CN111920770A - 一种紫杉醇脂质体及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种紫杉醇脂质体及其制备方法。本发明具体公开了一种负载活性物质的脂质体，其包括以人参皂苷为膜材的空白脂质体和活性物质；所述的空白脂质体具有膜，所述的膜包含脂类物质和如式I所示的人参皂苷，其中，所述的活性物质为紫杉醇；所述的如式I所示的人参皂苷为人参皂苷Rg5和/或人参皂苷Rk1。本发明的紫杉醇脂质体具有对肿瘤细胞的靶向作用、抗多药耐药作用、增效减毒和药物协同作用。

Description

一种紫杉醇脂质体及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种紫杉醇脂质体及其制备方法。
背景技术
脂质体是一种具有脂质双分子层的囊泡，其已经用于定向药物载体，属于靶向给药系统的一种新剂型。它可以将药物粉末或溶液包埋在直径为微米或纳米级的微粒中，这种微粒类似于生物膜结构的双分子层微小囊泡，具有良好的生物相容性。之所以称其为靶向给药系统，一方面，表面未经修饰的脂质体进入人体后，通常易被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾等组织器官中积蓄，粒径在纳米范围的脂质体由于肿瘤存在的高通透性和滞留效应(即EPR效应)能够有效蓄积于肿瘤部位，上述性质可称为脂质体的被动靶向；另一方面，脂质体表面可经过专门的共价或非共价修饰特殊配体，配体包括抗体、多肽、核酸适配体、糖基及小分子等，通过配体-受体相互作用介导脂质体被特定靶细胞高效摄取，这被称为主动靶向，常被比喻为“生物导弹”。脂质体的靶向递药能力能够提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。
脂质体的结构与由表面活性剂构成的胶束不同，后者是由单分子层组成，而脂质体由双分子层组成，可以包裹脂溶性药物或水溶性药物。脂质体的主要成分是磷脂和胆固醇。磷脂为两性物质，其结构中含有磷酸基团和含氨的碱基(均亲水)，及两个较长的疏水烃链链。胆固醇亦属于两亲物质，其结构中亦有疏水与亲水两种基团，但疏水性较亲水性强。其中，磷脂是脂质体的主要成分，磷脂形成脂质体时，有两条疏水链指向内部，亲水基在膜的内外两个表面上，磷脂双层构成一个封闭小室，内部包含水溶液，小室中水溶液被磷脂双层包围而独立，磷脂双层形成囊泡又被水相介质分开。胆固醇增加脂质体膜的稳定性，其它辅料起特殊功能性作用。
脂质体主要材料是磷脂和胆固醇，例如南京思科生产的紫杉醇脂质体(商品名为“力扑素”)的主要成份为(除紫杉醇药物以外)：卵磷脂(主成份一)、胆固醇(主成份二)、苏氨酸(氨基酸一般作为抗氧化剂或缓冲剂)和葡萄糖(糖类一般作为冻干赋形剂或冻干保护剂)。脂质体中也可以添加其他辅料，例如添加热敏性辅料制成热敏性脂质体、添加pH敏感物质制成pH敏感脂质体、添加阳离子或阴离子制成阳离子脂质体或阴离子脂质体或添加表面活性剂等，用途不同，添加的辅料也不同。一般情况，脂质体冻干之前主要成份是磷脂(比例一般在50％-95％)和胆固醇(5％-50％左右)；但在进行冻干的操作时，会根据具体情况加入一定量的辅料，不同用途的脂质体，所添加的辅料比例差别比较大，有些在冻干时无需加入辅料，有些在冻干时，辅料加入的量甚至达到50％。另外，目前市场上还有许多改性的磷脂，例如PEG化或氨基酸化的磷脂，该类磷脂中辅料的含量很少。因此，不同用途、不同类型的脂质体，具体组分和含量差别较大，相互之间的借鉴意义不大(注：以上出现的百分比均是指各组分占脂质体原料总质量的百分比)。
由于不同类型药物的理化性质差异，如结构、溶解性、稳定性等，其均有相应的制备技术要求，同时在技术、膜材料、中试放大等环节需要不断完善。对于脂质体的质量评价，主要8项指标，脂质体的形态和粒径(含分散性)，包封率，载药量，突释和渗漏率，体外释放度，磷脂氧化程度，有机溶剂残留和体内外功能评价。但总体来说，现在脂质体仍然存在靶向性有待进一步提高，包封率低、稳定性差、制备工艺复杂等缺点。
因此，研究一种高效、安全、稳定、靶向性强、均一性好、质量稳定和可靠、制备工艺简便的脂质体一直是脂质体研究的重点和方向。
人参皂苷是一种具有特殊双亲性的物质，亲水端带有糖基，亲油端带有长链尾端。人参皂苷具有非常广泛的医药用途，例如人参皂苷F4和Rg6能用于治疗淋巴瘤；人参皂苷Rg3能用于治疗痛经和白癜风；人参皂苷Rh1能用于改善使用地塞米松引起的激素抵抗，提高地塞米松的抗炎疗效；人参皂苷Rb1能用于防治高血压(参见CN201310165926、CN201310165907、CN201210501652、CN201310011400和CN201210486959)。CN201210151597.0公开了一种人参皂苷Rg3脂质体及制备方法，采用脂质体包封药物人参皂苷Rg3，得到了人参皂苷Rg3脂质体，并显著提高药物人参皂苷Rg3的可吸收度和生物利用度，同时增强了对肿瘤组织的靶向性，提高了药效。
现有技术中还没有任何关于人参皂苷可以作为脂质体膜材料，同时又可以作为靶向材料和药物等，用于制备空白脂质体并包载药物等其他成分的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的脂质体包封率低、稳定性差、制备工艺复杂以及靶向性有待进一步提高等缺陷，而提供了一种紫杉醇脂质体及其制备方法。本发明的空白脂质体具有高效、安全、稳定、靶向性强、均一性好、质量稳定和可靠、制备工艺简便等优点，并可用于包封药物、化妆品中的活性物质或具有保健作用的物质，形成负载活性物质的脂质体。当本发明的空白脂质体包封的活性物质为抗肿瘤药物时，所得的负载活性物质的脂质体具有对肿瘤细胞的靶向作用、抗多药耐药作用、增效减毒和药物协同作用。具体地，与传统的脂质体相比，各项指标更加优秀，尤其是在成药性、靶向性、抗多药耐药、增效减毒、药物协同作用等方面。
一种以人参皂苷为膜材的空白脂质体，其中所述的空白脂质体具有膜，所述的膜包含脂类物质和如式I所示的人参皂苷；
Figure BDA0002661037120000031
其中，R1和R2独立地为氢、羟基或R5，但R1和R2不同时为氢；R3为
Figure BDA0002661037120000032
Figure BDA0002661037120000033
R4为氢、羟基
Figure BDA0002661037120000034
或R5；所述的R5为R6、R7或R8：
R6为下述基团中的任一种：-O-Glc、-O-Rha、-O-Lyx、-O-Xyl、-O-Ara(p)、-O-Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(数字表示碳位，→表示连接关系，下同)、-O-Glc(6→1)Glc、-O-Glc(2→1)Rha、-O-Glc(2→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Rha、-O-Glc(2→1)Ara(p)、-O-Glc(6→1)Ara(p)、-O-Glc(2→1)Ara(f)、-O-Glc(6→1)Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Glc、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Xyl、-O-Glc(2→1)Glc(4→1)Xyl、-O-Glc(2→1)Lyx、-O-Glc(6→1)Lyx、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Rha、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Lyx、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Ara(p)、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Glc、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Rha、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Xyl、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Lyx、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Ara(p)、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Glc、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Rha、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Lyx、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Ara(f)、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Ara(p)、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Glc、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Rha、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Lyx、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Ara(f)或-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Ara(p)；
R7为R6中的一个以上的羟基被R8所取代，每个R8各自独立地相同或不同；
R8为下述基团中的任一种；
I)-mPEG、-Z-mPEG、-mPEO、-Z-PEO、-mPVP、-Z-PVP、-mEPEG或-Z-EPEG；其中，m为H、烷基或酰基，Z为-CO(CH2)aCO-、-NH(CH2)aCO-、-NH(CH2)bX-或-CO-Ar-CH2-；其中，X为O、S或NH，Ar为芳基，a为1、2、3、4、5、6、7或8，b为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
II)C4-C22的脂肪酰基、磷酸酯基、丁二酸酯基、正丁酸酯基、磺酸酯基、苹果酸酯基或硫酸钠盐；
III)Boc-甘氨酸、Boc-丙氨酸、Boc-精氨酸、Boc-赖氨酸、Boc-丝氨酸、乙酰苯丙氨酸、乙酰脯氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸或缬氨酸中的羧基去氢后所形成的基团；
IV)-O-PEO、-O-PVP、-O-PEG、-O-MPEG、-O-EPEG、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Mal或-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Ac；
R9、R10、R11、R12和R13分别独立地为C1-C3烷基(例如甲基、乙基、正丙基或异丙基)；d和e分别独立地为1、2或3；
如式I所示的人参皂苷中的一个或多个羟基可选地被一个或多个R8所取代；每个R8(当存在两个或多个时)各自独立地相同或不同。
其中，Glc为吡喃葡萄糖基，Xyl为吡喃木糖基，Rha为吡喃鼠李糖基，Ara(p)为吡喃阿拉伯糖基，Ara(f)为呋喃阿拉伯糖基，Lyx为来苏糖基。
其中，Mal为丙二酰基，Ac为乙酰基，PEG为聚乙二醇，PEO为聚氧乙烯，MPEG为单甲氧基封端的聚乙二醇，EPEG为环氧封端的聚乙二醇，PVP为聚维酮。
其中，在-O-Glc中，Glc的结构式为：
Figure BDA0002661037120000041
在-O-Ara(p)中，Ara(p)的结构式为：
Figure BDA0002661037120000042
在-O-Lyx中，Lyx的结构式为：
Figure BDA0002661037120000043
在-O-Ara(f)中，Ara(f)的结构式为
Figure BDA0002661037120000044
在-O-Rha中，Rha的结构式为
Figure BDA0002661037120000045
在-O-Xyl中，Xyl的结构式为
Figure BDA0002661037120000051
Mal的结构式为
Figure BDA0002661037120000052
其中，所述PEG、PEO、PVP和EPEG的分子量较佳地分别独立地为200～20000。
其中，所述的脂肪酰基可为天然存在的饱和或不饱和脂肪酸的酰基、及人工合成的饱和或不饱和的脂肪酸的酰基，较佳地为硬脂酰基或棕榈酰基。
R3较佳地为
Figure BDA0002661037120000053
所述的空白脂质体中，所述的如式I所示的人参皂苷优选为人参皂苷Rg5、人参皂苷Rg6、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rk2、人参皂苷Rk3、人参皂苷Rk4、人参皂苷Rh3、人参皂苷Rh4、人参皂苷F4、人参皂苷Rs4、人参皂苷Rs5、人参皂苷Rs6、人参皂苷Rs7、三七皂苷T5、达母林A(Damulin A)和达母林B(Damulin B)中的一种或多种。
如上所述，本发明中，所述的空白脂质体中所述的如式I所示的人参皂苷中的一个或多个羟基被R8所取代进而可被进一步进行结构修饰。每个R8(当存在多个时)可相同或不同，R8的定义同前所述。
所述的空白脂质体中，所述的如式I所示的人参皂苷的HPLC纯度较佳地大于或等于90％，更佳地为95％以上，所述的百分比是指质量百分比。
较佳地，所述的空白脂质体中，所述的如式I所示的人参皂苷还可为胶束形态。人参皂苷纳米胶束是指人参皂苷的胶束形态，具体见申请日为2013年4月28日的中国专利申请CN 201310155639.2，以及申请日为2013年12月4日的PCT申请PCT/CN2013/088558，在此引用上述中国专利申请和PCT申请的全文。较佳地，所述的空白脂质体中的脂类物质为磷脂，所述的磷脂和所述的如式I所示的人参皂苷的质量比通常为0.5:1-100:1，较佳地为0.5:1-20:1，更佳地为0.5:1-4:1(例如0.5:1-2:1。
较佳地，所述的空白脂质体中，所述的膜还可进一步包含胆固醇。其中，所述的磷脂和所述的如式I所示的人参皂苷的质量比较佳地为1:0.01-1:3(例如1:0.03-1:1)，更佳地为1:0.05-1:0.9(例如1:0.3-1:0.75)，最佳地为1:0.1-1:0.9(例如1:0.1-1:0.5)。所述的如式I所示的人参皂苷与所述的胆固醇的质量比较佳地为0.1:1-100:1，更佳地为0.5:1to 50:1，最佳地为0.5:1-10:1(例如1.5:1-6:1，或5:1)。
所述的空白脂质体中，所述的如式I所示的人参皂苷在膜中的含量较佳地为0.01％-80％；所述的磷脂在膜中的含量较佳地为5％-99.9％；所述的胆固醇在膜中的含量较佳地为0％-50％；以上百分比(％)均是指各组分的质量占所述的膜的总质量的百分比。
所述的空白脂质体中：所述的如式I所示的人参皂苷在膜中的含量较佳地为10％-80％，更佳地为10％-40％，最佳地为20％-40％(例如25％-40％，优选25％-35％)。所述的磷脂在膜中的含量较佳地为10％-70％，更佳地为30％-70％，最佳地为30％-60％。所述的胆固醇在膜中的含量较佳地为0.5％-50％，更佳地为5％-40％，最佳地为5％-30％(例如10％-20％)。
在本发明一优选实施方式中，所述的空白脂质体还可进一步包含抗氧化剂并包封于膜中。所述的抗氧化剂在空白脂质体中的含量一般小于等于25％，较佳地为0.001％-15％，更佳地为0.01％-10％，最佳地为0.01％-5％(例如0.1％-1％)；所述的百分比(％)是指抗氧化剂的质量与所述的空白脂质体的总质量的百分比。
在本发明一优选实施方式中，所述的空白脂质体还可进一步包含冻干保护剂并包封于膜中。所述的冻干保护剂在空白脂质体中的含量一般小于等于80％，较佳地为0.5％-60％，更佳地为5％-60％，最佳地为30％-60％；所述的百分比(％)是指冻干保护剂的质量占所述的空白脂质体总质量的百分比。
在本发明一优选实施方式中，所述的空白脂质体还可进一步包含大豆油和/或油酸钠并封装在膜中。所述的大豆油和/或油酸钠的含量较佳地为1％-90％，更佳地为15％-80％，最佳地为20％-70％(例如25％-62.5％,20％-30％，或60％-70％)；所述的百分比是指大豆油和/或油酸钠的质量占所述的空白脂质体总质量的百分比。所述“大豆油和/或油酸钠”和所述的磷脂的质量比较佳地为1:0.1-1:10，更佳地为1:0.5-1:5，最佳地为1:0.5-1:4(例如1:1-1:2)。
在本发明另一较佳实施例中，所述的空白脂质体包含下列组分：磷脂和如式I所示的人参皂苷，或者如式I所示的人参皂苷、磷脂和抗氧化剂，或者如式I所示的人参皂苷、磷脂和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷、“大豆油和/或油酸钠”和磷脂，或者如式I所示的人参皂苷、大豆油和/或油酸钠、磷脂和抗氧化剂；或者如式I所示的人参皂、大豆油和/或油酸钠、磷脂和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷、大豆油和/或油酸钠、磷脂、抗氧化剂和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷、磷脂和胆固醇，或者如式I所示的人参皂苷、磷脂、胆固醇和抗氧化剂，或者如式I所示的人参皂苷、磷脂、胆固醇和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷、大豆油和/或油酸钠、磷脂和胆固醇，或者如式I所示的人参皂苷、大豆油和/或油酸钠、磷脂、胆固醇和抗氧化剂；或者如式I所示的人参皂苷、大豆油和/或油酸钠、磷脂、胆固醇和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷、大豆油和/或油酸钠、磷脂、胆固醇、抗氧化剂和冻干保护剂。
在本发明另一优选实施方式中，所述的空白脂质体由上述组分组成。
在本发明另一较佳实施例中，所述的空白脂质体包含下列组分：如式I所示的人参皂苷、磷脂、胆固醇、大豆油和/或油酸钠、抗氧化剂和冻干保护剂。所述“大豆油和/或油酸钠”和所述的“胆固醇”的质量比较佳地为1:0.1-1:10，更佳地为1:0.5-1:5，最佳地为1:0.5-1:1。所述的胆固醇的含量较佳地为1％-20％，更佳地为10％-20％；所述的大豆油和/或油酸钠的含量较佳地为1％-90％，更佳地为15％-80％，最佳地为20％-70％(例如25％-62.5％,20％-30％，或60％-70％)。
在本发明一优选实施方式中，所述的空白脂质体由下列组分组成：磷脂、和如式I所示的人参皂苷。
在本发明一优选实施方式中，所述的空白脂质体由下列组分组成：如式I所示的人参皂苷、磷脂和胆固醇。
在本发明另一优选实施方式中，所述的空白脂质体由下列组分组成：如式I所示的人参皂苷、磷脂、胆固醇、抗氧化剂和冻干保护剂。
在本发明一优选实施方式中，所述的空白脂质体由下列组分组成：如式I所示的人参皂苷、磷脂、胆固醇、大豆油和/或油酸钠、抗氧化剂和冻干保护剂。
本发明中，所述的磷脂可为本领域常规的磷脂，较佳地为天然磷脂、半合成磷脂和全合成磷脂中的一种或多种。
本发明中，所述的天然磷脂一般是来源于大豆、蛋黄、动物脑或脏器中的天然磷脂，较佳地为天然卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂和脑磷脂中的一种或多种，更佳地为蛋黄卵磷脂。
本发明中，所述的半合成或全合成磷脂可为本领域常规的半合成或全合成磷脂，较佳地为磷脂酰胆碱类的磷脂、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺类的磷脂、磷脂酰甘油(DSPG)、二鲸蜡磷酸酯(DCP)、PEG修饰的磷脂、琥珀酸胆固醇酯(CHS)和2-油酰-1-棕榈锡甘油-3-磷酸胆碱(16:0-18:1PC，其中16:0-18:1是指PC的碳链)中的一种或多种。由于二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱等半合成或全合成的磷脂本身具有热敏性，可同时作为热敏性辅料使用。
本发明中，所述的磷脂酰胆碱类的磷脂可为本领域常规的磷脂酰胆碱类的磷脂，较佳地为氢化大豆卵磷脂(HSPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、磷脂酰胆碱(SPC)、单棕榈酰磷脂酰胆碱(MPPC)和甘油磷脂酰胆碱(GPC)中的一种或多种。
本发明中，所述的磷脂酰乙醇胺类的磷脂可为本领常规的磷脂酰乙醇胺类的磷脂，较佳地为1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(POPE)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺(DLPE)、二芥酰基磷脂酰乙醇胺(DEPE)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(DMPE)中的一种或多种。
本发明中，所述的PEG修饰的磷脂可为本领域常规的PEG修饰的磷脂，较佳地为磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DMPE-PEG)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DPPE-PEG)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)、二油酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DOPE-PEG)、C8神经酰胺-聚乙二醇(C8 Ceramide-PEG)、C16神经酰胺-聚乙二醇(C16 Ceramide-PEG)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-琥珀酰(DSPE-PEG Succinyl)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DSPE-PEG)Carboxylic Acid)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基(DSPE-PEG Maleimide)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-丙酰胺双巯基吡啶(DSPE-PEG PDP)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-三聚氯氰(DSPE-PEG Cyanur)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG Amine)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生物素(DSPE-PEG Biotin)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸(DSPE-PEG Folate)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸(DSPE-PEG Folate)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DLPE-PEG)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯(DSPE-PEG-NHS)、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯(DMPE-PEG-NHS)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯(DPPE-PEG-NHS)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯(DLPE-PEG-NHS)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基(DSPE-PEG-Maleimide)、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基(DMPE-PEG-Maleimide)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基(DPPE-PEG-Maleimide)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基(DLPE-PEG-Maleimide)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生物素(DSPE-PEG-Biotin)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-荧光素(DSPE-PEG-FITC)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羟基(DSPE-PEG-OH)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG-NH2)、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DMPE-PEG-NH2)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DPPE-PEG-NH2)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DLPE-PEG-NH2)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DSPE-PEG-COOH)、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DMPE-PEG-COOH)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DPPE-PEG-COOH)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DLPE-PEG-COOH)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-硫基(DSPE-PEG-SH)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-硅烷(DSPE-PEG-Silane)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叠氮(DSPE-PEG-N3)、胆固醇-聚乙二醇(CholesterolPEG)、甲氧基-聚乙二醇-胆固醇(mPEG-CLS)、胆固醇-聚乙二醇-活性酯(Cholesterol PEGNHS ester)、胆固醇-聚乙二醇-马来酰亚胺(CLS-PEG-Mal)、胆固醇-聚乙二醇-生物素(Cholesterol PEG Biotin)、胆固醇-聚乙二醇-荧光素(Cholesterol PEG fluorescein)、胆固醇-聚乙二醇-羧基(Cholesterol PEG COOH)、胆固醇-聚乙二醇-氨基(CholesterolPEG NH2)和胆固醇-聚乙二醇-硫基(Cholesterol PEG SH)中的一种或多种。其中，所述的聚乙二醇的相对分子量优选300-50000，更佳地为500-10000，例如300、350、500、550、1000、2000、3400、5000、10000、20000、30000、40000或50000。
本发明中，所述的DMPE-PEG的数均分子量较佳地为350、550、750、1000、2000、3000或5000。所述的DPPE-PEG的数均分子量较佳地为350、550、750、1000、2000、3000或5000。所述的DSPE-PEG的数均分子量较佳地为350、550、750、1000、2000、3000、5000、10000、20000、30000或40000。所述的DOPE-PEG的数均分子量较佳地为350、550、750、1000、2000、3000或5000。所述的C8 Ceramide-PEG的数均分子量较佳地为750、2000或5000。所述的C16Ceramide-PEG的数均分子量较佳地为750、2000或5000。所述的DLPE-PEG的数均分子量较佳地为2000或5000。所述的DSPE-PEG-NHS的数均分子量较佳地为1000、2000、5000、10000、20000、30000或40000。所述的DMPE-PEG-NHS的数均分子量较佳地为3400或5000。所述的DPPE-PEG-NHS的数均分子量较佳地为3400或5000。所述的DLPE-PEG-NHS的数均分子量较佳地为3400或5000。所述的DSPE-PEG-Maleimide的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的DMPE-PEG-Maleimide的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。、所述的DPPE-PEG-Maleimide的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的DLPE-PEG-Maleimid的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的DSPE-PEG-Biotin的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的DSPE-PEG-FITC的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的DSPE-PEG-OH的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DSPE-PEG-NH2的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DMPE-PEG-NH2的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DPPE-PEG-NH2的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DLPE-PEG-NH2的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DSPE-PEG-COOH的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DMPE-PEG-COOH的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DPPE-PEG-COOH的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DLPE-PEG-COOH的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DSPE-PEG-SH的数均分子量较佳地为5000。所述的DSPE-PEG-Silane的数均分子量较佳地为3400。所述的DSPE-PEG-N3的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的mPEG-CLS的数均分子量较佳地为1000、2000、5000、10000或20000。所述的Cholesterol PEG NHS ester的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的CLS-PEG-Mal的数均分子量较佳地为2000、3400、5000或10000。所述的CLS-PEG-Biotin的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的CLS-PEG-FITC的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的Cholesterol PEG COOH的数均分子量较佳地为3400。所述的Cholesterol PEG amine的数均分子量较佳地为3400。所述的Cholesterol PEG Thiol/Sulfhydril的数均分子量较佳地为3400。
本发明中，所述的抗氧化剂可为本领域常规的抗氧化剂，较佳地为焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、没食子酸丙酯、抗坏血酸、α-生育酚、α-羟基酸、黄酮类化合物、苯丙素酚类化合物、维生素E、维生素C、反丁烯二酸、半胱氨酸、蛋氨酸、丁羟基茴香醚(BHA)、二丁羟基甲苯(BHT)、硫代二丙酸、亚硫酸盐(如亚硫酸钠)、亚硫酸氢盐(如亚硫酸氢钠)、二硫代氨基苯甲酸类化合物、枸橼酸、苹果酸、山梨醇、甘油、丙二醇、氢醌、羟基香豆素、乙醇胺、磷酸和亚磷酸中的一种或多种。
本发明中，所述的冻干保护剂可为本领域常规的冻干保护剂，一般为糖、多元醇、氨基酸和缓冲剂中的一种或多种。其中，所述的糖较佳地为单糖、双糖和多糖中的一种或多种。所述的单糖较佳地为葡萄糖、甘露醇、木糖醇和山梨醇中的一种或多种，更佳地为葡萄糖。所述的双糖较佳地为蔗糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖中的一种或多种。所述的多糖较佳地为海藻糖。所述的多元醇较佳地为丙二醇和/或丙三醇。所述的氨基酸较佳地为α-氨基酸，例如苏氨酸、甘氨酸、谷氨酸、精氨酸和组氨酸中的一种或多种。所述的缓冲剂一般是指缓冲溶液。所述的缓冲溶液可为本领域常规的缓冲溶液，较佳地其pH值在3-10之间，更佳地在5-7之间。所述的缓冲溶液较佳地为乙醇-醋酸缓冲溶液、三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液、巴比妥缓冲溶液、甲酸钠缓冲溶液、邻苯二甲酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲溶液、氨-氯化铵缓冲溶液、硼砂-氯化钙缓冲溶液、醋酸盐缓冲溶液、醋酸-锂盐缓冲溶液、醋酸-醋酸钠缓冲溶液、醋酸-醋酸铵缓冲溶液、磷酸-三乙胺缓冲溶液或磷酸盐缓冲溶液。
较佳地，所述的空白脂质体中还可进一步包括其他辅料并包封于膜中。所述的其他辅料可为本领域制备脂质体时常规添加的除抗氧化剂和冻干保护剂以外的其他辅料，例如表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种。
本发明中，所述的表面活性剂较佳地为聚乙二醇和/或聚山梨醇酯。其中，所述的聚乙二醇的数均分子量较佳地为200-8000。所述的聚山梨醇酯较佳地为聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇三油酸酯、聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-聚乳酸、聚赖氨酸-聚丙交酯乙交酯、聚醚酰亚胺-聚乳酸、聚乙二醇-聚己内酯、聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯、泊洛沙姆188、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪酸醚和聚氧乙烯甲基蓖麻油醚中的一种或多种。
本发明中，所述的热敏性辅料一般是指可使脂质体具有热敏性的聚合物和/或表面活性剂中的一种或多种。其中，所述的聚合物较佳地为聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚磷酸酯和聚磷脂酰胺共聚物中的一种或多种。所述的表面活性剂较佳地为吐温类表面活性剂(例如吐温80)和/或苄泽类表面活性剂。
本发明中，所述的离子添加剂较佳地为阳离子添加剂(例如十八胺)和/或阴离子添加剂(例如磷脂酸和/或磷脂酰丝氨酸)。
本发明中，上述各其他辅料的用量可按照本领域含有该类辅料的普通脂质体中的用量进行选择。例如，当所述的空白脂质体中包含表面活性剂时，其含量为0％-50％，但不为0％；当所述的空白脂质体中包含离子添加剂时，其含量为0％-10％，但不为0％。
本发明中，所述的空白脂质体可采用本领域常规的脂质体制备方法制备得到，一般地，可采用注入法、逆向蒸发法、冻融法、复乳法、主动包封法、前体脂质体制备法、薄膜分散法、冷冻干燥法、硫酸铵梯度法或pH梯度法以及以上任意两种方法结合使用的方法。本发明较佳地采用下列方法一或方法二，其中方法一制得的空白脂质体中不包含冻干保护剂，方法二制得的空白脂质体中包含冻干保护剂：
方法一包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与水混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有空白脂质体的水溶液，干燥，即得所述的空白脂质体；
方法二包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有空白脂质体的水溶液，干燥，即得所述的空白脂质体。
方法一或方法二中，所述的脂类物质、所述的如式I所示的人参皂苷、所述的胆固醇、所述的抗氧化剂、所述的大豆油和/或油酸钠、所述的冻干保护剂、所述的表面活性剂、所述的热敏性辅料、所述的pH敏感物质和所述的离子添加剂的定义均同前所述。
方法一或方法二中，步骤(1)中，所述的有机溶剂可为本领域脂质体制备方法中常规的有机溶剂，较佳地为腈类溶剂、C1-C4的醇类溶剂、酮类溶剂、烷烃类溶剂、醚类溶剂和卤代烃类溶剂中的一种或多种，更佳地为C1-C4的醇类溶剂、腈类溶剂、醚类溶剂和卤代烃类溶剂中的一种或多种。所述的腈类溶剂较佳地为乙腈。所述的C1-C4醇类溶剂较佳地为甲醇、乙醇、异丙醇和正丁醇中的一种或多种。所述的醚类溶剂较佳地为四氢呋喃和/或乙醚。所述的卤代烃类溶剂较佳地为氯仿和/或二氯甲烷。所述的酮类溶剂较佳地为丙酮和/或丁酮。所述的烷烃类溶剂较佳地为石油醚。所述的有机溶剂的用量可为本领域脂质体制备方法中常规的用量，可不作具体限定，一般要求有机溶剂和所有组分混合后能够得到澄清溶液即可，较佳地，所述的有机溶剂与方法一或方法二步骤(1)中的所有组分的体积质量比为5-20mL/g。
方法一或方法二中，步骤(1)中，所述的混合的温度可为本领域常规的温度，一般为0-80℃，较佳地为10-80℃，更佳地为10-65℃。根据本领域常识，在一些情况下，为使混合温度达到80℃，需要在加热条件下进行；又或者当除冻干保护剂的所有原料组分中有对温度敏感的物质例如蛋白质类物质，一般选择在0℃下混合。
方法一或方法二中，步骤(2)中，所述的除去步骤(1)中澄清溶液的有机溶剂的操作可为本领域常规操作，一般使用旋转蒸发器或者膜蒸发器除去有机溶剂。其中，所述的除去有机溶剂的温度根据需要除去的有机溶剂进行常规选择，一般为25-80℃。
方法一或方法二中，步骤(2)中，所述的超声、高压均质或挤推过膜的操作可为本领域常规的操作。所述的超声、高压均质或挤推过膜的操作结束后，脂质体颗粒粒径一般在0.05-0.3微米。
方法一或方法二中，步骤(2)中，所述的过滤的操作可为本领域脂质体制备方法中常规的操作，其目的是除去细菌、固体颗粒、特别大的脂质体(在负载活性物质的脂质体的制备方法中，也可除去未包封的游离药物)等。本发明中，所述的过滤较佳地为微孔滤膜过滤。所述的微孔滤膜的孔径较佳地为0.22微米。
方法二中，步骤(2)中，所述的冻干保护剂的水溶液是指所述的冻干保护剂与水混合形成的水溶液。其中，所述的冻干保护剂的水溶液较佳地为5％-10％的冻干保护剂的水溶液，所述的百分比是指冻干保护剂的质量占冻干保护剂水溶液总质量的百分比。所述的冻干保护剂的水溶液的用量可不作具体限定，只要不影响空白脂质体的形成即可，较佳地与步骤(1)有机溶剂的用量相同。
在本发明一优选实施方式中，方法二中，当所述的冻干保护剂为缓冲剂时，步骤(2)中成膜的操作结束后，直接与所述的冻干保护剂混合即可。
方法一或方法二中，步骤(2)中，所述的干燥的操作可为本领域常规的操作，较佳地为冷冻干燥，一般采用冷冻干燥机进行冷冻干燥。所述的冷冻干燥的温度和时间为本领域常规的温度和时间，可不作具体限定。
方法一或方法二中，为方便贮存，步骤(2)得到的含有空白脂质体的水溶液分装于西林瓶中，干燥，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封保存即可。
所述的空白脂质体可通过将活性物质包裹于所述的膜中用于制备负载活性物质的脂质体，所述的活性物质为药物、化妆品中的活性物质和具有保健作用的物质中的一种或多种。因此，本发明还提供了一种负载活性物质的脂质体。所述的负载活性物质的脂质体通常是指将药物、化妆品中的活性物质和具有保健作用的物质中的一种或多种(活性物质)包裹于所述的空白脂质体中。
所述的负载活性物质的脂质体中，所述的活性物质与所述的如式I所示人参皂苷的质量比较佳地为1:0.1-1:10，更佳地为1:2-1:6(例如1:3或1:4)。
所述的活性物质中，所述的药物可为本领域常规的药物，较佳地为抗肿瘤药物、抗真菌药物、抗病毒药物、抗生素、非甾体抗炎药物、钙离子拮抗剂、免疫抑制剂、麻醉剂、心脑血管及血管扩张药物、肠胃药物、抗抑郁症药物、生物制剂、多聚核苷酸和寡核苷酸(包括核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸)中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的抗肿瘤药物可为本领域常规的抗恶性肿瘤的药物，较佳地为紫杉醇、多西他赛、卡巴他赛、盐酸伊立替康、羟基喜树碱、氨基喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、盐酸拓扑替康、勒托替康(Lurtotecan)、托泊替康、贝洛替康、顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂(Nedaplatin)、络铂(Lobaplatin)、赛特铂(Satraplatin)、米铂、戊铂、Aroplatin(L-NDDP)、卡氮芥、苯丁酸氮芥、美法仑、三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱、雷公藤甲素、他克莫司、柔红霉素、平阳霉素、盐酸多柔比星、伊达比星、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、磷酸依托泊甙、去氧鬼臼毒素、石杉碱甲、酒石酸长春瑞滨、硫酸长春新碱、硫酸长春碱、异长春花碱、硫酸长春地辛、替莫唑胺、替加氟、环磷酰胺、异环磷酰胺、达卡巴嗪、埃博霉素A、埃博霉素B、埃博霉素C、埃博霉素D、埃博霉素E、埃博霉素F、硼替佐米、盐酸吉西他滨、磷酸氟达拉滨、卡培他滨、地西他滨、培美曲塞二钠、索拉菲尼、重组人干扰素a2b、阿拉伯糖苷胞嘧啶、全反式维甲酸、白介素-2、足叶乙苷、胸核苷酸合酶抑制剂、米托蒽醌、米诺地尔、阿奇霉素、盐酸表柔比星、盐酸多柔比星(阿霉素)、盐酸氨柔比星、5-氨基酮戊酸(5-ALA)、吉非替尼、伊马替尼、厄罗替尼、苏尼替尼、达沙替尼、拉帕替尼、阿西替尼、阿帕替尼、尼罗替尼、伯舒替尼、凡德他尼、替拉替尼、来那替尼、卡奈替尼、塞卡替尼、奥替尼啶、索拉菲尼、埃克替尼、木利替尼、来他替尼、坦度替尼、多韦替尼、3’,5’-环胞苷二棕榈酸酯和莪术醇中的一种或多种，更佳地为紫杉醇。
所述的活性物质中，所述的抗真菌药物较佳地为两性霉素B、庆大霉素、吲哚美辛、青霉素G、硝酸益康唑、氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、雷夫康唑、卡泊芬净、米卡芬净、阿尼芬净、头孢匹胺钠、头孢噻肟钠、头孢曲松、头孢哌酮、头孢妥仑匹酯、头孢西丁钠、头孢氨苄、头孢呋辛钠、头孢克肟、头孢泊肟、头孢甲肟、头孢地嗪、头孢磺啶、头孢唑南、头孢唑肟、头孢他美酯、头孢特仑酯、头孢布坦、头孢地尼、头孢孟多、头孢替安、头孢雷特、头孢尼西、头孢他啶、头孢拉定、头孢丙烯、头孢唑林钠、头孢羟氨苄、头孢噻吩、头孢硫脒、头孢噻啶、头孢乙氰、头孢替唑、头孢匹林、头孢匹罗、头孢克定、头孢吡肟、夫西地酸钠、氟苯尼考和替加环素中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的抗病毒药物较佳地为利巴韦林、阿昔洛韦、阿糖胞苷、碘苷、无环鸟苷月桂酸酯、无环鸟苷棕榈酸酯、碘脱氧尿苷、环胞苷、环胞苷二棕榈酸酯、磷酸甲酸盐、磷酸醋酸盐、西米替丁、双嘧哒莫、利福平、异烟肼、吡喹酮、强力霉素、沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、奈非那韦、安普那韦、替普那韦、BMS232632、拉米夫定、齐多夫定、去羟肌苷(didanosine，ddi)、扎西他滨(zalcitabine，ddc)、司他夫定(stavudine，d4t)、阿巴卡韦(abacavir)、阿迪佛韦(adefovirdipivoail，pmea)、替诺佛韦(tenofovir，pmpa)、氟代拉米夫定(ftc)、奈韦拉平(nevirapine)、地拉韦啶(delavirdine)、依法韦司(efavirens)、白细胞介素2(il－2)、替米考星和地克珠利中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的抗生素较佳地为青霉素、青霉素V、阿莫西林、氨苄西林、苯唑西林、氯唑西林、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素、哌拉西林、美洛西林、替卡西林、阿洛西林、美西林、羧苄西林、磺苄西林、呋布西林、萘夫西林、双氯西林、匹氨西林、阿帕西林、阿扑西林、匹美西林、甲氧西林、仑氨西林、福米西林、氟氯西林、卡那霉素、那他霉素、丝裂霉素、丁胺卡那霉素、泰乐菌素、维替泊芬(Verteporfin)、头孢匹胺钠、硫酸奈替米星、阿奇霉素、氧氟沙星、环丙沙星、依诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、芦氟沙星、司氟沙星、氟罗沙星、莫西沙星、格帕沙星、曲伐沙星、淋沙星、吉米沙星、加替沙星、妥舒沙星、帕珠沙星、司帕沙星、克拉霉素、克林霉素、多粘菌素、妥布霉素、万古霉素、阿奇霉素、多西环素、四环素、土霉素、米诺环素、金霉素、胍甲环素、地美环素、美他环素、依替米星、奈替米星、西索米星、阿米卡星、阿贝卡星、地贝卡星、氨曲南、美罗培南、亚胺培南、硫霉素、帕尼培南、厄他培南、新霉素、巴龙霉素和大观霉素中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的钙离子拮抗剂较佳地为尼莫地平、硝苯地平、尼卡地平、尼群地平、维拉帕米、氨氯地平、地尔硫卓、氟桂利嗪、普尼拉明、加洛帕米和噻帕米中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的非甾体抗炎药较佳地为吲哚美辛、阿司匹林、对乙酰氨基酚、萘普生、双氯芬酸、布洛芬、尼美舒利、罗非昔布和塞来昔布中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的免疫抑制剂较佳地为环孢素、前列地尔(又称前列腺E-1)、环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、霉酚酸酯和咪唑立宾中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的麻醉剂较佳地为地氟烷、七氟烷、异氟烷、恩氟烷、丙泊酚、芬太尼、乌拉坦、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因、戊巴比妥钠、水合氯醛、氯胺酮、氯醛糖和吗啡中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的心脑血管及血管扩张药物较佳地为达比加群酯、阿格列汀、藻酸双酯钠、银杏内酯、银杏黄酮、银杏提取物、细辛脑、奥美沙坦酯、瑞格列奈、硫辛酸、灯盏花素、乌拉地尔、烟酸、卡托普利、氯沙坦、葛根素、丹参酮IIA、盐酸沙格雷酯、氟伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、洛伐他丁、辛伐他汀、美伐他汀、西立伐他汀、罗伐他汀、阿托伐他汀钙和瑞苏伐他汀钙中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的肠胃药物较佳地为奥美拉唑、兰索拉唑、艾普拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑、特拉唑嗪、埃索美拉唑、泰妥拉唑、莱米诺拉唑、替那拉唑、二硫拉唑和拉呋替丁中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的抗抑郁药物较佳地为阿戈美拉汀、氟西汀、帕罗西汀、度洛西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰、艾司西酞普兰、文拉法辛、米氮平、丙咪嗪、阿米替林、氯丙咪嗪、多虑平、瑞美隆、万拉法新、苯乙肼、异卡波肼和反苯环丙胺中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的多聚核苷酸或寡核苷酸较佳地是指由碱基A、T、C、G和U中的几种组成的具有遗传等功能的片段，例如SiRNA、反义核酸或小胶质细胞NLRP3基因的RNAi序列。
所述的活性物质中，所述的生物制剂较佳地为本领域常规的单抗类药物、胰岛素、丙种球蛋白、抗毒血清、干扰素、白介素、肿瘤坏死因子、皮肤活性因子、表皮生长因子、流感疫苗、甲肝疫苗、抗癌疫苗、重组人酸性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子2单克隆抗体(VEGFR-2单克隆抗体)中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的化妆品中的活性物质一般是指化妆品中具有营养、改善皮肤状况和预防皮肤疾病的功效的活性物质，较佳地为熊果酸、超氧化物歧化酶(SOD)、生物蛋白T4N5、维生素D2、烟酸甲酯、精制蛇油、透明质酸、精油和神经酰胺中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的具有保健作用的物质可为本领域常规的具有保健作用的物质，较佳地为甘草甜素、甘草酸、甘草酸二钠盐、甘草酸甲酯、甘草酸二铵、维生素E、白藜芦醇、辅酶Q10、水飞蓟素、花青素、原花青素、叶黄素、叶酸、亚叶酸、姜黄素、大黄素、茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、儿茶素、蓝莓提取物、谷胱甘肽和氧化苦参碱中的一种或多种。
在一优选技术方案中，所述的活性物质为紫杉醇。
本发明还提供了一种所述的负载活性物质的脂质体的制备方法，
当所述的脂质体中包含冻干保护剂，所述的负载活性物质的脂质体的制备方法较佳地为包括下列任一方法：
方法A包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质、如式I所示的人参皂苷和所述的活性物质混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法B包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与所述的活性物质、冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一负载活性物质的脂质体溶液，透析，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法C包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与含硫酸铵和冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，透析，然后与所述的活性物质混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法D包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与柠檬酸和冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，然后与所述的活性物质、和磷酸氢二钠水溶液混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
当所述的脂质体中不包含冻干保护剂时，所述的负载活性物质的脂质体的制备方法较佳地为包括下列任一方法：
方法A1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质、如式I所示的人参皂苷和所述的活性物质混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与水混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法B1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与所述的活性物质的混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一负载活性物质的脂质体溶液，透析，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法C1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与硫酸铵水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，透析，然后与所述的活性物质混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法D1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与柠檬酸水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，然后与所述的活性物质、和磷酸氢二钠水溶液混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体。
方法A、B、C、D、A1、B1、C1或D1中，各条件和参数参照所述的空白脂质体的制备方法中的方法一或方法二。
方法A、B、C或D中，步骤(2)中，所述的冻干保护剂的水溶液还可在得一含负载活性物质的脂质体的水溶液之后干燥之前加入。
方法B、C、B1或C1中，所述的透析的操作可为本领域脂质体制备方法中常规的操作，本发明较佳地为将所述的空白脂质体溶液或所述的负载活性物质的脂质体溶液置于葡萄糖水溶液(例如0.15mol/L)中或纯水中透析。所述的透析的时间可为本领域脂质体制备方法中常规的时间，较佳地为5-20小时，更佳地为12小时。方法B、C、B1或C1中，所述的透析的操作还可在超声、高压均质或挤推过膜的操作之前进行。
方法C或C1中，所述的含硫酸铵和冻干保护剂的水溶液或所述的硫酸铵水溶液中硫酸铵的用量可不作具体限定，为本领域制备脂质体硫酸铵梯度法常规的用量。所述的含硫酸铵和冻干保护剂的水溶液中或所述的硫酸铵水溶液中，硫酸铵的质量分数较佳地为1％-15％，更佳地为6.6％，所述的百分比是指硫酸铵的质量占上述水溶液总质量的百分比。
方法C或C1中，在进行过滤操作之前，较佳地还可进一步包含保温的操作。所述的保温的操作较佳地为在30℃-80℃(例如37℃)保温5分钟-1小时(例如30分钟)。
方法D或D1中，所述的柠檬酸水溶液的浓度和用量可不作具体限定，为本领域制备脂质体pH梯度法常规的浓度和用量。本发明中，所述的柠檬酸水溶液的质量分数较佳地为1％-15％，更佳地为5.76％，所述的百分比是指柠檬酸的质量占柠檬酸水溶液总质量的百分比。所述的磷酸氢二钠水溶液的浓度和用量可不作具体限定，为本领域制备脂质体pH梯度法常规的浓度和用量。本发明中，所述的磷酸氢二钠水溶液的质量分数较佳地为5％-20％，更佳地为7.1％。所述的磷酸氢二钠水溶液的用量一般使含负载活性物质的脂质体水溶液中(外水相)的pH值在6.5-7.5之间(例如7.3)即可。为快速达到所需pH值，在进行过滤的操作之前，加入纯水以使负载活性物质的脂质体水溶液的pH值在6.5-7.5之间(例如7.3)。
方法D或D1中，在进行过滤的操作之前，还可进一步包含保温的操作。所述的保温的操作较佳地为在30℃-80℃(例如60℃)保温5分钟-1小时(例如30分钟)。
上述各方法中，根据所述的活性物质的脂溶性或水溶性，所述的活性物质较佳地还可以所述活性物质的水溶液或者所述活性物质的有机溶液的形式使用。所述的活性物质的水溶液或所述的活性物质的有机溶液的质量分数可不作具体限定，较佳地为质量体积分数为1％-20％的水溶液或有机溶液，所述的百分比是指所述活性物质的质量(g)，占所述活性物质水溶液或者所述活性物质有机溶液总体积(mL)的百分比。所述的活性物质有机溶液中的有机溶剂可为本领域中常规的有机溶剂，只要能够很好的溶解所述的活性物质，即可。本发明中，所述的有机溶剂较佳地为亚砜类溶剂，例如二甲基亚砜(DMSO)。
所述的负载活性物质的脂质体的制备方法中，所述的活性物质的用量可为本领域常规的用量，较佳地，所述的活性物质与所述的如式I所示的人参皂苷和的质量比为1:0.1-1:10，更佳地为1:2-1:6(例如1:3，1:4)。
在一优选实施方案中，所述的负载活性物质的脂质体的制备方法，其包括以下步骤：
将1g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.3g紫杉醇，加入20ml的乙腈中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在50-60℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20ml的纯化水，超声至人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体。
所述的空白脂质体或所述的负载活性物质的脂质体的粒径可为本领域常规的粒径，较佳地为30-2000nm，更佳地为30-300nm，最佳地为50-300nm。所述的负载活性物质的脂质体中，包封率较佳地为80％以上，更佳地为90％以上，最佳地为95％以上。
当所述的负载活性物质的脂质体中所述的活性物质为药物和/或具有保健功能的物质时，所述的负载活性物质的脂质体的给药途径可为本领域常规的给药途径，较佳地为注射给药、口服给药或透皮给药，用于疾病的治疗和/或医疗保健。因此，所述的负载活性物质的脂质体通常制备成注射剂、冻干注射剂、口服固体制剂、口服液、搽剂、膏剂、酊剂或气雾剂的形式。其中所述的注射给药的方式较佳地为静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射或皮下注射。一般地，将所述的负载活性物质的脂质体加入到生理盐水、磷酸盐缓冲溶液或5％的葡萄糖水溶液配置成注射液，用于注射给药。
所述的负载活性物质的脂质体中，当所述的活性物质为抗肿瘤药物时，所述的负载活性物质的脂质体一般都具有对肿瘤细胞的靶向作用、抗多药耐药作用、增效减毒和药物协同作用。
本发明中，如式I所示的人参皂苷的结构如下表所示：
Figure BDA0002661037120000201
Figure BDA0002661037120000211
Figure BDA0002661037120000221
Figure BDA0002661037120000231
Figure BDA0002661037120000241
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明中，室温是指10-30℃。
本发明中，所述的冻干保护剂的水溶液或者所述的活性物质的水溶液的密度按照1g/mL计算(即水的密度)，因此，所述的冻干保护剂的水溶液或者所述的活性物质的水溶液的总质量m＝ρ*V。
本发明中，所述的活性物质的有机溶液的密度按照有机溶剂的种类计算，例如当有机溶剂为DMSO时，所述的活性物质的有机溶液的密度为1.1g/mL。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明的空白脂质体具有高效、安全、稳定、靶向性强、均一性好、质量稳定和可靠、制备工艺简便的优点。当所述的活性物质为抗肿瘤药物时，所述的负载活性物质的脂质体一般都具有对肿瘤细胞的靶向作用、抗多药耐药作用、增效减毒和药物协同作用。
附图说明
图1为实施例1制得的人参皂苷Rg5空白脂质体的粒径分布图。
图2为实施例2制得的人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径分布图。
图3为实施例3制得的人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径分布图。
图4为实施例4制得的人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径分布图。
图5为实施例5制得的人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径分布图。
图6为实施例6制得的人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径分布图。
图7为实施例7制得的人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径分布图。
图8为实施例8制得的人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径分布图。
图9为实施例9制得的人参皂苷Rg5多西他赛脂质体的粒径分布图。
图10为实施例10制得的人参皂苷Rg5盐酸伊立替康脂质体的粒径分布图。
图11为实施例11制得的人参皂苷Rg5羟基喜树碱脂质体的粒径分布图。
图12为实施例12制得的人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的粒径分布图。
图13为实施例13制得的人参皂苷Rg5两性霉素B脂质体的粒径分布图。
图14为实施例14制得的人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的粒径分布图。
图15为实施例15制得的人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体的粒径分布图。
图16为实施例16制得的人参皂苷Rg5奥沙利铂脂质体的粒径分布图。
图17为实施例17制得的人参皂苷Rg5顺铂脂质体的粒径分布图。
图18为实施例18制得的人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体的粒径分布图。
图19为实施例19制得的人参皂苷Rg5常规SiRNA脂质体的粒径分布图。
图20为实施例21制得的人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的粒径分布图。
图21为实施例22制得的人参皂苷Rg5两性霉素B脂质体的粒径分布图。
图22为实施例23制得的人参皂苷Rg5盐酸表阿霉素脂质体的粒径分布图。
图23为实施例24制得的人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体的粒径分布图。
图24为实施例25制得的人参皂苷Rg5奥沙利铂脂质体的粒径分布图。
图25为实施例26制得的人参皂苷Rg5顺铂脂质体的粒径分布图。
图26为实施例27制得的人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体的粒径分布图。
图27为实施例28制得的人参皂苷Rg5常规SiRNA脂质体的粒径分布图。图28为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对人肺癌细胞(A549)的细胞存活率曲线图。
图29为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的细胞存活率的曲线图。
图30为肿瘤细胞摄取的荧光倒置显微镜观察图；其中，图30-A、图30-B、图30-C分别为Nil、Nil-lip、Rg5-Nil-lip对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)摄取的荧光倒置显微镜观察图。
图31为用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布图，其中，图31-A、图31-B和图31-C分别为对照组在第2、6和10h用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布图；图31-D、图31-E和图31-F分别为实验组在第2、6和10h用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布图；图31-G为荧光标尺，其中，按荧光强弱，依次是红黄绿蓝，红色表示荧光最强，蓝色表示微弱荧光。
图32为对照组和实验组小鼠离体脏器的荧光图；其中，图32-A和图32-B分别为对照组和实验组小鼠离体脏器的荧光图；图32-C为荧光标尺，其中，按荧光强弱，依次是红黄绿蓝，红色表示荧光最强，蓝色表示微弱荧光。
图33为Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人肺癌细胞(A549)的抑瘤曲线图。
图34为Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的抑瘤曲线图。
图35为正常小鼠、Control组和Taxol+Rg5组小鼠肺、肝脏和肿瘤组织石蜡切片后经苏木精-伊红染色后显微镜观察图，其中，图35-A、图35-D和图35-G为正常小鼠肺、肝脏和肿瘤组织石蜡切片后经苏木精-伊红染色后显微镜观察图；图35-B、图35-E和图35-H为对照组荷瘤小鼠肺、肝脏和肿瘤组织石蜡切片后经苏木精-伊红染色后显微镜观察图；图35-C、图35-F和图35-I为实验组小鼠肺、肝脏和肿瘤组织石蜡切片后经苏木精-伊红染色后显微镜观察图。
图36为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对人乳腺癌细胞(MCF-7)的细胞存活率的曲线图。
图37为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的细胞存活率的曲线图。
图38为Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌细胞(MCF-7)的抑瘤曲线图。
图39为Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤曲线图。
图40为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人卵巢癌细胞(A2780)的细胞存活率的曲线图。
图41为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人卵巢癌紫杉醇耐药株(A2780/T)的细胞存活率的曲线图。
图42为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人前列腺癌细胞(PC-3)的细胞存活率的曲线图。
图43为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的细胞存活率的曲线图。
图44为Taxol、Rg5空和Taxol+Rg5对人胰腺癌细胞(BxPC-3)的细胞存活率的曲线图。
图45为Taxol、Rg5空和Taxol+Rg5对人胰腺癌细胞耐紫杉醇细胞株(BxPC-3/T)的细胞存活率的曲线图。
图46为Doc、Rg5空和Doc+Rg5对乳腺癌细胞(MCF-7)的细胞存活率的曲线图。
图47为Doc、Rg5空和Doc+Rg5对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的细胞存活率的曲线图。
图48为Control组、Doc+Rg5组和Abraxane组对乳腺癌(MCF-7)的抑瘤曲线图。
图49为Control组、Doc+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤曲线图。
图50为Cab、Rg5空和Cab+Rg5对人前列腺癌细胞(PC-3)的细胞存活率的曲线图。
图51为Cab、Rg5空和Cab+Rg5对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的细胞存活率的曲线图。
图52为FU+Rg5、Rg5空和FU对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)的细胞存活率的曲线图。
图53为Rg5空、FU和FU+Rg5对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)的抑瘤曲线图。
图54为Rg5空、DDP和DDP+Rg5对人胃癌顺铂耐药株(SGC-7901/DDP)的细胞存活率的曲线图。
图55为Rg5空、DDP和DDP+Rg5对人胃癌顺铂耐药株(SGC-7901/DDP)的抑瘤曲线图。
图56为Rg5空、V和V+Rg5对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的细胞存活率的曲线图。
图57为Rg5空、V和V+Rg5对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的抑瘤曲线图。
图58为Rg5空、Taxol和Rg5+Taxol对人胃癌细胞(SGC-7901)的细胞存活率的曲线图。
图59为Rg5空、Taxol和Rg5+Taxol对人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)细胞存活率的曲线图。
图60为Control组、Abraxane组和Rg5+Taxol组对人胃癌细胞(SGC-7901)的抑瘤曲线图。
图61为Control组、Abraxane组和Rg5+Taxol组对人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)的抑瘤曲线图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
1、实验药物：人参皂苷Rg5、人参皂苷Rh2、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rk1、紫杉醇、多西他赛、卡巴他赛、顺铂、奥沙利铂、盐酸伊立替康、羟基喜树碱、盐酸多柔比星、两性霉素B、盐酸表阿霉素、硫酸长春新碱、氟尿嘧啶为本领域常规市售可得，例如上海本素医药科技有限公司。
常规SiRNA购自锐博生物。
普通空白脂质体制备方法：将1g大豆卵磷脂、0.6g胆固醇、0.1g大豆油，加入20ml的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20ml的5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得普通空白脂质体的水溶液；然后分装于西林瓶中，使每瓶含脂质体180mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得普通空白脂质体。
2、下述实施例和应用实施例中所使用的仪器为西南大学药学院自有仪器设备，其设备型号和来源信息如下：
高效液相色谱仪(Agilent 1100)；
电子天平(TB-215，美国Denver Instrument)；
超声波清洗机(SB3200DT，宁波新芝生物科技股份有限公司)；
氮吹仪(HGC-12A，天津市恒奥科技发展有限公司)；
旋转蒸发器(RE-2000A，上海亚荣生化仪器厂)；
超纯水制造系统(ULUP-IV-10T，四川优普超纯科技有限公司)；
恒温振荡器(SHA-C，常州澳华仪器有限公司)；
超声波细胞粉碎机(JY92-II，宁波新芝生物科技股份有限公司)；
高压均质机(B15，加拿大AVESTIN)；
激光粒度分析仪(Nano ZS,英国马尔文仪器公司)；
微型挤出器(Mini-extruder，Avanti Polar Lipids Inc)；
光电显微镜(XDS-1B，重庆光电仪器有限公司)；
洁净工作台(SW-CJ-1FD，苏州安泰空气技术有限公司)；
细胞培养箱(CCL-170B-8，新加坡ESCO)；
荧光倒置显微镜(IX-73，日本奥林巴斯)；
小动物活体成像系统(FX PRO，美国Bruker公司)；
3、实验细胞株：
A549人肺癌细胞(南京凯基生物)；
A549/T人肺癌紫杉醇耐药株(南京凯基生物)；
MCF-7人乳腺癌细胞(南京凯基生物)；
A2780人卵巢癌细胞(南京凯基生物)；
A2780/T人卵巢癌紫杉醇耐药株(南京凯基生物)；
PC-3人前列腺癌细胞株(南京凯基生物)；
BxPC-3人胰腺癌细胞(南京凯基生物)；
Bel/FU人肝癌氟尿嘧啶耐药株(南京凯基生物)；
SGC-7901人胃癌细胞(南京凯基生物)；
SGC-7901/DDP人胃癌顺铂耐药株(南京凯基生物)；
HCT-8/V人结肠癌长春新碱耐药株(南京凯基生物)。
SGC-7901/T人胃癌紫杉醇耐药株建立方法；
采用低浓度加量持续诱导法诱导亲本SGC-7901细胞建立人胃癌耐药细胞系SGC-7901/Taxol。将新复苏的SGC-7901细胞常规条件下培养2代或3代，使细胞生长稳定。待细胞消化传代第二天更新培养基时，以Taxol对亲本SGC-7901IC50的1/10为起始浓度加入紫杉醇。加药第二天更新培养基，并维持紫杉醇的浓度常规传代培养。待每个紫杉醇浓度细胞稳定生长后再提高药物浓度继续培养，直到细胞可在含2.5mg/L紫杉醇的培养基中稳定生长，历时十二个月。
MCF-7/T人乳腺癌紫杉醇耐药株建立方法：
采用低浓度加量持续诱导法诱导亲本MCF7细胞建立人乳腺癌耐药细胞系MCF7/Taxol。将新复苏的MCF7细胞常规条件下培养2代或3代，使细胞生长稳定。待细胞消化传代第二天更新培养基时，以Taxol对亲本MCF7 IC50的1/10为起始浓度加入紫杉醇。加药第二天更新培养基，并维持紫杉醇的浓度常规传代培养。待每个紫杉醇浓度时细胞稳定生长后再提高药物浓度继续培养，直到细胞可在含2.5mg/L紫杉醇的培养基中稳定生长，历时十二个月。
PC-3/T人前列腺癌紫杉醇耐药株建立方法：
采用低浓度加量持续诱导法诱导亲本PC-3细胞建立人前列腺癌耐药细胞系PC-3/Taxol。将新复苏的PC-3细胞常规条件下培养2代或3代，使细胞生长稳定。待细胞消化传代第二天更新培养基时，以Taxol对亲本PC-3IC50的1/10为起始浓度加入紫杉醇。加药第二天更新培养基，并维持紫杉醇的浓度常规传代培养。待每个紫杉醇浓度时细胞稳定生长后再提高药物浓度继续培养，直到细胞可在含0.5mg/L紫杉醇的培养基中稳定生长，历时十个月。
BxPC-3/T人胰腺癌紫杉醇耐药株建立方法；
采用低浓度加量持续诱导法诱导亲本BxPC-3细胞建立人胰腺癌耐药细胞系BxPC-3/Taxol。将新复苏的BxPC-3细胞常规条件下培养2代或3代，使细胞生长稳定。待细胞消化传代第二天更新培养基时，以Taxol对亲本BxPC-3IC50的1/10为起始浓度加入紫杉醇。加药第二天更新培养基，并维持紫杉醇的浓度常规传代培养。待每个紫杉醇浓度时细胞稳定生长后再提高药物浓度继续培养，直到细胞可在含3mg/L紫杉醇的培养基中稳定生长，历时十二个月。
4、实验动物：昆明小鼠(或称正常小鼠)，购自第三军医大学动物中心；
BALB/C-nu/nu小鼠(或称裸小鼠)，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。
5、细胞培养方法：将涉及的细胞株置于含5％CO2的37℃培养箱中，用DMEM或RPMI1640完全培养基(含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素)培养，0.25％胰酶-EDTA消化传代，每周传代2-3次。
6、给药：对于每次实验，设置阴性对照组、阳性对照组(例如，人参皂苷空白脂质体对照组、紫杉醇对照组、普通脂质体紫杉醇对照组、白蛋白紫杉醇对照组)、载药人参皂苷脂质体组。设置6个以上浓度梯度、倍半或五倍稀释，每个浓度三复孔。
7、肿瘤细胞抑制浓度IC50实验方法：将对数生长期的肿瘤细胞用胰酶消化后配制成一定浓度的细胞液，按5000个/孔接种于96孔板，每孔加100μl。次日加入含不同浓度样品及相应溶剂对照的新鲜培养基，每孔加100μl(DMSO终浓度<0.5％)，每样品设10个剂量组，每组设三个平行孔，于37℃培养箱继续培养72h后，弃上清液，每孔加100μl的PBS及10μl的CCK-8，用微型振荡器震荡混匀，继续培养3h，用酶标仪在参考波长630nm，检测波长450nm条件下测定光密度值(OD)，以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，按中效方程计算IC50。
8、体外细胞实验方法：收集对数生长期的肿瘤细胞，将细胞重悬至DMEM完全培养基(含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素)中，终浓度为4×104个/ml。在96孔细胞培养板中，每孔加入200μl上述细胞悬液(8×103个细胞/孔)，置于37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养48h，将DMEM完全培养基分别换成200μl含不同浓度的抗肿瘤药物，使药物的最终浓度设置为6组以上，以DMEM完全培养基为阴性对照组，每个浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞在37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养72h后，每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，置细胞培养箱内继续培养4h后，弃上清液，每孔加入150μl DMSO，震荡10min后，用连续光谱多功能酶标仪(Tecan infinite M 200,TECAN，瑞士)测定在490nm处的OD值，按下式计算细胞存活率：(细胞存活率(％)＝OD药物/OD对照×100％)。
细胞存活率(％)＝OD490(样品)/OD490(对照)×100％；
其中，OD490(样品)为实验组的OD值，OD490(对照)为空白对照组的OD值。
9、体内药效实验方法：取1×107-10×107个/ml对数生长期的肿瘤细胞，用1ml注射器缓慢注射至18-20g的裸小鼠右侧腋下皮下，每只裸小鼠注射100μl，观察瘤块生长，直至瘤块体积长至约100mm3。将动物随机分组开始给药。每隔两天称重并测定肿瘤体积，并用游标卡尺测量肿瘤最长直径和最短直径，处死裸小鼠，测定瘤块体积，计算相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增殖率(T/C)和肿瘤抑制百分率，做统计学分析。
肿瘤体积计算公式：V＝abh/2。其中，a为肿瘤直径，b为肿瘤横径，h为肿瘤高度。
相对肿瘤体积RTV计算公式：RTV＝Vt/V0。其中Vt为某一时间的肿瘤体积，V0为开始给药时的肿瘤体积。
相对肿瘤增殖率的计算公式：T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％。其中TRTV为治疗组RTV，CRTV为溶剂对照组RTV。
肿瘤抑制百分率的计算公式：肿瘤抑制百分率＝(溶剂对照组瘤重-给药组瘤重)/溶剂对照组瘤重×100％。
疗效评价标准：T/C(％)>60为无效；T/C(％)≦60，并且与溶剂对照组比较，瘤体积经统计学处理P<0.05为有效。
下述实施例中，对于操作温度和压力，如未作特别说明，一般是指室温和常压。其中，室温是指10-30℃；常压是指一个标准大气压。
实施例1人参皂苷Rg5空白脂质体的制备
将1g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.1g大豆油，加入20ml的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20ml的5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5空白脂质体的水溶液；然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含脂质体180mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5空白脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为57.43nm(具体见表1和图1)。
表1人参皂苷Rg5空白脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000321
实施例2人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的制备
将1g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.3g紫杉醇，加入20ml的乙腈中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在50-60℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20ml的纯化水，超声至人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为113.6nm(具体见表2和图2)，包封率大于90％。
表2人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000322
Figure BDA0002661037120000331
实施例3人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的制备
将0.75g蛋黄卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g紫杉醇、0.25g胆固醇、0.25g苏氨酸，加入20ml的甲醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20ml 5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为132.6nm(具体见表3和图3)，包封率大于90％。
表3人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000332
实施例4人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的制备
将8g大豆卵磷脂、6g人参皂苷Rg5、1g紫杉醇、4g大豆油、2.5g维生素C，加入200ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用膜蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜，加入200ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，高压均质机均质至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为116.4nm(具体见表4和图4)，包封率大于90％。
表4人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000333
Figure BDA0002661037120000341
实施例5人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的制备
将7g大豆卵磷脂、6g人参皂苷Rg5、2g紫杉醇、4g大豆油、2.5g胆固醇、0.5g维生素E，加入200ml的乙醚中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在30-40℃下，使用膜蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜，加入200ml 5％蔗糖水溶液(所述的百分比是指蔗糖的质量占蔗糖水溶液总质量的百分比)，高压匀质机匀质至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为109.8nm(具体见表5和图5)，包封率大于90％。
表5人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000342
实施例6人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的制备
将8g氢化大豆卵磷脂(HSPC)、6g人参皂苷Rg5、2g紫杉醇、4g大豆油、0.5g维生素E，加入200ml的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在35-45℃下，使用膜蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜，加入200ml 5％甘露醇水溶液(所述的百分比是指甘露醇的质量占甘露醇水溶液总质量的百分比)，高压均质机匀质至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为186.7nm(具体见表6和图6)，包封率大于90％。
表6人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000351
实施例7人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的制备
将8g二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、6g人参皂苷Rg5、1g紫杉醇、4g大豆油、0.1g抗坏血酸，加入200ml的乙醇中，在55-65℃下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用膜蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜，加入200ml为5％的木糖醇水溶液(所述的百分比是指木糖醇的质量占木糖醇水溶液总质量的百分比)，高压均质机均质至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为146.7nm(具体见表7和图7)，包封率大于90％。
表7人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000352
实施例8人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的制备
将8g二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG(2000))、6g人参皂苷Rg5、2g紫杉醇、4g油酸钠、0.1g丙二醇，加入200ml的氯仿中，在10-20℃下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃温度下，使用膜蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜，加入200ml 5％的乳糖水溶液(所述的百分比是指乳糖的质量占乳糖水溶液总质量的百分比)，高压均质机匀质至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)气体，密封，即得所述人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为217.2nm(具体见表8和图8)，包封率大于90％。
表8人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000361
实施例9人参皂苷Rg5多西他赛脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g多西他赛、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5多西他赛脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含多西他赛20mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5多西他赛脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为158nm(具体见表9和图9)，包封率大于90％。
表9人参皂苷Rg5多西他赛脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000362
Figure BDA0002661037120000371
实施例10人参皂苷Rg5盐酸伊立替康脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g盐酸伊立替康、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃温度下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5盐酸伊立替康脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含盐酸伊立替康100mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5盐酸伊立替康脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为121.6nm(具体见表10和图10)。
表10人参皂苷Rg5盐酸伊立替康脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000372
实施例11人参皂苷Rg5羟基喜树碱脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g羟基喜树碱、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5羟基喜树碱脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含羟基喜树碱10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5羟基喜树碱脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为177.9nm(具体见表11和图11)。
表11人参皂苷Rg5羟基喜树碱脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000381
实施例12人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g盐酸多柔比星、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含盐酸多柔比星10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为144.5nm(具体见表12和图12)。
表12人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000382
实施例13人参皂苷Rg5两性霉素B脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g两性霉素B、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5两性霉素B脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含两性霉素B10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)气体，密封，即得所述人参皂苷Rg5两性霉素B脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为119.2nm(具体见表13和图13)。
表13人参皂苷Rg5两性霉素B脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000391
实施例14人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g盐酸多柔比星、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃温度下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含盐酸多柔比星10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为158.2nm(具体见表14和图14)。
表14人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000392
Figure BDA0002661037120000401
实施例15人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g硫酸长春新碱、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃温度下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含硫酸长春新碱1mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为177.9nm(具体见表15和图15)。
表15人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000402
实施例16人参皂苷Rg5奥沙利铂脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g奥沙利铂、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5奥沙利铂脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含奥沙利铂50mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5奥沙利铂脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为122.7nm(具体见表16和图16)。
表16人参皂苷Rg5奥沙利铂脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000403
Figure BDA0002661037120000411
实施例17人参皂苷Rg5顺铂脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g顺铂、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5顺铂脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含顺铂30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5顺铂脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为124.3nm(具体见表17和图17)。
表17人参皂苷Rg5顺铂脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000412
实施例18人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g氟尿嘧啶、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含氟尿嘧啶250mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为140.3nm(具体见表18和图18)。
表18人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000421
实施例19人参皂苷Rg5常规SiRNA脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g常规SiRNA、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5常规SiRNA脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含常规SiRNA20mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5常规SiRNA脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为84.58nm(具体见表19和图19)。
表19人参皂苷Rg5常规SiRNA脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000422
实施例20人参皂苷Rg5卡巴他赛脂质体
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.2g卡巴他赛、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5卡巴他赛脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含卡巴他赛250mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5卡巴他赛脂质体。
实施例21人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在35-40℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml6.6％硫酸铵水溶液(所述的百分比是指硫酸铵的质量占硫酸铵水溶液总质量的百分比)，超声至空白脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一空白脂质体溶液，然后将空白脂质体溶液在0.15M(0.15mol/L)的葡萄糖溶液中透析12h后，根据透析后空白脂质体溶液的体积加入相应质量的海藻糖，使得海藻糖在所述的空白脂质体溶液的质量分数达到10％，所述的百分比是指海藻糖的质量占空白脂质体溶液总质量的质量百分比。加入1mL质量分数为20％盐酸多柔比星水溶液(盐酸多柔比星0.2g)，在37℃水浴保温30min。通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含盐酸多柔比星10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为180.8nm(具体见表20和图20)。
表20人参皂苷Rg5盐酸多柔比星脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000431
实施例22人参皂苷Rg5两性霉素B脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在35-40℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入1mL质量分数为20％两性霉素B DMSO溶液(两性霉素B的质量为0.22g)和20ml质量分数为10％海藻糖水溶液(海藻糖2g)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一负载活性物质的脂质体溶液，将负载活性物质的脂质体溶液倾入透析袋中，置100倍体积的纯水中于室温下透析12h。通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5两性霉素B脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含两性霉素B10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)气体，密封，即得所述人参皂苷Rg5两性霉素B脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为216.4nm(具体见表21和图21)。
表21人参皂苷Rg5两性霉素B脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000441
实施例23人参皂苷Rg5表阿霉素脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在35-40℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml质量分数为6.6％硫酸铵水溶液，超声至空白脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一空白脂质体水溶液，然后将空白脂质体溶液在0.15M的葡萄糖溶液中透析12h后，根据透析后空白脂质体溶液的体积加入相应质量的海藻糖，使得海藻糖在所述的空白脂质体溶液的质量分数达到10％，所述的百分比是指海藻糖的质量占空白脂质体溶液总质量的质量百分比；加入1mL质量分数为20％表阿霉素水溶液(表阿霉素0.2g)，在37℃水浴保温30min。通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5表阿霉素脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含表阿霉素10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5表阿霉素脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为187.6nm(具体见表22和图22)。
表22人参皂苷Rg5表阿霉素脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000442
Figure BDA0002661037120000451
实施例24人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml质量分数为10％海藻糖和质量分数为5.76％的柠檬酸的混合水溶液，超声至空白脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一空白脂质体溶液，加入1mL质量分数为20％硫酸长春新碱水溶液(硫酸长春新碱0.2g)及6mL质量分数为7.1％磷酸氢二钠水溶液，加纯水使外水相pH值为7.30，在60℃水浴保温30min。通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含硫酸长春新碱1mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为188.3nm(具体见表23和图23)。
表23人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000452
实施例25人参皂苷Rg5奥沙利铂脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃温度下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml质量分数为1％奥沙利铂和质量分数为10％海藻糖的混合水溶液(奥沙利铂0.2g，海藻糖2g)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5奥沙利铂脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含奥沙利铂50mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5奥沙利铂脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为180.8nm(具体见表24和图24)。
表24人参皂苷Rg5奥沙利铂脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000461
实施例26人参皂苷Rg5顺铂脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml质量分数为1％顺铂和质量分数为10％海藻糖的混合水溶液(顺铂0.2g，海藻糖2g)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5顺铂脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含顺铂30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5顺铂脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为143.6nm(具体见表25和图25)。
表25人参皂苷Rg5顺铂脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000462
Figure BDA0002661037120000471
实施例27人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml质量分数为1％氟尿嘧啶和质量分数为10％海藻糖的混合水溶液(氟尿嘧啶0.2g，海藻糖2g)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含氟尿嘧啶250mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为145.6nm(具体见表26和图26)。
表26人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000472
实施例28人参皂苷Rg5常规SiRNA脂质体的制备
将0.5g DOTAP、0.3g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.4g大豆油、0.5g维生素C，加入20ml的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃温度下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜，加入20ml质量分数为10％海藻糖和质量分数为1％的常规SiRNA的混合水溶液(SiRNA 0.2g，海藻糖2g)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5常规SiRNA脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含常规SiRNA20mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5常规SiRNA脂质体。经检测，该脂质体的平均粒径为215.0nm(具体见表27和图27)。
表27人参皂苷Rg5常规SiRNA脂质体的粒径、粒径分布、强度和宽度
Figure BDA0002661037120000473
Figure BDA0002661037120000481
实施例29人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的制备
将8g蛋黄卵磷脂、6g人参皂苷Rg5、1.5g紫杉醇、4g大豆油和0.5g维生素C，加入200mL的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在35-45℃下，使用膜蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜，加入200mL10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，高压均质机均质至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体。
实施例30人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的制备
将14g蛋黄卵磷脂、12g人参皂苷Rg5、4g紫杉醇、8g大豆油、0.5g胆固醇和0.1g维生素E，加入400mL氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在35-45℃下，使用旋转蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜，加入400mL 5％蔗糖水溶液(所述的百分比是指蔗糖的质量占蔗糖水溶液总质量的百分比)；高压匀质机匀质至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)气体，密封，即得所述人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体。
实施例31人参皂苷Rg5多西他赛脂质体的制备
将8g蛋黄卵磷脂、6g人参皂苷Rg5、3g多西他赛、4g大豆油和0.5g维生素C，加入200mL氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在35-45℃下，使用膜蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜，加入200mL 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5多西他赛脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含多西他赛20mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5多西他赛脂质体。
实施例32人参皂苷Rg5盐酸伊立替康脂质体的制备
将8g蛋黄卵磷脂、6g人参皂苷Rg5、2g盐酸伊立替康和4g大豆油，加入200mL氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在35-45℃温度下，使用旋转蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜，加入200mL 10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指海藻糖的质量占海藻糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5盐酸伊立替康脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含盐酸伊立替康100mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5盐酸伊立替康脂质体。
应用实施例
下述应用实施例中C(μM)是指浓度，其中，Taxol+Rg5的浓度是指Taxol+Rg5是指人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体中，紫杉醇的浓度和人参皂苷Rg5的浓度，例如5+30是指人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体中紫杉醇的浓度为5μM，人参皂苷Rg5的浓度为30μM；Time(d)是指时间(天)。
下述应用实施例中，当出现人参皂苷Rg5空白脂质体时，如未作特别说明，均是指实施例1制得的人参皂苷Rg5空白脂质体(简称Rg5空)；当出现人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体时，如未作特别说明，均是指实施例4制得人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体(简称Taxol+Rg5)。普通紫杉醇注射剂常规市售产品(简称Taxol)。
应用例1人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体对人肺癌细胞(A549)/人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的体外细胞实验与体内动物实验
1、体外细胞实验
根据体外细胞实验方法，测定普通紫杉醇注射剂(Taxol)、人参皂苷Rg5空白脂质体(Rg5空)、人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体(Taxol+Rg5)分别对人肺癌细胞(A549)和人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)细胞的存活率，设置表28和29中的10个药物浓度，具体实验数据见表28和29，以及图28和图29：图28为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对人肺癌细胞(A549)的细胞存活率曲线图；图29为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的细胞存活率的曲线图。
表28 Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对人肺癌细胞(A549)的存活率
Figure BDA0002661037120000491
Figure BDA0002661037120000501
由表28和图28可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对人肺癌细胞(A549)的活性较弱，Taxol+Rg5比普通紫杉醇注射剂的活性略强。
表29 Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对耐紫杉醇人肺癌细胞(A549/T)的存活率
Figure BDA0002661037120000502
由表29和图29可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)具有较好活性，Taxol+Rg5比普通紫杉醇注射液对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)具有更强活性，细胞存活率更低，尤其在低剂量下更加明显。
2、根据IC50实验方法，测定Rg5空、Taxol和Taxol+Rg5分别对人肺癌细胞(A549)、人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的IC50值，实验数据如表30：
表30
细胞株 Rg5空 Taxol Taxol+Rg5
A549/T 106.05μM 29.99μM 4.357μM(26.14μM)
A549 10.68μM 77.46nM 65.73nM(0.3944μM)
备注：Taxol+Rg5对应的IC50值4.357μM(26.14μM)中，4.357μM是指Taxol+Rg5中Taxol的IC50值，而26.14μM是指Taxol+Rg5中Rg5空的IC50值。
由表30可知：对人肺癌细胞(A549)来说，Taxol+Rg5的活性比普通紫杉醇注射液增强1.1-1.2倍，对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)，Taxol+Rg5的活性比普通紫杉醇注射液增强了6-8倍。
3、体外细胞摄取实验
DAPI为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100％)。DAPI常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到细胞核的形态变化。经DAPI染色后，荧光显微镜下观察可以看到细胞核为蓝色荧光。而当经DAPI染色后的细胞置于尼罗红培养液中时，在特定条件下，细胞可摄取尼罗红，红色荧光和蓝色荧光叠加后，可产生蓝紫色荧光，可根据蓝紫色荧光的强弱判断尼罗红摄取量的多少。
将人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)接种于24孔板中，培养过夜后，Nil(游离尼罗红)、Nil-Lip和Rg5-Nil-Lip用无血清培养液配成含等量Nil(10μg·mL-1)的培养液，避光条件下加入各孔中，每组8孔，避光培养2h后，弃去培养基，PBS洗3次。同组实验的前4孔用4％多聚甲醛在37℃固定30min，PBS洗3次，DAPI(4’,6’-二脒基-2-苯基吲哚)染色，PBS(磷酸盐缓冲液)洗3次，荧光倒置显微镜下观察，见图30，其中，图30-A、图30-B、图30-C分别为Nil、Nil-lip、Rg5-Nil-lip的荧光倒置显微镜观察图。Nil＝游离尼罗红；Nil-lip＝尼罗红脂质体(即用普通空白脂质体包封尼罗红)；Rg5-Nil-lip＝尼罗红Rg5脂质体(即用人参皂苷Rg5空白脂质体包封尼罗红，具体可参照实施例4，将紫杉醇替换为尼罗红即可)。
图30-A为蓝色光，图30-B有少许紫红色光；图30-C几乎全部为紫红色光，可见，人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)对人参皂苷Rg5脂质体的摄取明显增多。
4、小动物活体成像
取左前肢皮下肿瘤大小为100mm3左右，大小均一，无出血坏死的BALB/C-nu/nu小鼠，分别尾静脉注射含10％载近红外荧光探针(IR783)的人参皂苷Rg5脂质体(以下简称实验组，即用人参皂苷Rg5空白脂质体包封近红外荧光探针(IR783)，具体可参照实施例4，将紫杉醇替换为近红外荧光探针(IR783)即可)和载近红外荧光探针(IR783)普通脂质体(以下简称对照组，即用普通空白脂质体包封近红外荧光探针(IR783)，制备方法为本领域常规的载近红外荧光探针(IR783)脂质体的制备方法)，后于2、6和10h用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布，具体见图31和图32。其中，图31-A、图31-B和图31-C分别为对照组在2、6和10h用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布图；31-G是指荧光标尺，按荧光强弱，依次是红黄绿蓝，红色表示荧光最强，蓝色表示微弱荧光；图31-D、图31-E和图31-F分别为实验组在2、6和10h用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布图。由图31可知，对照组小鼠左前肢无荧光，而实验组小鼠左前肢荧光很强，说明人参皂苷Rg5空白脂质体对肿瘤细胞的靶向性很强。
图32为对照组和实验组小鼠离体脏器的荧光图。也就是活体成像实验结束后，将实验组和对照组小鼠的主要脏器以及肿瘤取出，再进行离体的荧光检测；其中，图32-A和图32-B分别为对照组和实验组小鼠的离体脏器荧光图。图32-C为荧光标尺，按荧光强弱，依次是红黄绿蓝，红色表示荧光最强，蓝色表示微弱荧光。图32-B的肿瘤荧光很强，说明人参皂苷Rg5空白脂质体对肿瘤细胞具有较强的靶向性。
由图31和图32可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对A549肺癌的靶向性明显增加。
5、体内药效实验
根据体内药效实验方法，将27只皮下荷瘤裸鼠随机分为3组(每组9只)，分别设为空白对照组(Control组，0.9％NaCl)、Taxol+Rg5组(人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体)和Abraxane组(白蛋白紫杉醇组，简称Abr组)。将相应制剂经尾静脉注射(按照25mg·kg-1的剂量给药)。每隔两天记录每组小鼠的体重变化，并用游标卡尺测量肿瘤最长直径和最短直径，瘤体积由以下公式计算：V＝(dmax×dmin2)/2，其中dmin和dmax分别为肿瘤的短径和长径(mm)；根据测量的结果计算相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为给药时测量的肿瘤体积，Vt为每隔两天测量的肿瘤体积。
5.1、Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人肺癌细胞(A549)的抑瘤作用的比较(药效)，具体实验数据见表31和图33，其中，图33为Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人肺癌细胞A549的抑瘤曲线图。
表31 Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人肺癌细胞A549抑瘤作用
Figure BDA0002661037120000521
Figure BDA0002661037120000531
由表31和图33可知：相同时间下，Control组的肿瘤体积最大，而Taxol+Rg5组最小，且随着时间延长，到第21天时，对照组的肿瘤体积到达了12.274；而Taxol+Rg5组仅有2.77，Abraxane组为4.198。可见，Taxol+Rg5对人肺癌A549荷瘤小鼠的药效比白蛋白紫杉醇略强。
5.2、Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的抑瘤作用的比较(药效)，具体实验数据见表32和图34，其中，图34为Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的抑瘤曲线图。
表32 Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人肺紫杉醇耐药株A549/T抑瘤作用
Figure BDA0002661037120000532
由表32和图34可知：相同时间下，Control组的肿瘤体积最大，而Taxol+Rg5组最小，且随着时间延长，到第21天时，Control组的肿瘤体积到达了20.975；而Taxol+Rg5组仅有4.825，Abraxane组为11.504。可见，Taxol+Rg5对人肺癌紫杉醇耐药株A549/T的荷瘤小鼠的药效比白蛋白紫杉醇具有明显优势。
6、人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体对A549/T抗肿瘤转移实验
将上述体内药效实验中对照组(Control组)和Taxol+Rg5组体内含人肺癌紫杉醇耐药株A549/T的荷瘤小鼠以及正常小鼠处死后，取小鼠相应脏器或瘤组织进行石蜡切片、苏木精-伊红染色，于光学显微镜下观察，具体见图35。其中，图35-A、图35-D和图35-G分别为正常小鼠肺、肝脏和肿瘤组织石蜡切片后经苏木精-伊红染色后显微镜观察图。图35-B、图35-E和图35-H为对照组荷瘤小鼠肺、肝脏和肿瘤组织石蜡切片后经苏木精-伊红染色后显微镜观察图。图35-C、图35-F和图35-I为实验组(经人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体治疗)小鼠肺、肝脏和肿瘤组织石蜡切片后经苏木精-伊红染色后显微镜观察图。
由图35-A、图35-B和图35-C可以看出，实验组小鼠肺部组织石蜡切片，经苏木精-伊红染色染色后，颜色分布等均与正常小鼠相同，说明实验组小鼠肺部没有肿瘤转移，而对照组小鼠肺部组织石蜡切片，经苏木精-伊红染色染色后，颜色分布不均匀，说明对照组小鼠肺部肿瘤已转移。
由图35可知：Taxol+Rg5对A549/T的肺部肿瘤转移具有较好的抑制作用
应用例2
根据体外细胞实验方法，测定Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5分别对人乳腺癌细胞(MCF-7)和人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)体外细胞实验与体内动物实验
1、体外药效实验方法
根据体外细胞实验方法，设置表33和32中的9个浓度，具体存活率数据和曲线图见表33-34和图36-37：图36为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对人乳腺癌细胞(MCF-7)的细胞存活率的曲线图；图37为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的细胞存活率的曲线图。
表33 Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对人乳腺癌细胞(MCF-7)的存活率
Figure BDA0002661037120000541
由表33和图36可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对MCF-7的活性较弱，肿瘤细胞存活率高，Taxol+Rg5对MCF-7正常细胞的体外细胞活性比普通紫杉醇注射剂略强，肿瘤细胞存活率低。
表34 Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的存活率
Figure BDA0002661037120000551
由表34和图37可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)具有较好活性，Taxol+Rg5比普通紫杉醇注射液对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)具有更强活性，细胞存活率更低，尤其在低剂量下更加明显。
2、根据IC50实验方法，测定Rg5空、Taxol和Taxol+Rg5分别对人乳腺癌细胞(MCF-7)、人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的IC50值，实验数据如表35：
表35
细胞株 Rg5空 Taxol Taxol+Rg5
MCF-7/T 86.24μM 18.77μM 7.800μM(46.80μM)
MCF-7 11.29μM 58.90nM 52.41nM(0.3145μM)
由表35可知：对人乳腺癌细胞(MCF-7)，Taxol+Rg5的活性比普通紫杉醇注射液增强1.1-1.2倍之间，对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)，Taxol+Rg5的活性比普通紫杉醇注射液增强了2-3倍之间。
3、体内药效实验
将27只皮下荷瘤裸鼠随机分为3组(每组9只)，分别设为空白对照组(Control组，0.9％NaCl)、Taxol+Rg5组(即人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体组)和Abraxane组(白蛋白紫杉醇组，简称Abr组)。将相应制剂经尾静脉注射(按照25mg·kg-1的剂量给药)。每隔两天记录每组小鼠的体重变化，并用游标卡尺测量肿瘤最长直径和最短直径，瘤体积由以下公式计算得到：V＝(dmax×dmin2)/2，其中dmin和dmax分别为肿瘤的短径和长径(mm)；根据测量的结果计算相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为给药时测量的肿瘤体积，Vt为每隔两天测量的肿瘤体积。
3.1、Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌细胞(MCF-7)的抑瘤作用的比较(药效)，具体实验数据见表36和图38，其中，图38为Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌细胞(MCF-7)的抑瘤曲线图。
表36 Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌细胞(MCF-7)的抑瘤作用
Figure BDA0002661037120000561
由表36和图38可知：相同时间下，Control组的肿瘤体积最大，而Taxol+Rg5组最小，且随着时间延长，到第21天时，Control组的肿瘤体积到达了8.214；而Taxol+Rg5组仅有2.64，Abraxane组为3.51。可见，Taxol+Rg5对人乳腺癌(MCF-7)荷瘤小鼠的药效比白蛋白紫杉醇略强。
3.2、Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤作用的比较(药效)，具体实验数据见表37和图39，其中，图39为Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤曲线图。
表37 Control组、Taxol+Rg5组和Abraxane组对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤作用
Figure BDA0002661037120000562
Figure BDA0002661037120000571
由表37和图39可知：相同时间下，Control组的肿瘤体积最大，而Taxol+Rg5组最小，且随着时间延长，到第14天时，Control组的肿瘤体积到达了22.157；而Taxol+Rg5组仅有4.32，Abraxane组为8.78。可见，Taxol+Rg5对耐紫杉醇人乳腺癌(MCF-7/T)荷瘤小鼠的药效比白蛋白紫杉醇略强。
应用例3人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体对人卵巢癌细胞(A2780)/人卵巢癌紫杉醇耐药株(A2780/T)体外细胞实验
1、体外药效实验方法
根据体外细胞实验方法，测定Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人卵巢癌细胞(A2780)/人卵巢癌紫杉醇耐药株(A2780/T)的存活率，设置表30和31中的10个药物浓度，具体存活率数据和曲线图见表38和39以及图40和41：图40为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人卵巢癌细胞(A2780)的细胞存活率的曲线图；图41为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人卵巢癌紫杉醇耐药株(A2780/T)的细胞存活率的曲线图。
表38 Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对卵巢癌细胞(A2780)的存活率
Figure BDA0002661037120000572
由表38和图40可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对人卵巢癌细胞(A2780)的活性较弱，Taxol+Rg5对人卵巢癌细胞(A2780)的体外细胞株活性比普通紫杉醇注射剂、白蛋白紫杉醇注射剂都略强。
表39 Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人卵巢癌紫杉醇耐药株(A2780/T)的存活率
Figure BDA0002661037120000581
由表39和图41可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对人卵巢癌紫杉醇耐药株(A2780/T)具有较强活性，Taxol+Rg5对人卵巢癌紫杉醇耐药株(A2780/T)的活性比普通紫杉醇和白蛋白紫杉醇注射剂都强。
2、根据IC50实验方法，测定Rg5空、Taxol、Taxol+Rg5和Abraxane分别对人卵巢癌细胞(A2780)、人卵巢癌紫杉醇耐药株(A2780/T)的IC50值，实验数据见表40：
表40
细胞株 Rg5空 Taxol Taxol+Rg5 Abraxane
A2780/T 44.44μM 14.11μM 3.764μM(22.59μM) 17.88μM
A2780 40.79μM 37.81nM 33.64nM(0.2018μM) 48.44nM
由表40可知：对人卵巢癌细胞(A2780)，Taxol+Rg5的活性比紫杉醇和白蛋白紫杉醇注射液增强1.1-1.5倍之间，对人卵巢癌紫杉醇耐药株(A2780/T)，Taxol+Rg5的活性比紫杉醇和白蛋白紫杉醇注射液增强了3-5倍之间。
应用例4人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体对人前列腺癌细胞(PC-3)/人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)体外细胞实验
1、体外药效实验方法
根据体外细胞实验方法，测定Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人前列腺癌细胞(PC-3)/人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的存活率，设置表41和42中的10个药物浓度，具体存活率数据和存活率曲线见表41和42以及图42和43如下：图42为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人前列腺癌细胞(PC-3)的细胞存活率的曲线图；图43为Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的细胞存活率的曲线图。
表41 Taxol、Rg5、Taxol+Rg5、Abraxane对人前列腺癌细胞(PC-3)的存活率
Figure BDA0002661037120000591
由表41和图42可知：人参皂苷Rg5空白脂质体在低剂量时对人前列腺癌细胞(PC-3)的活性较弱，但在高剂量时活性较强。Taxol+Rg5对人前列腺癌细胞(PC-3)的活性与普通紫杉醇注射剂、白蛋白紫杉醇注射液无明显区别。
表42 Taxol、Rg5空、Taxol+Rg5、Abraxane对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的存活率
Figure BDA0002661037120000592
Figure BDA0002661037120000601
由表42和图43可知：人参皂苷Rg5空白脂质体在高剂量时对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的活性较强。Taxol+Rg5对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的活性比普通紫杉醇注射剂、白蛋白紫杉醇注射液优势明显。
2、根据IC50实验方法，测定Rg5空、Taxol、Taxol+Rg5和Abraxane分别对人前列腺癌细胞(PC-3)、人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的IC50值，实验数据见表43：
表43
细胞株 Rg5空 Taxol Taxol+Rg5 Abraxane
PC-3/T 29.01μM 16.20μM 0.6685μM(4.011μM) 13.98μM
PC-3 12.70μM 164.6nM 160.4nM(0.9627μM) 205.2nM
由表43可知：对人前列腺癌细胞(PC-3)，Taxol+Rg5的活性比紫杉醇注射剂和白蛋白紫杉醇注射液增强1.0-1.5倍之间，对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)，Taxol+Rg5的活性比紫杉醇注射剂和白蛋白紫杉醇注射液增强了20-30倍之间。
应用例5人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体对人原位胰腺癌细胞(BxPC-3)/耐紫杉醇胰腺癌(BxPC-3/T)细胞的体外细胞实验
1、体外药效实验方法
根据体外细胞实验方法，测定Taxol、Rg5空和Taxol+Rg5对人胰腺癌细胞(BxPC-3)/人胰腺癌耐紫杉醇细胞株(BxPC-3/T)的存活率，设置表44和45中的9个药物浓度，具体细胞存活率数据和细胞存活率曲线见表44和45以及图44和45：图44为Taxol、Rg5空和Taxol+Rg5对人胰腺癌细胞(BxPC-3)的细胞存活率的曲线图；图45为Taxol、Rg5空和Taxol+Rg5对人胰腺癌耐紫杉醇细胞株(BxPC-3/T)的细胞存活率的曲线图。
表44 Taxol、Rg5空和Taxol+Rg5对人胰腺癌细胞(BxPC-3)的存活率
Figure BDA0002661037120000602
Figure BDA0002661037120000611
由表44和图44可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对人胰腺癌细胞(BxPC-3)的活性较强，Taxol+Rg5对人胰腺癌细胞(BxPC-3)的活性比普通紫杉醇注射剂略强。
表45 Taxol、Rg5空和Taxol+Rg5对人胰腺癌耐紫杉醇细胞株(BxPC-3/T)的存活率
Figure BDA0002661037120000612
由表45和图45可知：人参皂苷Rg5对人胰腺癌耐紫杉醇细胞株(BxPC-3/T)的活性较强，Rg5紫杉醇脂质体对人胰腺癌耐紫杉醇细胞株(BxPC-3/T)的活性比普通紫杉醇注射剂强。
2、根据IC50实验方法，测定Rg5空、Taxol和Taxol+Rg5分别对人胰腺癌细胞(BxPC-3)、人胰腺癌耐紫杉醇细胞株(BxPC-3/T)的IC50值，实验数据见表46：
表46
细胞株 Rg5空 Taxol Taxol+Rg5
BxPC-3/T 91.60μM 20.98μM 7.850μM(47.10μM)
BxPC-3 90.66μM 9.483μM 7.850μM(47.10μM)
由表46可知：对人胰腺癌细胞(BxPC-3)，Taxol+Rg5的活性比普通紫杉醇增强1.1-1.5倍之间，对人胰腺癌耐紫杉醇细胞株(BxPC-3/T)，Taxol+Rg5的活性比紫杉醇注射剂增强了2-3倍之间。
应用例6
人参皂苷Rg5多西他赛脂质体对乳腺癌细胞(MCF-7)/人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)体外细胞实验与体内动物实验
1、体外药效实验方法
根据体外细胞实验方法，测定普通多西他赛注射剂(简称Doc)、人参皂苷Rg5空白脂质体(Rg5空)和人参皂苷Rg5多西他赛脂质体(Doc+Rg5，实施例9制得)对人乳腺癌细胞(MCF-7)/人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的细胞存活率，设置表47和48中的9个药物浓度，具体细胞存活率数据和存活率曲线见表47和48以及图46和图47：图46为Doc、Rg5空和Doc+Rg5对乳腺癌细胞(MCF-7)的细胞存活率的曲线图；图47为Doc、Rg5空和Doc+Rg5对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的细胞存活率的曲线图。
表47 Doc、Rg5空和Doc+Rg5对人乳腺癌细胞(MCF-7)的存活率
Figure BDA0002661037120000621
由表47和图46可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对乳腺癌细胞(MCF-7)的活性较弱，Doc+Rg5对乳腺癌细胞(MCF-7)活性比普通多西他赛注射剂略强。
表48 Doc、Rg5空和Doc+Rg5对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的存活率
Figure BDA0002661037120000622
Figure BDA0002661037120000631
由表48和图47可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的活性较强，Doc+Rg5对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)活性比普通多西他赛注射剂强。
2、根据IC50实验方法，测定Doc、Rg5空和Doc+Rg5分别对人乳腺癌细胞(MCF-7)、人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的IC50值，实验数据见表49：
表49
细胞株 Rg5空 Doc Doc+Rg5
MCF-7/T 86.24μM 12.11μM 6.251μM(37.51μM)
MCF-7 11.29μM 57.92nM 45.44nM(0.2726μM)
由表49可知：对人乳腺癌细胞(MCF-7)，Doc+Rg5的活性比普通多西他赛增强1.2-1.5倍之间，对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)，Doc+Rg5的活性比多西他赛增强了1.5-2倍之间。
3、体内药效实验
将27只皮下荷瘤裸鼠随机分为3组(每组9只)，分别设为空白对照组(Control组，0.9％NaCl)、Doc+Rg5组和Abraxane组。将相应制剂经尾静脉注射(按照25mg·kg-1的剂量给药)。每隔两天记录每组小鼠的体重变化，并用游标卡尺测量肿瘤最长直径和最短直径，瘤体积由以下公式计算得到：V＝(dmax×dmin2)/2，其中dmin和dmax分别为肿瘤的短径和长径(mm)；根据测量的结果计算相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为给药时测量的肿瘤体积，Vt为每隔两天测量的肿瘤体积。
3.1Control组、Doc+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌细胞(MCF-7)抑瘤作用比较(药效)，具体实验数据见表50和图48，其中，图48为Control组、Doc+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌细胞(MCF-7)的抑瘤曲线图。
表50 Control组、Doc+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌细胞(MCF-7)抑瘤作用
Figure BDA0002661037120000632
Figure BDA0002661037120000641
由表50和图48可知：Doc+Rg5对人乳腺癌细胞(MCF-7)荷瘤小鼠的药效比白蛋白紫杉醇注射液略强。
3.2Control组、Doc+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤作用比较，具体实验数据见表51和图49，其中，图49为Control组、Doc+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤曲线图。
表51 Control组、Doc+Rg5组和Abraxane组对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤作用
Figure BDA0002661037120000642
由表51和图49可知：Doc+Rg5对人乳腺癌紫杉醇耐药株(MCF-7/T)荷瘤小鼠的药效比白蛋白紫杉醇注射液优势明显。
应用例7
人参皂苷Rg5卡巴他赛脂质体对人前列腺癌细胞(PC-3)/人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)体外细胞实验
1、体外药效实验方法
根据体外细胞实验方法，测定普通卡巴他赛注射剂(Cab)、人参皂苷Rg5空白脂质体(Rg5空)和人参皂苷Rg5卡巴他赛脂质体(Cab+Rg5，实施例20制得)分别对人前列腺癌细胞(PC-3)/人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的存活率，设置表44和45中的10个药物浓度，具体细胞存活率数据和存活率曲线见表52和53以及图50和51；图50为Cab、Rg5空和Cab+Rg5对人前列腺癌细胞(PC-3)的细胞存活率的曲线图；图51为Cab、Rg5空和Cab+Rg5对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的细胞存活率的曲线图。
表52 Cab、Rg5空和Cab+Rg5对人前列腺癌细胞(PC-3)的存活率
Figure BDA0002661037120000651
由表52和图50可知：)在低剂量时，人参皂苷Rg5空白脂质体对人前列腺癌细胞(PC-3)活性较弱，而高剂量时活性较强。Cab+Rg5对人前列腺癌细胞(PC-3)的活性比普通卡巴他赛注射剂略强。
表53 Cab、Rg5空和Cab+Rg5对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的存活率
Figure BDA0002661037120000652
Figure BDA0002661037120000661
由表53和图51可知：在低剂量时，人参皂苷Rg5空白脂质体对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)活性较弱，高剂量时活性较强。Cab+Rg5对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)活性比普通卡巴他赛注射剂略强。
2、根据IC50实验方法，测定Cab、Rg5空和Cab+Rg5分别对人前列腺癌细胞(PC-3)、人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)的IC50值，实验数据见表54。
表54
细胞株 Rg5空 Cab Cab+Rg5
PC-3/T 29.01μM 2.809μM 0.2618μM(1.571μM)
PC-3 12.70μM 72.85nM 58.96nM(0.3538μM)
由表54可知：对人前列腺癌细胞(PC-3)，Cab+Rg5的活性比普通卡巴他赛注射剂增强1.1-1.5倍之间，对人前列腺癌紫杉醇耐药株(PC-3/T)，Cab+Rg5的活性比普通卡巴他赛注射剂增强了10-20倍之间。
应用例8
人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)体外细胞实验与体内动物实验
1、体外药效实验方法
根据体外细胞实验方法，测定人参皂苷Rg5空白脂质体(Rg5空)、普通氟尿嘧啶脂质体(FU)和人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体(FU+Rg5，实施例18制得)对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)的细胞存活率和细胞抑制率，设置表55中的10个药物浓度，具体细胞存活率和细胞抑制率数据见表55和图52，图52为FU+Rg5、Rg5空和FU对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)的细胞存活率的曲线图。
表55 FU+Rg5、Rg5空和FU对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)细胞存活率和抑制率
Figure BDA0002661037120000662
Figure BDA0002661037120000671
2、根据IC50实验方法，测定FU+Rg5、Rg5空和FU分别对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)的IC50值，实验数据见表56。
表56
细胞株 Rg5空 FU FU+Rg5
Bel/FU 114.3μM 32.49μM 11.89μM(2.017μM)
由表55、56和图52可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)的细胞活性较弱，FU+Rg5对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)的细胞活性比普通氟尿嘧啶脂质体优势明显。对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)，FU+Rg5的活性比普通氟尿嘧啶脂质体增强3倍。
2、体内药效实验方法：裸小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至平均体积为100mm3左右后将动物随机分组。普通氟尿嘧啶脂质体(FU)单用组剂量为5mg/kg，每周静脉注射给药一次，连续给药三周；人参皂苷Rg5空白脂质体(Rg5空)单用150mg/kg组，每周静脉注射给药一次，连续给药三周；人参皂苷Rg5氟尿嘧啶脂质体(FU+Rg5)组剂量为5+150mg/kg，同样每周静脉注射给药一次，连续给药三周；溶剂对照组则给等量生理盐水。整个实验过程中，每2天测量移植瘤直径。肿瘤体积(tumor volume,TV)的计算公式为：TV＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示长、宽。根据测量的结果计算相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。
Rg5空、FU和FU+Rg5对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)的抑瘤作用的比较(药效)，具体实验数据见表57和图53，其中，图53为Rg5空、FU和FU+Rg5对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)的抑瘤曲线图。
表57 Rg5空、FU+Rg5和FU对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)的抑瘤作用
Figure BDA0002661037120000681
由表57和图53可知：FU+Rg5对人肝癌氟尿嘧啶耐药株(Bel/FU)荷瘤小鼠的药效比普通氟尿嘧啶优势明显。
应用例9
人参皂苷Rg5顺铂脂质体对人胃癌顺铂耐药株(SGC-7901/DDP)体外细胞实验与体内动物实验
1、体外药效实验方法
根据体外细胞实验方法，测定人参皂苷Rg5空白脂质体(Rg5空)、普通顺铂脂质体(DDP)和人参皂苷Rg5顺铂脂质体(DDP+Rg5，实施例17制备得到)对人胃癌顺铂耐药株(SGC-7901/DDP)的细胞存活率和细胞抑制率；设置表58中的11个药物浓度，具体细胞存活率和细胞抑制率数据见表58和图54，图54为Rg5空、DDP和DDP+Rg5对人胃癌顺铂耐药株(SGC-7901/DDP)的细胞存活率的曲线图。
表58 Rg5空、DDP和DDP+Rg5对人胃癌顺铂耐药株(SGC-7901/DDP)的细胞存活率和细胞抑制率
Figure BDA0002661037120000682
Figure BDA0002661037120000691
2、根据IC50实验方法，测定Rg5空、DDP和DDP+Rg5对人胃癌顺铂耐药株(SGC-7901/DDP)的IC50值，实验数据见表59。
表59
细胞株 Rg5空 DDP DDP+Rg5
SGC-7901/DDP 204.7μM 27.02μM 5.839μM(2.285μM)
由表58、59和图54可知：人参皂苷Rg5对人胃癌顺铂耐药株(SGC-7901/DDP)的细胞活性较弱，DDP+Rg5对人胃癌顺铂耐药株(SGC-7901/DDP)的细胞活性比普通顺铂脂质体优势明显。对人胃癌顺铂耐药株(SGC-7901/DDP)的细胞活性，DDP+Rg5的活性比普通顺铂脂质体增强5倍。
3、体内药效实验方法：裸小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至平均体积为100mm3左右后将动物随机分组。普通顺铂脂质体(DDP)单用组剂量为6mg/kg，每周静脉注射给药一次，连续给药三周；人参皂苷Rg5空白脂质体(Rg5空)单用150mg/kg组，每周静脉注射给药一次，连续给药三周；人参皂苷Rg5顺铂脂质体(DDP+Rg5)组剂量为6+150mg/kg，同样每周静脉注射给药一次，连续给药三周；溶剂对照组则给等量生理盐水。整个实验过程中，每2天测量移植瘤直径。肿瘤体积(tumor volume,TV)的计算公式为：TV＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示长、宽。根据测量的结果计算相对肿瘤体积(relative tumorvolume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。
Rg5空、DDP和DDP+Rg5对人胃癌顺铂耐药株细胞(SGC-7901/DDP)的抑瘤作用的比较(药效)，具体实验数据见表60和图55，其中，图55为Rg5空、DDP和DDP+Rg5对人胃癌顺铂耐药株细胞(SGC-7901/DDP)的抑瘤曲线图。
表60 Rg5空、DDP和DDP+Rg5对人胃癌顺铂耐药株细胞(SGC-7901/DDP)的抑瘤作用
Figure BDA0002661037120000692
Figure BDA0002661037120000701
由表60和图55可知：DDP+Rg5对人胃癌顺铂耐药株(SGC-7901/DDP)荷瘤小鼠的药效比普通顺铂优势明显。
应用例10
人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)体外细胞实验与体内动物实验
1、体外药效实验方法
根据体外细胞实验方法，测定人参皂苷Rg5空白脂质体(Rg5空)、普通长春新碱脂质体(V)和人参皂苷Rg5硫酸长春新碱脂质体(V+Rg5，实施例15制得)对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的细胞存活率和细胞抑制率，设置表61中的11个药物浓度，具体数据细胞存活率和细胞抑制率数据见表61和图56，图56为Rg5空、V和V+Rg5对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的细胞存活率的曲线图。
表61 Rg5空、V和V+Rg5对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的细胞存活率和细胞抑制率
Figure BDA0002661037120000702
Figure BDA0002661037120000711
2、根据IC50实验方法，测定Rg5空、V和V+Rg5分别对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的IC50值，实验数据见表62。
表62
细胞株 Rg5空 V V+Rg5
HCT-8/V 65.94μM 1.673μM 0.8444μM(0.9082μM)
由表61、62和图56可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的细胞活性较弱，V+Rg5对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的细胞活性比普通长春新碱优势明显。对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的细胞活性，V+Rg5比普通长春新碱脂质体增强2倍。
3、体内药效实验方法：裸小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至平均体积为100mm3左右后将动物随机分组。普通长春新碱脂质体(V)单用组剂量为0.5mg/kg，每周静脉注射给药一次，连续给药三周；人参皂苷Rg5空白脂质体(Rg5空)单用150mg/kg组，每周静脉注射给药一次，连续给药三周；人参皂苷Rg5长春新碱脂质体(V+Rg5)组剂量为0.5+150mg/kg，同样每周静脉注射给药一次，连续给药三周；溶剂对照组则给等量生理盐水。整个实验过程中，每2天测量移植瘤直径。肿瘤体积(tumor volume,TV)的计算公式为：TV＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示长、宽。根据测量的结果计算相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。
Rg5空、V和V+Rg5对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的抑瘤作用的比较(药效)，具体实验数据见表63和图57，其中，图57为Rg5空、V和V+Rg5对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的抑瘤曲线图。
表63 Rg5空、V和V+Rg5对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)的抑瘤作用
Figure BDA0002661037120000712
Figure BDA0002661037120000721
由表63和图57可知：V+Rg5对人结肠癌长春新碱耐药株(HCT-8/V)荷瘤小鼠的药效比普通长春新碱脂质体优势明显。
应用例11
人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体对人胃癌细胞(SGC-7901)/人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)体外细胞实验与体内动物实验(口服制剂)
1、体外药效学实验：
根据体外细胞实验方法，测定人参皂苷Rg5空白脂质体(Rg5空)、普通紫杉醇注射液(Taxol)和人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体(Rg5+Taxol)分别对人胃癌细胞(SGC-7901)和人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)的细胞存活率；设置表64和66中的10个药物浓度，具体细胞存活率数据和存活率曲线见表64和66以及图58和图59。
表64 Rg5空、Taxol和Rg5+Taxol对人胃癌(SGC-7901)的细胞存活率
Figure BDA0002661037120000722
2、根据IC50实验方法，测定Rg5空、Taxol和Rg5+Taxol对人胃癌细胞(SGC-7901)的IC50值，实验数据见表65。
表65
/ Rg5空 Taxol Rg5+Taxol
IC<sub>50</sub>(μM) 77.4 1.51 0.523(3.50)
由表64、65和图58可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对人胃癌细胞(SGC-7901)的活性较弱，Rg5+Taxol体对人胃癌细胞(SGC-7901)活性比普通紫杉醇注射液活性较强。
表66 Rg5空、Taxol和Rg5+Taxol对人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)的细胞存活率
Figure BDA0002661037120000731
3、根据IC50实验方法，测定Rg5空、Taxol和Rg5+Taxol对人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)的IC50值，实验数据见表67。
表67
/ Rg5空 Taxol Rg5+Taxol
IC<sub>50</sub>(μM) 127.4 9.735 2.0(15.65)
由表66、67和图59可知：人参皂苷Rg5空白脂质体对人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)的活性较弱，Rg5+Taxol对人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)活性比普通紫杉醇注射液优势明显。
4、体内实验
将27只皮下荷瘤裸鼠随机分为3组(每组9只)，分别设为空白对照组(Control组，0.9％NaCl)、Taxol+Rg5组和Abraxane组。将相应制剂经口服给药(按照50mg·kg-1的剂量给药)。每隔两天记录每组小鼠的体重变化，并用游标卡尺测量肿瘤最长直径和最短直径，瘤体积由以下公式计算得到：V＝(dmax×dmin2)/2，其中dmin和dmax分别为肿瘤的短径和长径(mm)；根据测量的结果计算相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为给药时测量的肿瘤体积，Vt为每隔两天测量的肿瘤体积。
Abraxane和Rg5+Taxol分别对人胃癌细胞(SGC-7901/T)和人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)的抑瘤作用的比较(药效)，具体实验数据见表68和69以及图60和61，其中，图60和图61分别为Control组、Abraxane组和Rg5+Taxol组对人胃癌细胞(SGC-7901/T)和人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)的抑瘤曲线图。
表68 Control组、Abraxane组和Rg5+Taxol组对人胃癌细胞(SGC-7901/T)的抑瘤作用
Figure BDA0002661037120000741
由表68和图60可知：Taxol+Rg5对人胃癌细胞(SGC-7901/T)荷瘤小鼠的药效比普通紫杉醇注射液优势明显。
表69 Control组、Abraxane组和Rg5+Taxol组对人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)的抑瘤作用
Figure BDA0002661037120000742
Figure BDA0002661037120000751
由表69和图61可知：Taxol+Rg5对人胃癌紫杉醇耐药株(SGC-7901/T)荷瘤小鼠的药效比普通紫杉醇注射液优势明显。
效果实施例
1、人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体
将30mg蛋黄卵磷脂、人参皂苷Rg5、3mg紫杉醇和15mg大豆油，加入2ml的乙腈中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20ml的5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液；然后将溶液分装于西林瓶中。其中人参皂苷Rg5用量，制得的人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的外观、紫杉醇包封率、平均粒径、稳定性数据见下表。
Figure BDA0002661037120000752
Figure BDA0002661037120000761
2、人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体
将30mg蛋黄卵磷脂、人参皂苷Rg5、3mg紫杉醇、15mg大豆油和7.5mg胆固醇，加入2ml的乙腈中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20ml的5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液；然后将溶液分装于西林瓶中。其中人参皂苷Rg5用量，制得的人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的外观、紫杉醇包封率、平均粒径、稳定性数据见下表。
Figure BDA0002661037120000762
3、人参皂苷Rg3空白脂质体或人参皂苷Rh2空白脂质体
CN201210151597.0中公开的脂质体，其原料中必须含有胆固醇，即人参皂苷Rg3:胆固醇＝1：2.5；人参皂苷Rg3:磷脂＝1：10～20。但人参皂苷Rg3的质量占蛋黄卵磷脂质量的10％时，包封率低于80％，已达不到药用标准。
下述制备方法中涉及的人参皂苷Rg3和人参皂苷Rh2均为R型。
3.1、制备方法：
将30mg蛋黄卵磷脂、人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2、15mg大豆油，加入2ml的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入2ml的5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2空白脂质体的水溶液；然后将溶液分装于西林瓶中。其中人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2的用量，制得的人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2空白脂质体的外观、平均粒径、稳定性数据见下表。
Figure BDA0002661037120000771
3.2、制备方法：
将30mg蛋黄卵磷脂、人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2、15mg大豆油和7.5mg胆固醇，加入2ml的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入2ml的5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2空白脂质体的水溶液；然后将溶液分装于西林瓶中。其中人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2的用量，制得的人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2空白脂质体的外观、平均粒径、稳定性数据见下表。
Figure BDA0002661037120000772
Figure BDA0002661037120000781
4、人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2紫杉醇脂质体
制备方法：(与效果实施例2的区别仅在于Rg5)用量少、外观差，粒径大，稳定性差
将30mg蛋黄卵磷脂、人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2、3mg紫杉醇、15mg大豆油和7.5mg胆固醇，加入2ml的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入2ml的5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2紫杉醇脂质体的水溶液；然后将溶液分装于西林瓶中。其中人参皂苷Rg3或人参皂苷Rh2的用量，制得的人参皂苷Rg3或Rh2紫杉醇脂质体的外观、紫杉醇包封率、平均粒径、稳定性数据见下表。
Figure BDA0002661037120000782

Claims (9)

1.一种负载活性物质的脂质体，其特征在于，其包括以人参皂苷为膜材的空白脂质体和活性物质；所述的空白脂质体具有膜，所述的膜包含脂类物质和如式I所示的人参皂苷：
Figure FDA0002661037110000011
其中，所述的活性物质为紫杉醇；
所述的如式I所示的人参皂苷为人参皂苷Rg5和/或人参皂苷Rk1。
2.根据权利要求1所述的负载活性物质的脂质体，其特征在于，所述的空白脂质体中的脂类物质为磷脂，所述的磷脂和所述的如式I所示的人参皂苷的质量比为0.5:1-100:1，较佳地为0.5:1-20:1，更佳地为0.5:1-2:1。
3.根据权利要求2所述的负载活性物质的脂质体，其特征在于，所述的膜进一步包含胆固醇；所述的磷脂和所述的如式I所示的人参皂苷的质量比为1:0.01-1:3，较佳地为1：0.05-1:0.9，更佳地为1:0.1-1:0.9；所述的如式I所示的人参皂苷与所述的胆固醇的质量比为0.1:1-100:1，较佳地为0.5:1-50:1，更佳地为0.5:1-10:1。
4.根据权利要求3所述的负载活性物质的脂质体，其特征在于，所述的如式I所示的人参皂苷在膜中的含量为0.01％～80％，较佳地为10％-80％，更佳地为10％-40％，最佳地为20％-40％；所述的磷脂在膜中的含量为5％-99.9％；较佳地为10％-70％，更佳地为30％-70％，最佳地为30％-60％；所述的胆固醇在膜中的含量为0％-50％，较佳地为0.5％-50％，更佳地为5％-40％，最佳地为5％-30％以上百分比均是指各组分的质量占所述的膜的总质量的百分比。
5.根据权利要求1-4任一项所述的负载活性物质的脂质体，其特征在于，所述的空白脂质体中还进一步包含抗氧化剂、冻干保护剂和“大豆油和/或油酸钠”中的一种或多种，其中，所述的抗氧化剂的含量优选小于等于25％，较佳地为0.001％-15％，更佳地为0.01％-10％，最佳地为0.01％-5％；所述的冻干保护剂的含量优选小于等于80％，较佳地为0.5％-60％，更佳地为5％-60％，最佳地为30％-60％；所述的大豆油和/或油酸钠的含量较佳地为1％-90％，更佳地为15％-80％，最佳地为20％-70％；以上百分比是指所述的抗氧化剂、所述的冻干保护剂或所述的大豆油和/或油酸钠的质量占所述空白脂质体总质量的百分比。
6.根据权利要求5所述的负载活性物质的脂质体，其特征在于，
所述的磷脂为天然磷脂、半合成磷脂和全合成磷脂中的一种或多种；所述的天然磷脂较佳地为天然卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂和脑磷脂中的一种或多种，更佳地为蛋黄卵磷脂；所述的半合成或全合成磷脂较佳地为磷脂酰胆碱类的磷脂和/或PEG修饰的磷脂；其中，所述的磷脂酰胆碱类的磷脂较佳地为氢化大豆卵磷脂和/或二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱；所述的PEG修饰的磷脂较佳地为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇；
和/或，所述的抗氧化剂为抗坏血酸、维生素E、维生素C和丙二醇中的一种或多种；
和/或，所述的冻干保护剂为糖、多元醇、氨基酸和缓冲剂中的一种或多种；其中，所述的糖较佳地为单糖、双糖和多糖中的一种或多种；所述的单糖较佳地为葡萄糖、甘露醇、木糖醇和山梨醇中的一种或多种，更佳地为葡萄糖；所述的双糖较佳地为蔗糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖中的一种或多种；所述的多糖较佳地为海藻糖。
7.一种如权利要求1-6任一项所述的负载活性物质的脂质体的制备方法，其特征在于，
当所述的脂质体中包含冻干保护剂，所述的负载活性物质的脂质体的制备方法为方法A：
方法A包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质、如式I所示的人参皂苷和所述的活性物质混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
当所述的脂质体中不包含冻干保护剂时，所述的负载活性物质的脂质体的制备方法较佳地为方法A1：
方法A1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质、如式I所示的人参皂苷和所述的活性物质混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与水混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
所述的活性物质与所述的如式I所示人参皂苷的质量比较佳地为1:0.1-1:10，更佳地为1:2-1:6。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，
方法A或A1中，步骤(1)中，所述的有机溶剂为腈类溶剂、C1～C4的醇类溶剂、酮类溶剂、烷烃类溶剂、醚类溶剂和卤代烃类溶剂中的一种或多种，较佳地为C1～C4的醇类溶剂、腈类溶剂、醚类溶剂和卤代烃类溶剂中的一种或多种；所述的腈类溶剂较佳地为乙腈；所述的C1～C4醇类溶剂较佳地为甲醇、乙醇、异丙醇和正丁醇中的一种或多种；所述的醚类溶剂较佳地为四氢呋喃和/或乙醚；所述的卤代烃类溶剂较佳地为氯仿和/或二氯甲烷；所述的酮类溶剂较佳地为丙酮和/或丁酮；所述的烷烃类溶剂较佳地为石油醚；所述的有机溶剂与方法一或方法二步骤(1)中的所有组分的体积质量比为5-20mL/g；
和/或，方法A或A1中，步骤(1)中，所述的混合的温度为0-80℃，较佳地为10-80℃，更佳地为10-65℃；
和/或，方法A或A1中，步骤(2)中，所述的除去步骤(1)中澄清溶液的有机溶剂的操作为使用旋转蒸发器或者膜蒸发器除去有机溶剂；所述的除去有机溶剂的温度较佳地为25-80℃；
和/或，方法A或A1中，步骤(2)中，所述的过滤为微孔滤膜过滤；所述的微孔滤膜的孔径较佳地为0.22微米；
和/或，方法A中，步骤(2)中，所述的冻干保护剂的水溶液是指5％-10％的冻干保护剂的水溶液；所述的百分比是指冻干保护剂的质量占冻干保护剂水溶液总质量的百分比；
和/或，方法A或A1中，步骤(2)中，所述的干燥为采用冷冻干燥机冷冻干燥；
和/或，方法A或A1中，根据所述活性物质的脂溶性或水溶性，所述的活性物质以所述活性物质的水溶液或者所述活性物质的有机溶液的形式使用；所述的活性物质的水溶液或所述的活性物质的有机溶液优选质量体积分数为1％-20％的水溶液或有机溶液，所述的百分比是指所述活性物质的质量占所述活性物质水溶液或者所述活性物质有机溶液总体积的百分比。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：
将1g大豆卵磷脂、0.6g人参皂苷Rg5、0.3g紫杉醇，加入20ml的乙腈中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在50-60℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20ml的纯化水，超声至人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg；将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体，密封，即得所述人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体；所述的保护气体为氩气或氮气。
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