CN110174298B - 一种观察植物内部显微结构的染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种观察植物内部显微结构的染色方法，包括：(1)徒手切片；(2)将徒手切片放入甘油中保存待用；(3)徒手切片置于载玻片上，滴加甲苯胺蓝将徒手切片染色后，滴加清水，在显微镜下观察通气组织；(4)滴加间苯三酚染色后，然后滴加浓盐酸染色，在显微镜下观察木质化；(5)滴加75％乙醇清洗后，滴加苏丹7B染色，再滴加清水，在显微镜下观察栓质化；(6)滴加硫氢酸黄连素溶液染色后，滴加清水，滴加苯胺兰溶液，再滴加清水，在荧光显微镜下观察凯氏带。该方法可将徒手切片保存在甘油中，随取随用，使实验时间更加灵活，且只需1个完好的切片可先后进行4次染色观察，减少徒手切片的工作量，节省实验材料，提高了实验效率。
Description
技术领域
本发明涉及植物显微结构技术领域，尤其涉及一种观察植物内部显微结构的染色方法。
背景技术
对植物新鲜组织进行徒手切片可以用光学显微镜观察到植物内部的显微结构。植物内部的显微结构通常包括通气组织、木质化、栓质化以及凯氏带。解剖学研究对于植物的分类、发育学、生态学、生理学等都是非常重要的。但现有技术中存在2个突出问题，一是新鲜的植物材料做徒手切片后是放入蒸馏水中，需要马上进行观察，在实际操作中往往由于徒手切片时间过长，蒸馏水容易蒸发而使切片皱缩；二是观察通气组织、木质化、栓质化以及凯氏带等解剖结构总共需要4个完好的切片，并进行4次染色，徒手切片的工作量较大。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种观察植物内部显微结构的染色方法，
本发明是这样实现的：
本发明目的在于提供一种观察植物内部显微结构的染色方法，所述方法包括如下步骤：
步骤1、徒手切片；
步骤2、将徒手切片放入甘油中保存待用；
步骤3、取出保存好的徒手切片置于载玻片上，滴加甲苯胺蓝将徒手切片染色后，滴加清水，在显微镜下观察通气组织；
步骤4、滴加间苯三酚染色后，然后滴加浓盐酸染色，在显微镜下观察木质化；
步骤5、滴加75％乙醇清洗后，滴加苏丹7B染色，再滴加清水，在显微镜下观察栓质化；
步骤6、滴加硫氢酸黄连素溶液染色后，滴加清水清洗，然后滴加苯胺兰溶液，再滴加清水清洗，在荧光显微镜下观察凯氏带。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明提供的一种观察植物内部显微结构的染色方法，只需要1个完好的切片可以先后进行4次染色观察(通气组织、木质化、栓质化和凯氏带)，大大减少徒手切片的工作量，同时节省实验材料，提高了实验效率。
2、徒手切片为临时切片，之前没有保存方法，在实际操作中，蒸馏水容易干，切片皱缩，而本发明将切片保存在甘油中，切片完整，无皱缩，可以随取随用，随时染色观察，使徒手切片染色实验时间更加灵活。
3、本发明提供的一种观察植物内部显微结构的染色方法，步骤4中间苯三酚具有溶剂清洗的作用，避免甲苯胺蓝染色液的干扰。
4、本发明提供的一种观察植物内部显微结构的染色方法，步骤5中凯氏带是在蓝光下观察，步骤3中的染色液即使不清洗也不会对凯氏带的观察造成影响。
5、本发明提供的一种观察植物内部显微结构的染色方法，不需要使用盖玻片，避免了盖上盖玻片压坏切片的情况。
附图说明
图1为实施例1和对比例1的方法所观察的通气组织、木质化、栓质化、以及凯氏带的显微结构图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本发明提供一种观察植物内部显微结构的染色方法，包括如下步骤：
步骤1、徒手切片的制作：用刀片将植物根部小块横切成厚度0.2～0.5mm的切片。
步骤2、将徒手切片放入甘油中保存待用；
步骤3、药品配制：
(1)0.05％(w/v)甲苯胺兰(TBO)染液配制：取0.05g TBO，溶于100mL蒸馏水，混匀即成0.05％TBO。
(2)5％(w/v)间苯三酚溶液配制：取间苯三酚4～5g，溶于100毫升95％酒精中，混匀即成间苯三酚-酒精液，现配现用(溶液黄褐色失效)。
(3)0.1％(w/v)苏丹7B溶液配制：称取50mg苏丹7B溶于25mL PEG-300，后90℃水浴1h并冷却，加入等体积90％甘油，室温保存待用。
(4)0.1％(w/v)硫氢酸黄连素溶液的配制：称取0.1g硫氢酸黄连素溶于100mL蒸馏水，震荡混匀待用。0.5％(w/v)苯胺兰溶液的配制：称取0.5g苯胺兰溶于100mL蒸馏水，震荡混匀待用。
步骤4、将保存好的徒手切片解剖针挑入载玻片上，滴加1滴甲苯胺蓝将徒手切片染色3～5min后，滴加清水(或将切片用解剖针挑入另一滴加有清水的载玻片上)，在显微镜下观察通气组织；
步骤5、滴加1滴间苯三酚中30s～1min,接着滴加1滴浓盐酸中染色30s～1min，在显微镜下观察木质化；
步骤6、滴加1滴75％乙醇5～10min后，再滴加1滴苏丹7B染色3～5min后，滴加清水(或将切片用解剖针挑入另一滴加有清水的载玻片上)，在显微镜下观察栓质化；
步骤7、滴加1滴硫氢酸黄连素溶液10min～30min后，用蒸馏水洗净，再滴加1滴苯胺兰溶液5min～15min后，滴加清水(或将切片用解剖针挑入另一滴加有清水的载玻片上)在荧光显微镜下观察凯氏带。
对比例1
制备多个徒手切片。
通气组织观察：取1徒手切片置于载玻片上，滴加0.05％TBO使得徒手切片浸没于0.05％TBO中，染色3～5min后，蒸馏水洗，盖上盖玻片进行通气组织观察。
木质化观察：先取1徒手切片置于载玻片上，在徒手切片上滴上1滴浓盐酸，3～5min后，(可以用吸水纸吸掉多余水分)然后滴上间苯三酚-酒精液1滴，木质化的细胞壁就染上樱红或紫红色，盖上盖玻片进行木质化观察。
栓质化观察：先取1徒手切片置于载玻片上，切片组织如有后含物用蒸馏水洗切片，用吸水纸吸净，后浸没于0.1％(w/v)苏丹7B溶液1h或过夜。切片用蒸馏水洗几次，用吸水纸吸净，后滴加一滴蒸馏水，盖上盖玻片进行栓质化观察。
凯氏带观察：先取1徒手切片置于载玻片上，滴加0.1％(w/v)硫氢酸黄连素溶液使得切片浸没于0.1％(w/v)硫氢酸黄连素溶液1h后，用蒸馏水洗净，滴加0.5％(w/v)苯胺兰溶液0.5h后，用蒸馏水洗净，后滴加一滴蒸馏水，盖上盖玻片进行凯氏带观察。
实验例
记录并统计实施例1和对比例1所得通气组织、木质化、栓质化、以及凯氏带的显微结构图如图1所示。
由图1可知，实施例1和对比例1均可清晰地看到通气组织、木质化、栓质化、以及凯氏带的显微结构。
本发明实施例1的方法经多次反复试用和实验均取得了相同或相近的结果，表明方法稳定可靠，观察结果清晰，根的内部结构可以看清，与现有方法相比，可以先后进行4次染色观察(通气组织、木质化、栓质化和凯氏带)，大大减少徒手切片的工作量，同时节省实验材料，提高了实验效率。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种观察植物内部显微结构的染色方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
步骤1、徒手切片；
步骤2、将徒手切片放入甘油中保存待用；
步骤3、取出保存好的徒手切片置于载玻片上，滴加甲苯胺蓝将徒手切片染色后，滴加清水，在显微镜下观察通气组织；
步骤4、滴加间苯三酚染色后，然后滴加浓盐酸染色，在显微镜下观察木质化；
步骤5、滴加75％乙醇清洗后，滴加苏丹7B染色，再滴加清水，在显微镜下观察栓质化；
步骤6、滴加硫酸氢黄连素溶液染色后，滴加清水清洗，然后滴加苯胺兰溶液，再滴加清水清洗，在荧光显微镜下观察凯氏带；
所述步骤1中徒手切片的制作步骤为用刀片将植物根部小块横切成厚度0.2～0.5mm的切片；
所述步骤3中滴加1～3滴甲苯胺蓝将切片染色3～5min后再滴加清水；
所述步骤4中滴加1～3滴间苯三酚染色30s～1min，接着滴加1～3滴浓盐酸染色30s～1min；
所述步骤5中滴加75％乙醇5～10min后，滴加苏丹7B染色3～5min，再滴加清水；
所述步骤6中滴加硫酸氢黄连素溶液10min～30min后，滴加清水清洗后，再滴加苯胺兰溶液5min～15min。
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