CN114432245B - 一种人参皂苷紫杉醇脂质体、其制备方法和应用 - Google Patents
一种人参皂苷紫杉醇脂质体、其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114432245B CN114432245B CN202011229476.4A CN202011229476A CN114432245B CN 114432245 B CN114432245 B CN 114432245B CN 202011229476 A CN202011229476 A CN 202011229476A CN 114432245 B CN114432245 B CN 114432245B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ginsenoside
- liposome
- paclitaxel
- solution
- taxol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000002502 liposome Substances 0.000 title claims abstract description 186
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 title claims abstract description 179
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 title claims abstract description 179
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 title claims abstract description 179
- 229930182494 ginsenoside Natural products 0.000 title claims abstract description 117
- 229940089161 ginsenoside Drugs 0.000 title claims abstract description 115
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 57
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 75
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 41
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 38
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 29
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims abstract description 21
- RWXIFXNRCLMQCD-JBVRGBGGSA-N (20S)-ginsenoside Rg3 Chemical group O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3C[C@@H](O)[C@H]4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@@H]4[C@@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RWXIFXNRCLMQCD-JBVRGBGGSA-N 0.000 claims description 94
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 65
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 65
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 57
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 56
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 25
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 20
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 19
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 19
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 19
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 claims description 16
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 230000036571 hydration Effects 0.000 claims description 14
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 claims description 14
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 14
- 229940067631 phospholipid Drugs 0.000 claims description 14
- JQWAHKMIYCERGA-UHFFFAOYSA-N (2-nonanoyloxy-3-octadeca-9,12-dienoyloxypropoxy)-[2-(trimethylazaniumyl)ethyl]phosphinate Chemical compound CCCCCCCCC(=O)OC(COP([O-])(=O)CC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC JQWAHKMIYCERGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 12
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 12
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 12
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- CKUVNOCSBYYHIS-UHFFFAOYSA-N (20R)-ginsenoside Rg3 Natural products CC(C)=CCCC(C)(O)C1CCC(C2(CCC3C4(C)C)C)(C)C1C(O)CC2C3(C)CCC4OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O CKUVNOCSBYYHIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 10
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 10
- 238000010008 shearing Methods 0.000 claims description 10
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 9
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 8
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 8
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 8
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 7
- 238000010025 steaming Methods 0.000 claims description 7
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 claims description 6
- CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 2-azaniumylethyl [(2r)-2,3-diacetyloxypropyl] phosphate Chemical class CC(=O)OC[C@@H](OC(C)=O)COP(O)(=O)OCCN CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims description 6
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 claims description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 5
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 5
- 229940083466 soybean lecithin Drugs 0.000 claims description 5
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 3
- 208000003721 Triple Negative Breast Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 3
- 238000007599 discharging Methods 0.000 claims description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 3
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000003825 pressing Methods 0.000 claims description 3
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 208000022679 triple-negative breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 abstract description 30
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 28
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 28
- 230000008685 targeting Effects 0.000 abstract description 18
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 17
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 abstract description 15
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 58
- XIRZPICFRDZXPF-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rg3 Natural products CC(C)=CCCC(C)(O)C1CCC(C2(CC(O)C3C4(C)C)C)(C)C1C(O)CC2C3(C)CCC4OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O XIRZPICFRDZXPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 41
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 35
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 34
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 32
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 30
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 18
- 231100001252 long-term toxicity Toxicity 0.000 description 18
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 17
- 230000034994 death Effects 0.000 description 17
- 239000000463 material Substances 0.000 description 17
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 13
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 13
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 13
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 13
- 101100393884 Drosophila melanogaster Glut1 gene Proteins 0.000 description 12
- 101150058068 SLC2A1 gene Proteins 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 10
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 10
- 238000011160 research Methods 0.000 description 10
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 9
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 9
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 9
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 208000037816 tissue injury Diseases 0.000 description 8
- 210000001853 liver microsome Anatomy 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- CKUVNOCSBYYHIS-IRFFNABBSA-N (20S)-ginsenoside Rh2 Chemical compound O([C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3C[C@@H](O)[C@H]4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@@H]4[C@@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O CKUVNOCSBYYHIS-IRFFNABBSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 6
- 208000037974 severe injury Diseases 0.000 description 6
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 6
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 5
- 108010074922 Cytochrome P-450 CYP1A2 Proteins 0.000 description 5
- 108010020070 Cytochrome P-450 CYP2B6 Proteins 0.000 description 5
- 102000009666 Cytochrome P-450 CYP2B6 Human genes 0.000 description 5
- 108010081668 Cytochrome P-450 CYP3A Proteins 0.000 description 5
- AGBCLJAHARWNLA-DQUQINEDSA-N Ginsenoside RG2 Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2[C@H]3C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]3(C)[C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@H]([C@H]4[C@H](O)C3)[C@@](C)(O)CCC=C(C)C)C)(C)C2)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O AGBCLJAHARWNLA-DQUQINEDSA-N 0.000 description 5
- NJUXRKMKOFXMRX-RNCAKNGISA-N Ginsenoside Rg5 Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3C[C@@H](O)[C@H]4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@@H]4C(/C)=C/CC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NJUXRKMKOFXMRX-RNCAKNGISA-N 0.000 description 5
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- NJUXRKMKOFXMRX-AXUZFSSLSA-N ginsenoside Rg5 Natural products CC(=CCC=C(C)[C@H]1CC[C@]2(C)[C@@H]1[C@H](O)C[C@@H]3[C@@]4(C)CC[C@@H](O[C@H]5O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]5O[C@H]6O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]6O)C(C)(C)[C@@H]4CC[C@@]23C)C NJUXRKMKOFXMRX-AXUZFSSLSA-N 0.000 description 5
- NJUXRKMKOFXMRX-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Rz1 Natural products CC(C)=CCC=C(C)C1CCC(C2(CCC3C4(C)C)C)(C)C1C(O)CC2C3(C)CCC4OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O NJUXRKMKOFXMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 5
- IOUVKUPGCMBWBT-GHRYLNIYSA-N phlorizin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 IOUVKUPGCMBWBT-GHRYLNIYSA-N 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- PYXFVCFISTUSOO-HKUCOEKDSA-N (20S)-protopanaxadiol Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]([C@@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@H]4[C@H](O)C[C@@H]3[C@]21C PYXFVCFISTUSOO-HKUCOEKDSA-N 0.000 description 4
- KWDWBAISZWOAHD-MHOSXIPRSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3r,4s,5s,6r)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-2-[[(3s,5r,8r,9r,10r,12r,13r,14r,17s)-12-hydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-17-(6-methylhepta-1,5-dien-2-yl)-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]o Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3C[C@@H](O)[C@H]4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@@H]4C(=C)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O KWDWBAISZWOAHD-MHOSXIPRSA-N 0.000 description 4
- 102100026533 Cytochrome P450 1A2 Human genes 0.000 description 4
- KWDWBAISZWOAHD-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rk1 Natural products CC(C)=CCCC(=C)C1CCC(C2(CCC3C4(C)C)C)(C)C1C(O)CC2C3(C)CCC4OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O KWDWBAISZWOAHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940126902 Phlorizin Drugs 0.000 description 4
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 4
- PYXFVCFISTUSOO-UHFFFAOYSA-N betulafolienetriol Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC(C(C)(O)CCC=C(C)C)C4C(O)CC3C21C PYXFVCFISTUSOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 4
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 4
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 4
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 4
- IOUVKUPGCMBWBT-UHFFFAOYSA-N phloridzosid Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 IOUVKUPGCMBWBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019139 phlorizin Nutrition 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- AGBCLJAHARWNLA-UHFFFAOYSA-N (20R)-ginsenoside Rg2 Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(OC2C3C(C)(C)C(O)CCC3(C)C3C(C4(CCC(C4C(O)C3)C(C)(O)CCC=C(C)C)C)(C)C2)OC(CO)C(O)C1O AGBCLJAHARWNLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RAQNTCRNSXYLAH-RFCGZQMISA-N (20S)-ginsenoside Rh1 Chemical compound O([C@@H]1[C@H]2C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]2C[C@@H](O)[C@H]3[C@@]([C@@]2(C1)C)(C)CC[C@@H]3[C@@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RAQNTCRNSXYLAH-RFCGZQMISA-N 0.000 description 3
- WMGBQZAELMGYNO-YMWSGFAJSA-N (2r,3s,4s,5r,6r)-2-(hydroxymethyl)-6-[[(3s,5r,8r,9r,10r,12r,13r,14r,17s)-12-hydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-17-(6-methylhepta-1,5-dien-2-yl)-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]oxane-3,4,5-triol Chemical compound O([C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3C[C@@H](O)[C@H]4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@@H]4C(=C)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WMGBQZAELMGYNO-YMWSGFAJSA-N 0.000 description 3
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 3
- 102100039205 Cytochrome P450 3A4 Human genes 0.000 description 3
- RAQNTCRNSXYLAH-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rh1 Natural products CC(C)=CCCC(C)(O)C1CCC(C2(C3)C)(C)C1C(O)CC2C1(C)CCC(O)C(C)(C)C1C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O RAQNTCRNSXYLAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UZRSSXUIXNCYLP-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rk2 Natural products CC(=CCCC(=C)C1CCC2(C)C1C(O)CC3C4(C)CCC(OC5CC(O)C(O)C(CO)O5)C(C)(C)C4CCC23C)C UZRSSXUIXNCYLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 Rg3 Natural products 0.000 description 3
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 3
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 description 2
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 2
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 2
- BIABMEZBCHDPBV-MPQUPPDSSA-N 1,2-palmitoyl-sn-glycero-3-phospho-(1'-sn-glycerol) Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC BIABMEZBCHDPBV-MPQUPPDSSA-N 0.000 description 2
- CKUVNOCSBYYHIS-LGYUXIIVSA-N 20(R)-Ginsenoside Rh2 Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@@H]1C(C)(C)[C@H]2[C@@](C)([C@H]3[C@](C)([C@@]4(C)[C@H]([C@H](O)C3)[C@@H]([C@](O)(CC/C=C(\C)/C)C)CC4)CC2)CC1 CKUVNOCSBYYHIS-LGYUXIIVSA-N 0.000 description 2
- GHWSMQHJFMAATF-DSHMRAQASA-N 20(S)-protopanaxadiol Natural products CC(=CCC[C@@](O)(CO)[C@H]1CC[C@]2(C)[C@@H]1CC[C@H]3[C@@]2(C)CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]34CO)C GHWSMQHJFMAATF-DSHMRAQASA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 2
- 108010026925 Cytochrome P-450 CYP2C19 Proteins 0.000 description 2
- 108010000561 Cytochrome P-450 CYP2C8 Proteins 0.000 description 2
- 108010000543 Cytochrome P-450 CYP2C9 Proteins 0.000 description 2
- 108010001237 Cytochrome P-450 CYP2D6 Proteins 0.000 description 2
- 102000004328 Cytochrome P-450 CYP3A Human genes 0.000 description 2
- 102100029363 Cytochrome P450 2C19 Human genes 0.000 description 2
- 102100029359 Cytochrome P450 2C8 Human genes 0.000 description 2
- 102100029358 Cytochrome P450 2C9 Human genes 0.000 description 2
- 102100021704 Cytochrome P450 2D6 Human genes 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 2
- BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M Sodium oleate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC([O-])=O BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M 0.000 description 2
- YURJSTAIMNSZAE-UHFFFAOYSA-N UNPD89172 Natural products C1CC(C2(CC(C3C(C)(C)C(O)CCC3(C)C2CC2O)OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O YURJSTAIMNSZAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 2
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 229960003724 dimyristoylphosphatidylcholine Drugs 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000003777 experimental drug Substances 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- JURZHOVRCOWZFN-UHFFFAOYSA-N notoginsenoside R1 Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O)C2CCC3(C)C2C(O)CC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5C(CC34C)OC6OC(COC7OCC(O)C(O)C7O)C(O)C(O)C6O)C JURZHOVRCOWZFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 238000012809 post-inoculation Methods 0.000 description 2
- SWQINCWATANGKN-UHFFFAOYSA-N protopanaxadiol Natural products CC(CCC=C(C)C)C1CCC2(C)C1C(O)CC1C3(C)CCC(O)C(C)(C)C3CCC21C SWQINCWATANGKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHCBCKBYTHZQGZ-CJPZEJHVSA-N protopanaxatriol Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2[C@@H](O)C[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]([C@@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@H]4[C@H](O)C[C@@H]3[C@]21C SHCBCKBYTHZQGZ-CJPZEJHVSA-N 0.000 description 2
- BBEUDPAEKGPXDG-UHFFFAOYSA-N protopanaxatriol Natural products CC(CCC=C(C)C)C1CCC2(C)C1C(O)CC3C4(C)CCC(O)C(C)(C)C4C(O)CC23C BBEUDPAEKGPXDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- NJUXRKMKOFXMRX-MHOSXIPRSA-N (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-2-[[(3S,5R,8R,9R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-hydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-17-(6-methylhepta-2,5-dien-2-yl)-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]oxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound CC(C)=CCC=C(C)[C@H]1CC[C@]2(C)[C@@H]1[C@H](O)C[C@@H]1[C@@]3(C)CC[C@H](O[C@@H]4O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]4O[C@@H]4O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]4O)C(C)(C)[C@@H]3CC[C@@]21C NJUXRKMKOFXMRX-MHOSXIPRSA-N 0.000 description 1
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- FHQVHHIBKUMWTI-ZCXUNETKSA-N 1-palmitoyl-2-oleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC FHQVHHIBKUMWTI-ZCXUNETKSA-N 0.000 description 1
- ZUXNULGHCOXCFL-UHFFFAOYSA-N 2-(4-tert-butyl-2,6-dimethylphenyl)acetonitrile Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=CC(C)=C1CC#N ZUXNULGHCOXCFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGBCLJAHARWNLA-HQPVLIODSA-N 20(S)-ginsenoside Rg2 Natural products C[C@H]1O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]2O[C@H]3C[C@]4(C)[C@H](C[C@@H](O)[C@@H]5[C@H](CC[C@@]45C)[C@@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@@]6(C)CC[C@H](O)C(C)(C)[C@H]36)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AGBCLJAHARWNLA-HQPVLIODSA-N 0.000 description 1
- 206010006189 Breast cancer in situ Diseases 0.000 description 1
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 1
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 101001105486 Homo sapiens Proteasome subunit alpha type-7 Proteins 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 206010025327 Lymphopenia Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 229920002505 N-(Carbonyl-Methoxypolyethylene Glycol 2000)-1,2-Distearoyl-Sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine Polymers 0.000 description 1
- 101150053185 P450 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010033661 Pancytopenia Diseases 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 102100021201 Proteasome subunit alpha type-7 Human genes 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 201000005389 breast carcinoma in situ Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003181 co-melting Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 208000024389 cytopenia Diseases 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008355 dextrose injection Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 1
- 229940093181 glucose injection Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 238000012771 intravital microscopy Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 231100001023 lymphopenia Toxicity 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000002052 molecular layer Substances 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000012634 optical imaging Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 210000002863 seminiferous tubule Anatomy 0.000 description 1
- SRLOHQKOADWDBV-NRONOFSHSA-M sodium;[(2r)-2,3-di(octadecanoyloxy)propyl] 2-(2-methoxyethoxycarbonylamino)ethyl phosphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCCNC(=O)OCCOC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC SRLOHQKOADWDBV-NRONOFSHSA-M 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009044 synergistic interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000004506 ultrasonic cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种复方人参皂苷紫杉醇脂质体、其制备方法和应用。本发明提供了一种复方人参皂苷紫杉醇脂质体,其为如下质量分数的的组分:8‑12份磷脂、1‑1.5份人参皂苷、1份紫杉醇及25‑35份冻干保护剂。本发明中所述的人参皂苷紫杉醇脂质体具有更好的Glut1介导的主动靶向性;药效比常规的人参皂苷紫杉醇脂质体提高2倍以上;毒性比常规的人参皂苷紫杉醇脂质体降低1.5倍以上,比常规胆固醇紫杉醇脂质体降低4倍以上;不存在体内累积毒性的风险。
Description
技术领域
本发明涉及一种复方人参皂苷紫杉醇脂质体、其制备方法和应用;进一步公开了一种高效低毒的注射用复方人参皂苷紫杉醇脂质体,其制备方法和应用。
背景技术
脂质体是一种定向载药系统,属于靶向给药系统的一种特殊剂型,它可以将药物包埋在直径为纳米级的微粒中,这种微粒类似于生物膜结构中双分子层微小囊泡,进入人体内主要被网状内皮系统吞噬,并改变被包封药物的体内分布,使药物主要在靶向组织中积蓄,从而提高药物的治疗指数,减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。
本发明是在CN201610693884.2、CN201811447245.3和CN201811447243.4等中国发明申请专利的基础上进行的技术创新。上述三篇申请专利都公开了以人参皂苷为膜材的脂质体在包载紫杉醇等化疗药物之后,其相关脂质体质量稳定、药效显著等技术优势。
CN201610693884.2公开了一种以人参皂苷Rg5及其衍生物为膜材的空白脂质体和应用,处方中除了包括磷脂、皂苷、药物、冻干保护剂外,还可进一步包括胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠等其他辅料。
CN201811447245.3公开了一种以人参皂苷Rh5H及其衍生物为膜材的空白脂质体和应用,该专利在CN201610693884.2基础上,进一步解决了人参皂苷的溶血性问题。同样,处方中除了包括磷脂、皂苷、药物、冻干保护剂外,还可进一步包括胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠等其他辅料。
CN201811447243.4公开了一种以人参皂苷Rg3及其衍生物为膜材的空白脂质体和应用。该专利将Rg3、Rh2等皂苷通过超微粉等技术手段,解决了人参皂苷在氯仿中的溶解度问题,从而解决了Rg3和Rh2等人参皂苷必须在氯仿中成膜的难题,制备得到了质量符合标准的Rg3类脂质体。
上述现有技术仍存在一些不足的地方,例如部分方案中脂质体生产均质步骤所需压力较大,滤膜除菌过滤的速度慢,截留率高,产品收率明显较差;需要添加2-6倍量的大豆油。但是由于大豆油的添加,又不利于制剂冻干,影响药物的长期保存。
复方制剂的核心是药物在体内的协同相互作用,并能显著提高药物临床治疗效果。复方制剂各功能组分合理的比例范围是构成复方制剂的核心,尤其是复方脂质体在功能组分发生变化而引起的药物协同、体内药代、体内组织分布、药效等改变,均鲜有人涉及。因此,针对注射用复方人参皂苷紫杉醇脂质体(以下简称“Ginposome-PTX”),在主药“紫杉醇”已确定,如何选择最合适的“协同作用药物兼辅料”人参皂苷和关键辅料“磷脂”及其相关比例,制备出配伍合理、粒径小、质量稳定、药效和毒性均达到最佳效果,使得本发明的药物和关键辅料特定比例的组合物具有创新性和唯一性,具有十分重要的意义。
处方筛选中,药物、磷脂、皂苷、冻干保护剂和制备工艺等诸多因素中,任何一个因素的变化都将对产品的质量、药效和安全性产生致命的影响。例如增加皂苷与紫杉醇的质量比,能增加复方脂质体的质量稳定性和协同抗肿瘤效果,增加对肿瘤组织的靶向性分布,但也会增加皂苷在人体内的累积毒性并造成不可控器官损伤;合适的皂苷与紫杉醇的质量比,对该类型脂质体的稳定性、主动靶向性、药效学和安全性有非常重要的关联性。同时,选择不同的冻干保护剂,对脂质体冻干过程中脂质双层结构的不受破坏和冻干药物复溶后恢复脂质体的特性有至关重要的作用。例如,在冻干保护剂的选择中,不同冻干保护剂对冻干曲线具有不同影响,尤其是在复方脂质体的共溶点、是否塌陷、脂质体复溶后是否显著改变、一次冻干温度和时间设定、冻干总时间长短等诸多方面具有重要影响。
药品的安全性和有效性是药品的两个基本属性,缺一不可,药品的审批和使用都是基于两者之间的风险收益比来考量,尤其是改良型新药,其核心就是提高有效性和安全性。
在毒理学研究中,制剂学研究起着至关重要的作用,尤其是处方比例和制备工艺的选择对急性毒性、长期毒性和各个功能器官的累积毒性的各个影响,都将直接决定着该复方脂质体是否符合新药申报要求。
可见,上述脂质体处方膜成分中的磷脂、人参皂苷、紫杉醇和冻干保护剂糖类成分的最佳比例范围对所构成的复方脂质体的良好药学稳定性、体内分布、药效学和毒理学等性质具有重要作用。但是,这个最佳比例,现有技术未给出任何上述组分及比例以及工艺与药理活性、药代及毒理之间的推导关系。由于涉及的变量多,其筛选必须通过大量实验和创造性劳动的付出。
因此,如何选择一个最佳的复方药物配伍,如何制定最佳的制备工艺,以便生产出一种药效更好、毒性更低,质量和其他指标都能符合药品要求的注射用复方人参皂苷紫杉醇脂质体,以便符合药品申报要求,需要大量的研究工作和技术攻关。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有紫杉醇脂质体存在的不足,而提供一种(复方)人参皂苷紫杉醇脂质体、其制备方法和应用;其性质稳定、粒径小、药物包封率高、体内相容性良好、体内释药良好、药效更好、毒性更低、配伍合理;且其具有较好制备工艺,制备条件易于实现,利于产业化;实现了制备工艺与产品性能结合的优化。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题。
本发明提供了一种(复方)人参皂苷紫杉醇脂质体(简称“Ginposome-PTX”),其为如下质量分数的组分:8-12份磷脂、1-1.5份人参皂苷、1份紫杉醇及15-35份冻干保护剂。
在本发明的某一方案中,所述的磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化磷脂和脑磷脂中的一种或多种,或含有0.01-10%的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇2000(mPEG2000-DSPE)的蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化磷脂和脑磷脂中的一种或多种,优选蛋黄卵磷脂。
在本发明的某一方案中,所述的紫杉醇与所述的磷脂的质量比可为1:10;例如,所述的紫杉醇与蛋黄卵磷脂的质量比为1:10。
在本发明的某一方案中,所述的人参皂苷为20(S)-人参皂苷Rg3、人参皂苷伪Rg3、20(S)-人参皂苷Rh2、伪人参皂苷GQ、人参皂苷Rg5、人参皂苷Rk1和人参皂苷Rp1中的一种或多种,优选20(S)-人参皂苷Rg3。
在本发明的某一方案中,所述的紫杉醇与所述的人参皂苷的质量比可为1:1或1:1.5;例如所述的紫杉醇与所述的人参皂苷Rg3的质量比为1:1或1:1.5。
在本发明的某一方案中,所述的冻干保护剂可为海藻糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖和半乳糖中的一种或多种,优选葡萄糖。
在本发明的某一方案中,所述的冻干保护剂与所述的紫杉醇的质量比可为(25-35):1;例如25:1。
在本发明的某一方案中,所述的人参皂苷紫杉醇脂质体平均粒径D90≤150nm,包封率≥98%。
在本发明的某一方案中,所述人参皂苷的HPLC纯度≥99%。
在本发明的某一方案中,所述的人参皂苷紫杉醇脂质体为如下质量分数的组分:10份磷脂、1或1.5份人参皂苷、1份紫杉醇及25份冻干保护剂。
本发明中所述的人参皂苷紫杉醇脂质体具有更好的Glut1介导的主动靶向性。药效比常规的人参皂苷紫杉醇脂质体提高2倍以上。毒性比常规的人参皂苷紫杉醇脂质体降低1.5倍以上,比常规胆固醇紫杉醇脂质体降低4倍以上。不存在体内累积毒性的风险。
本发明还提供了一种人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法,其包括如下步骤;
步骤1、将紫杉醇、人参皂苷、磷脂与有机溶剂的溶液A1,进行浓缩成膜;
步骤2、将步骤1得到的膜在水中保温水化后,与冻干保护剂溶液混合均匀,得到脂质体溶液A2;
步骤3、其为方案1或方案2;
方案1(高压均质法)包括如下步骤:
将步骤2得到的所述的脂质体溶液A2进行高压均质,控制粒径D90在100nm以下,得到脂质体溶液A3a;
方案2(高速剪切+挤出法)包括如下步骤:
步骤3、将步骤2得到的所述的脂质体溶液A2进行剪切后,通过150nm孔径挤出板挤出,控制粒径D90在100nm以下,得到脂质体溶液A3b;
其中,紫杉醇、人参皂苷、磷脂以及冻干保护剂溶液的定义均同上所述(复方)人参皂苷紫杉醇脂质体中所述。
在本发明的某一方案中,所述的步骤1中,所述的有机溶剂可为甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷中的一种或多种,优选甲醇和/或乙醇与氯仿和/或二氯甲烷的混合溶剂;例如乙醇:氯仿=1:1(体积比)的混合溶剂。
所述的有机溶剂的用量可不做具体限定,以能溶解紫杉醇、人参皂苷、磷脂即可。例如紫杉醇与所述的有机溶剂的质量体积比为1g/60-120ml,例如1g/80mL。
在本发明的某一方案中,所述的步骤1中,所述的溶液A1较佳地为将紫杉醇、所述的人参皂苷、所述的磷脂等加热溶解于有机溶剂中得到;例如,将所述的人参皂苷、所述的磷脂加入到紫杉醇与所述的有机溶剂的溶液中,溶解得到;所述的加热可为水浴加热至35-65℃,例如55℃。
在本发明的某一方案中,所述的步骤1中,所述的浓缩可为减压浓缩;所述的减压浓缩可为真空=-0.08mpa~-0.1mpa,例如-0.089~-0.1MPa;所述的浓缩至溶剂全部挥发完全即可;总浓缩时间较佳地为低于4小时。
在本发明的某一方案中,所述的步骤1中,所述的浓缩可为在旋蒸瓶中进行,转速可为40~60rp/min,例如50rp/min。
在本发明的某一方案中,所述的步骤2中,所述的水可为注射用水。
在本发明的某一方案中,所述的步骤2中,所述的冻干保护剂溶液的浓度可为0.20-0.35mg/ml,例如0.25mg/mL。
在本发明的某一方案中,所述的步骤2中,所述的水化的温度可为35-65℃,优选40-45℃。
在本发明的某一方案中,所述的步骤2中,所述的水化为在旋蒸瓶中进行,转速为40~60rp/min,例如50rp/min。
在本发明的某一方案中,所述的步骤2中,所述的水化以溶液均一即可,例如2-4小时。
在本发明的某一方案中,所述的步骤2中,所述的紫杉醇:冻干保护剂溶液=1g:100mL。
在本发明的某一方案中,所述的步骤2中,所述的冻干保护剂溶液的体积与所述的水的体积相同。
在本发明的某一方案中,所述的步骤3的方案1中,所述的高压均质为在均质机中使用0~10℃冷冻水冷切循环;较佳地,确保脂质体溶液的温度在5-10℃。
在本发明的某一方案中,所述的步骤3的方案1中,所述的高压均质的压力在800-1400bar之间,例如1200bar。
在本发明的某一方案中,所述的步骤3的方案1中,所述的高压均质的次数可为3-4次,例如4次。
在本发明的某一方案中,所述的步骤3的方案2中,所述的剪切可在室温下进行。
在本发明的某一方案中,所述的步骤3的方案2中,所述的剪切的转速为1500~2200rp/min;例如2000rp/min。
在本发明的某一方案中,所述的步骤3的方案2中,所述的剪切的时间为5~10min;例如5min。
在本发明的某一方案中,所述的步骤3的方案2中,所述挤出的温度为35-45℃,例如40℃。
在本发明的某一方案中,所述的步骤3的方案2中,所述挤出板的孔径为150nm。
在本发明的某一方案中,所述的步骤3的方案2中,所述挤出的压力为600~800psi;例如800psi。
在本发明的某一方案中,所述的步骤3的方案2中,所述挤出的次数可为3-4次,例如4次。
本发明还提供了一种注射用人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法,其包括如下步骤;
步骤1、2和3同如上所述的人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法中的步骤1-3,得到脂质体溶液A3a或A3b;
步骤4、将所述的步骤3中得到的脂质体溶液A3a或A3b,进行除菌过滤,定量分装于西林瓶中,得到的脂质体溶液A4;
步骤5、将定量分装于西林瓶中的脂质体溶液A4进行冷冻干燥,得到注射用人参皂苷紫杉醇脂质体。
所述的制备方法中,所述的除菌过滤、冷冻干燥的条件和操作可为本领域该类工艺中常规的条件和操作;本发明中优选如下:
本发明的某一方案中,所述的步骤4中,所述的除菌过滤可为过0.22um滤膜。
本发明的某一方案中,所述的步骤5中,所述的西林瓶可为本领域常规的西林瓶,例如50mL西林瓶。
本发明的某一方案中,所述的步骤5中,所述的冷冻干燥可依次为:预冻、一次干燥、二次干燥;具体地,可为如下步骤:
步骤a、定量分装于西林瓶中的脂质体溶液A4至于冷冻干燥箱内,其中,冷冻干燥的搁板温度匀速降至-10±1℃,保温1小时,再将搁板温度升至-13±1℃,保温1小时,再将搁板温度继续降至-55±1℃,待制品温度达-45±1℃后,开始计时继续保温3小时;
步骤b、当步骤a中保温结束后,将冷凝器温度快速降至-50±1℃以下,抽真空至10pa以下,将搁板(约1.5小时)温度升至-25±1℃后,开始计时保温18个小时,再快速将搁板温度升至-15±1℃后,保温待制品冰晶完全消失,再继续保温4小时;
步骤c、当步骤b中保温结束后,将搁板温度快速(1小时内)升至15±1℃,保温3小时,然后将搁板温度升至30±1℃,待制品温度升至25±1℃时,保温12小时结束,即可。
本发明的某一方案中,所述的制备方法还可进一步包括后处理,所述的后处理的条件和操作可为本领域该类工艺中常规的条件和操作;例如,所述的后处理包括如下步骤:步骤5结束后,全压塞,出箱;轧盖和包装,即可。
本发明还提供了一种注射用复方人参皂苷紫杉醇脂质体,其由如上所述的注射用人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法制备得到。
在本发明的某一方案中,所述的注射用人参皂苷紫杉醇脂质体的粒径D90≤150nm,包封率≥98%。在本发明的某一方案中,所述人参皂苷的纯度≥99%。
本发明还提供了一种人参皂苷紫杉醇脂质体在制备治疗和/或预防癌症药物中的应用;所述的人参皂苷紫杉醇脂质体为如上所述的人参皂苷紫杉醇脂质体或注射用复方人参皂苷紫杉醇脂质体。
所述的癌症可为乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌和食管癌中的一种或多种。所述的乳腺癌可为三阴性乳腺癌。所述的乳腺癌细胞可为MDA-MB-231;胃癌细胞可为SNU-16;食管癌细胞可为AMC-HN-8。
术语“粒径D90”是指一个样品的累计粒度分布百分数达到90%时所对应的粒径。它的物理意义是粒径小于它的颗粒占90%。
在不违背本领域常识的基础上,上述各优选条件,可任意组合,即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于:本发明提供的复方人参皂苷紫杉醇脂质体具有对肿瘤细胞的靶向作用、抗多药耐药作用、增效减毒和药物协同作用。以实施例中注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体为例,药效显著优于不在本发明请求保护的范围内的技术方案;说明了Rg3在注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体中起到了更好的“药物、辅料、膜材、靶头”等多种作用,起到了良好的药物协同作用。具体地:
(1)药效显著提高。尤其是PTX-Rg3(1.5)/Lp组药效最优,其中剂量(15mg/kg)的抑瘤率(95%)均达到或超过了非本发明处方(皂苷比例不在1.0-1.5)脂质体组高剂量(30mg/kg)的抑瘤率,所以,抑瘤效果提高了2倍;
(2)Glut1靶向性显著提高。在荷瘤鼠的Glut1靶向性实验中,所述的人参皂苷脂质体的Glut1靶向性都是比普通胆固醇脂质体的靶向性提高了3倍以上,而普通非优选的人参皂苷脂质体的Glut1靶向性都是比普通胆固醇脂质体的靶向性提高了2倍以下。
(3)毒副作用显著降低。按本发明的处方制备的脂质体,PTX-Rg3(1.5)/Lp的急性毒性(LD50=200mg/kg)比普通胆固醇紫杉醇脂质体(LD50约40mg/kg左右)降低了4~5倍,比PTX-PPT/Lp和PTX-Rg2/Lp等的非本发明处方(皂苷比例不在1.0-1.5)人参皂苷脂质体(LD50=100mg/kg左右)降低了2倍左右。PTX-C/Lp组出现了动物死亡,表明胆固醇脂质体组的毒性作用大。本发明人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体的毒性比注射用紫杉醇脂质体(力朴素)降低了4倍以上。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,按照常规方法和条件,或按照商品说明书选择。
实验药物和器材
实验药物:20(S)-人参皂苷Rg3(简称:Rg3)、人参皂苷伪Rg3(简称:伪Rg3)、人参皂苷Rp1(简称:Rp1)、人参皂苷伪GQ(简称:伪GQ)、人参皂苷Rk1(简称:Rk1)、人参皂苷Rg5(简称:Rg5)、20(S)-人参皂苷Rh2(简称:Rh2)、人参皂苷Rk2(简称:Rk2)、20(S)-人参皂苷Rg2(简称:Rg2)、20(S)-人参皂苷Rh1(简称:Rh1)、20(S)-原人参二醇(简称:PPD)、20(S)-原人参三醇(简称PPT)等为本领域常规市售可得,例如上海本素医药科技有限公司、上海源叶生物科技有限公司等。
本发明所述的人参皂苷分子结构式如下:
试验仪器:下述实施例中所使用的仪器为上海本素医药科技有限公司、复旦大学药学院自有仪器设备,其设备型号和来源信息如下:
安捷伦液相色谱:安捷伦1100一套,奥泰3300ELSD,安捷伦科技(中国)有限公司;
旋蒸蒸发仪:ZX98-1 5L,上海鲁伊工贸有限公司;
超声波清洗机(SB3200DT,宁波新芝生物科技股份有限公司);
氮吹仪(HGC-12A,天津市恒奥科技发展有限公司);
探头超声仪(JYD-650,上海智信仪器有限公司,中国);
高压均质机(B15,加拿大AVESTIN);
微型挤出器(Mini-extruder,Avanti Polar Lipids Inc);
激光粒度分析仪(Nano ZS,英国马尔文公司);
马尔文粒度仪Malvern Nanosizer ZS90(英国马尔文公司);
酶标仪(Thermo Scientific,Waltham,MA,USA);
酶标仪(Infinitie 200,瑞士Tecan Trading Co.,Ltd);
流式细胞仪(BD Biosciences,USA);
流式细胞仪(CytoFlex S,Beckman Coulter,Inc.,USA);
倒置荧光显微镜(Leica,DMI 4000D,Germany);
荧光显微镜观察(Zeiss LSM 710,Oberkochen,Germany);
激光共聚焦显微镜(Leica,DMI 4000D,Germany);
共聚焦活体显微镜(Confocal intravital microscopy,IVM);
正置双光子显微镜(DM5500 Q;Nikon);
小动物活体光学成像系统(in vivo imaging system,IVIS)(PerkinElmer,USA);
生物大分子相互作用仪BiaCore T 200仪器(GE,USA);
洁净工作台(SW-CJ-1FD,苏州安泰空气技术有限公司);
20L旋转蒸发仪:R5002K,上海夏丰实业有限公司;
冷冻干燥机:FD-1D-80,上海比朗仪器制造有限公司;
冷冻干燥机:PDFD GLZ-1B,上海浦东冷冻干燥设备有限公司;
电子天平:CPA2250(精度0.00001g),赛多利斯(上海)贸易有限公司;
电子天平:JY3003(精度0.001g),上海舜宇恒平科学仪器有限公司;
光电显微镜(XDS-1B,重庆光电仪器有限公司);
细胞培养箱(CCL-170B-8,新加坡ESCO)。
动物和细胞株
动物:BALB/c裸小鼠,鼠龄3-4周,中科院上海药物研究所生产。
肿瘤细胞株:
乳腺癌原位瘤4T1细胞株,复旦大学药学院提供;
三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株,复旦大学药学院提供;
人胃癌SNU-16细胞株,中科院上海药物研究所提供。
实施例1注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体的制备
1.处方:蛋黄卵磷脂10g,人参皂苷Rg3 1g,紫杉醇1g,葡萄糖25g,无水乙醇40ml,氯仿40ml,注射用水200ml。
2.成膜:配置处方量的无水乙醇和氯仿(1:1)混合溶剂备用。
将处方量的紫杉醇加入混合溶剂溶解备用,再将处方量的人参皂苷Rg3和蛋黄卵磷脂加入混合溶剂中,加热溶解,转移入1L旋蒸瓶中,减压浓缩,水浴温度55℃,转速50转/min,真空度-0.089~-0.1MPa,旋蒸至溶剂全部挥发完全。
3.水化:配置葡萄糖溶液:将25g无水葡萄糖加入到100ml注射用水,搅拌溶解后配置成0.25mg/ml的葡萄糖水溶液,40℃水浴加热备用。
将100ml注射用水加入到成膜后的旋蒸瓶中,水浴温度40-45℃,转速50转/min,水化并完全溶解,时间约2h。
然后再加入100ml的葡萄糖水溶液,搅拌均匀,备用。
4.高压均质:水化后的溶液转移至均质机,均质机使用0~10℃冷冻水冷切循环,均质压力设置1200bar,循环均质3--4次,至D90小于100nm。
5.除菌过滤:将均质后的溶液过0.22um滤膜除菌过滤。
6.分装:将除菌过滤后的溶液按装设定量12~15ml分装进50ml西林瓶中。
7.预冻:产品进箱后,搁板温度匀速降至-10℃左右,保温1小时,再将搁板温度约升至-55℃,保温1小时,保温结束,再将搁板温度继续降至-55℃左右,待制品温度达-45℃后,开始计时继续保温约3小时。
8.一次干燥:将冷凝器温度快速降至-50℃以下,抽真空至10pa以下,将搁板(约1.5小时)温度升至-25±1℃后,开始计时保温约18个小时,再快速将搁板温度升至-15±1℃后,保温待制品冰晶完全消失,再继续保温4小时左右;
9.二次干燥:搁板温度快速(1小时内)升至15℃左右,保温约3小时,然后将搁板温度升至25℃左右,待制品温度升至25℃时,保温12小时左右。保温结束,检查真空度情况,结束整个冻干过程,全压塞,出箱。
10.轧盖和包装:将上述脂质体轧盖和包装,即得注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体(处方1)。
实施例2注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体的制备
将实施例1中的人参皂苷Rg3的处方量提高至1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体(处方2)。
实施例3注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体的制备
1.处方:蛋黄卵磷脂10g,人参皂苷Rg3 2g,紫杉醇1g,葡萄糖25g,无水乙醇40ml,氯仿40ml,注射用水200ml。
2.成膜:同实施例1的成膜法。
3.水化:同实施例1的水化法。
4.高速剪切和挤出:将上述脂质体溶液,室温下,在2000rp/min快速剪切5min。
将脂质体溶液温度控制在35-45℃,连接挤出装置,安装150nm孔径挤出板,在800psi压力下挤出。
5.后续步骤同实施例1的各个步骤,制备得到注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体(处方3)。
实施例4注射用复方人参皂苷伪Rg3紫杉醇脂质体的制备
将实施例1中的人参皂苷Rg3变更为人参皂苷伪Rg3 1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方人参皂苷伪Rg3紫杉醇脂质体(处方4)。
实施例5注射用复方人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的制备
将实施例1中的人参皂苷Rg3变更为人参皂苷Rg5 1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体(处方5)。
实施例6注射用复方人参皂苷Rk1紫杉醇脂质体的制备
将实施例1中的人参皂苷Rg3变更为人参皂苷Rk1 1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方人参皂苷Rk1紫杉醇脂质体(处方6)。
实施例7注射用复方人参皂苷Rh2紫杉醇脂质体的制备
将实施例1中的人参皂苷Rg3变更为人参皂苷Rh2 1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方人参皂苷Rh2紫杉醇脂质体(处方7)。
实施例8注射用复方人参皂苷Rp1紫杉醇脂质体的制备
将实施例1中的人参皂苷Rg3变更为人参皂苷Rp1 1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方人参皂苷Rp1紫杉醇脂质体(处方8)。
实施例9注射用复方人参皂苷伪GQ紫杉醇脂质体的制备
将实施例1中的人参皂苷Rg3变更为人参皂苷伪GQ 1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方人参皂苷伪GQ紫杉醇脂质体(处方9)。
实施例10:注射用复方人参皂苷Rk2紫杉醇脂质体的制备(1.5倍量)
将实施例1中的人参皂苷Rg3变更为人参皂苷Rk2 1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方人参皂苷Rk2紫杉醇脂质体(对比处方1)。
实施例11:注射用复方人参皂苷Rg2紫杉醇脂质体的制备(1.5倍量)
将实施例1中的人参皂苷Rg3变更为20(S)-人参皂苷Rg2 1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方人参皂苷Rg2紫杉醇脂质体(对比处方2)。
实施例12:注射用复方人参皂苷Rh1紫杉醇脂质体的制备(1.5倍量)
将实施例1中的人参皂苷Rg3变更为20(S)-人参皂苷Rh1 1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方人参皂苷Rh1紫杉醇脂质体(对比处方3)。
实施例13:注射用复方原人参二醇(PPD)紫杉醇脂质体的制备(1.5倍量)
将实施例1中的人参皂苷Rg3变更为20(S)-原人参二醇(PPD)1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方原人参二醇(PPD)紫杉醇脂质体(对比处方4)。
实施例14:注射用复方原人参三醇(PPT)紫杉醇脂质体的制备(1.5倍量)
将实施例1中的人参皂苷Rg3变更为20(S)-原人参三醇(PPT)1.5g,其他同实施例1,制备得到注射用复方原人参三醇(PPT)紫杉醇脂质体(对比处方5)。
效果实施例1
(a)根据下表处方,并按实施例1相同方法,对人参皂苷的种类比较结果如下表:
上述系列实验证明,在不添加大豆油或胆固醇等其他辅料情况下,本发明中的人参皂苷为:Rg3、伪Rg3、Rh2、伪GQ、Rg5、Rk1和Rp1等7个时,Ginposome-PTX具有较好制备工艺,制备条件易于实现,利于产业化的。人参皂苷为Rk2、Rg2、Rh1、PPD和PPT时,需要添加其他辅料,并且制备条件比较苛刻的。
(b)对磷脂的种类和比例进行了比较:
备注:蛋黄卵磷脂(EPC)、大豆磷脂(SPC)、脑磷脂(PE)、鞘磷脂(SM)、氢化磷脂(HSPC)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰基卵磷脂(DOPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、1-棕榈酰基-2-油酰基基磷脂酰乙醇胺(POPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、聚乙二醇2000-二硬脂酸磷脂酰乙醇胺(mPEG-DSPE)、聚乙二醇2000-二油酰基磷脂酰乙醇胺(mPEG-DOPE)。
按实施例1相同方法,对磷脂种类和比例的比较结果如下表:
上述实验证明,在不添加大豆油或胆固醇等其他辅料情况下,能良好包裹紫杉醇,制备工艺较易实现的磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化磷脂、脑磷脂和混合磷脂(上述4个磷脂中含有0.01-10%mPEG-DSPE)。其他磷脂与Rg3也能良好包裹紫杉醇,但需添加大豆油等其他辅料,或提高均质压力和均质次数。上述实验同时说明:在成膜性方面,本发明中的磷脂:紫杉醇=8-12:1时,效果较佳。
(c)按实施例1相同方法,对人参皂苷的最佳比例进行了比较:
上述实验证明,在不添加大豆油或胆固醇等其他辅料情况下,本发明中皂苷:紫杉醇=1-3:1的比例范围时,效果较佳。但由于本发明应用实施例4毒代动力学的研究结果,本发明只选择了皂苷:紫杉醇=1-1.5:1的比例范围。
(d)按实施例1相同方法,对冻干保护剂进行了比较:
在冻干保护剂的选择中,不同冻干保护剂对产品复溶后脂质体的包封率,粒径分布有显著影响,对冻干曲线的经济性也存在较大影响。通过上述实验,在不添加大豆油等其他辅料情况下,本发明中的冻干保护剂为葡萄糖、海藻糖、蔗糖、乳糖和半乳糖中的一种或多种,紫杉醇与冻干保护剂的比例为:冻干保护剂/紫杉醇=15-35倍量,例如25倍量葡萄糖时,与紫杉醇脂质体具有良好匹配性。因综合考虑制剂学的经验数据,本发明确定的紫杉醇与冻干保护剂的比例为:冻干保护剂/紫杉醇=15-35倍量。
应用实施例1:Glut1的细胞摄取实验
1)实验目的:通过添加葡萄糖抑制剂等证明Glut1靶向机制;通过Glut1靶向验证本发明的人参皂苷种类和比例、磷脂种类和比例。
2)实验方法:为了比较4T1对各实验组的摄取,探讨复方制剂的摄取机制,将4T1细胞按2×105的细胞密度接种于12孔板中,对于实验组+葡萄糖、实验组+根皮苷和实验组+槲皮素组,12小时后分别用20mM的葡萄糖溶液、根皮苷溶液和槲皮素溶液代替培养基。这三种溶质应在无葡萄糖培养基中溶解,孵育1小时后,加入各实验组药物(紫外荧光显色剂的浓度为100ng/ml),孵育4小时后,消化,用新鲜PBS溶液洗涤,采用流式细胞仪进行分析。
3)实验组制备方法:按本发明实施例1方法制备(紫杉醇改为香豆素,不需要冻干步骤)
4)实验组:(香豆素)C6-C/Lp组,C6-Rg3/Lp组,C6-Rg3/Lp组,C6-Rg3/Lp+葡萄糖组,C6-Rg3/Lp+根皮苷组,C6-Rg3/Lp+槲皮素组。
5)实验结果:
实验组名称 | 荧光强度 | 结果评价 |
C6-C/Lp | 2.23×104±1842 | 对照组 |
C6-Rg3/Lp | 1.41×105±6386 | 比C6-C/Lp提高了6.32倍 |
C6-Rg3/Lp+葡萄糖 | 8.74×104±1685 | 比C6-Rg3/Lp降低了38% |
C6-Rg3/Lp+根皮苷 | 6.63×104±1731 | 比C6-Rg3/Lp降低了53% |
C6-Rg3/Lp+槲皮素 | 2.54×104±1646 | 比C6-Rg3/Lp降低了82% |
肿瘤细胞对于药物递送系统的摄取能力极为重要。细胞对载体的摄取越多,则有更多的紫杉醇可被递送至肿瘤细胞以发挥治疗作用。如上表所示,C6-C/Lp的平均荧光强度为2.23×104±1842,而C6-Rg3/Lp的平均荧光强度为1.41×105±6386,比起C6-C/Lp,4T1细胞吸收更多的C6-Rg3/Lp,意味着C6-Rg3/Lp可以帮助递送更多的药物至4T1中。为了研究Rg3脂质体的摄取机制,将底物(葡萄糖),Glut1竞争性抑制剂根皮苷和槲皮素预先孵育1小时将Glut1先饱和后。再加入制剂。如上表所示,C6-Rg3/Lp的荧光强度分别降低了38%,53%和82%。由此可见Glut1底物和抑制剂的加入,阻止了C6-Rg3/Lp的细胞摄取,证明人参皂苷Rg3脂质体可通过与Glut1相互作用增强其摄取效率。
依据上述同样的方法,本发明对Rg3的比例和皂苷的种类进行了比较验证,结果如下:
备注:因应用实施例4毒代实验结果,下述实验未开展人参皂苷/紫杉醇超过2.0的处方的实验。
实验结果汇总如下:
本发明处方的Glut1靶向性比胆固醇脂质体提高了3-7倍,其他非优选处方的Glut1靶向性比胆固醇脂质体提高了2倍以下。
同时,本实验还研究了不同种类的磷脂和比例对Glut1靶向性的影响,结果如下:
本发明的处方的Glut1靶向性相对胆固醇脂质体都提高3倍以上。
应用实施例2:胃癌(SNU-16)体内药效学研究
1)试验方法:将肿瘤细胞株(SNU-16)注入小鼠皮下,建立皮下肿瘤模型。当肿瘤体积达到100mm3(接种后7d)时,将小鼠随机分组(n=8每组)治疗,每组尾静脉注射空白溶剂(5%葡萄糖,Blank)、PTX-C/Lp组、PTX-Rg3(0.5)组、PTX-Rg3(1.0)组、PTX-Rg3(1.5)/Lp组、PTX-Rg3/Lp(磷脂:Rg3:PTX=8:2:1)组、PTX-Rg5/Lp(磷脂:Rg5:PTX=4:3:1)组、PTX-GQ/Lp(磷脂:伪GQ:PTX=8:4:1)组,剂量按紫杉醇计高中低三组(30mg、15mg、7.5mg),每7天给一次药,持续到第28天,给药的同时测量肿瘤的长度、宽度和记录体重。计算肿瘤体积(V)的公式为:V=(W2×L)/2。长度(L)为实体瘤的最长直径,宽度(W)是垂直于长度的最短直径。在第28天实验结束,所有动物均处死,取出肿瘤进行影像学和组织学检测。
备注:紫杉醇+Rg3=30mg/kg+45mg/kg,表示药物浓度,下同。
因应用实施例4的毒代结果,本实施例未开展PTX-Rg3(2.0或以上)/Lp组的研究。
2)试验结果如下:
结论:
1)PTX-Rg3(1.0)/Lp组、PTX-Rg3(1.5)/Lp组的药效最佳。二组的中剂量(紫杉醇=15mg/kg)的抑瘤率与其他组的高剂量组(紫杉醇=30mg/kg)的抑瘤率基本一致。即:抑瘤效果比非本发明组提高了约2倍以上。
2)PTX-C/Lp组出现了动物死亡,表明毒性作用大。
3)药效高低与人参皂苷的比例高低不具有线性关系,根据本处方,人参皂苷/紫杉醇的比例在1~1.5时,药效最佳。
应用实施例3:急性毒性(LD50)研究(SD大鼠)
1)实验方法:大鼠160~260g,6~9周龄,每组6只,给药方式:缓慢静推(约1mL/min),给药频率:3次/天。
本试验供试品紫杉醇剂量设置为40,100,150和200mg/kg/天,供试品中紫杉醇和人参皂苷的质量比为1:1.5,故含皂苷分别60、150、225和300mg/kg/天。同时设置溶媒对照组(5%葡萄糖注射液)、市售阳性对照组(力朴素)、Rg3脂质体组和PPD脂质体组,缓慢静推(约1mL/min),3次/天,每次给药间隔至少4h。
2)实验分组:共计16组,5%葡萄糖组、PTX-C/Lp、PTX-Rg3/Lp和药效学的实验分组一致,其他组别名称如下述表格所示。
3)实验结果如下表:
备注:因应用实施例4的毒代结果,本实施例未开展PTX-Rg3(2.0或以上)/Lp组的研究。
通过以上实验显示,本发明的技术方案具有优良的制剂学和Glut1靶向性,使得相关制剂的降毒效果最佳,相对胆固醇脂质体组(PTX-C/Lp)普遍降低4-5倍。而Rk2,Rg2,Rh1,PPD和PPT等皂苷制剂学相对较差,而且主动靶向性相对不够优异,降毒效果一般,相对力朴素,毒性略微降低或降低不到2倍。
应用实施例4:毒代动力学(TK)研究
1.实验目的:研究各实验组的累积毒性。
2.实验方法:本实验TK组共设置8组,分别为溶媒对照组(5%葡萄糖注射液)、市售阳性对照组PTX-C/Lp组(15mg/kg)、供试品1(PTX-Rg3(1.0)/Lp组:15mg/kg和30mg/kg)、供试品2(PTX-Rg3(1.5)/Lp组:15mg/kg和30mg/kg)、供试品3(PTX-Rg3(2.0)/Lp组,15mg/kg和30mg/kg)。每组10只SD大鼠,雌雄各半,共80只。静脉注射给药,每周给药1次,连续给药四周,溶媒对照组分别于D1和D29给药前及给药后1hr采集全血,供试品1、供试品2、供试品3和市售阳性对照组分别于D1和D29给药前及给药后3min、15min、30min、1hr、3hr、6hr、24hr采集全血,全血收集至含EDTA-K2抗凝剂的试管中,置于碎冰上,离心收集血浆用于分析检测。
采用LC-MS/MS法对血浆中紫杉醇及20(S)-人参皂苷Rg3的浓度进行检测,紫杉醇分析方法定量下限为:25.000ng/mL,20(S)-人参皂苷Rg3分析方法定量下限为50.000ng/mL。采用WinNonlin软件(版本6.4)计算毒代动力学参数Tmax,Cmax及AUC(0-t)。毒代动力学参数描述性统计呈现样本数(N)、平均值(Mean)、标准差(SD)、变异系数(CV%)、中位数(Median)、最小值(Min)、最大值(Max)。在毒代动力学参数计算中,血浆浓度在Cmax之前的低于定量下限样品浓度以0表示并参与毒代参数计算,Cmax之后的低于定量下限样品浓度以BQL表示并不参与毒代参数计算。
暴露量(Cmax及AUC(0-t))先进行对数转换再进行统计检验。剂量暴露量比例性评价通过幂函数模型对暴露量参数和剂量进行回归(先进行对数转换再进行统计检验),计算β值及其90%置信区间。采用0.8~1.25的判断标准对β值的90%置信区间(90%CI)进行判断,90%CI下限和上限分别小于0.8和1.25判定为暴露量的增加低于剂量的增加,0.8~1.25之间判定为暴露量的增加呈剂量比例性增加,90%CI下限及上限分别大于0.8和1.25判定为暴露量的增加高于剂量的增加。药物蓄积通过比较多次给药后体内药物平均Cmax及适当时间计算的平均AUC来判断。平均AUC的差异超出2倍范围时,判定为存在蓄积。
3.实验结果,在本次试验条件下:
6)D1和D29给药后,雌雄SD大鼠静脉注射给予供试品1、供试品2和供试品3后血浆中人参皂苷Rg3的暴露量(以AUC(0-t)计)随着给药剂量的增长而增长,增长幅度高于剂量的增长。
7)D1给药后,雌雄SD大鼠静脉注射给予供试品1、供试品2和供试品3后血浆中人参皂苷Rg3的暴露量(以Cmax计)与给药剂量成正比例。
8)D1和D29给药后,雌雄SD大鼠静脉注射给予供试品1后血浆中紫杉醇的暴露量(以AUC(0-t)和Cmax计)随着与给药剂量的增长而增长,增长幅度高于剂量的增长。
9)D1和D29给药后,雌雄SD大鼠静脉注射给予供试品2后血浆中人参皂苷Rg3的暴露量(以Cmax计)与给药剂量成正比例。
10)在本次试验条件下,连续给药后,雌雄SD大鼠静脉注射给予供试品1和供试品2后血浆中人参皂苷Rg3基本无蓄积倾向;雌雄SD大鼠静脉注射给予供试品1和供试品2后血浆中紫杉醇基本无蓄积倾向;雌雄SD大鼠静脉注射给予供试品3后血浆中紫杉醇和人参皂苷Rg3的暴露量有蓄积;雌雄SD大鼠静脉注射给予市售对照组血浆中紫杉醇的暴露量有蓄积。
结论:PTX-Rg3(2.0)/Lp组具有累积毒性风险。
应用实施例5:长期毒性研究及其病理学报告
长毒SD大鼠给药方案
1)实验方法:大鼠160~260g,6~9周龄,每组6只,给药方式:缓慢静推(约1mL/min),给药频率:1次/周(D1、D8、D15、D22、D29)。
2)实验分组:设置了5%葡萄糖组(溶媒对照组)、Rg3/Lp组(Rg3脂质体组)、PTX-C/Lp组(力朴素)、PTX-C/Lp+Rg3/Lp组(Rg3脂质体+力朴素组)、PTX-Rg3/Lp组(注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体组)、注射用复方原人参二醇(PPD)紫杉醇脂质体,共计6组。
本试验供试品紫杉醇剂量设置为7.5,15和30mg/kg,供试品中紫杉醇和人参皂苷的质量比为1:1.5,故含皂苷分别11.25、22.5和45mg/kg。(按实施例1的制备方法制备得到)
每组的给药剂量设置如下:
3)实验结果如下:
结果1:Rg3/Lp组长期毒性实验结果(第30天的检查结果)
给药剂量 | 11.25mg/kg | 22.5mg/kg | 45mg/kg |
动物死亡比例 | 无死亡 | 无死亡 | 无死亡 |
动物平均体重变化情况 | +25% | +20% | +26% |
肝组织损伤情况 | 无损伤 | 无损伤 | 无损伤 |
肾组织损伤情况 | 无损伤 | 无损伤 | 无损伤 |
脾组织损伤情况 | 无损伤 | 无损伤 | 无损伤 |
心脏组织损伤情况 | 无损伤 | 无损伤 | 无损伤 |
结果2:PTX-C/Lp组长期毒性实验结果(第30天的检查结果)
给药剂量 | 7.5mg/kg | 15mg/kg | 30mg/kg |
动物死亡比例 | 无死亡 | 无死亡 | 33.3% |
动物平均体重变化情况 | +18% | +2% | -20% |
肝组织损伤情况 | 无损伤 | 中度 | 重度 |
肾组织损伤情况 | 无损伤 | 中度 | 重度 |
脾组织损伤情况 | 无损伤 | 中度 | 重度 |
心脏组织损伤情况 | 无损伤 | 中度 | 重度 |
结果3:PTX-C/Lp+Rg3/Lp组长期毒性实验结果(第30天的检查结果)
结果4:PTX-Rg3/Lp组长期毒性实验结果(第30天的检查结果)
结果5:注射用复方原人参二醇(PPD)紫杉醇脂质体长期毒性实验结果(第30天的检查结果)
以上大鼠长期毒性实验结果表明,在长期毒性研究中,相对力朴素,Rg3制剂的减毒效果最显著,PPD制剂的毒性有所降低,但不如Rg3制剂效果明显。
部分病理学结果:第30天的检查结果
动物病理检查(显微镜观察)结果如下:
以上5组大鼠长期毒性实验结果表明,在长期毒性研究中:
1)PTX-Rg3/Lp组,优于PTX-C/Lp+Rg3/Lp组,表明复方制剂具有良好的药物协同作用,大幅度降低了毒性。
2)从造血细胞减少程度,PTX-Rg3/Lp优于PTX-C/Lp+Rg3/Lp和PTX-C/Lp组。
从附睾单细胞坏死程度,PTX-Rg3/Lp、PTX-C/Lp+Rg3/Lp无显著差异,优于PTX-C/Lp。
从肾脏的炎症情况,PTX-Rg3/Lp优于PTX-C/Lp+Rg3/Lp和PTX-C/Lp组。
从肺脏的炎症情况,PTX-Rg3/Lp、PTX-C/Lp+Rg3/Lp无显著差别,优于PTX-C/Lp。
从肠系膜淋巴结减少情况,PTX-Rg3/Lp、PTX-C/Lp+Rg3/Lp和PTX-C/Lp无显著差异。
从卵泡单细胞坏死情况,PTX-Rg3/Lp、PTX-C/Lp+Rg3/Lp无显著差别,优于PTX-C/Lp。
从脾脏白髓淋巴细胞减少情况,PTX-Rg3/Lp优于PTX-C/Lp+Rg3/Lp和PTX-C/Lp组。
从睾丸生精小管变性情况,PTX-Rg3/Lp优于PTX-C/Lp+Rg3/Lp和PTX-C/Lp组。
从胸腺的单细胞坏死和淋巴细胞减少情况,PTX-Rg3/Lp优于PTX-C/Lp+Rg3/Lp和PTX-C/Lp组。
从子宫内膜单细胞坏死情况,PTX-Rg3/Lp优于PTX-C/Lp+Rg3/Lp和PTX-C/Lp组。
4)实验结论:复方Rg3紫杉醇脂质体优于2个单方脂质体(Rg3+PTX)组合,证明了复方制剂起到了良好的药物协同作用,同时,验证了本发明靶向肿瘤微环境所取得的显著降毒效果。
长毒犬给药方案
比格犬6~10kg,约6~9月龄,来源北京玛斯生物技术有限公司,每组6只,每周给药一次,共5次(D1、D8、D15、D22、D29),恢复期四周。
设置溶媒对照组、Rg3脂质体组、注射用紫杉醇脂质体组、Rg3脂质体+注射用紫杉醇脂质体组、注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体组,共计5组。
每组的给药剂量设置如下:
Rg3脂质体组长期毒性(比格犬)实验结果(第30天的检查结果,一共6只动物)
给药剂量 | 4.5mg/kg | 9mg/kg | 18mg/kg |
动物死亡比例 | 无死亡 | 无死亡 | 无死亡 |
动物平均体重变化情况 | +8% | +5% | +3% |
肝组织损伤情况 | 无损伤 | 轻度 | 中度 |
肾组织损伤情况 | 无损伤 | 轻度 | 中度 |
脾组织损伤情况 | 无损伤 | 轻度 | 轻度 |
心脏组织损伤情况 | 无损伤 | 轻度 | 中度 |
力朴素长期毒性(比格犬)实验结果(第30天的检查结果,一共6只动物)
给药剂量 | 1mg/kg | 2mg/kg | 3mg/kg |
动物死亡比例 | 无死亡 | 死亡1只 | 死亡3只 |
动物平均体重变化情况 | +9% | -0.5% | -6% |
肝组织损伤情况 | 轻度 | 严重损伤 | 严重损伤 |
肾组织损伤情况 | 轻度 | 严重损伤 | 严重损伤 |
脾组织损伤情况 | 轻度 | 中度 | 严重损伤 |
心脏组织损伤情况 | 轻度 | 中度 | 严重损伤 |
注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体组长期毒性(比格犬)实验结果(第30天的检查结果,一共6只动物)
通过比格犬的长期毒性实验研究结果表明,注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体组给药剂量是已上市脂质体4倍以上,其长期毒性的表现症状轻于紫杉醇脂质体组,说明人参皂苷Rg3可显著降低肿瘤治疗药物的不良反应,并起到药物协同作用。
在长期毒性研究中,注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体,相同剂量下严重不良反应发生率和体重变化情况如下:
结果显示,长期毒性研究中,注射用复方Rg3紫杉醇脂质体在各个功能器官中引起的各种不良反应显著低于力朴素。
应用实施例6:体外药代研究
1)Rg3对肝脏药物代谢酶CYP450抑制作用的体外研究
实验目的:应用人肝微粒体评价Rg3对CYP450亚酶CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的抑制作用。
实验组:肝微粒体与不同浓度的测试物溶液预孵育15分钟后,分别加入各亚酶的探针底物和辅酶NADPH孵育30分钟。
阴性对照(NC):肝微粒体与空白缓冲液预孵育15分钟后,分别加入各亚酶的探针底物和辅酶NADPH孵育30分钟。
阳性对照(PC):肝微粒体与各亚酶的选择性抑制剂预孵育15分钟后,分别加入各亚酶的探针底物和辅酶NADPH孵育30分钟。
实验步骤:混合人肝微粒体与测试物溶液或空白缓冲液(NC组)或选择性抑制剂(PC组)预孵育15分钟后,加入探针底物和辅酶NADPH启动酶反应,继续孵育30分钟后,加入预冷的甲醇终止反应,离心10分钟,取上清液,用LC-MS/MS方法测定各探针底物的代谢产物生成量。
相对活性(%of NC)=试验组或阳性对照组中的代谢产物生成量/空白阴性对照组中的代谢产物生成量平均值×100%。
半数抑制剂量(IC50)根据以下公式计算:Y=100/(1+10^(X-LogIC50))。
其中,X为转换成对数的测试物浓度(LogμM),Y为相对活性(%NC)。
平均值、标准偏差、相对活性、IC50及95%置信区间等数据保留三位有效数字。
测试浓度:5个测试浓度为0.1μM、1μM、10μM、50μM和100μM。
肝微粒体浓度为0.5mg/mL。
NADPH浓度为1.0mM。
实验结果:
结论:Rg3在0.1μM-100μM的测试浓度条件下,对人肝微粒体中的CYP1A2的酶活性无明显抑制作用;对CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的酶活性有轻微抑制作用;对CYP2B6存在浓度依赖性抑制,其IC50>100μM。
2)Rg3对CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4的酶活性和mRNA表达的诱导作用
实验目的:评价Rg3对人原代肝细胞中的肝脏药物代谢酶CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4的诱导作用。
实验方法:三个供体的人原代肝细胞分别与不同浓度的Rg3或特异性诱导剂于37℃,5%CO2条件下共孵育3天,然后分别用液质联用仪(LC-MS/MS)检测酶活性,荧光定量PCR检测mRNA的表达量。
测试系统:该试验所用超低温冷冻人原代肝细胞(细胞批号:HNN、QBU和XSM)由美国体外技术公司BIOIVT提供。
测试结果:
结论:在100μM、10μM和1μM测试浓度时,Rg3对人原代肝细胞的CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4的酶活性和mRNA表达水平均无诱导作用。
上述实验结果表明:
1)人参皂苷Rg3可与紫杉醇起到良好的药物协同作用,抑制了紫杉醇在体内的代谢,提高了药物的血药浓度和治疗效果。
2)人参皂苷Rg3对P450的7个亚族没有诱导作用,复方制剂不会促进紫杉醇的代谢,不会降低紫杉醇的血药浓度。
实验结论:P450酶代谢的抑制和诱导实验证明了人参皂苷和紫杉醇良好药物协同的作用机制。
应用实施例7:注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体稳定性研究
以实施例1制备得到的产品进行稳定性研究
通过加速稳定性实验说明,该制剂稳定,符合要求质量要求。
应用实施例8:注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体的乳腺癌(MDA-MB-231)、人胃癌(SNU-16)、食管癌(AMC-HN-8)体内研究
动物:BALB/c裸小鼠,鼠龄3-4周,上海药物研究所生产。
肿瘤细胞株:乳腺癌MDA-MB-231细胞株
人胃癌SNU-16细胞株
食管癌AMC-HN-8细胞株
由中科院上海药物研究所提供。
移植瘤模型:用上述各细胞株接种于裸小鼠右侧腋窝皮下,细胞接种量为5×106/只,形成移植瘤后再在裸小鼠体内传1代后使用。
实验方法:将肿瘤细胞株注入小鼠皮下,建立皮下肿瘤模型。当肿瘤体积达到100mm3(接种后7d)时,将小鼠随机分为5组(n=8每组)治疗,每组尾静脉注射空白溶剂(5%葡萄糖)、人参皂苷Rg3脂质体、注射用紫杉醇脂质体(力朴素)、力朴素+Rg3脂质体、注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体(30mg/kg紫杉醇计,45mg/kg人参皂苷Rg3计),每7天给一次药,持续到第28天,给药的同时测量肿瘤的长度、宽度和记录体重。计算肿瘤体积(V)的公式为:V=(W2×L)/2。长度(L)为实体瘤的最长直径,宽度(W)是垂直于长度的最短直径。在第28天实验结束,所有动物均处死,取出肿瘤进行影像学和组织学检测。
乳腺癌MDA-MB-231:根据体内药效学实验方法,针对乳腺癌MDA-MB-231体内药效学的研究数据如下。
结果显示:针对乳腺癌MDA-MB-231荷瘤鼠,同等剂量下,Rg3脂质体几乎无抑瘤效果,力朴素抑瘤效果一般,力朴素+Rg3脂质体效果得到改善,注射用复方人参皂苷Rg3紫杉醇脂质体效果最佳,在第21天肿瘤已完全消失。该实验结果表明:Rg3在复方脂质体中起到了良好的药物协同作用。
胃癌SNU-16:根据体内药效学实验方法,针对胃癌SNU-16体内药效学的研究数据如下。
结果显示:同等剂量下,注射用复方Rg3紫杉醇脂质体在各给药时间点肿瘤的抑制效果均显著优于力朴素。该实验结果表明:Rg3在复方脂质体中起到了良好的药物协同作用。
食管癌AMC-HN-8:根据体内药效学实验方法,针对食管癌AMC-HN-8体内药效学的研究数据如下。
结果显示:同等剂量下,注射用复方Rg3紫杉醇脂质体在各给药时间点肿瘤的抑制效果均显著优于力朴素。该实验结果表明:Rg3在复方脂质体中起到了良好的药物协同作用。
Claims (16)
1.一种人参皂苷紫杉醇脂质体,其为如下质量分数的组分:10份磷脂、1-1.5份人参皂苷、1份紫杉醇及15-35份冻干保护剂;
所述的人参皂苷为20(S)-人参皂苷Rg3;
所述的磷脂选自蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化磷脂、脑磷脂、含有0.01-10%的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇2000的蛋黄卵磷脂、含有0.01-10%的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇2000的大豆磷脂、含有0.01-10%的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇2000的氢化磷脂和含有0.01-10%的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-甲氧基聚乙二醇2000的脑磷脂的一种或多种。
2.如权利要求1所述的人参皂苷紫杉醇脂质体,其特征在于,
所述的紫杉醇与所述的人参皂苷的质量比为1:1或1:1.5;
和/或,所述的冻干保护剂为海藻糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖和半乳糖中的一种或多种;
和/或,所述的冻干保护剂与所述的紫杉醇的质量比为(25-35):1;
和/或,所述的人参皂苷紫杉醇脂质体平均粒径D90≤150nm;
和/或,所述的人参皂苷紫杉醇脂质体的包封率≥98%;
和/或,所述人参皂苷的纯度≥99%。
3.如权利要求1所述的人参皂苷紫杉醇脂质体,其特征在于,
所述的磷脂为蛋黄卵磷脂;
和/或,所述的冻干保护剂为葡萄糖;
和/或,所述的冻干保护剂与所述的紫杉醇的质量比为25:1;
和/或,所述的人参皂苷紫杉醇脂质体为如下质量分数的组分:10份磷脂、1或1.5份人参皂苷、1份紫杉醇及25份冻干保护剂。
4.一种如权利要求1所述的人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法,其特征在于,其包括如下步骤,
步骤1、将紫杉醇、人参皂苷、磷脂与有机溶剂的溶液A1进行浓缩成膜;
步骤2、将步骤1得到的膜在水中保温水化后,与冻干保护剂溶液混合均匀,得到脂质体溶液A2;
步骤3、其为方案1或方案2;
方案1包括如下步骤:
将步骤2得到的所述的脂质体溶液A2进行高压均质,控制粒径D90在100nm以下,得到脂质体溶液A3a;
方案2包括如下步骤:
步骤3、将步骤2得到的所述的脂质体溶液A2进行剪切后,通过150nm孔径挤出板挤出,控制粒径D90在100nm以下,得到脂质体溶液A3b。
5.如权利要求4所述的人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法,其特征在于,
所述的步骤1中,所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷中的一种或多种;
和/或,紫杉醇与所述的有机溶剂的质量体积比为1g/60-120ml;
和/或,所述的步骤1中,所述的溶液A1为将紫杉醇、所述的人参皂苷、所述的磷脂加热溶解于有机溶剂中得到;
和/或,所述的步骤1中,所述的浓缩为减压浓缩;
和/或,所述的步骤1中,所述的浓缩为浓缩至溶剂全部挥发完全即可;
和/或,所述的步骤1中,所述的浓缩为在旋蒸瓶中进行,转速为=40~60rp/min;
和/或,所述的步骤2中,所述的水为注射用水;
和/或,所述的步骤2中,所述的冻干保护剂溶液的浓度为0.20-0.35mg/ml;
和/或,所述的步骤2中,所述的水化的温度为35-65℃;
和/或,所述的步骤2中,所述的水化为在旋蒸瓶中进行,转速为40~60rp/min;
和/或,所述的步骤2中,所述的水化为以溶液均一即可;
和/或,所述的步骤2中,所述的紫杉醇:冻干保护剂溶液=1g:100mL;
和/或,所述的步骤2中,所述的冻干保护剂溶液的体积与所述的水的体积相同;
和/或,所述的步骤3的方案1中,所述的高压均质为在均质机中使用0~10℃冷冻水冷切循环;
和/或,所述的步骤3的方案1中,所述的高压均质的压力在800-1400bar之间;
和/或,所述的步骤3的方案1中,所述的高压均质的次数为3-4次;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述的剪切在室温下进行;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述的剪切的转速为1500~2200rp/min;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述的剪切的时间为5~10min;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述挤出的温度为35-45℃;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述挤出板的孔径为150nm;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述挤出的压力为600~800 psi;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述挤出的次数为3-4次。
6.如权利要求4所述的人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法,其特征在于,
所述的步骤1中,所述的有机溶剂为甲醇和/或乙醇与氯仿和/或二氯甲烷的混合溶剂;
和/或,紫杉醇与所述的有机溶剂的质量体积比为1mg/80mL;
和/或,所述的步骤1中,所述的溶液A1为将所述的人参皂苷、所述的磷脂加入到紫杉醇与所述的有机溶剂的溶液中,溶解得到;
和/或,所述的步骤1中,所述的浓缩为减压浓缩,所述的减压浓缩为真空=-0.08mpa~-0.1mpa;
和/或,所述的步骤1中,所述的浓缩为浓缩至溶剂全部挥发完全即可,总浓缩时间为低于4小时;
和/或,所述的步骤1中,所述的浓缩为在旋蒸瓶中进行,转速为50 rp/min;
和/或,所述的步骤2中,所述的冻干保护剂溶液的浓度为0.25mg/mL;
和/或,所述的步骤2中,所述的水化的温度为40-45℃;
和/或,所述的步骤2中,所述的水化为在旋蒸瓶中进行,转速为50 rp/min;
和/或,所述的步骤2中,所述的水化的时间为2-4小时;
和/或,所述的步骤3的方案1中,所述的高压均质为在均质机中使用0~10℃冷冻水冷切循环,并确保脂质体溶液的温度在5-10度;
和/或,所述的步骤3的方案1中,所述的高压均质的压力为1200bar;
和/或,所述的步骤3的方案1中,所述的高压均质的次数为4次;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述的剪切的转速为2000 rp/min;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述的剪切的时间为5min;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述挤出的温度为40℃;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述挤出的压力为800psi;
和/或,所述的步骤3的方案2中,所述挤出的次数为4次。
7.如权利要求4所述的人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法,其特征在于,
所述的步骤1中,所述的有机溶剂为乙醇:氯仿的体积比=1:1的混合溶剂;
和/或,所述的步骤1中,所述的溶液A1为将紫杉醇、所述的人参皂苷、所述的磷脂加热溶解于有机溶剂中得到,所述的加热为水浴加热至35-65℃;
和/或,所述的步骤1中,所述的浓缩为减压浓缩,所述的减压浓缩为真空-0.089~-0.1MPa。
8.如权利要求4所述的人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法,其特征在于,所述的步骤1中,所述的溶液A1为将紫杉醇、所述的人参皂苷、所述的磷脂加热溶解于有机溶剂中得到,所述的加热为水浴加热至55℃。
9.一种注射用人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法,其特征在于,其包括如下步骤;
步骤1、2和3同权利要求4-8任一项所述的人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法中的步骤1-3,得到脂质体溶液A3a或A3b;
步骤4、将所述的步骤3中得到的脂质体溶液A3a或A3b,进行除菌过滤,定量分装于西林瓶中,得到的脂质体溶液A4;
步骤5、将定量分装于西林瓶中的脂质体溶液A4进行冷冻干燥,得到注射用人参皂苷紫杉醇脂质体;
所述的人参皂苷紫杉醇脂质体为如权利要求1所述的人参皂苷紫杉醇脂质体。
10.如权利要求9所述的注射用人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法,其特征在于,
所述的步骤4中,所述的除菌过滤为过0.22μm滤膜;
和/或,所述的步骤5中,所述的西林瓶为50mL西林瓶;
和/或,所述的步骤5中,所述的冷冻干燥依次为:预冻、一次干燥、二次干燥;
和/或,所述的制备方法还进一步包括后处理,所述的后处理包括如下步骤:步骤5后,全压塞,出箱;轧盖和包装,即可。
11.如权利要求9所述的注射用人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法,其特征在于,所述的步骤5中,所述的冷冻干燥为如下步骤:步骤a、定量分装于西林瓶中的脂质体溶液A4至于冷冻干燥箱内,其中,冷冻干燥的搁板温度匀速降至-10±1℃,保温1小时,再将搁板温度升至-13±1℃,保温1小时,再将搁板温度继续降至-55±1℃,待制品温度达-45±1℃后,开始计时继续保温3小时;
步骤b、当步骤a中保温结束后,将冷凝器温度快速降至-50±1℃以下,抽真空至10pa以下,将搁板约1.5小时温度升至-25±1℃后,开始计时保温18个小时,再快速将搁板温度升至-15±1℃后,保温待制品冰晶完全消失,再继续保温4小时;
步骤c、当步骤b中保温结束后,将搁板温度1小时内快速升至15±1℃,保温3小时,然后将搁板温度升至30±1℃,待制品温度升至25±1℃时,保温12小时结束,即可。
12.一种注射用复方人参皂苷紫杉醇脂质体,其由如权利要求9-11任一项所述的注射用人参皂苷紫杉醇脂质体的制备方法制备得到。
13.一种人参皂苷紫杉醇脂质体在制备治疗和/或预防癌症药物中的应用;所述的人参皂苷紫杉醇脂质体为如权利要求1至3中任一项所述的人参皂苷紫杉醇脂质体或如权利要求12所述的注射用复方人参皂苷紫杉醇脂质体。
14.如权利要求13所述的应用,其特征在于,所述的癌症为乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌和食管癌中的一种或多种。
15.如权利要求14所述的应用,其特征在于,所述的乳腺癌为三阴性乳腺癌。
16.如权利要求14所述的应用,其特征在于,所述的乳腺癌的细胞为MDA-MB-231;和/或,所述的胃癌的细胞为SNU-16;和/或,所述的食管癌的细胞为AMC-HN-8。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011229476.4A CN114432245B (zh) | 2020-11-06 | 2020-11-06 | 一种人参皂苷紫杉醇脂质体、其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011229476.4A CN114432245B (zh) | 2020-11-06 | 2020-11-06 | 一种人参皂苷紫杉醇脂质体、其制备方法和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114432245A CN114432245A (zh) | 2022-05-06 |
CN114432245B true CN114432245B (zh) | 2023-10-03 |
Family
ID=81361908
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011229476.4A Active CN114432245B (zh) | 2020-11-06 | 2020-11-06 | 一种人参皂苷紫杉醇脂质体、其制备方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114432245B (zh) |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101015548A (zh) * | 2007-02-15 | 2007-08-15 | 黄成安 | 一种含有磷脂分散物的复方紫杉醇制剂及其制备方法 |
CN102423316A (zh) * | 2011-12-31 | 2012-04-25 | 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 | 一种紫杉醇复方制剂及其制备方法 |
CN106466299A (zh) * | 2015-08-19 | 2017-03-01 | 上海本素医药科技有限公司 | 以人参皂苷为膜材的空白脂质体、其制备方法及应用 |
KR20170035782A (ko) * | 2015-09-23 | 2017-03-31 | 세종대학교산학협력단 | 탁산계 약물 전달용 리포좀 및 이의 제조방법 |
CN106852928A (zh) * | 2015-12-09 | 2017-06-16 | 北京康爱营养科技股份有限公司 | 一种药物组合物及其用途 |
CN109833298A (zh) * | 2017-11-29 | 2019-06-04 | 厦门本素药业有限公司 | 以人参皂苷衍生物为膜材的新型空白脂质体、其制备方法及应用 |
CN111228219A (zh) * | 2018-11-29 | 2020-06-05 | 上海参素药物技术有限公司 | 以人参皂苷Rg3或其类似物为膜材的空白脂质体、其制备方法及应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105853403B (zh) * | 2016-05-09 | 2019-03-29 | 上海天氏利医药科技有限公司 | 一种紫杉醇棕榈酸酯脂质体及其制备方法 |
US20180050005A1 (en) * | 2016-08-16 | 2018-02-22 | Janssen Pharmaceutica Nv | Concentrated Solution of 17-Hydroxydocosahexaenoic Acid |
-
2020
- 2020-11-06 CN CN202011229476.4A patent/CN114432245B/zh active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101015548A (zh) * | 2007-02-15 | 2007-08-15 | 黄成安 | 一种含有磷脂分散物的复方紫杉醇制剂及其制备方法 |
CN102423316A (zh) * | 2011-12-31 | 2012-04-25 | 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 | 一种紫杉醇复方制剂及其制备方法 |
CN106466299A (zh) * | 2015-08-19 | 2017-03-01 | 上海本素医药科技有限公司 | 以人参皂苷为膜材的空白脂质体、其制备方法及应用 |
KR20170035782A (ko) * | 2015-09-23 | 2017-03-31 | 세종대학교산학협력단 | 탁산계 약물 전달용 리포좀 및 이의 제조방법 |
CN106852928A (zh) * | 2015-12-09 | 2017-06-16 | 北京康爱营养科技股份有限公司 | 一种药物组合物及其用途 |
CN109833298A (zh) * | 2017-11-29 | 2019-06-04 | 厦门本素药业有限公司 | 以人参皂苷衍生物为膜材的新型空白脂质体、其制备方法及应用 |
CN111228219A (zh) * | 2018-11-29 | 2020-06-05 | 上海参素药物技术有限公司 | 以人参皂苷Rg3或其类似物为膜材的空白脂质体、其制备方法及应用 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Ginsenoside Rg3 promotes cytotoxicity of Paclitaxel through inhibiting NF-κB signaling and regulating Bax/Bcl-2 expression on triple-negative breast cancer;Zuguo Yuan et al.;《Biomedicine & Pharmacotherapy》;20170531;第89卷;第227-232页 * |
人参皂甙Rg3联合化疗对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长影响的研究;刘嘉寅;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20131215(第12期);第E072-91页 * |
人参皂苷Rg3联合紫杉醇协同抗胃癌细胞增殖的研究;袁国荣等;《中华中医药学刊》;20110228;第29卷(第2期);第380-383页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114432245A (zh) | 2022-05-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6970683B2 (ja) | 固形腫瘍治療のための方法 | |
US9814734B2 (en) | Bufalin liposome, preparation method therefor and application thereof | |
CN103040748B (zh) | 一种培美曲塞二钠脂质体注射剂 | |
US20060034908A1 (en) | Manufacturing process for liposomal preparations | |
US8871253B2 (en) | Liposome having inner water phase containing sulfobutyl ether cyclodextrin salt | |
US11229602B2 (en) | Formulations for treating bladder cancer | |
CN112451487A (zh) | 一种姜黄素主动载药脂质体及其制备方法 | |
CN104203284A (zh) | 吸入用吡咯衍生物干粉制剂 | |
US11357728B2 (en) | Liposome having inner water phase containing sulfobutyl ether cyclodextrin salt | |
CN103370055A (zh) | 缓释性脂质体组合物及其制造方法 | |
CN109730998A (zh) | 米铂白蛋白纳米粒组合物及其制法 | |
KR20100103588A (ko) | 수용성의 양이온성 양친매성 제약학적 활성 물질의 투여를 위한 약물 전달 시스템 | |
CN105287612B (zh) | 共载盐霉素钠与阿霉素纳米脂质体及其制备方法与应用 | |
CN114432245B (zh) | 一种人参皂苷紫杉醇脂质体、其制备方法和应用 | |
WO2022242762A1 (zh) | 一种特定药脂比的药物组合物在抗肿瘤中的应用 | |
CN101897667A (zh) | 一种盐酸多柔比星脂质体注射剂及其制备工艺 | |
JP5466174B2 (ja) | 水溶性、カチオン性および両親媒性の薬学的に活性な物質を投与するためのドラッグ・デリバリー・システム | |
CN114712309B (zh) | 一种人参皂苷多西他赛脂质体、其制备方法和应用 | |
CN103040764B (zh) | 一种盐酸平阳霉素脂质体注射剂 | |
CN113827546A (zh) | 一种含阿霉素与免疫佐剂组合药物脂质体的注射用水凝胶及其制备方法 | |
WO2007014150A2 (en) | Method of administering liposomes containing oligonucleotides | |
CN102631330B (zh) | 一种兰索拉唑囊泡型磷脂凝胶缓释固体制剂 | |
TWI500430B (zh) | 伊立替康或鹽酸伊立替康脂質體及其製備方法 | |
CN115444821B (zh) | 一种人参皂苷长春新碱脂质体、其制备方法和应用 | |
CN115487148B (zh) | 一种人参皂苷米托蒽醌脂质体、其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20230331 Address after: 201612 room 605, building 20, No. 201, Minyi Road, Songjiang District, Shanghai Applicant after: Shanghai Shensu Pharmaceutical Technology Co.,Ltd. Address before: 361027 B7 Building, Xiamen Biomedical Industrial Park, 2062 Wengjiao West Road, Haicang District, Xiamen City, Fujian Province Applicant before: XIAMEN GINPOSOME PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. |
|
TA01 | Transfer of patent application right | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |