CN107836349A - 一种植物干细胞培养方法 - Google Patents

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闫毛钦
杨慧侠
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques

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Abstract

本发明公开了一种植物干细胞培养方法，所述植物干细胞培养方法的具体步骤如下：S1原料选择，S2种子培育，S3种子处理，S4诱导分离，S5培养增殖。本发明提供的一种植物干细胞培养方法，该方法以新鲜的玉米为原料，经培养后得到发芽的种子，然后选取带有静止中心的根组织，经诱导后得到静止中心干细胞。相较于传统的植物干细胞培养方法，本发明简单易行、提取效率高、培养周期短。

Description

一种植物干细胞培养方法
技术领域
本发明属于细胞培养领域，更具体地说，尤其涉及一种植物干细胞培养方法。
背景技术
植物干细胞又称为分生组织，是相对于植物体内已经分化成熟的成熟组织而言的。植物分生组织根据其位置可以分为顶端分生组织和侧生分生组织两大类。其中顶端分生组织包括茎尖分生组织(SAM)和根尖分生组织(RAM)。侧生分生组织包括维管形成层(vascular cambium)和木栓形成层(cork cambium)。植物细胞的培养大致分为四种：一、组织培养：诱发产生愈伤组织，如果条件适宜，可培养出再生植株。用于研究植物的生长发育、分化和遗传变异；进行无性繁殖；制取代谢产物。二、悬浮细胞培养：在愈伤组织培养技术基础上发展起来的一种培养技术。适合于进行产业化大规模细胞培养，制取植物代谢产物。三、原生质体培养：脱壁后的植物细胞称为原生质体(protoplast)，其特点是：①比较容易摄取外来的遗传物质，如DNA；②便于进行细胞融合，形成杂交细胞；③与完整细胞一样具有全能性，仍可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株：四、单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体植株，经人为加倍后可得到完全纯合的个体。传统的玉米干细胞培养方法培养周期常，步骤繁琐，不利于它的生产、研究，
有鉴于此，现需要一种步骤简单、培养周期短的植物干细胞培养方法来解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种植物干细胞培养方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种植物干细胞培养方法，所述植物干细胞培养方法的具体步骤如下：
S1、原料选择，挑选颗粒饱满完整、色泽鲜艳有光泽、无霉变腐败的玉米，先使用清水对其冲洗1-3遍去除杂质、灰尘后，使用消毒液对其进行消毒，消毒完成后使用烘干机对其进行干燥处理直至水分完全去除；
S2、种子培育，将处理后的种子种入培养基中，在温度为22℃-25℃，湿度为95％-98％的环境下培养3-5天使其发芽；
S3、种子处理，待到种子发芽4-5天后，将含有静止中心的根组织收集起来，去掉根端的根冠，从切口开始截取1-1.2mm长作为外植体；
S4、诱导分离，将外植体放入诱导培养基中，在无菌无毒、恒温的条件下培养25天后，静止中心干细胞被分离出；
S5、培养增殖，将静止中心干细胞放入增殖培养基中，在无菌无毒、恒温的条件下培养5-20天后就可得到大量静止中心干细胞。
优选的，所述诱导培养基为含有萘乙酸、水解酪蛋白、生长素的MN培养基。
优选的，所述增殖培养基为含有水、无机盐、蔗糖、植物激素的液体培养基。
优选的，所述植物激素为生长素和细胞分裂素。
本发明的技术效果和优点：本发明提供的一种植物干细胞培养方法，该方法以新鲜的玉米为原料，经培养后得到发芽的种子，然后选取带有静止中心的根组织，经诱导后得到静止中心干细胞。相较于传统的植物干细胞培养方法，本发明简单易行、提取效率高、培养周期短。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种植物干细胞培养方法，所述植物干细胞培养方法的具体步骤如下：
S1、原料选择，挑选颗粒饱满完整、色泽鲜艳有光泽、无霉变腐败的玉米，先使用清水对其冲洗1-3遍去除杂质、灰尘后，使用消毒液对其进行消毒，消毒完成后使用烘干机对其进行干燥处理直至水分完全去除；
S2、种子培育，将处理后的种子种入培养基中，在温度为22℃，湿度为95％的环境下培养5天使其发芽；
S3、种子处理，待到种子发芽4-5天后，将含有静止中心的根组织收集起来，去掉根端的根冠，从切口开始截取1mm长作为外植体；
S4、诱导分离，将外植体放入诱导培养基中，在无菌无毒、恒温的条件下培养25天后，静止中心干细胞被分离出；
S5、培养增殖，将静止中心干细胞放入增殖培养基中，在无菌无毒、恒温的条件下培养5天后就可得到大量静止中心干细胞。
具体的，所述诱导培养基为含有萘乙酸、水解酪蛋白、生长素的MN培养基。
具体的，所述增殖培养基为含有水、无机盐、蔗糖、植物激素的液体培养基。
具体的，所述植物激素为生长素和细胞分裂素。
实施例2
一种植物干细胞培养方法，所述植物干细胞培养方法的具体步骤如下：
S1、原料选择，挑选颗粒饱满完整、色泽鲜艳有光泽、无霉变腐败的玉米，先使用清水对其冲洗1-3遍去除杂质、灰尘后，使用消毒液对其进行消毒，消毒完成后使用烘干机对其进行干燥处理直至水分完全去除；
S2、种子培育，将处理后的种子种入培养基中，在温度为23℃，湿度为96％的环境下培养4天使其发芽；
S3、种子处理，待到种子发芽4-5天后，将含有静止中心的根组织收集起来，去掉根端的根冠，从切口开始截取1.1mm长作为外植体；
S4、诱导分离，将外植体放入诱导培养基中，在无菌无毒、恒温的条件下培养25天后，静止中心干细胞被分离出；
S5、培养增殖，将静止中心干细胞放入增殖培养基中，在无菌无毒、恒温的条件下培养12天后就可得到大量静止中心干细胞。
具体的，所述诱导培养基为含有萘乙酸、水解酪蛋白、生长素的MN培养基。
具体的，所述增殖培养基为含有水、无机盐、蔗糖、植物激素的液体培养基。
具体的，所述植物激素为生长素和细胞分裂素。
实施例3
一种植物干细胞培养方法，所述植物干细胞培养方法的具体步骤如下：
S1、原料选择，挑选颗粒饱满完整、色泽鲜艳有光泽、无霉变腐败的玉米，先使用清水对其冲洗1-3遍去除杂质、灰尘后，使用消毒液对其进行消毒，消毒完成后使用烘干机对其进行干燥处理直至水分完全去除；
S2、种子培育，将处理后的种子种入培养基中，在温度为25℃，湿度为98％的环境下培养3天使其发芽；
S3、种子处理，待到种子发芽4-5天后，将含有静止中心的根组织收集起来，去掉根端的根冠，从切口开始截取1.2mm长作为外植体；
S4、诱导分离，将外植体放入诱导培养基中，在无菌无毒、恒温的条件下培养25天后，静止中心干细胞被分离出；
S5、培养增殖，将静止中心干细胞放入增殖培养基中，在无菌无毒、恒温的条件下培养20天后就可得到大量静止中心干细胞。
具体的，所述诱导培养基为含有萘乙酸、水解酪蛋白、生长素的MN培养基。
具体的，所述增殖培养基为含有水、无机盐、蔗糖、植物激素的液体培养基。
具体的，所述植物激素为生长素和细胞分裂素。
综上所述：本发明提供的一种植物干细胞培养方法，该方法以新鲜的玉米为原料，经培养后得到发芽的种子，然后选取带有静止中心的根组织，经诱导后得到静止中心干细胞。相较于传统的植物干细胞培养方法，本发明简单易行、提取效率高、培养周期短。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种植物干细胞培养方法，其特征在于，所述植物干细胞培养方法的具体步骤如下：
S1、原料选择，挑选颗粒饱满完整、色泽鲜艳有光泽、无霉变腐败的玉米，先使用清水对其冲洗1-3遍去除杂质、灰尘后，使用消毒液对其进行消毒，消毒完成后使用烘干机对其进行干燥处理直至水分完全去除；
S2、种子培育，将处理后的种子种入培养基中，在温度为22℃-25℃，湿度为95％-98％的环境下培养3-5天使其发芽；
S3、种子处理，待到种子发芽4-5天后，将含有静止中心的根组织收集起来，去掉根端的根冠，从切口开始截取1-1.2mm长作为外植体；
S4、诱导分离，将外植体放入诱导培养基中，在无菌无毒、恒温的条件下培养25天后，静止中心干细胞被分离出；
S5、培养增殖，将静止中心干细胞放入增殖培养基中，在无菌无毒、恒温的条件下培养5-20天后就可得到大量静止中心干细胞。
2.根据权利要求1所述的一种植物干细胞培养方法，其特征在于：所述诱导培养基为含有萘乙酸、水解酪蛋白、生长素的MN培养基。
3.根据权利要求1所述的一种植物干细胞培养方法，其特征在于：所述增殖培养基为含有水、无机盐、蔗糖、植物激素的液体培养基。
4.根据权利要求3所述的一种植物干细胞培养方法，其特征在于：所述植物激素为生长素和细胞分裂素。
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