CN106852928A

CN106852928A - 一种药物组合物及其用途

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Publication number: CN106852928A
Application number: CN201510896998.2A
Authority: CN
Inventors: 石汉平; 应希堂; 韩梅; 栾春娜; 商维虎
Original assignee: Beijing Kang Love Nutrition Technology Co Ltd
Current assignee: Beijing Kang Love Nutrition Technology Co Ltd
Priority date: 2015-12-09
Filing date: 2015-12-09
Publication date: 2017-06-16

Abstract

本发明提供了一种药物组合物，以及这种组合物在医药卫生领域中的应用。本发明所述的组合物包括人参皂苷三组分和抗肿瘤药物紫杉醇。所述的人参皂苷三组分为人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2、和人参皂苷Re。该药物组合物可制备成口服液体制剂、片剂、胶囊剂、冻干粉针剂。本发明药物组合物的用途在于增强抗肿瘤药物的疗效，并减少抗肿瘤药物治疗造成的副作用。本发明的药物组合物特别针对乳腺癌疾病的治疗。

Description

一种药物组合物及其用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种抗肿瘤药物的组合物及其医药用途。

背景技术

根据WHO(世界卫生组织)统计显示，目前在残害人类生命各种疾病中，癌症已经成为死亡率第一重大疾病。仅在2008年，全球约有1270万癌症新增病例以及760万癌症死亡病例，其中约70％的死亡病例发生在低等收入和中等收入国家。另据国际权威调查机构预测，到2020年癌症死亡人数将翻一番，达到1000万人以上。目前，癌症的治疗手段主要包括手术、放疗和化疗等。其中，化疗能够明显延长病人的生命，在癌症的综合治疗中占有越来越重要的地位。但众所周知：在肿瘤化疗治疗中，患者普遍具有明显的恶心、呕吐、身体衰弱以及体重明显下降等副作用，给患者带来强烈的不适感同时影响临床结局。因此，在肿瘤治疗过程中，探索既可以增强药物疗效又能够减低副作用的辅助性治疗方案变得极为重要。

人参是一种药食同源食品，在我国已有较长的使用历史，未见显著的副作用，对多种疾病都具有防治效果，例如动脉硬化、高脂血症、血栓、高血压、免疫功能降低、肝功能降低等。在国际上，人参作为一种膳食营养补充品，深受人们的欢迎。

国内外大量科学研究表明，人参在肿瘤治疗中具有广泛的应用，如抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞的侵袭和转移；协同放化疗辅助治疗；增强肿瘤患者免疫功能等。然而，目前人参在使用过程中也存在着很多不足。首先，由于中药人参的产地、种类的不同，其质量良莠不齐；其次，在炮制过程中，由于制备工艺不同，人参样品中各人参皂苷活性成分含量不用；此外，采用人参皂苷单一成分时，人参皂苷Rg3和人参皂苷Rh2是具有较强抗肿瘤活性的人参单体，人参皂苷Re在降低胃肠道反应和骨髓抑制等不良反应的发生率中发挥着重要的作用，但仅靠单一使用难以充分展现中药多组分、多靶点的优势。

因此，为了增强放化疗的治疗效果，降低毒副作用，提高肿瘤患者的生活质量，依据补充替代医学原理，本发明将人参皂苷三组分(人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2和人参皂苷Re)依据不同比例设计成配方，使其能与抗肿瘤药物联合应用发挥增效减毒功效。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种具有增强抗肿瘤药物效果，并减少抗肿瘤药物副作用的药物组合物。

根据上述需解决的技术问题，设计了一种药物组合物，其包括人参皂苷三组分以及抗肿瘤药物紫杉醇，人参皂苷三组分和紫杉醇质量比为2000～500∶1，优选地，人参皂苷三组分和紫杉醇质量比1000∶1。

作为本发明进一步改进，所述的人参皂苷三组分包括人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2、和人参皂苷Re，其中，人参皂苷Rg3的质量百分比为20％～60％、人参皂苷Rh2的质量百分比为20％～60％、和人参皂苷Re的质量百分比为20％～60％。优选地，人参皂苷Rg3的质量百分比40％、人参皂苷Rh2的质量百分比为20％、和人参皂苷Re的质量百分比为40％。

本发明药物组合物的用途在于增强抗肿瘤药物的疗效，并减少抗肿瘤药物治疗造成的副作用。本发明药物组合物特别针对乳腺癌疾病的治疗。

本发明按一定比例将人参皂苷三组分配成6种配方，与抗肿瘤药物紫杉醇联合使用后，均具有明显的协同抑制人癌细胞生长的作用(增强作用)。这些结果预示着在肿瘤化疗过程中，同时服用该人参皂苷三组分的特定配方，有助于肿瘤患者的治疗和康复。

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明作进一步说明。

本发明提供了一种抗肿瘤的药物组合物，包括人参皂苷三组分和抗肿瘤药物紫杉醇，人参皂苷三组分和紫杉醇质量比为2000～500∶1，优选地，人参皂苷三组分和紫杉醇质量比1000∶1。

所述的人参皂苷三组分包括人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2、和人参皂苷Re。其中，人参皂苷Rg3的质量百分比为20％～60％、人参皂苷Rh2的质量百分比为20％～60％、和人参皂苷Re的质量百分比为20％～60％。优选地，在本实施方式中，人参皂苷Rg3的质量百分比40％、人参皂苷Rh2的质量百分比为20％、和人参皂苷Re的质量百分比为40％。

实施例1：本发明中人参皂苷的制备

1、人参皂苷Rg3提取纯化方法：

1.1人参皂苷的制备：

取200g人参药材，粉碎成粗粉，过60目筛。加入1000ml的70％乙醇，回流2h，充分震荡后过滤，再加入1000ml的70％乙醇，如此重复共计5次，合并5次滤液，减压蒸干得人参总皂苷。

1.2人参二醇组分的分离：

称取20g人参总皂苷溶于1000ml水，将此溶液通过AB-8型大孔树脂。首先用1000ml水洗树脂，流速为10ml/min；再用500ml的30％乙醇溶液洗；后以1000ml的pH＝10的碱性70％乙醇溶液洗脱。将洗脱液用旋转蒸发器真空浓缩至干，放入电热干燥箱中60℃干燥，得人参二醇组分粗皂苷。

1.3微波法纯化人参皂苷Rg3：

称取2g人参二醇组分粗皂苷，溶于100ml水中，加入盐酸至浓度为0.5mol/L，加水稀释到200ml。放入微波反应器内，选用225w，v＝2500MHz，开始反应。反应结束后，冷却至室温，倒去上清液，加甲醇100ml，10000r离心20min。过滤除去沉淀，得人参皂苷Rg3。

2、人参皂苷Rh2提取纯化方法：

2.1人参总皂苷的制备：

取200g干燥人参药材，加入1000ml的95％乙醇水浴加热回流2h，过滤，药渣再用1000ml的95％乙醇水浴加热回流2次，合并滤液，回收乙醇得浸膏，再用3倍量无水乙醇搅拌，静置2h，过滤，减压蒸干得人参总皂苷。

2.2人参皂苷Rh2组分的分离：

取人参总皂苷20g，加入200ml水溶解，采用乙醚萃取3次，每次50ml，将萃取液合并，回收溶液得含人参皂苷Rh2组分。

2.3薄层色谱纯化：

采用CHCl₃∶MeOH∶H₂O(2∶2∶4下层)溶剂系统，经硅胶柱反复层析；薄层色谱检查，分离得到白色化合物，应用甲醇-水体系重结晶，得到无色针状结晶，即为人参皂苷Rh2。

3、人参皂苷Re提取纯化方法：

3.1粗提液制备：

称取200g人参药材，粉碎成粗粉，过60目筛，应用80％乙醇水浴加热回流提取3次，每次500ml，时间2h。提取液减压浓缩至50ml，即为人参粗提液。

3.2D101大孔吸附树脂柱分离：

人参粗提液用20倍量水溶液加到已处理好的D101大孔吸附树脂柱(50×4cm，树脂为200g)。先用水洗柱，再用2％NaOH溶液、2％HCl溶液依次洗柱，再用水洗至流出液呈中性，最后采用90％乙醇淋洗，收集流出液。回收溶剂，60℃减压干燥，得干燥疏松黄白色粉末，即为人参总皂苷。

3.3纯化：

用40ml 70％乙醇溶解人参总皂苷，后加入400ml丙酮搅拌，有大量沉淀析出，放置，过滤，母液回收溶剂至干，得棕黄色疏松粉末。粉末再用40ml95％乙醇溶解，加300ml丙酮搅拌，析出沉淀，静置，过滤，母液回收至干，再用丙酮同法处理二次，过滤，回收溶液至干，60℃减压干燥，得黄白色干燥疏松粉末，即为人参皂苷Re。

实施例2：本发明通过以下的实验来验证上述药物组合物的效果

1、人参皂苷三组分的配比

6种人参皂苷三组分配方中的人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2、和人参皂苷Re的质量百分比如表1所示。

表1：人参皂苷三组分配方的人参皂苷Rg3、Rh2和Re的质量百分比

2、人参皂苷三组分和紫杉醇的药物组合物对人乳腺癌细胞的协同抑制作用

2.1实验方法

人乳腺癌细胞系MCF-7细胞培养：细胞生长于体积分数为10％的胎牛血清的DMEM/F12培养基中，于37℃，5％CO2培养箱中培养。3-4天以约1∶3比例传代一次。细胞经胰酶分散传代和收获，取对数生长期细胞进行实验。

人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长抑制实验：采用ATP方法进行实验。取对数生长期的MCF-7细胞，0.25％胰酶消化，用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基将细胞配制成细胞悬液，计数。调节细胞浓度至2×104/ml，接种于384孔板中，每孔50μl。置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h。实验分为以下3组：

①紫杉醇单一用药组：加入10μl不同浓度的紫杉醇于细胞中，使其终浓度为0.1，0.3，1，3，10，30nM；

②人参皂苷三组分组(共6种配方)：加入10μl不同浓度的人参皂苷三组分于细胞中，使其终浓度为0.1，0.3，1，3，10，30μM；

③紫杉醇和人参皂苷三组分联合组(共6种配方)：以质量浓度1∶1000配比紫杉醇和人参皂苷三组分混合液，加入不同浓度该混合液于细胞中。

每个浓度设5个复孔，同时设空白对照(10μl DMEM/F12培养基)。继续培养48h后，加入10μl ATP检测试剂，静置10min，采用多功能酶标仪在595nm波长下检测其发光值，并计算细胞的存活率。计算公式：细胞存活率＝(加药组细胞所测细胞发光值-空白对照组所测发光值)/(对照组细胞所测发光值-空白对照组所测发光值)×100％。实验重复三次。

2.2实验结果

紫杉醇和人参皂苷三组分的药物组合物对人乳腺癌细胞MCF-7的生长影响结果见表2。

表2：不同浓度紫杉醇、人参皂苷三组分配方1及紫杉醇联合人参皂苷三组分配方1对MCF-7细胞的细胞存活率(％)

注：紫杉醇联合人参皂苷三组分配方1与紫杉醇组相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01。

表3：不同浓度紫杉醇、人参皂苷三组分配方2及紫杉醇联合人参皂苷三组分配方2对MCF-7细胞的细胞存活率(％)

注：紫杉醇联合人参皂苷三组分配方2与紫杉醇组相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01。

表4：不同浓度紫杉醇、人参皂苷三组分配方3及紫杉醇联合人参皂苷三组分配方3对MCF-7细胞的细胞存活率(％)

注：紫杉醇联合人参皂苷三组分配方3与紫杉醇组相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01。

表5：不同浓度紫杉醇、人参皂苷三组分配方4及紫杉醇联合人参皂苷三组分配方4对MCF-7细胞的细胞存活率(％)

注：紫杉醇联合人参皂苷三组分配方4与紫杉醇组相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01。

表6：不同浓度紫杉醇、人参皂苷三组分配方5及紫杉醇联合人参皂苷三组分配方5对MCF-7细胞的细胞存活率(％)

注：紫杉醇联合人参皂苷三组分配方5与紫杉醇组相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01。

表7：不同浓度紫杉醇、人参皂苷三组分配方6及紫杉醇联合人参皂苷三组分配方6对MCF-7细胞的细胞存活率(％)

注：紫杉醇联合人参皂苷三组分配方6与紫杉醇组相比，^#p＜0.05，^##p＜0.01。

由以上结果(表2-表7)可知，6种人参皂苷三组分配方在浓度为0.1-30μM的范围内对人乳腺癌细胞MCF-7都没有显著的生长抑制作用(肿瘤细胞的存活率基本都在80％以上)，而单独使用紫杉醇时，随着紫杉醇浓度的不断增加(0.1-30nM)，MCF-7肿瘤细胞的存活率明显降低(69.5±6.3％-5.9±1.4％)，且具有浓度剂量依赖特点。更为重要的是，相比于紫杉醇单一组，联合应用组(即人参皂苷三组分配方联合紫杉醇)的细胞存活率更低，且具有显著性差异。说明该6种人参皂苷三组分与紫杉醇联合应用后，均能够显著增强紫杉醇抑制人乳腺癌细胞MCF-7生长的作用。

特别地，当人参皂苷三组分Rg3、Rh2和Re的比例为40％：20％：40％时(配方4)，其与紫杉醇联合应用后，在实验所测试的6个浓度下都具有协同抑制肿瘤细胞生长的作用。这些结果预示着在肿瘤化疗过程中，同时服用该人参皂苷三组分的特定配方，有助于肿瘤患者的治疗和康复。

以上所述的仅是本发明的实施方式，在此应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出改进，但这些均属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种药物组合物，其特征在于所述的药物组合物包括人参皂苷三组分以及抗肿瘤药物成分紫杉醇。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的人参皂苷三组分包括人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2、和人参皂苷Re。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述的人参皂苷中：

人参皂苷Rg3的质量百分比为20％～60％、人参皂苷Rh2的质量百分比为20％～60％、和人参皂苷Re的质量百分比为20％～60％。

4.一种药物组合物的用途在于增强抗肿瘤成分的疗效。

5.根据权利要求4所述的药物组合物的用途，其特征在于治疗乳腺癌疾病。