CN111758560A - 一种蝴蝶兰新品种快速育成的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种蝴蝶兰新品种快速育成的方法，依次经过杂交授粉、无菌播种、种子萌发、分化培养，分化阶段分2步走：(1)从中挑出5‑10株无根苗各自单独进行增殖继代培养，再经壮苗生根培养，得到分生苗；(2)剩下的进行生根培养，得到实生苗。随后分生苗和实生苗分别进行炼苗，并出瓶移栽，经小、中、大苗的种植最终形成开花株，经对比筛选出优良株系通过测试与评价形成新品种并从实生苗开花株中筛选出分生苗开花株中没有的优良个体，再经单株克隆繁殖、种植及测试与评价形成新品种。本发明的方法明显地缩短了新品种育成时间，显著地提高了蝴蝶兰育种效率，并通过快速育种方法和传统育种方法相结合，形成互补优势。

Description

一种蝴蝶兰新品种快速育成的方法
技术领域
本发明属于组织培养快速繁殖技术领域，具体涉及一种蝴蝶兰新品种快速育成的方法。
背景技术
蝴蝶兰为兰科(Orchidaceae)蝴蝶兰属(Phalaenopsis)植物，大多数分布于湿热的亚洲地区，而人工育成的蝴蝶兰在温室栽培条件下可以在世界各地种植，因其花形奇特、花色艳丽、色泽丰富、花序整齐、花期长，成为全世界广泛流行的热带兰花，深受国内外消费者喜爱，素有“兰花皇后”的美称。通过全世界兰花育种者和兰花爱好者的努力，至2019年5月22日，已有35971个蝴蝶兰杂交组合在英国皇家园艺学会(Royal HorticulturalSociety，RHS)正式注册登录。我国台湾地区在20世纪80年代就树立了世界蝴蝶兰育种中心的地位，产业上也傲视全球；大陆地区于20世纪80年代开始引种，90年代后期迅速发展，现已成为全球重要的蝴蝶兰生产和消费地之一，但由于育种工作起步晚，流行品种仍以台湾的为主。因此，加快自主品种的培育是大陆蝴蝶兰育种刻不容缓的工作。当前，杂交育种仍然是蝴蝶兰新品种选育最有效的方法，但蝴蝶兰育种周期长是蝴蝶兰育种中最突出的问题。
传统蝴蝶兰新品种的育成包括杂交授粉(4个月)、无菌播种(12月)、瓶苗移栽(1个月)、实生苗小苗(4-5个月)、实生苗中苗(4-5个月)、实生苗大苗(4-5个月)、成熟苗抽梗期(3个月)、成熟苗开花期及优良单株选择(2-3个月)、优良单株克隆繁殖至200-300株(14-18个月)、瓶苗移栽(1个月)、分生苗小苗(4-5个月)、分生苗中苗(4-5个月)、分生苗大苗(4-5个月)、成熟苗抽梗期(3个月)、成熟苗开花期及优良单株选择(2-3个月)、品种测试与评价(12-24个月)，至此新品种育成，则需78-102个月，即6.5-8.5年，此后才开始规模化生产分生苗并推广应用。因此，如何提高育种效率，缩短育种周期，是蝴蝶兰育种最迫切的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明所解决的技术问题在于提高了蝴蝶兰育种效率，缩短了育种周期，即提供了一种蝴蝶兰新品种快速育成的方法，依次经过杂交授粉(4个月)、无菌播种并分化培养(3月)、从分化阶段挑出5-10个单棵无根苗各自单独克隆繁殖至200-300株(14-18个月)、瓶苗移栽(1个月)、分生苗小苗(4-5个月)、分生苗中苗(4-5个月)、分生苗大苗(4-5个月)、成熟苗抽梗期(3个月)、成熟苗开花期(2-3个月)、品种测试与评价(12-24个月)，至此新品种育成，则需51-71个月，即4.25-5.92年(快速育种方法)。并从实生苗开花株中筛选出分生苗开花株中没有的优良个体，再经单株克隆繁殖、种植及测试与评价形成新品种(传统育种方法)。因此，快速育种方法明显地缩短了新品种育成时间，从传统的蝴蝶兰新品种育成需6.5-8.5年，缩短至4.25-5.92年，显著地提高了蝴蝶兰育种效率，并通过快速育种方法和传统育种方法相结合，形成互补优势。
本发明通过以下技术方案来解决上述技术问题：
一种蝴蝶兰新品种快速育成的方法，该方法包括以下步骤：
1)杂交授粉：选择综合性状优良、健壮的蝴蝶兰品种为亲本，在开花期进行授粉杂交，每个杂交组合授粉2-3朵，以保障成功率，授粉环境温度28±2℃，湿度70-80％，授粉后约120d果荚成熟；
2)无菌播种：将成熟的果荚用自来水冲洗干净，置于超净工作台上用75％的酒精浸泡30s，再用0.1％HgCl2溶液灭菌8～10min，无菌水冲洗5～8次后，用无菌滤纸吸干残余水分并切开果荚，将粉末状种子均匀撒播于萌发培养基中培养，培养温度25～28℃，前期暗培养，后期光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，30-50d后萌发形成原球茎；
3)分化培养及部分苗的增殖培养：将原球茎接种到分化培养基上培养，培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，培养50-60d后形成无根苗，无根苗的量保持在200-300株之间；同时在分化阶段挑出5-10株无根苗各自单独放在增殖继代培养基中进行增殖继代培养，当挑出的单棵无根苗每个均单独增殖到200-300株时，再进行壮苗生根培养；
4)壮苗生根培养：将分化阶段形成的无根苗和单株增殖继代到一定数量的苗转接到生根培养基中培养，培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d。经过60d左右的培养，形成健壮的小植株；
5)小苗种植：将瓶苗放置于具自然光散射的温室中，瓶苗一字排开，炼苗15～20d即可出瓶移栽。
6)中苗种植：小苗种植120-150d后，用2.5寸(针对大花型)或2.8寸(针对中小花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用3000～4000倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在12000～15000lx；
7)大苗种植：中苗种植120-150d后，用3.0寸(针对中小花型)或3.5寸(针对大花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用2500～3500倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在18000～20000lx；
8)成熟苗抽梗期：大苗经120-150d种植成熟之后，在抽花梗前的1-2个月，提高磷钾肥，促进花芽分化；湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx；
9)成熟苗开花期：成熟大苗经90d的抽梗期后始花，开花期长达60-90d；湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx；
10)新品种筛选：从分生苗中筛选出观赏性状一致、稳定的优良株系形成新品种，并从实生苗开花株中筛选出分生苗开花株中没有的优良单株，再经克隆繁殖、种植后形成新品种；
11)新品种测试与评价：新品种经特异性、一致性和稳定性测试，并通过审定或认定或申请品种权或国际登录获得认可，此后规模化生产并推广应用。
优选地，所述萌发培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.5mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。
优选地，所述分化培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)0.1mg/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。
优选地，所述增殖继代培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)3.0mg/L+Ad(腺嘌呤)3.0mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。
优选地，所述生根培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。
优选地，首先从试管中取出小苗，清洗根部的培养基，然后放于0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟，取出后用水苔种植于1.7寸的透明塑料杯盆中；保持温室通风，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度8000～10000lx。
相比于现有技术，本发明的蝴蝶兰新品种快速育成的方法的有益效果在于：该方法依次经过杂交授粉、无菌播种、种子萌发、分化培养，分化阶段分2步走：(1)从中挑出5-10株无根苗各自单独进行增殖继代培养，再经壮苗生根培养，得到分生苗；(2)剩下的进行生根培养，得到实生苗。随后分生苗和实生苗分别进行炼苗，并出瓶移栽，经小苗、中苗和大苗的种植最终形成开花株，通过分生苗和实生苗开花株的对比，筛选出优良株系通过测试与评价形成新品种(快速育种方法)，并从实生苗开花株中筛选出分生苗开花株中没有的优良个体，再经单株克隆繁殖、种植及测试与评价形成新品种(传统育种方法)。本发明利用蝴蝶兰杂交F1代优良单株的选择一般在5-10株的原则，提前至无菌播种时的分化培养阶段挑出5-10株无根苗进行单株克隆繁殖并形成新品种，明显地缩短了新品种育成时间，从传统的蝴蝶兰新品种育成需6.5-8.5年，缩短至4.25-5.92年，显著地提高了蝴蝶兰育种效率，并通过快速育种方法和传统育种方法相结合，形成互补优势。
具体实施方式
有鉴于此，本发明具体实施方式中提供的一种蝴蝶兰新品种快速育成的方法，具体包括以下步骤：
1)杂交授粉：选择综合性状优良、健壮的蝴蝶兰品种为亲本，在开花期进行授粉杂交，每个杂交组合授粉2-3朵，以保障成功率，授粉环境温度28±2℃，湿度70-80％，授粉后约120d果荚成熟；
2)无菌播种：将成熟的果荚用自来水冲洗干净，置于超净工作台上用75％的酒精浸泡30s，再用0.1％HgCl2溶液灭菌8～10min，无菌水冲洗5～8次后，用无菌滤纸吸干残余水分并切开果荚，将粉末状种子均匀撒播于萌发培养基中培养，培养温度25～28℃，前期暗培养，后期光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，30-50d后萌发形成原球茎；
3)分化培养及部分苗的增殖培养：将原球茎接种到分化培养基上培养，培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，培养50-60d后形成无根苗，无根苗的量保持在200-300株之间；同时在分化阶段挑出5-10株无根苗各自单独放在增殖继代培养基中进行增殖继代培养，当挑出的单棵无根苗每个均单独增殖到200-300株时，再进行壮苗生根培养；
4)壮苗生根培养：将分化阶段形成的无根苗和单株增殖继代到一定数量的苗转接到生根培养基中培养，培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d。经过60d左右的培养，形成健壮的小植株；
5)小苗种植：将瓶苗放置于具自然光散射的温室中，瓶苗一字排开，炼苗15～20d即可出瓶移栽。
6)中苗种植：小苗种植120-150d后，用2.5寸(针对大花型)或2.8寸(针对中小花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用3000～4000倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在12000～15000lx；
7)大苗种植：中苗种植120-150d后，用3.0寸(针对中小花型)或3.5寸(针对大花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用2500～3500倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在18000～20000lx；
8)成熟苗抽梗期：大苗经120-150d种植成熟之后，在抽花梗前的1-2个月，提高磷钾肥，促进花芽分化；湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx；
9)成熟苗开花期：成熟大苗经90d的抽梗期后始花，开花期长达60-90d；湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx；
10)新品种筛选：从分生苗中筛选出观赏性状一致、稳定的优良株系形成新品种，并从实生苗开花株中筛选出分生苗开花株中没有的优良单株，再经克隆繁殖、种植后形成新品种；
11)新品种测试与评价：新品种经特异性、一致性和稳定性测试，并通过审定或认定或申请品种权或国际登录获得认可，此后规模化生产并推广应用。
其中，所述萌发培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.5mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。
其中，所述分化培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)0.1mg/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。
其中，所述增殖继代培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)3.0mg/L+Ad(腺嘌呤)3.0mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。
其中，所述生根培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。
其中，首先从试管中取出小苗，清洗根部的培养基，然后放于0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟，取出后用水苔种植于1.7寸的透明塑料杯盆中；保持温室通风，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度8000～10000lx。
为使本发明更加容易理解，下面将进一步阐述本发明的具体实施例。
(1)杂交授粉：母本为TTHN，父本为HHS
在2-4月进行授粉杂交，授粉2-3朵，以保障成功率。温度控制在28±2℃，湿度控制在70-80％，授粉后约120d果荚成熟。
(2)无菌播种：将成熟的果荚用自来水冲洗干净，置于超净工作台上用75％的酒精浸泡30s，再用0.1％HgCl2溶液灭菌8～10min，无菌水冲洗5～8次后，用无菌滤纸吸干残余水分并切开果荚，将粉末状种子均匀撒播于萌发培养基中，萌发培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.5mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。培养温度25～28℃，前期暗培养，后期光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，30-50d后萌发形成原球茎。
(3)分化培养及部分苗的增殖培养：将原球茎接种到分化培养基上，分化培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)0.1mg/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，培养50-60d后形成无根苗，无根苗的量保持在200-300株之间。同时在分化阶段挑出5-10株无根苗各自单独进行增殖继代培养，增殖继代培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)3.0mg/L+Ad(腺嘌呤)3.0mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，当挑出的单棵无根苗每个均单独增殖到200-300株时，再进行壮苗生根培养。
(4)壮苗生根培养：将分化阶段形成的无根苗和单株增殖继代到一定数量的苗转接到生根培养基中，生根培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d。经过60d左右的培养，形成健壮的小植株。
(5)小苗种植：将瓶苗放置于具自然光散射的温室中，瓶苗一字排开，炼苗15～20d即可出瓶移栽。首先从试管中取出小苗，清洗根部的培养基，然后放于0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟，取出后用水苔种植于1.7寸的透明塑料杯盆中。保持温室通风，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度8000～10000lx。
(6)中苗种植：小苗种植120d后，用2.5寸(针对大花型)或2.8寸(针对中小花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用3000～4000倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在12000～15000lx。
(7)大苗种植：中苗种植120d后，用3.0寸(针对中小花型)或3.5寸(针对大花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用2500～3500倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在18000～20000lx。
(8)成熟苗抽梗期：大苗经120d种植成熟之后，在抽花梗前的1-2个月，提高磷钾肥，促进花芽分化。湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx。
(9)成熟苗开花期：成熟大苗经90d的抽梗期后始花，开花期长达60d。湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx。
(10)新品种筛选：从分生苗中筛选出观赏性状一致、稳定的优良株系形成新品种，并从实生苗开花株中筛选出分生苗开花株中没有的优良单株，再经克隆繁殖、种植后形成新品种。
(11)新品种测试与评价：新品种经特异性、一致性和稳定性测试，并通过审定或认定或申请品种权或国际登录获得认可，此后规模化生产并推广应用。
实施例2：
(1)杂交授粉：母本为P316，父本为P25
在2-4月进行授粉杂交，授粉2-3朵，以保障成功率。温度控制在28±2℃，湿度控制在70-80％，授粉后约120d果荚成熟。
(2)无菌播种：将成熟的果荚用自来水冲洗干净，置于超净工作台上用75％的酒精浸泡30s，再用0.1％HgCl2溶液灭菌8～10min，无菌水冲洗5～8次后，用无菌滤纸吸干残余水分并切开果荚，将粉末状种子均匀撒播于萌发培养基中，萌发培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.5mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。培养温度25～28℃，前期暗培养，后期光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，30-50d后萌发形成原球茎。
(3)分化培养及部分苗的增殖培养：将原球茎接种到分化培养基上，分化培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)0.1mg/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，培养50-60d后形成无根苗，无根苗的量保持在200-300株之间。同时在分化阶段挑出5-10株无根苗各自单独进行增殖继代培养，增殖继代培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)3.0mg/L+Ad(腺嘌呤)3.0mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，当挑出的单棵无根苗每个均单独增殖到200-300株时，再进行壮苗生根培养。
(4)壮苗生根培养：将分化阶段形成的无根苗和单株增殖继代到一定数量的苗转接到生根培养基中，生根培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d。经过60d左右的培养，形成健壮的小植株。
(5)小苗种植：将瓶苗放置于具自然光散射的温室中，瓶苗一字排开，炼苗15～20d即可出瓶移栽。首先从试管中取出小苗，清洗根部的培养基，然后放于0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟，取出后用水苔种植于1.7寸的透明塑料杯盆中。保持温室通风，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度8000～10000lx。
(6)中苗种植：小苗种植135d后，用2.5寸(针对大花型)或2.8寸(针对中小花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用3000～4000倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在12000～15000lx。
(7)大苗种植：中苗种植135d后，用3.0寸(针对中小花型)或3.5寸(针对大花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用2500～3500倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在18000～20000lx。
(8)成熟苗抽梗期：大苗经135d种植成熟之后，在抽花梗前的1-2个月，提高磷钾肥，促进花芽分化。湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx。
(9)成熟苗开花期：成熟大苗经90d的抽梗期后始花，开花期长达75d。湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx。
(10)新品种筛选：从分生苗中筛选出观赏性状一致、稳定的优良株系形成新品种，并从实生苗开花株中筛选出分生苗开花株中没有的优良单株，再经克隆繁殖、种植后形成新品种。
(11)新品种测试与评价：新品种经特异性、一致性和稳定性测试，并通过审定或认定或申请品种权或国际登录获得认可，此后规模化生产并推广应用。
实施例3：
(1)杂交授粉：母本为P25，父本为HHS
在2-4月进行授粉杂交，授粉2-3朵，以保障成功率。温度控制在28±2℃，湿度控制在70-80％，授粉后约120d果荚成熟。
(2)无菌播种：将成熟的果荚用自来水冲洗干净，置于超净工作台上用75％的酒精浸泡30s，再用0.1％HgCl2溶液灭菌8～10min，无菌水冲洗5～8次后，用无菌滤纸吸干残余水分并切开果荚，将粉末状种子均匀撒播于萌发培养基中，萌发培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.5mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。培养温度25～28℃，前期暗培养，后期光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，30-50d后萌发形成原球茎。
(3)分化培养及部分苗的增殖培养：将原球茎接种到分化培养基上，分化培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)0.1mg/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，培养50-60d后形成无根苗，无根苗的量保持在200-300株之间。同时在分化阶段挑出5-10株无根苗各自单独进行增殖继代培养，增殖继代培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)3.0mg/L+Ad(腺嘌呤)3.0mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，当挑出的单棵无根苗每个均单独增殖到200-300株时，再进行壮苗生根培养。
(4)壮苗生根培养：将分化阶段形成的无根苗和单株增殖继代到一定数量的苗转接到生根培养基中，生根培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d。经过60d左右的培养，形成健壮的小植株。
(5)小苗种植：将瓶苗放置于具自然光散射的温室中，瓶苗一字排开，炼苗15～20d即可出瓶移栽。首先从试管中取出小苗，清洗根部的培养基，然后放于0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟，取出后用水苔种植于1.7寸的透明塑料杯盆中。保持温室通风，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度8000～10000lx。
(6)中苗种植：小苗种植150d后，用2.5寸(针对大花型)或2.8寸(针对中小花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用3000～4000倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在12000～15000lx。
(7)大苗种植：中苗种植150d后，用3.0寸(针对中小花型)或3.5寸(针对大花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用2500～3500倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在18000～20000lx。
(8)成熟苗抽梗期：大苗经150d种植成熟之后，在抽花梗前的1-2个月，提高磷钾肥，促进花芽分化。湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx。
(9)成熟苗开花期：成熟大苗经90d的抽梗期后始花，开花期长达90d。湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx。
(10)新品种筛选：从分生苗中筛选出观赏性状一致、稳定的优良株系形成新品种，并从实生苗开花株中筛选出分生苗开花株中没有的优良单株，再经克隆繁殖、种植后形成新品种。
(11)新品种测试与评价：新品种经特异性、一致性和稳定性测试，并通过审定或认定或申请品种权或国际登录获得认可，此后规模化生产并推广应用。
结果分析：
通过上述实施例的实验结果分析可知：本发明利用蝴蝶兰杂交F1代优良单株的选择一般在5-10株的原则，提前至无菌播种时的分化培养阶段挑出5-10株无根苗进行单株克隆繁殖并形成新品种，明显地缩短了新品种育成时间，从传统的蝴蝶兰新品种育成需6.5-8.5年，缩短至4.25-5.92年，显著地提高了蝴蝶兰育种效率，并通过快速育种方法和传统育种方法相结合，形成互补优势。分析结果如下表1所示：
表1 蝴蝶兰传统育种方法与快速育种方法育种时间对比表
Figure BDA0002599723260000121
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (6)

1.一种蝴蝶兰新品种快速育成的方法，该方法包括以下步骤：
1)杂交授粉：选择综合性状优良、健壮的蝴蝶兰品种为亲本，在开花期进行授粉杂交，每个杂交组合授粉2-3朵，以保障成功率，授粉环境温度28±2℃，湿度70-80％，授粉后约120d果荚成熟；
2)无菌播种：将成熟的果荚用自来水冲洗干净，置于超净工作台上用75％的酒精浸泡30s，再用0.1％HgCl2溶液灭菌8～10min，无菌水冲洗5～8次后，用无菌滤纸吸干残余水分并切开果荚，将粉末状种子均匀撒播于萌发培养基中培养，培养温度25～28℃，前期暗培养，后期光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，30-50d后萌发形成原球茎；
3)分化培养及部分苗的增殖培养：将原球茎接种到分化培养基上培养，培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，培养50-60d后形成无根苗，无根苗的量保持在200-300株之间；同时在分化阶段挑出5-10株无根苗各自单独放在增殖继代培养基中进行增殖继代培养，当挑出的单棵无根苗每个均单独增殖到200-300株时，再进行壮苗生根培养；
4)壮苗生根培养：将分化阶段形成的无根苗和单株增殖继代到一定数量的苗转接到生根培养基中培养，培养温度25～28℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d。经过60d左右的培养，形成健壮的小植株；
5)小苗种植：将瓶苗放置于具自然光散射的温室中，瓶苗一字排开，炼苗15～20d即可出瓶移栽。
6)中苗种植：小苗种植120-150d后，用2.5寸(针对大花型)或2.8寸(针对中小花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用3000～4000倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在12000～15000lx；
7)大苗种植：中苗种植120-150d后，用3.0寸(针对中小花型)或3.5寸(针对大花型)透明塑料杯换盆种植，每隔7-10d用2500～3500倍的通用肥(N-P-K＝20-20-20)进行叶面喷施及浇灌，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在18000～20000lx；
8)成熟苗抽梗期：大苗经120-150d种植成熟之后，在抽花梗前的1-2个月，提高磷钾肥，促进花芽分化；湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx；
9)成熟苗开花期：成熟大苗经90d的抽梗期后始花，开花期长达60-90d；湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度保持在20000～25000lx；
10)新品种筛选：从分生苗中筛选出观赏性状一致、稳定的优良株系形成新品种，并从实生苗开花株中筛选出分生苗开花株中没有的优良单株，再经克隆繁殖、种植后形成新品种；
11)新品种测试与评价：新品种经特异性、一致性和稳定性测试，并通过审定或认定或申请品种权或国际登录获得认可，此后规模化生产并推广应用。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述萌发培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.5mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分化培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)0.1mg/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述增殖继代培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)3.0mg/L+Ad(腺嘌呤)3.0mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述生根培养基为Hyponex(花宝1号)3.0g/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L+10.0％椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.5-5.8。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤5)，首先从试管中取出小苗，清洗根部的培养基，然后放于0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟，取出后用水苔种植于1.7寸的透明塑料杯盆中；保持温室通风，湿度保持在70～80％，温度保持在25～28℃，光照强度8000～10000lx。
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