CN111869564A - 一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法，包括以下步骤：(1)取冻干植物组织进行研磨破壁，得到组织粗粉；(2)将步骤(1)中的组织粗粉过筛得到组织细粉，剩余残渣则返回步骤(1)继续研磨；(3)将步骤(2)中的组织细粉放入亚临界萃取器中萃取得到萃取混合液；(4)对步骤(3)中的萃取混合液进行分离提纯，得到组织原液；(5)对步骤(4)中的组织原液进行离心分离，取下层浊液；(6)制作植物诱导培养基，取步骤(5)中的下层浊液放入植物诱导培养基中在黑暗环境下进行诱导培养至长出愈伤组织；(7)制作植物增殖培养基，取出步骤(6)中的愈伤组织放入植物增殖培养基进行增殖培养得到植物干细胞。

Description

一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法
技术领域
本发明涉及生物科学技术领域，具体是一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法。
背景技术
植物干细胞是所有植物细胞的起源，植物是由植物干细胞分裂而成的，植物干细胞技术被认为是21世纪生物技术领域最具竞争力的技术之一。植物干细胞的培养是在传统组织培养技术的基础上，改进了传统方法，以植物干细胞为目标，诱导、分离和培养外植体，建立相应的干细胞培养体系。通过同步的植物干细胞培养，可实现次生代谢物批量生产的稳定性和目标活性物质的大量生产，为功能食品的研发、生物材料研究提供大量的原材料。
目前的植物干细胞培养技术为保持组织活性，一般采用植物原生组织进行诱导、增殖培养，需要较长时间等到植物组织生长分化，培养效率低，并且对原生植物组织需求量高，不利于生态平衡调节。
发明内容
本发明为克服上述情况不足，旨在提供一种能解决上述问题的技术方案。
一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法，包括以下步骤：
(1)取冻干植物组织进行研磨破壁，得到组织粗粉；
(2)将步骤(1)中的组织粗粉过筛得到组织细粉，剩余残渣则返回步骤(1)继续研磨；
(3)将步骤(2)中的组织细粉放入亚临界萃取器中萃取得到萃取混合液；
(4)对步骤(3)中的萃取混合液进行分离提纯，得到组织原液；
(5)对步骤(4)中的组织原液进行离心分离，取下层浊液；
(6)制作植物诱导培养基，取步骤(5)中的下层浊液放入植物诱导培养基中在黑暗环境下进行诱导培养至长出愈伤组织；
(7)制作植物增殖培养基，取出步骤(6)中的愈伤组织放入植物增殖培养基进行增殖培养得到植物干细胞。
进一步的，步骤(2)中过筛采用20～40目筛。
进一步的，步骤(3)中亚临界萃取器的真空度为-0.5～-1MPa。
进一步的，步骤(3)中萃取温度为15～40℃，萃取时间为30～60min，萃取次数为2～4次。
进一步的，步骤(6)中的植物诱导培养基的营养成本包括MS、1mg/L的NAA、5mg/L的6-BA。
进一步的，步骤(7)中的植物增殖培养基的营养成本包括MS、5mg/L的2,4-D、2mg/L的6-BA。
与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：本发明采用冻干植物组织进行细胞提取后再进行植物干细胞培养，使细胞可以充分吸收培养基中的营养物质，进而提高培养效率；采用冻干植物组织进行培养，对原生植物组织需求低，有利于维持生态平衡。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法，包括以下步骤：
(1)取冻干植物组织进行研磨破壁，得到组织粗粉；
(2)将步骤(1)中的组织粗粉过筛得到组织细粉，剩余残渣则返回步骤(1)继续研磨；
(3)将步骤(2)中的组织细粉放入亚临界萃取器中萃取得到萃取混合液；
(4)对步骤(3)中的萃取混合液进行分离提纯，得到组织原液；
(5)对步骤(4)中的组织原液进行离心分离，取下层浊液；
(6)制作植物诱导培养基，取步骤(5)中的下层浊液放入植物诱导培养基中在黑暗环境下进行诱导培养至长出愈伤组织；
(7)制作植物增殖培养基，取出步骤(6)中的愈伤组织放入植物增殖培养基进行增殖培养得到植物干细胞。
进一步的，步骤(2)中过筛采用20～40目筛。
进一步的，步骤(3)中亚临界萃取器的真空度为-0.5～-1MPa。
进一步的，步骤(3)中萃取温度为15～40℃，萃取时间为30～60min，萃取次数为2～4次。
进一步的，步骤(6)中的植物诱导培养基的营养成本包括MS、1mg/L的NAA、5mg/L的6-BA。
进一步的，步骤(7)中的植物增殖培养基的营养成本包括MS、5mg/L的2,4-D、2mg/L的6-BA。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

Claims (6)

1.一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取冻干植物组织进行研磨破壁，得到组织粗粉；
(2)将步骤(1)中的组织粗粉过筛得到组织细粉，剩余残渣则返回步骤(1)继续研磨；
(3)将步骤(2)中的组织细粉放入亚临界萃取器中萃取得到萃取混合液；
(4)对步骤(3)中的萃取混合液进行分离提纯，得到组织原液；
(5)对步骤(4)中的组织原液进行离心分离，取下层浊液；
(6)制作植物诱导培养基，取步骤(5)中的下层浊液放入植物诱导培养基中在黑暗环境下进行诱导培养至长出愈伤组织；
(7)制作植物增殖培养基，取出步骤(6)中的愈伤组织放入植物增殖培养基进行增殖培养得到植物干细胞。
2.根据权利要求1所述一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法，其特征在于，步骤(2)中过筛采用20～40目筛。
3.根据权利要求1所述一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法，其特征在于，步骤(3)中亚临界萃取器的真空度为-0.5～-1MPa。
4.根据权利要求1所述一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法，其特征在于，步骤(3)中萃取温度为15～40℃，萃取时间为30～60min，萃取次数为2～4次。
5.根据权利要求1所述一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法，其特征在于，步骤(6)中的植物诱导培养基的营养成本包括MS、1mg/L的NAA、5mg/L的6-BA。
6.根据权利要求1所述一种超低温冻干研磨提取植物干细胞制作方法，其特征在于，步骤(7)中的植物增殖培养基的营养成本包括MS、5mg/L的2,4-D、2mg/L的6-BA。
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