CN108703972A - 一种黄酮-皂苷混源萜类化合物在药物制备中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及对最新分离得到黄酮皂苷混源萜类化合物clinoposides G和H的药理作用进行了研究，发现化合物clinoposides G和H对缺氧复氧(A/R)诱导的H9c2心肌细胞损伤具有保护作用，可以显著提高细胞存活率，降低LDH释放，提高线粒体膜电位，减少细胞凋亡，降低炎性因子IFN‑γ、TNF‑α、IL‑6、MCP‑1活性。Westernblot分析发现其可以提高Nrf2核转位，降低NF‑кB的核转位。以上结果提示黄酮皂苷混源萜类化合物可能通过双重调节NF‑κB和Nrf2而显示出显著的心肌保护活性。

Description

一种黄酮-皂苷混源萜类化合物在药物制备中的应用
技术领域
本发明涉及对植物中提取分离纯化从而得到具有生物活性的化合物的应用。具体是对唇形科植物风轮菜Clinopodium chinense(Benth.)O. Kuntze的地上部分提取分离纯化得到的2个新化合物的制药用途。
背景技术
心血管疾病已成为全世界第一位致死致残原因，心血管疾病具有发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高、并发症多的特点。发病形式多样，给人类社会带来了极大的痛苦和死亡威胁。近年来，国内外许多专家学者都在致力于发现预防和治疗心血管疾病的有效方法，而寻找高效低毒的防治心血管疾病的天然药物是科学工作者研究的热点课题之一。
风轮菜(Clinopodium chinense(Benth.)O.Kuntze)为唇形科风轮菜属植物，味微苦涩，性凉，归肝经，具有收敛止血的功效，常用于治疗各种出血症。现代研究表明，风轮菜主要含有黄酮、三萜皂苷、萜类、挥发油、甾体等，风轮菜提取物既有治疗糖尿病、冠心病以及心肌缺氧保护等作用。本课题组一直致力于从天然产物中寻找具有良好疗效的治疗和/或预防心血管疾病的药物。我们前期研究发现，风轮菜具有止血和活血的双向调节作用，在止血的同时又可以祛除已瘀之血，从而达到止血而不留淤的效果，治疗和/或预防心血管疾病方面具有独特的优势，有着良好的研究开发前景。
由于风轮菜中含有众多化合物，其所含有的活性化合物的结构还不明确，目前还不知道是哪一种物质为活性物质，使其难以进行进一步的利用，因此，确定风轮菜中具体活性物质的结构和药理活性具有重要的意义。
发明内容
为解决上述问题，本发明人进行了大量研究，从风轮菜正丁醇部位中得到2个黄酮皂苷混源萜类成分，均为新化合物。这2个新型混源萜类化合物分别命名为clinoposides G和clinoposides H。
本发明的另一个目的是提供clinoposides G和clinoposides H在心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用。
一种黄酮-皂苷混源萜类化合物，名称为clinoposides G(1)或 clinoposides H(2)，结构如下式所示：
本发明还提供了一种所述的黄酮-皂苷混源萜类化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将风轮菜地上部分粉碎后，用乙醇回流提取，减压回收乙醇，得到浸膏；
(2)用水溶解此浸膏后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取，对正丁醇提取液减压回收溶剂，得到正丁醇萃取物；
(3)将正丁醇萃取物以D101大孔吸附树脂处理，依次以水-乙醇洗脱剂进行梯度洗脱，合并50-85％乙醇洗脱物，得到总皂苷；
(4)将总皂苷部位经硅胶柱层析以氯仿：甲醇进行梯度洗脱，用薄层色谱进行检识合并相似组分得到FZ(A-H)8个部分，FZ-G经C18反相柱层析，以甲醇：水梯度洗脱，得到23个流分，经薄层示踪并合并相同组分，得到FZ-G(Fr.1-9)9个部分；
(5)将FZ-G(Fr.6)进行Sephadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂进行洗脱，得到4个流分FZ-G(Fr.6.1-6.4)，将其中的 FZ-G(Fr.6.4)经过制备液相分离纯化得到化合物2clinoposides H，保留时间为29min；
(6)将FZ-G(Fr.8)进行Sephadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂进行洗脱，得到5个流分FZ-G(Fr.8.1-8.5)，将其中的 FZ-G(Fr.8.5)经过制备液相分离纯化得到化合物1clinoposides G，保留时间为38min。
作为优选，具体步骤如下：
(1)风轮菜地上部分15kg粉碎后，以100L70％乙醇回流提取2次，每次两小时，减压回收乙醇，得到浸膏约3kg；
(2)用水溶解此浸膏后，依次用石油醚萃取三次，每次2L，减压回收溶剂，得石油醚萃取物(FS，120g)；用乙酸乙酯萃取三次，每次6L，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物(FY，760g)，用正丁醇萃取三次，每次6L，减压回收溶剂，得正丁醇萃取物(FZ，350g)；
(3)正丁醇萃取物以D101大孔吸附树脂处理，依次以水、20％乙醇、 85％乙醇、95％乙醇洗脱，减压回收溶剂，合并50-85％乙醇洗脱物，得到总皂苷180g；
(4)将总皂苷部位(180g)经硅胶柱层析以氯仿：甲醇(100:0～0:100) 进行梯度洗脱，用薄层色谱进行检识合并相似组分得到FZ(A-H)8个部分；FZ-G(30g)经C18反相柱层析，以甲醇：水(30:70→90:10，v/v) 梯度洗脱，得到23个流分，经薄层示踪并合并相同组分，得到FZ-G (Fr.1-9)9个部分；
(5)将FZ-G(Fr.6,250mg)进行Sephadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂进行洗脱，得到4个流分FZ-G(Fr.6.1-6.4)， FZ-G(Fr.6.4，30mg)经过制备液相分离纯化(流动相条件：甲醇-水72:28) 得到化合物2(4.3mg)，保留时间为29min；
(6)将FZ-G(Fr.8,320mg)进行Sephadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂进行洗脱，得到5个流分FZ-G(Fr.8.1-8.5)， FZ-G(Fr.8.5，80mg)经过制备液相分离纯化(流动相条件：甲醇-水67:33) 得到化合物1(8.2mg)，保留时间为38min。
本发明提供的clinoposides G和clinoposides H在心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用是通过以下方案获得的：先进行心肌细胞缺氧复氧损伤模型的建立，通过MTT法检测细胞的存活率，2,4-二硝基苯肼显色法检测LDH水平，双染荧光法检测细胞凋亡，试剂盒检测IFN-γ，MCP-1，TNF-α， IL-6的水平变化以及SOD，CAT的活性。
具体试验过程包括以下步骤：
(1)心肌细胞缺氧复氧损伤模型的建立
将H9c2心肌细胞于37℃CO2的恒温培养箱中培养后，细胞融合度 90％时用于实验。把细胞的培养液更换为PBS缓冲液，在含有95％的N2 和5％的CO2缺氧培养箱培养，把缺氧复氧培养箱放入37℃的恒温培养箱中培养4h造成缺氧，然后换掉缓冲液，重新加入的培养基，放置于37°CO2的中培养24h，建立心肌细胞的缺氧复氧模型。对照组：培养的H9c2心肌细胞放入CO2的恒温培养箱培养，不做任何处理。
(2)通过MTT法测定细胞存活率和LDH释放量的检测
当心肌细胞融合度90％时用于实验，调整细胞悬液浓度，每孔加入 100ul，铺板使待测细胞调密度1000-10000每孔，细胞的边缘孔用无菌的 PBS填充。5％CO2,37℃的恒温培养箱进行孵育至细胞单层铺满孔底，分别设置对照组(不做任何处理)，缺氧复氧模型组，给药组:clinoposides G 和clinoposides H(5ug/ml，10ug/ml，20ug/ml)，培养到一定时间进行细胞存活率的测定。每孔加入10ulMTT,继续培养4h终止培养，小心吸出培养液，每孔加入150ul的二甲基亚枫，置摇床上低速震荡10分钟，使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光度。
各组处理结束后,收集细胞培养液及细胞,根据试剂盒说明书检测LDH 的释放量；
(3)通过TUNEL染色检测细胞凋亡
(4)检测心肌细胞内IFN-γ,MCP-1,TNF-α和IL-6的含量以及SOD， CAT活性的检测
各组处理结束后,收集细胞培养液及细胞,根据试剂盒说明书检测 IFN-γ,MCP-1,TNF-α和IL-6的含量以及SOD，CAT的活性。
(5)Westernblot分析NF-κB和Nrf2的表达
细胞以(密度1×105个/m L)接种于96孔板，培养24h。分组及药物处理同“收集细胞，在裂解缓冲液中裂解，冰浴下超声匀浆，冰上孵育 20min，4℃、10 000r/min离心10min，取上清液，测定蛋白浓度，制成浓度相等的样品，取20μL进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，电转印至PVDF 膜，5％脱脂奶粉封闭2h后分别滴加一抗，4℃孵育过夜。洗膜后以相应二抗室温孵育2h，显色，于凝胶自动成像分析系统下成像，用Quantity One分析软件进行灰度值半定量分析。
结果表明，化合物clinoposides G和H对缺氧复氧(A/R)诱导的H9c2 心肌细胞损伤具有保护作用，可以显著提高细胞存活率，降低LDH释放，提高线粒体膜电位，减少细胞凋亡，降低炎性因子IFN-γ、TNF-α、IL-6、 MCP-1活性。Westernblot分析发现其可以提高Nrf2核转位，降低NF-кB 的核转位。以上结果提示黄酮皂苷混源萜类化合物可能通过双重调节NF- κB和Nrf2而显示出显著的心肌保护活性。
附图说明
图1风轮菜中2个黄酮皂苷混源萜类化合物的化学结构；
图2化合物1的HR-ESI-MS谱；
图3化合物1的1H NMR谱；
图4化合物1的13C NMR谱；
图5化合物1的HSQC谱；
图6化合物1的HSQC-TOCSY谱；
图7化合物1的HMBC的谱；
图8化合物1的COSY的谱；
图9化合物1的TOCSY谱；
图10化合物1的NOESY谱；
图11化合物1的UV谱；
图12化合物1的ECD谱；
图13化合物1的IR谱；
图14化合物2的HR-ESI-MS谱；
图15化合物2的1H NMR谱；
图16化合物2的13C NMR谱；
图17化合物2的HSQC谱；
图18化合物2的HSQC-TOCSY谱；
图19化合物2的HMBC的谱；
图20化合物2的COSY的谱；
图21化合物2的TOCSY谱；
图22化合物2的NOESY谱；
图23化合物2的UV谱；
图24化合物2的ECD谱；
图25化合物2的IR谱；
图26MTT法测定细胞存活率和LDH释放量数据处理图；图26中， *P<0.05**P<0.01模型组与对照组相比较；$P<0.05；$$P<0.01治疗组与模型组相比较；
图27TUNEL染色检测细胞凋亡图；图27中，*P<0.05**P<0.01模型组与对照组相比较；$P<0.05；$$P<0.01治疗组与模型组相比较
图28心肌细胞内IFN-γ,MCP-1,TNF-α和IL-6的含量以及SOD， CAT活性的检测；图28中，*P<0.05**P<0.01模型组与对照组相比较；$P <0.05；$$P<0.01治疗组与模型组相比较
图29检测线粒体膜电位；图29中，*P<0.05**P<0.01与对照组相比较；$P<0.05；$$P<0.01治疗组与模型组相比较；
图30Westernblot分析NF-κB和Nrf2的表达。
具体实施方式
根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员将很清楚本发明的其他实施方案，下述实施方案仅作示例。在不违反本发明主旨及范围的情况下，可对本发明进行各种改变和改进。这些改变和改进均应在本发明的保护范围之内。
实施例1化合物的制备
风轮菜地上部分15kg粉碎后，以100L70％乙醇回流提取2次，每次两小时，减压回收乙醇，得到浸膏约3kg。用水溶解此浸膏后，依次用石油醚萃取三次，每次2L，减压回收溶剂，得石油醚萃取物(FS，120g)；用乙酸乙酯萃取三次，每次6L，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物(FY， 760g)，用正丁醇萃取三次，每次6L，减压回收溶剂，得正丁醇萃取物(FZ，350g)。正丁醇萃取物以D101大孔吸附树脂处理，依次以水、20％乙醇、 50％乙醇、85％乙醇、95％乙醇洗脱，减压回收溶剂，合并50-85％乙醇洗脱物，得到总皂苷180g。将总皂苷部位(180g)经硅胶柱层析以以氯仿：甲醇(100:0～0:100)进行梯度洗脱，用薄层色谱进行检识合并相似组分得到FZ(A-H，分别标记为FZ-A、FZ-B、FZ-C、FZ-D、FZ-E、FZ-F、FZ-G 和FZ-H)8个部分。FZ-G(30g)经C18反相柱层析，以甲醇：水 (30:70→90:10，v/v)梯度洗脱，得到23个流分，经薄层示踪并合并相同组分，得到FZ-G(Fr.1-9，即分别记为Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5、 Fr.6、Fr.7、Fr.8和Fr.9)9个部分。将FZ-G(Fr.6,250mg)进行Sephadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂进行洗脱，得到4个流分FZ-G(Fr.6.1-6.4，即分别记为Fr.6.1、Fr.6.2、Fr.6.3、Fr.6.4)，FZ-G(Fr.6.4， 30mg)经过制备液相分离纯化(流动相条件：甲醇-水72:28)得到化合物2(4.3mg)，保留时间为29min。将FZ-G(Fr.8,320mg)进行Sephadex LH-20 羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以甲醇为洗脱剂进行洗脱，得到5个流分FZ-G (Fr.8.1-8.5，即分别记为Fr.8.1、Fr.8.2、Fr.8.3、Fr.8.4、Fr.8.5)，FZ-G(Fr.8.5，80mg)经过制备液相分离纯化(流动相条件：甲醇-水67:33)得到化合物1(8.2mg)，保留时间为38min。利用现代波谱技术(IR,UV,1D-,2D-NMR, HRMS)鉴定所有化合物均为新化合物，分别命名为clinoposides G(1) 和clinoposides H(2)。
实施例2化合物的结构鉴定
经过测试化合物1-2的理化性质、波谱数据确定了其结构。
化合物1Clinoposide G：为黄色粉末，易溶于甲醇等有机试剂；电喷雾质谱给出离子峰m/z1213[M-H]-，经高分辨电喷雾质谱确定其精确 m/z1213.5829(calcd for1213.5795及分子式C63H89O23。IR(film)vmax 3368,2942,2879,1636,1613,1382,1247,1070,837cm-1；1H和13C-NMR数据见表1，H-H相关谱(H-H COSY),H-C相关谱(HMBC),H-C远程相关谱(HMQC)，HSQC-TOCSY谱，确定了该化合物的化学结构，化学结构式如下：
表1实施例1化合物clinoposides G和clinoposides H的1H和13C-NMR数据
实施例3心肌细胞缺氧复氧损伤模型的建立
将H9c2心肌细胞于37℃CO2的恒温培养箱中培养后，细胞融合度 90％时用于实验。把细胞的培养液更换为PBS缓冲液，在含有95％的N2和5％的CO2缺氧培养箱培养，把缺氧复氧培养箱放入37℃的恒温培养箱中培养4h造成缺氧，然后换掉缓冲液，重新加入的培养基，放置于37°CO2的中培养24h，建立心肌细胞的缺氧复氧模型。对照组：培养的H9c2心肌细胞放入CO2的恒温培养箱培养，不做任何处理。
实施例4通过MTT法测定细胞存活率和LDH释放量的检测
当心肌细胞融合度90％时用于实验，调整细胞悬液浓度，每孔加入 100ul，铺板使待测细胞调密度1000-10000每孔，细胞的边缘孔用无菌的 PBS填充。5％CO2,37℃的恒温培养箱进行孵育至细胞单层铺满孔底，分别设置对照组(不做任何处理)，缺氧复氧模型组，给药组：clinoposides G 和clinoposides H(5ug/ml，10ug/ml，20ug/ml)，培养到一定时间进行细胞存活率的测定。每孔加入10ulMTT,继续培养4h终止培养，小心吸出培养液，每孔加入150ul的二甲基亚砜，置摇床上低速震荡10分钟，使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光度。结果见图 26的上半部分，其中，Cont为对照组数据，A/R为模型组数据，5ug/ml、 10ug/ml、20ug/ml分别为不同给药组数据，1为clinoposides G的数据，2为clinoposides H的数据。
结果：如图26所示，与对照组相比，在心肌细胞经过缺氧复氧后细胞的存活率显著下降，具有显著统计学意义(p<0.01)。治疗组与模型组相比较，clinoposides G治疗组中，低剂量组具有显著差异(p<0.05)，中剂量跟高剂量组具有极显著差异(p<0.01)。clinoposides H治疗组中，与模型组相比较，低剂量组没有显著差异，中剂量组具有显著差异(P<0.05)，高剂量组具有极显著差异(P<0.01)。
LDH释放量的检测
2，4二硝基苯肼显色法检测细胞培养液中LDH中活性。原理：LDH 在乳酸催化下生成丙酮酸，后者与二硝基苯胼结合成丙酮酸二硝基苯腙，丙酮酸二稍基苯腙在碱性环境下呈棕红色，通过比色法求出LDH活力。收集细胞的上清液，用试剂盒检测细胞培养液中的LDH含量。结果见图 26的下半部分，其中，Cont为对照组数据，A/R为模型组数据，5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml分别为不同给药组数据，1为clinoposides G的数据，2 为clinoposidesH的数据。
结果：如图26所示，与对照组相比较，在心肌细胞经过缺氧复氧后细胞的LDH释放量显著升高，具有统计学意义(p<0.01)。治疗组中，通过治疗心肌细胞LDH的释放量有所下降。治疗组与模型组相比较， clinoposides G治疗组中，低剂量组没有显著差异，中剂量组和高剂量组有极显著差异，具有统计学意义(p<0.01)。细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即调亡细胞治疗组中，低剂量组没有差异，中剂量组有显著差异，具有统计学意义(p<0.05)。高剂量组具有极显著差异，有统计学意义 (p<0.01)
实施例5通过TUNEL染色检测细胞凋亡
结果：通过TUNEL染色处理细胞，通过荧光显微镜观察，细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即调亡细胞，结果如图27所示，其中，图 27上半部分为细胞凋亡图片，下半部分为凋亡图片的统计数据。如图27 所示，模型组跟正常组相比较，细胞凋亡指数较高，具有显著差异有统计学意义。clinoposides G和clinoposides(20ug/ml)预处理组跟模型组比较，细胞凋亡指数有所下降。两者都具有统计学意义(P<0.01)。
实施例6检测心肌细胞内IFN-γ,MCP-1,TNF-α和IL-6的含量以及SOD， CAT活性的检测
各组处理结束后,收集细胞培养液及细胞,根据试剂盒说明书检测 IFN-γ,MCP-1,TNF-α和IL-6的含量以及SOD，CAT的活性。
结果：IFN-γ含量：如图28所示，模型组跟正常组比较，IFN-γ表达量显著增加，具有统计学意义(p<0.01),clinoposides G和clinoposides预处理组与模型组比较：IFN-γ表达量有所下降。clinoposides G低中高剂量预处理组具有极显著差异，具有统计学意义(P<0.01)。clinoposides H低剂量组有显著差异(p<0.05)，中高剂量组有极显著差异(p<0.01)。
MCP-1含量：模型组跟正常组比较，MCP-1表达量显著增加，具有统计学意义(p<0.01),clinoposides G和clinoposides预处理组与模型组比较：MCP-1表达量有所下降。clinoposides G低剂量组差异不明显，中高剂量预处理组具有极显著差异，具有统计学意义(P<0.01)。clinoposides H 低剂量组有显著差异(p<0.05)，中高剂量组有极显著差异(p<0.01)。
TNF-α含量：模型组跟正常组比较，TNF-α表达量显著增加，具有统计学意义(p<0.01),clinoposides G和clinoposides预处理组与模型组比较：TNF-α表达量有所下降。clinoposides G低剂量组差异显著，有统计学意义 (p<0.05)，中高剂量预处理组具有极显著差异，具有统计学意义(P<0.01)。 clinoposides H低，中剂量组差异不明显，高剂量组有极显著差异(p<0.01)。
IL-6含量：模型组跟正常组比较，IL-6表达量显著增加，具有统计学意义(p<0.01),clinoposides G和clinoposides预处理组与模型组比较：IL-6 表达量有所下降。clinoposides G低剂量组差异不明显，中高剂量预处理组具有极显著差异，具有统计学意义(P<0.01)。clinoposides H低剂量组差异不明显，高剂量组有极显著差异(p<0.01)。
SOD和CAT活性的检测：模型组跟对照组相比较，内源性抗氧化酶 SOD和CAT的表达量显著下降。治疗组与模型比较，低剂量组没有显著差异，中高剂量组有明显的治疗效果，具有统计学意义(p<0.01)
实施例7检测线粒体膜电位
按上述实验分组，接种细胞，生长36h后接受各组处理。实验终止, 胰酶消化收集细胞。1000rpm离心5分钟。加1mlDMEM培养液洗细胞一次。重新加入培养液,细胞计数。按所需量加入JC-1染料。避光染色30分钟。离心去除多余染料，加入2mlPBS清洗细胞一次。加入500ulPBS,用荧光显微镜进行观察。结果如图29所示，其中，图29上半部分为细胞荧光显微镜图片，下半部分为荧光显微镜图片的统计数据。
结果：如图29所示，模型组跟正常组比较，线粒体膜电位显著下降，具有统计学意义(p<0.01)。给药组与模型组相比较，clinoposides G和 clinoposides治疗组的线粒体膜电位显著上升，具有统计学意义(p<0.01)。
实施例8 Westernblot分析NF-κB和Nrf2的表达
细胞以(密度1×105个/m L)接种于96孔板，培养24h。分组及药物处理同“收集细胞，在裂解缓冲液中裂解，冰浴下超声匀浆，冰上孵育 20min，4℃、10 000r/min离心10min，取上清液，测定蛋白浓度，制成浓度相等的样品，取20μL进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，电转印至PVDF 膜，5％脱脂奶粉封闭2h后分别滴加一抗，4℃孵育过夜。洗膜后以相应二抗室温孵育2h，显色，于凝胶自动成像分析系统下成像，用Quantity One分析软件进行灰度值半定量分析。
结果：如图30所示：经过clinoposides G和clinoposides治疗后可以提高Nrf2核转位，降低NF-кB的核转位。该结果提示黄酮皂苷混源萜类化合物可能通过双重调节NF-κB和Nrf2而显示出显著的心肌保护活性。

Claims (6)

1.一种黄酮-皂苷混源萜类化合物在药物制备中的应用，其特征在于，所述的黄酮-皂苷混源萜类化合物名称为clinoposides G(1)或clinoposides H(2)，结构如下式所示：
2.根据权利要求1所述的黄酮-皂苷混源萜类化合物在药物制备中的应用，其特征在于，所述的药物用于预防或者治疗心血管疾病。
3.根据权利要求1所述的黄酮-皂苷混源萜类化合物在药物制备中的应用，其特征在于，所述的药物用于保护心肌细胞损伤。
4.根据权利要求3所述的黄酮-皂苷混源萜类化合物在药物制备中的应用，其特征在于，所述的心肌细胞损伤为缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤。
5.根据权利要求3所述的黄酮-皂苷混源萜类化合物在药物制备中的应用，其特征在于，所述的心肌细胞为H9c2心肌细胞。
6.根据权利要求1～5任一项所述的黄酮-皂苷混源萜类化合物在药物制备中的应用，其特征在于，所述的药物用于降低LDH释放，提高线粒体膜电位，减少细胞凋亡，降低炎性因子IFN-γ、TNF-α、IL-6或MCP-1的活性。
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