CN111763772A - 蚊媒传染病病原体预混荧光pcr检测试剂及试剂盒 - Google Patents

蚊媒传染病病原体预混荧光pcr检测试剂及试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开的属于病原体检测技术领域，具体为蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂及试剂盒，该试剂由以下材料组成：蚊媒病病原体、STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液、STRtyper Primer Set 10x浓缩液、STR Control DNA溶液、R‑500 Internal Lane Standard、5Dyes 310 Matrix Standard、4Dyes 3100 Matrix Standard、Taqman探针，通过多个原液与病原体混合进行检测，根据原液的特性，得出混合后的试剂的检验性能，提高转换效率。

Description

蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂及试剂盒
技术领域
本发明涉及病原体检测技术领域，具体为蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂及试剂盒。
背景技术
蚊媒传染病，是由病媒蚊子传播的自然疫源性疾病，常见的有流行性乙型脑炎、疟疾、登革热、寨卡、黄热病、基孔肯雅热等危害性较强的传染病。蚊媒传染病在我国每年传染病总发病病例中约占5％-10％，但其病死数则占传染病总病死数的30％-40％。新发蚊媒传染病是新发传染病的重要组成部分，在全球呈现加剧化形势。2014年，中国爆发登革热病毒疫情，截至2014年10月21日零时，2014年广东全省共有20个地级市累计报告登革热病例38753例，其中重症病例20例，死亡病例6例。寨卡病毒病目前主要流行于美洲、非洲、东南亚和太平洋岛国等国家和地区。截至2016年2月底，美洲、大洋洲、亚洲、非洲等36个国家和地区报告本地感染寨卡病毒病例，该病毒在东南亚等地区有逐步蔓延的趋势。我国南方地区温暖潮湿极适合蚊子的繁殖生长，故蚊媒传染病长期处于高发状态，威胁人员健康和造成较大经济损失。
蚊媒传染病严重危害人类健康，药物治疗效果不好且代价巨大，寻找有效的快速诊断方法对于蚊媒传染病的预防控制和研究工作具有重要意义，蚊媒传染病的快速诊断对于疫情的传播扩散控制起关键作用。该类疾病发病初期的临床症状相似，因此，建立快速、简易的实验室检测方法对及时进行临床诊断救治、开展流行病学调查并最终控制其传播流行具有重要意义。
在对蚊媒传染病病原体进行检测的方法大多通过专用的检测机器进行，机器的造价比较昂贵，造成检测产生的费用较高，且现有的部分检测方法通过试剂检测，但检测的效果并不明显，且转换效率并不如人意，容易造成检测数据与实际数据差别较大的情况发生，不利于使用。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施方式的一些方面以及简要介绍一些较佳实施方式。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述和/或现有蚊媒传染病病原体进行检测试剂及试剂盒中存在的问题，提出了本发明。
因此，本发明的目的是提供蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂及试剂盒，能够通过多个原液与病原体混合进行检测，根据原液的特性，得出混合后的试剂的检验性能，提高转换效率。
为解决上述技术问题，根据本发明的一个方面，本发明提供了如下技术方案：
蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂，该试剂由以下材料组成：蚊媒病病原体、STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液、STRtyper Primer Set 10x浓缩液、STR ControlDNA溶液、R-500Internal Lane Standard、5Dyes 310Matrix Standard、4Dyes 3100MatrixStandard、Taqman探针。
作为本发明所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂的一种优选方案，其中：所述蚊媒病病原体为阳性质粒ssDNA，其包含寨卡病毒ZIKV、登革病毒DENV、基孔肯雅病毒CHIKV。
作为本发明所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂的一种优选方案，其中：所述STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液中的缓冲液中含有MgCl2+和dNTP，所述STR PCRReaction MIX 5x浓缩液的体积为1.1mlx1管。
作为本发明所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂的一种优选方案，其中：所述STRtyper Primer Set 10x浓缩液中含有荧光标记和未标记的引物，所述STRtyperPrimer Set 10x浓缩液的体积为0.55mlx1管。
作为本发明所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂的一种优选方案，其中：所述STR Control DNA溶液的体积为0.3mlx1管。
作为本发明所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂的一种优选方案，其中：所述R-500Internal Lane Standard中片段长度分别为80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500。
作为本发明所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂的一种优选方案，其中：所述STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液中5x为STR PCR Reaction浓缩液的使用次数，所述STRtyper Primer Set 10x浓缩液中10x为STRtyper Primer Set浓缩液的使用次数。
作为本发明所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂盒的一种优选方案，其中：包括蚊媒病病原体、STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液、STRtyper Primer Set 10x浓缩液、STR Control DNA溶液、R-500Internal Lane Standard、5Dyes 310MatrixStandard、4Dyes 3100Matrix Standard和Taqman探针。
与现有技术相比：在对蚊媒传染病病原体进行检测的方法大多通过专用的检测机器进行，机器的造价比较昂贵，造成检测产生的费用较高，且现有的部分检测方法通过试剂检测，但检测的效果并不明显，且转换效率并不如人意，容易造成检测数据与实际数据差别较大的情况发生，不利于使用，本申请文件中，通过多个原液与病原体混合进行检测，根据原液的特性，得出混合后的试剂的检验性能，提高转换效率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施方式的技术方案，下面将结合附图和详细实施方式对本发明进行详细说明，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
图1为本发明蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂及试剂盒的试剂混合示意图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施方式的限制。
其次，本发明结合示意图进行详细描述，在详述本发明实施方式时，为便于说明，表示器件结构的剖面图会不依一般比例作局部放大，而且所述示意图只是示例，其在此不应限制本发明保护的范围。此外，在实际制作中应包含长度、宽度及深度的三维空间尺寸。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的实施方式作进一步地详细描述。
本发明提供蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂及试剂盒，请参阅图1，该试剂由以下材料组成：蚊媒病病原体、STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液、STRtyper PrimerSet 10x浓缩液、STR Control DNA溶液、R-500Internal Lane Standard、5Dyes 310MatrixStandard、4Dyes 3100Matrix Standard、Taqman探针。
请再次参阅图1，所述蚊媒病病原体为阳性质粒ssDNA，包含寨卡病毒ZIKV、登革病毒DENV、基孔肯雅病毒CHIKV，所述STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液中的缓冲液中含有MgCl2+和dNTP，所述STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液的体积为1.1mlx1管。
请再次参阅图1，所述STRtyper Primer Set 10x浓缩液中含有荧光标记和未标记的引物，所述STRtyper Primer Set 10x浓缩液的体积为0.55mlx1管。
请再次参阅图1，所述STR Control DNA溶液的体积为0.3mlx1管。
请再次参阅图1，所述R-500Internal Lane Standard中片段长度分别为80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500。
请再次参阅图1，所述STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液中5x为STR PCR Reaction浓缩液的使用次数，所述STRtyper Primer Set 10x浓缩液中10x为STRtyper Primer Set浓缩液的使用次数。
蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂及试剂盒，包括蚊媒病病原体、STR PCRReaction MIX 5x浓缩液、STRtyper Primer Set 10x浓缩液、STR Control DNA溶液、R-500Internal Lane Standard、5Dyes 310Matrix Standard、4Dyes 3100Matrix Standard和Taqman探针。
在具体使用过程中，将蚊媒病病原体加入到STR PCR Reaction MIX浓缩液中混合，通过荧光检测仪进行荧光检测，蚊媒病病原体与STR PCR Reaction MIX浓缩液混合的方法为将STR PCR Reaction MIX浓缩液分为五次进行混合，混合使用ABI 9700型PCR热循环仪，循环的参数为85℃2min+(84℃30s+55℃1min+70℃1min)*5，得出混合STR PCRReaction MIX浓缩液后的蚊媒病病原体的检测数据，按照同样的方法，将蚊媒病病原体与STRtyper Primer Set浓缩液混合，混合的次数为10次，代入到ABI 9700型PCR热循环仪中按照此参数进行循环，得出混合STRtyper Primer Set浓缩液后的蚊媒病病原体的检测数据，然后根据STR Control DNA溶液进行DNA制备，剪下3*3的滤纸，或者取1-2Ч的蚊媒病病原体，在1ml ddH2O中室温浸泡30min，浸泡过程中不时震动，12000g离心5min，去净上清液，然后100℃煮沸10min，离心，取6-20Ч1上清液作PCR。
虽然在上文中已经参考实施方式对本发明进行了描述，然而在不脱离本发明的范围的情况下，可以对其进行各种改进并且可以用等效物替换其中的部件。尤其是，只要不存在结构冲突，本发明所披露的实施方式中的各项特征均可通过任意方式相互结合起来使用，在本说明书中未对这些组合的情况进行穷举性的描述仅仅是出于省略篇幅和节约资源的考虑。因此，本发明并不局限于文中公开的特定实施方式，而是包括落入权利要求的范围内的所有技术方案。

Claims (8)

1.蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂，其特征在于：该试剂由以下材料组成：蚊媒病病原体、STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液、STRtyper Primer Set 10x浓缩液、STRControl DNA溶液、R-500Internal Lane Standard、5Dyes 310Matrix Standard、4Dyes3100Matrix Standard、Taqman探针。
2.根据权利要求1所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂，其特征在于：所述蚊媒病病原体为阳性质粒ssDNA，其包含寨卡病毒ZIKV、登革病毒DENV、基孔肯雅病毒CHIKV。
3.根据权利要求1所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂，其特征在于：所述STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液中的缓冲液中含有MgCl2+和dNTP，所述STR PCR ReactionMIX 5x浓缩液的体积为1.1mlx1管。
4.根据权利要求1所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂，其特征在于：所述STRtyper Primer Set 10x浓缩液中含有荧光标记和未标记的引物，所述STRtyper PrimerSet 10x浓缩液的体积为0.55mlx1管。
5.根据权利要求1所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂，其特征在于：所述STR Control DNA溶液的体积为0.3mlx1管。
6.根据权利要求1所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂，其特征在于：所述R-500Internal Lane Standard中片段长度分别为80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500。
7.根据权利要求1所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂，其特征在于：所述STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液中5x为STR PCR Reaction浓缩液的使用次数，所述STRtyper Primer Set 10x浓缩液中10x为STRtyper Primer Set浓缩液的使用次数。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的蚊媒传染病病原体预混荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：包括蚊媒病病原体、STR PCR Reaction MIX 5x浓缩液、STRtyper Primer Set 10x浓缩液、STR Control DNA溶液、R-500Internal Lane Standard、5Dyes 310MatrixStandard、4Dyes 3100Matrix Standard和Taqman探针。
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