CN113384705A - 泊洛沙姆修饰的脂质体的制备及在口服药物递送中的应用 - Google Patents
泊洛沙姆修饰的脂质体的制备及在口服药物递送中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了泊洛沙姆修饰的脂质体制备方法及在口服药物递送中应用。该方法主要是通过泊洛沙姆对植物提取脂质及商用脂质进行修饰,所获得的脂质体经口服后在胃肠道中具有优异的稳定性,从而增加了口服药物的胃肠道稳定性及递送效率。目前对于通过泊洛沙姆修饰的植物脂质及商用脂质的脂质体在多种疾病的口服治疗方面均无报道,因此该发明有力地证明了泊洛沙姆修饰的植物脂质及商用脂质的脂质体,通过口服后可以在胃肠道中保持稳定,从而提高药物的治疗效率。因此泊洛沙姆修饰的脂质体对多种疾病的口服药物递送治疗具有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于纳米药物载体技术领域,具体涉及一种含泊洛沙姆的脂质载药纳米载体及制备方法提高纳米药物在为胃肠道的稳定性及在多种疾病领域的应用。
背景技术
脂质纳米药物是以生物相容的脂质材料作为载体,将药物分子溶解或包裹于脂质核内或者是通过吸附、附着于纳米粒子表面的新型纳米药物递送系统。脂质纳米药物不仅能够改善机体对药物吸收、改变药物体内过程,而且还具有药物缓释、控释、提高药物稳定性、增强疗效降低毒副作用等方面的优越性。现已广泛应用于基因药物、抗肿瘤药、蛋白质和多肽等药物的载体系统。现已有脂质体、脂质纳米药物、胶束等体系供临床使用。
脂质纳米药物载体主要包括如脂肪酸甘油酯类(三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、Witepsol W 35、 Witepsol H35、 Witepsol H 42、单硬脂酸甘油酯)及脂肪酸类(如硬脂酸、棕榈酸),胆固醇,磷脂等。
植物来源的纳米结构和纳米颗粒在许多学科得到应用如保健、食品、饲料、化妆品、生物医学、能源科学、药物基因传递、环境健康等领域。在绿色纳米技术中,天然植物纳米粒子作为一种经济高效,可持续和可再生的理想来源,可帮助消除或减少合成纳米材料时产生的有害物质。研究发现植物中含有各种各样的囊泡,这些可食性植物来源囊泡每天在与人们的肠道接触。而且这些植物囊泡还参与健康受试者的肠道组织更新过程,调节肠道微生物群,并且对炎症性疾病(如结肠炎,肝脂肪变性)具有重要的生物学功能。此外,研究数据表明植物来源的纳米囊泡是治疗剂(如siRNA,抗癌药)或者难溶性天然化合物(如姜黄素,喜树碱)递送的极佳载体,因为它们能很好的穿越哺乳动物屏障系统而不引起炎症反应或细胞坏死。植物来源的纳米粒子似乎在物种间交流中发挥着作用,并被假定具有抗炎及癌症的作用。从生姜、胡萝卜、葡萄、葡萄柚、柠檬、苹果、西蓝花等中分离并鉴定了可食性植物来源的纳米颗粒,这些纳米颗粒在大小和结构上与哺乳动物衍生的外泌体相似。它们含有蛋白质、脂质、miRNA,可被肠道巨噬细胞和干细胞所吸收,而达到对相应疾病的治疗。
泊洛沙姆作为一种聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯构成的非离子式三嵌段共聚物,具有粘液穿透能力,被用于口服纳米药物递送中克服粘液对口服药物吸收的障碍。天然植物脂质中含有一些天然靶向分子如半乳糖、磷脂酰丝氨酸等可以实现对细胞的天然靶向性。脂质作为药物载体具有良好的生物相容性和生物降解性等生物医学方面的性能,已经被FDA批准可应用于临床医学。本研究分别利用植物提取的脂质及商用脂质作为药物载体,同时引入具有吸收促进剂作用的泊洛沙姆,这种含有泊洛沙姆的脂质载体不仅提高了药物在胃肠道稳定性差、吸收差、易被分解等缺点。同时也解决了一些合成纳米颗粒在体内潜在毒性、大规模经济生产有关的问题及其临床应用存在的问题。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的之一在于提供多种含泊洛沙姆载药脂质体(枸杞,桑叶,桑葚,茶叶等多种可食性植物脂质)及商用脂质体(磷脂,三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、Witepsol W 35、 Witepsol H35、 Witepsol H 42、单硬脂酸甘油酯及脂肪酸类),其具有均一的粒径、良好的生物相容性、可降解性以及粘膜穿透能力。同时口服后,可提高纳米药物在胃肠道中的稳定性及在病灶部位的聚集。提高纳米药物在炎症性肠病及癌症部位的治疗效果。
本发明的技术方案具体如下:
含泊洛沙姆的脂质体的制备方法,其特征在于:利用薄膜水化法制备脂质体,包括以下步骤:
(1)提供一种脂质;
(2)将步骤(1)脂质溶于有机溶剂,得到有机相;
(3)将泊洛沙姆加入步骤(2)中的有机相,在旋转蒸发仪中将有机相除去得到一层脂质薄膜;
(4)将步骤(3)的得到脂质薄膜中,加入3 mL药物水溶液,通过水浴超声得到粒子;
(5)将步骤(4)的得到的混合体系,通过探头超声仪100 W 超声2 min;
(6)将步骤(5)混合体系通过高速冷冻离心机 12000 RPM/min 离心30 min;
(7)将步骤(6)沉淀重新加入PBS缓冲液中进行洗涤三次;
(8)将步骤(7)得到的脂质体重新分散在1 mL含海藻糖的PBS溶液中,PBS和海藻糖溶液体积比为1:1;
(9)将步骤(8)的混合液冷冻干燥,将脂质体存于-20℃冰箱备用。
进一步,所述步骤(1)中脂质为植物提取的脂质或商业购买的脂质。
进一步,所述的植物提取的脂质,包括以下提取步骤:将500 g植物与1 L PBS进行混合,榨汁;混合液通过 3000 RPM/min 离心10 min,6000 RPM/min离心 20 min,10000RPM/min离心 30 min,取上清液;将含蛋白160 mg的上清液,加入30 mL体积比为2:1的甲醇/氯仿混合体系中,涡旋 1min后,加入相10 mL的氯仿;再次涡旋1 min后,加入3 mL的二次水,涡旋1 min;3000 RPM/min离心5 min后,取有机相,得到从植物中提取的脂质;所述的植物为枸杞,桑叶,桑葚,茶叶,生姜中的一种或几种。
进一步,所述商业购买的脂质包括三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、Witepsol W 35、 Witepsol H 35、 Witepsol H42、单硬脂酸甘油酯、磷脂中的一种或几种。
进一步,所述步骤(2)中,脂质的质量为40 mg,有机溶剂为无水乙醇,体积为60ml;所述步骤(3)中泊洛沙姆的质量为6 mg。
进一步,所述步骤(3)中泊洛沙姆包括泊洛沙姆108、泊洛沙姆124、泊洛沙姆182、泊洛沙姆188、泊洛沙姆215、泊洛沙姆235、泊洛沙姆237、泊洛沙姆333、泊洛沙姆334、泊洛沙姆338、泊洛沙姆407、泊洛沙姆408中的一种或多种。
进一步,所述步骤(4)中药物为表没食子儿茶素没食子酸酯、喜树碱、盐酸阿霉素、姜黄素、地塞米松中的一种或多种。
进一步,所述步骤(3)中,药物水溶液配置为将5 mg 的药物溶于3 mL 的二次水中。
进一步,所述步骤(5)中,混合体系通过探头超声仪100 W 超声2 min。
进一步,所述步骤(9)中,冷冻干燥按照以下方法进行:在-20摄氏度冷冻过夜后置于冻干机中冻干24 h。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合附图对本发明作进一步的详细描述,其中:
图1:实施例1中的含有泊洛沙姆的载药植物脂质体在胃肠道模拟液中的稳定性测定。
图2:实施例2中的含有泊洛沙姆的载药商用脂质体在胃肠道模拟液中的稳定性测定。
具体实施方式
以下将参照附图,对本发明的优选实施例进行详细的描述,但不用来限制本发明的范围。
实施例1
实验1:含有泊洛沙姆407的载药茶叶脂质体在胃肠道模拟液稳定性的检测。
(1)将500 g茶叶与1 L PBS进行混合,榨汁;混合液通过 3000 RPM/min 离心10min,6000 RPM/min离心 20 min,10000 RPM/min离心 30 min,取上清;上清液蛋白含量为160 mg加入30 mL甲醇/氯仿(2:1)混合体系中,涡旋 1min后,加入相10 mL的氯仿;再次涡旋1 min后,加入3 mL的二次水,涡旋1 min;3000 RPM/min离心5 min后,取有机相。得到从植物中提取的脂质。
(2) 取40 mg植物提取脂质加入到60 mL无水乙醇中,得到有机相。
(3)将6 mg泊洛沙姆407加入步骤(2)中的有机相,在旋转蒸发仪中将有机相除去得到一层脂质薄膜。
(4)将步骤(3)的得到脂质薄膜中,加入3 mL 的1.67 mg/mL盐酸阿霉素水溶液,通过水浴超声得到粒子。
(5)将步骤(4)的得到的混合体系,通过探头超声仪100 W 超声2 min。
(6)将步骤(5)混合体系通过高速冷冻离心机 12000 RPM/min 离心30 min。
(7)将步骤(6)沉淀重新加入PBS缓冲液中进行洗涤三次。
(8)将步骤(7)得到的脂质体重新分散在1 mL含海藻糖的PBS溶液中,PBS和海藻糖溶液体积比为1:1。
(9)将步骤(8)的混合液冷冻干燥,将脂质体子存于-20℃冰箱备用。
取1 mg粒子,分别加入2 mL胃、小肠、结肠模拟液中混匀,随后用DLS粒径分析仪去测定粒径及电势。
实验2:含有泊洛沙姆407的载药商用脂质体(磷脂)在胃肠道模拟液稳定性的检测。
(1)提供商用脂质(磷脂)。
(2)取40 mg商用脂质(磷脂)加入到60 mL无水乙醇中,得到有机相。
(3)将6 mg泊洛沙姆407加入步骤(2)中的有机相,在旋转蒸发仪中将有机相除去得到一层脂质薄膜。
(4)将步骤(3)的得到脂质薄膜中,3 mL 的1.67 mg/mL盐酸阿霉素水溶液,通过水浴超声得到粒子。
(5)将步骤(4)的得到的混合体系,通过探头超声仪100 W 超声2 min。
(6)将步骤(5)混合体系通过高速冷冻离心机 12000 RPM/min 离心30 min。
(7)将步骤(6)沉淀重新加入PBS缓冲液中进行洗涤三次。
(8)将步骤(7)得到的脂质粒子重新分散在1 mL含海藻糖的PBS溶液中,PBS和海藻糖溶液体积比为1:1。
(9)将步骤(8)的混合液冷冻干燥,将脂质体子存于-20℃冰箱备用。
取1 mg粒子,分别加入2 mL胃、小肠、结肠模拟液中混匀,随后用DLS粒径分析仪去测定粒径及电势。
图1为植物载药脂质体的粒径电势分布图。图1 a是不含有泊洛沙姆407的载药植物脂质体在胃模拟液中的测定,图1b是含有泊洛沙姆407的载药植物脂质体在胃模拟液中的测定,图1c是含有泊洛沙姆407的载药植物脂质体在小肠模拟液中的测定,图1d是含有泊洛沙姆407的载药植物脂质体在结肠模拟液中的测定。从图中可以看出,引入泊洛沙姆对载药脂质体的稳定性具有很大的作用。
图2为商用载药脂质体的粒径电势分布图。图2a是不含有泊洛沙姆407的载药商用脂质体在胃模拟液中的测定,图2b是含有泊洛沙姆407的载药商用脂质体在胃模拟液中的测定,图2c是含有泊洛沙姆407的载药商用脂质体在小肠模拟液中的测定,图2d是含有泊洛沙姆407的载药商用脂质体在结肠模拟液中的测定。从图中可以看出,引入泊洛沙姆对商用载药脂质体的稳定性具有很大的作用。
最后说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述,但本领域的普通技术人员应当理解,可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变,而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。
Claims (10)
1.含泊洛沙姆的脂质体的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)提供一种脂质;
(2)将步骤(1)脂质溶于有机溶剂,得到有机相;
(3)将泊洛沙姆加入步骤(2)中的有机相,在旋转蒸发仪中将有机相除去得到一层脂质薄膜;
(4)将步骤(3)的得到脂质薄膜中,加入3 mL药物水溶液,通过水浴超声得到粒子;
(5)将步骤(4)的得到的混合体系,通过探头超声仪100 W 超声2 min;
(6)将步骤(5)混合体系通过高速冷冻离心机 12000 RPM/min 离心30 min;
(7)将步骤(6)沉淀重新加入PBS缓冲液中进行洗涤三次;
(8)将步骤(7)得到的脂质粒子重新分散在1 mL含海藻糖的PBS溶液中,PBS和海藻糖溶液体积比为1:1;
(9)将步骤(8)的混合液冷冻干燥,将脂质体存于-20℃冰箱备用。
2.根据权利要求1中所述含泊洛沙姆的脂质体的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中脂质为植物提取的脂质或商业购买的脂质。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的含泊洛沙姆的脂质体的制备方法,其特征在于:所述的植物提取的脂质,包括以下提取步骤:将500 g植物与1 L PBS进行混合,榨汁;混合液通过 3000 RPM/min 离心10 min,6000 RPM/min离心 20 min,10000 RPM/min离心 30min,取上清液;将含蛋白160 mg的上清液,加入30 mL体积比为2:1的甲醇/氯仿混合体系中,涡旋 1min后,加入相10 mL的氯仿;再次涡旋1 min后,加入3 mL的二次水,涡旋1 min;3000 RPM/min离心5 min后,取有机相,得到从植物中提取的脂质;所述的植物为枸杞,桑叶,桑葚,茶叶,生姜中的一种或几种。
4.根据权利要求1-2中任一项所述的含泊洛沙姆的脂质体的制备方法,其特征在于:所述商业购买的脂质包括三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、Witepsol W 35、 Witepsol H 35、 Witepsol H 42、单硬脂酸甘油酯、磷脂中的一种或几种。
5.根据权利要求1中所述含泊洛沙姆的脂质体的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,脂质的质量为40 mg,有机溶剂为无水乙醇,体积为60ml;所述步骤(3)中泊洛沙姆的质量为6 mg。
6.根据专利要求1中所述含泊洛沙姆的脂质体的制备方法,其特征在于:所述泊洛沙姆包括泊洛沙姆108、泊洛沙姆124、泊洛沙姆182、泊洛沙姆188、泊洛沙姆215、泊洛沙姆235、泊洛沙姆237、泊洛沙姆333、泊洛沙姆334、泊洛沙姆338、泊洛沙姆407、泊洛沙姆408中的一种或多种。
7.根据权利要求1中所述含泊洛沙姆的脂质体的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中药物为表没食子儿茶素没食子酸酯、喜树碱、盐酸阿霉素、姜黄素、地塞米松中的一种或多种。
8.根据权利要求1中所述含泊洛沙姆的脂质体的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中,药物水溶液配置为将5 mg 的药物溶于3 mL 的二次水中。
9.根据权利要求1中所述含泊洛沙姆的脂质体的制备方法,其特征在于:所述步骤(5)中,混合体系通过探头超声仪100 W 超声2 min。
10.根据权利要求1中所述含泊洛沙姆的脂质体的制备方法,其特征在于:所述步骤(9)中,冷冻干燥按照以下方法进行:在-20摄氏度冷冻过夜后置于冻干机中冻干24 h。
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