CN114058657A - 一种高产灵芝胞内多糖的液体培养基及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种高产灵芝胞内多糖的液体培养基及其制备方法，其中所述的灵芝培养基由如下重量百分比含量的组分组成：黄豆饼粉水提液2％‑4％、蛋白胨0.2％‑0.6％、葡萄糖0.5％‑1.5％、糊精2％‑4％、磷酸二氢钾0.1％‑0.2％、硫酸镁0.05％‑0.1％、VB1 0.01‰‑0.03％、消泡剂0.02％‑0.06％。通过本发明培养基生产的灵芝菌丝体生长周期短，菌丝浓密，菌丝体胞内多糖含量高，且培养基制备简单，易于操作。本发明可提高菌丝体胞内多糖的生产效率，缩短培养时间，有利于高产多糖的灵芝菌丝体的工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及食药用菌液体发酵领域，具体的说涉及一种高产灵芝胞内多糖的液体培养基。
背景技术
灵芝属于真菌，是我国传统的珍贵药材，灵芝多糖是灵芝的主要次生代谢产物之一，具有独特的保健和药用价值，是国内外研究热点之一。灵芝多糖具有调节免疫力、抗肿瘤、抗血栓、保护肝脏等功能。灵芝液态发酵时为丝状真菌，是一类复杂的微生物，在不同的生长时期、采用不同的培养条件以及使用不同的培养基下，菌丝体的形态均会出现差异，菌体胞内糖含量也会存在差异。当菌种一致、培养条件稳定时，培养基的调整和变更，将严重影响灵芝菌丝体胞内糖的含量。
现有的发酵生产灵芝胞内多糖的液体培养基的碳源多为单一碳源，如葡萄糖、蔗糖、淀粉等，碳源单一不利于菌丝生长或胞内多糖的积累，组合碳源有利于菌丝体的生长及多糖的积累，不同的多糖对菌丝体内的多糖含量影响不同。灵芝属于低糖发酵菌，碳源浓度过高，提高渗透压，不利于菌丝体生长和代谢产物产生。液体培养基的氮源多为有机氮源，如豆饼粉、麸皮粉、酵母浸粉、酵母粉等，使用豆饼粉、麸皮等时多是带渣发酵，这会导致产物菌丝不纯，影响产品品质；酵母浸粉、酵母粉等的价格较高，使用时成本较高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种原料来源易得、成本低廉、能够缩短培养时间、高产灵芝胞内多糖的液体培养基，所述的灵芝液体培养基包含如下重量百分比含量的组分：
黄豆饼粉水提液2％-4％、蛋白胨0.2％-0.6％、葡萄糖0.5％-1.5％、糊精2％-4％、磷酸二氢钾0.1％-0.2％、硫酸镁0.05％-0.1％、VB1 0.01‰-0.03％、消泡剂0.02％-0.06％。
优选的灵芝液体培养基由下列重量百分比含量的组分组成：
黄豆饼粉水提液2％、蛋白胨0.6％、葡萄糖0.5％、糊精4％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、VB1 0.01‰、消泡剂0.02％。
优选的灵芝液体培养基由下列重量百分比含量的组分组成：
黄豆饼粉水提液2％、蛋白胨0.6％、葡萄糖1.5％、糊精2％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.075％、VB1 0.02‰、消泡剂0.04％。
优选的灵芝液体培养基由下列重量百分比含量的组分组成：
黄豆饼粉水提液3％、蛋白胨0.4％、葡萄糖1％、糊精3％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.075％、VB1 0.03‰、消泡剂0.06％。
优选的灵芝液体培养基由下列重量百分比含量的组分组成：
黄豆饼粉水提液4％、蛋白胨0.2％、葡萄糖0.5％、糊精4％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.1％、VB1 0.01‰、消泡剂0.02％。
优选的灵芝液体培养基由下列重量百分比含量的组分组成：
黄豆饼粉水提液4％、蛋白胨0.2％、葡萄糖1.5％、糊精2％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.075％、VB1 0.02‰、消泡剂0.04％。
所述的黄豆饼粉水提液的制备方法为：
取黄豆饼粉与饮用水按照质量比为1:15-20混合后，90℃-100℃保温30-40min，温度降至室温时，3000-5000rpm离心，取滤液。
优选上述黄豆饼粉水提液的制备方法为：取黄豆饼粉与饮用水按照质量比为1:15混合后，100℃保温30min，温度降至室温时，5000rpm离心，取滤液。
上述高产灵芝胞内多糖的液体培养基的制备方法包括如下步骤：将蛋白胨、葡萄糖、糊精、磷酸二氢钾、硫酸镁、VB1、消泡剂按照比例混合后，加水搅拌混匀，再加入黄豆饼粉水提液，搅拌均匀，补水定容，121℃灭菌30min即得。
本发明的灵芝液态培养基使用时，接种量为10％，培养温度为26℃、罐压为0.05MPa、通风比为1:0.8(vvm)。
发酵获得的湿菌丝分别进行3次水洗(纯化水)、干燥、粉碎、过筛(80目)后，采用硫酸蒽酮法进行灵芝菌丝体胞内多糖检测。
所述的黄豆饼粉是将黄豆榨干油后的豆粕经粉碎、烘干得到的粉，富含食药用菌生长需要的氮源、生长因子等；糊精是淀粉分解的中间产物，是一类介于淀粉与糖之间的纯碳水化合物，提供食药用菌需要的碳源。通过本发明培养基发酵生产的灵芝菌丝体生长周期短，菌丝浓密，菌丝体胞内多糖含量高。
特别说明，所述的培养基使用前均已经经过灭菌处理，本发明所述的“％”除特殊说明外，均为质量百分含量。
与现有技术比较本发明的有益效果：
(1)本发明以黄豆饼粉、葡萄糖、糊精为培养基主要碳氮源，成本低廉、来源广；应用该液体培养基发酵出的灵芝菌丝体，产量稳定，胞内多糖含量高，质量好。
(2)本发明易于操作，可显著提高生产效率，缩短培养时间，由原先60-80h，缩短至50-55h，特别利于高产多糖的灵芝菌丝体的工业化生产。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步说明本发明。以下实施例采用的灵芝菌株，在北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏，其保藏号为CICCNo.14020。
实施例1
一种高产灵芝胞内多糖的液体培养基，所用原料按以下配比(％)组成：黄豆饼粉水提液2％、蛋白胨0.6％、葡萄糖0.5％、糊精4％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、VB10.01‰、消泡剂0.02％。
实施例2
一种高产灵芝胞内多糖的液体培养基，所用原辅料按以下配比(％)组成：黄豆饼粉水提液2％、蛋白胨0.6％、葡萄糖1.5％、糊精2％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.075％、VB1 0.02‰、消泡剂0.04％。
实施例3
一种高产灵芝胞内多糖的液体培养基，所用原辅料按以下配比(％)组成：黄豆饼粉水提液3％、蛋白胨0.4％、葡萄糖1％、糊精3％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.075％、VB10.03‰、消泡剂0.06％。
实施例4
一种高产灵芝胞内多糖的液体培养基，所用原辅料按以下配比(％)组成：黄豆饼粉水提液4％、蛋白胨0.2％、葡萄糖0.5％、糊精4％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.1％、VB10.01‰、消泡剂0.02％。
实施例5
黄豆饼粉水提液4％、蛋白胨0.2％、葡萄糖1.5％、糊精2％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.075％、VB1 0.02‰、消泡剂0.04％。
对照组1
酵母粉1.5％、蛋白胨0.5％、葡萄糖3.0％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.075％、消泡剂0.044％。
对照组2
黄豆饼粉水提液3％、蛋白胨0.3％、葡萄糖3％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、VB1 0.01‰、消泡剂0.02％。
对照组3
黄豆饼粉水提液3％、蛋白胨0.3％、葡萄糖3％、糊精3％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、VB1 0.01‰、消泡剂0.02％。
上述实施例中黄豆饼粉水提液的制备方法如下：将黄豆饼粉与饮用水按1:15比例混合，用电磁炉加热温度升至100℃时，保温30min，温度降至室温时，5000rpm离心，取滤液。
实施例1-5培养基配制：将蛋白胨、葡萄糖、糊精、磷酸二氢钾、硫酸镁、VB1、消泡剂分别按照比例混合后，加水搅拌混匀，再加入黄豆饼粉水提液，搅拌均匀，补水定容至4.5L。
对照组1培养基配制：酵母粉1.5％、蛋白胨0.5％、葡萄糖3.0％、磷酸二氢钾0.15％、硫酸镁0.075％、消泡剂按照比例混合后，加水搅拌混匀，再加入黄豆饼粉水提液，搅拌均匀，补水定容至4.5L。
对照组2培养基配制：将蛋白胨0.3％、葡萄糖3％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、VB1 0.01‰、消泡剂按照比例混合后，加水搅拌混匀，再加入黄豆饼粉水提液3％，搅拌均匀，补水定容至4.5L。
对照组3培养基配制：将蛋白胨0.3％、葡萄糖3％、糊精5％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、VB1 0.01‰、消泡剂0.02％按照比例混合后，加水搅拌混匀，再加入黄豆饼粉水提液3％，搅拌均匀，补水定容至4.5L。
灭菌：将培养基使用高压灭菌锅灭菌，温度达到121℃，维持30min，灭菌结束后待罐温降至室温时，将罐进行安装。
灵芝发酵培养过程：
接种培养：待温度为26℃时，按10％的接种量进行接种，罐压控为0.05MPa，通风比控为1:0.8(vvm)，PH自然，实施1-5发酵周期为50-55h，对照组2发酵周期为55h，对照组1发酵周期62h，对照组3发酵周期78h。
灵芝菌丝体胞内多糖的测定
将实施例和对照组所得的8份湿菌丝分别进行3次水洗(纯化水)、干燥、粉碎、过筛(80目)后进行灵芝菌丝体胞内多糖检测，检测方法采用硫酸蒽酮法。
表1实施例和对照组中的灵芝菌丝体得率及胞内多糖含量统计表
由以上数据可以说明，采用本发明液体培养基发酵培养的灵芝菌丝体，产量稳定且胞内多糖含量高，质量好。
Claims (5)
1.一种高产灵芝胞内多糖的液体培养基，其特征在于其中所述的灵芝液体培养基包含如下重量百分比含量的组分：
黄豆饼粉水提液2％-4％、蛋白胨0.2％-0.6％、葡萄糖0.5％-1.5％、糊精2％-4％、磷酸二氢钾0.1％-0.2％、硫酸镁0.05％-0.1％、VB1 0.01‰-0.03％、消泡剂0.02％-0.06％。
2.根据权利要求1所述的高产灵芝胞内多糖的液体培养基，其特征在于所述的黄豆饼粉水提液的制备方法为：
取黄豆饼粉与饮用水按照质量比为1:15-20混合后，90℃-100℃保温30-40min，温度降至室温时，3000-5000rpm离心，取滤液。
3.根据权利要求2所述的高产灵芝胞内多糖的液体培养基，其特征在于所述的黄豆饼粉水提液的制备方法为：
取黄豆饼粉与饮用水按照质量比为1:15混合后，100℃保温30min，温度降至室温时，5000rpm离心，取滤液。
4.根据权利要求2或3所述的高产灵芝胞内多糖的液体培养基，其特征在于所述的黄豆饼粉是将黄豆榨干油后的豆粕经粉碎、烘干得到的粉。
5.一种权利要求1所述的高产灵芝胞内多糖的液体培养基的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：将蛋白胨、葡萄糖、糊精、磷酸二氢钾、硫酸镁、VB1、消泡剂按照比例混合后，加水搅拌混匀，再加入黄豆饼粉水提液，搅拌均匀，补水定容，121℃灭菌30min即得。
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