CN111892567B - 一种从山橿中提取的二氢黄酮类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种从山橿中提取的二氢黄酮类化合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111892567B CN111892567B CN202010715493.2A CN202010715493A CN111892567B CN 111892567 B CN111892567 B CN 111892567B CN 202010715493 A CN202010715493 A CN 202010715493A CN 111892567 B CN111892567 B CN 111892567B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lindera
- flavanone
- terpene
- ethanol
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000012106 Lindera reflexa Species 0.000 title claims abstract description 42
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 52
- ZONYXWQDUYMKFB-UHFFFAOYSA-N SJ000286395 Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)CC1C1=CC=CC=C1 ZONYXWQDUYMKFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 51
- 229930003949 flavanone Natural products 0.000 claims abstract description 51
- 235000011981 flavanones Nutrition 0.000 claims abstract description 51
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 claims abstract description 42
- -1 terpene flavanone Chemical class 0.000 claims abstract description 30
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 22
- 150000002207 flavanone derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 claims abstract description 20
- 241000546273 Lindera <angiosperm> Species 0.000 claims abstract description 18
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 17
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 26
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 claims description 19
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 claims description 19
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 claims description 15
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 8
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 7
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 2
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical group O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 2
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 2
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 2
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 3
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 abstract description 3
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 abstract description 3
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 abstract description 3
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 abstract description 3
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 abstract description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 3
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 abstract 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000008671 Calycanthus floridus Nutrition 0.000 description 5
- 235000008670 Calycanthus occidentalis Nutrition 0.000 description 5
- 244000148992 Lindera benzoin Species 0.000 description 5
- 235000004520 Lindera benzoin Nutrition 0.000 description 5
- 235000008262 Lindera benzoin var. benzoin Nutrition 0.000 description 5
- 241000146029 Lindera aggregata Species 0.000 description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 4
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- FOGVNFMUZXDMTR-UHFFFAOYSA-N [Mg].Cl Chemical compound [Mg].Cl FOGVNFMUZXDMTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007813 chromatographic assay Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N dicarbon monoxide Chemical compound [C]=C=O VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N (R)-camphor Chemical compound C1C[C@@]2(C)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N 0.000 description 1
- 241000723346 Cinnamomum camphora Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000012097 Lindera communis Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 150000001555 benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 229960000846 camphor Drugs 0.000 description 1
- 229930008380 camphor Natural products 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 208000023652 chronic gastritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- LGKJJUMVDIOTCE-UHFFFAOYSA-N linderatone Natural products CC(C)C1CCC(C)=CC1C1=C(O)C=C(O)C2=C1OC(C=1C=CC=CC=1)CC2=O LGKJJUMVDIOTCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N methanol-d1 Chemical compound [2H]OC OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000012306 spectroscopic technique Methods 0.000 description 1
- 150000001629 stilbenes Chemical class 0.000 description 1
- 235000021286 stilbenes Nutrition 0.000 description 1
- 208000018556 stomach disease Diseases 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
- C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
- C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
- C07D311/28—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only
- C07D311/32—2,3-Dihydro derivatives, e.g. flavanones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
- C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
- C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
- C07D311/40—Separation, e.g. from natural material; Purification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及从山橿中提取的二氢黄酮类化合物及其制备方法与应用，可有效解决从山橿中制备新的化合物，开拓山橿药用新用途的问题，该化合物为异乌药萜烯黄烷酮和乌药萜烯黄烷酮甲醚，制备方法是：用乙醇对山橿提取，大孔吸附树脂湿法装柱，山橿乙醇提取物上样吸附，纯水冲洗除去杂质，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得到的纯化山橿总黄酮用甲醇超声溶解，微孔滤膜过滤得到进样溶液，根据化合物的在297nm波长下的吸收及出峰时间，定向收集相应的组分，减压回收溶剂，得异乌药萜烯黄烷酮和乌药萜烯黄烷酮甲醚。本发明从山橿中提取的异乌药萜烯黄烷酮和乌药萜烯黄烷酮甲醚具有抑制肿瘤细胞的活性，有效用于制备治疗肿瘤药物。
Description
技术领域
本发明涉及医药，特别是一种从山橿中提取的二氢黄酮类化合物及其制备方法与应用。
背景技术
山橿系樟科(Lauraceae)山胡椒属植物山橿(Lindera reflexaHemsl.)的干燥根，山橿性温，味辛，具有理气止痛、祛风解表、活血消肿等功效，在民间用其治疗慢性胃炎、胃溃疡有悠久的历史。
根据文献报道，山橿的化学成分主要有挥发油类、生物碱类、黄酮类、二苯乙烯类等。以药理活性为导向，对山橿的有效部位和有效成分进行系统研究后发现，山橿总黄酮是其主要有效活性成分。对山橿中的总黄酮进行了纯化工艺研究，利用大孔吸附树脂得到了纯化后的山橿总黄酮提取物。
目前对山橿的总黄酮进行化学成分分析时发现，除了已报道的化学成分外，仍有部分成分未得到系统的指认。这对山橿的临床研究和有效部位的质量控制极为不利。为了将山橿开发成治疗胃病的新药，创造良好的经济效益和社会效益，利用色谱技术，对山橿总黄酮中的未知成分进行定向的分离鉴定，得到新的化合物，开拓山橿药用的新用途是需要认真解决的技术问题。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从山橿中提取的二氢黄酮类化合物及其制备方法与应用，可有效解决从山橿中制备新的化合物，开拓山橿药用新用途的问题。
本发明解决的技术方案是，一种从山橿中提取的二氢黄酮类化合物，为异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)和乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)，分子结构式分别为：
异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)和乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备山橿总黄酮提取物：用乙醇对山橿进行提取，大孔吸附树脂湿法装柱，山橿乙醇提取物上样吸附，纯水冲洗除去杂质，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得纯化山橿总黄酮。
(2)制备进样溶液：称取纯化山橿总黄酮，用甲醇进行超声溶解，微孔滤膜过滤后得到进样溶液。
(3)定向分离目标化合物：根据化合物的在297nm波长下的吸收及出峰时间，定向收集相应的组分，减压回收溶剂，得到异乌药萜烯黄烷酮和乌药萜烯黄烷酮甲醚。
本发明所得到的化合物异乌药萜烯黄烷酮和乌药萜烯黄烷酮甲醚是首次从山橿中提取得到的，在目前的文献报道从大叶钓樟里分离得到该化合物，但是并没有相关生物活性的报道，也未公开有这两种化合物的标准品及提取分离纯化方法，本发明从山橿中提取的异乌药萜烯黄烷酮和乌药萜烯黄烷酮甲醚具有抑制肿瘤细胞的活性，有效用于制备治疗肿瘤药物，开拓山橿的药用新用途，有巨大的经济和社会效益。
附图说明
图1为本发明提取的山橿化合物分子结构式图。
图2为本发明的制备液相色谱图。
图3为本发明异乌药萜烯黄烷酮的1H-NMR图。
图4为本发明异乌药萜烯黄烷酮的13C-NMR图。
图5为本发明乌药萜烯黄烷酮甲醚的1H-NMR图。
图6为本发明乌药萜烯黄烷酮甲醚的13C-NMR图。
具体实施方式
以下结合附图和具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，一种从山橿中提取的二氢黄酮类化合物，为异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)和乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)，分子结构式见图1所示，其制备方法包括以下步骤：
(1)制备山橿提取物溶液：将山橿药材粉碎成粉，加入质量浓度为70％的乙醇超声提取3次，每次提取1小时，每次加入70％乙醇的量为山橿重量的12倍；合并三次的提取液，减压回收乙醇至提取液无醇味，得到浓缩液，浓缩液加入水稀释成相当于每1mL含生药0.05mg(0.05mg/mL生药)的山橿提取物溶液，备用；
(2)树脂处理及装柱：将大孔吸附树脂先用质量浓度95％乙醇浸泡12小时，用质量浓度95％乙醇清洗至乙醇洗脱液与水混合不呈白色混浊，再用蒸馏水洗至无醇味，按树脂柱子直径与柱高比1:8的比例将大孔吸附树脂湿法装柱；
(3)制备纯化山橿总黄酮：取步骤1制备的山橿提取物溶液上样，上样量为大孔吸附树脂重量的4倍，上样流速为1.0mL/min，上样完成后静置2小时，用大孔吸附树脂4倍重量的纯水冲洗杂质，再用大孔吸附树脂4倍量的质量浓度70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得纯化山橿总黄酮；
(4)制备进样溶液：取纯化山橿总黄酮0.50g，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇100mL，记录重量，超声溶解，超声后补足重量，混匀，用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，得到进样溶液；
(5)、对进样溶液梯度洗脱：在色谱条件为：色谱柱YMC-Pack ODS-A，250×20mml.D.S-5μm，12nm，检测波长297nm，流速为7mL·min-1，进样体积500μL进行装柱，流动相为甲醇-水梯度洗脱，洗脱梯度和洗脱时间分别为：第0-35min梯度洗脱液为甲醇︰水＝80︰20，第35-45min梯度洗脱液为甲醇︰水＝85︰15，第45-55min梯度洗脱液为甲醇︰水＝100︰0，第55-60min梯度洗脱液为甲醇︰水＝100︰0，第60-65min梯度洗脱液为甲醇︰水＝80︰20，第65min以上梯度洗脱液为甲醇︰水＝80︰20；
(6)、收集组分：收集49.9min的洗脱液，为组分1，收集55.7min的洗脱液，为组分2，组分1和组分2分别减压回收溶剂，得到异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)和乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)。
该化合物具有抑制肿瘤细胞的活性，有效用于制备治疗肿瘤药物，并经过多次反复试验均取得了相同或近似的结果，有关资料如下：
一、化合物的结构鉴定
经核磁共振光谱(1H-NMR、13C-NMR)及高分辨质谱(HR-ESI-MS)光谱技术鉴定，其中：
化合物异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)为黄色油状物，盐酸-镁粉反应呈阳性，证实为黄酮类化合物，HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z393.2051[M+H]+(calcd forC25H29O4,393.2060)，确定分子式为C25H28O4。13C-NMR谱中有一组碳信号峰，δ131.7，126.4，35.1，41.0，23.7，30.9，23.1，28.6，16.7，21.9，提示该化合物中含有対薄荷烯基片段。此外，除去δ196.6的羰基碳后，芳香区还有14个碳信号，提示该化合物为黄酮类化合物；1H-NMR谱中芳香区有6个H,δ7.35-7.52(5H，m)为B环上的苯环H,δ5.97(1H,s)为A环上6位的H信号，δ5.57(1H,t,J＝3.75Hz,4.4Hz)为对薄荷烯基片段上2”位上的H信号，δ5.07(1H,s)为2位上的H信号，δ3.66-3.73(1H,m)为3”位上的H信号,δ2.75(1H,m)和3.17(1H,m)为3位上的H信号，说明该化合物为二氢黄酮，δ12.60(1H,d,J＝5.3Hz)为5位羟基H的信号，δ0.82(3H,d,J＝6.8Hz)，δ0.76(3H,d,J＝6.6Hz)，δ1.60(3H,s)分别为对薄荷烯基上9”和10”和7”上的H信号。其数据和现有的异乌药萜烯黄烷酮的数据基本一致，故确定其为异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)，分子结构式为：
色谱测定情况如下表1：
表1该化合物异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)的1H-NMR和13C-NMR数据(inDMSO)
化合物乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)为黄色油状物，盐酸-镁粉反应呈阳性，证明为黄酮类化合物，HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z407.2208[M+H]+(calcdfor C26H31O4,407.2217)，确定分子式为C26H30O4。13C-NMR谱中有一组碳信号峰，δ133.0，126.8，36.4，42.8，23.6，32.0，23.7，29.8，16.8，21.9，提示该化合物含有対薄荷烯基片段。此外，除去δ198.02的羰基碳后,芳香区还有14个碳信号，提示该化合物为黄酮类化合物；1H-NMR谱中芳香区有6个H，其中7.42(2H,t,J＝7.05,7.7Hz)，7.51(2H,d,J＝7.3Hz)，7.37(1H,d,J＝7.25Hz)是苯环单取代时的典型信号，说明为B环上的氢；2.80(1H,dd,J＝3.05,17.1)，3.15(1H,dd,J＝13.1,17.1Hz)，5.43(1H,dd,J＝2.9,2.9Hz)的氢信号，δ80.5，44.4的碳信号提示为二氢黄酮2，3位碳信号；13C-NMR谱中δ56.3和1H-NMR谱中的1.62(3H,s)，是甲氧基的信号，数据与乌药萜烯黄烷酮甲醚的信号基本一致，综上可以得出SJ-10的结构为乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)，分子结构式为：
色谱测定情况如下表2：
表2该化合物乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)的1H-NMR和13C-NMR数据(in MeOD)
本发明制备的异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)和乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)经实验，对人胃癌细胞(MGC803)和人肝癌细胞(SMMC-7721)具有细胞毒性，有关实验资料如下：
1.实验材料
人胃癌细胞株(MGC803)和人肝癌细胞(SMMC-7721)有河南中医药大学药理实验室提供，胎牛血清购买自Gibco公司。
2.细胞培养
MGC803细胞和SMMC-7721细胞培养于含有10％经加热灭活的胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI1640培养基中，将培养皿置于37℃，5％CO2饱和湿度培养箱培养，每1-2天换培养液一次，当细胞融合度达到80％以上时，用胰蛋白酶进行消化传代。
3.MTT法
对数生长期细胞培养于96孔板内，每100μL(含5000个肿瘤细胞)，置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h，小心移除培养基，然后加入含有不同浓度的测试化合物的稀释液，设置5-6个剂量组，每组设置五个复孔，每孔100μL。对照组加入与给药组等体积的溶剂。置于37℃、5％CO2培养箱中培养48h，每孔加入20μL(1mg/mL)MTT溶液。37℃、5％CO2培养箱中孵育4h，弃去上清液，每孔加入150μL的DMSO溶解甲瓒颗粒，轻度振荡溶解，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其吸光度值(OD)，以溶剂对照处理的细胞作为对照，按照下面的公式计算药物对细胞的抑制率，根据计算得到的各浓度结果，通过GraphPad Prism 8软件处理，得到半数抑制浓度(IC50)。
4.实验结果
通过MTT法采用人胃癌细胞株(MGC803)和人肝癌细胞株(SMMC-7721)对异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)和乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)进行细胞毒活性测试，结果见表3。
表3化合物细胞毒活性测试结果
通过实验结果可以看出，异乌药萜烯黄烷酮和乌药萜烯黄烷酮甲醚虽然母核相同，但是因为取代基的不同，导致两者在细胞毒活性中存在很大的差异，本发明制备出的异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)和乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)对人胃癌细胞(MGC803)和人肝癌细胞(SMMC-7721)具有细胞毒活性，具有制备临床抗癌药的应用价值，开拓了山橿药材的新用途，原料丰富，制备方法易操作，易于推广应用，开拓了山橿的药物价值和商业价值，经济和社会效益显著。
Claims (2)
1.一种从山橿中提取的二氢黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，该化合物为异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)和乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)，分子结构分别是：
制备方法包括以下步骤：
(1)制备山橿提取物溶液：将山橿药材粉碎成粉，加入质量浓度为70％的乙醇超声提取3次，每次提取1小时，每次加入70％乙醇的量为山橿重量的12倍；合并三次的提取液，减压回收乙醇至提取液无醇味，得到浓缩液，浓缩液加入水稀释成相当于每1mL含生药0.05mg的山橿提取物溶液，备用；
(2)树脂处理及装柱：将大孔吸附树脂先用质量浓度95％乙醇浸泡12小时，用质量浓度95％乙醇清洗至乙醇洗脱液与水混合不呈白色混浊，再用蒸馏水洗至无醇味，按树脂柱子直径与柱高比1:8的比例将大孔吸附树脂湿法装柱；
(3)制备纯化山橿总黄酮：取步骤1制备的山橿提取物溶液上样，上样量为大孔吸附树脂重量的4倍，上样流速为1.0mL/min，上样完成后静置2小时，用大孔吸附树脂4倍重量的纯水冲洗杂质，再用大孔吸附树脂4倍量的质量浓度70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得纯化山橿总黄酮；
(4)制备进样溶液：取纯化山橿总黄酮0.50g，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇100mL，记录重量，超声溶解，超声后补足重量，混匀，用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，得到进样溶液；
(5)、对进样溶液梯度洗脱：在色谱条件为：色谱柱YMC-Pack ODS-A，250×20mml.D.S-5μm，12nm，检测波长297nm，流速为7mL·min-1，进样体积500μL进行装柱，流动相为甲醇-水梯度洗脱，洗脱梯度和洗脱时间分别为：第0-35min梯度洗脱液为甲醇︰水＝80︰20，第35-45min梯度洗脱液为甲醇︰水＝85︰15，第45-55min梯度洗脱液为甲醇︰水＝100︰0，第55-60min梯度洗脱液为甲醇︰水＝100︰0，第60-65min梯度洗脱液为甲醇︰水＝80︰20，第65min以上梯度洗脱液为甲醇︰水＝80︰20；
(6)、收集组分：收集49.9min的洗脱液，为组分1，收集55.7min的洗脱液，为组分2，组分1和组分2分别减压回收溶剂，得到异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)和乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)。
2.权利要求1所述方法制备的化合物异乌药萜烯黄烷酮(Isolinderatone)和乌药萜烯黄烷酮甲醚(Methyllinderatone)在制备抗胃癌药物和抗肝癌药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010715493.2A CN111892567B (zh) | 2020-07-22 | 2020-07-22 | 一种从山橿中提取的二氢黄酮类化合物及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010715493.2A CN111892567B (zh) | 2020-07-22 | 2020-07-22 | 一种从山橿中提取的二氢黄酮类化合物及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111892567A CN111892567A (zh) | 2020-11-06 |
| CN111892567B true CN111892567B (zh) | 2024-01-26 |
Family
ID=73190778
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010715493.2A Active CN111892567B (zh) | 2020-07-22 | 2020-07-22 | 一种从山橿中提取的二氢黄酮类化合物及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111892567B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103864742A (zh) * | 2012-12-13 | 2014-06-18 | 天津科技大学 | 一类新颖柚皮素衍生制备及抗肿瘤应用 |
| CN108703972A (zh) * | 2018-05-07 | 2018-10-26 | 温州医科大学 | 一种黄酮-皂苷混源萜类化合物在药物制备中的应用 |
-
2020
- 2020-07-22 CN CN202010715493.2A patent/CN111892567B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103864742A (zh) * | 2012-12-13 | 2014-06-18 | 天津科技大学 | 一类新颖柚皮素衍生制备及抗肿瘤应用 |
| CN108703972A (zh) * | 2018-05-07 | 2018-10-26 | 温州医科大学 | 一种黄酮-皂苷混源萜类化合物在药物制备中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Studies on the Flavonoid Components of Lindera umbellata THUNB. var. membranacea(MAXIM.) MOMIYAMA;Kazuhiko Ichino et al;Chem. Pharm. Bull.;第37卷(第4期);944-947 * |
| 山橿乙醇提取物中总黄酮与二苯乙烯类化合物分离工艺研究;高丹丹 等;中医学报;第30卷(第7期);1010-1013 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111892567A (zh) | 2020-11-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112094176B (zh) | 一种从山橿中提取的二苯乙烯类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN109364119B (zh) | 从青钱柳叶中制备具有降血糖作用的总三萜的方法及应用 | |
| CN117003812A (zh) | 一种松香烷型二萜内酯类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN111892567B (zh) | 一种从山橿中提取的二氢黄酮类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN107698510A (zh) | 从青竹标中提取的生物碱类化合物及提取方法 | |
| CN117106008A (zh) | 一种对映松香烷型二萜内酯类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN108689969B (zh) | 一种分离纯化乳香中香木兰烷型二萜类化合物的方法 | |
| CN114874098B (zh) | 一种从宿萼木中提取分离的化合物及其制备方法和应用 | |
| CN112812085B (zh) | 一对从酒茱萸提取的化合物a、b及其制备方法与应用 | |
| CN111253352B (zh) | 一种从中药斑叶兰中提取分离的化合物及其制备方法和应用 | |
| CN114956967B (zh) | 一种从山橿中提取的化合物Reflexanbene E和F及其制备方法与应用 | |
| CN116903578B (zh) | 连钱草中的酚酸类化合物及其提取分离方法与应用 | |
| CN116284200B (zh) | 一种提取分离自威灵仙的化合物及其制备方法和用途 | |
| CN113214211B (zh) | 一种提取自牡丹皮炭的化合物及其制备方法和制药用途 | |
| CN114031625B (zh) | 甘草中具有抗结直肠癌活性的化合物制备及其应用 | |
| CN112300185B (zh) | 肝毒性降低的生物碱类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN109776565B (zh) | 一种苦味素类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN113024494B (zh) | 一种菲类化合物、制备方法及应用 | |
| CN112390809B (zh) | 一种从黄花败酱中提取环烯醚萜类化合物的方法 | |
| CN113735698B (zh) | 具有抗肿瘤活性的三环二萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN113666816B (zh) | 具有抗肿瘤活性的京大戟二萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN114456137B (zh) | 螺环萘类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN108658909B (zh) | 异戊烯基苯酚类化合物peperobtusin B及其制备方法 | |
| CN117547532A (zh) | 一种狗牙花中生物碱类化合物的应用 | |
| Luo et al. | Sophflarines B− E, four distinctive matrine alkaloids from Sophora flavescens with potential neuroprotective activities |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |