CN101352468A

CN101352468A - 牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途

Info

Publication number: CN101352468A
Application number: CNA2008101376454A
Authority: CN
Inventors: 戴好富; 王祝年; 王茂媛; 梅文莉; 吴娇; 曾艳波
Original assignee: Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences; Tropical Crops Genetic Resources Institute CATAS
Current assignee: Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences; Tropical Crops Genetic Resources Institute CATAS
Priority date: 2008-07-02
Filing date: 2008-07-02
Publication date: 2009-01-28

Abstract

本发明公开了牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途，属于中药、天然药物领域。牛角瓜通过乙醇提取，用石油醚进行萃取，剩下的水液经过滤后上大孔吸附树脂(D101)柱层析，先后用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，经浓缩得到甲醇部位，经实验证明，提取所得到的甲醇部位具有抗肿瘤细胞的作用。

Description

牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途

技术领域

本发明涉及一种药用植物新的医疗用途，尤其是牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途，属于中药、天然药物领域。

背景技术

牛角瓜[Calotropis gigantea(L.)Dryand ex Ait.f.]为萝藦科(Asclepiadaceae)牛角瓜属(Calotropis)植物。别名：五狗卧花、羊浸树、断肠草。牛角瓜属植物全世界共有6个种，分布于东南亚。我国产牛角瓜和白花牛角瓜2种，分布于海南、云南、广东和广西等地，生长于低海拔向阳山坡、旷野和海边。牛角瓜根、茎、叶、果各部及白色汁液均有大毒和强烈的刺激性，食少量能引起呕吐和下泻，食大量则会发生严重的腹痛及肠炎，以致死亡，妊娠的人畜中毒引起流产。牛角瓜入药可用作发汗剂、除痰剂、驱虫剂、驱风剂和强心剂，用于治疗湿疹、麻疯病、梅毒、象皮病、哮喘等病症。

目前，已从牛角瓜植物中分离出50余种化合物，其中强心苷类化合物为主要的化学成分(《现代本草纲目》(上卷)，2001年版)。至今文献报道多为牛角瓜强心苷类化合物在抗肿瘤等方面的研究和应用(《Journal of Natural Product》，2006，69：1249；《Chemical PharmaceuticalBulletin》，1998，46：528)，公开专利“PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAININGUSCHARIDIN OR ITS ANALOGUES”(US 6342490B1)涉及强心苷抗肿瘤活性的研究，“一种治疗癌症的强心苷类化合物及其制备方法”(专利CN1414010A)涉及强心苷类化合物提取新工艺等。

癌症是一组可影响身体任何部位的100多种疾病的通称。使用的其它术语为恶性肿瘤和肿瘤。癌症是全世界一个主要死亡原因。在2005年全世界5800万死亡总数中，癌症占所有死亡的760万(或13％)。导致癌症总死亡率的主要癌症种类为：肺(130万死亡/年)，胃(约100万死亡/年)，肝(662000死亡/年)，结肠(655000死亡/年)，乳腺(502000死亡/年)。目前的治疗手段为临床用药从单一药物治疗过渡到多药联合化疗，但是，绝大多数的治疗仅能延长生命而不能根除病症，伴随治疗产生的许多毒副作用如肝功能衰竭和糖尿病等，使得患者的免疫系统受到损害。目前从天然药物中寻找抗肿瘤药物是研究的热门课题。一些中草药的提取物如延命素(《云南植物研究》，2006，28：95)、牡荆苷(《热带亚热带植物学报》，2008，16：51)、亚油酸(《上海医学》，1994，17：635)等具有抗肿瘤的活性，其化学结构包括二萜、黄酮苷、有机酸等。大蒜、蘑菇、灵芝和人参等已被许多国家用于癌症治疗。

本发明所述的牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途，至今尚未见文献报道和专利公开。

发明内容

本发明的目的是提供牛角瓜新的医疗用途，即牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的用途。

本发明的内容是牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物中的用途，所述用途特征在于：1、牛角瓜提取物可通过下述步骤获得：牛角瓜干燥根，适当粉碎后用8-11倍量95％乙醇室温浸泡提取3次，也可渗漉提取，将提取液减压回收乙醇，减压回收乙醇至无醇味。将乙醇提取物分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取得到石油醚浸膏A，剩下的水液经过滤后上大孔吸附树脂(D-101)柱层析，先后用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，经浓缩得到甲醇浸膏B。浸膏A、B干燥即得牛角瓜提取物A、牛角瓜提取物B；2、牛角瓜提取物B和/或牛角瓜95％乙醇提取物，添加适当的药用辅料，按常规的制剂工艺，即可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液等口服药物制剂和注射药物制剂。

牛角瓜提取物B经薄层层析，用强心苷显色剂显色，显示牛角瓜提取物B含有强心苷类化合物。

本发明的牛角瓜提取物B，经体外活性筛选，统计处理结果显示有较好的抗肿瘤活性。为了进一步验证牛角瓜及其提取物在治疗肿瘤方面的功效，对牛角瓜提取物B进行了100例病人初步的临床疗效观察，结果表明牛角瓜提取物B是有效的。由牛角瓜提取物B的体外活性筛选和病人初步临床疗效观察结果，可以合理推导牛角瓜及其提取物可用于制备抗肿瘤药物，即牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物方面的用途。

本发明的有益效果是提供了牛角瓜在民间通常用于制备治疗湿疹、麻疯病等药物以外的新的医疗用途，即牛角瓜及其提取物在制备抗肿瘤药物方面的用途，并采用不同的溶媒萃取得到牛角瓜提取物B，牛角瓜提取物B添加适当的药用辅料，按常规的制剂工艺，即可制成口服和注射药物制剂。

下面是牛角瓜提取物B的体外活性筛选和病人初步临床疗效观察试验及其结果。

一、体外活性筛选

试验方法：

采用MTT法测试了牛角瓜提取物B对人体的胃癌细胞SGC-7901、慢性骨髓性白血病细胞K562、人口腔表皮癌细胞KB、骨纤维肉瘤HT-1080、骨肉瘤(G-292、KHOS/NP)、前列腺癌LNCap、胃腺癌(KKLS、MKN-28、MKN-45)等细胞株的体外抑瘤活性(结果见附表1)。活性测试方法如下：实验设阴性对照组(水)、DMSO溶剂对照组、阳性对照组(丝裂霉素C)和8个不同浓度(0.8，1.6，3.2，6.3，12.5，25，50，100)的待测样品，每个浓度设2个平行。收集对数生长期细胞，血球计数板计数，按每孔4500个癌细胞量接种于96孔平底细胞培养板中，置于5％CO₂、湿度90％以上、37℃培养箱中培养。24h后取出加入一定量的待测样品，继续培养3d后取出置于显微镜下观察每孔细胞形态，记录细胞形态变化情况，接着每孔加入5mg/mL的MTT溶液(溶于平衡盐溶液PBS)50μL，37℃反应4h后，将细胞培养液吸出，每孔加入100μL DMSO将Formazane充分溶解，将细胞培养板置于MK3酶标仪上，用570nm波长测各孔的吸光度(A)，按下列公式求生长抑制率。

以样品浓度为横坐标，以抑制率为纵坐标，作图并求出抑制率为50％时样品的浓度(IC₅₀)，样品活性结果即以半数抑制浓度(IC₅₀)表示。

实验结果：

附表1样品对SGC-7901、K562等肿瘤细胞株的毒性作用

注：毒性值IC₅₀，即药物对细胞杀灭50％时的浓度值。IC₅₀值越大则毒性越小。

二、初步临床疗效观察

研究对象：肿瘤患者，其中男63例，女37例，年龄最小者35岁，最大者73岁。

诊断标准：1、无其他任何不良症状；2、没有服用过任何其他抗肿瘤药物。

研究方法：该试验以100名肿瘤患者为研究对象，受试物为本发明成药(约含0.15g牛角瓜提取物B的0号胶囊)服用，一日三次，每次二粒，开水冲服。每40天为一个疗程，连续两个疗程后停药休息一周，详细观察病情变化进行检查。然后进行第三个疗程治疗，在服药期间停服其它药品。

临床治愈：症状及客观检查阳性征象消失，连续半年无复发者。

临床显著：症状基本消失，癌灶缩小一半以上，其它客观检查有明显好转，观察半年以上不再发展者。

临床有效：症状有所改善，病灶基本稳定，观察在一个月以上者。

临床无效：症状及客观检查无改善，或仅有短期改善，而又迅速恶化者。

疗效结果：

本发明的优点是：

1、本发明选用的天然药物为原料，低毒，副作用小。

2、本发明无须煎煮，治疗方便，有效率达91％。

3、本发明能够控制癌细胞增生，防止癌细胞扩散，使癌细胞枯萎脱落消失。

4、本发明提供低剂量(0.5～2mg/kg)即可产生抗肿瘤活性，因此长期低剂量(如0.6～1.25mg/kg)比高剂量(5～10mg/kg)的抗肿瘤作用更强。

具体实施方式

实施例1

取牛角瓜干燥品2.0kg，用10倍量95％乙醇分3次(5、3、3天)浸提，减压回收乙醇，浓缩干燥得到浸膏粉，浸膏粉加入淀粉适量，混均、制粒、干燥、整粒，装入胶囊，制成1000粒即可。

实施例2

取牛角瓜干燥品10.0kg，用9倍量90％乙醇渗漉，减压浓缩渗漉液至无醇味得浓缩液，浓缩液分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取得到石油醚浸膏A，剩下的水液经过滤后上大孔吸附树脂(D-101)柱层析，先后用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，经浓缩得到甲醇浸膏B，浸膏B干燥即得牛角瓜提取物B。取牛角瓜提取物B 100g，加入淀粉等适量辅料，混均、制粒、干燥，压制成1000片即可。

实施例3

取牛角瓜干燥品5.0kg，用8倍量80％乙醇渗漉，减压浓缩渗漉液至无醇味得浓缩液，浓缩液分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取得到石油醚浸膏，剩下的水液经过滤后上大孔吸附树脂(D-101)柱层析，先后用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，经浓缩得到甲醇浸膏，甲醇浸膏干燥即得牛角瓜提取物B；取牛角瓜提取物B 25g，加适量注射用水溶解，按常规的水针剂工艺，调PH值、过滤、灌封、灭菌制成1000ml即可；或者添加适量附加剂如甘露醇，溶解搅匀，过滤、冻干、分装制成500瓶即可。

Claims

1、牛角瓜在制备抗肿瘤药物中的新用途，其特征在于所述牛角瓜为萝藦科(Asclepiadaceae)牛角瓜属(Calotropis)植物牛角瓜(Calotropis gigantea)，药用全株。

2、牛角瓜提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途，其特征在于牛角瓜提取物可通过下述步骤获得：

牛角瓜干燥根，适当粉碎后用8-11倍量95％乙醇室温浸泡提取3次，也可渗漉提取，将提取液减压回收乙醇，减压回收乙醇至无醇味。将乙醇提取物分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取得到石油醚浸膏A，剩下的水液经过滤后上大孔吸附树脂(D-101)柱层析，先后用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，经浓缩得到甲醇浸膏B。浸膏A、B干燥即得牛角瓜提取物A、牛角瓜提取物B。

3、根据权利要求2所述牛角瓜提取物，其特征在于所述牛角瓜提取物B含有强心苷类化合物。

4、根据权利要求1、2所述用途，其特征在于：将牛角瓜提取物B和/或牛角瓜95％乙醇提取物，添加适当的药用辅料，按常规的制剂工艺，即可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液等口服药物制剂和冻干粉针、水针等注射药物制剂。