CN111905059B - 抗肺癌的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药技术领域，具体涉及抗肺癌的中药组合物及其制备方法和应用。本发明所要解决的技术问题是提供了一种抗肺癌的中药组合物，用于扶正益气，缓解疼痛，抗肺癌。该中药组合物由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草10～40份、半枝莲9～40份、仙鹤草4～12份、黄芪3～20份、芦根5～30份、人工牛黄1～5份。本发明中药组合物具有一定的抗肺癌效果，能够保护呼吸系统，可用于肺癌的辅助治疗和维持治疗阶段，缓解癌症导致的疼痛，减轻患者痛苦，提高其生活质量。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及用于肺癌辅助治疗的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
肺癌是常见的恶性肿瘤之一，随着环境污染的加剧，肺癌的发病率越来越高，其严重的威胁着人们的健康。癌症的主要特点是癌细胞无休止地增生和迁移，不断消耗患者体内大量的营养物质，同时释放多种毒素，导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损等。目前恶性肿瘤的治疗主要是手术、药物化疗和放疗结合，手术和放疗是西医治疗恶性肿瘤的主要治疗方法，但是其主要以治标为主，在去除或杀死癌细胞的同时，对人体的正常组织产生了很大损失或不可逆转的损害，疗效也不太令人满意，联合化疗有效率仅为30％～40％，并且肿瘤患者在术后或经长期化疗后处于低免疫力状态，患第二肿瘤的风险极大增高，患者气虚瘀滞，生活质量严重下降。
药物治疗包括中药和西药治疗，西药治疗具有一定的副作用，在应用过程中西药的副作用会逐一出现，并且其副作用带来的后果有时会大于其治疗效果。能否针对性的研制出既能较有效控制肿瘤生长，同时药物的相关不良反应又较低的药物成为研究重点。中药具有双向调解作用，在癌症治疗上受到国内外医学界的关注和推崇。
现代中医认为肺癌是由于正气内虚、邪毒外侵引起的，以痰浊内聚，气滞血瘀，蕴结于肺，以致肺失宣发与肃降为基本病机，多与肺气不足、痰湿瘀血阻滞有关。扶正祛邪是癌症治疗的根本，对症治疗是癌症治疗的关键，气机不畅，则津、液、血运行不畅，积而成块形成肿瘤。因此，为减轻肺癌患者的痛苦，克服采用传统的放、化疗治疗癌症所带来的一系列问题，本发明人基于中医药对慢性炎症、囊肿和癌症发病机理的认识和分析，反复优化和调整配方，最终获得本发明的中药组合物，并取得了意想不到的抗癌效果。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供了一种抗肺癌的中药组合物，用于扶正益气，缓解疼痛，抗肺癌。
本发明提供了中药组合物，由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草10～40份、半枝莲9～40份、仙鹤草4～12份、黄芪3～20份、芦根5～30份、人工牛黄1～5份。
进一步地，由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草15～30份、半枝莲12～40份、仙鹤草6～10份、黄芪5～18份、芦根10～20份、人工牛黄2～4份。
进一步优选地，由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草20～30份、半枝莲20～35份、仙鹤草8～10份、黄芪5～10份、芦根11～15份、人工牛黄2～4份。
最优选地，由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草30份、半枝莲30份、仙鹤草10份、黄芪8份、芦根12份、人工牛黄4份。
本发明提供了所述中药组合物制备得到的浸膏。
本发明还提供了上述浸膏的制备方法，包括如下步骤：将原料粉碎、混合，加入乙醇浸泡，过滤得到滤液1和滤渣1，向滤渣1中加入乙醇浸泡，过滤得到滤液2和滤渣2，向滤渣2中加入乙醇浸泡，过滤得到滤液3，合并滤液1、2和3进行回流提取得到提取液，离心得到上清液，上清液经浓缩、干燥即得。
进一步地，上述所述浸膏的制备方法中，满足以下至少一项：
所述向混合后原料中加入乙醇的量为总原料重量的10～20倍；
所述向滤渣中加入乙醇的量为总原料重量的8～16倍；
所述乙醇的质量分数为60～80％；
所述浸泡的时间为1～5小时；
所述浓缩采用减压浓缩；
所述干燥是在80～100℃加热4～8小时。
本发明还提供了以所述浸膏为基本原料，加入药学上可接受的辅料制备成的常用口服制剂。
进一步地，所述常用口服制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂或滴丸剂。
本发明提供了所述中药组合物在制备辅助治疗肺癌的药物中的应用。
本发明的有益效果是：
本发明中药组合物具有一定的抗肺癌效果，能够保护呼吸系统，可用于肺癌的辅助治疗和维持治疗阶段。药效试验表明，本发明中药组合物对肺癌细胞具有良好的抑制生长作用，能够有效抑制肺癌细胞的迁移，并且能够促进肺癌细胞株的凋亡。本发明中药组合物能够扶正、益气、提高机体免疫力，帮助改善内循环，排除体内毒素，缓解癌症导致的疼痛，减轻患者痛苦，提高其生活质量。本发明药物组合物所用原料无毒副作用，使用安全性高。本发明中药组合物能够有效抑制肿瘤细胞生长同时安全性高，为肺癌患者提供了一种全新的选择。
附图说明
图1是本发明实施例5中本发明中药组合物的成分分析结果。
图2是本发明实施6中本发明中药组合物对肺癌细胞A549的抑制活性测定。
图3是本发明实施6中本发明中药组合物对肺癌细胞LL2的抑制活性测定。
图4是本发明实施例7中本发明中药组合物细胞克隆能力测定。
图5是本发明实施例7中本发明中药组合物对肺癌细胞迁移测定。
图6是本发明实施例8中本发明中药组合物对肺癌细胞凋亡的测定。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
在本发明中，各原料的功效如下：
黄芪，性微温，味甘。归肺、脾经。有补气升阳，固表止汗，利水消肿，生津养血，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌的功效。用于治疗气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，内热消渴，血虚萎黄，半身不遂，痹痛麻木，痈疽难溃，久溃不敛。
仙鹤草，性平，味苦、涩。归心、肝经。有收敛止血，凉血，截疟，止痢，杀虫，解毒消肿，补虚，消积的功效。用于咯血，吐血，崩漏下血等多种出血症及脱力劳伤，神疲乏力，面色萎黄等证。
白花蛇舌草，性寒，味苦、甘。归肺、肝、大肠、小肠经。有清热解毒，利湿，抗癌的功效。用于肺热喘咳，咽喉肿痛，肠痈，疖肿疮疡，毒蛇咬伤，热淋涩痛，水肿，痢疾，肠炎，湿热黄疸，癌肿。
半枝莲，性寒，味辛、苦。归肺、肝、肾经。有清热解毒，活血化瘀，消肿止痛，抗癌的功效。用于疔疮肿毒，咽喉肿痛，跌打伤痛，水肿，黄疸，蛇虫咬伤。
芦根，性寒，味甘。归肺、胃经。有清热泻火，生津止渴，除烦，止呕，利尿的功效。用于热病烦渴，肺热咳嗽，肺痈吐脓，胃热呕吐，热淋涩痛。
人工牛黄，性凉，味甘。归心、肝经。有清热解毒、化痰定惊的功效。用于治疗痰热谵狂，咽喉肿痛，痈肿疔疮。
肺癌是由于正气内虚、邪毒外侵引起的，以痰浊内聚，气滞血瘀，蕴结于肺，以致肺失宣发与肃降为基本病机，多与肺气不足，痰湿瘀血有关。发明人根据癌症的病因机制，考虑到癌症病人身体虚弱，免疫力低下，以黄芪益气补中、扶正祛邪，以增强体液细胞免疫力，恢复机体正常免疫功能。方中加入有收敛止血，凉血，截疟，止痢，杀虫，解毒消肿，补虚，消积功效的仙鹤草、有清热解毒，利湿，抗癌功效的白花蛇舌草和有清热解毒，活血化瘀，消肿止痛，抗癌的功效的半枝莲，该三味药可同时直接抑制肿瘤细胞生长，还可以清除血液毒素，进一步提高体液免疫力。由于气机不畅，则津、液、血运行不畅，积而成块形成肿瘤，方中加入有清热泻火，生津止渴，除烦，止呕，利尿功效的芦根和有清热解毒、化痰定惊功效的人工牛黄，达到镇痛目的，使得机体气机通畅，脾胃通健，食欲得到恢复，癌痛减轻，有利于津、液、血的运行和脏腑组织的正常发挥。综上，整方组方合理，各主要成分之间互相协同配合和补充，在不增加机体脏器负担的情况下，具有较强的增强人体免疫力，调节内循环，抑制癌细胞生长，排出体内毒素，缓解疼痛，对肺癌病人具有较好的治疗效果。
经过长期实验应用总结，本发明中药组合物，由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草10～40份、半枝莲9～40份、仙鹤草4～12份、黄芪3～20份、芦根5～30份、人工牛黄1～5份。
进一步地，由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草15～30份、半枝莲12～40份、仙鹤草6～10份、黄芪5～18份、芦根10～20份、人工牛黄2～4份。
进一步优选地，由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草20～30份、半枝莲20～35份、仙鹤草8～10份、黄芪5～10份、芦根11～15份、人工牛黄2～4份。
最优选地，由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草30份、半枝莲30份、仙鹤草10份、黄芪8份、芦根12份、人工牛黄4份。
本发明提供了所述中药组合物制备得到的浸膏。
本发明还提供了上述浸膏的制备方法，包括如下步骤：将原料粉碎、混合，加入乙醇浸泡，过滤得到滤液1和滤渣1，向滤渣1中加入乙醇浸泡，过滤得到滤液2和滤渣2，向滤渣2中加入乙醇浸泡，过滤得到滤液3，合并滤液1、2和3进行回流提取得到提取液，离心得到上清液，上清液经浓缩、干燥即得。
进一步地，上述所述浸膏的制备方法中，满足以下至少一项：
所述向混合后原料中加入乙醇的量为总原料重量的10～20倍；
所述向滤渣中加入乙醇的量为总原料重量的8～16倍；
所述乙醇的质量分数为60～80％；
所述浸泡的时间为1～5小时；
所述浓缩采用减压浓缩；
所述干燥是在80～100℃加热4～8小时。
本发明还提供了以所述浸膏为基本原料，加入药学上可接受的辅料制备成的常用口服制剂。
进一步地，所述常用口服制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂或滴丸剂。
本发明提供了所述中药组合物在制备辅助治疗肺癌的药物中的应用。
下面将结合实施例对本发明作进一步地详细阐述。在本发明中，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1
白花蛇舌草30g、半枝莲30g、仙鹤草10g、黄芪8g、芦根12g、人工牛黄4g粉碎、混合，加入1000mL质量分数为75％的乙醇浸泡4小时，过滤得到滤液1和滤渣1，向滤渣1中加入总原料质量的10倍75％乙醇浸泡4小时，过滤得到滤液2和滤渣2，滤渣2重复上述步骤，过滤得到滤液3，合并滤液进行回流提取得到提取液，离心得到上清液，上清液经减压浓缩后，置于水浴锅在85℃加热6小时得到浸膏。
实施例2
白花蛇舌草30g、半枝莲30g、仙鹤草12g、黄芪6g、芦根12g、人工牛黄4g粉碎、混合，加入1410mL质量分数为75％的乙醇浸泡5小时，过滤得到滤液1和滤渣1，向滤渣1中加入总原料质量的8倍75％乙醇浸泡5小时，过滤得到滤液2和滤渣2，滤渣2重复上述步骤，过滤得到滤液3，合并滤液进行回流提取得到提取液，离心得到上清液，上清液经减压浓缩后，置于水浴锅在90℃加热5小时得到浸膏，向浸膏中加入常规辅料制成软材，制粒，分装成颗粒剂或压片制成片剂。
实施例3
白花蛇舌草25g、半枝莲25g、仙鹤草10g、黄芪10g、芦根15g、人工牛黄4g粉碎、混合，加入1780mL质量分数为75％的乙醇浸泡3小时，过滤得到滤液1和滤渣1，向滤渣1中加入总原料质量的13倍75％乙醇浸泡3小时，过滤得到滤液2和滤渣2，滤渣2重复上述步骤，过滤得到滤液3，合并滤液进行回流提取得到提取液，离心得到上清液，上清液经减压浓缩后，置于水浴锅在100℃加热4小时得到浸膏，向浸膏中加入常规辅料制粒、干燥、整粒、填充为硬胶囊剂或软胶囊剂。
实施例4
白花蛇舌草20g、半枝莲20g、仙鹤草15g、黄芪15g、芦根15g、人工牛黄4g粉碎、混合，加入1000mL质量分数为75％的乙醇浸泡4小时，过滤得到滤液1和滤渣1，向滤渣1中加入总原料质量的8倍75％乙醇浸泡3小时，过滤得到滤液2和滤渣2，滤渣2重复上述步骤，过滤得到滤液3，合并滤液进行回流提取得到提取液，离心得到上清液，上清液经减压浓缩后，置于水浴锅在85℃加热6小时得到浸膏，向浸膏中加入适量辅料和水加热熔融成澄清液体，加入滴丸器中制成滴丸，干燥即得滴丸剂。
实施例5本发明中药组合物生物碱类成分检识
实施例5～8均采用实施例1的浸膏经干燥、粉碎成的粉末作为样品进行测定。
将样品分别用碘-碘化钾试剂、苦味酸试剂、雷氏铵盐试剂和碘化铋钾试剂进行理化检识分析本发明中药组合物的大类成分。
(1)采用碘化铋钾试剂分析
甲液：取次硝酸铋0.85g，加冰醋酸10mL与水40mL溶解。
乙液：40％质量浓度的碘化钾溶液。
碘化铋钾试剂的制备：取甲液5mL，加入乙液5mL，加入冰醋酸20mL，用水稀释至100mL，摇匀，即得。
样品溶液的制备：取0.5g样品加入10mL0.5％的盐酸溶液溶解、过滤即得。
取lmL样品溶液，加入碘化铋钾试剂1～2滴，立即出现橙红色无定型沉淀。
(2)采用碘-碘化钾试剂分析
将1g碘及10g碘化钾溶于50g水中，加入2mL醋酸，再用水稀释至100mL制得碘-碘化钾试剂。取lmL上述样品溶液，加入碘-碘化钾试剂1滴～2滴，15h后出现褐色无定型沉淀。
(3)采用苦味酸试剂分析
苦味酸试剂的制备：将1g苦味酸溶于100mL水中即得。
样品溶液的制备：取0.5g样品加入10mL的反渗透纯水溶解、过滤即得。
取1mL样品溶液加入苦味酸试剂1～2滴，15h后产生黄色沉淀。
(4)采用雷氏铵盐试剂分析
雷氏铵盐试剂：临用时配制2％硫氰化铬铵溶液即得。
样品溶液的制备：取0.5g样品加入10mL0.5％的盐酸溶液溶解、过滤即得。
取1mL样品溶液，加入雷氏铵盐试剂1～2滴，立即出现紫红色沉淀。
空白对照：取0.5g样品加入10mL0.5％的盐酸溶液溶解、过滤即得。
结论：采用碘-碘化钾试剂、苦味酸试剂、雷氏铵盐试剂和碘化铋钾试剂进行理化检识分析本发明中药组合物，通过实验现象得出本发明中药组合物中含有生物碱类成分，说明本发明中药组合物具有潜在的抗肿瘤活性。
实施例6本发明中药组合物的体外抗癌活性研究结果
为评价本发明中药组合物的体外抗癌活性，发明人采用MTT法，考察了本发明样品对A549和LL2肿瘤细胞株的生长抑制活性。
药物配制：样品采用含胎牛血清的细胞培养基配制成0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL。
A549细胞：腺癌人类肺泡基底上皮细胞；LL2细胞：小鼠肺癌细胞。所有细胞均来自生物治疗国家重点实验室；RPMI1640培养基，购于Hyclone公司；血清：NATOCOR胎牛血清；DMSO：Sigma；其他所有试剂耗材均为国产。
细胞实验步骤：将5000个对数生长期的A549细胞和LL2细胞分别接种至96孔平底板，每孔加入200μL培养基，在5％CO2，37℃环境中培养24小时，显微镜观察细胞贴壁，然后加入上述各浓度梯度的药物，在5％CO2，37℃环境中继续培养24小时，倒置显微镜下观察药物的作用效果；吸出含有药物的原培养基，每孔加入10uL MTT(5mg/mL)，培养4小时；观察紫色Formazan结晶形成后，使用排枪吸除液体，每孔加入150μL的DMSO，摇床振荡10分钟后，使用酶标仪测492nm的吸光光度值；根据数据吸光度计算抑制率。
由图2和图3可知，本发明中药组合物对肺癌细胞株A549和LL2均有良好的抑制肿瘤细胞增长的作用，并且其抑制增长作用呈剂量依赖性增强。当本发明中药组合物浓度为3mg·mL-1时，其抑制增长作用达到平台期，显微镜下观察到细胞基本死亡。本发明中药组合物对A549细胞株的抑制率为67.32％，本发明中药组合物对LL2细胞株的抑制率为67.2％。
实施例7本发明中药组合物细胞克隆能力和对细胞迁移的测定
(1)本发明中药组合物细胞克隆能力的测定
采用本发明样品进行测定，首先在24孔细胞培养板各孔中接种5x105个LL2或A549细胞，置于37℃5％CO2的二氧化碳培养箱中培养，待细胞贴壁生长。采用含10％小牛血清的RPMI-1640培养基递次稀释样品，使本发明药物在培养基中的浓度为0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL、3.0mg/mL、4.0mg/mL、5.0mg/mL，每个稀释浓度及对照组3个重复孔。继续培养48小时。去除培养液，用PBS小心洗涤一次，每孔加0.1ml 10％甲醇固定细胞30秒。吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml结晶紫染液，室温中放置20分钟。去除染色液，用蒸馏水洗涤各孔，将培养板倒置于吸水纸上吸干水分，37℃烘干后拍照。结果见图4。
(2)本发明中药组合物对细胞迁移的测定
在6孔细胞培养板中各加入约5x105个LL2或A549肺癌细胞，使用含10％胎牛血清的RPMI1640培养基培养，待细胞均匀铺满孔底，用1ml移液管枪头在六孔细胞培养板底部垂直划痕，保证划痕大小均匀。采用上述细胞克隆能力测定中浓度为1mg/mL和2mg/mL的本发明药物作用于LL2或A549肺癌细胞，并放置37℃5％CO2培养箱培养24和48小时，用PBS缓慢清洗细胞3次去除漂浮细胞，分别于0，24，48小时拍照。对照组不进行任何处理。结果见图5。
通过本发明中药组合物对肺癌细胞迁移和细胞克隆能力的测定，结合图4和图5可知，本发明中药组合物对A549及LL2细胞的迁移和增殖能力有明显的抑制作用。当药物浓度为1.0mg/mL时，给药组中的肺癌细胞数量开始减少，同时抑制A549及LL2细胞的生长和增殖，肿瘤细胞的恶性增殖表型减弱或消失，迁移能力被抑制，说明本发明中药组合物具有较好的抗肿瘤作用。
实施例8本发明中药组合物对肺癌细胞株凋亡的测定
收集给药24小时后的A549及LL2细胞样品，每样本细胞数为1×106个/mL，在1500rpm/min离心5min，弃去原培养液。用磷酸缓冲盐溶液洗涤1次，继续在1500rpm/min离心5min，弃物上清液。用100μl磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，加入PI染料，室温下避光孵育，加入AnnexinV-FITC荧光抗体在4℃下避光孵育10min，然后采用流式细胞仪检测。对照组不加入AnnexinV及PI，直接上机检测。
在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限(门1)显示活细胞为(FITC阴性/PI阴性)；右上象限(门2)是非活细胞，即坏死细胞，为(FITC阳性/PI阳性)；而右下象限(门3)为早期凋亡细胞，显现(FITC阳性/PI阴性)。
由图6可知，采用本发明中药组合物进行细胞凋亡的测定可以看出，本发明中药组合物的能显著提高肺癌细胞A549和LL2的早期、晚期凋亡。肺癌细胞A549对照组早期和晚期细胞凋亡率分别为2.44％，14.3％，给药组早期和晚期的细胞凋亡率分别为3.22％，21.4％；肺癌细胞LL2对照组早期和晚期细胞凋亡率分别为2.18％，2.02％，给药组早期和晚期的细胞凋亡率分别为6.11％及4.54％。
综上所述，本发明中药组合物对肺癌细胞A549和ALL2具有一定的抑制生长作用，能够有效抑制肺癌细胞的迁移，并且能够促进肺癌细胞株的凋亡，具有一定的抗肺癌效果，可用于肺癌的辅助治疗和维持治疗阶段，帮助癌症患者缓解疼痛，减轻痛苦，提高生活质量。为肺癌患者提供了一种全新的选择。
Claims (10)
1.一种辅助治疗肺癌的中药组合物，其特征在于：由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草10～40份、半枝莲9～40份、仙鹤草4～12份、黄芪3～20份、芦根5～30份、人工牛黄1～5份。
2.根据权利要求1所述的辅助治疗肺癌的中药组合物，其特征在于：由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草15～30份、半枝莲12～40份、仙鹤草6～10份、黄芪5～18份、芦根10～20份、人工牛黄2～4份。
3.根据权利要求2所述的辅助治疗肺癌的中药组合物，其特征在于：由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草20～30份、半枝莲20～35份、仙鹤草8～10份、黄芪5～10份、芦根11～15份、人工牛黄2～4份。
4.根据权利要求3所述的辅助治疗肺癌的中药组合物，其特征在于：由以下重量份的原料制成：白花蛇舌草30份、半枝莲30份、仙鹤草10份、黄芪8份、芦根12份、人工牛黄4份。
5.权利要求1～4任一项所述的辅助治疗肺癌的中药组合物制备得到的浸膏。
6.权利要求5所述的浸膏的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：将原料粉碎、混合，加入乙醇浸泡，过滤得到滤液1和滤渣1，向滤渣1中加入乙醇浸泡，过滤得到滤液2和滤渣2，向滤渣2中加入乙醇浸泡，过滤得到滤液3，合并滤液1、2和3进行回流提取得到提取液，离心得到上清液，上清液经浓缩、干燥即得。
7.根据权利要求6所述的浸膏的制备方法，其特征在于：满足以下至少一项：
混合后原料中加入乙醇的量为总原料重量的10～20倍；
所述向滤渣中加入乙醇的量为总原料重量的8～16倍；
所述乙醇的质量分数为60～80%；
所述浸泡的时间为1～5小时；
所述浓缩采用减压浓缩；
所述干燥是在80～100℃加热4～8小时。
8.由权利要求5所述的浸膏为原料，加入药学上可接受的辅料制备成的常用口服制剂。
9.根据权利要求8所述的常用口服制剂，其特征在于：所述常用口服制为颗粒剂、片剂、胶囊剂或滴丸剂。
10.权利要求1～4任一项所述的中药组合物在制备辅助治疗肺癌的药物中的应用。
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