CN117232923A - 一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法，包括以下步骤：步骤一：组织选取：选取大小为1.5*5.0*0.3cm大小的钙化组织；步骤二：将选取的钙化组织通过福尔马林溶液进行固定，用低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份，将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温，待石蜡完全浸入组织块后进行包埋；步骤三：脱钙处理：对蜡块进行修整，暴露出组织，将草酸溶液加入到反应容器中，将固定后的钙化组织放置到反应容器中进行脱钙；通过10％的草酸溶液对钙化组织进行脱钙，既能保持标本组织细胞形态，又能适当软化钙化区域，然后将脱钙标本组件放置于冷冻台上，用低温方法增加酸化后组织蜡块的硬度，便于对钙化组织进行切片。
Description
技术领域
本发明涉及钙化组织切片技术领域，尤其涉及一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法。
背景技术
日常病理工作中，会经常遇到含骨及严重钙化组织制作石蜡切片的特殊病例。但是骨及钙化组织非常坚硬，进行石蜡制片的整个过程程序繁多，其中以组织的固定、取材、脱钙、除酸、切片、染色等环节最为重要。
经检索，中国专利号为CN108918215B的发明专利，公开了一种快速制备硬组织切片的方法：将硬组织在多聚甲醛中固定，然后在蔗糖水溶液中浸泡；使用包埋剂包埋上述硬组织，然后进行速冻，使得包埋剂固化；将样本的一侧紧密地粘贴至粘附膜带上，然后在-25°C～-30℃下沿与粘附膜带的表面相平行的方向对硬组织进行切片，切片厚度为8-15μm；将带有硬组织切片的膜带置于防脱载玻片上，带有硬组织切片的膜带上的硬组织切片通过紫外固化胶与防脱载玻片紧密贴合，然后用紫外光引发紫外固化胶聚合，去除硬组织切片表面的粘附膜带，得到硬组织切片。本发明还要求保护上述方法所制备的硬组织切片在组织染色中的应用。本发明方法简便易学、价格低廉、效率高(仅需24小时)。
然而上述方法仅能用紫外光引发紫外固化胶聚合，去除硬组织切片表面的粘附膜带，得到硬组织切片，但钙化的组织“沙粒”状改变，组织脆性增加，常规切片极易发生碎裂，完整的组织结构很难保留，因此需要一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在钙化的组织“沙粒”状改变，组织脆性增加，常规切片极易发生碎裂，完整的组织结构很难保留的缺点，而提出的一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法，包括以下步骤：
步骤一：组织选取：选取大小为1.5*5.0*0.3cm大小的钙化组织；
步骤二：将选取的钙化组织通过福尔马林溶液进行固定，用低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份，将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温，待石蜡完全浸入组织块后进行包埋；
步骤三：脱钙处理：对蜡块进行修整，暴露出组织，将草酸溶液加入到反应容器中，将固定后的钙化组织放置到反应容器中进行脱钙；
步骤四：将脱钙处理后的钙化组织用三次蒸馏去离子水冲洗，中和组织PH；
步骤五：将中和处理后的钙化组织通过脱水机进行处理；
步骤六：在蜡块上涂抹一层甘油蛋白增加标本组织和蜡的融合度；
步骤七：切片：顺组织纹理朝向切片，先切容易出片的部位。
上述技术方案进一步包括：
草酸溶液浓度为10％，钙化组织在反应容器中浸泡时间为20-40min。
经过步骤三脱钙处理后的钙化组织先通过生理盐水冲洗两次。
将步骤六中的标本组织放置于冷冻台上，用低温方法增加酸化后组织蜡块的硬度。
切片时蜡块需要有一定的潮湿度，切片完成后镜下检查。
相比现有技术，本发明的有益效果为：
本发明中，通过10％的草酸溶液对钙化组织进行脱钙，既能保持标本组织细胞形态，又能适当软化钙化区域，然后将脱钙标本组件放置于冷冻台上，用低温方法增加酸化后组织蜡块的硬度，便于对钙化组织进行切片。
具体实施方式
实施例一
第一步，选取大小为1.5*5.0*0.3cm大小的钙化组织，将选取的钙化组织通过福尔马林溶液进行固定24小时；
充分泡水15-30min后，用低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份，将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温，待石蜡完全浸入组织块后进行包埋；
第二步，将草酸溶液加入到反应容器中，草酸溶液浓度为10％，钙化组织在反应容器中浸泡时间为20-40min，将固定后的钙化组织放置到反应容器中进行脱钙，将脱钙处理后的钙化组织用三次蒸馏去离子水冲洗，中和组织PH；
第三步，将中和处理后的钙化组织通过脱水机进行处理，在蜡块上涂抹一层甘油蛋白增加标本组织和蜡的融合度，顺组织纹理朝向切片，先切容易出片的部位，标本组织放置于冷冻台上，用低温方法增加酸化后组织蜡块的硬度，切片时蜡块需要有一定的潮湿度，切片完成后镜下检查。
实施例二
第一步，选取大小为1.5*5.0*0.3cm大小的钙化组织，将选取的钙化组织通过福尔马林溶液进行固定；
将选取的钙化组织通过福尔马林溶液进行固定，用低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份，将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温，待石蜡完全浸入组织块后进行包埋；
第二步，将醋酸溶液加入到反应容器中，醋酸溶液浓度为10％，钙化组织在反应容器中浸泡时间为20-40min，将固定后的钙化组织放置到反应容器中进行脱钙，将脱钙处理后的钙化组织用三次蒸馏去离子水冲洗，中和组织PH；
钙化组织进行中和处理中，向溶液中添加氢氧化钠溶液，处理后的钙化组织先通过生理盐水冲洗两次；
第三步，将中和处理后的钙化组织通过脱水机进行处理，在蜡块上涂抹一层甘油蛋白增加标本组织和蜡的融合度，顺组织纹理朝向切片，先切容易出片的部位，标本组织放置于冷冻台上，用低温方法增加酸化后组织蜡块的硬度，切片时蜡块需要有一定的潮湿度，甘油蛋白粘合剂充分固化后，切片完成后镜下检查。
实施例三
第一步，选取大小为1.5*5.0*0.3cm大小的钙化组织，将选取的钙化组织通过福尔马林溶液进行固定；
将选取的钙化组织通过福尔马林溶液进行固定，用低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份，将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温，待石蜡完全浸入组织块后进行包埋；
第二步，将草酸溶液加入到反应容器中，草酸溶液浓度为10％，钙化组织在反应容器中浸泡时间为20-40min，将固定后的钙化组织放置到反应容器中进行脱钙，将脱钙处理后的钙化组织用三次蒸馏去离子水冲洗，中和组织PH；
钙化组织进行中和处理中，向溶液中添加氢氧化钠溶液，处理后的钙化组织先通过生理盐水冲洗两次；
第三步，将中和处理后的钙化组织通过脱水机进行处理，在蜡块上涂抹一层甘油蛋白增加标本组织和蜡的融合度，顺组织纹理朝向切片，先切容易出片的部位。
综上所述，经过上述实施例一、实施例二与实施例三进行钙化组织切片完整度如下表所示：
| 项目 | 实施例一 | 实施例二 | 实施例三 |
| 完整度％ | 98.3 | 86.7 | 83.1 |
通过10％的草酸溶液对钙化组织进行脱钙，既能保持标本组织细胞形态，又能适当软化钙化区域，然后将脱钙标本组件放置于冷冻台上，用低温方法增加酸化后组织蜡块的硬度，便于对钙化组织进行切片。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：组织选取：选取大小为1.5*5.0*0.3cm大小的钙化组织；
步骤二：将选取的钙化组织通过福尔马林溶液进行固定，用低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份，将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温，待石蜡完全浸入组织块后进行包埋；
步骤三：脱钙处理：对蜡块进行修整，暴露出组织，将草酸溶液加入到反应容器中，将固定后的钙化组织放置到反应容器中进行脱钙；
步骤四：将脱钙处理后的钙化组织用三次蒸馏去离子水冲洗，中和组织PH；
步骤五：在蜡块上涂抹一层甘油蛋白增加标本组织和蜡的融合度；
步骤六：切片：顺组织纹理朝向切片，先切容易出片的部位。
2.根据权利要求1所述的一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法，其特征在于，草酸溶液浓度为10％，钙化组织在反应容器中浸泡时间为20-40min。
3.根据权利要求1所述的一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法，其特征在于，经过步骤三脱钙处理后的钙化组织先通过生理盐水冲洗两次。
4.根据权利要求1所述的一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法，其特征在于，将步骤六中的标本组织放置于冷冻台上，用低温方法增加酸化后组织蜡块的硬度。
5.根据权利要求1所述的一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法，其特征在于，切片时蜡块需要有一定的潮湿度，切片完成后镜下检查。
6.根据权利要求1所述的一种运用草酸对严重钙化组织完整切片的方法，其特征在于，钙化组织进行中和处理中，向溶液中添加氢氧化钠溶液。
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