CN111726994A - 低过敏原性婴儿配方食品及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及婴儿配方营养制剂领域，尤其涉及用于为处于发展牛乳过敏(CMA)风险中的婴儿提供基于牛乳蛋白的低过敏原性营养组合物的方法。该方法包括以下步骤：(i)提供乳蛋白的部分水解物，该部分水解物是通过对在水性介质中包含一种或多种牛乳蛋白的起始组合物进行酶处理而获得的，(ii)使该部分水解物从一种或多种能够结合RAGE和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分中澄清；(iii)任选地浓缩该澄清的部分水解物；并且(iv)将该(浓缩的)澄清的部分水解物配制成用于处于发展CMA风险中的婴儿的营养组合物。

Description

低过敏原性婴儿配方食品及其制备方法
本发明涉及婴儿配方营养制剂领域。更具体地说，本发明涉及用于为处于发展牛乳过敏(CMA)风险中的婴儿提供基于牛乳蛋白的低过敏原性营养组合物的方法。
许多婴儿配方食品都基于来自牛乳的蛋白。然而，已知牛乳蛋白会在一小部分人群中引起过敏表现；估计范围为0.1％至8％。
估计的牛乳过敏(CMA)患病率在0.25％和4.9％之间变化，儿童患病率高于成人。CMA是由对一种或多种乳蛋白的免疫反应引起的。这种免疫学基础将CMA与对牛乳蛋白的其他不良反应(诸如乳糖不耐症)区分开来。CMA可能是免疫球蛋白E(IgE)或非IgE介导的，可能是特应性体质的表现并且可伴有其他食物过敏。对其他食物的反应(取决于区域性膳食摄入)可与CMA组合发生。非IgE介导的病症通常涉及T细胞(或嗜酸性粒细胞)，主要表现为胃肠道症状，不太可能发展多种食物过敏。IgE和非IgE介导的机制可在特应性皮炎和嗜酸性胃肠道病症(EGID)的发病机理中起作用。常见的过敏原反应包括腹泻、呕吐、肠道病症、呼吸系统问题、皮炎、应激性、烦躁和食欲不振。β-乳球蛋白(人乳中不存在)是乳汁敏感性的最常见原因。
可以通过蛋白水解降低基于牛乳蛋白的配方食品的过敏原潜力。实际上，对于诊断为对牛乳蛋白过敏或被鉴定为过敏风险组的婴儿，水解蛋白在配方食品中至关重要。在水解过程中，蛋白上引起过敏的区域(表位)被破坏或减少到最低限度。动物研究显示，部分水解物可以诱导对完整蛋白的口服耐受性。口服耐受性是免疫系统对口服施用的过敏原主动无反应。如果口服耐受性失效，则会发生食物过敏，这意味着口服耐受性是出生最初几个月的关键过程。
有两个类别的用于婴儿用营养物中的乳蛋白水解物。在广泛的水解物中，几乎所有表位都被破坏，使得它们可用于已知患有CMA的婴儿。相反，部分蛋白水解物仍含有最少量的表位。部分水解物因过敏预防作用和舒适性通常被认为对于非过敏性婴儿，例如易于发展CMA的婴儿而言是理想的。
为了理想地符合人乳的组成，婴儿配方食品中的牛乳蛋白应同时含有适当比率的乳清蛋白和酪蛋白。虽然许多基于完整乳蛋白的产品都符合所希望的乳清蛋白与酪蛋白的比率，但大多数可商购的部分水解配方食品均基于100％的乳清蛋白。
乳清蛋白部分水解物的制备方法是本领域众所周知的，并且通常涉及多步水解和水解后的物理分离以消除酶和/或残留蛋白。大多数方法还涉及在水解期间控制pH值恒定。
Boyle等人(BMJ 2016；352:i974)的出版物对水解配方食品在降低过敏或自身免疫性疾病的风险方面是否有效表示怀疑。根据对37项水解配方食品干预试验(包括超过19,000多名参与者)的系统评价和元分析，得出的结论是，没有总体一致的证据表明部分或广泛水解的配方食品可在处于过敏或自身免疫性后果的高危预存风险的婴儿中降低这些后果的风险。值得注意的是，作者得出的结论是，没有证据支持美国食品和药物管理局(USFood and Drug Administration)批准的健康声明，即部分水解的配方食品可以降低湿疹的风险，也没有证据支持Cochrane综述的结论，即水解配方食品可对牛乳产生过敏。
为了更好地了解当前市售的乳蛋白部分水解物的功能，诸位发明人着手解释引起免疫原性和/或过敏原性的潜在组分的存在。
令人惊讶地观察到，几种常规的部分水解物均含有可与RAGE结合的蛋白质聚集物，RAGE是在DC、巨噬细胞、T淋巴细胞和B细胞以及肥大细胞和嗜碱性粒细胞上高度表达的AGE(晚期糖基化终产物)的受体。正如Teodorowicz等人(2016)和Smith等人(2017)所讨论的，已知由膳食AGE进行的RAGE激活参与介导(加工)食品蛋白的过敏原性和免疫原性作用。
另外，使用体外嗜碱性粒细胞测定法，发现部分乳水解物会诱导脱粒，脱粒是导致过敏介质的胞吐作用的过程。值得注意的是，从部分水解物中去除高分子量(糖基化)聚集物显著降低了RAGE结合和嗜碱性粒细胞的脱粒。
因此，诸位发明人提供了改良的乳蛋白部分水解物，其用作处于发展CMA的风险中的婴儿的营养成分。除非另有说明，否则如本文所用的术语“易感”和“处于风险中”意指对某种病状或疾病几乎没有抵抗力，包括遗传易感的、具有该病状或疾病的家族史和/或具有该病状或疾病的症状。例如，具有至少一个患过敏症的近亲家庭成员的婴儿处于发展CMA的风险中。这种过敏原性降低的婴儿配方食品还被认为具有预防益处，因为它可以延迟或预防否则可能导致过敏的临床症状的致敏。
在一个实施例中，本发明提供了一种用于为处于发展牛乳过敏(CMA)风险中的婴儿提供低过敏原性营养组合物的方法，该方法包括以下步骤：
(i)提供乳蛋白的部分水解物，该部分水解物是通过对在水性介质中包含一种或多种牛乳蛋白的起始组合物进行酶处理而获得的，
(ii)使该部分水解物从一种或多种能够结合RAGE和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分中澄清；
(iii)任选地浓缩该澄清的部分水解物；并且
(iv)将该(浓缩的)澄清的部分水解物配制成用于处于发展CMA风险中的婴儿的营养组合物。
在一个特定实施例中，本发明提供了一种用于为处于发展牛乳过敏(CMA)风险中的婴儿提供低过敏原性营养组合物的方法，该方法包括以下步骤：
(i)提供乳蛋白的部分水解物，该部分水解物是通过对在水性介质中包含一种或多种牛乳蛋白的起始组合物进行酶处理而获得的，
(ii)使该部分水解物从一种或多种能够结合RAGE和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分中澄清；
(iii)任选地浓缩该澄清的部分水解物；并且
(iv)将该(浓缩的)澄清的部分水解物配制成用于处于发展CMA风险中的婴儿的营养组合物；
其中该澄清步骤(ii)包括使用分子截留值在10-100kDa范围内的膜过滤该部分水解物，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。
在另一个特定实施例中，本发明提供了一种用于为处于发展牛乳过敏(CMA)风险中的婴儿提供低过敏原性营养组合物的方法，该方法包括以下步骤：
(i)提供乳蛋白的部分水解物，该部分水解物是通过对在水性介质中包含一种或多种牛乳蛋白的起始组合物进行酶处理而获得的，
(ii)使该部分水解物从一种或多种能够结合RAGE和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分中澄清；
(iii)任选地浓缩该澄清的部分水解物；并且
(iv)将该(浓缩的)澄清的部分水解物配制成用于处于发展CMA风险中的婴儿的营养组合物；
其中该澄清步骤(ii)包括对该部分水解物进行尺寸排阻色谱法，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。
在一个优选的实施例中，该澄清步骤(ii)包括使用分子截留值在10-100kDa范围内的膜过滤该部分水解物，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。在该实施例中，进一步优选的是，膜的分子量截留值在10至50kDa的范围内，更优选在10至20kDa的范围内。
在一个实施例中，该部分水解物得自一种或多种选自由以下各项组成的组的牛乳蛋白：乳清蛋白、酸性乳清蛋白、甜乳清蛋白、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物、脱盐乳清粉和酪蛋白酸盐。例如，该部分蛋白水解物包含或是部分乳清蛋白水解物，该部分蛋白水解物包含或是部分β-乳球蛋白水解物和/或部分α-乳白蛋白水解物，或该部分蛋白水解物包含或是部分酪蛋白水解物。
乳清蛋白源可以是酸性乳清、甜乳清、乳清蛋白分离物或其混合物。在一个实施例中，蛋白源基于乳清蛋白分离物或改性的甜乳清蛋白。甜乳清是干酪制作中容易获得的副产物，经常用于制造基于牛乳的婴儿配方食品。然而，甜乳清包括酪蛋白-糖-巨肽(CGMP)，其是不合需要地富含苏氨酸而缺乏色氨酸的组分。从甜乳清中去除CGMP会产生苏氨酸含量接近于人乳的蛋白级分。在EP 880902中描述了从甜乳清中去除CGMP的方法。如果使用改良的甜乳清或乳清蛋白分离物作为蛋白源，可以补充按蛋白质重量计为0.1％至3％的量的游离组氨酸。
在一个特定方面中，部分水解物获自乳清蛋白浓缩物。
如本文所用，表述“部分水解物”是指要与本领域已知的广泛水解的蛋白水解物区别开，作为患有CMA的婴儿的营养成分的水解物。在一个实施例中，部分水解物的水解度(DH)在约5％至20％的范围内，其中DH是通过本领域已知的方法例如通过甲醛滴定或AN/TN测定的。在一个优选的实施例中，本发明的方法使用DH为6％至18％，更优选为8％-15％的部分水解物。在一个特定方面中，部分水解物获自WPC并且DH在5％-14％，优选7％-11％的范围内。
牛乳蛋白可以以本领域已知的任何合适方式水解。通常，酶处理包括在2.5-24小时的时间段内，在pH 6-8和45℃-60℃范围内的温度下，将包含一种或多种乳蛋白的起始组合物暴露于一种或多种内切蛋白酶和外切蛋白酶。
例如，然后用至少一种内切蛋白酶和至少一种外切蛋白酶的组合处理原材料本身或呈合适的形式诸如溶液或悬浮液的原材料，其中以0.1％-5％的量添加所述酶混合物。在一个实施例中，原材料是在水性介质中包含一种或多种乳蛋白的组合物，其蛋白含量在10重量％至20重量％的范围内。内切蛋白酶和外切蛋白酶可以依次使用-例如在两个或更多个单独的水解步骤中-或同时使用，例如在单个水解步骤中作为合适的混合物使用，任选地与使用任何其余酶的一个或多个其他水解步骤组合使用。优选地，水解包括使用所有要使用的酶的组合的单个水解步骤。
在一个实施例中，使用合适的丝氨酸蛋白酶混合物，包括含有(至少)碱性蛋白酶(Alcalase)和胰蛋白酶(Trypsine)的酶混合物，作为内切蛋白酶和外切蛋白酶。适合用于所述酶混合物的另一种酶是风味酶(Flavourzyme)。在一个实施例中，使用碱性蛋白酶、风味酶和胰蛋白酶的混合物。
使用适当的酶，例如内切蛋白酶和外切蛋白酶的混合物，可以在约45℃-60℃，优选在50℃至58℃的温度下水解原材料少于4小时，优选1.5至3小时。在水解期间，pH通常保持在6.4至8的范围内，并且优选保持基本恒定，例如，保持在6.8至7.8的范围内。
如果将乳清级分用作基本上不含乳糖的原材料，则可以发现该蛋白在水解和后续热处理期间受赖氨酸阻滞的影响要小得多。这使得赖氨酸阻滞的程度从总赖氨酸的约15重量％降低到少于赖氨酸的约10重量％；例如约7重量％的赖氨酸阻滞，这大大改善了蛋白源的营养质量。
在本发明的一个实施例中，本发明的方法包括提供包含至少10重量％的大小为5kDa或以上的肽和至少15重量％的大小在1至5kDa范围内的肽的牛乳蛋白部分水解物。
例如，基于部分蛋白水解物中存在的肽的干重计，该部分蛋白水解物中肽的大小分布是40％至60％<1kDa，10％至14％为1至<2kDa，8％至16％为2至<5kDa，3％至7％为5至<10kDa以及8％至12％>10kDa。
本发明方法的特征在于包括使牛乳蛋白部分水解物从能够与RAGE(晚期糖基化终产物(AGE)的受体)结合的一种或多种不需要的组分(聚集物)，即可能是由于存在晚期糖基化终产物(AGE)而具有RAGE结合特征和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分/聚集物中澄清，从而降低了水解物的过敏原性/免疫原性潜力。
一方面，去除一种或多种具有RAGE结合活性的组分(聚集物)。可以使用本领域已知的方法，例如在人ELISA中使用晚期糖基化终产物的可溶性受体(sRAGE)，确定RAGE结合组分的存在(或不存在)。sRAGE测试试剂盒由BioVendor销售。
另外或可替代地，可以通过本领域已知的方法检测AGE的存在和/或去除。例如，可以使用HPLC/FLD方法和邻苯二甲醛柱前衍生化来分析N-羧甲基赖氨酸(CML)为AGE的标志物(Lee等人，2016The FASEB Journal[FASEB杂志],第30卷第1期增刊673.8)
可替代地或另外地，去除一种或多种具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力(例如，使用已知的使用RBL的体外测定法证明)的组分(聚集物)。在另一个实施例中，去除RAGE结合组分(聚集物)以及具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分。
在一个实施例中，该澄清步骤(ii)包括使用分子截留值在10-100kDa范围内的膜过滤该部分水解物，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。使用分子截留值在10至50kDa范围内，优选在10至20kDa范围内的膜获得良好结果。在一个优选的实施例中，该澄清步骤(ii)包括使用分子截留值为10kDa的膜过滤该部分水解物。
本领域技术人员将理解，根据本发明，可以使用任何类型的过滤技术来去除一种或多种不需要的组分。例如，本文提供的方法可以涉及微滤(MF)、超滤(UF)、碳过滤或精细过滤(polish filtration)。使用超滤可以获得非常好的结果。
过滤后，可以通过本领域已知的方法，例如通过诸如喷雾干燥等热处理，将澄清的部分水解物浓缩至高的干燥固体含量。
技术人员将理解，在清除步骤(ii)中可以使用其他技术。在另一个实施例中，澄清步骤(ii)包括对该部分水解物进行尺寸排阻色谱法，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。在该实施例中，通过尺寸排阻色谱法去除分子量为100kDa或更高的组分。可以通过本领域已知的方法，例如通过诸如喷雾干燥等热处理，将澄清的部分水解物浓缩至高的干燥固体含量。
在本文披露的方法的步骤(iv)中，将(浓缩的)澄清的牛乳蛋白部分水解物配制成用于处于发展CMA风险中的婴儿的营养组合物。(浓缩的)澄清的牛乳蛋白部分水解物通常在最终营养产品中“按原样”使用，无需进一步分级或纯化。
优选地，将(浓缩的)澄清的牛乳蛋白部分水解物配制成低过敏原性婴儿配方食品，更优选地是供四月龄以上的婴儿使用的婴儿配方食品。
因此，本发明还提供了可通过本文披露的方法获得的用于婴儿的低过敏原性营养组合物。更具体地，本发明提供了一种低过敏原性营养组合物，在本文中也称为“低过敏原性婴儿配方食品”，其旨在供婴儿在出生第一年的特定营养用途，并且自身满足1991年5月14日欧洲委员会第91/321/EEC号指令定义的这类人的营养需求。术语“婴儿配方食品”包括一段婴儿配方食品和后续配方食品。术语“一段婴儿配方食品”意指旨在供婴儿在出生后的前四至六个月的特定营养用途的食品。术语“后续配方食品”是指旨在供四至六月龄，最多12月龄的婴儿的特定营养用途，并构成这类人逐渐多样化膳食中的主要液体元素的食品。
本发明的婴儿配方食品每100ml即食配方食品可包含1.0至2.0克的部分水解的乳清蛋白，更优选1.5至1.9g/100ml。
根据本发明的婴儿配方食品可以包含碳水化合物源。可以使用婴儿配方食品中常规发现的任何碳水化合物源，诸如乳糖、蔗糖、麦芽糊精、淀粉及其混合物，但是优选的碳水化合物源是乳糖。优选地，碳水化合物源占配方食品总能量的35％至65％。
婴儿配方食品通常含有脂质源。在这种情况下，脂质源可以是适合用于婴儿配方食品中的任何脂质或脂肪。优选的脂肪源包括乳脂、红花油、蛋黄脂质、菜籽油、橄榄油、椰子油、棕榈仁油、大豆油、鱼油、棕榈油酸、高油酸向日葵油和高油酸红花油，以及含有长链多不饱和脂肪酸的微生物发酵油。在一个实施例中，使用无水乳脂。脂质源也可以是源自这些油诸如棕榈油精、中链甘油三酯，和脂肪酸诸如花生四烯酸、亚油酸、棕榈酸、硬脂酸、二十二碳六烯酸、亚麻酸、油酸、月桂酸、癸酸、辛酸、己酸等的酯的级分形式。也可以添加少量的含有大量预先形成的花生四烯酸和二十二碳六烯酸的油，诸如鱼油或微生物油。脂肪源优选具有约5:1至约15:1；例如约8:1到约10:1的n-6与n-3脂肪酸比率。在一个实施例中，婴儿配方食品的能量密度为600kcal/L至780kcal/L，优选为630kcal/L至700kcal/L。总的来说，脂肪含量优选诸如占配方食品总能量的30％至55％。
在一个特定方面，婴儿配方食品包含油混合物，该油混合物包含被酯化为三酰基甘油的棕榈酸，例如其中在三酰基甘油的sn-2位置被酯化的棕榈酸的量为总棕榈酸的20重量％至60重量％并且在三酰基甘油的sn-1/sn-3位置被酯化的棕榈酸的量为总棕榈酸的40重量％至80重量％。
婴儿配方食品也可以含有所有维生素和矿物质，据了解这些维生素和矿物质是日常膳食中必不可少的，并且是营养上足够的量。对某些维生素和矿物质已确定了最低需求。婴儿配方食品中任选存在的矿物质、维生素和其他营养素的实例包括维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素E、维生素K、维生素C、维生素D、叶酸、肌醇、烟酸、生物素、泛酸、胆碱、钙、磷、碘、铁、镁、铜、锌、锰、氯化物、钾、钠、硒、铬、钼、牛磺酸和L-肉碱。矿物质通常以盐的形式添加。特定矿物质和其他维生素的存在和量将会根据预期婴儿群体而变化。
在一个特定的方面中，根据本发明的方法包括将至少一种选自由以下各项组成的组的成分包括在内：半乳寡糖(GOS)、人乳寡糖(HMO)，尤其是2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)和/或6’-唾液乳糖，和TGF-β。
在一个实施例中，婴儿配方食品至少包含半乳寡糖(GOS)。
在另一个实施例中，婴儿配方食品至少包含人乳寡糖(HMO)，优选选自由以下各项组成的组的HMO：唾液乳糖、岩藻糖基乳糖、二唾液酸化寡糖、乳糖-N-新四糖(LNnT)、乳糖-N-四糖(LNT)、乳糖-N-岩藻五糖(LNFP)-异构体、乳糖-N-二岩藻己糖(LNDFH)-异构体、岩藻糖基乳糖-N-己糖(F-LNH)-异构体、二岩藻糖基乳糖-N-己糖(DF-LNH)-异构体和三岩藻糖基乳糖-N-己糖(TF-LNH)-异构体(另请参见WO 2013/025104A1)。唾液乳糖可以来源于牛乳。在一个特别优选的实施例中，配方食品包含2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)和/或6’-唾液乳糖(6’-SL)。
本发明的婴儿配方食品每100ml即食婴儿配方食品可含50至1000纳克的TGF-β，更优选每100ml含50至500纳克，且最优选每100ml含200至300纳克。优选地，本发明的婴儿配方食品含有TGF-β1和TGF-β2两者，更优选地其比率在1:5至1:50之间。
可以通过本领域已知的方法，例如如EP 1218410 B1中所述，以从乳汁中分离的多肽生长因子的形式将TGF-β添加至配方食品中。可替代地，如果优选，则可以使用重组TGF-β。
如有必要，婴儿配方食品可以含有乳化剂和稳定剂，诸如大豆卵磷脂，单甘油和二甘油的柠檬酸酯等。
婴儿配方食品可以任选地含有可具有有益作用的其他物质，诸如乳铁蛋白、核苷酸、核苷等。
在本发明的另一方面，本发明涉及一种用于使乳蛋白的部分水解物从一种或多种能够结合RAGE和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分中澄清的方法，该方法包括以下步骤：
(i)提供乳蛋白的部分水解物，该部分水解物是通过对在水性介质中包含一种或多种牛乳蛋白的起始组合物进行酶处理而获得的；并且
(ii)使该部分水解物从一种或多种能够结合RAGE和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分中澄清；并且
(iii)任选地浓缩该澄清的部分水解物；
其中该澄清步骤(ii)包括使用分子截留值在10-100kDa范围内的膜过滤该部分水解物，并回收包含澄清的部分水解物的滤液；或者
其中该澄清步骤(ii)包括对该部分水解物进行尺寸排阻色谱法，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。
在一个优选的实施例中，该澄清步骤(ii)包括使用分子截留值在10-100kDa范围内的膜过滤该部分水解物，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。在该实施例中，进一步优选的是，膜的分子量截留值在10至50kDa的范围内，更优选在10至20kDa的范围内。
在另一个实施例中，澄清步骤(ii)包括对该部分水解物进行尺寸排阻色谱法，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。在该实施例中，通过尺寸排阻色谱法去除分子量为100kDa或更高的组分。
上面更详细地描述了术语“部分水解物”。上面更详细地描述了部分水解物及其优选的实施例。这些优选的实施例也适用于根据本发明，使乳蛋白的部分水解物从一种或多种能够结合RAGE和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分中澄清的方法。
本发明进一步涉及一种乳蛋白的部分水解物，其可通过根据本发明，使乳蛋白的部分水解物从一种或多种能够结合RAGE和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分中澄清的方法获得。
本发明还涉及根据本发明的乳蛋白的部分水解物，该部分水解物用于向遗传易感的和/或具有发展CMA的家族史的婴儿或幼儿施用。
附图说明
图1.在离心过滤装置上分级乳蛋白水解物S100、S375、S8x和S6-50后，不同分子量的级分的相对占比。数据基于所得级分的蛋白质浓度和体积。
图2.通过SEC分析乳清蛋白水解物级分。通过过滤装置对乳清蛋白水解物(S8x)进行分级，然后通过SEC进行级分分析。x轴：通过在过滤器装置上分级获得的级分；y轴：SEC的结果。数据已归一化为100％。
图3.对水解物S8X(图A)和S100(图B)的不同级分的sRAGE抑制测定。将乳清来源的蛋白样品溶解在MilliQ中，分级并进行sRAGE测定。结果是三平行样的平均值。相对于总液体或相对于彼此给出显著性水平。CML：羧甲基赖氨酸。G90：阳性对照。OVA：阴性对照(卵白蛋白)。通过ANOVA(单因素方差分析)、然后进行Tukey后检验分析结果。所有分析均在Graphpad Prism软件(5.03版)中进行。数据显示为平均值+标准偏差。在所有情况下，显著性水平均以星号指示，*：p≤0.05；**：p≤0.01；***：≤0.001。
图4.RBL的β-己糖胺酶释放量。将RBL与60x稀释的不含IgG的人血清温育24小时，然后洗涤并与水解物S8x的不同级分温育1小时。从所有值中减去了自发释放量(在ACB中)。绝对释放量已参考乳清蛋白浓缩物(WPC)的释放量进行了标准化。相对于WPC指示了显著性水平。蛋白质浓度通过Nanodrop测定；ACB：抗原攻击缓冲液。通过ANOVA(单因素方差分析)分析结果，然后进行Tukey后检验。所有分析均在Graphpad Prism软件(5.03版)中进行。数据显示为平均值+标准偏差。在所有情况下，显著性水平均以星号指示，*：p≤0.05；**：p≤0.01；***：≤0.001。
实验部分
实例1：乳蛋白分部分水解物的粒析
该实例显示了将乳蛋白部分水解物分级成不同大小的级分。
使用了以下水解物：
S8x、S6-50和S375是从乳清蛋白浓缩物(WPC)获得的且水解度为约9.2％的喷雾干燥的部分水解物。
S100是从WPC获得的且水解度为约15％的喷雾干燥的粗水解物。
大小分级
将四种不同的乳蛋白部分水解物以50mg/mL的蛋白浓度溶解在MilliQ中。在振荡下溶解15分钟后，将样品离心(2000g，10分钟，20℃)。然后，将样品在4℃下温育15分钟，以形成单独的水层和脂肪层。小心地去除水层，并丢弃脂肪层。将剩余的团块溶解在固定体积的PBS、Tris/脲(0.05M/6M)或添加有二硫赤藓糖醇(DTE，5mg/mL)的Tris/脲(0.05M/6M)中。使用Nanodrop系统(赛默科技(ThermoScientific))，通过在280nm下的吸收测量来测定获得的级分的蛋白浓度。
使用离心过滤装置，根据蛋白质的大小分离出从样品中获得的水层中的蛋白质。洗涤过滤器后，将60mg溶解的蛋白质装入分子量截留值为10kDa的Amicon离心过滤装置(密理博(Millipore))中。将样品在室温下3363g离心10分钟。将渗余物重新悬浮并重复离心步骤。在每个离心步骤之后，控制渗余物的蛋白浓度。重复该过程，直到渗余物中的蛋白浓度无法检测。收集两个级分(渗余物和渗透物)并继续分级过程。
如上文所述，对通过10kDa过滤器的蛋白级分，在分子量截留值为3kDa的过滤装置上进行分级。未通过10kDa过滤器的级分在100kDa过滤器上进行分级。样品S100未在100kDa过滤器上进行分级。和用于在10kDa过滤器上分级的固定量的蛋白质相反，在3kDa和100kDa过滤器上使用可变量的蛋白质。合并相关级分并储存在-20℃直至进一步使用。
分级水解物的HPLC分析
对分级样品的不同级分进行尺寸排阻色谱法(SEC)分析。使用粒度为1.7μm且孔径为
Figure BDA0002579122620000131
的Waters Acquity UPLC蛋白柱。应用含PBS(100mM，pH 6.8+150mM NaCl)的等度流(0.3mL/min)。将10μL样品上样，并通过214nm下的UV吸光度检测蛋白质。
UV-VIS和荧光测量
对实验乳水解物进行吸光度和荧光测量。在MilliQ中将样品稀释成5.0或2.5mg蛋白/mL。将样品吸移到96孔板的孔中(低结合，100μL/孔)。在294nm和490nm下测量吸光度。
在平行实验中，将样品吸移到白色96孔板的孔中。确定最佳激发波长和发射波长后，在440nm下评估样品荧光，激发波长为350nm。
为了研究乳蛋白水解物的任何大小依赖性方面，使用截留值为10kDa、3kDa和100kDa的Amicon过滤装置将样品进行分级。图1示出了不同级分的占比。水解物S100主要由小的(<3kDa)肽和蛋白质组成。相反，水解物S375、S8x和S6-50也含有大量较大的蛋白质，尤其是大小在3至10kDa之间的蛋白质，但也含有大小>100kDa的蛋白质。由于S375、S8x和S6-50源自相似的来源，因此预计那些样本之间有相似性。
分级的精确度由尺寸排阻色谱法(SEC)控制，结果如图2所示。SEC分析揭示，大多数蛋白质都可以通过过滤装置分级正确地分类。这适用于所有测试样品的所有大小类别(<3kDa，3-10kDa和>10kDa)。在通过3kDa过滤器的所有蛋白质中，高达30％的分子量在3至10kDa之间，因此通过过滤装置分析将其错误分类。3-10kDa的级分和>10kDa的级分也显示存在较小尺寸的蛋白质，高达20％(3-10kDa级分)和30％(>10kDa级分)。总的来说，数据显示通过过滤装置离心进行蛋白质分级的方法允许以约70％-85％的精确度分级乳水解物。
实例2：乳蛋白部分水解物含有与sRAGE结合的聚集物。
sRAGE抑制测定
如Liu等人(Liu F等人Food Funct.[食品与功能]2016年1月；7(1):239-49；Liu F等人,J Agric Food Chem.[农业和食品化学杂志]2016年8月24日；64(33):6477-86)之前所述，通过竞争测定法评估不同乳蛋白水解物的sRAGE结合能力。
简言之，将高蛋白结合的96孔板(葛莱纳(Greiner Bio-one))在4℃下以100μL/孔用糖化大豆蛋白提取物(20μg/mL)包被过夜。将pH 9.6的200mM碳酸钠缓冲液用作包被缓冲液。将sRAGE(在大肠杆菌(E.coli)中产生的可溶性晚期糖基化终产物特异性受体，生贩科技公司(Biovendor))溶于pH 4.0的0.1M乙酸中，并用作AGE结合蛋白。首先将样品级分稀释于含1.5％BSA和0.025％吐温-20(Tween-20)的PBS中。将获得的浓缩物连续稀释，与sRAGE(1.25μg/mL)预先温育，然后在37℃下温育。温育45分钟后，将200μL蛋白质-sRAGE混合物转移至包被的板中，将该板用3％BSA的PBS溶液封闭1小时，然后洗涤。在37℃下温育1小时后，弃去蛋白质-sRAGE混合物，并用PBS+0.05％吐温-20洗涤各孔。将抗sRAGE抗体(单克隆小鼠IgG，0.5μg/mL)添加至孔(0.5μg/mL，80μL)中，并且在室温下边振荡边将板温育30分钟。洗涤后，添加检测抗体(多克隆山羊抗小鼠，HRP偶联的，0.5mg/mL)，并在室温下温育30分钟。最终洗涤后，与TMB(80μL/孔)温育3分钟。通过添加100μL的2％HCl终止着色反应。在450nm下读取吸光度，以620nm作为参考。结果表示为相对于阳性对照G90(50μg/mL)的抑制％。卵白蛋白(英杰公司(Invivogen))用作阴性对照。
在该系统中，添加RAGE结合聚集物可以抑制糖化大豆蛋白与sRAGE的相互作用，并且表示为抑制％。
测试示例性水解物S8x和S100的分级样品(参见实例1)对sRAGE与糖化大豆蛋白结合的抑制作用。结果示于图3中。尽管未分级的部分水解物显著抑制sRAGE结合，但发现对于<100kDa的蛋白质而言用过滤器清除的所有级分都不能促进这种抑制作用。相反，>100kDa的级分显示出的抑制作用与未分离的水解物的抑制作用相似。不含任何>10kDa的蛋白级分的水解物S100无法抑制sRAGE结合(图3B)。
实例3：乳蛋白水解物中存在的聚集物诱导嗜碱性粒细胞脱粒
来自乳过敏患者的人血清
来自乳过敏患者的人血清接收自Rijnstate医院(荷兰阿纳姆(Arnhem,TheNetherlands))。将三名不同患者的等体积血清合并。测定每名患者的特异性IgE水平。测定值示于表1。
表1：使用ImmunoCAP(瑞典乌普萨拉的法蒂亚公司(Phadia AB,Uppsala,Sweden))测定针对不同乳蛋白的特异性IgE水平。
Figure BDA0002579122620000151
去除IgG
通过旋转离心从人血清中去除IgG。根据方案，使与琼脂糖偶联的蛋白质G平衡，并将其置于15mL收集管中。将人血清在结合缓冲液中稀释2x，并上样到柱中的琼脂糖树脂上且温育10分钟。之后，将柱离心(1000g，1分钟)，并储存流过物。通过向柱中添加额外的结合缓冲液，然后离心，将柱洗涤三次。合并基于其蛋白浓度的相关洗涤级分。通过添加洗脱缓冲液，将结合的IgG从柱上洗脱，然后将其丢弃。
RBL测定
采用经人IgE受体(FcERI)的α亚基转染的大鼠嗜碱性粒细胞(RBL)来评估不同乳水解物级分的脱粒诱导能力。使细胞在含有5％热灭活胎牛血清(FBS)、1％青霉素、1％链霉素和1％谷氨酰胺的MEM中于37℃、5％CO2下生长。用MEM洗涤细胞，并从烧瓶底部刮下。通过离心(400g，5分钟，室温)将细胞在MEM中洗涤两次，并重悬于MEM中。然后，将细胞以7.5×104个/孔的密度接种在96孔板的MEM+1％谷氨酰胺中。
一旦细胞粘附到孔的底部，就将来自牛乳过敏患者的人血清添加到细胞中。使用来自3名患者的IgG去除之后的合并血清(乳特异性IgE平均值为132kU/L，参见表1)。通常，将MEM中的40x和60x稀释液施加于细胞。对于阳性对照，将细胞与IgE(100ng/mL)在MEM中温育。在37℃下温育24小时后，将细胞用75μL Tyrode洗涤缓冲液(137mM NaCl、2.69mM KCl、0.415mM NaH2PO4、0.492mM MgCl2、2.72mM CaCl2、10.1mM HEPES、0.280mM葡萄糖和1gBSA/L溶于H2O中)轻轻地洗涤三次。完成洗涤步骤后，将抗IgE(1.0-32μg/mL)或稀释的乳水解物样品添加到细胞中，每孔100μL。对于该步骤，将抗IgE和乳水解物均溶于抗原攻击缓冲液(137mM NaCl、2.69mM KCl、0.415mM NaH2PO4、0.492mM MgCl2、2.72mM CaCl2、10.1mMHEPES、0.280mM葡萄糖和1g BSA/L，溶于50％H2O和50％D2O中)。
温育50分钟后，将100μL Triton-X100(1％的PBS溶液)添加到细胞中，作为总释放量的阳性对照。温育1小时(37℃、5％CO2)后，将60μL细胞上清液与50μL底物溶液(在126mMNa2HPO4中的3.80mM对硝基-N-乙酰基-β-D-葡萄糖苷，溶于pH 4.5(用0.4M柠檬酸调节)的H2O中)在37℃下温育1小时。添加100μL甘氨酸(0.2M，pH 10.7)终止反应。在405nm下测量吸光度，以620nm作为参考值。
用分级的水解物温育细胞后，评价RBL细胞的β-己糖胺酶释放量。在所有实验中均使用乳清蛋白浓缩物(WPC)作为阳性参考。
结果示于图4中。除了分子量>100kDa的级分之外，示例性水解物S8x的每个级分诱导的RBL释放量均显著少于WPC。该级分显示出最大的RBL释放量，相对于WPC诱导的释放量减少54％。相反，分子量较低的级分导致较低的β-己糖胺酶释放量，分子量小于<3kDa蛋白的级分降低到WPC的14％。来自团块的不溶性蛋白几乎不会促进RBL的释放。
实例4：低过敏原性(HA)婴儿配方食品的制造。
部分水解物的制备
在50℃-60℃下将包含乳清蛋白浓缩物(WPC)或酪蛋白的乳蛋白溶于水中至最终蛋白浓度为10％-15％(w/w)。用45％的氢氧化钾(KOH)或氢氧化钠(NaOH)将蛋白质溶液的pH调节至pH 6-8。通过以1:50-1:500的酶/底物(E/S)比率将内肽酶(碱性蛋白酶)和外肽酶(风味酶)添加到蛋白质溶液中开始蛋白质的水解。将反应混合物在50℃-60℃下保持4-24小时。通过将反应混合物加热至90℃而终止酶反应，随后将混合物在90℃下保持至少10分钟。加热后，将混合物冷却至10℃。
澄清部分水解物
在10℃下使用分子量截留值为100kDa的Amicon离心过滤装置(密理博(Millipore))将部分水解物经膜过滤(10分钟，3363g，室温)。将渗余物重新悬浮在水中，并重复离心步骤，直到在280nm下在渗透物中无法检测到蛋白质。将含有澄清的水解物的渗透物级分合并，并进行进一步的下游加工。
澄清的部分水解物的浓度
通过在30℃下施加60毫巴的真空压力，使用旋转膜蒸发，将澄清的水解物浓缩至干物质含量为40％-60％。使用Büchi台式喷雾干燥器，施加200℃的入口温度和80℃的出口温度，对浓缩的水解物进行喷雾干燥。
将澄清的部分水解物配制成婴儿配方食品
将经过澄清和干燥的部分水解物配制成0-6个月龄婴儿配方食品，达到如表2所示的最终浓度。口感良好的婴儿配方食品包含(每100克产品)6重量％-16重量％的澄清乳清或酪蛋白蛋白水解物、18重量％-29重量％的脂肪组分、<60重量％的碳水化合物含量、3重量％-8重量％的益生元组分。以立法推荐量掺入如矿物质、微量元素和维生素等其他组分。
表2示出了每100mL即饮饮品中用于支持或增强婴儿免疫系统的根据本发明的示例性营养配方食品，例如0至6个月龄组的婴儿配方食品(HA婴儿配方食品)的组成。
表2：HA婴儿配方食品的组成(每100ml)
g/100mL
能量，kcal 67
蛋白质(g) 1.6
碳水化合物(g) 7.0
脂肪(g) 3.5
益生元(GOS) 0.4
盐(g) 0.05

Claims (18)

1.一种用于为处于发展牛乳过敏(CMA)风险中的婴儿提供低过敏原性营养组合物的方法，该方法包括以下步骤：
(i)提供乳蛋白的部分水解物，该部分水解物是通过对在水性介质中包含一种或多种牛乳蛋白的起始组合物进行酶处理而获得的，
(ii)使该部分水解物从一种或多种能够结合RAGE和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分中澄清；
(iii)任选地浓缩该澄清的部分水解物；并且
(iv)将该(浓缩的)澄清的部分水解物配制成用于处于发展CMA风险中的婴儿的营养组合物；
其中该澄清步骤(ii)包括使用分子截留值在10-100kDa范围内的膜过滤该部分水解物，并回收包含澄清的部分水解物的滤液；或者
其中该澄清步骤(ii)包括对该部分水解物进行尺寸排阻色谱法，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。
2.根据权利要求1所述的方法，其中该澄清步骤(ii)包括使用分子截留值在10-100kDa范围内，优选在10至50kDa范围内，更优选在10至20kDa范围内的膜过滤该部分水解物，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中该部分水解物得自一种或多种选自由以下各项组成的组的牛乳蛋白：乳清蛋白、酸性乳清蛋白、甜乳清蛋白、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物、脱盐乳清粉和酪蛋白酸盐。
4.根据权利要求3所述的方法，其中该部分蛋白水解物包含或是部分乳清蛋白水解物，该部分蛋白水解物包含或是部分β-乳球蛋白水解物和/或部分α-乳白蛋白水解物，该部分蛋白水解物包含或是部分酪蛋白水解物。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该部分水解物的水解度(DH)在约5％至20％，优选6％至18％，更优选7％至11％的范围内。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该部分水解物包含至少10重量％的大小为5kDa或以上的肽和至少15重量％的大小在1至5kDa范围内的肽。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中基于部分蛋白水解物中存在的肽的干重计，该部分蛋白水解物中肽的大小分布是40％至60％为<1kDa，10％至14％为1至<2kDa，8％至16％为2至<5kDa，3％至7％为5至<10kDa以及8％至12％为>10kDa。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，该方法包括使用分子截留值在10至50kDa范围内，优选在10至20kDa范围内的膜。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中过滤包括微滤(MF)、超滤(UF)、碳过滤或精细过滤，优选超滤。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，该方法包括浓缩该澄清的部分水解物的步骤(iii)，优选其中步骤(iii)包括喷雾干燥。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(iv)包括将该浓缩的澄清的部分水解物与碳水化合物源、脂质源和常规维生素、微量元素和矿物质合并。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(iv)包括将至少一种选自由以下各项组成的组的成分包括在内：半乳寡糖(GOS)，人乳寡糖(HMO)，尤其是2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)和/或6’-唾液乳糖，和TGFβ。
13.一种用于婴儿的低过敏原性营养组合物，该低过敏原性营养组合物可通过根据权利要求1-14中任一项所述的方法获得。
14.根据权利要求13所述的低过敏原性营养组合物，该低过敏原性营养组合物用于向遗传易感的和/或具有发展CMA的家族史的婴儿或幼儿施用。
15.一种用于使乳蛋白的部分水解物从一种或多种能够结合RAGE和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分中澄清的方法，该方法包括以下步骤：
(i)提供乳蛋白的部分水解物，该部分水解物是通过对在水性介质中包含一种或多种牛乳蛋白的起始组合物进行酶处理而获得的；并且
(ii)使该部分水解物从一种或多种能够结合RAGE和/或具有嗜碱性粒细胞脱粒诱导能力的组分中澄清；并且
(iii)任选地浓缩该澄清的部分水解物；
其中该澄清步骤(ii)包括使用分子截留值在10-100kDa范围内的膜过滤该部分水解物，并回收包含澄清的部分水解物的滤液；或者
其中该澄清步骤(ii)包括对该部分水解物进行尺寸排阻色谱法，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。
16.根据权利要求15所述的方法，其中该澄清步骤(ii)包括使用分子截留值在10-100kDa范围内，优选在10至50kDa范围内，更优选在10至20kDa范围内的膜过滤该部分水解物，并回收包含澄清的部分水解物的滤液。
17.一种乳蛋白部分水解物，该乳蛋白部分水解物可通过根据权利要求15或权利要求16所述的方法获得。
18.根据权利要求17所述的乳蛋白部分水解物，该乳蛋白部分水解物用于向遗传易感的和/或具有发展CMA的家族史的婴儿或幼儿施用。
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WO (1) WO2019141662A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102020113747A1 (de) * 2020-05-20 2021-11-25 Gea Mechanical Equipment Gmbh Verfahren zur Gewinnung von Proteinen aus einem nativen Stoffgemenge aus Soja oder aus Sojamilch

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5112812A (en) * 1985-12-18 1992-05-12 Samuelsson Ernst Gunnar Peptide preparation, a process for producing it and use of the peptide preparation
WO1993004593A1 (en) * 1991-08-30 1993-03-18 Teagasc, The Agriculture And Food Development Authority Hypoallergenic whey protein hydrolysate
CN1105818A (zh) * 1993-06-30 1995-08-02 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 乳蛋白部分水解产物及其制备方法
US20010022986A1 (en) * 1993-08-03 2001-09-20 Girsh Leonard S. Dairy permeate-based beverage
CN1358067A (zh) * 1999-04-29 2002-07-10 雀巢制品公司 用于具有低苏氨酸含量的婴儿配制食品的组合物
CN1392877A (zh) * 2000-03-13 2003-01-22 森永乳业株式会社 蛋白水解物,其制造方法以及含有该蛋白水解物的饮食品
CN101203144A (zh) * 2005-06-01 2008-06-18 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 低乳糖部分水解的婴儿食品配方
US20100162418A1 (en) * 2008-08-13 2010-06-24 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Recombinant protein s composition
RU2428047C1 (ru) * 2010-02-19 2011-09-10 Закрытое акционерное общество "Компания "Нутритек" (ЗАО "Компания "Нутритек") Способ получения гидролизата сывороточных белков с высокой степенью гидролиза и гидролизат сывороточных белков с высокой степенью гидролиза
CN102378581A (zh) * 2009-04-02 2012-03-14 诺维信公司 用于制备基于乳的蛋白质水解产物的方法

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2634104B1 (fr) * 1988-07-18 1991-10-18 Union Coop Agricole Hydrolysat partiel de proteines de lactoserum, procede enzymatique de preparation de cet hydrolysat, et aliment lacte dietetique hypoallergenique le contenant
JPH0773507B2 (ja) * 1988-11-19 1995-08-09 森永乳業株式会社 低分子量ペプチド組成物およびその製造方法
DK71292D0 (zh) * 1992-05-27 1992-05-27 Novo Nordisk As
JPH093712A (ja) 1995-06-19 1997-01-07 Hirohisa Kida 作業用手袋
NL1005037C2 (nl) 1997-01-17 1998-07-20 Nl Zuivelonderzoek Inst Werkwijze voor het selectief afbreken van melkeiwit, in het bijzonder voor het selectief hydrolyseren van caseïne/caseïnaat in aanwezigheid van andere melkeiwitten, in het bijzonder wei-eiwitten.
EP0880902A1 (fr) 1997-05-27 1998-12-02 Nestlé Produkte AG Procédé de traitement d'une matiére première lactosérique
DK1218410T3 (da) 1999-10-06 2005-08-08 Nutricia Nv Fremgangsmåde til opnåelse af vækstfaktorpræparater (TGF-beta og IGF-1) med lav gensidig krydskontamination ud fra mælkeprodukter
EP1981358B1 (en) * 2006-01-31 2010-07-28 Nestec S.A. Nutritional composition for low birth weight infants
EP2003989A1 (en) * 2006-03-31 2008-12-24 DSMIP Assets B.V. Process for the hydrolysis of milk proteins
WO2011150949A1 (en) * 2010-06-04 2011-12-08 N.V. Nutricia Non-digestible oligosaccharides for oral induction of tolerance against dietary proteins
WO2012009426A1 (en) 2010-07-13 2012-01-19 Abbott Laboratories High tolerance infant formula including hydrolyzed protein
NL2007268C2 (en) 2011-08-16 2013-02-19 Friesland Brands Bv Nutritional compositions comprising human milk oligosaccharides and uses thereof.
DK2730170T3 (en) * 2012-11-13 2016-05-30 Dmk Deutsches Milchkontor Gmbh Allergen-free food compositions

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5112812A (en) * 1985-12-18 1992-05-12 Samuelsson Ernst Gunnar Peptide preparation, a process for producing it and use of the peptide preparation
WO1993004593A1 (en) * 1991-08-30 1993-03-18 Teagasc, The Agriculture And Food Development Authority Hypoallergenic whey protein hydrolysate
CN1105818A (zh) * 1993-06-30 1995-08-02 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 乳蛋白部分水解产物及其制备方法
US20010022986A1 (en) * 1993-08-03 2001-09-20 Girsh Leonard S. Dairy permeate-based beverage
CN1358067A (zh) * 1999-04-29 2002-07-10 雀巢制品公司 用于具有低苏氨酸含量的婴儿配制食品的组合物
CN1392877A (zh) * 2000-03-13 2003-01-22 森永乳业株式会社 蛋白水解物,其制造方法以及含有该蛋白水解物的饮食品
CN101203144A (zh) * 2005-06-01 2008-06-18 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 低乳糖部分水解的婴儿食品配方
US20100162418A1 (en) * 2008-08-13 2010-06-24 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Recombinant protein s composition
CN102378581A (zh) * 2009-04-02 2012-03-14 诺维信公司 用于制备基于乳的蛋白质水解产物的方法
RU2428047C1 (ru) * 2010-02-19 2011-09-10 Закрытое акционерное общество "Компания "Нутритек" (ЗАО "Компания "Нутритек") Способ получения гидролизата сывороточных белков с высокой степенью гидролиза и гидролизат сывороточных белков с высокой степенью гидролиза

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
R. FLORIS，等: "Trends in infant formul: as a dadiry perspective", 《IMPROVING THE SAFETY AND QUALITY OF MILK》 *
R. FLORIS，等: "Trends in infant formul: as a dadiry perspective", 《IMPROVING THE SAFETY AND QUALITY OF MILK》, 31 December 2010 (2010-12-31), pages 454 - 474 *
郑庆康等: "改性水解蛋白质对染料废水的脱色处理", 《四川大学学报(工程科学版)》 *
郑庆康等: "改性水解蛋白质对染料废水的脱色处理", 《四川大学学报(工程科学版)》, no. 02, 20 March 1998 (1998-03-20), pages 18 - 22 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2019141662A1 (en) 2019-07-25
DK3740087T3 (da) 2022-08-08
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US20200345024A1 (en) 2020-11-05
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CA3083157A1 (en) 2019-07-25

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