CN111647520B - 稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株贝氏不动杆菌a9和杨氏柠檬酸杆菌a13及其应用 - Google Patents
稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株贝氏不动杆菌a9和杨氏柠檬酸杆菌a13及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株贝氏不动杆菌A9和杨氏柠檬酸杆菌A13及其应用。该菌株分别归属于贝氏不动杆菌(Acinetobacter baylyi)和杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，均已于2020年01月10日移送至中国典型培养物保藏中心保藏，对应的保藏编号为CCTCC NO:M 2020031和CCTCC NO:M 2020030。这两株菌株均来源于稀土浸矿场地淋出液，均为异养硝化‑好氧反硝化脱氮菌株，能在好氧条件下借助有机碳源高效脱除稀土浸矿场地淋出液中的氨氮，同时对硝酸盐和亚硝酸盐也有较好的去除效果，具有适应能力强、脱氮效率高等优点。
Description
技术领域
本发明涉及微生物及污水处理技术领域，具体涉及稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株贝氏不动杆菌A9和杨氏柠檬酸杆菌A13及其应用。
背景技术
稀土元素在新材料、新科技、新能源等诸多领域中应用越来越广泛，是许多国家的国家发展战略储备资源。我国稀土资源丰富，具有稀土元素配方全、储量大等优点，这些稀土资源对于我国具有极高的经济、战略价值。离子型稀土矿是我国特有的稀土矿，其所含的中、重稀土高，自上世纪七十年代我国首次开发利用离子型稀土矿以来，先后开发了池浸、堆浸和原地浸出工艺，浸取剂也从氯化钠逐步替换为硫酸铵。然而硫酸铵的使用导致稀土浸矿场地残留了大量铵盐，这是稀土矿区环境恢复急需解决的难题。针对这一问题已经有学者开发了相应的洗脱剂，利用其洗脱稀土浸矿场地残留铵盐，并通过收液系统收集淋出液集中处理，这种方法在一定程度上解决了稀土浸矿场地铵盐残留问题，降低了对稀土矿区及周边环境的污染。
稀土浸矿场地淋出液的主要待处理成分是硫酸铵，且淋出液的C/N低，具有一定盐度(含有大量硫酸根离子及少量铝、铁、硅、钙、铅等金属离子)，其pH偏酸性。总之，稀土浸矿场地淋出液是一种成分复杂的酸性矿山氨氮废水。如果实现了稀土浸矿场地淋出液中氨氮的高效脱除，对稀土浸矿场地环境恢复有极大帮助。
现有氨氮废水的处理方法较为成熟，主要分为两大类：物理化学法和生物法。物理化学法中，吹脱法和化学沉淀法在中高浓度氨氮废水中应用较多，通常用于高浓度氨氮废水的预处理；除此之外的吸附法、折点氯化法易造成二次污染，应用受限；离子交换法成本高，无法大规模工业化应用。生物法在低浓度氨氮废水的处理上应用较多，且相对物理化学法具有环境友好、成本低等优势。生物法又分为传统生物法和新型生物法，传统生物法是利用自养硝化细菌和厌氧反硝化细菌分别进行硝化过程和反硝化过程，硝化、反硝化过程不能同时进行。然而异养硝化-好氧反硝化菌的发现打破了该概念。异养硝化-好氧反硝化菌能在好氧和有机碳条件下，同时进行硝化-反硝化过程，能节约设备建筑面积、降低成本且脱氮速率快。研究表明，异养硝化-好氧反硝化菌在自然界中大量存在，目前已从假单胞菌属、不动杆菌属、副球菌属等菌属中发现了异养硝化-好氧反硝化菌。
在稀土浸矿场地浸出液中，大量残留铵盐是天然的微生物筛选条件，生活在其中的微生物在耐受氨氮、脱除氨氮等方面往往具有极大优势。因此，从稀土浸矿场地淋出液中筛选异养硝化-好氧反硝化菌株，并反过来利用其脱除稀土浸矿场地淋出液中的氨氮，具有极高的实践意义，对稀土矿区环境污染治理有重要作用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有微生物脱氮技术中普遍存在的外来脱氮菌种对稀土浸矿场地淋出液不耐受、脱氮能力不够强等不足，开发了稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株贝氏不动杆菌A9和杨氏柠檬酸杆菌A13，为稀土浸矿场地淋出液的高效、环境友好以及低成本微生物脱氮提供了一种有望工业化应用的新选择。
本发明的目的之一在于提供两株稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9和A13，经鉴定分别属于贝氏不动杆菌(Acinetobacter baylyi)和杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)。这两株菌株均已于2020年01月10日保藏在中国典型培养物保藏中心(地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学校内)，对应的保藏编号为：CCTCC NO:M2020031和CCTCC NO:M 2020030。
本发明的另一目的在于将上述两株稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株用于含氨氮废水的微生物脱氮处理。
进一步的，所述含氨氮废水具体为稀土浸矿场地淋出液，其氨氮含量不超过300mg/L。
进一步的，上述应用的具体过程如下：将稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9或A13活化后制成种子液，将单一或复合种子液接种到含氨氮废水中培养即可。所述复合种子液由A9种子液和A13种子液按照任意体积比混合而成。
进一步的，菌株活化过程如下：将稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9或A13接种至脱氮固体培养基中倒置平板培养即可，培养温度：28-30℃，培养时间：12-36h。所述脱氮固体培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖或柠檬酸钠3-6份，(NH4)2SO4 0.3-0.6份，MgSO4·7H2O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，FeSO4·7H2O 0.01-0.05份，MnSO4·4H2O 0.01-0.04份，K2HPO4 0.5-1.5份，蒸馏水1000份，琼脂15-20g，pH为7-7.5。
进一步的，种子液的制备方法如下：将活化后的稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9或A13接种至脱氮液体培养基中振荡培养即可，培养温度：28-30℃，培养时间：12-36h，摇床转速：150-170r/min。所述脱氮液体培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖或柠檬酸钠5-20份，(NH4)2SO4 0.5-2份，MgSO4·7H2O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，FeSO4·7H2O0.01-0.05份，MnSO4·4H2O 0.01-0.04份，K2HPO4 0.5-1.5份，蒸馏水1000份，pH为7-7.5。
进一步的，含氨氮废水中种子液的接种量为(2-5)％，接种完成后的培养温度为28-30℃，摇床转速为150-170r/min。
与现有同类菌株相比，本发明具有以下有益效果：本发明提供的两株菌株直接来源于稀土浸矿场地淋出液，具有较好的耐受能力和适应性，在好氧条件下能充分利用有机碳源脱除稀土浸矿场地淋出液中的氨氮，脱氮率达到90％以上。
附图说明
图1为稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9的16s rDNA基因序列；
图2为稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A13的16s rDNA基因序列；
图3为稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9在初始氨氮浓度为100mg/L的模拟淋出液中的生长、脱氮规律；
图4为稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9在初始氨氮浓度为200mg/L的模拟淋出液中的生长、脱氮规律；
图5为稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9在初始氨氮浓度为300mg/L的模拟淋出液中的生长及脱氮规律；
图6为稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A13在初始氨氮浓度为100mg/L的模拟淋出液中的生长、脱氮规律；
图7为稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A13在初始氨氮浓度为200mg/L的模拟淋出液中的生长、脱氮规律；
图8为稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A13在初始氨氮浓度为300mg/L的模拟淋出液中的生长及脱氮规律。
具体实施方式
为使本领域普通技术人员充分理解本发明的技术方案和有益效果，以下结合具体实施例进行进一步说明。
稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9和A13的富集、分离、筛选、鉴定过程具体如下：
1.稀土浸矿场地淋出液样品的采集
2019年11月到江西赣州市龙南县某稀土浸矿场地进行采样。从稀土浸矿场地淋出液集液池、集液沟中采集新鲜的淋出液样品，装入保鲜塑料瓶后用0-4℃的冰盒保藏好，每1-2m2的区域内采集5个点，每个点采集100-200mL淋出液样品。采样完成后，将所有样品迅速带回实验室。
2.稀土浸矿场地淋出液样品中微生物的富集
按照下述配方提前配制脱氮富集培养基：柠檬酸钠5g，(NH4)2SO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，NaCl 2g，FeSO4·7H2O 0.04g，MnSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，蒸馏水1000mL，pH为7-7.5。将采集到的淋出液样品与脱氮富集培养基按照1:2的体积比混合均匀，所得混合物置于摇床中，于28℃、165r/min条件下振荡培养2天，得到第一次富集的淋出液微生物富集培养液。将第一次富集的淋出液微生物富集培养液与脱氮富集培养基按照1:4的体积比混合均匀，所得混合物置于摇床中，于28℃、165r/min条件下振荡培养2天，得到第二次富集的淋出液微生物富集培养液。将第二次富集的淋出液微生物富集培养液与脱氮富集培养基按照1:4的体积比混合均匀，所得混合物置于摇床中，于28℃、165r/min条件下发酵培养2天，得到淋出液微生物富集培养液。
3.菌株的分离纯化
(1)采用梯度稀释法稀释淋出液微生物富集培养液，具体做法如下：用1000μL的移液枪吸取1mL淋出液微生物富集培养液，加入至含9mL无菌水的灭菌试管中，混匀后得10-1浓度的菌悬液；更换枪头，用1000μL的移液枪吸取1mL、10-1稀释倍数的菌悬液，加入至含9mL无菌水的灭菌试管中，混匀后得10-2稀释倍数的菌悬液；按照上述方法依次得到10-1、10-2、10-3、10-4、10-5稀释倍数的菌悬液。
(2)采用平板涂布法分离菌株。按照下列配方提前制备脱氮固体培养基：柠檬酸钠5g，(NH4)2SO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，NaCl 2g，FeSO4·7H2O 0.04g，MnSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1g，蒸馏水1000mL，琼脂15-20g，pH为7-7.5。取15-20mL灭菌后的脱氮固体培养基，倒入灭菌后的培养皿中制成若干个平板。用移液枪分别吸取不同稀释倍数的菌悬液各0.1mL，滴入已制好的平板中并用涂布棒涂布均匀。接种完成后，先静置20-30min，随后放入28℃培养箱中倒置培养2d。
(3)采用平板划线法纯化菌株。分别取15-20mL灭菌后的脱氮固体培养基，倒入灭菌后的培养皿中制成若干个平板。用接种环挑取上一步涂布平板中长势较好的单菌落，在已制好的新平板中划线纯化，于28℃培养箱中培养。待有菌落长出后，挑取单菌落再次划线纯化，重复2-3次，得到纯化菌株。
4.稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株的筛选
按照下述配方提前制备脱氮液体培养基：柠檬酸钠5g，(NH4)2SO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，NaCl 2g，FeSO4·7H2O 0.04g，MnSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1g，蒸馏水1000mL，pH为7-7.5。在无菌条件下用接种环将上一步得到的纯化菌株接种于装有50mL脱氮液体培养基的100mL锥形瓶中，将锥形瓶置于摇床中于28℃、165r/min条件下振荡培养24h。培养结束后离心取上清液，用纳式试剂分光光度法测定上清液氨氮浓度，用紫外分光光度法测定上清液硝酸氮浓度，用N-(1-萘基)-乙二胺光度法测定上清液中的亚硝酸氮浓度，筛选出上清液中氨氮浓度、亚硝酸盐浓度、硝酸盐浓度低的纯化菌株，最终得到两株稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9和A13。这两株菌株均已于2020年01月10日保藏至中国典型微生物保藏中心，对应的保藏编号为：CCTCC NO:M2020031和CCTCC NO:M 2020030。
5.菌种鉴定
将上述两株纯化菌株送到上海美吉生物医药科技有限公司进行16s rDNA测序。鉴定结果表明，其中一株菌株A9归属于贝氏不动杆菌(Acinetobacter baylyi)，保藏编号为CCTCC NO:M2020031，其16s rDNA序列如图1所示。另外一株菌株A13归属于杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，保藏编号为CCTCC NO:M 2020030，其16s rDNA序列如图2所示。
为弄清楚上述两株稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9和A13的脱氮性能，分别进行了下述脱氮实验。
实施例1
将保存在试管斜面、4℃环境中的稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9接种至含脱氮固体培养基的平板中(平板制备方法参见3-(2))，于28℃下倒置培养12h，实现菌株活化。无菌条件下用接种环将活化后的菌株接种到装有100mL脱氮液体培养基的250mL锥形瓶中，将锥形瓶置于摇床中于28℃、165r/min条件下振荡培养12h，得到种子液。以脱氮液体培养基为基础，调整其氨氮初始浓度为100mg/L、C/N比为12，得到稀土浸矿场地模拟淋出液。以2％的接种量将种子液接种至100mL灭菌后的稀土浸矿场地模拟淋出液中，于28℃、165r/min条件下进行振荡培养，定时取样测定培养液中氨氮含量、OD600、亚硝酸氮含量、硝酸氮含量，绘制得到图3。
由图3可知，接种种子液处理12h后稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的100mg/L下降至1.25mg/L，计算可知氨氮去除率高达98.75％；同时未检测到亚硝酸盐含量变化，硝酸盐的最终累积量为3.79mg/L。
实施例2
参照实施例1方法制得种子液。以脱氮液体培养基为基础，调整其氨氮初始浓度为200mg/L、C/N比为12，得到稀土浸矿场地模拟淋出液。以2％的接种量将种子液接种至100mL灭菌后的稀土浸矿场地模拟淋出液中，于28℃、165r/min条件下进行振荡培养，定时取样测定培养液中氨氮含量、OD600、亚硝酸氮含量、硝酸氮含量，绘制得到图4。
由图4可知，接种种子液处理36h后稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的200mg/L下降至1mg/L，计算可知氨氮去除率高达99.5％；同时未检测到亚硝酸盐含量变化，硝酸盐的最终累积量为8.07mg/L。
实施例3
参照实施例1方法制得种子液。以脱氮液体培养基为基础，调整其氨氮初始浓度为300mg/L、C/N比为12，得到稀土浸矿场地模拟淋出液。以2％的接种量将种子液接种至100mL灭菌后的稀土浸矿场地模拟淋出液中，于28℃、165r/min条件下进行振荡培养，定时取样测定培养液中氨氮含量、OD600、亚硝酸氮含量、硝酸氮含量，绘制得到图5。
由图5可知，接种种子液处理48h后稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的300mg/L下降至5.79mg/L，计算可知氨氮去除率高达98.07％；同时未检测到亚硝酸盐含量变化，硝酸盐的最终累积量为14.67mg/L。
实施例4
实施例4与实施例1基本相同，不同之处在于：将脱氮液体培养基中的硫酸铵替换为硝酸钠，调整硝酸氮的初始浓度为100mg/L、保持C/N为12。接种菌株K3种子液处理24h后，培养液中硝酸氮浓度由最初的100mg/L下降至18.11mg/L，计算可知硝酸氮去除率达到81.89％。
实施例5
实施例5与实施例1基本相同，不同之处在于：将脱氮液体培养基中的硫酸铵替换为亚硝酸钠，调整亚硝酸氮的初始浓度为100mg/L、保持C/N为12。接种菌株K17种子液处理24h后，培养液中亚硝酸氮氨氮浓度由最初的100mg/L下降至25.75mg/L，计算可知亚硝酸氮去除率达到74.25％。
实施例6
实施例6与实施例1基本相同，不同之处在于：将稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株由A9更换为A13。
实施例6的实验结果如图6所示。由图中可以看出，接种种子液处理24h左右稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的100mg/L下降至2.07mg/L，计算可知氨氮去除率高达97.93％；同时未检测到亚硝酸盐含量变化，硝酸盐的最终累积量为4.76mg/L。
实施例7
实施例7与实施例2基本相同，不同之处在于：将稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株由A9更换为A13。
实施例7的实验结果如图7所示。由图中可以看出，接种种子液处理48h左右稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的200mg/L下降至2.35mg/L，计算可知氨氮去除率高达98.82％；未检出亚硝酸盐含量变化，硝酸盐的最终累积量为2.82mg/L。
实施例8
实施例8与实施例3基本相同，不同之处在于：将稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株由A9更换为A13。
实施例8的实验结果如图8所示。由图中可以看出，接种种子液处理60h左右稀土浸矿场地模拟淋出液中氨氮浓度由最初的300mg/L下降至16.16mg/L，计算可知氨氮去除率高达94.61％；未检出亚硝酸盐含量变化，硝酸盐的最终累积量为3.21mg/L。
实施例9
实施例9与实施例4基本相同，不同之处在于：将脱氮液体培养基中的硫酸铵替换为硝酸钠，调整硝酸氮的初始浓度为100mg/L、保持C/N为12。接种菌株K17种子液处理24h后，培养液中硝酸氮浓度由最初的100mg/L下降至5.54mg/L，计算可知硝酸氮去除率达到94.46％。
实施例10
实施例10与实施例4基本相同，不同之处在于：将脱氮液体培养基中的硫酸铵替换为亚硝酸钠，调整亚硝酸氮的初始浓度为100mg/L、保持C/N为12。接种菌株K17种子液处理24h后，培养液中亚硝酸氮浓度由最初的100mg/L下降至6.25mg/L，计算可知亚硝酸氮去除率达到93.75％。
实施例11
从江西省赣州市龙南县某离子型稀土矿浸矿场地采集的淋出液，经检测其氨氮浓度为116.5mg/L,硝酸氮和亚硝酸氮未检出，pH为7.65。添加适量柠檬酸钠至上述淋出液中，保持C/N为12，并添加一定量MgSO4·7H2O(0.5g/L)，NaCl(2g/L)，K2HPO4(1g/L)等物质至上述淋出液中(根据文献描述，淋出液中含FeSO4·7H2O 0.04g，MnSO4·4H2O 0.01g等微量元素)，得到配制好的待处理淋出液。按照实施例1的方法制得菌株A9的种子液，以3％的接种量将菌株A9种子液接种到待处理淋出液中，24h后溶液的氨氮浓度降至2.56mg/L，亚硝酸氮积累量为0.13mg/L,硝酸氮积累量为6.15mg/L。
实施例12
从江西省赣州市龙南县某离子型稀土矿浸矿场地采集的淋出液，经检测其氨氮浓度为116.5mg/L,硝酸氮和亚硝酸氮未检出，pH为7.65。添加适量柠檬酸钠至上述淋出液中，保持C/N为12，并添加一定量MgSO4·7H2O(0.5g/L)，NaCl(2g/L)，K2HPO4(1g/L)等物质至上述淋出液中，得到配制好的待处理淋出液。按照实施例1的方法制得菌株A13的种子液，以3％的接种量将菌株A13种子液接种到待处理淋出液中，24h后溶液的氨氮浓度降至1.65mg/L，亚硝酸氮积累量为0.08mg/L,硝酸氮积累量为6.89mg/L。
SEQUENCE LISTING
<110> 武汉工程大学
<120> 稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株贝氏不动杆菌A9和杨氏柠檬酸杆菌A
13及其应用
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accgatggcg aaggcagcca tctggcctaa cactgacgct gaggtgcgaa agcatgggga 660
gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca tgccgtaaac gatgtctact agccgttggg 720
gcctttgagg ctttagtggc gcagctaacg cgataagtag accgcctggg gagtacggtc 780
gcaagactaa aactcaaatg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt 840
aattcgatgc aacgcgaaga accttacctg gccttgacat agtagaaact ttccagagat 900
ggattggtgc cttcgggaat ctacatacag gtgctgcatg gctgtcgtca gctcgtgtcg 960
tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaacccttt tccttacttg ccagcatttc 1020
ggatgggaac tttaaggata ctgccagtga caaactggag gaaggcgggg acgacgtcaa 1080
gtcatcatgg cccttacggc cagggctaca cacgtgctac aatggtcggt acaaagggtt 1140
gctacctagc gataggatgc taatctcaaa aagccgatcg tagtccggat tggagtctgc 1200
aactcgactc catgaagtcg gaatcgctag taatcgcgga tcagaatgcc gcggtgaata 1260
cgttcccggg ccttgtacac accgc 1285
<210> 2
<211> 1288
<212> DNA
<213> Citrobacter youngae
<400> 2
gagtaatgtc tgggaaactg cccgatggag ggggataact actggaaacg gtagctaata 60
ccgcataacg tcgcaagacc aaagaggggg accttcgggc ctcttgccat cggatgtgcc 120
cagatgggat tagctagtag gtggggtaac ggctcaccta ggcgacgatc cctagctggt 180
ctgagaggat gaccagccac actggaactg agacacggtc cagactccta cgggaggcag 240
cagtggggaa tattgcacaa tgggcgcaag cctgatgcag ccatgccgcg tgtatgaaga 300
aggccttcgg gttgtaaagt actttcagcg aggaggaagg tgttgtggtt aataaccgca 360
gcaattgacg ttactcgcag aagaagcacc ggctaactcc gtgccagcag ccgcggtaat 420
acggagggtg caagcgttaa tcggaattac tgggcgtaaa gcgcacgcag gcggtctgtc 480
aagtcggatg tgaaatcccc gggctcaacc tgggaactgc atccgaaact ggcaggctag 540
agtcttgtag aggggggtag aattccaggt gtagcggtga aatgcgtaga gatctggagg 600
aataccggtg gcgaaggcgg ccccctggac aaagactgac gctcaggtgc gaaagcgtgg 660
ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccacgccgta aacgatgtcg acttggaggt 720
tgtgcccttg aggcgtggct tccggagcta acgcgttaag tcgaccgcct ggggagtacg 780
gccgcaaggt taaaactcaa atgaattgac gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg 840
tttaattcga tgcaacgcga agaaccttac ctactcttga catccagaga acttagcaga 900
gatgctttgg tgccttcggg aactctgaga caggtgctgc atggctgtcg tcagctcgtg 960
ttgtgaaatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttatcctttg ttgccagcgg 1020
ttaggccggg aactcaaagg agactgccag tgataaactg gaggaaggtg gggatgacgt 1080
caagtcatca tggcccttac gagtagggct acacacgtgc tacaatggca tatacaaaga 1140
gaagcgacct cgcgagagca agcggacctc ataaagtatg tcgtagtccg gattggagtc 1200
tgcaactcga ctccatgaag tcggaatcgc tagtaatcgt ggatcagaat gccacggtga 1260
atacgttccc gggccttgta cacaccgc 1288
Claims (8)
1.稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9，其特征在于：该菌株归属于贝氏不动杆菌(Acinetobacter baylyi)，已于2020年01月10日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2020031。
2.稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A13，其特征在于：该菌株归属于杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)，已于2020年01月10日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2020030。
3.权利要求1或2所述的稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株在含氨氮废水微生物脱氮方面的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述含氨氮废水具体为稀土浸矿场地淋出液，其氨氮含量不超过300mg/L。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于：应用时首先将稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9或A13活化，然后制成种子液，最后将其中一种种子液接种到含氨氮废水中培养，进行微生物脱氮即可。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于菌株活化过程如下：将稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9或A13接种至脱氮固体培养基中倒置平板培养即可，培养温度：28-30℃，培养时间：12-36h，所述脱氮固体培养基的配方为：柠檬酸钠5g，(NH4)2SO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，NaCl 2g，FeSO4·7H2O 0.04g，MnSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1g，蒸馏水1000mL，琼脂15-20g，pH为7-7.5。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于种子液的制备方法如下：将活化后的稀土浸矿场地淋出液土著高效脱氮菌株A9或A13接种至脱氮液体培养基中振荡培养即可，培养温度：28-30℃，培养时间：12-36h，摇床转速：150-170r/min，所述脱氮液体培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖或柠檬酸钠 5-20份，(NH4)2SO4 0.5-2份，MgSO4·7H2O 0.3-0.5份，NaCl1.5-3份，FeSO4·7H2O 0.01-0.05份，MnSO4·4H2O 0.01-0.04份，K2HPO4 0.5-1.5份，蒸馏水1000份，pH为7-7.5。
8.如权利要求5所述的应用，其特征在于：含氨氮废水中种子液的接种量为(2-5)%，接种完成后的培养温度为28-30℃，摇床转速为150-170r/min。
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Applications Claiming Priority (1)
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2020
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| CN111647520A (zh) | 2020-09-11 |
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