CN105928759A - 一种用于气生铁兰属植物表皮结构观测的表皮制作方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于气生铁兰属植物表皮结构观测的表皮制作方法，包括以下步骤：(1)取新鲜的成熟叶片，室温下浸泡在双氧水溶液中；(2)浸泡后取出叶片，在上表面和下表面中部，刮试去除表面鳞片；(3)切取叶片上刮去鳞片的部分，在其上表面或下表面撕下表皮层；(4)将撕下的表皮层用清水洗净，浸入载玻片上的水滴中、展平、盖盖玻片并进行常规染色。相对于现有技术，本发明表皮制作方法不但能够取得完整的表皮，而且还可以显著提高鳞片去除度，提高表皮细胞清晰度和气孔清晰度，方法简单，效果突出，尤其适用于气生铁兰属植物。
Description
技术领域
本发明涉及一种表皮制作方法，具体涉及一种用于气生铁兰属植物表皮结构观测的表皮制作方法。
背景技术
气生铁兰属植物(Tillandsia)是凤梨科(Bromeliaceae)景天科酸(CAM)类多年生常绿草本植物，属于无根类植物，该属植物在抗逆和气体污染物吸附方面作用突出。我国是近几年才开始引种栽培的，由于该类植物对甲醛等气体污染物的吸附能力极强，在室内绿化领域应用前景广阔。由于其生长在空气中与泥土无关，与其它植物不同，叶片是其吸收水分和养分等物质的唯一器官，叶片结构特殊，为了便于该类植物得到更科学的应用，叶片表皮结构的研究急待开展。由于其叶片结构特殊，叶片质地硬，特别是表面鳞片发达密集，鳞片结构与表皮细胞结合紧密，常规的叶片表皮制作方法均无法彻底去除表面鳞片获得理想的观察材料。目前我国引进的气生铁兰属植物已有190余种，急需一种有效简便的表皮制作方法，用于相关研究。
目前，现有技术中表皮制作方法包括直接剥离法、煮沸剥离法、离析法、指甲油印迹法、透明胶带粘取法、刮片法，虽然大部分方法能取得完整的表皮，但是均存在一定的缺陷，如鳞片去除度低，表皮细胞清晰度和气孔清晰度差等，都无法获得理想的气生铁兰属植物叶片表皮观察材料。
发明内容
发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供了一种用于气生铁兰属植物表皮结构观测的表皮制作方法。
技术方案：为实现上述目的，本发明提供了一种用于气生铁兰属植物表皮结构观测的表皮制作方法，包括以下步骤：
(1)取新鲜的成熟叶片，室温下浸泡在双氧水溶液中；
(2)浸泡后取出叶片，在上表面和下表面中部，刮试去除表面鳞片；
(3)切取叶片上刮去鳞片的部分，在其上表面或下表面撕下表皮层；
(4)将撕下的表皮层用清水洗净，浸入载玻片上的水滴中、展平、盖盖玻片并进行常规染色。
作为优选，所述气生铁兰属植物品种为霸王、贝吉、青铜气花、线叶铁兰、三色铁兰、斯垂科特、维路提那、哈里斯、扭叶铁兰或者松萝。
作为另一种优选，步骤(1)中所述双氧水溶液的浓度为1％-5％(质量分数)，浸泡时间为0.5-2.0小时。
作为另一种优选，步骤(1)中所述双氧水溶液的浓度为3％，浸泡时间为2.0小时。
作为另一种优选，步骤(2)中所述去除表面鳞片的面积为2cm x2cm。
具体制作方法如下：
1、取新鲜的成熟叶片，在室温下浸泡在1％-5％双氧水溶液中0.5-2.0小时。
2、浸泡后取出叶片，在上表面和下表面中部，分别选取2cm x2cm面积，用单面刀片进行刮试，去除表面鳞片，此时鳞片极易刮去，且不易划破表皮层。以3％的双氧水溶液浸泡2.0小时效果最佳。
3、切取叶片上刮去鳞片的部分。
4、在已切取的叶片上表面或下表面用镊子撕下表皮层，此时可撕下没有破损的完整表皮层。
5、将撕下的表皮层用清水洗净。
6、把撕取的表皮浸入载玻片上的水滴中、展平、盖盖玻片并进行常规染色。
通过以上步骤即可在常规光学显微镜下观察到清晰的气生铁兰属植物(如霸王、贝吉、青铜气花、线叶铁兰、三色铁兰、斯垂科特、维路提那、哈里斯、扭叶铁兰、松萝)叶片表皮细胞结构。
有益效果：相对于现有技术，本发明表皮制作方法不但能够取得完整的表皮，而且还可以显著提高鳞片去除度，提高表皮细胞清晰度和气孔清晰度，方法简单，效果突出，尤其适用于气生铁兰属植物。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。而本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体试验结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所描述的本发明。
实施例1
1、取新鲜的“维路提那”成熟叶片，在室温下浸泡在3％双氧水溶液中2.0小时。
2、浸泡后取出叶片，在上表面和下表面中部，分别选取2cm x2cm面积，用单面刀片进行刮试，去除表面鳞片，此时鳞片极易刮去，且不易划破表皮层。
3、切取叶片上刮去鳞片的部分。
4、在已切取的叶片上表面或下表面用镊子撕下表皮层，此时可撕下没有破损的完整表皮层。
5、将撕下的表皮层用清水洗净。
6、把撕取的表皮浸入载玻片上的水滴中、展平、盖盖玻片并进行常规染色。
通过以上步骤即可在常规光学显微镜下观察到清晰的“维路提那”叶片表皮细胞结构。
实施例2
所有方法与实施例1均相同，不同之处在于气生铁兰属植物的品种为“霸王”，且步骤1中用1％双氧水溶液浸泡2.0小时。
实施例3
所有方法与实施例1均相同，不同之处在于气生铁兰属植物的品种为“青铜气花”，且步骤1中用5％双氧水溶液浸泡0.5小时。
实施例4
所有方法与实施例1均相同，不同之处在于气生铁兰属植物的品种为“斯垂科特”，且步骤1中用3％双氧水溶液浸泡1.5小时。
实施例5
所有方法与实施例1均相同，不同之处在于气生铁兰属植物的品种为“松萝”，且步骤1中用4％双氧水溶液浸泡1小时。
实验例 本发明表皮制作方法所得表皮效果考察
六种常规植物表皮制作技术均用于气生铁兰属植物(选择品种“维路提那”)的表皮制作，制片效果与本发明方法(实施例1方法)比较见下表1。此外，对六种常规植物表皮制作技术进行了改进，在适宜阶段(直接剥离法在撕取表皮前；煮沸剥离法制作法在撕取表皮前；离析法在撕取表皮前；指甲油印记法在指甲油涂抹之前；透明胶带粘取法在透明胶带粘贴；刮片法在刮取表皮层前)进行表面鳞片刮去操作，鳞片去除效果见下表1
考察标准：
鳞片去除度：染色制片后，显微镜下观测所取表皮表面的鳞片覆盖情况，每个表皮细胞清晰可见，无鳞片覆盖，鳞片去除度为100％；10％表皮细胞清晰可见，90％表皮细胞有鳞片覆盖，鳞片去除度为10％；20％表皮细胞清晰可见，80％表皮细胞有鳞片覆盖，鳞片去除度为20％；依次类推。
表皮完整度：染色制片后，显微镜下观测所取表皮完整程度，整个材料完全无破损，完整度为100％；整个材料10％破损，完整度为90％；整个材料20％破损，完整度为80％；依次类推。
表皮细胞清晰度：染色制片后，显微镜下观测所取材料表皮细胞清晰度，采用0-5级打分法，无法分辨单个细胞，全部细胞模糊不清视为0级；部分单个细胞清晰可见、其余单个细胞模糊不清视为1级；每个单个细胞清晰可见，细胞结构模糊不清视为2级；每个单个细胞清晰可见、单个细胞细胞壁清晰可见，其它细胞结构不清晰视为3级；每个单个细胞清晰可见、单个细胞细胞壁、细胞膜清晰可见，细胞壁内结构不清晰视为4级；单个细胞、细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、液泡清晰可见视为5级。
气孔清晰度：染色制片后，显微镜下观测所取材料气孔清晰度，采用0-4级打分法，观察不到气孔，视为0级；可看到零星气孔，气孔保卫细胞结构不清晰，视为1级；可看到较多气孔，但分布不均匀，气孔保卫细胞结构不清晰，视为2级；可看到较多气孔，且气孔分布均匀，但气孔保卫细胞结构不清晰，视为3级；可看到较多分布均匀的气孔，且气孔保卫细胞结构清晰，视为4级。
表1制作表皮效果考察
由上表1结果可以看出，与6种常规方法及常规方法改进(添加刮去鳞片步骤)相比较，本发明所制作的表皮，不但可以得到完整的表皮，而且其鳞片去除度显著增加，同时，表皮细胞清晰度和气孔清晰度级别均显著提高，结果表明本方法对气生铁兰表皮的制片效果明显优于常规六种表皮制作方法。
Claims (5)
1.一种用于气生铁兰属植物表皮结构观测的表皮制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取新鲜的成熟叶片，室温下浸泡在双氧水溶液中；
(2)浸泡后取出叶片，在上表面和下表面中部，刮试去除表面鳞片；
(3)切取叶片上刮去鳞片的部分，在其上表面或下表面撕下表皮层；
(4)将撕下的表皮层用清水洗净，浸入载玻片上的水滴中、展平、盖盖玻片并进行常规染色。
2.根据权利要求1所述的用于气生铁兰属植物表皮结构观测的表皮制作方法，其特征在于，所述气生铁兰属植物品种为霸王、贝吉、青铜气花、线叶铁兰、三色铁兰、斯垂科特、维路提那、哈里斯、扭叶铁兰或者松萝。
3.根据权利要求1所述的用于气生铁兰属植物表皮结构观测的表皮制作方法，其特征在于，步骤(1)中所述双氧水溶液的浓度为1％-5％，浸泡时间为0.5-2.0小时。
4.根据权利要求1所述的用于气生铁兰属植物表皮结构观测的表皮制作方法，其特征在于，步骤(1)中所述双氧水溶液的浓度为3％，浸泡时间为2.0小时。
5.根据权利要求1所述的用于气生铁兰属植物表皮结构观测的表皮制作方法，其特征在于，步骤(2)中所述去除表面鳞片的面积为2cmx2cm。
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|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160907 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |