CN111793577B - 一种具有减肥降脂功能的植物乳杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有减肥降脂功能的植物乳杆菌及其应用，属于微生物技术领域，所述植物乳杆菌LP‑KFY04为乳酸菌属(lactic acid bacteria，LAB)，保藏编号为CGMCC No.15651；本发明从酸奶中分离出植物乳杆菌KFY04，并将其用于维持45％脂肪饮食的小鼠；然后获得肝脏和血清样本，并检测与TG水平、氧化、炎症和PPAR通路相关的基因表达，以评估LP‑KFY04对肥胖、氧化和炎症的影响；结果说明，LP‑KFY04可用于减轻高脂饮食诱导的小鼠肥胖，且LP‑KFY04能有效减少肥胖引起的肝脏损伤和脂肪积累。

Description

一种具有减肥降脂功能的植物乳杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种具有减肥降脂功能的植物乳杆菌及其应用。
背景技术
益生菌微生物，包括乳酸杆菌、双歧杆菌、乳球菌、肠球菌和其他乳酸菌，主要定植于人体肠道，可改善肠道微生物平衡，发挥有益作用。在食品中，乳酸菌被用于发酵，近年来由于其功能作用而受到广泛关注。此外，在利用乳酸菌进行原料奶发酵时，会产生抗菌物质，如有机酸、过氧化氢和双乙酰，通过防止生长致病菌来防止乳制品变质。此外，许多研究表明，乳酸菌可以改善肠道功能和增强人类的免疫力，同时也表现出抗氧化、降低胆固醇和抗肿瘤的作用。
天然乳制品中含有丰富的营养成分，免疫球蛋白，乳铁蛋白，其他免疫因子，以及多种促生长因子。这些因素影响免疫调节，促进生长发育，调节肠道菌群，影响其他生理功能。传统的酸奶、奶酪和用益生菌发酵制成的乳制品，如乳酸杆菌和双歧杆菌，营养丰富，包括氨基酸和有机酸。
肥胖是一种严重影响人类健康和发展的慢性代谢性疾病，已成为世界性流行病。现代高糖、高脂饮食导致摄入的能量超过身体所能消耗的能量；因此，导致肝脏、周围肾脏和脂肪组织中甘油三酯(T G)过度积累，导致肥胖。实验结果表明，肥胖导致血液中TG和胆固醇水平的增加，并可引发心血管疾病和2型糖尿病。此外，身体不能分解的过度TG积累在肝脏中积累，导致脂肪肝和肝纤维化。为了抑制肥胖，目前市面上可用的减肥药物是脂质吸收抑制剂或利尿剂，但它们的副作用会引起内分泌紊乱。因此，目前正在探索一些非药物治疗肥胖的方法，包括益生菌来缓解肥胖。一些研究结果表明，益生菌补充可以有效地缓解肥胖的发展，可能是通过改变肠道微生物结构。这种微生物的改善可以随后改善养分的吸收，改变肝脏脂质代谢相关通路，从而减少TG的积累；影响炎症因子和氧化应激调节肠道中的代谢物，如短链脂肪酸通过血液输送到肝脏，从而调节脂质代谢；激活某些途径，如过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)途径，从而调节脂肪细胞分裂，减少脂肪组织体积和细胞大小，最终减轻肥胖。
植物乳杆菌是一种革兰氏阳性菌，最适生长温度为30-35℃，兼性厌氧。菌体呈短杆状，不产芽孢，在MRS琼脂平板培养基中呈乳白色不透明，圆形，光滑的菌落。植物乳杆菌为同型发酵乳酸菌，能利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等，在发酵过程中只产生乳酸，是典型的兼性厌氧菌，有很强的发酵碳水化合物的能力，较耐盐。植物乳杆菌与人类的生活密切相关，被广泛用于乳制品、肉类、蔬菜以及果汁中，能通过胃肠道并定植于肠道发挥益生作用。植物乳杆菌已被广泛应用于食品发酵、乳酸发酵和医疗保健。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有减肥降脂功能的植物乳杆菌及其应用，以解决上述现有技术存在的问题。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)LP-KFY04，所述植物乳杆菌LP-KFY04为乳酸菌属(lactic acid bacteria，LAB)，已保藏于中国微生物菌种保藏中心管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年4月28日，保藏编号为CGMCC No.15651。
本发明还提供一种所述的植物乳杆菌LP-KFY04在减肥降脂中的应用。
本发明公开了以下技术效果：
本发明从酸奶中分离出乳酸菌(植物乳杆菌KFY04)，并将其用于维持45％脂肪饮食的小鼠。然后获得肝脏和血清样本，并检测与TG水平、氧化、炎症和PPA R通路相关的基因表达，以评估LP-KFY04对肥胖、氧化和炎症的影响。本发明表明，该菌株耐受酸胁迫、耐受胆盐胁迫和耐受氧化胁迫良好，抗致病菌感染、调节代谢絮乱、调节非酒精性脂肪肝等，LP-KFY04可用于减轻高脂饮食诱导的小鼠肥胖。结果表明，LP-KFY04能有效减少肥胖引起的肝脏损伤和脂肪积累。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为动物实验安排；
图2为实验期间小鼠体重；
图3为小鼠肝脏组织H&E病理观察；
图4为小鼠附睾组织H&E病理观察；
图5为小鼠肝脏组织中PPA R-α、PPA R-γ、CYP7A1、CPT1、LPL、C/EBPαmRNA(A)和蛋白质(B)的表达；
图6为小鼠附睾组织中PPA R-α、PPA R-γ、CYP7A1、CPT1、LPL、C/EBPαmRNA(A)和蛋白(B)的表达。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
为了使益生菌有益于胃肠道，必须将其在胃液暴露下生存，禁食或吃酸性食物时，pH3.0或低至1.5，胆汁盐(0.03至0.30％)，因此，对酸和胆盐抵抗力较低的乳酸菌不能存活，也不会是有效的益生菌。本实施例对两种乳酸菌LDSB(一种商业发酵菌株)和LP-KFY04(实验室分离)进行了检测。结果表明，与LDSB相比，LP-KFY04具有更强的抵抗胃酸和胆盐的能力，从而有可能提供更高程度的益生菌益处。
体重变化是衡量小鼠肥胖的一个重要指标，因为较快的体重增加通常与脂肪组织的积累有关，因为消耗的能量比身体需要的多。肥胖也是非酒精性脂肪肝最常见的原因，因为过量的TG积累。因此，检查肝脏和脂肪组织指数可以帮助从内部评估小鼠的肥胖。虽然维持45％脂肪饮食的小鼠相对于正常组显示出显著的体重增加和组织指数的增加，但LP-KFY04组显示出从高脂饮食中减轻的影响。
脂肪组织主要由脂肪细胞组成，但也含有胶原纤维基质、血管、成纤维细胞和免疫细胞。在哺乳动物中，脂肪组织有两种类型，白色脂肪组织(WAT)和棕色脂肪组织(BAT)。位于皮肤下和内脏周围的WAT是最普遍的，主要由大的球形脂肪细胞组成，充满单腔脂滴。在成人中，BAT主要分布在肩胛区、纵隔和颈部上肩胛区。在肥胖发展过程中，脂质不断积累，前脂肪细胞不断分裂和激活，成熟脂肪细胞体积增加。在肥胖期间，肝脏也会发生变化，主要表现为肝细胞中的液泡和窦房结紊乱。在此，本实施例发现LP-KFY04可以减少成熟脂肪细胞的体积增加，减少肝细胞中液泡的数量，减轻肝脏细胞和脂肪细胞中肥胖相关的影响。
肝脏在合成、储存和脂质代谢中起着重要的作用，TC血清浓度作为脂质代谢的指标。在体内，大量甘油被储存为TG，这是一种重要的能量形式，主要在肝脏中合成，并储存在肝脏和脂肪组织中。肝脏损伤的程度可以在组织学上确定，并且是基于TC和TG水平。此外，在血浆中，LDL-C是从VLDL转化而来的，是内源性胆固醇的主要形式，被转运到肝脏。此外，HDL-C主要由肝细胞合成，是从外周组织中去除胆固醇以保护血管免受LD L损伤的反向胆固醇转运机制的一部分。当脂肪肝存在时，肝脏对脂肪进行氧化分解的能力降低，脂肪合成增加，磷脂合成受损；导致LDL-C增加，HDL-C减少。
另一种评估肝脏损伤的方法是检查肝损伤标记物ALT和AST。肝脏储存ALT，一种重要的代谢酶，催化肝细胞中谷氨酸和丙酮酸的转氨过程。在正常情况下，血清ALT活性较低，ALT处于细胞与循环之间的动态平衡状态。在肝损伤期间，肝细胞损伤导致大量ALT被释放到血液中。此外，AST催化谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用，也能提供对肝脏损伤的洞察。AST有两种同工酶，称为c-AST和m-AST。研究表明，当细胞损伤较轻时，c-AST被释放，而当细胞损伤更严重时，甚至在坏死期间，m-AST被释放到血液中。因此，血清ALT和AST水平也能反映肝细胞和线粒体损伤的严重程度。在此，本实施例发现LP-KFY04可减轻高脂饮食引起的TC、TG、LDL-C、ALT和AST升高，HDL-C降低。
肥胖的存在也促进了自由基的产生，包括肾素-血管紧张素系统的上调，从而导致超氧阴离子的产生增加，随后巨噬细胞摄取LDL增加，脂蛋白氧化增加。此外，肥胖伴随着一种减弱的抗氧化防御机制，这导致过量的活性氧不被去除，以及随后的氧化应激。氧化应激破坏细胞DNA，最终导致蛋白质氧化产物和脂质过氧化产物的积累。在此，本实施例发现LP-KFY04可增加抗氧化剂SOD和CAT，降低脂质过氧化反应产物MDA，从而减轻肥胖引起的氧化应激反应。
最近的科学研究表明，肥胖可能导致身体长期处于慢性、低炎症状态。这种慢性低度炎症和免疫系统非特异性激活可促进肥胖相关代谢性疾病和心脑血管疾病的发生和发展。脂肪组织不仅储存能量，而且还产生和分泌各种激素和细胞因子，影响新陈代谢、神经内分泌和自身免疫功能。在肥胖期间，巨噬细胞浸润增加，这导致随后促炎因子的增加，如TNF-α和IL-6，以及抗炎因子的减少，包括IL-4和IL-10。此外，一些研究表明，肥胖可能导致肠道菌群失衡，降低小鼠的免疫耐受，并增加体内分泌的炎症递质的数量和类型，如IL-1β、IL-6和IFN-γ。本实施例发现LP-KFY04能有效降低肥胖小鼠的促炎因子、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和IL-6水平，增加抗炎因子IL-4和IL-10。
调节能量消耗和各种其他细胞功能的另一个重要因素是PPA Rs。这些配体激活的受体有三种亚型，PPA R-α、PPARβ和PPA R-γ，并在不同的物种中发现。PPA Rα在肝脏、骨骼肌、肾脏、心脏和血管壁中高度表达。它主要调节能量消耗，可刺激脂肪前细胞分化和脂肪酸氧化，并可降低肝脏和循环脂质浓度。PPA Rα还通过增加脂肪组织中的细胞内脂解来防止脂肪细胞的扩大和胰岛素敏感组织中脂肪的积累。PPA Rγ是一种重要的细胞分化转录因子，在哺乳动物脂肪组织、血管平滑肌组织和心肌组织中表达。它还介导脂肪细胞前分化、脂质积累和脂肪细胞特异性基因表达。PPA R-γ激活脂肪细胞中的酶，可以增加TG合成，增加脂肪细胞的体积和数量；因此，它的活性与脂肪含量成正比。另一种成脂因子C/EBPα在分化中起着重要作用，促进了与脂滴形成相关的基因的转录和表达。PPA R-γ和C/EBPα被认为是脂肪细胞分化的关键标志，C/EBPα促进PPA R-γ的上调，并保持分化表型。另外，LPL是一种蛋白水解酶，也是脂质代谢的关键酶，其主要功能是催化CMS和VLDL中TGs分解为游离脂肪酸，促进蛋白质、磷脂和载脂蛋白的转运，从而促进血清HDL水平的升高和TG水平的降低。在肝脏中，每天合成的40％的胆固醇通过CYP7A1通路转化为胆汁酸，这是下游PPAR靶点。此外，CYP7A1已被证明与血浆胆固醇水平和肝脏脂肪积累成反比。另一个下游PPA R靶点CPT1是脂肪酸β氧化的关键酶。此外，增加CPT1的表达已被证明增加脂肪酸分解和降低身体脂肪含量。在此，本实施例发现LP-KFY04促进肝脏和脂肪PPA R-α、CYP7A1、CPT1和LPL的表达，抑制PPA R-γ和C/EBPα，从而减少脂肪积累，减轻肥胖。
实施例1
1.材料和方法
1.1实验应变
从中国四川省牦牛酸奶中分离出植物乳杆菌HFY15，经16S rDNA序列鉴定为乳酸菌属lactic acid bacteria，LAB，该菌株已于2018年10月29日保藏于中国微生物菌种保藏中心管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No.16648。
从牦牛酸奶样品中分离纯化出的植物乳杆菌HFY15，革兰氏染色均呈现阳性；菌落颜色多为白色或乳白色，形状为圆形，边缘整齐，表面湿润光滑，在100倍油镜下，细胞形态有长杆、短杆、球状，且不存在出芽生殖。
本发明的菌株HFY15的16S rDNA碱基序列，如SEQ ID No.1所示；将测序结果于NCBI网站进行序列比对(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)。同Lactobacillusplantarum，MN368282.1,同源性100％。
1.2人工胃液耐受性试验
制备人工胃液(0.2％NaCl和0.35％胃蛋白酶)，用1mol/L HCl调节至3.0，过滤灭菌(0.22μm)。为了激活LP-KFY04细胞，样品在5mlMRS中培养两次，3000rpm离心10min收集细菌细胞，用无菌生理盐水洗涤两次，然后再悬浮在5ml无菌生理盐水中。然后将菌液与无菌人工胃液(1：1v/v)结合，轻轻混合，在37℃下孵育。在0h和3h测定存活率，计算如下：.
Figure BDA0002567094670000091
1.3抗0.3％胆盐
将活化的LP-KFY04细胞(2％v/v)接种到含有0.0％或0.3％猪胆盐(121℃预灭菌15min)的MRS-THIO(0.2％硫乙醇酸钠)培养基中；空白MRS-THIO培养基(未接种)为阴性对照；样品在37℃下在摇床上孵育24小时。然后将空白培养基和接种培养基装入96孔板(200毫升/井)中，在600nm的光密度(OD)下测量吸光度。生长效率计算如下：
Figure BDA0002567094670000092
1.4建立动物模型
六周龄SPF雌雄C57BL/6J小鼠(n＝60)来自重庆医科大学，重庆，中国(S CXK(YU)2017-0001)。自适应喂养7天后，将小鼠随机分为6组：正常组、对照组、L-肉碱组、LP-KFY04低剂量组(LLP-KFY04组)、LP-KFY04高剂量组(HLP-KFY04组)和LDSB组。正常组小鼠饲喂10％脂肪饮食，其余5组饲喂45％脂肪饮食(常州奇航生物科技有限公司，江苏常州；表1)8周。在此期间，每日口服治疗，L-肉碱每日200毫克/千克(体重)，LP-KFY04每日1×108LLP-KFY04组的CFU/kg(体重)×109HLP-KFY04组的CFU/kg(B W)和LDSB在1×109时给药CFU/kg(体重)。每周测量体重，并重新计算灌胃量。在实验的最后一天，小鼠禁食24小时。给药醚后，从下腔静脉取全血，保存在4℃，直到进一步使用。从体内分离肝脏，附睾脂肪和肾周脂肪，称重。部分肝脏和附睾脂肪组织固定在10％福尔马林中，并进行H&E染色。剩余的肝脏和附睾脂肪组织样本保存在-80℃，直到进一步使用(图1)。器官组织指数测定如下：器官组织指数＝器官重量/体重×100。本研究经重庆市功能食品协同创新中心伦理委员会(201906015B；重庆，中国)批准。
表1本研究小鼠的饮食配方
Figure BDA0002567094670000101
预混料：微量矿物质，元素，维生素，合成氨基酸.
1.5小鼠肝脏TC、TG、ALT和AST水平的测定
肝组织(1g)匀浆，组织匀浆在4℃下以4000转/分离心10分钟。收集上清液，并根据制造商的指示用试剂盒测定总TC、TG、ALT和AST水平(南京建城生物工程研究所，南京，中国)。
1.6小鼠血清HDL-C、LDL-C、TC、TG、ALT和AST水平的测定
全血在4000转/分离心10分钟在4℃。收集上血清，并根据制造商的指示(南京建城生物工程研究所)使用试剂盒对HDL-C、LDL-C、TC、TG、ALT和AST水平进行量化。
1.7测定小鼠血清细胞因子中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-6和IL-10水平及血清T-SOD、CAT和MDA水平
根据制造商的指示(南京建城生物工程研究所)，用试剂盒测定血清TNF-α、IFN-γ、IL1β、IL-4、IL-6和IL-10(ABCAM、剑桥、MA、美国)细胞因子水平和T-SOD、CAT和MDA水平。
1.8小鼠肝脏和脂肪组织的组织病理学检查
将小鼠肝脏和附睾脂肪组织固定在10％福尔马林(v/v)中24h，然后脱水、清除、石蜡包埋、切片和染色(H&E)。然后在光学显微镜下对样品进行成像(B X43；奥林巴斯，东京，日本)，并对组织学进行了检查。
1.9小鼠肝脏和脂肪组织的定量PCR分析
用TRIzol(Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)从肝脏和附睾脂肪组织样品中提取RNA，用1μL稀释RNA(1μg/μL)合成cDNA。然后将得到的cDNA与10μL SYBR绿色PCR主混合(Thermo FisherScience，Wal tham，MA，USA)、1μL每个正向/反向引物(表2)和蒸馏水(7μL)结合。在自动热循环器中进行定量实时PCR，在95℃C下进行60s；然后在95℃下进行40次循环，15s、55℃下进行30s，72℃下进行35s；最后一步在95℃下进行30s，55℃下进行35s，以GAPDH为内参基因，计算相对m RNA转录水平-ΔΔCT。
表2引物序列
Figure BDA0002567094670000121
注：PPAR-α：过氧化物酶体增殖物激活受体α；PPAR-γ：过氧化物酶体增殖物激活受体gama；CYP7A1：胆固醇7-α羟化酶；CPT1：肉碱棕榈酰转移酶1；LPL：脂蛋白甘油酶；C/EBPα：CCAAT/增强子结合蛋白α；GAPD H：3-磷酸脱氢酶。
1.10小鼠肝脏和脂肪组织蛋白质表达分析
肝组织和脂肪组织样品(100毫克)在1米L RIPA(Thermo Fisher，Waltham，MA，USA)和10μL PMS F(Thermo Fisher，Wal tham，MA，USA)中匀浆，在4℃下以12000转/分离心5min。蛋白质用BCA蛋白测定试剂盒(Thermo Fisher，Wal tham，MA，USA)定量，然后用样品缓冲液(ThermoFisher，Wal tham，MA，USA)稀释4：1，在95℃下加热5分钟。SDS-PAGE是通过凝胶电泳在100V，产生的带，然后转移到PVD F膜。然后用5％脱脂牛奶阻断PV DF膜1h，然后在4℃与一次抗体过夜孵育(Thermo Fisher，Wal tham，MA，USA)。然后，将样品与二次抗体(Thermo Fisher，Wal tham，MA，USA)孵育1h，然后用ECL西印迹底物(Thermo Fisher，Waltham，MA，USA)对条带进行可视化，并使用Tano发光成像工作站(上海Tanon技术有限公司，上海，中国)进行成像。
1.11统计分析
所有的样本，血清和组织检查一式三份，并计算平均值。数据使用社会科学统计软件包(版本22；SPSS，芝加哥，伊利诺伊州，伊利诺伊州，美国)软件进行分析。单个组的平均值之间的差异是通过使用单因素方差分析和邓肯的多范围检验来评估的。如果得到p值<0.05，差异被认为具有统计学意义。
2.结果
2.1乳酸菌对人工胃液和胆盐的抗性
结果表明，LDSB在人工胃液(pH3)中的存活率为37.69％±4.52％；而LP-KFY04的存活率为87.21％±5.12％，是LDBS的2.35倍(表3)。在0.3％胆盐溶液中，LDSB的生长效率为7.79％±0.23％，LP-KFY04的生长效率为17.71％±0.24％，是LDSB的2.27倍。
表3乳酸菌对人工胃液和胆汁盐的抗性
Figure BDA0002567094670000131
给出的值是平均±标准差(n＝10/组)。LDSB：Delbrueckii乳杆菌。保加利亚；LP-KFY04：植物乳杆菌KFY04。
2.2小鼠的体重
在八周期间，喂食10％脂肪饮食的正常小鼠平均从19克增加到24克，体重增加率为26.3％。其余5组维持45％脂肪饮食。对照组(49.1％)、L-肉碱组(46.2％)和LDSB组(44.2％)增重率最高。体重增加率最低的是LLP-KFY04组(38.5％)和HLP-KFY04组(35.6％)。这些发现表明LP-KFY04可以显著降低小鼠的体重增加(图2)。
2.3小鼠器官指数
在所有检查的器官指数中，对照组的肝脏、附睾脂肪和肾周脂肪指数最高，属于正常组的指数最低(表4)。在其他4组中，与HLP-KFY04组相关的指数均明显低于除正常组外的所有其他组(p<0.05)。下一个最低的组为LLP-KFY04组，与L-肉碱和LDSB组相比，L-肉碱和LDSB组明显降低(p<0.05)。
表4各组小鼠的器官指数
Figure BDA0002567094670000141
给出的值是平均±标准差(n＝10/组)。a-f根据邓肯的多范围检验，同一列中不同字母的平均值有显着性差异(p<0.05)。左旋肉碱：用200mg/kg(b.w)左旋肉碱处理的小鼠；LLP-KFY04：用1.0×108处理的小鼠植物乳杆菌KFY04的CFU/kg(B.w)；HLP-KFY04：1.0×109处理小鼠植物乳杆菌KFY04的CFU/kg(B.w)；LDSB：1.0×109处理的小鼠德氏乳杆菌亚磷的CFU/kg(b.w)。
2.4小鼠肝脏组织TG、TC、ALT和AST水平
分析表明，正常组T G、TC、ALT和AST水平最低，对照组最高(表5)。胃内给药LP-KFY04后，LDSB或L-肉碱四组均与对照组相比有一定程度的下降，HLP-KFY04组下降幅度最大。下一组指标下降最大的是LLP-KFY04，其次是LDSB和L-肉碱组，下降幅度要小得多。
表5小鼠肝脏组织TC、TG、ALT和AST水平
Figure BDA0002567094670000151
2.5小鼠血清HDL-C、LDL-C、TC、TG、ALT和AST水平
对照组中LDL-C、TC、TG、ALT和AST水平最高，但正常组最低；对照组小鼠HDL-C最低，但正常组最高(表6)。LP-KFY04、LDSB和L-肉碱均能提高指标值，但HLP-KFY04的影响最显著，其次是LLP-KFY04、L-肉碱和LDSB。
表6小鼠血清HDL-C、LDL-C、TC、TG、ALT和AST水平
Figure BDA0002567094670000152
2.6小鼠T-SOD、CAT和MDA血清水平
结果表明，正常组T-SOD和CAT值最高，对照组最低；正常组MDA最低，对照组最高(表7)。所有4个干预组均表现出与正常组更相似的血清氧化指数，在HLP-KFY04组中效果最好。
表7小鼠血清T-SOD、CAT和MDA水平
Figure BDA0002567094670000161
2.7小鼠TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-6和IL-10血清水平
对照组促炎因子水平(TNF-α、IFN-γ、IL-1β和IL-6)最高，抗炎因子水平(IL-4和IL-10)最低。在正常组，一个完全相反的趋势被注意到。其余4组，促炎因子显著低于对照组(p<0.05)，抗炎因子显著高于对照组(p，0.05)。在HLP-KFY04组中，改善程度最高，其次是LLP-KFY04、L-肉碱和LDSB组(表8)。
表8小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-6和IL-10的细胞因子水平
Figure BDA0002567094670000162
2.8小鼠肝脏和附睾脂肪组织的组织病理学评价
在正常组获得的肝组织中，肝小叶结构有组织，中心静脉清晰，肝窦清晰(图3)。但对照组肝小叶模糊，肝索排列紊乱，肝窦狭窄，肝细胞内可见大量脂肪液泡。将LP-KFY04组与对照组比较时，肝小叶结构基本正常，肝窦更清晰，肝索排列更整齐，肝细胞脂肪液泡数量明显减少。这种效应在HLP-KFY04组比LLP-KFY04组更为明显。此外，与L-肉碱和LDSB组相比，LP-KFY04组表现出更显著的改善，LP-KFY04组更接近正常组的形态。
在检查附睾脂肪组织(图4)时，正常组观察到有规则的脂肪细胞结构和大小；而对照组的脂肪细胞最大，细胞壁最薄。LP-KFY04、LDSB和L-肉碱均在一定程度上抑制脂肪细胞的增加。最明显的影响是在HLP-KFY04组，显示脂肪细胞大小接近正常组。
1.9肝脏和附睾脂肪组织中RNA和蛋白表达水平
在肝脏和附睾脂肪组织中检测PPAR-α、PPAR-γ、CYP7A1、CPT1、LPL和C/EBPαmRNA和蛋白质的表达(图5，图6)。在正常小鼠样本中，PPAR-α、CYP7A1、CPT1和LPL表达最高，而PPA R-γ和C/EBPα表达最低。在维持较高脂肪饮食的小鼠中，HLP-KFY04组表现出最接近正常组小鼠的表达趋势，其次是LLP-KFY04组。此外，LDSB和L-肉碱也在一定程度上抑制PPAR-γ和C/EBPα的表达，增加PPA R-α、CYP7A1、CPT1和LPL的表达，但LP-KFY04组干预程度最高。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
序列表
<110> 重庆第二师范学院
教育部学校规划建设发展中心
<120> 一具有减肥降脂功能的植物乳杆菌及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1438
<212> DNA
<213> 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)
<400> 1
tgcagtcgaa cgaactctgg tattgattgg tgcttgcatc atgatttaca tttgagtgag 60
tggcgaactg gtgagtaaca cgtgggaaac ctgcccagaa gcgggggata acacctggaa 120
acagatgcta ataccgcata acaacttgga ccgcatggtc cgagtttgaa agatggcttc 180
ggctatcact tttggatggt cccgcggcgt attagctaga tggtggggta acggctcacc 240
atggcaatga tacgtagccg acctgagagg gtaatcggcc acattgggac tgagacacgg 300
cccaaactcc tacgggaggc agcagtaggg aatcttccac aatggacgaa agtctgatgg 360
agcaacgccg cgtgagtgaa gaagggtttc ggctcgtaaa actctgttgt taaagaagaa 420
catatctgag agtaactgtt caggtattga cggtatttaa ccagaaagcc acggctaact 480
acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt gtccggattt attgggcgta 540
aagcgagcgc aggcggtttt ttaagtctga tgtgaaagcc ttcggctcaa ccgaagaagt 600
gcatcggaaa ctgggaaact tgagtgcaga agaggacagt ggaactccat gtgtagcggt 660
gaaatgcgta gatatatgga agaacaccag tggcgaaggc ggctgtctgg tctgtaactg 720
acgctgaggc tcgaaagtat gggtagcaaa caggattaga taccctggta gtccataccg 780
taaacgatga atgctaagtg ttggagggtt tccgcccttc agtgctgcag ctaacgcatt 840
aagcattccg cctggggagt acggccgcaa ggctgaaact caaaggaatt gacgggggcc 900
cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagctacg cgaagaacct taccaggtct 960
tgacatacta tgcaaatcta agagattaga cgttcccttc ggggacatgg atacaggtgg 1020
tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa 1080
cccttattat cagttgccag cattaagttg ggcactctgg tgagactgcc ggtgacaaac 1140
cggaggaagg tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt 1200
gctacaatgg atggtacaac gagttgcgaa ctcgcgagag taagctaatc tcttaaagcc 1260
attctcagtt cggattgtag gctgcaactc gcctacatga agtcggaatc gctagtaatc 1320
gcggatcagc atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc 1380
atgagagttt gtaacaccca aagtcggtgg ggtaaccttt taggaaccag ccgcctaa 1438

Claims (2)

1.一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)LP-KFY04，其特征在于，所述植物乳杆菌LP-KFY04为乳酸菌属(lactic acid bacteria，LAB)，已保藏于中国微生物菌种保藏中心管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年4月28日，保藏编号为CGMCC No .15651。
2.一种权利要求1所述的植物乳杆菌LP-KFY04在制备减肥降脂的药物中的应用。
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