MC-OR-0001、菌株HMGIM-I170004，菌株编号及来源见表5，将本发明的卵孢小奥德蘑菌株HMGIM-W160136与任意野生菌株或市场流通菌株接种至平板，待菌丝长满后，观察是否存在拮抗线，结果见图5。
表5菌株编号及来源
Figure BDA0002543615170000131
在图5中，a为菌株HMGIM-W160136和菌株HMGIM-W150719两者之间的拮抗结果；b为菌株HMGIM-W160136和菌株HMGIM-MC-OR-0002两者之间的拮抗结果；c为菌株 HMGIM-W160136和菌株HMGIM-MC-OR-0001两者之间的拮抗结果；d为菌株 HMGIM-W160136和菌株HMGIM-I170004两者之间的拮抗结果。
由图5可知，卵孢小奥德蘑菌株HMGIM-W160136与野生的菌株HMGIM-W150719和市场上现有的菌株HMGIM-MC-OR-0002、菌株HMGIM-MC-OR-0001、菌株HMGIM-I1700004 两两之间均存在明显的拮抗线，由于遗传特性不同使得菌丝体具有不相融性，菌丝体这种不相容状态肉眼可见的指标之一。
结果表明，卵孢小奥德蘑菌株HMGIM-W160136和市场上现有的菌株 HMGIM-MC-OR-0002、菌株HMGIM-MC-OR-0001、菌株HMGIM-I1700004之间均存在明显的遗传差异，可判断卵孢小奥德蘑菌株HMGIM-W160136与所有野生和市场流通种均不同，为新菌株。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
<110> 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）；广东粤微生物科技有限公司
<120>一种卵孢小奥德蘑新菌种及其人工栽培方法和用途
<160> 1
<210> 1
<211> 788
<212> DNA
<213>人工序列（Artificial sequence）
<220>
<223> ITS
<400>
ggaaggatcattattgaaaacactgaacgcttgcggcttcactgctgttgctgactttccttaggggaagtatgtgcacgtttgaactcgttcgcctcttctttgtccacctgtgcaccttttgtagatctggttgggaagctcactttgaacacttcgttcaagtggattttgaagggtttgcttgcgctccctttgttcagccaggtctatgcttcacatcatctctttgtatgtttagaatgtcttgtttattggacttgatcgtcctttaaaaaacttaatacaactttcaacaacggatctcttggctctcgcatcgatgaagaacgcagcgaaatgcgataactaatgtgaattgcagaattcagtgaatcatcgagtctttgaacgcaccttgcgccctttggtattccgaagggcatgcctgtttgagtgtcagtaaattctcaacccttcttactttgttgttaaggatgggattggatagtggaggcttgccggatgttcaacgttcggctcctctgaaatgcattagcggtacaaccatttacttgggctacgctaagctgtgataatatctaagctagctggttcagagtgttggcagagttcgggcttttgaagggttttgcctcgcggctccctttgtgttctctcttcggagggatacctatgcgactctgtaaaaaagtgttgttgcggcttccaaccgtctcttgaaactgggacaaaccttttaaactgattatttgacctcaaatcaggtaggactacccgctgaactt

Claims (10)

1.一种卵孢小奥德蘑新菌种，其特征在于，所述卵孢小奥德蘑新菌种为卵孢小奥德蘑(Oudemansiella raphanipes)HMGIM-W160136，保藏编号为GDMCC NO：61004。
2.一种卵孢小奥德蘑新菌种卵孢GDMCC NO：61004的人工栽培方法，其特征在于，包括制作母种，制作生产母种，制作生产种，栽培培养及栽培管理，以重量百分比计，所述栽培料包括43-46％棉籽壳、28-30％木屑、18-20％麸皮、1-3％玉米粉、1-2％过磷酸钙、1-2％石膏。
3.根据权利要求2所述的人工栽培方法，其特征在于，以重量百分比计，所述栽培料包括45％棉籽壳、30％木屑、20％麸皮、3％玉米粉、1％过磷酸钙、1％石膏，水分含量为60％-65％。
4.根据权利要求3所述的人工栽培方法，其特征在于，所述栽培培养包括：将生产种转接至栽培料中，25-26℃恒温、遮光培养，湿度60％-70％，菌丝长满菌袋进入栽培管理。
5.根据权利要求3所述的人工栽培方法，其特征在于，所述栽培管理包括：待栽培袋中的菌丝长满袋中栽培料后，继续遮光后熟培养30天，进入出菇阶段，控制温度在24-26℃，并加大通风量，保持空间二氧化碳含量在1％以下，空气相对湿度调整至85％-90％之间，去除菌盖，经12天后，菌丝开始扭结并形成黑褐色米柆状原基；原基生长至0.5cm后，继续控制温度在26-28℃，空气相对湿度90％-95％之间，每天光照10-12小时，光照强度300-500lx，并保持空气中二氧化碳浓度350～1500ppm，保持空气湿润，经7天左右，在此期间，每天向幼菇喷施水雾1-2次，直至子实体菌柄长到6-8cm时采收。
6.根据权利要求2至5中任一所述的人工栽培方法，其特征在于，所述制作母种包括：将分离的菌种转接至母种培养基，置于25℃恒温暗培养，待菌丝生长而细菌尚未生长时进行尖端菌丝的挑取，得到母种；和/或，
所述制作生产母种包括：将母种转接至生产母种培养基，置于25℃恒温暗培养，待菌丝长满斜面得到生产母种；和/或，
所述制作生产种包括：向生产种培养基中无菌接入生产母种，接种时确保生产母种料块埋入原种料中，置于25℃恒温暗培养，待菌丝吃满料后得到生产种。
7.根据权利要求6所述的人工栽培方法，其特征在于，
所述母种培养基为孟加拉红培养基，以重量百分比计，所述孟加拉红培养基包括：蛋白胨5g/L、葡萄糖10g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁(MgSO4 .7H2O)0.5g/L、琼脂20g/L、1/3000孟加拉红溶液100mL、氯霉素0.1g/L；
所述生产母种培养基为加富综合PDA，以重量百分比计，所述加富综合PDA包括：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂20g/L、蛋白胨10g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸镁1.5g/L、VB10.01g/L；
以重量百分比计，所述生产种培养基包括：98-99％高粱和1-2％碳酸钙。
8.一种卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004或其提取物在制备提高免疫力的保健品方面的应用。
9.一种保健品，其特征在于，包括卵孢小奥德蘑新菌种GDMCC NO：61004或其提取物。
10.根据权利要求9所述的保健品，其特征在于，所述保健品为富含蛋白质、和/或粗多糖、和/或钙、和/或钾含量的保健品。
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