CN101775383A - 一种酯化酶酶制剂的制备方法 - Google Patents

一种酯化酶酶制剂的制备方法 Download PDF

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刘绪
刘念
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Abstract

本发明公开了一种从红曲酯化酶粗酶制剂中提取酯化酶并制成精酶制剂的方法，该方法包括缓冲液浸提，离心，盐析，透析，干制等步骤。利用该法生产出的酯化酶精酶制剂克服了粗酶制剂易霉变、虫蚀、不便于保存和运输、霉味和异杂味重的缺点。本发明工艺简单，易操作，易规模化生产。

Description

一种酯化酶酶制剂的制备方法
所属技术领域
本发明涉及一种酯化酶(能催化短链脂肪酸和醇生成酯的脂肪酶)酶制剂的制备方法，尤其是从红曲酯化酶粗酶制剂中提取酯化酶并制成精酶制剂的方法。
背景技术
中国白酒是源自中国本土的生物技术产品，是世界六大蒸馏酒之一。浓香型白酒是中国白酒品种中产量最大、市场覆盖最广的一类白酒，在国民经济和人们日常生活中占有重要的地位。目前，优质浓香型白酒的生产还存在生产周期长，优级品率低等问题，是浓香型白酒产业亟待解决技术难题之一。其主要原因之一为浓香型白酒主要香味物质己酸乙酯的形成速度慢且最终含量低。因此使用酶制剂催化己酸和乙醇生成己酸乙酯能明显地提高浓香型白酒的质量并缩短生产周期。红曲酯化酶就是一种优良的催化己酸与乙醇酯化的酶制剂，目前生产上使用的是将红曲霉菌种接种于以麸皮为主要原料的培养基上经固态发酵而成的粗酶制剂。虽然该粗酶制剂在浓香型白酒生产上及在酯化液的制备方面取得了不错的效果，但由于该粗酶制剂本身存在缺陷，阻碍了其广泛使用。该缺陷主要表现为粗酶制剂易霉变、虫蚀、不便于保存和运输，尤其是粗酶制剂自身带有浓郁的霉味和异杂味对浓香型白酒的风味特征有一定的影响，该缺陷致使其难于用于高端浓香型白酒的生产。
发明内容
为了克服红曲酯化酶粗酶制剂易霉变、虫蚀、不便于保存和运输、霉味和异杂味重的缺点，本发明专利提供了一种从粗酶制剂中提取酯化酶并制成精酶制剂的方法，该方法包括缓冲液浸提，离心，盐析，透析，干制等步骤。利用该法生产出的酯化酶精酶酶制剂与粗酶制剂相比体积小，便于保存和运输，也不易霉变和虫蚀，并且有效地去除了霉味和异杂味。
技术方案：将红曲酯化酶粗酶制剂粉碎成粉，按质量体积比1∶5的比例加入PH6.4的磷酸缓冲液在4℃下浸提24小时，用滤布过滤去除固体残渣，将所收集的滤液在4℃下冷冻离心去除菌体等固体残渣，收集上清液。在低温下往上清液中加入硫酸铵使其饱和度为20％，在0℃下沉淀24小时，4℃下冷冻离心去除沉淀，收集上清液。在低温下往二次离心收集的上清液中加入硫酸铵使其饱和度为65％-80％，0℃下沉淀18-24小时，4℃下冷冻离心去除上清液，收集沉淀。将该沉淀溶解在一定量的蒸馏水中，并装入透析袋中，低温透析去盐。将透析后的酶液用PEG6000浓缩后调整到一定的浓度，加入海藻糖、蔗糖、海藻酸钠、可溶性淀粉、β-糊精中的一种或其中几种的组合作为喷雾干燥的保护剂。其中海藻糖、蔗糖、海藻酸钠的用量为2％-5％，可溶性淀粉、β-糊精的用量为6％-8％，总用量控制在10％以内。将上述添加了保护剂的酶液在进口温度110℃、出口温度65℃、压力2kgf/cm2、液体流速4ml/min的条件下喷雾干燥即得红曲酯化酶精酶制剂，酯化力为(800-1200)mg/100ml·7day。
本发明的有益效果是：克服了红曲酯化酶粗酶制剂本身易霉变、虫蚀、不利于保存和运输、霉味和异杂味重的缺点。同时本发明生产工艺简单，易操作，易规模化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步说明。
实施列1
(1)浸提：
将红曲酯化酶粗酶制剂粉碎成粉，按质量体积比1∶5的比例加入PH6.4的磷酸缓冲液在4℃下浸提24小时，用滤布过滤去除固体残渣，将所收集的滤液用冷冻离心机在4℃，4000r/min的条件下离心15分钟去除菌体等固体残渣，收集上清液为初提液。
(2)硫酸铵分级沉淀：
在低温条件下往(1)所得初提液中加入硫酸铵(用磁力搅拌器边搅拌边缓慢加入硫酸铵)使其饱和度为20％，0℃下沉淀24小时，用冷冻离心机在4℃，4000r/min的条件下离心20分钟去除沉淀，收集上清液。在低温条件下往上清液中加入硫酸铵使其饱和度为65％，在0℃下沉淀24小时，用冷冻离心机在4℃，4000r/min的条件下离心20分钟去除上清，收集沉淀。将该沉淀溶解在一定量的蒸馏水中得到酶提取液。
(3)透析：
将(2)所得酶提取液装入透析袋中，低温透析30小时，每6小时更换一次透析液。
(4)喷雾干燥：
将透析后的酶液用PEG6000浓缩后调整到一定的浓度，加入1％的海藻酸钠和6％的可溶性淀粉，使海藻酸钠和可溶性淀粉充分溶解，形成溶液。将该溶液在进口温度为110℃、出口温度为65℃、压力为2kgf/cm2、液体流速为4ml/min的条件下喷雾干燥得红曲酯化酶精酶制剂，酯化力为900mg/100ml·7day。
实施列2
(1)浸提：
将红曲酯化酶粗酶制剂粉碎成粉，按质量体积比1∶5的比例加入PH6.4的磷酸缓冲液在4℃下浸提24小时，用滤布过滤去除固体残渣，将所收集的滤液用冷冻离心机在4℃，5000r/min的条件下离心10分钟去除菌体等固体残渣，收集上清液为初提液。
(2)硫酸铵分级沉淀：
在低温条件下往上清液中加入(1)所得的初提液中加入硫酸铵(用磁力搅拌器边搅拌边缓慢加入硫酸铵)使其饱和度为20％，在0℃的条件下沉淀24小时，用冷冻离心机在4℃，5000r/min的条件下离心15分钟去除沉淀，收集上清液。在低温条件下往上清液中加入硫酸铵使其饱和度为80％，0℃下沉淀18小时，用冷冻离心机在4℃，5000r/min的条件下离心15分钟去除上清，收集沉淀。将该沉淀溶解在一定量的蒸馏水中得到酶提取液。
(3)透析：
将(2)所得酶提取液装入透析袋中，透析24小时，每3小时更换一次透析液。
(4)喷雾干燥：
将透析后的酶液用PEG6000浓缩后调整到一定的浓度，加入2％的海藻糖和6％的β-糊精，使蔗糖和β-糊精充分溶解，形成均一溶液。将该溶液在进口温度为110℃、出口温度为65℃、压力为2kgf/cm2、液体流速为4ml/min的条件下喷雾干燥得红曲酯化酶精酶制剂，酯化力为1100mg/100ml·7day。

Claims (5)

1.一种酯化酶酶制剂的制备方法，其特征在于：经过缓冲液浸提，离心，盐析，透析，干制等步骤，从酯化酶粗酶制剂中提取酯化酶并制成精酶制剂。
2.根据权利要求1所述的一种酯化酶酶制剂的制备方法，其特征在于：酯化酶粗酶制剂是指以麸皮或大米为原料利用红曲霉菌株经固态发酵工艺而成的红曲酯化酶粗酶制剂。
3.根据权利要求1所述的一种酯化酶酶制剂的制备方法，其特征在于：干制采用喷雾干燥的方法，其参数设置为进口温度为110℃、出口温度为65℃、压力为2kgf/cm2、液体流速为4ml/min。
4.根据权利要求1-3所述的一种酯化酶酶制剂的制备方法，其特征在于：喷雾干燥中使用的保护剂为海藻糖、蔗糖、海藻酸钠、可溶性淀粉、β-糊精中的一种或其中几种的组合。
5.根据权利要求1-4所述的一种酯化酶酶制剂的制备方法，其特征在于：保护剂海藻糖、蔗糖、海藻酸钠的用量为2％-5％，可溶性淀粉、β-糊精的用量为6％-8％，保护剂的总用量控制在10％以内。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103045558A (zh) * 2012-12-18 2013-04-17 山东中惠食品有限公司 红曲霉生产酯化酶制剂的方法
CN103224919A (zh) * 2013-05-08 2013-07-31 黑龙江大学 一种提高酒曲中霉菌酯化酶活力的培养基及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101555470A (zh) * 2009-04-28 2009-10-14 陕西省科学院酶工程研究所 酶制剂发酵液的喷雾干燥方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101555470A (zh) * 2009-04-28 2009-10-14 陕西省科学院酶工程研究所 酶制剂发酵液的喷雾干燥方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 20071115 覃拥灵 微生物酯酶产生菌的选育及发酵条件优化酶学性质的研究 第1.2.3节、4.1.7节 1-5 , 2 *
《四川理工学院学报（自然科学版）》 20081231 刘念 己酸乙酯专用酯化曲产酯条件的优化 第21卷, 第6期 2 *
《酶制剂生产与应用》 20060831 杨昌鹏 酶制剂生产与应用 , 1 *
《酶制剂生产技术》 20040731 孙俊良 酶制剂生产技术 , 1 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103045558A (zh) * 2012-12-18 2013-04-17 山东中惠食品有限公司 红曲霉生产酯化酶制剂的方法
CN103224919A (zh) * 2013-05-08 2013-07-31 黑龙江大学 一种提高酒曲中霉菌酯化酶活力的培养基及其制备方法

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