CN111912651A - 一种脂肪组织冰冻切片的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种脂肪组织冰冻切片的制备方法，其包括冰冻切片机和速冻台进行预冷，将脂肪组织置于冰冻托头中央，将托头置于速冻台上进行冷冻处理，然后将其固定在冰冻切片机夹头中进行修片、调整组织切片方向、再次速冻、切片等处理；最后进行贴片、固定、染色和封片，完成脂肪组织冰冻切片的制备。本发明能够制备出完整且平整的脂肪组织冰冻切片。

Description

一种脂肪组织冰冻切片的制备方法
技术领域
本发明涉及脂肪组织切片方法，具体涉及一种脂肪组织冰冻切片的制备方法。
背景技术
冰冻切片是借助于低温条件使组织达到一定的硬度，然后切片的一种方法，很好的保存组织的抗原和酶活性，因而被广泛应用于临床快速病理诊断以及对于疾病的科学研究。不同组织的切片方式会有所不同。脂肪组织是由大量群集的脂肪细胞构成，聚集成团的脂肪细胞由薄层疏松结缔组织分隔呈小叶。脂肪组织中的网状纤维很发达，但脂肪组织的细胞间质很少。脂肪组织的结构特点决定了脂肪组织在冰冻切片过程中很难切出一张完整、平整的切片，目前采用较多的方法就是厚切片后推片或拉片，导致组织细胞严重变形、重叠，甚至掉片，严重影响病理诊断，脂肪组织冰冻切片是病理领域里最难攻克的难题之一，一直以来没有好的实验方法，对病理技术及诊断造成了很大的麻烦，严重的情况会造成误诊或漏诊。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种脂肪组织冰冻的切片方法，其能够制备出完整且平整的脂肪组织冰冻切片。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种脂肪组织冰冻切片的制备方法，其包括以下步骤：
（1）对冰冻切片机和速冻台进行预冷，将冰冻切片机箱温度设为-35℃，速冻台温度设为-40℃；
（2）将脂肪组织置于冰冻托头中央，并于脂肪组织周围的托头上滴加包埋剂，所述脂肪组织尺寸小于冰冻托头尺寸；
（3）将托头置于速冻台上进行冷冻处理，当脂肪组织最上部分临近完全冻凝前，采用速冻台上的冻锤放于脂肪组织上，平整脂肪组织表面，当脂肪组织完全冻凝后，取下冻锤，取出托头，并将其固定在冰冻切片机夹头中；
（4）将刀口对准脂肪组织，调整切片厚度为30μm，进行粗修片，待脂肪组织暴露最大面积之前，调整托头方向，使脂肪组织的实质组织丰富的灰白区域置于正下方，油性淡黄色脂肪细胞丰富的区域置于正上方；接着，调整切片厚度为10μm，进行细修片，直至脂肪组织暴露最大面积；
（5）取出托头，并将其放入速冻台上进行再次速冻；将冻锤置于脂肪组织上方，4-6分钟后，取下冻锤，取出托头；
（6）更换已在-40℃的速冻台进行预冷的新刀片，选择切片厚度为5μm；取出组织托头并将其固定在冷冻切片机夹头中，使脂肪组织的实质组织丰富的灰白区域置于正下方，油性淡黄色脂肪细胞丰富区域置于正上方；
（7）进行脂肪组织切片；
（8）切片完成后，采用玻璃片进行贴片、固定，然后进行染色，并进行封片，即可得到脂肪组织切片。
所述脂肪组织尺寸为1×1×0.5cm。
所述包埋剂为普通胶水或OCT包埋剂。
所述步骤（6）中，选择切片厚度为5μm。
所述步骤（7）具体为：右手转动冰冻切片机手轮，左手用排笔轻拉切片前端的空白固定胶水，配合右手转动手轮的速度轻慢的拉平切片；在完整有形组织完整切下来末端，右手停止轮动切片，左手停止向下拉片，轻轻将切片前端摁压在刀座上，使切片前端无法翻转卷起；然后左手用排笔尖部轻轻摁住切片末端左侧，右手继续向下轮转手轮到底部，完成整个切片动作。
采用上述方案后，本发明在脂肪组织冰冻处理的过程中，待脂肪组织最上部分临近完全冻凝时才将冻锤平放于脂肪组织上，这样既可以达到平整脂肪组织表面，又可以避免由于冻锤压制作用而导致脂肪组织结构受到挤压。本发明在修片完成后，将脂肪组织再次放到速冻台进行冰冻处理4-6分钟，并将冻锤置于上方，有效抵制因为修片时脂肪组织与刀片间摩擦导致脂肪组织回温软化，可以快速有效降低脂肪组织的温度，增加脂肪组织的硬度，有利于获得完整、平整的高质量的组织切片；并且，在修片的细修过程中以及切片过程中，脂肪组织的实质组织丰富的灰白区域置于正下方，淡黄色油性脂肪细胞吩咐的区域置于正上方，灰白色实质区域纤维丰富，有利于平整的切片及拉片，不会受淡黄色油性脂肪区域干扰；反之，如果淡黄色油性脂肪区域在下方，切片时油性脂肪组织会黏黏堆积在一起，无法成片状，影响平整拉片，后面的组织将严重堆积皱褶，无法正常平整铺片，这样低质量的切片严重影响疾病的诊断，本发明有效的解决了这方面的技术难题。综上，本发明能够制备出完整且平整的脂肪组织冰冻切片。
具体实施方式
本发明揭示了一种脂肪组织冰冻切片的制备方法，其采用现有的冰冻切片机和速冻台进行，具体包括以下步骤：
（1）对冰冻切片机和速冻台进行预冷，将冰冻切片机箱温度设为-35℃，速冻台温度设为-40℃。
（2）将脂肪组织置于冰冻托头中央，并于脂肪组织周围的托头上滴加包埋剂，所述脂肪组织尺寸小于冰冻托头尺寸。其中，脂肪组织尺寸为1×1×0.5cm，包埋剂为普通胶水或OCT包埋剂。
（3）将托头置于速冻台上进行冷冻处理，当脂肪组织最上部分临近完全冻凝前（一般需要冷冻4-6分钟），采用速冻台上的冻锤放于脂肪组织上，平整脂肪组织表面，当脂肪组织完全冻凝后，取下冻锤，取出托头，并将其固定在冰冻切片机中。
（4）将刀口对准脂肪组织，调整切片厚度为30μm，进行粗修片，待脂肪组织暴露最大面积之前，调整托头方向，使脂肪组织的纤维缔结组织或肿瘤组织等实质组织丰富的灰白区域置于正下方，油性淡黄色脂肪细胞吩咐的区域置于正上方；接着，调整切片厚度为10μm，进行细修片，直至脂肪组织暴露最大面积。
（5）取出托头，并将其放入速冻台上进行速冻；将冻锤置于脂肪组织上方，4-6分钟后，取下冻锤，取出托头。
（6）更换已在-40℃的速冻台进行预冷的新刀片，选择切片厚度为5μm；取出组织托头并将其固定在冷冻切片机夹头中，使脂肪组织的实质组织丰富的灰白区域置于正下方，油性淡黄色脂肪细胞丰富区域置于正上方。
（7）进行脂肪组织切片：右手转动冰冻切片机手轮，左手用排笔轻拉切片前端的空白固定胶水，配合右手转动手轮的速度轻慢的拉平切片；在完整有形组织完整切下来末端，右手停止轮动切片，左手停止向下拉片，轻轻将切片前端摁压在刀座上，使切片前端无法翻转卷起；然后左手用排笔尖部轻轻摁住切片末端左侧，右手继续向下轮转手轮到底部，完成整个切片动作。
（8）切片完成后，采用玻璃片进行贴片、固定，然后进行染色，并进行封片，即可得到脂肪组织切片。
本发明在脂肪组织冰冻处理的过程中，待脂肪组织最上部分临近完全冻凝时才将冻锤平放于脂肪组织上，这样既可以达到平整脂肪组织表面，又可以避免由于冻锤压制作用而导致脂肪组织结构受到挤压。本发明在修片完成后，将脂肪组织再次放到速冻台进行冰冻处理4-6分钟，并将冻锤置于上方，有效抵制因为修片时脂肪组织与刀片间摩擦导致脂肪组织回温软化，可以快速有效降低脂肪组织的温度，增加脂肪组织的硬度，有利于获得完整、平整的高质量的组织切片；并且，在修片的细修过程中以及切片过程中，脂肪组织的实质组织丰富的灰白区域置于正下方，淡黄色油性脂肪细胞吩咐的区域置于正上方，灰白色实质区域纤维丰富，有利于平整的切片及拉片，不会受淡黄色油性脂肪区域干扰；反之，如果淡黄色油性脂肪区域在下方，切片时油性脂肪组织会黏黏堆积在一起，无法成片状，影响平整拉片，后面的组织将严重堆积皱褶，无法正常平整铺片，这样低质量的切片严重影响疾病的诊断，本发明有效的解决了这方面的技术难题。
以上所述，仅是本发明实施例而已，并非对本发明的技术范围作任何限制，故凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何细微修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (5)

1.一种脂肪组织冰冻切片的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
对冰冻切片机和速冻台进行预冷，将冰冻切片机箱温度设为-35℃，速冻台温度设为-40℃；
将脂肪组织置于冰冻托头中央，并于脂肪组织周围的托头上滴加包埋剂，所述脂肪组织尺寸小于冰冻托头尺寸；
将托头置于速冻台上进行冷冻处理，当脂肪组织最上部分临近完全冻凝前，采用速冻台上的冻锤放于脂肪组织上，平整脂肪组织表面，当脂肪组织完全冻凝后，取下冻锤，取出托头，并将其固定在冰冻切片机夹头中；
将刀口对准脂肪组织，调整切片厚度为30μm，进行粗修片，待脂肪组织暴露最大面积之前，调整托头方向，使脂肪组织的实质组织丰富的灰白区域置于正下方，油性淡黄色脂肪细胞丰富的区域置于正上方；接着，调整切片厚度为10μm，进行细修片，直至脂肪组织暴露最大面积；
取出托头，并将其放入速冻台上进行速冻；将冻锤置于脂肪组织上方，4-6分钟后，取下冻锤，取出托头；
更换已在-40℃的速冻台进行预冷的新刀片，选择切片厚度为5μm；取出组织托头并将其固定在冷冻切片机中，使脂肪组织的实质组织丰富的灰白区域置于正下方，油性淡黄色脂肪细胞丰富区域置于正上方；
进行脂肪组织切片；
切片完成后，采用玻璃片进行贴片、固定，然后进行染色，并进行封片，即可得到脂肪组织切片。
2.根据权利要求1所述的一种脂肪组织冰冻切片的制备方法，其特征在于：所述脂肪组织尺寸为1×1×0.5cm。
3.根据权利要求1所述的一种脂肪组织冰冻切片的制备方法，其特征在于：所述包埋剂为普通胶水或OCT包埋剂。
4.根据权利要求1所述的一种脂肪组织冰冻切片的制备方法，其特征在于：所述步骤（6）中，选择切片厚度为5μm。
5.根据权利要求1所述的一种脂肪组织冰冻切片的制备方法，其特征在于：所述步骤（7）具体为：右手转动冰冻切片机手轮，左手用排笔轻拉切片前端的空白固定胶水，配合右手转动手轮的速度轻慢的拉平切片；在完整有形组织完整切下来末端，右手停止轮动切片，左手停止向下拉片，轻轻将切片前端摁压在刀座上，使切片前端无法翻转卷起；然后左手用排笔尖部轻轻摁住切片末端左侧，右手继续向下轮转手轮到底部，完成整个切片动作。
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