CN111793632A

CN111793632A - 变异的Gsdmd-C核酸片段，包含所述核酸片段的载体及应用

Info

Publication number: CN111793632A
Application number: CN202010639575.3A
Authority: CN
Inventors: 汪枫桦
Original assignee: Shanghai Langsheng Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shanghai Langsheng Biotechnology Co ltd
Priority date: 2020-07-06
Filing date: 2020-07-06
Publication date: 2020-10-20

Abstract

本发明涉及生物医学领域，具体而言，涉及一种变异的Gsdmd‑C核酸片段，包含所述核酸片段的载体及应用。该核酸片段能更好的在宿主体内进行表达(特别是配合腺相关病毒进行表达)。此外，包含该核酸片段的载体在大鼠光感受器细胞内的感染效果优异，且在细胞核内稳定表达，能显著降低视网膜外核层细胞焦亡、增加小鼠感光细胞的存活率，因此可用于制备治疗视网膜脱离感光细胞损伤凋亡的焦亡，具有广泛的市场前景。

Description

变异的Gsdmd-C核酸片段，包含所述核酸片段的载体及应用

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体而言，涉及一种变异的Gsdmd-C核酸片段，包含所述核酸片段的载体及应用。

背景技术

视网膜脱离(Retinal Detachemnt,RD)为孔源性视网膜脱离、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变等多种视网膜脉络膜疾病的一个共同病理特征。视网膜脱离，即视网膜神经上皮层与视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)及脉络膜复合体分离，临床上主要表现为视力下降，视物遮挡，眼前飘浮物、闪光感，当神经上皮的脱离范围扩大至黄斑区时，患者视力迅速下降。由于RPE及脉络膜复合体等是外层视网膜神经纤维层/光感受器细胞的主要氧气、血液、能量物质来源，又光感受器细胞内氧化代谢活跃，以维持正常视觉化学信号-电信号转化形成视觉功能，因此，当视网膜脱离发生后，光感受器细胞的氧气、能量物质供应中断，引起大量感光细胞迅速死亡，是其引起视力损害的关键性病理基础，而焦亡作为一种高度促炎的细胞死亡形式，在光感受器损伤中起到重要作用。

Gasdermin D是细胞焦亡过程的执行蛋白，焦亡作为一种新进发现的细胞死亡方式，表现出剧烈的细胞爆炸式形态学特征，并伴随有强烈的炎症因子释放及炎症反应。不同于细胞凋亡、细胞自噬等细胞死亡形式，其具有独特的细胞死亡形态学特征及通路机制。在很长一段时间内，其终末效应蛋白未被人们所了解和研究。新近研究发现，一种被称为Gasdermin的功能未知的蛋白家族，在炎症小体激活的前提下被炎性Caspase蛋白剪切完成焦亡过程。活化的Caspase-1蛋白会于GSDMD蛋白的276位点进行剪切，形成的分子量约31kda的Gsdmd氨基段(Gsdmd-N)，GSDMD-N转移并锚定至细胞膜上，形成非选择性离子通道，破坏细胞内外渗透压，促使胞内物质向外界释放，进而完成细胞焦亡过程，与此同时，过表达Gsdmd的碳基端(Gsdmd-C)，可以一定程度上抑制细胞焦亡的发生，达到保护细胞功能的作用。

腺相关病毒(AAV)是细小病毒科(Parvovirus)家族的一个成员，它是小的无包膜、二十面体病毒，具有4.7千碱基(kb)到6kb的单链线性DNA基因组。由于该病毒是作为纯化的腺病毒原种的污染物被发现的，AAV指定为依赖病毒属(Dependovirus)。AAV的生命周期包括潜伏期(AAV基因组在感染后位点特异性整合入宿主染色体)，感染期(腺病毒或单纯疱疹病毒感染后，整合的基因组接着得到拯救、复制并包装入感染的病毒)。非致病性、宽宿主范围(包括非分裂细胞)感染性以及潜在的位点特异性染色体整合的特性使得AAV成为用于基因转移的有吸引力的工具。但重组腺相关病毒(rAAV)仍然存在一些不足，如重组病毒不稳定，病毒滴度低，接纳治疗基因的容量仍然有限(一般仅能插入的外源性基因片段最大约2000碱基对(bp)，否则rAAV的稳定性将被破坏)。因此，需要设计合理的重组腺相关病毒(rAAV)载体，以满足实际应用的需要。

中国专利文献CN108379597A公开了一种基因载体及其用于治疗视网膜神感光细胞变性的基因治疗药物，所述基因载体包含显性抑制型(dominant negative)人类Fas-associatedprotein with death domain(FADD-DN)、增强子/启动子、增加基因表达的β-globin内含子、human growth hormone poly(A)tail序列等，还公开了上述基因载体或包含上述基因载体的组合物在制备治疗光感受器细胞损伤凋亡的药物中的应用；其优点表现在：上述基因治疗载体可用于治疗或预防由视网膜脱离等引起的感光细胞病变。

中国专利文献CN 105087648B公开了一种携带MAGE-A3抗原基因的重组腺相关病毒载体及构建方法与应用，该rAAV是在腺相关病毒载体中已经被删除的腺相关病毒结构基因位置处插入MAGE-A3抗原基因得到；该发明的rAAV可将其携带的MAGE-A3抗原基因输送入单核细胞-树突状细胞系中，被用于刺激免疫系统的效应细胞，实验证明，被该发明的rAAV的病毒载体感染的DC所诱导的CTL在体外或患者体内可有效地抑制MAGE-A3抗原阳性的恶性肿瘤细胞的生长或者杀灭肿瘤细胞。

然而，现有技术中关于表达Gsdmd-C蛋白的腺相关病毒载体及其制备方法与在治疗视网膜脱离光感受器细胞损伤死亡方面的应用，目前还未见报道。

发明内容

本发明涉及一种变异的Gsdmd-C核酸片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

根据本发明的再一方面，本发明还涉及变异的Gsdmd-C蛋白，其氨基酸序列如SEQID NO:2所示。

本发明还涉及包含所述核酸片段的载体，以及包含所述载体的药物组合物。

本发明还涉及如上所述的载体在制备用于抑制细胞焦亡的药物中的用途。

本发明的有益效果为：

本发明对人Gsdmd-C基因序列进行了优化，使得其能更好的在宿主体内进行表达(特别是配合腺相关病毒进行表达)。此外，包含该核酸片段的载体在大鼠光感受器细胞内的感染效果优异，且在细胞核内稳定表达，能显著降低视网膜外核层细胞焦亡、增加小鼠感光细胞的存活率，因此可用于制备治疗视网膜脱离感光细胞损伤凋亡的焦亡，具有广泛的市场前景。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明一个实施例中病毒载体AAV_Gsdmd-C-HA的特征图谱及各元件的起止位点示意图；

图2为本发明一个实施例中Brown-Norway大鼠视网膜下注射优化前AAV_Gsdmd-C-HA及优化后AAV_Gsdmd-C-HA三周后视网膜切片对比，免疫荧光染色图；

图3为本发明一个实施例中Brown-Norway大鼠视网膜下注射AAV_Gsdmd-C-HA或AAV-GFP，3周后，在视网膜下注射HA造成视网膜脱离，视网膜脱离1天后视网膜的PI染色图；

图4为Brown-Norway大鼠视网膜下注射AAV_Gsdmd-C-HA或AAV-GFP，3周后，在视网膜下注射粘弹剂造成视网膜脱离，视网膜脱离1天后视网膜的PI染色图，图示为其PI染色后进行焦亡细胞计数和存活率分析结果图。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。

因此，旨在本发明覆盖落入所附权利要求的范围及其等同范围中的此类修改和变化。本发明的其它对象、特征和方面公开于以下详细描述中或从中是显而易见的。本领域普通技术人员应理解本讨论仅是示例性实施方式的描述，而非意在限制本发明更广阔的方面。

该Gsdmd-C核酸片段经过改造后能够在动物细胞中高效表达，优选的动物是哺乳动物，例如大鼠、小鼠、兔、犬、猫、猪、羊、牛、马、人等。并且其表达的Gsdmd-C蛋白具有抑制细胞焦亡的作用。

本发明涉及一种变异的Gsdmd-C蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

在本发明中，所述特异性核酸片段可以包括SEQ ID NO：1所示的核酸片段，或者与SEQ ID NO：1所示核酸片段实质上相同的核酸片段。

“实质上相同的核酸片段”是指相较于SEQ ID NO：1替换1、2、3或更多个核酸碱基或碱基类似物，或者在不造成移码突变的前提下增加或减少3n个碱基或碱基类似物【碱基类似物例如4-乙酰胞嘧啶、8-羟基-N6-甲基腺苷、吖丙啶基胞嘧啶、假异胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、Q核苷等】，或者是部分碱基具有某些修饰。“实质上相同的核酸片段”优选与SEQ ID NO：1所示核酸片段具有至少90％、或95％、或96％、或97％、或98％、或99％的同源性。显然，由于密码子的简并性，其它经过转录翻译后能够得到SEQ ID NO:2所示蛋白的核酸片段属于典型的“实质上相同的核酸片段”。

另外，本发明还保护具有抑制细胞焦亡作用，且与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列具有至少90％、或95％、或96％、或97％、或98％、或99％的同源性的蛋白。另外，在替代方案中，SEQ ID NO：2所示氨基酸序列可以携带翻译后修饰。翻译后修饰的非限制性实例是糖基化、酰化和/或磷酸化。

本发明还涉及包含如上所述核酸片段的载体。

术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。

在优选的实施方式中，是病毒表达载体，根据本发明，病毒表达载体是腺相关病毒(AAV)载体，诸如选自由血清型AAV1、2、3、4、5、6、7、8、9和10，或其衍生的嵌合AAV组成的组中的AAV载体如AAV2-AAV3，AAVrh.10，AAVhu.14，AAV3a/3b，AAVrh32.33，AAVHSC15，AAV-HSC17，AAVhu.37，AAVrh.8，CHt-P6，AAV2.5，AAV6.2，AAV2i8，AAV-HSC15/17，AAVM41，AAV9.45，AAV6(Y445F/Y731F)，AAV2.5T，AAV-HAE1/2，AAV clone 32/83，AAVShH10，AAV2(Y->F)，AAV8(Y733F)，AAV2.15，AAV2.4，AAVM41，AAVr3.45，AAV2或AAV5，这能更好地适于在感兴趣的组织中进行高效率的转导。在转染时，AAV只在宿主中引起轻微的免疫反应(如果有的话)。在本发明的优选实施方式中，基因治疗载体是AAV血清型2或5载体。在进一步优选的实施方式中，基因治疗载体是AAV 2载体。

本发明的AAV载体为单链AAV，可根据标准技术生产重组病毒载体。例如，重组腺相关病毒载体能在人293细胞(其提供反式E1A和E1B特性)中传播，以达到在10⁷～10¹³个病毒颗粒/mL范围内的滴度。在体内应用之前，病毒载体可通过凝胶过滤方法(诸如琼脂糖柱)进行脱盐，并通过随后的过滤进行纯化。纯化降低给药载体的主体中潜在的有害作用。所给药的病毒基本上不含野生型病毒和可复制型病毒。能通过合适的方法，诸如十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，随后进行银染，来证明病毒的纯度。

用于人的AAV的合适剂量在约1×10¹⁰～1×10¹⁴个病毒颗粒的范围内。

在一些具体的实施方式中，所述核酸片段还具有标签片段。

标签片段优选与表达后的蛋白的C端偶联。

在一些具体的实施方式中，所述标签片段为HA标签。

HA标签的氨基酸序列为YPYDVPDYA，

在一些具体的实施方式中，所述载体还含有CMV增强子、CMV启动子以及β-globin内含子中的至少一种

β-globin内含子可提高真核基因的表达，常配合CMV启动子、增强子增强基因的表达。

在一些具体的实施方式中，所述载体包含顺次连接的Ori、L-ITR、CMV增强子和/或CMV启动子、β-globin内含子、如上所述核酸片段、多聚腺苷化信号、R-ITR、fi Ori、报告基因启动子以及报告基因。

在一些实施方式中，所述L-ITR序列如SEQ ID NO:3所示。

在一些实施方式中，所述CMV增强子和CMV启动子的序列如SEQ ID NO:4所示。

在一些实施方式中，所述β-globin内含子的序列如SEQ ID NO:5所示。

在一些实施方式中，所述多聚腺苷化信号为hGHpA，更进一步的，其核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示。

在一些实施方式中，所述R-ITR的序列如SEQ ID NO:8所示。

在一些实施方式中，所述f1 Ori序列如SEQ ID NO:11所示。

在一些实施方式中，所述报告基因选自抗生素基因，进一步优选为Ampicillin序列，更优选为SEQ ID NO:9所示。

本发明还涉及药物组合物，其含有如上所述的载体以及药学上可接受的辅料。

如本文所用，“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或哺乳动物而无过度不良副反应(如毒性)的，即具有合理的效益/风险比的物质。术语“药学上可接受的辅料”指用于治疗剂给药的辅料，包括各种赋形剂和稀释剂，即这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。

合适的药学上可接受的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington’sPharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.,N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的载体的充分说明；在组合物中药学上可接受的辅料可含有液体，如水、BBS(BalancedSaltSolution)磷酸盐缓冲液、ringer溶液、生理盐水、平衡盐溶液、甘油或山梨醇等。另外，这些辅料中还可能存在辅助性的物质，如润滑剂、助流剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质和稳定剂等。

为了便于临床应用，本发明的药物组合物可以包含在注射用给药器(如注射用针)中，所述的注射用给药器中，可以包含一次给药量的所述的药物组合物。所述的注射用给药器可以被包含在药盒中，以方便储存、使用。运输时需要将装有药物悬浊液的微小容器放置于干冰中。平时应保存于-80℃冰箱中。

根据本发明的再一方面，本发明还涉及如上任一项所述的载体在制备用于抑制细胞焦亡的药物中的用途。

在一些实施方式中，所述药物用于治疗感染性疾病、神经系统相关疾病和动脉粥样硬化性疾病。

在一些实施方式中，所述药物用于治疗视网膜脱离后光感受器细胞损伤。

此外，本发明还提供一种治疗细胞焦亡相关疾病，特别是视网膜脱离感光细胞损伤焦亡的方法，将有效量的如上任一所述的载体给予需要治疗的个体。

在一些实施方式中，个体为哺乳动物；更优选为灵长类动物，更有选为人。

在一些实施方式中，给药方法为眼内注射。

在一些实施方式中，所述的眼内注射为视网膜下腔注射或玻璃体腔注射。

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。

实施例1重组腺相关病毒载体的构建和分离纯化

基因序列

SEQ ID NO:1所示的是Gsdmd-C序列，

SEQ ID NO:2所示的是Gsdmd-C氨基酸序列，

SEQ ID NO:3所示的是Left ITR序列，

SEQ ID NO:4所示的是CMV序列，

SEQ ID NO:5所示的是humanβ-globin intron序列，

SEQ ID NO:6所示的是MCS序列，

SEQ ID NO:7所示的是hGHpA序列，

SEQ ID NO:8所示的是Right ITR序列，

SEQ ID NO:9所示的是Ampicillin Resistance序列，

SEQ ID NO:10所示的是全核苷酸序列，

SEQ ID NO:11所示的是f1 ori序列，

SEQ ID NO:12所示的是重组序列。

质粒AAV_Gsdmd-C-HA的构建、特征图谱及各元件的起止位点如图1所示，主要元件包括CMV增强子/启动子(SEQ ID NO:4)及Gsdmd-C-HA序列，CMV增强子可以增强转入基因的表达，目的基因之后紧接着是hGHpA(SEQ ID NO:7)，表达盒两侧是反向末端重复序列(TR)，即病毒载体包括L-ITR(SEQ ID NO:3)，R-ITR(SEQ ID NO:8)，病毒载体还包括Ampicillin(SEQ ID NO:9)和f1 ori(SEQ ID NO:11)。

Gsdmd-C-HA序列如下：

Gsdmd-C-HA蛋白序列如下：

MGTNEEEVIREDFQGLRAEVEAGSSELRSLEMELRQQLLVDIGRILQDQPSMEALEASLEQGLCSGEQVEPLEGPAGSILECLVLDSGELVPELAAPVFYLLGALAGLSETQQQLLATKALEATVLSKELELVKHELVKHVLEQSTPWQELPSRLLGDSWDEEALTWVLLEECGLTLQVEPPQVYWEPTSQGPICALYASLALLSSLGQKSC(SEQ IDNO:2)YPYDVPDYA(HA标签)

病毒载体是通过质粒共转染方法获得的。将含有AAV2外壳蛋白基因和能帮助AAV复制的基因的辅助质粒和AAV_Gsdmd-C-HA质粒与HEK 293T细胞共转染，初步形成重组腺相关病毒载体；经碘克丁醇初步纯化后，经过以5ml-Hitrp Q琼脂糖凝胶作为填料的快速蛋白液相色谱仪通过离子交换层析进一步纯化，使用仪器为Pharmacia AKTA FPLC system(Amersham Biosciences,Piscataway,NJ)；之后用pH8.0，215mM的NaCl淋洗琼脂糖凝胶柱，对峰值的重组腺相关病毒载体进行收集；收集的液体通过浓缩器(100K concentrater,Millipore)后，用含0.014％的吐温20淋洗浓缩器对重组腺相关病毒载体进行浓缩；再用DNase I消化掉病毒颗粒以外DNA，并通过实时荧光定量PCR的方法确定病毒的滴度；最后用硝酸银染色-SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳法确保重组腺相关病毒载体颗粒没被污染且不含内毒素，并分装零下80℃储存。

实施例2重组腺相关病毒载体对视网膜脱离模型小鼠的治疗

1实验材料

1.1实验动物

正常Brown-Norway雄性大鼠购自北京维通利华实验动物有限责任公司，光照周期为12h光照-12h黑暗，自由采食，自由饮水，所有的动物研究严格按照国家科学技术委员会颁发的《实验动物管理条例》进行。

1.2实验试剂及耗材

生理盐水(浙江天瑞药业有限公司)，一次性注射针头(美国Becton Dickinsonand Company公司)，HA抗体(Cell signaling technology)，PI(Sigma Aldrich公司)，二抗山羊抗兔IgG(JacksonImmuno)，山羊血清(Sigma)，聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)(Sigma)，多聚甲醛(Sigma)。

1.3实验仪器

眼科实验手术显微镜(日本Nikon公司)；眼科显微器械(苏州明仁医疗器械有限公司)；微量进样器(美国Hamilton公司)；共聚焦显微镜(德国徕卡公司)。

2大鼠视网膜脱离模型的构建

托吡卡胺眼药水扩瞳大鼠右眼两次，每次间隔10min，腹腔注射麻醉大鼠；向麻醉后的大鼠角膜滴加表面麻醉滴眼液，将大鼠置于显微操作镜下；剪开颞侧结膜，于角巩缘后方3mm处34G针头巩膜穿刺，形成全层巩膜切口，镜下直视见到针尖斜面完全进入玻璃体腔后退出针头；连接于微量注射器的玻璃针针头通过巩膜切口进入玻璃体腔，直视下缓慢进入视网膜下腔，微微推动注射器，观察到神经上皮与色素上皮层轻度脱离后，直视下确认针头位于视网膜下，而非脉络膜下或玻腔内，向网膜下缓慢注射0.05ml透明质酸钠，见灰白色视网膜进一步隆起，形成3-4个视网膜隆起。显微镜下观察视网膜脱离已形成，高度及范围超过全视网膜的80％，向巩膜切口处滴加生物组织胶水封闭，最后典必殊眼膏涂于大鼠术眼角膜表面。恒温加热垫上复苏大鼠至麻醉苏醒。

3处理方法

3.1视网膜下注射

使用34G针头，于视网膜边缘、角膜巩膜交界靠后处进针穿刺，当针头前端进入视网膜下时，进行注射，注射时需注意进针角度和深度，注意避免损伤晶体或其他眼内组织。

3.2组织处理

动物先经由PBS进行全身灌注，后继续用4％多聚甲醛(PFA)灌注，灌注速度为5mL/分钟。眼球及视神经取出后在4％PFA溶液中浸泡约2小时。组织染色前需在0.1M PBS中4℃储存；组织冰冻切片前需在30％蔗糖溶液中浸泡过夜。

4表达Gsdmd-HA蛋白的腺相关病毒感染及检测

造模成功的大鼠视网膜下注射AAV_Gsdmd-C-HA两周后，据前述组织处理方法进行眼球的前处理，后使用显微镊夹住眼球底部向上提起，用剪刀剪断眼球周围的结膜和肌肉组织，保持眼球组织完整，剪去角膜、虹膜和晶状体做成眼杯，在30％蔗糖溶液中浸泡过夜，制作10μm厚组织切片。

免疫荧光染色：选取视网膜，在20％山羊血清溶液中封闭1h，后一抗孵育过夜，抗体HA，PBS清洗三次，每次10min，后二抗孵育1h，PBS清洗三次，每次10min后封片；使用共聚焦显微镜观察视网膜结构变化并拍照。

结果：

大鼠注射AAV_Gsdmd-C-HA两周后，进行视网膜切片免疫荧光染色，可见大量AAV_Gsdmd-C-HA，且定位在细胞膜表达，环绕DAPI，显示优化后的AAV_Gsdmd-C-HA的感染效果优异，明显高于优化前AAV_Gsdmd-C-HA(插入有优化前Gsdmd-C的序列，即野生型人Gsdmd-C序列)(图2)。

5感光细胞焦亡率检测

8周龄大鼠单侧眼视网膜下注射AAV_Gsdmd-C-HA(实验组)、AAV_GFP(对照组)，3周后制作视网膜脱离模型，视网膜脱离3天后，据上述组织处理方法处理眼球及视网膜，进行免疫荧光染色，使用共聚焦显微镜观察视网膜结构变化并拍照，每个眼球选取5个视野计数PI阳性细胞数(比例尺：25μm)，并计算感光细胞存活率。

结果：

分组	PI数目
		空白组	0.00±0.00
模型组	854.0±62.04
		对照组	835.3±51.15
实验组	415.0±10.39

由上表可见，与空白组相比，模型组、对照组以及实验组感光细胞PI阳性数目增加，具有统计学差异(P<0.05)，与模型组相比，对照组PI阳性细胞数目无统计学差异(P>0.05)，与对照组相比，实验组PI阳性细胞显著减少，结果具有统计学差异(P<0.05)。

定量分析证明视网膜脱离后感光细胞在1天达到焦亡高峰，感光细胞层厚度显著减小(模型组、对照组)；与之对比，注射AAV_Gsdmd-C-HA大鼠感光细胞焦亡不显著，显示AAV_Gsdmd-C-HA对感光细胞具有保护作用(图3、图4)。

由上述实验可见，本发明的重组腺相关病毒AAV_Gsdmd-C-HA能显著降低小鼠感光细胞焦亡，有效的治疗视网膜脱离感光细胞损伤。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

序列表

<110> 上海朗昇生物科技有限公司

<120> 变异的Gsdmd-C核酸片段，包含所述核酸片段的载体及应用

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 636

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 1

atgggaacca atgaggaaga agtaatcagg gaagacttcc aaggcctgcg tgcggaggtg 60

gaggcaggct cttcagaact gcggagctta gaaatggagt tgagacaaca gctactagta 120

gacatcggga ggattttaca ggaccagccc agcatggaag ccttagaggc ctcactagag 180

cagggtctgt gcagtggtga gcaggtagag cctctggaag gcccagcagg cagcatcctt 240

gagtgtctgg tgctcgactc tggagaactg gtgccggaac ttgcagcccc cgtcttctac 300

ctgttgggag cactggctgg gttgagtgaa acccagcagc agctactggc tactaaggct 360

ctggaggcaa cggtgctgtc aaaggagcta gagttggtga agcacgtctt ggaacagagc 420

accccatggc aggagcagag atctgtgccc ctgccctcca ggctccttgg ggacagctgg 480

gatgaggagg ctctcacctg ggtcttgcta gaagaatgtg gcctaacgct gcaggtggaa 540

cccccccagg tatactggga accaacatct cagggcccca tatgtgcact ctatgcctcc 600

ctggccctat tgtcaagtct aggccagaaa tcgtgt 636

<210> 2

<211> 212

<212> PRT

<213> artificial sequence

<400> 2

Met Gly Thr Asn Glu Glu Glu Val Ile Arg Glu Asp Phe Gln Gly Leu

1 5 10 15

Arg Ala Glu Val Glu Ala Gly Ser Ser Glu Leu Arg Ser Leu Glu Met

20 25 30

Glu Leu Arg Gln Gln Leu Leu Val Asp Ile Gly Arg Ile Leu Gln Asp

35 40 45

Gln Pro Ser Met Glu Ala Leu Glu Ala Ser Leu Glu Gln Gly Leu Cys

50 55 60

Ser Gly Glu Gln Val Glu Pro Leu Glu Gly Pro Ala Gly Ser Ile Leu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Val Leu Asp Ser Gly Glu Leu Val Pro Glu Leu Ala Ala

85 90 95

Pro Val Phe Tyr Leu Leu Gly Ala Leu Ala Gly Leu Ser Glu Thr Gln

100 105 110

Gln Gln Leu Leu Ala Thr Lys Ala Leu Glu Ala Thr Val Leu Ser Lys

115 120 125

Glu Leu Glu Leu Val Lys His Glu Leu Val Lys His Val Leu Glu Gln

130 135 140

Ser Thr Pro Trp Gln Glu Leu Pro Ser Arg Leu Leu Gly Asp Ser Trp

145 150 155 160

Asp Glu Glu Ala Leu Thr Trp Val Leu Leu Glu Glu Cys Gly Leu Thr

165 170 175

Leu Gln Val Glu Pro Pro Gln Val Tyr Trp Glu Pro Thr Ser Gln Gly

180 185 190

Pro Ile Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Leu Ala Leu Leu Ser Ser Leu Gly

195 200 205

Gln Lys Ser Cys

210

<210> 3

<211> 141

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 3

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc t 141

<210> 4

<211> 663

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 4

acgcgtggaa ttcgctagtt attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc 60

atatatggag ttccgcgtta cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa 120

cgacccccgc ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgt caatagggac 180

tttccattga cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca 240

agtgtatcat atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg 300

gcattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt 360

agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg 420

gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg 480

caccaaaatc aacgggactt tccaaaatgt cgtaacaact ccgccccatt gacgcaaatg 540

ggcggtaggc gtgtacggtg ggaggtctat ataagcagag ctcgtttagt gaaccgtcag 600

atcgcctgga gacgccatcc acgctgtttt gacctccata gaagacaccg ggaccgatcc 660

agc 663

<210> 5

<211> 493

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 5

gattcgaatc ccggccggga acggtgcatt ggaacgcgga ttccccgtgc caagagtgac 60

gtaagtaccg cctatagagt ctataggccc acaaaaaatg ctttcttctt ttaatatact 120

tttttgttta tcttatttct aatactttcc ctaatctctt tctttcaggg caataatgat 180

acaatgtatc atgcctcttt gcaccattct aaagaataac agtgataatt tctgggttaa 240

ggcaatagca atatttctgc atataaatat ttctgcatat aaattgtaac tgatgtaaga 300

ggtttcatat tgctaatagc agctacaatc cagctaccat tctgctttta ttttatggtt 360

gggataaggc tggattattc tgagtccaag ctaggccctt ttgctaatca tgttcatacc 420

tcttatcttc ctcccacagc tcctgggcaa cgtgctggtc tgtgtgctgg cccatcactt 480

tggcaaagaa ttg 493

<210> 6

<211> 76

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 6

atcgattgaa ttccccgggg atcctctaga gtcgacctgc agaagcttgc ctcgagcagc 60

gctgctcgag agatct 76

<210> 7

<211> 479

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 7

acgggtggca tccctgtgac ccctccccag tgcctctcct ggccctggaa gttgccactc 60

cagtgcccac cagccttgtc ctaataaaat taagttgcat cattttgtct gactaggtgt 120

ccttctataa tattatgggg tggagggggg tggtatggag caaggggcaa gttgggaaga 180

caacctgtag ggcctgcggg gtctattggg aaccaagctg gagtgcagtg gcacaatctt 240

ggctcactgc aatctccgcc tcctgggttc aagcgattct cctgcctcag cctcccgagt 300

tgttgggatt ccaggcatgc atgaccaggc tcagctaatt tttgtttttt tggtagagac 360

ggggtttcac catattggcc aggctggtct ccaactccta atctcaggtg atctacccac 420

cttggcctcc caaattgctg ggattacagg cgtgaaccac tgctcccttc cctgtcctt 479

<210> 8

<211> 141

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 8

aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60

ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120

gagcgcgcag ctgcctgcag g 141

<210> 9

<211> 861

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 9

atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct 60

gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca 120

cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc 180

gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc 240

cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg 300

gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta 360

tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc 420

ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt 480

gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg 540

cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct 600

tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc 660

tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct 720

cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac 780

acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc 840

tcactgatta agcattggta a 861

<210> 10

<211> 4654

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 10

atgggaacca atgaggaaga agtaatcagg gaagacttcc aaggcctgcg tgcggaggtg 60

gaggcaggct cttcagaact gcggagctta gaaatggagt tgagacaaca gctactagta 120

gacatcggga ggattttaca ggaccagccc agcatggaag ccttagaggc ctcactagag 180

cagggtctgt gcagtggtga gcaggtagag cctctggaag gcccagcagg cagcatcctt 240

gagtgtctgg tgctcgactc tggagaactg gtgccggaac ttgcagcccc cgtcttctac 300

ctgttgggag cactggctgg gttgagtgaa acccagcagc agctactggc tactaaggct 360

ctggaggcaa cggtgctgtc aaaggagcta gagttggtga agcacgtctt ggaacagagc 420

accccatggc aggagcagag atctgtgccc ctgccctcca ggctccttgg ggacagctgg 480

gatgaggagg ctctcacctg ggtcttgcta gaagaatgtg gcctaacgct gcaggtggaa 540

cccccccagg tatactggga accaacatct cagggcccca tatgtgcact ctatgcctcc 600

ctggccctat tgtcaagtct aggccagaaa tcgtgttacc catacgatgt tccagattac 660

gcttcggtaa caactccgcc ccattgacgc aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt 720

taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag acgccatcca cgctgttttg 780

acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg attcgaatcc cggccgggaa 840

cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg taagtaccgc ctatagagtc 900

tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt ttttgtttat cttatttcta 960

atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata caatgtatca tgcctctttg 1020

caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag gcaatagcaa tatttctgca 1080

tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag gtttcatatt gctaatagca 1140

gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg ggataaggct ggattattct 1200

gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct cttatcttcc tcccacagct 1260

cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt ggcaaagaat tgggattcga 1320

acatcgattg aattccccgg ggatcctcta gagtcgacct gcagaagctt gcctcgagca 1380

gcgctgctcg agagatctac gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg 1440

ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca 1500

ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca 1560

aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga 1620

gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc 1680

tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt 1740

tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat 1800

ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg 1860

ctcccttccc tgtccttctg attttgtagg taaccacgtg cggaccgagc ggccgcagga 1920

acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg 1980

gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggctt tgcccgggcg gcctcagtga gcgagcgagc 2040

gcgcagctgc ctgcaggggc gcctgatgcg gtattttctc cttacgcatc tgtgcggtat 2100

ttcacaccgc atacgtcaaa gcaaccatag tacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg 2160

gcgggtgtgg tggttacgcg cagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct 2220

cctttcgctt tcttcccttc ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta 2280

aatcgggggc tccctttagg gttccgattt agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa 2340

cttgatttgg gtgatggttc acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct 2400

ttgacgttgg agtccacgtt ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc 2460

aaccctatct cgggctattc ttttgattta taagggattt tgccgatttc ggcctattgg 2520

ttaaaaaatg agctgattta acaaaaattt aacgcgaatt ttaacaaaat attaacgttt 2580

acaattttat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg ccgcatagtt aagccagccc 2640

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tacagacaag ctgtgaccgt ctccgggagc tgcatgtgtc agaggttttc accgtcatca 2760

ccgaaacgcg cgagacgaaa gggcctcgtg atacgcctat ttttataggt taatgtcatg 2820

ataataatgg tttcttagac gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct 2880

atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga 2940

taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtatgagta ttcaacattt ccgtgtcgcc 3000

cttattccct tttttgcggc attttgcctt cctgtttttg ctcacccaga aacgctggtg 3060

aaagtaaaag atgctgaaga tcagttgggt gcacgagtgg gttacatcga actggatctc 3120

aacagcggta agatccttga gagttttcgc cccgaagaac gttttccaat gatgagcact 3180

tttaaagttc tgctatgtgg cgcggtatta tcccgtattg acgccgggca agagcaactc 3240

ggtcgccgca tacactattc tcagaatgac ttggttgagt actcaccagt cacagaaaag 3300

catcttacgg atggcatgac agtaagagaa ttatgcagtg ctgccataac catgagtgat 3360

aacactgcgg ccaacttact tctgacaacg atcggaggac cgaaggagct aaccgctttt 3420

ttgcacaaca tgggggatca tgtaactcgc cttgatcgtt gggaaccgga gctgaatgaa 3480

gccataccaa acgacgagcg tgacaccacg atgcctgtag caatggcaac aacgttgcgc 3540

aaactattaa ctggcgaact acttactcta gcttcccggc aacaattaat agactggatg 3600

gaggcggata aagttgcagg accacttctg cgctcggccc ttccggctgg ctggtttatt 3660

gctgataaat ctggagccgg tgagcgtggg tctcgcggta tcattgcagc actggggcca 3720

gatggtaagc cctcccgtat cgtagttatc tacacgacgg ggagtcaggc aactatggat 3780

gaacgaaata gacagatcgc tgagataggt gcctcactga ttaagcattg gtaactgtca 3840

gaccaagttt actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg 3900

atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg 3960

ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt 4020

ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg 4080

ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata 4140

ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca 4200

ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag 4260

tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc 4320

tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga 4380

tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg 4440

tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac 4500

gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg 4560

tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg 4620

ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgt 4654

<210> 11

<211> 306

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 11

cccgctcctt tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa 60

gctctaaatc gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc 120

aaaaaacttg atttgggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt 180

cgccctttga cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca 240

acactcaacc ctatctcggg ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc 300

tattgg 306

<210> 12

<211> 6124

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 12

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tgcggccgca cgcgtggaat tcgctagtta ttaatagtaa 180

tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt tccgcgttac ataacttacg 240

gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc cattgacgtc aataatgacg 300

tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac gtcaatgggt ggagtattta 360

cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata tgccaagtac gccccctatt 420

gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc agtacatgac cttatgggac 480

tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta ttaccatggt gatgcggttt 540

tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac ggggatttcc aagtctccac 600

cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc 660

gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata 720

taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag acgccatcca cgctgttttg 780

acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg attcgaatcc cggccgggaa 840

cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg taagtaccgc ctatagagtc 900

tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt ttttgtttat cttatttcta 960

atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata caatgtatca tgcctctttg 1020

caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag gcaatagcaa tatttctgca 1080

tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag gtttcatatt gctaatagca 1140

gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg ggataaggct ggattattct 1200

gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct cttatcttcc tcccacagct 1260

cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt ggcaaagaat tgggattcga 1320

acatcgattg aattccacca tgatggtcag aaagcctgtt gtgtccacca tctccaaagg 1380

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agctttgtct tatgctgaat tgggaacaac tataaagaaa tctggaggtc attacacata 1680

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ctttgttact gaagaagtag aaaaccctga aaaaaccatt ccccttgcaa tatgtatatc 2160

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tacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg cagcgtgacc 3660

gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc ctttctcgcc 3720

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taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta acaaaaattt 4020

aacgcgaatt ttaacaaaat attaacgttt acaattttat ggtgcactct cagtacaatc 4080

tgctctgatg ccgcatagtt aagccagccc cgacacccgc caacacccgc tgacgcgccc 4140

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acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat 4380

atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag 4440

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gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc 5400

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ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg 5700

ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga 5760

tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc 5820

ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc 5880

acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga 5940

gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt 6000

cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg 6060

aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac 6120

atgt 6124

Claims

1.变异的Gsdmd-C核酸片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.变异的Gsdmd-C蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.包含权利要求1所述核酸片段的载体。

4.根据权利要求3所述载体，其为腺相关病毒载体。

5.根据权利要求4所述的载体，其为AAV2载体。

6.根据权利要求3～5任一项所述的载体，所述核酸片段还具有标签片段。

7.根据权利要求6所述的载体，所述标签片段为HA标签。

8.根据权利要求4、5、7任一项所述的载体，其还含有CMV增强子、CMV启动子以及β-globin内含子中的至少一种。

9.根据权利要求8所述的载体，其包含顺次连接的Ori、L-ITR、CMV增强子和/或CMV启动子、β-globin内含子、权利要求1所述核酸片段、多聚腺苷化信号、R-ITR、f1 Ori、报告基因启动子以及报告基因。

10.药物组合物，其含有权利要求3～9任一项所述的载体以及药学上可接受的辅料。

11.权利要求3～9任一项所述的载体在制备用于抑制细胞焦亡的药物中的用途。

12.根据权利要求11所述的用途，所述药物用于治疗视网膜脱离后光感受器细胞损伤。