CN111718864A

CN111718864A - 稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株黄褐假单胞菌k3和摩氏假单胞菌k17及其应用

Info

Publication number: CN111718864A
Application number: CN202010070032.4A
Authority: CN
Inventors: 肖春桥; 胡锦刚; 池汝安
Original assignee: Wuhan Institute of Technology
Current assignee: Wuhan Institute of Technology
Priority date: 2020-01-21
Filing date: 2020-01-21
Publication date: 2020-09-29
Anticipated expiration: 2040-01-21
Also published as: CN111718864B

Abstract

本发明涉及稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株黄褐假单胞菌K3和摩氏假单胞菌K17及其应用。该菌株都是从稀土浸矿场地土壤中富集筛选而来，分别归属于黄褐假单胞菌(Pseudomonas fulva)和摩氏假单胞菌(Pseudomonas mosselii)，均已于2019年12月16日移送至中国典型培养物保藏中心保藏，对应的保藏编号分别为CCTCC NO:M 20191055和CCTCC NO:M 20191056。这两株菌株均为异养硝化‑好氧反硝化细菌，能在好氧条件下快速脱除稀土浸矿场地淋出液(初始氨氮浓度≤300mg/L)中的氨氮，脱氮率在90％以上，且亚硝酸氮和硝酸氮的积累量小于6mg/L，处理后的淋出液中氨氮浓度达到国家排放标准。该菌株的发现为稀土浸矿场地淋出液提供了一种高效且环境友好的微生物脱氮处理方法，具有广阔的应用前景。

Description

稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株黄褐假单胞菌K3和摩氏假单胞菌K17及其应用

技术领域

本发明涉及微生物及矿山污水治理技术领域，具体涉及稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株黄褐假单胞菌K3和摩氏假单胞菌K17及其应用。

背景技术

风化壳淋积型稀土矿是我国重要的战略性资源，此类稀土矿中中、重稀土含量较高，在国际市场中有很大竞争优势。我国南方七省都曾先后发现风化壳淋积型稀土矿并已经进行了开采利用，开采工艺也从池浸发展到堆浸再到目前的原地浸出。风化壳淋积型稀土矿原地浸出工艺使用最为广泛的浸取剂是硫酸铵，利用硫酸铵浸取稀土后会导致大量铵盐残留在稀土浸矿场地，对矿场环境造成了较大的污染，必须进行处理。目前常见的治理方法为人工注入液淋洗，然后收集淋出液(也包括自然雨水冲洗的淋出液)集中处理。

国家规定的氨氮一级排放标准为15mg/L。相对于其它行业的氨氮废水，稀土浸矿场地淋出液具有以下特征：①高氨氮浓度(主要含硫酸铵)；②低C/N；③具有一定盐度(含有大量硫酸根离子及少量铝、铁、硅、钙、铅等金属离子)；④pH低于7，偏酸性。与其他氨氮废水相比，稀土浸矿场地淋出液处理难度更大，如何高效、低能耗、工业化对其进行处理并达标排放，仍是当前稀土行业面临的难题和重要任务。

常见的氨氮废水处理方法包括物理化学法、传统生物法和新型生物法，其中物理化学法和传统生物法都是比较成熟的技术。传统生物法在节约成本和环境友好方面优势明显，对于低浓度氨氮废水有较好的处理效果，但是也存在一些问题，如对环境条件要求较高、处理周期较长、工艺建筑占地大。此外传统生物脱氮观点认为，硝化与反硝化分别在好氧和厌氧两个不同的条件下进行，然而异养硝化-好氧反硝化菌的发现打破了这一传统脱氮理论，由此诞生了新型生物法。

与基于自养硝化细菌和厌氧反硝化细菌的传统生物脱氮方法相比，基于异养硝化-好氧反硝化菌的异养硝化-好氧反硝化脱氮方法具有以下优势：(1)可在同一反应器中完成硝化和反硝化过程，极大地节约了设备占地面积；(2)异养硝化-好氧反硝化菌的多样性使其具有较强的环境耐受能力；(3)异养硝化-好氧反硝化脱氮处理能节约部分碳源。自20世纪80年代Robertson等人首次发现好氧反硝化Paracoccus pantotrophus菌株后，科学家们随后在假单胞菌属、克雷伯氏菌属、不动杆菌属、副球菌属、红球菌属等多个菌属中发现了异养硝化-好氧反硝化菌。

稀土浸矿场地是一个富含氨氮的环境，生活在其中的微生物大多已经适应了较高的氨氮环境，并且对稀土浸矿场地淋出液也有较强的耐受性。因此，发明人从离子型稀土矿浸矿场地采集土壤样品，分离筛选出稀土浸矿场地土著异养硝化-好氧反硝化菌，并利用这些土著异养硝化-好氧反硝化菌脱除稀土浸矿场地淋出液中的氨氮，该项新技术对稀土行业氨氮废水污染治理具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有微生物脱氮技术中普遍存在的外来脱氮菌种对稀土浸矿场地淋出液不耐受、脱氮能力不够强等不足，开发了一种稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株，该菌株为稀土浸矿场地淋出液的高效、环境友好且低成本生物脱氮提供了一种有望工业化应用的新选择。

本发明的目的之一在于提供两株稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3和K17，经鉴定分别属于黄褐假单胞菌(Pseudomonas fulva)和摩氏假单胞菌(Pseudomonasmosselii)。这两株菌株均已于2019年12月16日保藏在中国典型培养物保藏中心(地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学校内)，对应的保藏编号为：CCTCC NO:M 20191055和CCTCCNO:M 20191056。这两株菌株由本申请发明人于2019年7月从江西赣州龙南县某稀土浸矿场地的土壤中分离、筛选而来，在好氧条件下均具有较强的异养硝化-好氧反硝化脱氮能力。

本发明的另一目的在于将上述两株稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株用于含氨氮废水的微生物脱氮处理。

进一步的，所述含氨氮废水具体为稀土浸矿场地淋出液，其氨氮含量不超过300mg/L。

进一步的，上述应用的具体过程如下：将稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3或K17活化后制成种子液，将单一或复合种子液接种到含氨氮废水中培养即可。所述复合种子液由K3种子液和K17种子液按照任意体积比混合而成。

进一步的，菌株活化过程如下：将稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3或K17接种至脱氮固体培养基中倒置平板培养即可，培养温度：28-30℃，培养时间：12-36h。所述脱氮固体培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖或柠檬酸钠3-6份，(NH₄)₂SO₄ 0.3-0.6份，MgSO₄·7H₂O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，FeSO₄·7H₂O 0.01-0.05份，MnSO₄·4H₂O 0.01-0.04份，K₂HPO₄ 0.5-1.5份，蒸馏水1000份，琼脂15-20g，pH为7-7.5。

进一步的，种子液的制备方法如下：将活化后的稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3或K17接种至脱氮液体培养基中振荡培养即可，培养温度：28-30℃，培养时间：12-36h，摇床转速：150-170r/min。所述脱氮液体培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖或柠檬酸钠5-20份，(NH₄)₂SO₄ 0.5-2份，MgSO₄·7H₂O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，FeSO₄·7H₂O0.01-0.05份，MnSO₄·4H₂O 0.01-0.04份，K₂HPO₄ 0.5-1.5份，蒸馏水1000份，pH为7-7.5。

进一步的，含氨氮废水中种子液的接种量为(2-5)％，接种完成后的培养温度为28-30℃，摇床转速为150-170r/min。

与现有同类菌株相比，本发明具有以下有益效果：(1)本发明提供的两株菌株均来源于稀土浸矿场地土壤，对成分复杂的稀土浸矿场地淋出液有较强的耐受能力和适应性，接种到其中培养后可快速、高效脱除水体中的氨氮，且硝酸氮的积累量小于10mg/L，亚硝酸氮几乎没有积累；(2)本发明提供的菌株可脱除较高氨氮浓度(300mg/L左右)废水中的氨氮，可应用于高浓度氨氮废水的处理，尤其适用于处理成分复杂、性质较为特殊的稀土浸矿场地淋出液；(3)本发明微生物脱氮方法简单高效、成本低，为异养硝化-好氧反硝化菌的理论研究和应用提供了新的材料。

附图说明

图1为稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3的16s rDNA基因序列；

图2为稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K17的16s rDNA基因序列；

图3为稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3在初始氨氮浓度为100mg/L的模拟淋出液中生长、脱氮规律；

图4为稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3在初始氨氮浓度为200mg/L的模拟淋出液中生长、脱氮规律；

图5为稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3在初始氨氮浓度为300mg/L的模拟淋出液中生长及脱氮规律；

图6为稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K17在初始氨氮浓度为100mg/L的模拟淋出液中生长、脱氮规律；

图7为稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K17在初始氨氮浓度为200mg/L的模拟淋出液中生长、脱氮规律；

图8为稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K17在初始氨氮浓度为300mg/L的模拟淋出液中生长及脱氮规律。

具体实施方式

为使本领域普通技术人员充分理解本发明的技术方案和有益效果，以下结合具体实施例进行进一步说明。

稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3和K17的富集、分离、筛选、鉴定过程具体如下：

1.稀土浸矿场地土壤样品的采集

2019年7月到江西赣州市龙南县某稀土浸矿场地进行采样。从稀土浸矿场地采集新鲜的土壤样品并装入保鲜塑料袋内备用，每1-2m²的区域内采集5个点，每个点采集100-200g土壤样品。采样完成后，将所有样品迅速带回实验室。

2.稀土浸矿场地土壤样品中微生物的富集

按照100g:1L的比例，将土壤样品与无菌水混合，所得混合物放入摇床中振荡培养，振荡培养时间为30min，摇床转速为165r/min，培养温度为28℃。振荡培养完成后静置15min，收集上清液得到土壤样品初始菌悬液。

按照下述配方提前配制脱氮富集培养基：柠檬酸钠5g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，NaCl 2g，FeSO₄·7H₂O 0.04g，MnSO₄·4H₂O 0.01g，K₂HPO₄ 1.0g，蒸馏水1000mL，pH为7-7.5。将土壤样品初始菌悬液与脱氮富集培养基按照1:2的体积比混合均匀，所得混合物置于摇床中，于28℃、165r/min条件下振荡培养2天，得到第一次富集的土壤微生物富集培养液。将第一次富集的土壤微生物富集培养液与脱氮富集培养基按照1:4的体积比混合均匀，所得混合物置于摇床中，于28℃、165r/min条件下振荡培养2天，得到第二次富集的土壤微生物富集培养液。将第二次富集的土壤微生物富集培养液与脱氮富集培养基按照1:4的体积比混合均匀，所得混合物置于摇床中，于28℃、165r/min条件下发酵培养2天，得到土壤微生物富集培养液。

3.菌株的分离纯化

(1)采用梯度稀释法稀释土壤微生物富集培养液，具体做法如下：用1000μL的移液枪吸取1mL土壤微生物富集培养液，加入至含9mL无菌水的灭菌试管中，混匀后得10^-1浓度的菌悬液；更换枪头，用1000μL的移液枪吸取1mL、10^-1稀释倍数的菌悬液，加入至含9mL无菌水的灭菌试管中，混匀后得10^-2稀释倍数的菌悬液；按照上述方法依次得到10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5稀释倍数的土壤菌悬液。

(2)采用平板涂布法分离菌株。按照下列配方提前制备脱氮固体培养基：柠檬酸钠5g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，NaCl 2g，FeSO₄·7H₂O 0.04g，MnSO₄·4H₂O 0.01g，K₂HPO₄ 1g，蒸馏水1000mL，琼脂15-20g，pH为7-7.5。分别取15mL-20mL灭菌后的脱氮固体培养基，倒入灭菌后的培养皿中制成若干个平板。用移液枪分别吸取不同稀释倍数的土壤菌悬液0.1mL，滴入已制好的平板中并用涂布棒涂布均匀。接种完成后，先静置20-30min，随后放入28℃培养箱中倒置培养2d。

(3)采用平板划线法纯化菌株。分别取15-20mL灭菌后的脱氮固体培养基，倒入灭菌后的培养皿中制成若干个平板。用接种环挑取上一步涂布平板中长势较好的单菌落，在已制好的新平板中划线纯化，于28℃培养箱中培养。待有菌落长出后，挑取单菌落再次划线纯化，重复2-3次，得到纯化菌株。

4.菌株的筛选

按照下述配方提前制备脱氮液体培养基：柠檬酸钠5g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，NaCl 2g，FeSO₄·7H₂O 0.04g，MnSO₄·4H₂O 0.01g，K₂HPO₄ 1g，蒸馏水1000mL，pH为7-7.5。在无菌条件下用接种环将上一步得到的纯化菌株接种于装有50mL脱氮液体培养基的100mL锥形瓶中，将锥形瓶置于摇床中于28℃、165r/min条件下振荡培养24h。培养结束后离心取上清液，用纳式试剂分光光度法测定上清液氨氮浓度，用紫外分光光度法测定上清液硝酸氮浓度，用N-(1-萘基)-乙二胺光度法测定上清液中的亚硝酸氮浓度，筛选出上清液中氨氮浓度、亚硝酸盐浓度、硝酸盐浓度低的纯化菌株，最终得到两株稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3和K17。这两株菌株均已于2019年12月16日保藏至中国典型微生物保藏中心，对应的保藏编号分别为：CCTCC NO:M 20191055和CCTCC NO:M 20191056。

5.菌种鉴定

将上述两株纯化菌株送到上海美吉生物医药科技有限公司进行16srDNA测序。鉴定结果表明，其中一株菌株K3归属于黄褐假单胞菌(Pseudomonas fulva)，保藏编号为CCTCC NO:M 20191055，其16s rDNA序列如图1所示；另外一株菌株K17归属于摩氏假单胞菌，保藏编号为CCTCC NO:M 20191056，其16s rDNA序列如图2所示。

为弄清楚上述两株稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3和K17的脱氮性能，分别进行了下述脱氮实验。

实施例1

将保存在试管斜面、4℃环境中的稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3接种至含脱氮固体培养基的平板中(平板制备方法参见3-(2))，于28℃下培养12h，实现菌株活化。无菌条件下用接种环将活化后的菌株接种到装有100mL脱氮液体培养基的250mL锥形瓶中，将锥形瓶置于摇床中于28℃、165r/min条件下振荡培养12h，得到种子液。以脱氮液体培养基为基础，调整其氨氮初始浓度为100mg/L、C/N比为12，得到稀土浸矿场地模拟淋出液。以2％的接种量将种子液接种至100mL灭菌后的稀土浸矿场地模拟淋出液中，于28℃、165r/min条件下进行振荡培养，定时取样测定培养液中氨氮含量、OD600、亚硝酸氮含量、硝酸氮含量，绘制得到图3。

由图3可知，接种种子液处理10h后稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的100mg/L下降至2.6mg/L，计算可知氨氮去除率高达97.4％；亚硝酸盐的累积量为0.09mg/L，硝酸盐的最终累积量为3.8mg/L。该结果说明，按照上述方案分离、纯化所得稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3对模拟淋出液具有较好的处理能力，能够做到达标排放。

实施例2

参照实施例1方法制得种子液。以脱氮液体培养基为基础，调整其氨氮初始浓度为200mg/L、C/N比为12，得到稀土浸矿场地模拟淋出液。以2％的接种量将种子液接种至100mL灭菌后的稀土浸矿场地模拟淋出液中，于28℃、165r/min条件下进行振荡培养，定时取样测定培养液中氨氮含量、OD600、亚硝酸氮含量、硝酸氮含量，绘制得到图4。

由图4可知，接种种子液处理24h后稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的200mg/L下降至1.4mg/L，计算可知氨氮去除率高达99.3％；亚硝酸盐的累积量为0mg/L，硝酸盐的最终累积量为2.2mg/L。

实施例3

参照实施例1方法制得种子液。以脱氮液体培养基为基础，调整其氨氮初始浓度为300mg/L、C/N比为12，得到稀土浸矿场地模拟淋出液。以2％的接种量将种子液接种至100mL灭菌后的稀土浸矿场地模拟淋出液中，于28℃、165r/min条件下进行振荡培养，定时取样测定培养液中氨氮含量、OD600、亚硝酸氮含量、硝酸氮含量，绘制得到图5。

由图5可知，接种种子液处理48h后稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的300mg/L下降至12.37mg/L，计算可知氨氮去除率高达95.8％；亚硝酸盐的累积量为0.07mg/L，硝酸盐的最终累积量为5.3mg/L。

实施例4

实施例4与实施例1基本相同，不同之处在于：将脱氮液体培养基中的硫酸铵替换为硝酸钠，调整硝酸氮的初始浓度为100mg/L、保持C/N为12。接种菌株K3种子液处理24h后，培养液中硝酸氮浓度由最初的100mg/L下降至1.46mg/L，计算可知硝酸氮去除率达到98.54％。

实施例5

实施例5与实施例1基本相同，不同之处在于：将脱氮液体培养基中的硫酸铵替换为亚硝酸钠，调整亚硝酸氮的初始浓度为100mg/L、保持C/N为12。接种菌株K17种子液处理24h后培养液中亚硝酸氮浓度由最初的100mg/L下降至0.03mg/L，计算可知亚硝酸氮去除率达到99.97％。

实施例6

实施例6与实施例1基本相同，不同之处在于：将稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株由K3更换为K17。

实施例6的实验结果如图6所示。由图中可以看出，接种种子液处理8h左右稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的100mg/L下降至5.9mg/L，计算可知氨氮去除率高达94.1％；亚硝酸盐的累积量为0.044mg/L，硝酸盐的最终累积量为4.4mg/L。

实施例7

实施例7与实施例2基本相同，不同之处在于：将稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株由K3更换为K17。

实施例7的实验结果如图7所示。由图中可以看出，接种种子液处理24h左右稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的200mg/L下降至0.2mg/L，计算可知氨氮去除率高达99.9％；未检出亚硝酸盐含量变化，硝酸盐的最终累积量为4.00mg/L。

实施例8

实施例8与实施例3基本相同，不同之处在于：将稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株由K3更换为K17。

实施例8的实验结果如图8所示。由图中可以看出，接种种子液处理48h左右稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的300mg/L下降至10.7mg/L，计算可知氨氮去除率高达96.4％；亚硝酸盐的累积量为0mg/L，硝酸盐的最终累积量为2.50mg/L。

实施例9

实施例9与实施例6基本相同，不同之处在于：将脱氮液体培养基中的硫酸铵替换为硝酸钠，调整硝酸氮的初始浓度为100mg/L、保持C/N为12。接种菌株K17种子液处理24h后，培养液中硝酸氮浓度由最初的100mg/L下降至9.8mg/L，计算可知硝酸氮去除率达到90.2％。

实施例10

实施例10与实施例6基本相同，不同之处在于：将脱氮液体培养基中的硫酸铵替换为亚硝酸钠，调整亚硝酸氮的初始浓度为100mg/L、保持C/N为12。接种菌株K17种子液处理24h后，培养液中亚硝酸氮氨氮浓度由最初的100mg/L下降至5.89mg/L，计算可知亚硝酸氮去除率达到94.11％。

实施例11

从江西省赣州市龙南县某离子型稀土矿浸矿场地采集淋出液，经检测确认其氨氮浓度为290.5mg/L,硝酸氮和亚硝酸氮未检出，pH为4.52。向该淋出液样品中添加适量柠檬酸钠，保持C/N为12，再添加一定量MgSO₄·7H₂O(0.5g/L)，NaCl(2g/L)，K₂HPO₄(1g/L)等物质至上述淋出液中(根据文献描述，淋出液中含FeSO₄·7H₂O 0.04g，MnSO₄·4H₂O 0.01g等微量元素)，用氢氧化钠溶液调节其pH至7.2，得到配制好的待处理淋出液。按照实施例1的方法制得菌株K3种子液，以3％的接种量将菌株K3接种到待处理淋出液中进行微生物脱氮处理，48h后溶液中氨氮浓度降至11.63mg/L，亚硝酸氮积累量为0.67mg/L，硝酸氮积累量为10.25mg/L。

实施例12

从江西省赣州市龙南县某离子型稀土矿浸矿场地采集到的淋出液，经检测其氨氮浓度为290.5mg/L,硝酸氮和亚硝酸氮未检出，pH为4.52。向该淋出液样品中添加适量柠檬酸钠，保持C/N为12，并添加一定量MgSO₄·7H₂O(0.5g/L)，NaCl(2g/L)，K₂HPO₄(1g/L)等物质至上述淋出液中，用氢氧化钠溶液调节其pH至7.2，得到配制好的待处理淋出液。按照实施例1的方法制得菌株K17种子液，以3％的接种量将菌株K17接种到待处理淋出液中进行微生物脱氮处理，48h后待处理淋出液中氨氮浓度降至8.66mg/L，亚硝酸氮积累量为2.34mg/L，硝酸氮积累量为13.64mg/L。

SEQUENCE LISTING

<110> 武汉工程大学

<120> 稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株黄褐假单胞菌K3和摩氏假单胞菌K17及

其应用

<130> 1

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1286

<212> DNA

<213> Pseudomonas fulva

<400> 1

gacgggcggt gtgtacaagg cccgggaacg tattcaccgt gacattctga ttcacgatta 60

ctagcgattc cgacttcacg cagtcgagtt gcagactgcg atccggacta cgatcggttt 120

tatgggatta gctccacctc gcggcttggc aaccctttgt accgaccatt gtagcacgtg 180

tgtagccctg gccgtaaggg ccatgatgac ttgacgtcat ccccaccttc ctccggtttg 240

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gctcgttacg ggacttaacc caacatctca cgacacgagc tgacgacagc catgcagcac 360

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ccccactaat aggcagattc ctaggc 1286

<210> 2

<211> 1289

<212> DNA

<213> Pseudomonas mosselii

<400> 2

tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac gtattcaccg cgacattctg attcgcgatt 60

actagcgatt ccgacttcac gcagtcgagt tgcagactgc gatccggact acgatcggtt 120

ttgtgagatt agctccacct cgcggcttgg caaccctctg taccgaccat tgtagcacgt 180

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gcctggtaag gttcttcgcg ttgcttcgaa ttaaaccaca tgctccaccg cttgtgcggg 480

cccccgtcaa ttcatttgag ttttaacctt gcggccgtac tccccaggcg gtcaacttaa 540

tgcgttagct gcgccactaa aatctcaagg attccaacgg ctagttgaca tcgtttacgg 600

cgtggactac cagggtatct aatcctgttt gctccccacg ctttcgcacc tcagtgtcag 660

tatcagtcca ggtggtcgcc ttcgccactg gtgttccttc ctatatctac gcatttcacc 720

gctacacagg aaattccacc accctctacc gtactctagc tcgccagttt tggatgcagt 780

tcccaggttg agcccggggc tttcacatcc aacttaacga accacctacg cgcgctttac 840

gcccagtaat tccgattaac gcttgcaccc tctgtattac cgcggctgct ggcacagagt 900

tagccggtgc ttattctgtc ggtaacgtca aaacagcaag gtattaactt actgcccttc 960

ctcccaactt aaagtgcttt acaatccgaa gaccttcttc acacacgcgg catggctgga 1020

tcaggctttc gcccattgtc caatattccc cactgctgcc tcccgtagga gtctggaccg 1080

tgtctcagtt ccagtgtgac tgatcatcct ctcagaccag ttacggatcg tcgccttggt 1140

gagccattac ctcaccaact agctaatccg acctaggctc atctgatagc gcaaggcccg 1200

aaggtcccct gctttctccc gtaggacgta tgcggtatta gcgttccttt cgaaacgttg 1260

tcccccacta ccaggcagat tcctaggca 1289

Claims

1.两株稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株，其特征在于：其中一株K3归属于黄褐假单胞菌(Pseudomonas fulva)，已于2019年12月16日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20191055；另外一株K17归属于摩氏假单胞菌(Pseudomonasmosselii)，已于2019年12月16日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M20191056。

2.权利要求1所述的两株稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株在含氨氮废水微生物脱氮方面的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述含氨氮废水具体为稀土浸矿场地淋出液，其氨氮含量不超过300mg/L。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于：应用时首先将至少一株稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株活化，然后制成种子液，最后将单一或复合种子液接种到含氨氮废水中培养，进行微生物脱氮。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于菌株活化过程如下：将稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3或K17接种至脱氮固体培养基中倒置平板培养即可，培养温度：28-30℃，培养时间：12-36h，所述脱氮固体培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖或柠檬酸钠3-6份，(NH₄)₂SO₄ 0.3-0.6份，MgSO₄·7H₂O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，FeSO₄·7H₂O 0.01-0.05份，MnSO₄·4H₂O 0.01-0.04份，K₂HPO₄0.5-1.5份，蒸馏水1000份，琼脂15-20份，pH为7-7.5。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于种子液的制备方法如下：将活化后的稀土浸矿场地土壤土著高效脱氮菌株K3或K17接种至脱氮液体培养基中振荡培养即可，培养温度：28-30℃，培养时间：12-36h，摇床转速：150-170r/min，所述脱氮液体培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖或柠檬酸钠5-20份，(NH₄)₂SO₄ 0.5-2份，MgSO₄·7H₂O 0.3-0.5份，NaCl1.5-3份，FeSO₄·7H₂O 0.01-0.05份，MnSO₄·4H₂O 0.01-0.04份，K₂HPO₄ 0.5-1.5份，蒸馏水1000份，pH为7-7.5。

7.如权利要求4所述的应用，其特征在于：含氨氮废水中单一或复合种子液的接种量为(2-5)％，接种完成后的培养温度为28-30℃，摇床转速为150-170r/min。