CN111670034A - 用于治疗自身免疫性疾病的吡喃并吡唑类和吡唑并吡啶类免疫调节剂 - Google Patents

用于治疗自身免疫性疾病的吡喃并吡唑类和吡唑并吡啶类免疫调节剂 Download PDF

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CN111670034A CN201880087852.5A CN201880087852A CN111670034A CN 111670034 A CN111670034 A CN 111670034A CN 201880087852 A CN201880087852 A CN 201880087852A CN 111670034 A CN111670034 A CN 111670034A
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哈罗德·斯尼克
梅丽萨·埃格伯特森
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Abstract

本申请公开了如下式I或式II所示的吡喃并吡唑类和吡唑并吡啶类化合物：

Description

用于治疗自身免疫性疾病的吡喃并吡唑类和吡唑并吡啶类免 疫调节剂
相关申请的交叉引用
本申请要求于2017年11月29日递交的第62/592,003号美国临时申请的优先权，其全部内容在此通过援引全部并入本申请。
技术领域
本申请涉及抑制凝血因子XIIa的3-氨基-(7H)-4,5-二氢吡喃并吡唑和3-氨基-4,5,6,7-四氢-5-甲基吡唑并吡啶，它们在凝血酶和其他凝血因子存在的情况下对选择性抑制凝血因子XIIa具有特别的优势，这些化合物可用于治疗自身免疫性疾病。
背景技术
趋化性是响应特定化学梯度的定向运动。除了其他关键的生物过程之外，这种细胞能力对于免疫稳态和炎症的响应是必需的。已经识别出几种趋化因子及其受体，它们提供一种分子机制以协调不同细胞类型响应于各种刺激的运动。例如，趋化因子受体7(CCR7)及其配体(CCL19和CCL21)包括T细胞趋化并在淋巴器官内所需的信号转导轴。CCR7介导的趋化性在研究适应性免疫以及维持耐受性和记忆力方面很重要。
趋化因子被广泛分为稳态趋化因子或炎症性趋化因子。对于炎症性趋化因子，急剧增加的产量可能足以控制趋化响应。对于稳态趋化因子，例如CCL19/21，通过改变受体密度或有效配体浓度来进行信号调节。可以直接(例如增加受体表达)或间接(例如配体的非典型趋化因子受体清除)来实现这种信号调节。实际上，对于CCR7，暴露于血清会促进细胞迁移，并且在血清的存在下T细胞对CCL19/21的趋化响应增强。
PCT WO 2017/123518公开了一种来自高分子量激肽原(HK)的片段是用于加速CCL19介导的趋化性的有效辅因子。该HK片段是必需的并且足以加速CCL19的趋化性，而且对于血清或血浆而言，活性取决于凝血因子XIIa。高分子量激肽原(HK)在炎症中的作用是熟知的，特别是作为九肽缓激肽的亲体分子而出名。
从机理上来看，血清加速的趋化性依赖于活性凝血因子XII(FXIIa)，该因子以可促进HK的分裂而熟知。用这种HK衍生片段肽预处理天然鼠类淋巴细胞可增强T细胞在体内归集到淋巴结。循环辅因子在炎症和损伤部位被激活，以增强淋巴细胞趋化性，表现出炎症与适应性免疫结合的强大机制。尤其是，小分子治疗剂可以调节FXIIa功能并从而产生HK片段而不会显著影响凝血酶激活，提供了一种通过体液辅因子安全地调节免疫细胞趋化性的方法。
发明内容
一方面，本申请涉及如下式I或式II所示的化合物：
Figure BDA0002603691860000021
其中
R1是任选被取代的双环系统；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、(C1-C4)酰胺基、(C1-C4)氟烷基、(C1-C4)氟烷氧基和(C1-C6)氧杂烷基；
X1和X2中的一个选自-O-和-N(QR5)-，另一个选自-CR3R4-；
Q选自直接键、-CH2-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR6-、-SO2-和-SO2NR6-；
R3、R4、R6和R7独立地选自氢和(C1-C6)烷基；
R5选自氢、(C1-C6)烷基、羟基(C2-C6)烷基、三至七元碳环和三至七元杂环。
另一方面，本申请涉及一种用于抑制受试者的因子XIIa的方法，包括例如向受试者施用抑制量的上述的式I或式II化合物。
另一方面，本申请涉及一种在凝血酶和激肽释放酶存在的情况下选择性抑制因子XIIa的方法，包括例如使抑制量的上述的式I或式II化合物与因子XIIa接触。
另一方面，本申请涉及一种用于治疗患者的炎症的方法，包括例如向患者施用治疗有效量的上述的式I或式II的化合物。
另一方面，本申请涉及一种用于治疗患者的免疫失调的方法，包括例如向患者施用治疗有效量的上述的式I或式II的化合物。
另一方面，本申请涉及一种用于治疗患者的血管扩张的方法，包括例如向患者施用治疗有效量的上述的式I或式II的化合物。
另一方面，本申请涉及一种用于治疗患者的血栓形成的方法，包括例如向患者施用治疗有效量的上述的式I或式II的化合物。
根据以下对本申请各个方面的详细描述，本申请的这些和其他目的、特征和优点将变得显而易见。
具体实施方式
一方面，本申请涉及如下式I或式II所示的化合物：
Figure BDA0002603691860000031
在如式I或式II所示的化合物中，R1是任选被取代的双环系统。任选的取代基包括：卤素、羟基、氨基、氰基、氧代、(C1-C6)脂族烃基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、(C1-C4)酰胺基、(C1-C4)烷基磺酰基、[(C1-C4)烷基磺酰基]氨基、(C1-C4)氟烷基、(C1-C4)氟烷氧基、(C1-C6)氧杂烷基、芳基和杂芳基。在一些实施例中，R1是6:6或6:5双环。可以任选被取代的双环系统的实例包括，吲哚、异吲哚、羟吲哚、四氢吲哚、四氢化萘、二氢吲哚、异吲哚啉、四氢喹啉、四氢异喹啉、3,4-二氢-1H-异苯并吡喃、3,4-二氢-2H-苯并吡喃、苯并呋喃、二氢苯并呋喃、四氢苯并呋喃、苯并噻吩、四氢苯并噻吩、吲唑、四氢吲唑、2,3-二氢-1H-茚、萘、四氢化萘、萘啶、四氢萘啶和苯并二氢异吡喃。例如，在一些实施例中，R1可以是含氮双环，例如任选地被取代的四氢喹啉、吲哚、四氢萘啶或四氢吲哚。
在一些实施例中，R1可以是双环系统，任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、羟基、氨基、氰基、氧代、(C1-C8)烃基、(C1-C8)烃氧基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、(C1-C4)酰胺基、(C1-C4)烷基磺酰基、[(C1-C4)烷基磺酰基]氨基、(C1-C4)氟烷基、(C1-C4)氟烷氧基、(C1-C6)氧杂烷基、(C3-C6)碳环、芳基、杂芳基和(C1-C4)烯基。在某些实施例中，(C1-C8)烃基取代基可以选自：直链(C1-C8)烷基、支链(C1-C8)烷基、(C3-C6)环烷基和(C3-C6)环烷基(C1-C3)烷基。在一些实施例中，R1任选地被选自以下的一个至三个取代基取代：卤素、羟基、氨基、氰基、氧代基、(C1-C6)脂族烃基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、(C1-C4)酰胺基、(C1-C4)烷基磺酰基、[(C1-C4)烷基磺酰基]氨基、(C1-C4)氟烷基、(C1-C4)氟烷氧基、(C1-C6)氧杂烷基、芳基和杂芳基。在一些实施例中，R1任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)脂族烃基、(C1-C4)氟烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)酰胺基、(C1-C4)烷基磺酰基、苯基和吡啶基，并且尤其是被氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、三氟甲基、甲氧基、甲磺酰基、乙酰胺基、苯基和吡啶基中的一个或两个取代。
任选被取代的双环系统的一个示例性实施例包括如式I或式II所示的化合物，其中R1可以是下式中的一个：
Figure BDA0002603691860000041
其中
R10选自H、卤素、(C1-C4)烷基和(C3-C6)环烷基；
R11选自H和甲氧基；以及
R12选自H和(C1-C4)烷基。
任选被取代的双环系统的另一个示例性实施例包括如式I或式II所示的化合物，其中R1可以是：
Figure BDA0002603691860000042
其中
R13和R14独立地选自H、卤素、(C1-C4)烷基、氟(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)酰胺基、(C1-C4)烷基磺酰基、苯基和吡啶基；
R15a和R15b独立地选自-H和-(C1-C4)烷基，或者R15a和R15b一起形成氧代。
在一些实施例中，标有星号的碳可以是外消旋的，或者在(R)绝对构型中>90％e.e，或者在(S)绝对构型中>90％e.e.。
在一些实施例中，R1可以是任选被取代的萘啶，尤其是四氢-1,8-萘啶或四氢-1,6-萘啶。
在一个亚属中，如式I或式II所示的化合物是3-氨基-(7H)-4,5-二氢吡喃并吡唑：
Figure BDA0002603691860000051
在另一个亚属中，如式I或式II所示的化合物是3-氨基-4,5,6,7-四氢-5-甲基吡唑并吡啶：
Figure BDA0002603691860000052
在一些实施例中，Q选自直接键、-CH2-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR6-、-SO2-和-SO2NR6-；R6是氢或甲基。
在一些实施例中，R2和R7独立地选自氢和甲基。在一些实施例中，R2和R7都是氢；在另一些实施例中，R2是氢，和R7是甲基。从实施例可以清楚地看出，R2和R7可以连接在六元环的任何碳上，包括都连接在相同的碳上。
在一些实施例中，R3和R4均为氢。
在一些实施例中，R5选自H、(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、羟基(C2-C6)烷基、氟甲基、二氟甲基、苯基、吡啶基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基。
在式I(2-酰基-3-胺类)和式II(1-酰基-3-胺类)的两种主要化合物中，式I是一种通常比其1-酰基-3-胺类同系物更具选择性且更有效的化合物。在2-酰基-3-胺类化合物中，优选的化合物包括其中R3和R4均为氢的那些化合物；Q选自直接键、-CH2-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR6-、-SO2-和-SO2NR6-；R6是氢或甲基，以及R5选自H、(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、氟甲基、二氟甲基、苯基、吡啶基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基。
在本说明书中，术语和取代基保留其定义。
C1-C20烃基(或其任何子集，例如(C1-C6)烃基)包括烷基、环烷基、多环烷基、烯基、炔基、芳基，以及它们的组合。实例包括苄基、苯乙基、环己基甲基、金刚烷基、樟脑基和萘基乙基。烃基是指由氢和碳作为仅有元素组成的任何取代基。脂族烃是非芳族的烃，它们可以是饱和或不饱和的、环状的、直链的或支链的。脂族烃的实例包括异丙基、2-丁烯基、2-丁炔基、环戊基、降冰片基等。芳族烃包括苯(苯基)、萘(萘基)、蒽等。
除非另有说明，否则烷基(或亚烷基)旨在包括直链或支链的饱和烃结构以及它们的组合。烷基是指具有1-20个碳原子，优选1-10个碳原子，进一步优选1-6个碳原子的烷基。烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基等。
环烷基是烃的子集并且包括3-8个碳原子的环状烃基。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、降冰片基等。
除非另有说明，否则术语“碳环”旨在包括其中环原子都是碳但具有任何氧化态的环系统。因此，(C3-C7)碳环是指非芳族系统和芳族系统，包括诸如环丙烷、苯和环己烯等系统；如果没有其他限制，碳环是指单环、双环和多环。
杂环是指脂族或芳族碳环基，其中1-4个碳原子被选自N、O和S的杂原子取代。氮和硫杂原子可任选被氧化，并且氮杂原子可选地被季铵化。除非另有说明，否则杂环可以是非芳族(杂脂族)或芳族(杂芳基)。杂环的实例包括吡咯烷、吡唑、吡咯、吲哚、喹啉、异喹啉、萘啶、四氢异喹啉、苯并呋喃、苯并二恶烷、苯并二氧杂环戊烯(当作为取代基出现时、通常被称为亚甲基二氧苯基)、四唑、吗啉、噻唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、噻吩、呋喃、恶唑、恶唑啉、异恶唑、二恶烷、四氢呋喃等。杂环基的实例包括哌嗪基、哌啶基、吡唑烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡嗪基、恶唑烷基、异恶唑烷基、噻唑烷基、异噻唑基、奎宁环基、异噻唑烷基、苯并咪唑基、噻二唑基、苯并吡喃基、苯并噻唑基、萘啶基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻吩基(曾经也被称为苯硫基)，苯并噻吩基、硫吗啉基、恶二唑基、三唑基和四氢喹啉基。
烃氧基是指通过氧与母体结构连接的具有1-20个碳原子、优选1-10个碳原子、进一步优选1-6个碳原子的基团。烷氧基是烃氧基的子集，并且包括直链或支链构型的基团。实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基等。低级烷氧基是指含有1-4个碳的基团。术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘原子。
除非另有说明，否则酰基是指甲酰基和具有1-8个碳原子的直链、支链、环状构型、饱和、不饱和与芳族，以及它们的组合的基团，通过羰基官能团连接到母体结构上。实例包括乙酰基、苯甲酰基、丙酰基、异丁酰基等。低级酰基是指含有1-4个碳的基团。
当本身被作为取代基时，双键氧被称为“羰基(oxo)”。本领域技术人员将理解，由于羰基是二价自由基，因此在某些情况下(例如在苯基上)它不适合作为取代基，以及其他情况，例如下面的实施例43和44中，可以容纳该取代基。
在本文中，术语“任选被取代”与短语“未被取代或被取代的”可以互换使用。术语“被取代的”是指在特定基团中的一个或多个氢原子被特定取代基取代。例如，被取代的烷基、芳基、环烷基、杂环基等，是指其中每个基团中的一个或多个氢原子被下述取代基取代：卤素、卤代烷基、烃基、酰基、烷氧基烷基、羟基低级烷基、羰基、苯基、杂芳基、苯磺酰基、羟基、烃氧基、卤代烷氧基、氧杂烷基、羧基、烷氧基羰基[-C(＝O)O-烷基]、烷氧基羰基氨基[HNC(＝O)O-烷基]、氨基羰基(也称为甲酰胺基)[-C(＝O)NH2]、烷基氨基羰基[-C(＝O)NH-烷基]、氰基、乙酰氧基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、(烷基)(芳基)氨基烷基、烷基氨基烷基(包括环烷基氨基烷基)、二烷基氨基烷基、二烷基氨基烷氧基、杂环基烷氧基、巯基、烷硫基、亚砜、砜、磺酰基氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、酰基氨基烷基、酰基氨基烷氧基、酰基氨基、脒基、芳基、苄基、杂环基、杂环基烷基、苯氧基、苄氧基、杂芳氧基、羟基亚氨基、烷氧基亚氨基、氧杂烷基、磺酰胺基、三苯甲基、脒基、胍基、脲基、苄氧基苯基和苄氧基。在一个实施例中，1、2或3个氢原子被特定取代基取代。对于烷基和环烷基而言，三个以上的氢原子可以被氟取代；实际上，所有可用的氢原子都可以被氟取代。
氧杂烷基(oxaalkyl)是指其中一个或多个碳(以及与其相关的氢)已被氧取代的烷基。实例包括甲氧基丙氧基和3,6,9-三氧杂癸基等。如本领域所理解的，术语“氧杂烷基”是指氧通过单键与相邻原子键合(形成醚键)的化合物(参看美国化学学会出版的Namingand Indexing of Chemical Substances for Chemical Abstracts第196页，但不受第127(a)条的限制)；而不指如羰基那种双键键合的氧。类似地，硫代烷基和氮杂烷基是指其中一个或多个碳已分别被硫或氮取代的烷基。实例包括乙基氨基乙基和甲硫基丙基。
在一些实施例中，取代基R1可以是任选被取代的6,5-、5,6-或6,6双环AB，其中环A是非芳族，并且其连接点处的碳具有如下所示的特定的绝对构型：
Figure BDA0002603691860000071
在手性中心*处的构型使得环A在纸平面中并且取代基H和羰基位于该平面的上方和下方(如本领域技术人员所理解的，命名(R)或(S)可根据与环中的手性碳相邻的原子的层次而变化)。
本文中的外消旋的、双非外消旋的(ambiscalemic)和非外消旋的(scalemic)或光学纯的化合物的图示采用Maehr J.Chem.Ed.62,114-120(1985)中的表述：实心楔形和虚线楔形用来表示手性元素的绝对构型，波浪线表示对其所代表的键可能产生任何立体化学含义的否认；粗实线和虚实线是表示所示的相对构型，但不表示外消旋特征的几何描述；且楔形轮廓和点线或虚线表示具有不确定的绝对构型的光学纯的化合物。对于文中与楔形轮廓和点线或虚线相对应的命名，将R*和S*定义为表示具有不确定的绝对构型的单一对映异构体。因此，例如，在下面的实施例18和19中，描述了(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮的合成。(R*)和(S*)旨在表示所述产物是具有所述特征(例如NMR、HPLC保留时间等)的单一对映异构体，其中每个手性中心被认为是基于所示配置的旁证，但尚未确认绝对构型。因此，下述的：
Figure BDA0002603691860000081
表示产物是以下两个异构体中的一个，很可能是第一个：
Figure BDA0002603691860000082
当化合物具有不对称中心时，其在本申请权利要求中的描述以简单的线条表示(例如
Figure BDA0002603691860000091
旨在表示该结构包括任何和所有的异构体，而与对映异构体纯度无关。当其在本申请权利要求书中的描述包括楔形、虚线等时(例如
Figure BDA0002603691860000092
)，旨在表示该结构包括至少80％ee，优选>90％ee的相对或绝对构型的异构体。
在引入取代基Rn时通常会对其进行定义，并且在整个说明书和权利要求书中都保留该定义。
化合物的制备可涉及各种化学基团的保护和脱保护。本领域技术人员可以容易地确定对保护和脱保护的需求以及对合适的保护基的选择。用于该目的合适基团已在化学领域的标准教科书中有讨论，例如由T.W.Greene和P.G.M.Wuts出版的Protective Groups inOrganic Synthesis(John Wiley&Sons，纽约，1999年)、in Protecting Group Chemistry(第1版，牛津大学出版社，2000年)、以及March出版的Advanced Organic chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure(第5版，Wiley-Interscience Publication，2001年)。
通常，式I或式II的化合物可如方案I-XVI所示的那样制备。用于制备本申请化合物的合适的被取代的起始原料和中间体可市售获得，或者本领域技术人员可以通过文献中已知的方法很容易地制备获得。
所使用的所有溶剂均可市售获得，并且无需进一步纯化即可使用。通常在氮气的惰性气氛下使用无水溶剂进行反应。在配备有Bruker 400BBO探针的Bruker Mercury Plus400NMR光谱仪上以300或400MHz记录质子光谱。所有氘代溶剂都通常含有0.03％至0.05％v/v的四甲基硅烷，用作参比信号(对于1H和13C均设置为d 0.00)。
在由UFLC 20-AD和LCMS 2020MS检测器组成的SHIMADZU LCMS上进行LCMS分析。使用的柱为Shim-pack XR-ODS，2.2μm，3.0×50mm。使用线性梯度，经2.2分钟从95％A(A：在水中0.05％TFA)开始并到100％B(B：在MeCN的0.05％TFA)结束，总运行时间为3.6分钟。柱温为40℃，流速为1.0mL/min。二极管阵列检测器从190-400nm处扫描。质谱仪配备有以正或负模式运行的电喷雾离子源(ESI)。质谱仪在m/z 90-900之间扫描，扫描时间为0.5s至0.7s。
在具有两个LC20 AD泵和SPD-M20A光电二极管阵列检测器的SHIMADZU UFLC上进行HPLC分析。使用的柱是XBridge C18，3.5μm，460×100mm。使用线性梯度，经10分钟从90％A(A：在水中0.05％TFA)开始到95％B(B：在MeCN中0.05％TFA)结束，总运行时间为15分钟。柱温为40℃，流速为1.5mL/min。二极管阵列检测器从200-400nm处扫描。
薄层色谱(TLC)在购自Mancherey-Nagel的
Figure BDA0002603691860000101
(Silica gel 60F254)上进行，并通常利用紫外线观察斑点。在某些情况下，还使用了其他可视化方法。在这些情况下，TLC板是用碘(将约1g的I2加入10g硅胶中并充分混合生成)、茚三酮(可从Aldrich购得)或Magic Stain(通过在450mL水和50mL浓H2SO4中将25g的(NH4)6Mo7O24.4H2O和5g的(NH4)2Ce(IV)(NO3)6充分混合而生成)显影以显示化合物。快速色谱按照以下方法进行：根据与Still,W.C.；Kahn,M.和Mitra,M.在Journal of Organic Chemistry(1978，43，2923)中所公开的类似方法，使用来自Silicycle的40-63μm(230-400目)硅胶来进行。用于快速色谱或薄层色谱的典型溶剂是由氯仿/甲醇、二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/甲醇、和己烷/乙酸乙酯组成的混合物。
中间体1：3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002603691860000102
向250mL圆底烧瓶中，加入3-氰基-4-哌啶酮-1-羧酸叔丁酯(5g，22.30mmol，1.00当量)、NH2NH2H2O(11.1g，223mmol，10.00当量)和EtOH(100mL)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，所得混合物在真空下浓缩。将残余物施加到具有氯仿/甲醇(95/5)的硅胶柱上。得到4.9g(93％)的3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔丁酯，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]:239。
中间体2：5-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺
Figure BDA0002603691860000103
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的100mL圆底烧瓶中，0℃下加入3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔丁酯(700mg，2.94mmol，1.00当量)、四氢呋喃(15mL)和LiAlH4(334mg，8.80mmol，3.00当量)。所得溶液在60℃下搅拌过夜。然后通过加入水(2ml)和NaOH(1M/l，4ml)以及水(2ml)将反应淬灭。将混合物搅拌30分钟，滤掉固体。粗产物用制备型高效液相色谱(Prep-HPLC)在以下条件下进行纯化：柱，Atlantis Prep T3 OBD柱，19×250mm 10u；流动相：水(0.1％FA)和ACN(15分钟内从0到达30.0％)；检测器，UV254nm。得到90mg(20％)的5-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]:153。
中间体3：4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺的盐酸盐
Figure BDA0002603691860000111
向100mL三颈圆底烧瓶中，加入3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔丁酯(3g，12.59mmol，1.00当量)。然后，在0℃搅拌下逐滴加入在1,4-二恶烷(10mL)中的HCl。所得溶液在25℃下搅拌8小时，将所得混合物在真空下浓缩。得到1.5g(68％)的4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺盐酸盐的HCl盐，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:139。
中间体4：3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸苄酯
Figure BDA0002603691860000112
向100mL圆底烧瓶中，加入4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺盐酸盐(200mg，1.15mmol，1.00当量)、碳酸钾(476mg，3.44mmol，3.00当量)、水(2mL)、和1,4-二恶烷(10mL)。然后在0℃搅拌下逐滴加入Cbz-Cl(165mg，0.97mmol，0.90当量)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，用H2O(10mL)稀释所得溶液。用二氯甲烷(80mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。将残余物施加到具有二氯甲烷/甲醇(10/1)的硅胶柱上。得到150mg(48％)的3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸苄酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:273。
中间体5：6-苄基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺
Figure BDA0002603691860000121
步骤1：2-(苄基(3-氰基丙基)氨基)乙酸乙酯
Figure BDA0002603691860000122
向500mL圆底烧瓶中，加入CH3CN(300mL)、2-(苄氨基)乙酸乙酯(32g，167.40mmol，1.00当量)、碳酸钾(64.4g，465.96mmol，3.00当量)、和4-溴丁腈(27.4g，185.13mmol，1.20当量)。所得溶液在80℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将固体滤掉。滤液在真空下浓缩。将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(0-100％)的硅胶柱上。得到40g(97％)的2-[苄基(3-氰基丙基)氨基]乙酸乙酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:261。
步骤2：1-苄基-3-哌啶酮-4-甲腈
Figure BDA0002603691860000123
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的500mL三颈圆底烧瓶中，加入2-[苄基(3-氰基丙基)氨基]乙酸乙酯(20g，76.83mmol，1.00当量)和四氢呋喃(300mL)。之后在0℃下分批加入t-BuOK(12.9g，114.96mmol，1.50当量)。所得溶液在室温搅拌过夜，用DCM:MeOH(4:1,1000mL)稀释所得溶液。所得混合物用盐水(1000mL×3)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。得到13.6g(83％)的1-苄基-3-哌啶酮-4-甲腈，为红色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:215。
步骤3：6-苄基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺
Figure BDA0002603691860000124
向250mL圆底烧瓶中，加入1-苄基-3-哌啶酮-4-甲腈(13.6g，63.47mmol，1.00当量)、乙醇(100mL)、NH2NH2H2O(14mL)。所得溶液在室温下搅拌过夜，所得混合物在真空下浓缩。将残余物施加到具有甲醇/二氯甲烷(0-10％)的硅胶柱上。得到8.5g(59％)的6-苄基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:229。
中间体6：步骤1：4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺
Figure BDA0002603691860000131
向250mL圆底烧瓶中，加入6-苄基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(15g，65.71mmol，1.00当量)、甲醇(100mL)、和钯碳(10％，10g)。向其中引入氢气。所得溶液在室温搅拌38小时，滤掉固体，滤液在真空下浓缩。得到8.2g(90％)的4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:139。
中间体7：3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002603691860000132
向50mL圆底烧瓶中，加入4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(350mg，2.53mmol，1.00当量)、二恶烷(8mL)、和氢氧化钠(203mg，5.08mmol，2.00当量)在水(2mL)中的溶液。然后在0℃搅拌下逐滴加入在二恶烷(3mL)中的(Boc)2O(442mg，2.03mmol，0.80当量)溶液。所得溶液在室温下搅拌3小时，所得混合物在真空下浓缩。通过制备型TLC(EA:PE＝1:1)对残余物进行纯化。得到410mg(68％)的3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸叔丁酯，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:239。
中间体8：6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺
Figure BDA0002603691860000133
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的100mL三颈圆底烧瓶中，加入3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸叔丁酯(320mg，1.34mmol，1.00当量)和四氢呋喃(40mL)。随后在0℃下分批加入LiAlH4(102mg，2.69mmol，2.00当量)。所得溶液在70℃下搅拌过夜，所得混合物在真空下浓缩。通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)对残余物进行纯化。得到50mg(24％)的6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:153。
中间体9：6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺
Figure BDA0002603691860000134
向250mL圆底烧瓶中，加入4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(5g，36.19mmol，1.00当量)、1，4-二恶烷(40mL)以及在水(10mL)中的碳酸钾(10g，72.35mmol，2.00当量)溶液。然后在0℃搅拌下逐滴加入在二恶烷(5mL)中的甲磺酰氯(2g，17.46mmol，0.50当量)溶液。所得溶液在室温下搅拌2小时，所得混合物在真空下浓缩。将残余物施加到具有甲醇/二氯甲烷(0-10％)的硅胶柱上。得到3.2g(41％)的6-甲磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:217。
实施例1：3-氨基-2-[(2-甲基-1H-吲哚-4-基)羰基]叔丁基]-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]-5-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002603691860000141
向50mL圆底烧瓶中，加入2-甲基-1H-吲哚-4-羧酸(52mg，0.30mmol，1.00当量)、3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔丁酯(85mg，0.36mmol，1.20当量)、HOBt(61mg，0.45mmol，1.50当量)、EDCI(86mg，0.45mmol，1.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(3mL)和TEA(194mg，1.92mmol，5.00当量)。所得溶液在25℃下搅拌过夜。用DCM(80mL)稀释反应混合物，用H2O(50mL×3)和盐水(50mL×3)洗涤并用Na2SO4干燥。过滤后，对滤液进行减压浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，XSelect CSH Prep C18OBD柱，5μm，19×150mm；流动相：水(0.1％FA)和ACN(ACN在9分钟内从30.0％达到49.0％)；检测器，UV 254nm。将收集的部分冻干，得到1.4mg(2％)的3-氨基-2-[(2-甲基-1H-吲哚-4-基)羰基]-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔丁酯，为灰白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:396；(300MHz,DMSO-d6,ppm):δ11.22(s,1H),7.57(d,J＝7.5Hz,1H),7.48(d,J＝7.8Hz,1H),7.09-7.04(m,1H),6.65(s,2H),6.29(s,1H),4.27(s,2H),3.58-2.54(m,2H),2.49-2.45(m,2H),2.41(s,3H),1.44(s,9H)。
实施例2：(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(2-甲基-1H-吲哚-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000151
向50mL圆底烧瓶中，加入3-氨基-2-[(2-甲基-1H-吲哚-4-基)羰基]-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔丁酯(70mg，0.18mmol，1.00当量)、二氯甲烷(8mL)和TFA(2mL)。所得溶液在25℃下搅拌20分钟，用2mL的H2O稀释所得溶液。用碳酸氢钠(1mol/L)将溶液的pH值调节至8。用乙酸乙酯萃取该溶液，用水和盐水洗涤并浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，XBridge C18 OBD制备柱，5μm，19mm×250mm；流动相：水(0.1％FA)和ACN(ACN在7分钟内从38.0％达到58.0％)；检测器，UV/质量254&220nm。将收集的部分冻干，得到1.8mg(3％)的(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(2-甲基-1H-吲哚-4-基)甲酮，为粉红色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:296；(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ11.30(s,1H),8.25-8.23(m,1H),7.56-7.46(m,2H),7.08-7.04(m,1H),6.53(d,J＝12.0Hz,2H),6.27(s,1H),3.67-3.64(m,2H),3.09-2.96(m,2H),2.51-2.50(m,2H),2.40(s,3H)。
实施例3：(3-氨基-5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(2-氯-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000152
步骤1：1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-酮
Figure BDA0002603691860000153
向5000mL的圆底烧瓶中，加入在二氯甲烷(3000mL)中的4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-酮(200g，1.48mol，1.00当量)的溶液、4-甲基苯基-1-磺酰氯(290g，1.52mol，1.03当量)、TEA(600mL)和4-二甲基氨基吡啶(18g，147.34mmol，0.10当量)。所得溶液在25℃下搅拌16小时，然后通过加入水将反应淬灭。用乙酸乙酯(4000ml)萃取所得溶液。有机层用盐水(1000mL×4)洗涤并在真空下浓缩。收集分离的固体并通过用PE/EA结晶来对其进行纯化。得到130g(30％)的1-[(4-甲基苯)磺酰基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-酮，为白色固体。MS[M+H]+(ES,m/z):290。
步骤2：1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(三甲基甲硅烷基)氧基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-甲腈
Figure BDA0002603691860000161
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的2000mL的圆底烧瓶中，加入在CH3CN(1000mL)中的1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-酮(130g，449.28mmol，1.00当量)溶液、TMSCN(120mL)和ZnI2(13g，40.72mmol，0.09当量)。所得溶液在25℃下搅拌3小时。然后加水将反应淬灭，用乙酸乙酯(4000mL)萃取所得溶液。所得混合物用盐水(1000mL×4)洗涤，混合物经无水硫酸钠干燥，滤掉固体，将所得混合物浓缩。得到170g的1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(三甲基硅烷基)氧基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-甲腈，为黄色油状物。MS[M+H]+(ES,m/z):389。
步骤3：1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-6,7-二氢-1H-吲哚-4-甲腈
Figure BDA0002603691860000162
向3000mL圆底烧瓶中，加入在甲苯(2000mL)中的1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-[(三甲基甲硅烷基)氧基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-甲腈(170g，粗品)溶液和4-甲基苯基-1-磺酸(5g)。所得溶液在110℃下搅拌5小时，然后加水将反应淬灭，用乙酸乙酯(4000mL)萃取所得溶液。所得混合物用盐水(1000mL×4)洗涤，混合物经无水硫酸钠干燥，滤掉固体，浓缩所得混合物。收集分离的固体并通过用PE/EA结晶来对其进行纯化。得到110g(粗品)的1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-6,7-二氢-1H-吲哚-4-甲腈，为黄色固体。MS[M+H]+(ES,m/z):
步骤4：1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-甲腈
Figure BDA0002603691860000171
向2L圆底烧瓶中，加入在乙醇(1000中)中的1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-6,7-二氢-1H-吲哚-4-甲腈(110g，粗品)溶液和硼氢化钠(45g，1.22mol)。所得溶液在80℃下搅拌6小时，然后加入水/冰将反应淬灭。用乙酸乙酯(4000mL)萃取所得溶液，有机层用盐水(1L×4)洗涤并用无水硫酸钠干燥，滤掉固体并在真空下对其浓缩。收集分离的固体并通过用PE/EA结晶来对其进行纯化。得到89g的1-[(4-甲基苯)磺酰基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-甲腈，为白色固体。MS[M+H]+(ES,m/z):301。
步骤5：1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸乙酯
Figure BDA0002603691860000172
向2L圆底烧瓶中，加入在乙醇(1000mL)中的2-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-甲腈(89g，296.30mmol)溶液和磺酰二氯(350g，2.94mol，9.93当量)。所得溶液在90℃下搅拌16小时，然后通过加入水/冰将反应淬灭。所得溶液用乙酸乙酯(4000mL)萃取，所得混合物用盐水(1L×4)洗涤。将所得混合物在真空下浓缩，残余物施加到硅胶柱(PE/EA)上，得到70g(68％)的1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸乙酯，为白色固体。MS[M+H]+(ES,m/z):348。
步骤6：4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000173
向2L圆底烧瓶中，加入1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸乙酯(60g，172.70mmol，1.00当量)、甲醇(240mL)、四氢呋喃(240mL)和氢氧化钾(5N)(420mL)。所得溶液在85℃下搅拌26小时，所得混合物在真空下浓缩以去除MeOH和THF，用乙酸乙酯(1L×3)萃取所得溶液。用HCl(1N)将水相的pH值调节至6。所得混合物用盐水(1L×4)洗涤并用无水硫酸钠干燥。滤掉固体并在真空下对其进行浓缩。收集分离的固体，并通过用PE/EA结晶来对其进行纯化。得到26g(91％)的4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸，为白色固体。MS[M+H]+(ES,m/z):166。
步骤7：2-氯-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000181
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的500mL圆底烧瓶中，加入在四氢呋喃(210mL)中的4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸溶液(7.5g，45.40mmol，1.00当量)溶液。然后在-78℃搅拌下逐滴加入在THF(20mL)中的1-氯吡咯烷-2,5-二酮(6.6g，49.43mmol，1.09当量)溶液，所得溶液在-78℃下搅拌3小时，然后加入水将反应淬灭。用乙酸乙酯(800mL×3)萃取所得溶液，合并有机层并用无水硫酸钠干燥，滤掉固体，用DMF(150mL)稀释所得溶液。将所得混合物在真空下浓缩(除去EA)。得到9g(转化)的2-氯-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸。MS[M+H]+(ES,m/z):200和202。
步骤8：5-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺
Figure BDA0002603691860000182
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的100mL圆底烧瓶中，加入3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔丁酯(700mg，2.94mmol，1.00当量)和四氢呋喃(15mL)，0℃下加入LiAlH4(334mg，8.80mmol，3.00当量)，所得溶液在60℃下搅拌过夜。然后通过加水(2ml)、NaOH(1M/l，4ml)和水(2ml)将反应猝灭。将混合物搅拌30分钟，滤掉固体。将粗产物用Prep-HPLC在以下条件下进行纯化：柱，Atlantis Prep T3 OBD柱，19×250mm10u；流动相：水(0.1％FA)和ACN(15分钟内从0达到30.0％)；检测器，UV254nm。得到90mg(20％)的5-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]:153。
步骤9：(3-氨基-5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(2-氯-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000191
向50mL圆底烧瓶中，加入2-氯-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸(60mg，0.30mmol，1.00当量)、5-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺(50mg，0.33mmol，1.10当量)、HOBT(61mg，0.45mmol，1.50当量)、EDCI(86mg，0.45mmol，1.50当量)、TEA(92mg，0.91mmol，3.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(8mL)，所得溶液在室温下搅拌过夜，然后加入水(30mL)将反应淬灭。所得溶液用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，用盐水(80mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。粗产物用Prep-HPLC在以下条件下进行纯化：柱：XBridge C18OBD Prep柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(10MMOL/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从5％B到20％B；254&220nm；Rt：7分钟。将收集的部分冻干，得到2.3mg(2％)的(3-氨基-5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(2-氯-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-基)甲酮，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:334；(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ11.07(s,1H),6.50(s,2H),5.54(s,1H),4.70-4.67(m,1H),3.42-3.40(m,2H),2.79-2.70(m,2H),2.66-2.65(s,2H),2.48-2.45(m,2H),1.99-1.81(m,3H),1.70-1.68(m,1H)。
实施例4和5：3-氨基-2-(2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羰基)-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸苄酯和3-氨基-1-(2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸苄酯
Figure BDA0002603691860000192
步骤1：2-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002603691860000193
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的250mL三颈圆底烧瓶中，加入5-乙基-1H-吡咯-2-甲醛(2.0g，16.24mmol，1.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(150mL)。然后在0℃搅拌下分批加入氢化钠(780mg，19.50mmol，1.20当量，60％)。在5℃搅拌下向其中逐滴加入在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的(Boc)2O(3.9g，17.87mmol，1.10当量)溶液。所得溶液在25℃下搅拌过夜。然后通过加入冰/水(250mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(250mL×2)萃取所得溶液并合并有机层。所得混合物用饱和盐水(200mL×3)洗涤，混合物经无水硫酸钠干燥，滤掉固体，将所得混合物在真空下浓缩。残余物施加到硅胶柱上并用乙酸乙酯或石油醚(1:10)洗脱。浓缩所收集的部分，得到3.7g(97.2％)的2-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:224。
步骤2：2-乙基-5-乙烯基-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002603691860000201
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的250mL三颈圆底烧瓶中，加入四氢呋喃(80mL)，随后在5℃下加入氢化钠(1.0g，41.67mmol，1.50当量)。在5℃下向其中加入甲基三苯基溴化膦(8.9g，24.91mmol，1.50当量)。混合物在70℃下搅拌1.5小时，然后冷却至35℃以下，向混合物中加入在四氢呋喃(8mL)中的2-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(3.7g，16.57mmol，1.00当量)溶液，所得溶液在70℃下搅拌3小时。
冷却至室温后，将固体滤掉。用乙酸乙酯/石油醚(1/7)将残余物施加到硅胶柱上，得到2.6g(71％)的2-乙烯基-5-乙基-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:222。
步骤3：1-叔丁基4-甲基-2-乙基-4,5,6,7-四氢吲哚-1,4-二羧酸酯
Figure BDA0002603691860000202
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的8个25mL均质密封管中，加入2-乙烯基-5-乙基-1H-吡咯-1-羧酸叔丁酯(2.0g，9.04mmol，1.00当量)、二恶烷(60mL)和丙-2-烯酸甲酯(3.1g，36.01，4.00当量)。所得溶液在120℃下搅拌过夜。冷却至室温后，所得混合物在真空下浓缩。得到500mg(18％)的1-叔丁基4-甲基-2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-1,4-二羧酸酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:308。
步骤4：2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000203
向100mL圆底烧瓶中，加入1-叔丁基4-甲基2-乙基-2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-1,4-二羧酸酯(300mg，0.98mmol，1.00当量)、二氯甲烷(10g，117.74mmol，120.64当量)和CF3COOH(1.5g，13.16mmol，13.48当量)。所得溶液在25℃下搅拌2小时，然后加入水(80mL)将反应淬灭。用二氯甲烷(8 0mL×2)萃取所得溶液并合并有机层，并用无水硫酸钠干燥。滤掉固体，滤液在真空下浓缩。得到200mg(99％)的2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸甲酯，为浅黄色原油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:208。
步骤5：2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000211
向50mL圆底烧瓶中，加入2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸甲酯(200mg，0.96mmol，1.00当量)、四氢呋喃(8mL)、甲醇(4mL)和在H2O(3mL)中的LiOH(139.1mg，5.81mmol，6.00当量)溶液。所得溶液在15℃下搅拌过夜，所得混合物真空浓缩。用H2O(3mL)稀释所得溶液，用乙酸乙酯(40mL)萃取所得溶液并合并水层。用HCl(1mol/L)将pH值调节至5-6，用乙酸乙酯(80mL×2)萃取所得溶液并合并有机层，并用无水硫酸钠干燥。滤掉固体，将所得混合物真空浓缩。得到170mg(91％)的2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸，为红色晶体状物。(ES,m/z)[M+H]+:194。
步骤6：3-氨基-2-(2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羰基)-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸苄酯和3-氨基-1-(2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羰基)-6,7-二氢苄基1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸苄酯
Figure BDA0002603691860000212
向50mL圆底烧瓶中，加入2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羧酸(150mg，0.78mmol，1.20当量)、3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸苄酯(90mg，0.33mmol，1.00当量)、HOBT(90mg，0.67mmol，1.20当量)、EDCI(190mg，0.99mmol，1.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(5mL)和TEA(140mg，1.38mmol，3.00当量)，所得溶液在25℃下搅拌4小时。用DCM(80mL)稀释反应混合物，用H2O(50mL×3)和盐水(50mL×3)洗涤并用Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XBridge Prep OBD C18柱；150mm 5um；流动相A：水(10mM NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7分钟内从25％B到55％B；254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到2.0mg(1％)的3-氨基-2-(2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羰基)-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸苄酯，为白色固体。Rt2:6.32分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:448；(300MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.10(s,1H),7.40-7.38(m,5H),6.60(s,2H),5.28(s,1H),5.13(m,2H),4.74-4.69(m,1H),4.30(s,2H),3.32(s,2H),2.51-2.50(m,2H),2.41-2.39(m,3H),1.98-1.61(m,5H),1.09-1.04(m,3H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到1.5mg(1％)的3-氨基-2-(2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-羰基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-羧酸苄酯，为白色固体。Rt1:5.69分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:448；(300MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.06(s,1H),7.39-7.38(m,5H),5.65(s,2H),5.30(d,J＝2.1Hz,1H),5.13(m,2H),4.65-4.61(m,1H),4.28(s,2H),3.63(s,2H),2.49-2.36(m,3H),1.86-1.64(m,5H),1.10-1.05(m,3H)。
实施例6：(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000221
向25mL圆底烧瓶中，加入3-氨基-2-[(2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-基)羰基]-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸苄酯(30mg，0.07mmol，1.00当量)、甲醇(3mL)，AcOH(0.2mL)和钯碳(10％，30mg)，向其中引入氢气。所得溶液在室温下搅拌40分钟，滤掉固体，滤液在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XBridge Prep OBD C18柱；150mm 5um；流动相A：水(10mM NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7分钟内从25％B到55％B；254nmRt:6.32分钟。将收集的组分冻干，得到1.3mg(6％)的(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(2-乙基-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-4-基)甲酮，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:314。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ10.11(s,1H),6.37(s,2H),5.28(s,1H),4.74-4.72(m,1H),3.52-3.51(m,2H),2.92-2.84(m,2H),2.47-2.39(m,7H),2.01-1.84(m,3H),1.75-1.68(m,1H),1.09-1.05(m,3H)。
实施例7和8：3-氨基-2-(2-甲基-1H-吲哚-4-羰基)-4,5-二氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯和3-氨基-1-(2-甲基-1H-吲哚-4-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002603691860000231
向50mL圆底烧瓶中，加入3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-羧酸叔丁酯(30mg，0.13mmol，1.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(5mL)、HOBt(26mg，0.19mmol，1.50当量)、EDCI(37mg，0.19mmol，1.50当量)、TEA(64mg，0.63mmol，5.00当量)和2-甲基-1H-吲哚-4-羧酸(27mg，0.15mmol，1.20当量)。所得溶液在室温下搅拌16小时，然后加入水(30mL)将反应淬灭。所得溶液用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，用盐水(100mL×3)洗涤并在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，XBridge C18 OBD制备柱，5μm，19mm×250mm；流动相，水(0.1％FA)和ACN(ACN在7分钟内从10.0％达到30.0％)；检测器，UV/质量254&220nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到0.8mg(2％)的3-氨基-2-(2-甲基-1H-吲哚-4-羰基)-4,5-二氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯，为黄色固体状。Rt2:6.42分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:396；(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ11.22(s,1H),7.55(d,J＝6.9Hz,1H),7.52(d,J＝12.9Hz,1H),7.09-7.04(m,1H),6.55(s,2H),6.27(s,1H),4.27(s,2H),3.54-3.16(m,2H),2.52-2.49(m,5H),1.4(s,9H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到2.5mg(5％)的3-氨基-1-(2-甲基-1H-吲哚-4-羰基)-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7H)-羧酸叔丁酯，为黄色固体。Rt1:5.78分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:396；(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ11.16(s,1H),7.56(d,J＝7.2Hz,1H)；7.44(d,J＝8.0Hz,1H),7.06-7.02(m,1H),6.27(s,1H),5.53(s,2H),4.78(s,2H),3.60-3.57(m,2H),2.51-2.49(m,3H),2.39-2.38(m,2H),1.44(s,9H)。
实施例9：(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(2-甲基-1H-吲哚-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000232
向50mL圆底烧瓶中，加入6-苄基-2-[(2-甲基-1H-吲哚-4-基)羰基]-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(60mg，0.16mmol，1.00当量)、钯碳(10％，60mg)、甲醇(10mL)和AcOH(0.5mL)。所得溶液在室温下搅拌1.5小时，滤掉固体，滤液在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，5μm，19mm×150mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从25％B到50％B；254nm；Rt:6.3分钟。将收集的组分冻干，得到6mg(13％)的(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(2-甲基-1H-吲哚-4-基)甲酮，为褐色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:295；(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ11.20(s,1H),8.19(s,1H),7.53(d,J＝7.5Hz,1H),7.46(d,J＝7.8Hz,1H),7.07-7.02(m,1H),6.47(s,2H),6.27(s,1H),3.63(s,2H),2.91-2.89(m,2H),2.40-2.34(m,5H)。
实施例10和11：(3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(2-甲基-1H-吲哚-4-基)甲酮和(3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(2-甲基-1H-吲哚-4-基)甲酮。
Figure BDA0002603691860000241
向50mL圆底烧瓶中，加入2-甲基-1H-吲哚-4-羧酸(91mg，0.52mmol，1.00当量)、6-苄基-4,5,6,7-四氢2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(119mg，0.52mmol，1.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(5mL)、HOBT(135mg，1.00mmol，1.50当量)、EDCI(150mg，0.78mmol，1.50当量)和TEA(262mg，2.59mmol，5.00当量)。所得溶液在30℃下搅拌18小时，然后加入水(10mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(10mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物(10mg)进行纯化：柱，XBridge C18 OBD制备柱，100×5μm，19mm×250mm；流动相，水(10mmoL/L NH4HCO3)和ACN(ACN在12分钟内从5.0％达到20.0％)；检测器，UV/质量254和220nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到4.1mg(2％)的(3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基(2-甲基-1H-吲哚-4-基)甲酮，为黄色固体状。Rt2:11.02分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:386；(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ11.21(s,1H),7.54(d,J＝11.2Hz,1H),7.46(d,J＝10.4Hz,1H),7.38-7.26(m,5H),7.06-7.00(m,1H),6.49(s,2H),6.26(s,1H),3.63-3.61(m,2H),3.35-3.34(m,2H),2.52-2.49(m,2H),2.40-2.38(m,5H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到3.6mg(2％)的(3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(2-甲基-1H-吲哚-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:10.13min。MS(ES,m/z)[M+H]+:386；(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ11.13(s,1H),7.52(d,J＝9.6Hz,1H),7.42-7.35(m,5H),7.42-7.35(m,1H)；7.05-7.02(m,1H),6.20(s,1H),5.46(s,2H),3.82-3.80(m,2H),3.74-3.72(m,2H),2.73-2.71(m,2H),2.51-2.47(m,5H)。
实施例12和13：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000251
步骤1：6-甲基喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000252
向用氩气的惰性气体吹扫并保持的30mL压力罐反应器(60atm)中，加入4-溴-6-甲基喹啉(1g，4.50mmol，1.00当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(1.84g，2.25mmol，0.50当量)、TEA(2.86g，28.26mmol，1.50当量)和甲醇(20mL)。所得溶液在70℃下搅拌过夜，冷却至室温后，将所得混合物在真空下浓缩。用乙酸乙酯/石油醚(1/1)将残余物施加到硅胶柱上，得到610mg(67％)的6-甲基喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:202。
步骤2：6-甲基喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000253
向50mL圆底烧瓶中，加入6-甲基喹啉-4-羧酸甲酯(200mg，0.99mmol，1.00当量)、氢氧化钠(200mg，6.24mmol，5.00当量)、水(2mL)、和甲醇(10mL)，所得溶液在25℃下搅拌过夜。所得混合物在真空下浓缩，所得混合物用EA(50mL×2)洗涤，用盐酸(1mol/L)将溶液的pH值调至6。用二氯甲烷(50mL×2)萃取所得溶液并进行浓缩，得到145mg(78％)的6-甲基喹啉-4-羧酸，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:188。
步骤3：6-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000254
向用氢气的惰性气体吹扫并保持的100mL圆底烧瓶中，加入6-甲基喹啉-4-羧酸(145mg，0.77mmol，1.00当量)、钯碳(10％，100mg)和甲醇(10mL)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，滤掉固体，滤液在真空下浓缩，得到120mg(81％)的6-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为白色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:192。
步骤4：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000261
向100mL圆底烧瓶中，加入6-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(54mg，0.28mmol，1.00当量)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(60mg，0.28mmol，1.00当量)、EDCI(80.6mg，0.42mmol，1.50当量)、HOBt(56.7mg，0.42mmol，1.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和TEA(141.4mg，1.40mmol，5.00当量)。所得溶液在室温下搅拌3小时，用H2O(50mL)稀释所得混合物，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取所得溶液并在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XBridge C18 OBD制备柱，100 10μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从20％B到45％B；254&220nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到2.8mg(3％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:6.77分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:390。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.74-6.70(m,1H),6.63-6.57(m,3H),6.44-6.42(d,J＝8.4,1H),5.63(s,1H),4.98-4.97(m,1H),4.23(s,2H),3.42-3.40(m,2H),3.23-3.27(m,1H),3.13-3.18(m,1H),2.97(s,3H),2.47-2.45(m,2H),2.09-2.06(m,3H),2.02-2.01(m,2H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到4.7mg(5％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:6.19分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:390。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.73-6.70(m,1H),6.59(s,1H),6.42-6.40(d,J＝8.0,1H),5.81-5.78(m,2H),5.60(s,1H),4.90-4.87(m,1H),4.56-4.52(m,2H),3.47-3.45(m,3H),3.39-3.37(m,1H),3.16-3.13(m,1H),2.96(s,3H),2.47-2.41(m,1H),2.09-2.07(m,3H),2.00-1.99(m,2H)。
实施例14和15：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000271
向40mL圆底烧瓶中，加入6-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(28mg，0.13mmol，1.00当量)(以市售的6-氯喹啉-4-羧酸开始并利用Pt2O，通过类似于6-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(实施例12)的方法制得)、HOBt(27mg，0.20mmol，1.50当量)、EDCI(38mg，0.20mmol，1.50当量)、TEA(100mg，0.99mmol，7.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(6.0mL)和6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(29mg，0.13mmol，1.00当量)。所得溶液在20℃下搅拌5小时，然后加入水/冰(20mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30ml×3)萃取所得溶液并合并有机层，并用无水硫酸钠干燥以及在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，XBridge Shield RP18 OBD柱，5μm，19×150mm；流动相，水(0.1％FA)和ACN(ACN在7分钟内从35.0％达到55.0％)；检测器，UV 254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到0.9mg(2％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为灰色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:410；(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ6.95-6.93(m,1H),6.84(d,J＝2.5Hz,1H),6.67(s,2H),6.53(d,J＝8.7Hz,1H),6.12(s,1H),4.98-4.97(m,1H),4.24(s,2H),3.42-3.39(m,2H),3.22-3.20(m,2H),2.98(s,3H),2.50-2.43(m,2H),2.04-1.98(m,2H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到5.1mg(9％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1(6-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:410；(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ6.94-6.92(m,1H),6.86(d,J＝2.5Hz,1H),6.52(d,J＝8.6Hz,1H),6.09(s,1H),5.83(s,2H),4.89-4.86(m,1H),4.57-4.51(m,2H),3.52-3.34(m,2H),3.19-3.17(m,2H),2.97(s,3H),2.11-1.94(m,2H)。
实施例16、17、18和19：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮、(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮以及(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000281
步骤1：6-氟喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000282
向300mL压力罐反应器(60atm)中，加入4-溴-6-氟喹啉(10g，44.24mmol，1.00当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(3.3g，4.04mmol，0.10当量)和甲醇(100ml)，向其中引入一氧化碳(g)。所得溶液在120℃下搅拌过夜，冷却至室温后，将所得混合物在真空下浓缩。用乙酸乙酯/石油醚(0-20％)将残余物施加到硅胶柱上，得到7.5g(83％)的6-氟喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:206。
步骤2：6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000283
向250mL圆底烧瓶中，加入6-氟喹啉-4-羧酸甲酯(4g，19.49mmol，1.00当量)、甲醇(50mL)和钯碳(10％，3g)，抽空烧瓶并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫。混合物在室温下在氢气气氛(气球)中搅拌2小时，滤掉固体，滤液在真空下浓缩，得到3.5g(86％)的6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:210。
步骤3：6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000284
向250mL圆底烧瓶中，加入6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯(3.5g，16.73mmol，1.00当量)、氢氧化钠(2g，50.00mmol，3.00当量)，CH3OH(30mL)和H2O(30mL)。所得溶液在室温下搅拌12小时，用盐酸(1mol/L)将溶液的pH值调至6。用EA(150ml×3)萃取所得溶液并合并有机层，和用无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。得到2.3g(70％)的6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:196。
步骤4：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000291
向100mL圆底烧瓶中，加入6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(60mg，0.31mmol，1.00当量)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(80mg，0.37mmol，1.20当量)、DECI(88mg，1.50当量)、HOBt(62mg，0.46mmol，1.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和TEA(156mg，1.54mmol，5.00当量)。所得溶液在室温下搅拌3小时，所得溶液在室温下搅拌12小时，然后加入水(50mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(100mL×2)萃取所得溶液并在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：10分钟内从25％B到65％B；254nm。
第一洗脱化合物：将收集的组分冻干，得到8.2mg(7％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-白色固体的2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:9.78分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:394。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.79-6.78(m,1H),6.68-6.64(m,3H),6.52-6.49(m,1H),5.80(s,1H),4.98-4.97(m,1H),4.24(s,2H),3.43-3.40(m,2H),3.27-3.15(m,2H),2.97(s,3H),2.47-2.45(m,2H),2.06-1.98(m,2H)。
第二洗脱化合物：将收集的组分冻干，得到16.7mg(14％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:8.35分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:394。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.77-6.74(m,1H),6.70-6.67(m,1H),6.51-6.48(m,1H),5.81-5.78(m,3H),4.89-4.86(m,1H),4.52(s,2H),3.44-3.40(m,2H),3.27-3.15(m,2H),2.95(s,3H),2.51-2.47(m,2H),2.07-2.04(m,2H)。
步骤5：(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000301
通过制备-手性-高效液相色谱(Prep-chiral-HPLC)，按照以下条件分离出(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(50mg，0.13mmol，1.00当量)，柱：Chiralpak IA，2×25cm，5μm；流动相A：Hex--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：17mL/min；梯度：24分钟内从50B到50B；220/254nm。
对映异构体A，第一洗脱化合物。实施例19：得到17.0mg(34％)的(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:9.64分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:394；(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.82-6.77(m,1H),6.69-6.65(m,3H),6.54-6.49(m,1H),5.82(s,1H),4.99-4.96(m,1H),4.24(s,2H),3.42-3.40(m,2H),3.25-3.14(m,2H),2.97(s,3H),2.47-2.45(m,2H),2.09-1.99(m,2H)。
对映异构体B，第二洗脱化合物。实施例18：得到13.9mg(28％)的(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:11.58分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:394；(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.82-6.77(m,1H),6.69-6.65(m,3H),6.53-6.49(m,1H),5.82(s,1H),4.99-4.96(m,1H),4.24(s,2H),3.43-3.41(m,2H),3.26-3.14(m,2H),2.97(s,3H),2.47-2.45(m,2H),2.10-1.98(m,2H)。
实施例20和21：(3-氨基-6-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000302
步骤1：3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002603691860000303
向50mL圆底烧瓶中，加入6-苄基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(500mg，2.19mmol，1.00当量)、二氯甲烷(10mL)、TEA(665mg，6.60mmol，3.00当量)和二碳酸二叔丁酯(478mg，2.19mmol，1.00当量)。所得溶液在室温下搅拌16小时，所得混合物真空浓缩。通过制备型TLC(EA:PE＝1:1)对残余物进行纯化。得到548mg(76％)的3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:329。
步骤2：3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002603691860000311
向50mL圆底烧瓶中，加入3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁酯(548mg，1.67mmol，1.00当量)、甲醇(20mL)和钯碳(10％，500mg)。抽空烧瓶并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫。混合物在室温下在氢气气氛(气球)下搅拌16小时，滤掉固体。将所得混合物在真空下浓缩，得到392mg(99％)的3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁基酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:239。
步骤3：3-氨基-6-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002603691860000312
向50mL圆底烧瓶中，加入3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁酯(150mg，0.63mmol，1.00当量)、四氢呋喃(10mL)和碳酸钾(148mg，1.07mmol，1.10当量)。然后在室温下加入在四氢呋喃(5mL)中的碘乙烷(261mg，1.67mmol，3.00当量)溶液。所得溶液在40℃下搅拌16小时，所得混合物真空浓缩。通过制备型TLC(PE:EA＝1:1)对残余物进行纯化。得到78mg(47％)的3-氨基6-氨基-6-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁基酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:267。
步骤4：6-乙基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺
Figure BDA0002603691860000313
向50mL圆底烧瓶中，加入3-氨基-6-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁酯(61mg，0.23mmol，1.00当量)、二氯甲烷(4mL)和三氟乙酸(1mL)。所得溶液在室温下搅拌2.5小时，将所得混合物在真空下浓缩。然后加入水(30ml)和盐酸(1moL/L)(0.2mL)，将混合物冷冻，得到57.9mg(152％)的6-乙基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺盐，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:167。
步骤5：(3-氨基-6-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000321
向100mL圆底烧瓶中，加入6-乙基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺盐(57mg，0.34mmol，1.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(10mL)、HOBt(36mg，0.27mmol，1.50当量)、EDCI(50mg，0.26mmol，1.50当量)、TEA(89mg，0.88mmol，5.00当量)和1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(37mg，0.21mmol，1.20当量)。所得溶液在室温下搅拌7小时，然后加入水(30mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液并并合并有机层，所得混合物用盐水(100mL×3)洗涤，将混合物在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，XBridge C18 OBD制备柱，5μm，19mm×250mm；流动相，水(0.1％FA)和ACN(ACN在10分钟内从30.0％达到55.0％)；检测器，UV 254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到3.2mg(3％)的(3-氨基-6-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:7.07分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:326。(300MHz,DMSO-d6,ppm):δ6.93-6.90(m,1H),6.87(d,J＝1.2Hz,1H),6.77-6.75(m,2H),6.52-6.49(m,1H),5.84(s,1H),5.01-5.00(m,1H),3.32-3.20(m,6H),2.79-2.28(m,3H),2.09(s,2H),1.09(s,3H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到2.8mg(3％)的(3-氨基-6-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:6.73分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:326。(300MHz,DMSO-d6,ppm):δ6.94-6.88(m,1H),6.76(d,J＝7.2Hz,1H),6.50(d,J＝0.9Hz,1H),5.78-5.80(m,1H),5.64(s,1H),4.90-4.91(m,1H),3.67(s,2H),3.32(s,2H),3.30(s,2H),2.73-2.27(m,4H),2.02-1.99(m,2H),1.12-1.04(m,3H)。
实施例22和23：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000322
步骤1：6-甲氧基喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000331
向用CO的惰性气体吹扫并保持的50mL压力罐反应器(60atm)中，加入4-溴-6-甲氧基喹啉(4g，16.80mmol，1.00当量)、TEA(5.11g，50.50mmol，3.00当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(4.13g，5.05mmol，0.30当量)和甲醇(30mL)。所得溶液在120℃下搅拌过夜，冷却至室温后，将所得混合物在真空下浓缩，用乙酸乙酯/石油醚(1/5)将残余物施加到硅胶柱上，得到2g(55％)的6-甲氧基喹啉-4-羧酸甲酯，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:218。
步骤2：6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000332
向用氢气的惰性气体吹扫并保持的100mL圆底烧瓶中，加入6-甲氧基喹啉-4-羧酸甲酯(217mg，1.00mmol，1.00当量)、钯碳(10％，217mg)、甲醇(12mL)和AcOH(2mL)。所得溶液在20℃下搅拌过夜，滤掉固体。所得混合物在真空下浓缩，得到230mg(粗品)的6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯，为棕色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:222。
步骤3：6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000333
向100mL圆底烧瓶中，加入6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯(221mg，1.00mmol，1.00当量)、甲醇(8mL)、四氢呋喃(2mg，0.03mmol，0.03当量)、LiOH(120mg，5.01mmol，5.00当量)和水(1ml)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，所得混合物在真空下浓缩。用H2O(20mL)稀释所得溶液，用盐酸(1mol/L)将溶液的pH值调至4。用乙酸乙酯(20mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。用二氯甲烷/甲醇(10/1)将残余物施加到硅胶柱上，得到40mg(19％)的6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸盐，为棕色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:208。
步骤4：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000341
向50mL圆底烧瓶中，加入6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(60mg，0.29mmol，1.00当量)、HOBt(59mg，0.44)mmol，1.50当量)、EDCI(84mg，0.44mmol，1.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(3mL)、6-甲磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(75mg，0.35mmol，1.20当量)和TEA(88mg，0.87mmol，3.00当量)。所得溶液在25℃下搅拌3小时，用DCM(80mL)稀释反应混合物，用H2O(50mL×3)和盐水(50mL×3)洗涤并用Na2SO4干燥。过滤后将滤液减压浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化(分析HPLC-SHIMADZU)：柱：XBridge Prep C18 OBD柱；19×150mm 5um；流动相A：水(10mM NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从25％B到25％B；254/220nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到1.3mg(1％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2：6.73分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:406。(300MHz,DMSO-d6,ppm):δ6.61-6.57(m,3H),6.48(s,2H),5.42(s,1H),4.98-4.95(m,1H),4.23(s,2H),3.54(s,3H),3.43-3.41(m,2H),3.22-3.09(m,2H),2.95(s,3H),2.49-2.44(s,2H),2.03-1.97(m,2H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到4.5mg(4％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1：7.13分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:406。(300MHz,DMSO-d6,ppm):δ6.60-6.56(m,1H),6.46-6.43(m,2H),5.77(s,2H),5.39(s,1H),4.89-4.86(m,1H),4.51(s,2H),3.54(s,3H),3.43-3.41(m,2H),3.22-3.10(m,2H),2.94(s,3H),2.49-2.44(s,2H),2.03-1.97(m,2H)。
实施例24和25：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000342
步骤1：6-(三氟甲基)喹啉-4-基三氟甲磺酸酯
Figure BDA0002603691860000351
向500mL圆底烧瓶中，加入6-(三氟甲基)喹啉-4-醇(2.0g，9.38mmol，1.00当量)、二氯甲烷(150mL)和吡啶(1.5g，18.96mmol，2.00当量)。然后在0℃搅拌下逐滴加入(三氟甲烷)磺酰基三氟甲磺酸酯(3.18g，11.27mmol，1.20当量)，所得溶液在室温下搅拌过夜。用盐酸(1mol/L，100ml×2)萃取所得溶液并合并有机层和用无水硫酸钠干燥。将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(0-20％)的硅胶柱上，得到0.8g(25％)的6-(三氟甲基)喹啉-4-基三氟甲磺酸酯，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:346。
步骤2：6-(三氟甲基)喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000352
向用CO的惰性气体吹扫并保持的50mL压力罐反应器(60atm)中，加入6-(三氟甲基)喹啉-4-基三氟甲磺酸酯(820mg，2.38mmol，1.00当量)、Pd(dppf)Cl2﹒CH2Cl2(388mg，0.47mmol，0.20当量)、TEA(1.2g，11.88mmol，5.00当量)和甲醇(10mL)。所得溶液在80℃下并在油浴中搅拌过夜。冷却至室温后，然后加入DCM(50mL)将反应淬灭。用水(50ml×3)洗涤所得溶液，合并有机层并用无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液减压浓缩。通过制备型TLC(EtOAc:PE＝1:2)对残余物进行纯化。得到210mg(35％)的6-(三氟甲基)喹啉-4-羧酸甲酯，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:256。
步骤3：6-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000353
向100mL圆底烧瓶中，加入6-(三氟甲基)喹啉-4-羧酸甲酯(100mg，0.39mmol，1.00当量)、甲醇(10mL)和钯碳(10％，100mg)。抽空烧瓶并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫。混合物在室温下在氢气气氛(气球)中搅拌4小时，滤掉固体。将所得混合物在真空下浓缩，得到98.2mg(97％)的6-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯，为无色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:260。
步骤4：6-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000361
向100mL圆底烧瓶中，加入6-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯(98mg，0.38mmol，1.00当量)、四氢呋喃(20mL)、水(5mL)和LiOH(45mg，1.88mmol，5.00当量)。所得溶液在室温下搅拌过夜，然后加入水/冰(20mL)将反应淬灭。用二氯甲烷(25mL×3)萃取所得溶液并合并水层。用盐酸(1mol/L)将溶液的pH值调至4-6。用二氯甲烷(40mL×3)萃取所得溶液并合并有机层，和用无水硫酸钠干燥，并在真空下浓缩，得到87mg(94％)的6-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为红色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:246。
步骤5：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000362
向40mL圆底烧瓶中，加入6-(三氟甲基)-1,2-二氢喹啉-4-羧酸(60mg，0.25mmol，1.00当量)、HOBt(49mg，0.36mmol，1.50当量)、EDCI(70.2mg，0.37mmol，1.50当量)、TEA(185mg，1.83mmol，7.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(8.0mL)和6-甲磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(53mg，0.25mmol，1.00当量)。所得溶液在20℃下搅拌4小时，然后加入水/冰(30mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液并合并有机层，和用无水硫酸钠干燥。滤掉固体，将所得混合物在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，XSelect CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19×150mm；流动相，水(0.1％FA)和ACN(ACN在10分钟内从30.0％达到60.0％)；检测器，UV 254/220nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到2.8mg(3％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:9.65分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:444。(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ7.23-7.21(m,1H),7.16-7.15(m,1H),6.69-6.61(m,4H),5.03-5.00(m,1H),4.24(s,2H),3.43-3.40(m,2H),3.28-3.26(m,2H),2.97(s,3H),2.46-2.42(m,2H),2.11-2.08(m,1H),2.03-1.99(m,1H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到9.8mg(9％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:8.78分钟。MS(ES,m/z):[M+H]+.444。(300MHz,DMSO-d6,ppm)δ7.23-7.15(m,2H),6.67-6.60(m,2H),5.85(s,2H),4.94-4.90(m,1H),4.53(s,2H),3.50-3.36(m,2H),3.27-3.22(m,2H),2.96(s,3H),2.47-2.43(m,2H),2.15-2.09(m,1H),2.03-1.96(m,1H)。
实施例26和27：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000371
步骤1：6,7-二氢-2H-异吲哚-4(5H)-酮
Figure BDA0002603691860000372
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的500mL三颈圆底烧瓶中，加入在四氢呋喃(50mL)中的氢化钠(5.1g，1.50当量，60％)溶液、环己-2-烯-1-酮(7.8g，81.14mmol，1.00当量和在四氢呋喃(50mL)中的TosMic(16g，1.00当量)溶液。在0℃搅拌下加入DMSO(80mL)，所得溶液在室温下搅拌15小时。然后加入水/冰(100mL)将反应淬灭，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。用乙酸乙酯/己烷(1:10)将残余物施加到硅胶柱上，得到6.1g(56％)的6,7-二氢-2H-异吲哚-4(5H)-酮，为浅黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:136。
步骤2：2-甲基-6,7-二氢-2H-异吲哚-4(5H)-酮
Figure BDA0002603691860000373
向250mL圆底烧瓶中，加入4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-酮(6.1g，45.13mmol，1.00当量)、CH3I(13g，91.59mmol，2.00当量)、CH3CN(100mL)和甲烷过氧化钾(19g，137.47mmol，3.00当量)。所得溶液在85℃下搅拌15小时，冷却至室温后，将固体滤掉。所得混合物真空浓缩，用乙酸乙酯/己烷(1:3)将残余物施加到硅胶柱上，得到5g(74％)的2-甲基-6,7-二氢-2H-异吲哚-4(5H)-酮，为黄色液体。MS(ES,m/z)[M+H]+:150。
步骤3：2-甲基-6,7-二氢-2H-异吲哚-4-基三氟甲磺酸酯
Figure BDA0002603691860000381
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的250mL三颈圆底烧瓶中，加入2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-酮(2g，13.41mmol，1.00当量)和四氢呋喃(80ml)。在-78℃搅拌下加入LiHMDS(25mL，25.48mmol，1.90当量)。
以上混合物在-78℃下搅拌5分钟。在-78℃下缓慢加入在四氢呋喃中(10mL)的1,1,1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲烷)磺酰基甲磺酰胺(4.5g，25.50mmol，1.90当量)溶液。使温度自然升至室温，所得溶液在室温下搅拌15小时，然后加入水/冰(100mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(100ml×3)萃取所得溶液并合并有机层，和用无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。得到6g(粗品)的2-甲基-6,7-二氢-2H-异吲哚-4-基三氟甲磺酸酯，为棕色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:282。
步骤4：2-甲基-6,7-二氢-2H-异吲哚-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000382
向30mL压力罐反应器(CO，60atm)中，加入2-甲基-6,7-二氢-2H-异吲哚-4-基三氟甲磺酸盐(6g，21.33mmol，1.00当量)、pd(dppf)Cl2CH2Cl2(0.46g，0.10当量)、甲醇(10mL)和TEA(7.3mg，5.00当量)。所得溶液在75℃下搅拌15小时，冷却至室温后，将反应混合物浓缩并将残余物施加到具有乙酸乙酯/PE(1:10)的硅胶柱上，得到3g(74％)的2-甲基-6,7-二氢-2H-异吲哚-4-羧酸甲酯，为棕色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:192。
步骤5：2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000383
向100mL圆底烧瓶中，加入2-甲基-6,7-二氢-2H-异吲哚-4-羧酸甲酯(100mg，0.52mmol，1.00当量)、甲醇(10mL)和钯碳(10％，50mg)。将烧瓶抽真空并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫。混合物在室温下在氢气气氛(气球)中搅拌4小时，滤掉固体，滤液在真空下浓缩。得到100mg(99％)的2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-羧酸甲酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:194。
步骤6：2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000391
向100mL圆底烧瓶中，加入2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-羧酸甲酯(110mg，0.57mmol，1.00当量)、氢氧化钠(45.6mg，1.14mmol，2.00当量)、水(10mL)和甲醇(20mL)。所得溶液在室温下搅拌15小时，用盐酸(1mol/L)将溶液的pH值调至6。用乙酸乙酯(80mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。得到30mg(29％)的2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-羧酸，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:180。
步骤7：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000392
向100mL圆底烧瓶中，加入2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-羧酸(30mg，0.17mmol，1.00当量)、6-甲基甲磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(36.2mg，0.17mmol，1.00当量)、EDCI(48.3mg，0.25mmol，1.50当量)、HOBt(33.8mg，0.25mmol，1.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和TEA(85.9mg，0.85mmol，5.00当量)。所得溶液在室温下搅拌6小时，然后加水(100mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(150mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，XBridge Shield RP18 OBD柱，5μm，19×150mm；流动相，水(0.1％FA)和ACN(ACN在9分钟内从25.0％达到60.0％)；检测器，UV 254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到2.8mg(4％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:6.20分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:378。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.59(s,1H),6.37-6.36(m,1H),6.18-6.17(m,1H),4.75-4.76(m,1H),4.23-4.22(m,2H),3.46(s,3H),3.43-3.40(m,2H),2.97(s,3H),2.47-2.43(m,4H),1.91-1.88(m,3H),1.63-1.57(m,1H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到1.1mg(2％)的(3-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-异吲哚-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:5.60分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:378。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.36-6.35(m,1H),6.20-6.19(m,1H),5.70(s,2H),4.68-4.63(m,1H),4.52(s,2H),3.47(s,3H),3.46-3.36(m,2H),2.96(s,3H),2.53-2.52(m,1H),2.47-2.43(m,3H),1.93-1.82(m,3H),1.58-1.55(m,1H)。
实施例28和29：(3-氨基-6-苯基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-苯基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000401
步骤1：3-氨基-6-苯基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002603691860000402
向100mL圆底烧瓶中，加入3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁酯(720mg，3.02mmol，1.00当量)、苯基硼酸(293mg，2.40mmol，0.80当量)、二氯甲烷(20mL)、TEA(1.53g，15.12mmol，5.00当量)、Cu(OAc)2(821mg，4.52mmol，1.50当量)和MS(1.4g)。所得溶液在室温下搅拌16小时，将所得混合物在真空下浓缩，用二氯甲烷/甲醇(10:1)将残余物施加到硅胶柱上。得到72mg(8％)3-氨基-6-苯基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:315。
步骤2：6-苯基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺的盐酸盐
Figure BDA0002603691860000403
向50mL圆底烧瓶中，加入3-氨基-6-苯基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羧酸叔丁酯(72mg，0.33mmol，1.00当量)、二氯甲烷(4mL)和三氟乙酸(1mL)。所得溶液在室温下搅拌1小时，将所得混合物在真空下浓缩。用3mL ACN、10ml H2O和2ml盐酸(1mol/L)稀释所得溶液。将所得混合物冻干，得到15mg(49％)的6-苯基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺的盐酸盐，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:215。
步骤3：(3-氨基-6-苯基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-苯基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000411
向25mL圆底烧瓶中，加入6-苯基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺的盐酸盐(15mg，0.07mmol，1.00当量)、6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(15mg，0.08mmol，1.00当量)、HOBt(14mg，0.10mmol，1.50当量)、EDCI(20mg，0.10mmol，1.50当量)、TEA(21mg，0.21mmol，3.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(3mL)。所得溶液在室温下搅拌5小时，然后加水(10mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(10mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XBridge C18OBD制备柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：15分钟内从25％B到45％B；254/220nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到1.1mg(4％)的(3-氨基-6-苯基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:13.70分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:392；(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ7.24-7.18(m,2H),7.03-7.01(m,2H),6.82-6.66(m,3H),6.53-6.48(m,3H),5.79(s,1H),5.03-4.99(m,1H),4.27(s,2H),3.58-3.55(m,2H),3.31-3.18(m,2H),2.45-2.42(m,2H),2.11-2.00(m,2H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到2.5mg(9％)的(3-氨基-6-苯基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:12.50分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:392。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ7.24-7.19(m,2H),6.97-6.94(m,2H),6.81-6.67(m,3H),6.53-6.48(m,1H),5.77(s,1H),5.74(s,2H),4.92-4.89(m,1H),4.48(s,2H),3.55-3.52(m,2H),3.31-3.27(m,1H),3.18-3.12(m,1H),2.46-2.44(m,2H),2.11-1.97(m,2H)。
实施例30、31、32和33：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮以及(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000421
步骤1：6-乙烯基喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000422
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的250mL圆底烧瓶中，加入6-溴喹啉-4-羧酸(2g，7.93mmol，1.00当量)，2-乙烯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(1.8g，11.69mmol，1.50当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(1.3g，0.20当量)、碳酸钾(3.3g，23.88mml，3.00当量)、水(6mL)和二恶烷(60mL)。所得溶液在100℃下搅拌过夜，将混合物冷却至20℃。用H2O(60mL)稀释所得溶液。所得混合物用DCM(100mL×2)洗涤，用盐酸(1mol/L)将溶液的pH值调至3-4。用二氯甲烷(100mL×5)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩，得到880mg(56％)的6-乙烯基喹啉-4-羧酸，为棕色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:200。
步骤2：6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000423
向用氢气的惰性气体吹扫并保持的100mL圆底烧瓶中，加入6-乙烯基喹啉-4-羧酸(620mg，3.11mmol，1.00当量)、乙酸乙酯(40mL)、钯碳(10％，600mg)和AcOH(0.25mL)。所得溶液在25℃下搅拌1小时，滤掉固体。加入Pt2O(300mg)。所得溶液在25℃下搅拌6小时，滤掉固体。将滤液浓缩并将残余物施加到具有二氯甲烷/甲醇(10/1)的硅胶柱上。得到100mg(16％)的6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:206。
步骤3：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000431
向50mL圆底烧瓶中，加入6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(150mg，0.72mmol，1.00当量)、1H-1,2,3-苯并三唑-1-醇(150mg，1.11mmol，1.50当量)、EDCI(210mg，1.11mmol，1.50当量)、TEA(222mg，2.19mmol，3.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和6-甲磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(210mg，0.96mmol，1.30当量)。所得溶液在20℃下搅拌2小时，然后加水(30mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和用无水硫酸钠干燥。滤掉固体，所得混合物真空浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XSelect CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从15％B到50％B；254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到15mg(13％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:6.05分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.79-6.76(m,1H),6.63-6.61(m,3H),6.47-6.44(m,1H),5.65(s,1H),5.00-4.97(m,1H),4.24(s,2H),3.44-3.40(m,2H),3.26-3.16(m,2H),2.97(s,3H),2.47-2.45(m,2H),2.39-2.31(m,2H),2.03-2.01(m,2H),1.07-1.02(m,3H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到9.4mg(9％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-乙基1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:5.8分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.78-6.75(m,1H),6.62-6.61(m,1H),6.46-6.43(m,1H),5.79(s,2H),5.65(s,1H),4.91-4.88(m,1H),4.53(s,2H),3.44-3.39(m,3H),3.27-3.23(m,2H),3.15-3.11(m,1H),2.96(s,3H),2.39-2.31(m,2H),2.01-1.99(m,2H),1.07-1.02(m,3H)。
步骤4：(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000441
通过Prep-HPLC按照以下条件分离出(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(15mg，0.05mmol，1.00当量)，柱：CHIRALPAK IA，2.12×15cm，5μm；流动相A：Hex--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：15分钟内从50B到50B；254/220nm。
对映异构体A，实施例32：得到2.8mg(15％)的(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2：10.45分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.77-6.74(m,1H),6.61-6.59(m,3H),6.45-6.42(m,1H),5.62(s,1H),4.98-4.97(m,1H),4.22(s,2H),3.42-3.39(m,2H),3.26-3.14(m,2H),2.95(s,3H),2.37-2.29(m,4H),2.02-1.98(m,2H),1.06-1.00(m,3H)。
对映异构体B，实施例33：得到3.4mg(18％)的(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1：6.36分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.79-6.76(m,1H),6.69-6.61(m,3H),6.47-6.44(m,1H),5.66(s,1H),5.01-4.97(m,1H),4.24(s,2H),3.42-3.40(m,2H),3.17-3.13(m,2H),2.97(s,3H),2.39-2.27(m,4H),2.03-2.01(m,2H),1.06-1.02(m,3H)。
实施例34、35和36：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮以及(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000442
步骤1：4-溴-8-甲基喹啉
Figure BDA0002603691860000443
向100mL圆底烧瓶中，加入8-甲基喹啉-4-醇(500mg，3.14mmol，1.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(20mL)。然后在室温搅拌下逐滴加入三溴化磷(85 1mg，3.14mmol，1.20当量)，所得溶液在室温下搅拌15小时。然后加入水/冰(100mL)将反应淬灭。用氢氧化钠(2mol/L)将溶液的pH值调至10。过滤收集固体，得到660mg(95％)的4-溴-8-甲基喹啉，为浅黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:222。
步骤2：8-甲基喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000451
向50mL压力罐反应器(CO，60atm)中，加入4-溴-8-甲基喹啉(600mg，2.70mmol，1.00当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(444mg，0.54mmol，0.20当量)、TEA(1.4g，13.86mmol，5.00当量)和甲醇(15mL)。所得溶液在80℃下搅拌16小时，冷却至室温后，将反应混合物浓缩并将残余物施加到具有乙酸乙酯/己烷(0-30％)的硅胶柱上。得到350mg(64％)的8-甲基喹啉-4-羧酸甲酯，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:202.
步骤3：8-甲基喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000452
向100mL圆底烧瓶中，加入8-甲基喹啉-4-羧酸甲酯(350mg，1.74mmol，1.00当量)、氢氧化钠(209mg，5.23mmol，3.00当量)、水(20mL)和甲醇(20mL)。所得溶液在室温下搅拌14小时，将所得混合物在真空下浓缩。用乙酸乙酯(20mL×2)萃取所得溶液并合并水层。用盐酸(6mol/L)将溶液的pH值调至5-6，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液并合并有机层。将所得混合物在真空下浓缩，得到250mg(77％)的8-甲基喹啉-4-羧酸，为黄色固体状。MS(ES,m/z)[M+H]+:188。
步骤4：8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000453
向100mL圆底烧瓶中，加入8-甲基喹啉-4-羧酸(250mg，1.34mmol，1.00当量)、PtO2(40mg)和甲醇(20mL)。将烧瓶抽真空并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫。混合物在室温下在氢气气氛(气球)下搅拌1小时，滤掉固体。将所得混合物在真空浓缩，得到220mg(86％)的8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:192。
步骤5：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000461
向250mL圆底烧瓶中，加入8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(1.8g，9.41mmol，1.00当量)、6-甲磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(2.2g，10.17mmol，1.10当量)、EDCI(2.7g，14.08mmol，1.50当量)、HOBt(1.9g，14.06mmol，1.50当量)、TEA(4.7g，46.45mmol，5.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(30mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加水(200mL)将反应淬灭，用乙酸乙酯(300mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，XBridge Prep OBDC18柱，150mm 5um；流动相，水(0.1％FA)和ACN(ACN在9分钟内从15.0％达到45.0％)；检测器，UV 220nm。将收集的组分冻干，得到150mg(5％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为浅黄色固体。Rt:6.50分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:390。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.83-6.81(m，1H),6.66-6.62(m,3H),6.37-6.32(m,1H),5.23(s,1H),5.05-5.01(m,1H),4.20(s,2H),3.43-3.39(m,2H),3.32-3.30(m,1H),3.27-3.26(m,1H),2.9(s,3H),2.49-2.45(m,2H),2.11-1.98(m,5H)。
步骤6：(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000462
通过制备型-手性HPLC按照以下条件分离出6-甲基磺酰基-2-[(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)羰基]-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(150mg)。柱：CHIRALPAK IG，20 250mm,5um；流动相A：Hex--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：18mL/min；梯度：26分钟内从50B到50B；254/220nm。
对映异构体A，实施例35：得到55.9mg(37％)的(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为浅黄色固体。Rt1:16.47分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:390。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.83-6.81(m，1H),6.66-6.62(m,3H),6.37-6.32(m,1H),5.23(s,1H),5.05-5.01(m,1H),4.20(s,2H),3.43-3.39(m,2H),3.32-3.30(m,1H),3.27-3.26(m,1H),2.97(s,3H),2.49-2.45(m,2H),2.07-1.98(m,5H)。
对映异构体B，实施例36：得到43.8mg(29％)的(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为浅黄色固体。Rt2:20.84min。MS(ES,m/z)[M+H]+:390。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.83-6.81(m，1H),6.66-6.62(m,3H),6.37-6.32(m,1H),5.23(s,1H),5.05-5.01(m,1H),4.20(s,2H),3.43-3.39(m,2H),3.32-3.30(m,1H),3.27-3.26(m,1H),2.96(s,3H),2.49-2.45(m,2H),2.07-1.96(m,5H)。
实施例37和38：3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000471
步骤1：4-溴-8-氟喹啉
Figure BDA0002603691860000472
向100mL圆底烧瓶中，加入8-氟喹啉-4-醇(1g，6.13mmol，1.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(20mL)。随后在室温搅拌下逐滴添加PBr3(1.8g，6.65mmol，1.10当量)。所得溶液在室温下搅拌1小时，然后加水(50mL)将反应淬灭。用氢氧化钾水溶液将溶液的pH值调至8。过滤收集固体，得到1.1g的4-溴-8-氟喹啉，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:226。
步骤2：8-氟喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000481
向50mL密封管(60atm)中，加入4-溴-8-氟喹啉(1.1g，4.87mmol，1.00当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(800mg，0.98mmol，0.20当量)、TEA(2g，19.80mmol，4.00当量)和甲醇(15mL)。向其中引入一氧化碳，所得溶液在75℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将固体滤掉，滤液在真空下浓缩。将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(0-50％)的硅胶柱上，得到890mg(89％)的8-氟喹啉-4-羧酸甲酯，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:206。
步骤3：8-氟喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000482
向50mL圆底烧瓶中，加入8-氟喹啉-4-羧酸甲酯(890mg，4.34mmol，1.00当量)、甲醇(15mL)和在水(8mL)中的氢氧化钠(520mg，13.00mmol，3.00当量)溶液。所得溶液在室温下搅拌过夜，将所得混合物在真空下浓缩。用水(20mL)稀释所得溶液，用乙酸乙酯(30mL×2)洗涤所得溶液，用盐酸(1mol/L)将溶液的pH值调至5-6。过滤收集固体，得到710mg(86％)的8-氟喹啉-4-羧酸，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:192。
步骤4：8-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000483
向50mL的圆底烧瓶中，加入8-氟喹啉-4-羧酸(150mg，0.78mmol，1.00当量)、甲醇(8mL)和Pt2O(30mg)。向其中引入氢气，所得溶液在室温下搅拌50分钟，滤掉固体。将所得混合物真空浓缩，得到140mg(91％)的8-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:196。
步骤5：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000491
向50mL圆底烧瓶中，加入6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(95mg，0.44mmol，1.20当量)、8-氟喹啉-4-羧酸(70mg，0.37mmol，1.00当量)、HOBT(75mg，0.56mmol，1.50当量)、EDCI(105mg，0.55mmol，1.50当量)、TEA(110mg，1.09mmol，3.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加水(30mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液并合并有机层。将所得混合物在真空下浓缩，通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XSelect CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从25％B到60％B；254nm。
对映异构体A，实施例37：将收集的组分冻干，得到1.8mg(1％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:6.63分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:394。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.91-6.86(m,1H),6.74-6.64(m,3H),6.42-6.38(m,1H),5.79(s,1H),5.08-5.05(m,1H),4.24-4.20(m,2H),3.45-3.42(m,2H),3.29-3.26(m,2H),2.97(s,3H),2.48-2.45(m,2H),2.10-2.02(m,2H)。
组分B，实施例38：将收集的组分冻干，得到4.3mg(3％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:5.95分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:394。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.90-6.85(m,1H),6.69-6.67(m,1H),6.41-6.36(m,1H),5.81(s,2H),5.76(s,1H),4.97-4.94(m,1H),4.57-4.47(m,2H),3.46-3.40(m,2H),3.29-3.24(m,2H),2.96(s,3H),2.47-2.44(m,2H),2.11-1.99(m,2H)。
实施例39和40：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(2,2-二甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(2,2-二甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000492
步骤1：4-(2-氨基苯基)-2-甲基-3-炔-2-醇
Figure BDA0002603691860000501
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的250mL圆底烧瓶中，加入2-碘苯胺(5g，22.83mmol，1.00当量)、2-甲基-3-丁炔-2-醇(2.87g，34.12mmol，1.50当量)、Pd(PPh3)2Cl2(798mg，1.14mmol，0.05当量)、PPh3(3g，11.54mmol，0.50当量)、CuI(216.6mg，1.14mmol，0.05当量)、TEA(50mL)和吡啶(50mL)。所得溶液在100℃下搅拌15小时，冷却至室温后，将所得溶液用水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。将残余物施加到具有乙酸乙酯/PE(1:3)的硅胶柱上，得到3.1g(77％)的4-(2-氨基苯基)-2-甲基-3-丁炔-2-醇，为黄色液体。MS(ES,m/z)[M+H]+:176。
步骤2：2,2-二甲基-2,3-二氢喹啉-4(1H)-酮
Figure BDA0002603691860000502
向250mL圆底烧瓶中，加入4-(2-氨基苯基)-2-甲基-3-丁炔-2-醇(3.1g，17.69mmol，1.00当量)、盐酸(90mL)和水(90mL)。所得溶液在120℃下搅拌1.5小时，冷却至室温后，用饱和NaHCO3水溶液将溶液的pH值调至7。用乙酸乙酯(200mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。将残余物施加到具有乙酸乙酯/PE(3/1)的硅胶柱上，得到2.91g(94％)的2,2-二甲基-2,3-二氢喹啉-4(1H)-酮，为褐色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:176。
步骤3：2,2-二甲基-4-(三甲基甲硅烷基氧基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-甲腈
Figure BDA0002603691860000503
向100mL圆底烧瓶中，加入2,2-二甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-酮(1.5g，8.56mmol，1.00当量)、乙腈(30mL)、TMCSN(16.8g，170.12mmol，20.00当量)和ZnI2(5.5g，17.23mmol，2.00当量)。所得溶液在室温下搅拌15小时，然后加水(100mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(100mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩，得到2g(85％)的2,2-二甲基-4-(三甲基甲硅烷基氧基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-甲腈，为棕色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:275。
步骤4：2,2-二甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000511
向250mL圆底烧瓶中，加入2,2-二甲基-4-[(三甲基甲硅烷基)氧基]-1,2,3,4-四氢喹啉-4-甲腈(1.9g，6.92mmol，1.00当量)、AcOH(10mL)、盐酸(12mol/L，10mL)和二氯-2-锡烷水合物(1.88g，9.05mmol，1.20当量)。所得溶液在室温下搅拌15小时，通过反相柱在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，C18硅胶，120g，20-45μm，100A；流动相，具有0.05％TFA和ACN的水(30分钟内从5％至65％ACN)；检测器，UV 220/254nm。得到280mg(20％)的2,2-二甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为紫色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:206。
步骤4：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(2,2-二甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(2,2-二甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000512
向100mL圆底烧瓶中，加入2,2-二甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(150mg，0.73mmol，1.00当量)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(159mg，0.74mmol，1.00当量)、HOBt(150mg，1.11mmol，1.50当量)、EDCI(210mg，1.10mmol，1.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和TEA(375mg，3.71mmol，5.00当量)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加水(50mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(60mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XBridge C18 OBD制备柱，100 10μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从20％B到45％B；254/220nm。
组分A，实施例39：将收集的组分冻干，得到10.4mg(3.5％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(2,2-二甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:6.25分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.93-6.88(m,1H),6.68-6.60(m,3H),6.52-6.50(m,1H),6.42-6.37(m,1H),5.69(s,1H),5.14-5.08(m,1H),4.23(s,2H),3.44-3.41(m,2H),2.97(s,3H),2.47-2.44(m,2H),1.94-1.84(m,2H),1.22(s,3H),1.11(s,3H)。
组分B，实施例40：将收集的组分冻干，得到14.7mg(5％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(2,2-二甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:5.77分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.91-6.86(m,1H),6.64-6.66(m,1H),6.51-6.48(m,1H),6.41-6.36(m,1H),5.79(s,2H),5.66(s,1H),5.05-4.99(m,1H),4.57(s,2H),3.44-3.42(m,2H),2.98(s,3H),2.47-2.44(m,2H),1.91-1.85(m,2H),1.23(s,3H),1.12(s,3H)。
实施例41和42：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000521
步骤1：3-(吡啶-2-基氨基)丙酸
Figure BDA0002603691860000522
向250mL圆底烧瓶中，加入吡啶-2-胺(4g，42.50mmol，1.00当量)、AcOH(752mg，12.52mmol，0.52当量)和丙-2-烯酸丁酯(3.7g，28.87mmol，1.20当量)。所得溶液在70℃下搅拌过夜，加入氢氧化钾(3.37g，60.06mmol，2.50当量)和水(10mL)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，所得混合物在真空下浓缩。所得混合物用DCM(200mL×6)洗涤，滤掉固体，浓缩滤液，得到4g(57％)的3-(吡啶-2-基氨基)丙酸，为棕色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:167。
步骤2：2,3-二氢-1,8-萘啶-4(1H)-酮
Figure BDA0002603691860000523
向250mL圆底烧瓶中，加入3-[(吡啶-2-基)氨基]丙酸(4g，24.07mmol，1.00当量)和硫酸(70mL)。所得溶液在80℃下搅拌过夜，将混合物冷却至30℃。用氢氧化钠(100％)将溶液的pH值调至12。用乙酸乙酯(400mL×4)萃取所得溶液并浓缩，将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(1/1)的硅胶柱上。将收集的组分合并和在真空下浓缩，得到400mg(11％)的2,3-二氢-1,8-萘啶-4(1H)-酮，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:149。
步骤3：4-(三甲基甲硅烷氧基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-甲腈
Figure BDA0002603691860000531
向250mL圆底烧瓶中，加入1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-酮(680mg，4.59mmol，1.00当量)、ACN(20mL)、ZnI2(380mg，5.51mmol，1.20当量)和TMCSN(4.5g，46.10mmol，10.00当量)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，然后加水(50mL)将反应淬灭。用二氯甲烷(50mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩，得到880mg(78％)的4-(三甲基甲硅烷氧基)-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-甲腈，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:248。
步骤4：1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000532
向250mL圆底烧瓶中，加入4-[(三甲基甲硅烷基)氧基]-1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-甲腈(880mg，3.56mmol，1.00当量)、SnCl2H2O(3.22g，14.25mmol，4.00当量)、AcOH(10mL)和盐酸(12mol/L，10mL)。所得溶液在115℃下搅拌过夜，将混合物冷却至30℃，然后加水(100mL)将反应淬灭。用二氯甲烷(150mL×6)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩，得到1.26g(粗品)的1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-羧酸，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:179。
步骤5：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000533
向25mL圆底烧瓶中，加入1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-羧酸(66mg，0.37mmol，1.00当量)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(96mg，0.44mmol，1.20当量)、HOBt(76mg，0.56mmol，1.50当量)、EDCI(107mg，0.56mmol，1.50当量)，N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和TEA(187mg，1.85mmol，5.00当量)。得到的溶液在25℃下搅拌4小时，用DCM(80mL)稀释反应混合物，用H2O(50mL×3)和盐水(50mL×3)洗涤，并用Na2SO4干燥。过滤后，将滤液进行减压浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化(分析HPLC-SHIMADZU)：柱：XBridge Prep OBD C18柱；150mm 5um；流动相A：水(10mM NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：8分钟内从5％B到35％B；220nm。
组分A，实施例41：将收集的组分冻干，得到(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:7.27分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:377。(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ7.83-7.82(m,1H),7.14-7.13(m,1H),6.65(s,2H),6.59(s,1H),6.43-6.40(m,1H),5.00-4.96(m,1H),4.23(s,2H),3.43-3.35(m,2H),3.32-3.30(m,2H),2.90(s,3H),2.49-2.46(m,2H),2.33-2.00(m,2H)。
组分B，实施例42：将收集的组分冻干，得到15mg(11％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:6.57分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:377。(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ7.82-7.80(m,1H),7.14-7.12(m,1H),6.60(s,1H),6.42-6.40(m,1H),5.82(s,2H),4.90-4.87(m,1H),4.48(s,2H),3.47-3.41(m,3H),3.28-3.27(m,1H),2.90(s,3H),2.49-2.47(m,2H),2.10-1.98(m,2H)。
实施例43和44：4-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羰基)-6-氟-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮和4-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-羰基)-6-氟-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮
Figure BDA0002603691860000541
向50mL圆底烧瓶中，加入6-氟-2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(市售，ChemBridge，200mg，0.96mmol，1.00当量)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(210mg，0.97mmol，1.10当量)、HOBT(195mg，1.44mmol，1.50当量)、EDCI(175mg，0.91mmol，1.50当量)、TEA(290mg，2.87mmol，3.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加水(30mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩，通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：11分钟内从20％B到40％B；254/220nm。
组分A，实施例43：将收集的组分冻干，得到7.7mg(2％)的4-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羰基)-6-氟-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮，为灰白色固体。Rt2:9.48分钟。MS(ES,m/z)[M+H]+:408。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ10.11(s,1H),7.23-7.19(m,1H),7.06-6.99(m,1H),6.88-6.82(m,1H),6.59(s,2H),5.13-5.10(m,1H),4.23(s,2H),3.39-3.35(m,2H),2.94(s,3H),2.87-2.79(m,1H),2.68-2.62(m,1H),2.48-2.39(m,2H)。
组分B，实施例44：将收集的组分冻干，得到11.7mg(3％)的4-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-羰基)-6-氟-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮，为白色固体。Rt1:8.33分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:408。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ10.10(s,1H),7.31-7.28(m,1H),7.07-7.02(m,1H),6.89-6.86(m,1H),5.88(s,2H),5.04-5.02(m,1H),4.55-4.41(m,1H),3.48-3.42(m,1H),3.37-3.32(m,1H),2.94(s,3H),2.85-2.79(m,1H),2.69-2.64(m,1H),2.49-2.45(m,2H)。
实施例45和46：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-异丙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-异丙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000551
步骤1：6-(丙-1-烯-2-基)喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000552
向250mL圆底烧瓶中，加入6-溴喹啉-4-羧酸(1.0g，3.97mmol，1.00当量)、碳酸钾(1.65g，11.94mmol，3.00当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(294mg，0.40mmol，0.10当量)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(1.08g，6.43mmol，1.50当量)、二恶烷(50mL)和水(5.0mL)。所得溶液在85℃油浴中搅拌过夜，冷却至室温后，将将固体滤掉。用水(50mL)稀释所得溶液，并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并水层。用盐酸(1mol/L)将溶液的pH值调至5-6，过滤收集固体。得到700mg(83％)的6-(丙-1-烯-2-基)喹啉-4-羧酸，为灰白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:214。
步骤2：6-异丙基喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000561
向500mL圆底烧瓶中，加入6-(丙-1-烯-2-基)喹啉-4-羧酸(700mg，3.28mmol，1.00当量)、甲醇(200mL)和钯碳(10％，700mg)。将烧瓶抽真空并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫。混合物在室温氢气气氛(气球)中搅拌2小时，滤掉固体。将所得混合物在真空下浓缩，得到300mg(42％)6-(丙-2-基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:216。
步骤3：6-异丙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000562
向100mL圆底烧瓶中，加入6-(丙-2-基)喹啉-4-羧酸(90mg，0.42mmol，1.00当量)、甲醇(15.0mL)、和二氧化铂(90mg，0.40mmol，0.95当量)。将烧瓶抽真空并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫。混合物在室温(20℃)氢气气氛(气球)中搅拌2小时。将所得混合物在真空下浓缩，残余物溶解于10.0mL甲醇中。将残余物施加到具有MeCN/H2O(0-40％)的硅胶柱上。得到50mg(55％)的6-(丙烷-2-基)-1,2,3,-四氢喹啉-4-羧酸，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:220。
步骤4：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-异丙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-异丙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000563
向100mL圆底烧瓶中，加入6-(丙-2-基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(219mg，1.00mmol，1.00当量)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(216mg，1.00mmol，1.00当量)、1H-1,2,3-苯并三唑-1-醇(202mg，1.49mmol，1.50当量)、EDCI(287mg，1.50mmol，1.50当量)、TEA(505mg，4.99mmol，5.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(15mL)。所得溶液在20℃下搅拌2小时，然后加水(20mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和用无水硫酸钠干燥，滤掉固体。将所得混合物在真空下浓缩，通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，XBridge C18 OBD制备柱，10μm，19mm×250mm；流动相，水(0.1％FA)和ACN(ACN在9分钟内从20.0％达到40.0％)；检测器，UV254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到11.1mg(3％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-异丙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为灰白色固体。Rt2:7.03分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:418。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.81(d,J＝8.4Hz,1H),6.65-6.63(m,3H),6.45(d,J＝8.4Hz,1H),5.85(s,1H),4.99-4.97(m,1H),4.23(s,2H),3.46-3.39(m,2H),3.26-3.21(m,1H),3.16-3.13(m,1H),2.97(s,3H),2.67-2.59(m,1H),2.47-2.41(m,2H),2.07-1.99(m,2H),1.06-1.05(m,6H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到13.2mg(3％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1(6-异丙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:6.52分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:418。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.81(d,J＝8.4Hz,1H),6.66-6.65(m,1H),6.45(d,J＝8.4Hz,1H),5.78(s,3H),4.91-4.88(m,1H),4.52(s,2H),3.45-3.38(m,2H),3.27-3.24(m,1H),3.16-3.11(m,1H),2.97(s,3H),2.67-2.59(m,1H),2.47-2.45(m,2H),2.07-1.99(m,2H),1.07-1.05(m,6H)。
实施例47和48：N-(4-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)乙酰胺和N-(4-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)乙酰胺
Figure BDA0002603691860000571
步骤1：6-氨基喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000572
向用CO的惰性气体吹扫并保持的50mL压力罐反应器(50atm)中，加入在甲醇(20mL)中的4-溴-6-硝基喹啉(2.0g，7.90mmol，1.00当量)溶液、TEA(4.0g，39.60mmol，5.00当量)和Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(1.29g，1.58mmol，0.20当量)。所得溶液在70℃下搅拌24小时，将反应混合物用水浴冷却至20℃。将所得混合物在真空下浓缩，通过反相柱在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，C18硅胶，120g，20-45μm，100A；流动相，含0.05％FA和ACN的水(15分钟内从5％至40％ACN)；检测器，UV 220/254nm。得到322mg(20％)的6-氨基喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:203。
步骤2：6-乙酰胺基喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000581
向100mL圆底烧瓶中，加入在二氯甲烷(15mL)中的6-氨基喹啉-4-羧酸甲酯(350mg，1.73mmol，1.00当量)溶液、乙酸乙酰酯(195mg，1.91mmol，1.10当量)和吡啶(273mg，3.46mmol，2.00当量)。所得溶液在20℃下搅拌4小时，将所得混合物在真空下浓缩。通过反相柱在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，C18硅胶，80g，20-45μm，100A；流动相，含0.05％FA和ACN的水(20分钟内从2％至40％ACN)；检测器，UV 220/254nm。得到417mg(99％)的6-乙酰胺基喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:245。
步骤3：6-乙酰胺基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000582
向50mL圆底烧瓶中，加入在甲醇(15mL)中的6-乙酰胺基喹啉-4-羧酸甲酯(392mg，1.60mmol，1.00当量)溶液和PtO2(196mg)。将烧瓶抽真空并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫。混合物在20℃下在氢气气氛(气球)中搅拌1小时，然后加入PtO2(200mg)。所得溶液在搅拌下在20℃下继续反应1小时。滤掉固体，滤液在真空下浓缩。得到338mg(85％)的6-乙酰氨基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:249。
步骤4：6-乙酰氨基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000583
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的50mL圆底烧瓶中，加入在甲醇(6mL)中的6-乙酰胺基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯(338mg，1.36mmol，1.00当量)溶液、水(6.0mL)和氢氧化钠(272mg，6.80mmol，5.0当量)。所得溶液在20℃下搅拌2小时，用盐酸(1.0mol/L)将溶液的pH值调至5-6，将所得混合物在真空下浓缩。通过反相柱在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，C18硅胶，80g，20-45μm，100A；流动相，含0.05％FA和ACN的水(20分钟内从2％至20％ACN)；检测器，UV 220/254nm。得到254mg(80％)6-乙酰氨基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为棕色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:249。
步骤5：N-(4-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-2-羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)乙酰胺和N-(4-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑啉[3,4-c]吡啶-1-羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)乙酰胺
Figure BDA0002603691860000591
向50mL圆底烧瓶中，加入6-乙酰胺基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(16mg，0.07mmol，1.50当量)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(10mg，0.05mmol，1.00当量)、HOBt(9.3mg，0.07mmol，1.50当量)、EDCI(13mg，0.07mmol，1.50当量)、TEA(14mg，0.14mmol，3.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(10ml)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加水(20mL)将反应淬灭。用二氯甲烷(20mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，XBridge Prep OBDC18柱，19×250mm 5um；流动相，水(10mM NH4HCO3)和ACN(ACN在7分钟内从25.0％达到50.0％)；检测器，UV 254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到4.2mg(21％)的N-(4-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4]-c]吡啶-2-羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)乙酰胺，为粉红色固体。Rt2:6.48分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:433。(DMSO,400MHz,ppm):δ9.42(s,1H),7.42-7.13(m,1H),6.98(s,1H),6.64(s,1H),6.46-6.440(m,1H),5.67(s,1H),5.01(m,1H),4.25-4.24(m,2H),3.43-3.41(m,2H),3.31-3.28(m,2H),2.97(s,3H),2.50-2.46(m,2H),2.02-2.01(m,2H),1.90(s,3H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到2.3mg(11.5％)的N-(4-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-1-羰基)1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)乙酰胺，为粉红色固体。Rt1:6.01分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:433。(DMSO,400MHz,ppm):δ9.43(s,1H),7.42-7.13(m,1H),6.92-6.92(s,1H),6.45-6.43(s,1H),5.81(s,1H),5.67(s,1H),4.93-4.90(m,1H),4.53(s,2H),3.43-3.40(m,2H),3.33-3.26(m,1H),3.25(m,1H),2.97(s,3H),2.54-2.34(m,2H),2.02-1.99(m,2H),1.90(s,3H)。
实施例49和50：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000601
步骤1：6-苯基喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000602
向100mL圆底烧瓶中，加入6-溴喹啉-4-羧酸(500mg，1.98mmol，1.00当量)、碳酸钾(828mg，5.99mmol，3.00当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(147mg，0.20mmol，0.10当量)、苯基硼酸(366mg，3.00mmol，1.50当量)、二恶烷(30mL)和水(3mL)。向其中引入N2，所得溶液在85℃在油浴中搅拌过夜。冷却至室温后，将固体滤掉。将所得混合物在真空下浓缩，残余物溶解于50.0mL水中，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取所得溶液并合并水层。用盐酸(1mol/L)将溶液的pH值调至6，收集分离的固体。得到180mg(36％)的6-苯基喹啉-4-羧酸，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:250。
步骤2：6-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000603
向250mL圆底烧瓶中，加入6-苯基喹啉-4-羧酸(500mg，2.01mmol，1.00当量)、甲醇(90mL)、乙酸(20mL)和钯碳(10％，500mg)。将烧瓶抽真空并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫，混合物在20℃下在氢气气氛(气球)中搅拌过夜。将所得混合物过滤并将滤液在真空下浓缩，得到100mg(20％)的6-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:254。
步骤3：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000611
向40mL小瓶中，加入6-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(120mg，0.47mmol，1.00当量)、1H-1,2,3-苯并三唑-1-醇(96mg，0.71mmol，1.50当量)、EDCI(138mg，0.72mmol，1.50当量)、TEA(144mg，1.42mmol，3.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(10.0mL)和6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(102mg，0.47mmol，1.00当量)。所得溶液在20℃下搅拌6小时，然后加水(20mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和用无水硫酸钠干燥，滤掉固体，将所得混合物在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱，XSelect CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19×150mm；流动相，水(0.1％FA)和ACN(ACN在7分钟内从35.0％达到70.0％)；检测器，UV 254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到13.6mg(6％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为灰白色固体。Rt2:6.12分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:452。(DMSO,400MHz,ppm):δ7.45-7.43(m,2H),7.35-7.28(m,3H),7.19-7.17(m,2H),6.63-6.60(m,3H),6.10(s,1H),5.07-5.05(m,1H),4.26(s,2H),3.44-3.42(m,2H),3.29-3.23(m,2H),2.97(s,3H),2.44-2.40(m,2H),2.14-2.08(m,2H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到32.5mg(15％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-苯基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为灰白色固体。Rt1:5.50分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:452。(DMSO,400MHz,ppm):δ7.46-7.44(m,2H),7.34-7.31(m,2H),7.28-7.25(m,1H),7.19-7.16(m,2H),6.61-6.59(m,1H),6.07(s,1H),5.82(s,2H),4.99-4.97(m,1H),4.53(s,2H),3.46-3.42(m,1H),3.39-3.35(m,2H),3.22-3.20(m,1H),2.98(s,3H),2.44-2.41(m,2H),2.11-2.03(m,2H)。
实施例51、52、53和54：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮以及(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000621
步骤1：2-((4-氟-2-甲基苯基氨基)亚甲基)丙二酸二乙酯
Figure BDA0002603691860000622
向500mL圆底烧瓶中，加入4-氟-2-甲基苯胺(25g，200mmol，1.00当量)、甲苯(30mL)和2-(乙氧基亚甲基)丙二酸1，3-二乙酯(65g，300mmol，1.50当量)。所得溶液在110℃下搅拌过夜，将混合物冷却至35℃。所得混合物在真空下浓缩，将残余物施加至具有乙酸乙酯/石油醚(1/10)的硅胶柱上。得到50g(85％)的2-((4-氟-2-甲基苯基氨基)亚甲基)丙二酸二乙酯，为粉红色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:295。
步骤2：6-氟-8-甲基-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-羧酸乙酯
Figure BDA0002603691860000623
向1000mL三颈圆底烧瓶中，加入1,3-二乙基2-[[(4-氟-2-甲基苯基)氨基]亚甲基]丙二酸酯(30g，101.59mmol，1.00当量)。随后加入苯氧基苯(500mL)，所得溶液在240℃下搅拌1小时。冷却至室温后，加入正己烷使产物沉淀，过滤收集固体。得到21g(83％)的6-氟-8-甲基-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-羧酸乙酯，为灰色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:250。
步骤3：6-氟-8-甲基喹啉-4(1H)-酮
Figure BDA0002603691860000631
向500mL三颈圆底烧瓶中，加入6-氟-8-甲基-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-羧酸乙酯(500g，21g，84.26mmol，1.00当量)、乙烷-1,2-二醇(200mL)、氢氧化钠(17g，425.00mmol，5.00当量)和水(5mL)。所得溶液在190℃下搅拌2小时，冷却至室温后，将所得溶液用水(300mL)稀释。使用盐酸(3mol/L)将pH值调至5-6，过滤收集固体。得到14.5g(97％)的6-氟-8-甲基喹啉-4(1H)-酮，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:178。
步骤4：4-溴-6-氟-8-甲基喹啉
Figure BDA0002603691860000632
向500mL圆底烧瓶中，加入6-氟-8-甲基-1,4-二氢喹啉-4-酮(14.5g，81.84mmol，1.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(150mL)。随后在0℃搅拌下逐滴添加PBr3(24g，88.66mmol，1.10当量)。所得溶液在室温下搅拌3小时，然后加水/冰(300mL)将反应淬灭。用氢氧化钠(20％)将pH值调至8-9。过滤收集固体，得到16g(81％)的4-溴-6-氟-8-甲基喹啉，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:240。
步骤5：6-氟-8-甲基喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000633
向用CO的惰性气体吹扫并保持的300mL压力罐反应器(50atm)中，加入4-溴-6-氟-8-甲基喹啉(16g，66.65mmol，1.00当量)、甲醇(100mL)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(8g，9.79mmol，0.15当量)和TEA(20g，197.65mmol，3.00当量)。所得溶液在70℃下搅拌过夜，冷却至室温后，将所得混合物在真空下浓缩。将残余物施加至具有乙酸乙酯/石油醚(0-30％)的硅胶柱上。得到10g(68％)的6-氟-8-甲基喹啉-4-羧酸甲酯，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:220。
步骤6：6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000641
向250mL圆底烧瓶中，加入6-氟-8-甲基喹啉-4-羧酸甲酯(2g，9.75mmol，1.00当量)、甲醇(50mL)和PtO2(1g)。向其中引入氢气，所得溶液在室温下搅拌1小时，滤掉固体。将所得混合物在真空下浓缩。得到1.5g(74％)6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:222。
步骤7：6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000642
向250mL圆底烧瓶中，加入6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯(1.5g，6.72mmol，1.00当量)、甲醇(80mL)和在水(40mL)中的氢氧化钠(800mg,20.00mmol，3.00当量)溶液。所得溶液在室温下搅拌过夜，将所得混合物在真空下浓缩。用乙酸乙酯(40mL×2)萃取所得溶液并合并水层。使用盐酸(3mol/L)将pH值调至5-6。用乙酸乙酯(50mL×3)萃取所得溶液并合并有机层，将所得混合物在真空下浓缩。得到1.3g(92％)的6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:208。
步骤8：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000643
向50mL圆底烧瓶中，加入6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(115mg，0.53mmol，1.10当量)、6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(100mg，0.48mmol，1.00当量)、HOBt(100mg，0.74mmol，1.50当量)、EDCI(140mg，0.73mmol，1.50当量)、TEA(145mg，1.43mmol，3.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加水(30mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液，合并有机层并在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XSelect CSH PrepC18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：8分钟内从25％B到54.6％B；254nm。
组分A，实施例43：将收集的组分冻干，得到4.1mg(2％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为灰白色固体。Rt2:7.23分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:408。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.78-6.73(m,1H),6.65(s,2H),6.56-6.53(m,1H),5.15(s,1H),5.01-4.98(m,1H),4.24(s,2H),3.45-3.40(m,2H),3.28-3.21(m,2H),2.96(s,3H),2.49-2.46(m,2H),2.11-1.98(m,5H)。
组分B，实施例52：将收集的组分冻干，得到14.6mg(7％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为灰白色固体。Rt1:6.27分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:408。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.75-6.71(m,1H),6.58-6.54(m,1H),5.80(s,2H),5.11(s,1H),4.93-4.89(m,1H),4.53(s,2H),3.49-3.36(m,2H),3.23-3.19(m,2H),2.96(s,3H),2.49-2.45(m,2H),2.07-1.96(m,5H)。
步骤9：(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000651
通过Prep-HPLC在以下条件下分离出(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(130mg，0.32mmol，1.00当量)，柱：CHIRAL ART Cellulose-SB S-5um，2×25cm，5um；流动相A：Hex--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：13分钟内从50B到50B；220/254nm。
对映异构体A，实施例53：得到49.6mg(38％)的(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c[吡啶-2-基](6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:11.39分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:408。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.76-6.73(m,1H),6.65(s,2H),6.56-6.53(m,1H),5.15(s,1H),5.01-4.98(m,1H),4.24(s,2H),3.47-3.41(m,2H),3.29-3.22(m,2H),2.97(s,3H),2.49-2.46(m,2H),2.12-1.90(m,5H)。
对映异构体B，实施例54：得到43.6mg(34％)的(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:9.81分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:408。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.76-6.73(m,1H),6.64(s,2H),6.56-6.53(m,1H),5.15(s,1H),5.01-4.98(m,1H),4.24(s,2H),3.47-3.41(m,2H),3.29-3.21(m,2H),2.97(s,3H),2.49-2.46(m,2H),2.11-1.95(m,5H)。
实施例55和56：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000661
步骤1：8-甲基-6-乙烯基喹啉-4(1H)-酮
Figure BDA0002603691860000662
向1L圆底烧瓶中，加入6-溴-8-甲基-1,4-二氢喹啉-4-酮(11.8g，49.56mmol，1.00当量)、2-乙烯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(15.4g，99.99mmol，2.00当量)、Pd(dppf)Cl2(4.1g，5.60mmol，0.10当量)、碳酸钾(20.7g，3.00当量)、二恶英(dioxone)(600mL)和水(60mL)。所得溶液在80℃下搅拌15小时，冷却至室温后，将残余物施加到具有二氯甲烷/甲醇(10:1)的硅胶柱上。得到5.3g(58％)的8-甲基-6-乙烯基喹啉-4(1H)-酮，为褐色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:186。
步骤2：4-溴-8-甲基-6-乙烯基喹啉
Figure BDA0002603691860000663
向250mL的圆底烧瓶中，加入8-甲基-6-乙烯基喹啉-4(1H)-酮(3.2g，17.28mmol，1.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(50mL)和三溴化磷(5.6g，20.69mmol，1.20当量)。所得溶液在室温下搅拌15小时，然后加水/冰(100mL)将反应淬灭。用氢氧化钠(6mol/L)将溶液的pH值调至9，过滤收集固体。得到3.5g(87％)的4-溴-8-甲基-6-乙烯基喹啉，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:248。
步骤3：8-甲基-6-乙烯基喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000671
向50mL压力罐反应器(CO，60atm)中，加入4-溴-8-甲基-6-乙烯基喹啉(1g，4.27mmol，1.00当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(0.66g，0.20当量)、TEA(2.02g，5.00当量)和甲醇(20mL)。所得溶液在室温下搅拌15小时，将残余物施加到具有乙酸乙酯/己烷(1:3)的硅胶柱上。得到600mg(62％)的8-甲基-6-乙烯基喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:228。
步骤4：6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000672
向100mL圆底烧瓶中，加入6-乙烯基-8-甲基喹啉4-羧酸甲酯(700mg，3.08mmol，1.00当量)、甲醇(30mL)和钯碳(10％，350mg)。所得溶液在室温下搅拌15小时，将烧瓶抽真空并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫。混合物在室温下在氢气气氛(气球)中搅拌2小时，滤掉固体，滤液在真空下浓缩。得到500mg(70％)的6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:234。
步骤5：6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸钠
Figure BDA0002603691860000673
向100mL圆底烧瓶中，加入6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯(360mg，1.54mmol，1.00当量)、甲醇(30mL)、水(15mL)和氢氧化钠(185mg，4.64mmol，3.00当量)。所得溶液在室温下搅拌15小时，通过真空蒸馏除去反应液。得到200mg(54％)的6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸钠，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:242。
步骤6：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000681
向100mL圆底烧瓶中，加入6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸钠(150mg，0.62mmol，1.00当量)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(148mg，0.68mmol，1.10当量)、HATU(353mg，0.93mmol，1.50当量)、DIEA(340mg，2.63mmol，129.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加水(50mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(50mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。通过反相柱在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30×150mm,5um；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：9分钟内从10％B到50％B；254.220nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到5mg(2％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:8.45分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:418。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.70(s,1H),6.63(s,2H),6.49(s,1H),5.04-5.00(m,2H),4.24(s,2H),3.44-3.40(m,2H),3.25-3.23(m,2H),2.97(s,3H),2.47-2.45(m,2H),2.38-2.30(m,2H),2.09-1.98(m,5H),1.07-1.02(m,3H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到10.3mg(4％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1基)(6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:6.67分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:418。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.73(s,1H),6.54(s,1H),5.80(s,3H),4.95-4.92(m,1H),4.52(s,2H),3.44-3.41(m,2H),3.32-3.31(m,1H),3.25-3.22(m,1H),2.96(s,3H),2.47-2.45(m,2H),2.39-2.34(m,2H),2.05-1.97(m,5H),1.08-1.03(m,3H)。
实施例57、58、59和60：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮以及(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000682
步骤1：8-氯喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000691
向用CO的惰性气体吹扫并保持的250mL压力罐反应器(50atm)中，加入4-溴-8-氯喹啉(4g，16.49mmol，1.00当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(2g，2.45mmol，0.15当量)、甲醇(70mL)和TEA(5g，49.50mmol，3.00当量)。所得溶液在70℃下搅拌38小时，将反应冷却至室温。将所得混合物在真空下浓缩，将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(0-30％，30分钟)的硅胶柱上。得到3.5g(96％)的8-氯喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:222。
步骤2：8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000692
向100mL圆底烧瓶中，加入8-氯喹啉-4-羧酸甲酯(400mg，1.80mmol，1.00当量)、甲醇(20mL)和PtO2(200mg)。向其中引入氢气，所得溶液在室温下搅拌1小时。滤掉固体，将所得混合物在真空下浓缩，得到320mg(79％)的8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:226。
步骤3：8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000693
向100mL圆底烧瓶中，加入8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯(320mg，1.42mmol，1.00当量)、甲醇(15mL)和在水(10mL)中的氢氧化钠(175mg，4.38mmol，3.00当量)溶液。所得溶液在室温下搅拌过夜，将所得混合物在真空下浓缩。用H2O(20mL)稀释所得溶液，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取所得溶液并合并水层。用盐酸(6mol/L)将溶液的pH值调至5-6。用乙酸乙酯(40mL×3)萃取所得溶液并合并有机层。将所得混合物在真空下浓缩，得到220mg(73％)的8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:212。
步骤4：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000701
向50mL圆底烧瓶中，加入8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(100mg，0.47mmol，1.00当量)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(150mg，0.69mmol，1.50当量)、HOBt(95mg，0.70mmol，1.50当量)、EDCI(135mg，0.70mmol，1.50当量)、TEA(145mg，1.43mmol，3.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加水(30mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液并合并有机层，所得混合物用盐水(100mL×2)洗涤。混合物经无水硫酸钠干燥，滤掉固体。将所得混合物在真空下浓缩，通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XBridge C18OBD Prep柱；19mm×250mm；流动相A：水(10mM NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从30％B到50％B；254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到10.5mg(5％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为灰白色固体。Rt2:6.48分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:410。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ7.12(d,J＝9.2Hz,1H),6.82(d,J＝7.2Hz,1H),6.64(s,2H),6.45-6.41(m,1H),5.77(s,1H),5.07-5.04(m,1H),4.28-4.20(m,2H),3.43-3.40(m,2H),3.36-3.34(m,1H),3.29-3.27(m,1H),2.97(s,3H),2.49-2.45(m,2H),2.14-2.11(m,1H),2.07-1.98(m,1H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到15.4mg(8％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为灰白色固体。Rt1:5.61分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:410。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ7.10(d,J＝9.2Hz,1H),6.82(d,J＝7.6Hz,1H),6.45-6.41(m,1H),5.81(s,2H),5.74(s,1H),4.97-4.94(m,1H),4.57-4.51(m,2H),3.47-3.37(m,3H),3.31-3.28(m,1H),2.96(s,3H),2.49-2.47(m,2H),2.12-2.07(m,1H),2.03-1.98(m,1H)。
步骤5：(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000711
通过制备-手性-HPLC在以下条件下分离(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-甲基)甲酮(7mg，0.02mmol，1.00当量)，柱：CHIRALPAK IG，20×250mm，5μm；流动相A：Hex--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：23分钟内从50B到50B；254/220nm。
对映异构体A，实施例59：得到2.9mg(41％)的(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。RT2:18.74分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:410。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ7.13-7.11(m,1H),6.83-6.81(m,1H),6.65(s,2H),6.45-6.41(m,1H),5.79(s,1H),5.08-5.04(m,1H),4.24(s,2H),3.43-3.37(m,2H),3.28-3.26(m,2H),2.97(s,3H),2.48-2.42(m,2H),2.14-2.04(m,2H)。
对映异构体B，实施例60：得到2.5mg(36％)的(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。RT1:14.75分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:410。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ7.13-7.11(m,1H),6.83-6.82(m,1H),6.65(s,2H),6.45-6.41(m,1H),5.79(s,1H),5.08-5.04(m,1H),4.24(s,2H),3.43-3.40(m,2H),3.28-3.26(m,2H),2.97(s,3H),2.48-2.45(m,2H),2.14-1.96(m,2H)。
实施例61、62、63和64：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮以及(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000712
步骤1：4-溴-8-甲氧基喹啉
Figure BDA0002603691860000713
向100mL圆底烧瓶中，加入8-甲氧基喹啉-4-醇(2g，11.42mmol，1.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(20mL)。之后在室温搅拌下逐滴加入PBr3(3.4g,12.56mmol,1.10当量)。所得溶液在室温下搅拌1小时。然后加水(70mL)将反应淬灭。用氢氧化钾将溶液的pH值调至7-8。用乙酸乙酯(80mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。得到2g(74％)的4-溴-8-甲氧基喹啉，为灰色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:238。
步骤2：8-甲氧基喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000721
向用CO的惰性气体吹扫并保持的50mL压力罐反应器(50atm)中，加入4-溴-8-甲氧基喹啉(1g，4.20mmol，1.00当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(0.5g，0.15当量)、TEA(1.3g，12.6mmol，3.00当量)和甲醇(15ml)。所得溶液在70℃下搅拌36小时，冷却至室温后，将所得混合物在真空下浓缩。将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(0-40％)的硅胶柱上。得到800mg(88％)的8-甲氧基喹啉-4-羧酸甲酯，为红色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:218。
步骤3：8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000722
向50mL圆底烧瓶中，加入8-甲氧基喹啉-4-羧酸甲酯(400mg，1.84mmol，1.00当量)、甲醇(20mL)和PtO2(200mg)。向其中引入氢气，所得溶液在室温下搅拌2小时。滤掉固体，将所得混合物在真空下浓缩。得到360mg(88％)的8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯，为红色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:222。
步骤4：8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000723
向50mL圆底烧瓶中，加入8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯(360mg，1.63mmol，1.00当量)、甲醇(10mL)和在水(10mL)中的氢氧化钠(200mg，5.00mmol，3.00当量)溶液。所得溶液在室温下搅拌过夜，将所得混合物在真空下浓缩。用乙酸乙酯(10mL×2)萃取所得溶液并合并水层。用盐酸(6mol/L)将溶液的pH值调节至5-6。用乙酸乙酯(20mL×3)萃取所得溶液并合并有机层，将所得混合物在真空下浓缩，得到200mg(59％)的8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:208。
步骤5：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000731
向50mL圆底烧瓶中，加入8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(100mg，0.48mmol，1.00当量)、6-甲基磺酰基-45,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(160mg，0.74mmol，1.50当量)、HOBt(97mg，0.72mmol，1.50当量)、EDCI(140mg，0.73mmol，1.50当量)、TEA(150mg，1.48mmol，3.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加入水(30mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液并合并有机层，所得混合物用盐水(100mL×2)洗涤，混合物经无水硫酸钠干燥，滤掉固体，将所得混合物在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XSelect CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从15％B到55％B；254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到11.1mg(6％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-酰基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为黄色固体。Rt2:6.9分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:406。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.69-6.62(m,3H),6.46-6.37(m,2H),5.21(s,1H),5.06-5.03(m,1H),4.28-4.20(m,2H),3.76(s,3H),3.43-3.40(m,2H),3.28-3.22(m,2H),2.97(s,3H),2.49-2.45(m,2H),2.09-2.01(m,2H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到20mg(10％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-酰基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为黄色固体。Rt1:6.12分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:406。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.74-6.71(m,1H),6.55-6.51(m,2H),6.00-6.50(m,3H),4.98-4.95(m,1H),4.57-4.85(m,2H),3.78(s,3H),3.45-3.36(m,3H),3.29-3.21(m,1H),2.97(s,3H),2.49-2.47(m,2H),2.10-1.98(m,2H)。
步骤6：(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000741
通过制备-手性-HPLC按照以下条件下分离出(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-甲基)甲酮(10mg，0.02mmol，1.00当量)，柱：CHIRAL ART Cellulose-SB S-5um，2×25cm，5um；流动相A：Hex--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：25分钟内从50B到50B；220/254nm。
对映异构体A，实施例63：得到3.4mg(34％)的(S*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:22.96分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:406。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.68-6.66(m,1H),6.63(s,2H),6.48-6.37(m,2H),5.21(s,1H),5.06-5.03(m,1H),4.24(s,2H),3.76(s,3H),3.43-3.40(m,2H),3.31-3.28(m,2H),2.97(s,3H),2.47-2.45(m,2H),2.09-1.97(m,2H)。
对映异构体B，实施例64：得到3.5mg(35％)的(R*)-(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲氧基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:17.57分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:406。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.68-6.67(m,1H),6.63(s,2H),6.46-6.37(m,2H),5.21(s,1H),5.06-5.03(m,1H),4.24(s,2H),3.76(s,3H),3.43-3.40(m,2H),3.30-3.28(m,2H),2.97(s,3H),2.47-2.45(m,2H),2.09-1.97(m,2H)。
实施例65和66：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000742
步骤1：2-((2-乙基苯基氨基)亚甲基)丙二酸二乙酯
Figure BDA0002603691860000743
向500mL圆底烧瓶中，加入2-乙基苯胺(25g，200mmol，1.00当量)、甲苯(30mL)和1,3-二乙基2-(乙氧基亚甲基)丙二酸酯(65g，300mmol，1.50当量)。所得溶液在110℃下搅拌过夜，将混合物冷却至25℃，将得到的混合物在真空下浓缩。将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(1/10)是硅胶柱上，得到50g(85％)的2-((2-乙基苯基氨基)亚甲基)丙二酸二乙酯，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:292。
步骤2：8-乙基-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-羧酸乙酯
Figure BDA0002603691860000751
向1000mL三颈圆底烧瓶中加入Ph2O(500g)，之后在250℃下分批加入1,3-二乙基2-[[(2-乙基苯基)氨基]亚甲基]丙二酸(25g，85.81mmol，1.00当量)。所得溶液在250℃下搅拌4小时，用水浴将反应混合物冷却至20℃，得到16g(76％)的8-乙基-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-羧酸乙酯，为棕色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:246。
步骤3：8-乙基喹啉-4(1H)-酮
Figure BDA0002603691860000752
向500mL三颈圆底烧瓶中，加入8-乙基-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-羧酸乙酯(16g，65.23mmol，1.00当量)、氢氧化钠(13.06g，326.50mmol，5.00当量)、水(5mL)和HOCH2CH2OH(240mL)。所得溶液在160℃下搅拌4小时，用水浴将反应混合物冷却至25℃。用H2O(100mL)稀释所得溶液，将残余物施加到具有二氯甲烷/甲醇(20/1)的硅胶柱上，得到10g(89％)的8-乙基喹啉-4(1H)-酮，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:174。
步骤4：4-溴-8-乙基喹啉
Figure BDA0002603691860000753
向250mL圆底烧瓶中，加入8-乙基-1,4-二氢喹啉-4-酮(10g，57.73mmol，1.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(150mL)和PBr3(47g，173.63mmol，3.00当量)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，然后加水(200mL)将反应淬灭。用氢氧化钾将溶液的pH值调节至8，用二氯甲烷(400mL×4)萃取所得溶液并合并有机层，所得混合物用氯化钠(100mL×8)洗涤，将得到的混合物在真空下浓缩，得到9g(66％)的4-溴-8-乙基喹啉，为棕色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:236。
步骤5：8-乙基喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000761
向用CO的惰性气体吹扫并保持的50mL压力罐反应器(60atm)中，加入4-溴-8-乙基喹啉(2g，8.47mmol，1.00当量)、TEA(2.58g，25.50mmol，3.00当量)、甲醇(30mL)和Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(1.04g，1.27mmol，0.15当量)。所得溶液在120℃下搅拌过夜，将混合物冷却至25℃。将得到的混合物在真空下浓缩，将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(1/10)的硅胶柱上，得到1.3g(71％)的8-乙基喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:216。
步骤6：8-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000762
向100mL圆底烧瓶中，加入8-乙基喹啉-4-羧酸甲酯(1.3g，6.04mmol，1.00当量)、甲醇(20mL)、AcOH(2.5mL)和PtO2(1.3g)。将烧瓶抽真空并用氮气吹扫3次，然后用氢气吹扫。混合物在室温下在氢气气氛(气球)中搅拌2小时，滤掉固体。将得到的混合物在真空下浓缩，得到1.3g(98％)的8-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:220。
步骤7：8-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000763
向250mL圆底烧瓶中，加入8-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯(1.57g，7.16mmol，1.00当量)、水(5mL)、甲醇(40mL)和氢氧化钠(1.43g，35.75mmol，5.00当量)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，用H2O(40mL)稀释所得溶液。所得混合物用DCM(100mL×3)洗涤，用盐酸(1mol/L)将溶液的pH值调节至3-4。用二氯甲烷(150mL×4)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。得到1.1g(75％)的8-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为黄色固体状。MS(ES,m/z)[M+H]+:206。
步骤8：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000771
向100mL圆底烧瓶中，加入8-乙基喹啉-4-羧酸(150mg，0.75mmol，1.00当量)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(238mg，1.10mmol，1.50当量)、HOBt(149mg，1.10mmol，1.50当量)、EDCI(210mg，1.10mmol，1.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(8mL)和TEA(220mg，2.17mmol，3.00当量)。所得溶液在25℃下搅拌3小时，用DCM(80mL)稀释反应混合物，用H2O(50mL×3)和盐水(50mL×3)洗涤并用Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化(分析HPLC-SHIMADZU)，柱：XSelect CSHPrep C18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从35％B到65％B；254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到26.7mg(5％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:5.93分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(300MHz,DMSO-d6,ppm):δ6.83(d,J＝6.9Hz,1H),6.67-6.62(m,3H),6.42-6.37(m,1H),5.29(s,1H),5.06-5.03(m,1H),4.24(s,2H),3.44-3.10(m,4H),3.20(s,3H),2.50-2.37(m,4H),2.10-1.99(m,2H),1.16-1.11(m,3H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到41mg(14％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1酰基)(8-乙基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:5.28分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(300MHz,DMSO-d6,ppm):δ6.82(d,J＝6.9Hz,1H),6.68-6.66(m,1H),6.41-6.36(m,1H),5.77(m,2H),5.26(s,1H),4.97-4.93(m,1H),4.52(s,2H),3.47-3.10(m,4H),2.95(s,3H),2.50-2.37(m,4H),2.07-1.99(m,2H),1.15-1.10(m,3H)。
实施例67和68：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000781
步骤1：4-溴-8-(三氟甲基)喹啉
Figure BDA0002603691860000782
向250mL圆底烧瓶中，加入8-(三氟甲基)喹啉-4-醇(2g，9.38mmol，1.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(30mL)和PBr3(2.8g，10.34mmol，1.10当量)。所得溶液在室温下搅拌1小时，然后加水(200mL)将反应淬灭。用饱和氢氧化钾水溶液将溶液的pH值调节至8。过滤收集固体，得到2.1g(81％)的4-溴-8-(三氟甲基)喹啉，为灰白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:276。
步骤2：8-(三氟甲基)喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000783
向CO的惰性气体吹扫并保持的50mL压力罐反应器(60atm)中，加入4-溴8-(三氟甲基)喹啉(1g，3.62mmol，1.00当量)、Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(445mg，0.54mmol，0.15当量)、TEA(1.1g，10.89mmol，3.00当量)和甲醇(15mL)。所得溶液在室温下搅拌过夜，将得到的混合物在真空下浓缩。将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(0-30％，40分钟)的硅胶柱上，得到820mg(89％)的8-(三氟甲基)喹啉-4-羧酸甲酯，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:256。
步骤3：8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯
Figure BDA0002603691860000791
向50mL圆底烧瓶中，加入8-(三氟甲基)喹啉-4-羧酸甲酯(350mg，1.37mmol，1.00当量)、甲醇(15mL)和二氧化铂(200mg，0.88mmol，0.64当量)。所得溶液在室温下搅拌1小时，滤掉固体。将得到的混合物在真空下浓缩，得到300mg(84％)的8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:260。
步骤4：8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸
Figure BDA0002603691860000792
向100mL的圆底烧瓶中，加入8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸甲酯(300mg，1.16mmol，1.00当量)、甲醇(20mL)和在水(10mL)中的氢氧化钠(140mg，3.50mmol，3.00当量)溶液。所得溶液在室温下搅拌过夜，将得到的混合物在真空下浓缩，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取所得溶液并合并水层，用盐酸(3mol/L)将pH值调节至5-6。用乙酸乙酯(20mL×3)萃取所得溶液并合并有机层，将得到的混合物在真空下浓缩，得到280mg(99％)的8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:246。
步骤5：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000793
向50mL圆底烧瓶中，加入8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(100mg，0.41mmol，1.00当量)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(135mg，0.62mmol，1.50当量)、HOBt(85mg，0.63mmol，1.50当量)、EDCI(120mg，0.63mmol，1.50当量)、TEA(125mg，1.24mmol，3.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(3mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加水(30mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取所得溶液并合并有机层，所得混合物用盐水(100mL×2)洗涤，混合物经无水硫酸钠干燥，滤掉固体，将得到的混合物在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化：柱：XSelect CSH PrepC18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从40％B到75％B；254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到16.7mg(9％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:5.60分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:444。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ7.28(d,J＝7.2Hz,1H),7.09(d,J＝7.6Hz,1H),6.66(s,2H),6.58-6.51(m,1H),5.90(s,1H),5.07-5.04(m,1H),4.24(s,2H),3.43-3.40(m,2H),3.37-3.36(m,1H),3.29-3.24(m,1H),2.98(s,3H),2.48-2.45(m,2H),2.15-2.02(m,2H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到61.8mg(34％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1酰基)(8-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:5.08分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:444。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ7.27(d,J＝6.8Hz,1H),7.09(d,J＝7.6Hz,1H),6.54-6.51(m,1H),5.89(s,1H),5.84(s,2H),4.97-4.94(m,1H),4.52(s,2H),3.47-3.37(m,2H),3.32-3.28(m,2H),2.97(s,3H),2.48-2.46(m,2H),2.14-2.00(m,2H)。
实施例69和70：(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)((S*)-6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)((R*)-6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000801
向100mL圆底烧瓶中，加入6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(300mg，1.37mmol，1.00equiv)、6-甲基磺酰基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(326mg，1.51mmol，1.10当量)、EDCI(403mg，2.10mmol，1.50当量)、HOBt(284mg，2.10mmol，1.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和TEA(692mg，6.84mmol，5.00当量)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加水(30mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(50mL×2)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化，柱：XSelect CSHPrep C18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.05％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：10分钟内从10％B到40％B；254nm。将收集的组分冻干，并通过制备-手性-HPLC在以下条件下对其进行分离，柱：Chiralpak IA，2×25cm，5μm；流动相A：Hex--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：23分钟内从30B到30B；254/220nm。
对映异构体A：得到8.9mg(2％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(S*)-6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2：17.86分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:418。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.70(s,1H),6.61(s,2H),6.49(s,1H),5.03-4.99(m,2H),4.24(s,2H),3.44-3.40(m,2H),3.25-3.20(m,2H),2.97(s,3H),2.45-2.40(m,2H),2.38-2.30(m,2H),2.05-1.98(m,5H),1.07-1.02(m,3H)。
对映异构体B：得到9.8mg(2％)的(3-氨基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(R*)-6-乙基-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:12.89分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:418。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.70(s,1H),6.61(s,2H),6.48(s,1H),5.03-4.99(m,2H),4.24(s,2H),3.44-3.40(m,2H),3.24-3.20(m,2H),2.96(s,3H),2.43-2.38(m,2H),2.38-2.28(m,2H),2.07-1.98(m,5H),1.07-1.02(m,3H)。
实施例71、72和73：(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(S*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮以及(R*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000811
步骤1:(3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000812
向50mL圆底烧瓶中，加入6-苄基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(190mg，0.83mmol，1.10当量)、8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(160mg，0.76mmol，1.00当量)、HOBT(150mg，1.11mmol，1.50当量)、EDCI(220mg，1.15mmol，1.50当量)、TEA(230mg，2.27mmol，3.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(3mL)。所得溶液在室温下搅拌4小时，然后加水(40mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(40mL×3)萃取所得溶液并合并有机层，所得混合物用盐水(2×100mL×2)洗涤。混合物经无水硫酸钠干燥，滤掉固体，将得到的混合物在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化，柱：XSelect CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：16分钟内从2％B到30％B；254nm。Rt1:13.8分钟，Rt2:14.88分钟。将收集的组分冻干，得到150mg(47％)的(3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:422；和120mg(38％)的(3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体，MS(ES,m/z)[M+H]+:422。
步骤2：(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000821
向100mL圆底烧瓶中，加入(3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(250mg，0.59mmol，1.00当量)、甲醇(10mL)、钯碳(10％，200mg)和AcOH(0.4mL)。向其中引入氢气，所得溶液在室温下搅拌1.5小时，滤掉固体，将得到的混合物在真空下浓缩。通过使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化，柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(10mM NH4HCO3)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：3分钟内从5％B到30％B；254nm；Rt:7.63分钟。将收集的组分冻干，得到30mg(15％)的(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:332。
步骤3：(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000822
向100mL圆底烧瓶中，加入(3-氨基-6-苄基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(120mg，0.28mmol，1.00当量)、甲醇(20mL)、钯碳(10％，120mg)和AcOH(0.2mL)。向其中引入氢气，所得溶液在室温下搅拌40分钟。滤掉固体，将得到的混合物在真空下浓缩。使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行进一步纯化，柱：XBridge Prep C18 OBD柱；19×150mm 5um；流动相A：水(10MMOL/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：5分钟内从30％B到43.5％B；254/220nm；Rt:4.35分钟。将收集的组分冻干，得到6.8mg(7％)的(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:332。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ7.09(d,J＝7.5Hz,1H),6.79(d,J＝7.2Hz,1H),6.52-6.39(m,1H),5.71(s,1H),5.63(m,2H),4.98-4.94(m,1H),3.88(s,2H),3.45-3.38(m,2H),2.82-2.79(m,2H),2.25-2.22(m,2H),2.10-1.93(m,2H)。
步骤4：(S*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000831
通过制备-手性-HPLC在以下条件下分离出(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(30mg，0.09mmol，1.00当量)，柱：CHIRALPAK AD-H,2.0cm I.D.×25cm L；流动相A：Hex(％DEA)--HPLC，流动相B：IPA--HPLC；流速：20mL/min；梯度：20分钟内30B至30B；220/254nm。
对映异构体A，实施例72：得到14.9mg(50％)的(S*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2：16.51分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:332。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ7.09(d,J＝6.9Hz,1H),6.78(d,J＝7.2Hz,1H),6.45(s,2H),6.43-6.39(m,1H),5.74(s,1H),5.05-5.02(m,1H),3.71(s,2H),3.60-3.45(m,2H),2.89-2.87(m,2H),2.31-2.27(m,2H),2.18-1.91(m,2H)。
对映异构体B，实施例73：得到11.6mg(39％)的(R*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-氯-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1：12.86分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:332。(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ7.09(d,J＝7.8Hz,1H),6.78(d,J＝7.5Hz,1H),6.43(s,2H),6.41-6.38(m,1H),5.73(s,1H),5.05-5.02(m,1H),3.87(s,2H),3.68-3.63(m,2H),2.87-2.84(m,2H),2.29-2.28(m,2H),2.18-1.95(m,2H)。
实施例74和75：(3-氨基-6,7-二氢吡喃并[4,3-c]吡唑-2(4H)-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6,7-二氢吡喃并[4,3-c]吡唑-1(4H)-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000841
步骤1：4-羰基恶烷-3-甲腈
Figure BDA0002603691860000842
向100mL的圆底烧瓶中，加入3-溴恶烷-4-酮(1.5g，8.38mmol，1.00当量)、DMSO(40mL)和NaCN(616g，12.57mmol，1.50当量)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，然后加入FeSO4水溶液(150mL)将反应淬灭。用二氯甲烷(200mL×6)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩，得到1.5g(粗品)的4-氧代恶烷-3-腈，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:126。
步骤2：2H,4H,6H,7H-吡喃并[4,3-c]吡唑-3-胺
Figure BDA0002603691860000843
向250mL的圆底烧瓶中，加入4-羰基恶烷-3-甲腈(1.5g，11.99mmol，1.00当量)、乙醇(20mL)和NH2NH2H2O(10mL)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，所得混合物在真空下浓缩。将残余物施加到具有二氯甲烷/甲醇(10/1)的硅胶柱上，得到150mg的2H,4H,6H,7H-吡喃并[4,3-c]吡唑-3-胺，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:140。
步骤3：(3-氨基-6,7-二氢吡喃并[4,3-c]吡唑-2(4H)-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(3-氨基-6,7-二氢吡喃并[4,3-c]吡唑-1(4H)-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000844
向100mL圆底烧瓶中，加入6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(168mg，0.86mmol，1.20当量)、2H,4H,6H,7H-吡喃并[4,3-c]吡唑-3-胺(100mg，0.72mmol，1.00当量)、HOBt(146mg，1.08mmol，1.50当量)、EDCI(207mg，1.08mmol，1.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(8mL)和TEA(218mg，2.15mmol，3.00当量)。所得溶液在25℃下搅拌1小时，反应混合物用DCM(80mL)稀释，用H2O(50mL×3)和盐水(50mL×3)洗涤并用Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化(分析HPLC-SHIMADZU)，柱：XBridgeShield RP18 OBD柱，5μm，19mm×150mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：8分钟内从15％B到40％B；254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到28mg(12％)的(3-氨基-6,7-二氢吡喃并[4,3-c]吡唑-2(4H)-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:7.25分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:317。(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ6.81-6.77(m,1H),6.68-6.65(m,1H),6.58(s,2H),6.52-6.49(m,1H),5.80(s,1H),5.00-4.98(m,1H),4.42(s,2H),3.84-3.79(m,2H),3.25-3.15(m,2H),2.62-2.59(m,2H),2.10-1.98(m,2H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到28mg(12％)的(3-氨基-6,7-二氢吡喃并[4,3-c]吡唑-1(4H)-基)(6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:6.19分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:317。(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ6.80-6.77(m,1H),6.77-6.75(m,1H),6.69-6.66(m,1H),5.78(s,1H),5.71(s,2H),4.91-4.88(m,1H),4.41(s,2H),3.77-3.75(m,2H),3.33-3.12(m,2H),2.90-2.88(m,2H),2.08-1.92(m,2H)。
实施例76和77：(S*)-(3-氨基-4,5-二氢吡喃并[3,4-c]吡唑-2(7H)-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-4,5-二氢吡喃[3,4-c]吡唑-2(7H)-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000851
步骤1：2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙酸乙酯
Figure BDA0002603691860000852
向用氮气的惰性气体吹扫并保持氮气的250mL三颈圆底烧瓶中，加入2-溴乙酸乙酯(3.5g，20.96mmol，1.00当量)和四氢呋喃(40mL)。随后在0℃下分批加入氢化钠(1.01g，25.25mmol，1.20当量，60％)，将混合物在0℃下搅拌40分钟。0℃下向其中加入3-(苄氧基)丙-1-醇(10.50g，63.17mmol，3.00当量)，所得溶液在25℃下搅拌过夜。然后加水(100mL)将反应淬灭，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取所得溶液并合并有机层。在真空下除去溶剂，将残余物施加到具有并乙酸乙酯/己烷(1/10)的硅胶柱上。将收集的组分合并和在真空下浓缩。得到3g(57％)的2-(3-(苄氧基)丙氧基)乙酸乙酯，为白色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]:253。
步骤2：2-(3-羟基丙氧基)乙酸乙酯
Figure BDA0002603691860000861
向250mL圆底烧瓶中，加入2-[3-(苄氧基)丙氧基]乙酸乙酯(2.8g、11.10mmol，1.00当量)、Pd(OH)2(2.8g，19.94mmol，1.80当量)和甲醇(15mL)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，过滤收集固体。所得混合物在真空下浓缩，得到1.2g(67％)的2-(3-羟基丙氧基)乙酸乙酯，为白色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]:163。
步骤3：2-(3-溴丙氧基)乙酸乙酯
Figure BDA0002603691860000862
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的100mL圆底烧瓶中，加入2-(3-羟基丙氧基)乙酸乙酯(1.23g，7.58mmol，1.00当量)、CBr4(3.78g，1.50当量)、PPh3(2.39g，9.11mmol，1.20当量)和四氢呋喃(30mL)。所得溶液在25℃下搅拌过夜。，然后加水(30mL)将反应淬灭。用二氯甲烷(80mL×2)萃取所得溶液并合并有机层，将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(1/10)的硅胶柱上。得到1.4g(82％)的2-(3-溴丙氧基)乙酸乙酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]:225。
步骤4：2-(3-氰基丙氧基)乙酸乙酯
Figure BDA0002603691860000863
向250mL圆底烧瓶中，加入2-(3-溴丙氧基)乙酸乙酯(1.4g，6.22mmol，1.00当量)、DMSO(10mL)和NaCN(460mg，9.33mmol，1.50当量)。所得溶液在20℃下搅拌过夜，然后加入FeSO4水溶液(100mL)将反应淬灭。用二氯甲烷(50mL×3)萃取所得溶液并合并有机层，所得混合物用氯化钠(100mL×4)洗涤，将得到的混合物在真空下浓缩。得到1g(94％)的2-(3-氰基丙氧基)乙酸乙酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]:172。
步骤5：3-羰基恶烷-4-甲腈
Figure BDA0002603691860000871
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的100mL三颈圆底烧瓶中，加入2-(3-氰基丙氧基)乙酸乙酯(1.2g，7.01mmol，1.00当量)和四氢呋喃(30mL)。然后在0℃下分批加入t-BuOK(1.18g，10.52mmol，1.50当量)，所得溶液在25℃下搅拌过夜。然后加水/冰(25mL)将反应淬灭，用盐酸(1mol/L)将溶液的pH值调节至4-5。用二氯甲烷(100mL×5)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。得到800mg(91％)的3-羰基恶烷-4-甲腈，为红色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]:126。
步骤6：2,4,5,7-四氢吡喃并[3,4-c]吡唑-3-胺
Figure BDA0002603691860000872
向100mL圆底烧瓶中，加入3-羰基恶烷-4-甲腈(750mg，5.99mmol，1.00当量)、乙醇(25mL)和NH2NH2H2O(10mL)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，所得混合物在真空下浓缩，将残余物施加到具有二氯甲烷/甲醇(10/1)的硅胶柱上。得到240mg(29％)的2,4,5,7-四氢吡喃并[3,4-c]吡唑-3-胺，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]:140。
步骤7：(S*)-(3-氨基-4,5-二氢吡喃并[3,4-c]吡唑-2(7H)-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-4,5-二氢吡喃[3,4-c]吡唑-2(7H)-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000873
向50mL圆底烧瓶中，加入6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(207mg，0.99mmol，1.20当量)、2H,4H,5H,7H-吡喃并[3,4-c]吡唑-3-胺(150mg，1.08mmol，1.00当量)、HOBT(219mg，1.62mmol，1.50当量)、EDCI(311mg，1.62mmol，1.50当量)、N,N-二甲基甲酰胺(6mL)和TEA(327mg，3.23mmol，3.00当量)。所得溶液在25℃下搅拌3小时，用DCM(80mL)稀释反应混合物，用H2O(50mL×3)和盐水(50mL×3)洗涤并用Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化(分析HPLC-SHIMADZU)，色谱：XSelect CSH Prep C18 OBD柱，5μm，19mm×250mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从25％B到65％B；220nm；Rt:5.38和6.18分钟。通过制备-手性-HPLC在以下条件下分离出该产物，柱，CHIRALPAK IF，2×25cm，5μm；流动相，己醇-和乙醇-(在20分钟内保持20.0％乙醇-)；检测器，UV 254/220nm。
对映异构体A：得到16mg(4％)的(S*)-(3-氨基-4,5-二氢吡喃并[3,4-c]吡唑-2(7H)-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt2:6.18分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:331。(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ6.75(d,J＝2.8Hz,1H),6.73-6.52(m,3H),5.13(s,1H),5.00-4.97(m,1H),4.59-4.51(m,2H),3.80-3.75(m,2H),3.32-3.21(m,2H),2.50-2.41(m,2H),2.11-2.07(m,5H)。
对映异构体B：得到15.7mg(4％)的(R*)-(3-氨基-4,5-二氢吡喃并[3,4-c]吡唑-2(7H)-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。Rt1:5.37分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:331。(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ6.75(d,J＝2.8Hz,1H),6.73-6.52(m,3H),5.13(s,1H),5.00-4.97(m,1H),4.59-4.51(m,2H),3.80-3.77(m,2H),3.32-3.21(m,2H),2.50-2.41(m,2H),2.10-2.02(m,5H)。
实施例78、79、80和81：(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮非对映异构体A和(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮非对映异构体B以及(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(非对映体A)和(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(非对映异构体B)
Figure BDA0002603691860000881
步骤1：2-(3-氰基丙基氨基)丙酸乙酯
Figure BDA0002603691860000891
向500mL圆底烧瓶中，加入4-溴丁腈(10g，67.57mmol，1.00当量)、2-氨基丙酸乙酯盐酸盐(11.5g，74.87mmol，1.20当量)、甲烷过氧化钾(potassium potassiummethaneperoxoate)(36g，258.60mmol，4.00当量)和ACN(150mL)。所得溶液在70℃下搅拌过夜，冷却至室温后，将固体滤掉。所得混合物在真空下浓缩，将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(0-100％，50分钟)的硅胶柱上。得到6g(48％)的2-[(3-氰基丙基)氨基]丙酸乙酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:185。
步骤2：2-(苄基(3-氰基丙基)氨基)丙酸乙酯
Figure BDA0002603691860000892
向500mL圆底烧瓶中，加入2-[(3-氰丙基丙基)氨基]丙酸乙酯(6g，32.57mmol，1.00当量)、ACN(200mL)、(溴甲基)苯(8.3g，48.53mmol，1.50当量)和甲烷过氧化钾(13.5g，96.97mmol，3.00当量)。所得溶液在90℃下搅拌过夜，冷却至室温后，将固体滤掉。所得混合物在真空下浓缩，将残余物施加到具有乙酸乙酯/石油醚(0-50％，40分钟)的硅胶柱上。得到8.5g(95％)的2-[苄基(3-氰基丙基)氨基]丙酸乙酯，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:275。
步骤3：1-苄基-2-甲基-3-哌啶酮-4-甲腈
Figure BDA0002603691860000893
向用氮气的惰性气体吹扫并保持的500mL三颈圆底烧瓶中，加入2-[苄基(3-氰基丙基)氨基]丙酸乙酯(8.5g，30.98mmol，1.00当量)和四氢呋喃(200mL)，随后在0℃下分批加入t-BuOK(10g，89.12mmol，3.00当量)。所得溶液在室温下搅拌3小时，然后加入NH4Cl水溶液(300mL)将反应淬灭。用盐酸(3mol/L)将溶液的pH值调节至7-8，用二氯甲烷(10％甲醇)(400mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。得到6.7g(粗品)的1-苄基-2-甲基-3-哌啶酮-4-甲腈，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:229。
步骤4：6-苄基-7-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺
Figure BDA0002603691860000901
向250mL圆底烧瓶中，加入1-苄基-2-甲基-3-哌啶酮-4-甲腈(2.5g，10.95mmol，1.00当量)、NH2NH2H2O(2.5mL)和乙醇(60mL)。所得溶液在室温下搅拌过夜，所得混合物在真空下浓缩，将残余物施加到具有甲醇/二氯甲烷(0-10％，30分钟)的硅胶柱上。得到1.4g(53％)的6-苄基-7-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺，为黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:243。
步骤5：7-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺
Figure BDA0002603691860000902
向250mL圆底烧瓶中，加入6-苄基-7-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(1.4g，5.78mmol，1.00当量)、甲醇(50mL)和钯碳(10％，700mg)。向其中引入氢气，所得溶液在室温下搅拌6小时。过滤收集固体，将得到的混合物在真空下浓缩。得到670mg(76％)的7-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺，为浅黄色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:153。
步骤6：7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺
Figure BDA0002603691860000903
向100mL三颈圆底烧瓶中，加入7-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺((500mg，3.29mmol，1.00当量)、二恶烷(30mL)和在水(10mL)中的碳酸钾(900mg，6.51mmol，2.00当量)溶液。然后在0℃搅拌下逐滴加入在二恶烷(5mL)中的甲磺酰氯(370mg，3.23mmol，1.00当量)溶液。所得溶液在室温下搅拌过夜，滤掉固体，所得混合物在真空下浓缩。将残余物施加到具有甲醇/二氯甲烷(0-10％，30分钟)的硅胶柱上。得到300mg(40％)的6-甲基磺酰基-7-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺，为灰白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:231。
步骤7：(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮非对映异构体A和(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮非对映异构体B以及(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(非对映体A)和(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-1-基)-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(非对映异构体B)
Figure BDA0002603691860000911
向100mL圆底烧瓶中，加入6-甲基磺酰基-7-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(240mg，1.04mmol，1.00当量)、8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸(200mg，1.05mmol，1.00当量)、HOBt(210mg，1.55mmol，1.50当量)、EDCI(300mg，1.56mmol，1.50当量)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后加水(70mL)将反应淬灭。用乙酸乙酯(70mL×3)萃取所得溶液并合并有机层，所得混合物用盐水(200mL×3)洗涤，混合物经无水硫酸钠干燥，滤掉固体，所得混合物在真空下浓缩。通过制备型TLC(EA:PE＝2:1)对残余物进行纯化。使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化,柱：XSelectCSH Prep C18 OBD柱，5μm，19 150mm；流动相A：水(0.1％FA)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：15分钟内从25％B到30％B；254nm。
组分A：将收集的组分冻干，得到45.3mg(11％)的(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮非对映异构体A，为黄色固体。Rt4:16.55分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.82(d,J＝7.2Hz,1H),6.67(d,J＝7.2Hz,1H),6.59(s,2H),6.36-6.32(m,1H),5.24(s,1H),5.07-5.04(m,1H),4.88-4.83(m,1H),3.86-3.82(m,1H),3.41-3.38(m,1H),3.26-3.21(m,2H),2.96(s,3H),2.41-2.39(m,2H),2.11-2.00(m,5H),1.44(s,3H)。
组分B：将收集的组分冻干，得到37.6mg(9％)的(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)(8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮非对映异构体B，为黄色固体。Rt3:15.39分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.82(d,J＝7.2Hz,1H),6.67(d,J＝7.6Hz,1H),6.59(s,2H),6.37-6.33(m,1H),5.23(s,1H),5.02-4.99(m,1H),4.89-4.84(m,1H),3.86-3.82(m,1H),3.26-3.21(m,3H),2.97(s,3H),2.43-2.39(m,2H),2.11-2.03(m,5H),1.44(s,3H)。
组分C：将收集的组分冻干，得到50.7mg(12％)的(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基-1-基)-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(非对映体A)，为黄色固体。Rt2:11.87分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.81(d,J＝7.2Hz,1H),6.62(d,J＝7.2Hz,1H),6.36-6.33(m,1H),5.77(s,2H),5.31-5.26(m,1H),5.22(s,1H),5.01-4.98(m,1H),3.88-3.83(m,1H),3.42-3.38(m,1H),3.26-3.22(m,2H),2.92(s,3H),2.46-2.41(m,2H),2.08-1.95(m,5H),1.35(s,3H)。
组分D：将收集的组分冻干，得到37.6mg(9％)的(3-氨基-7-甲基-6-(甲基磺酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶基-1-基)-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(非对映体B)，为黄色固体。Rt1:10.32分钟，MS(ES,m/z)[M+H]+:404。(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.82(d,J＝6.8Hz,1H),6.64(d,J＝7.6Hz,1H),6.37-6.33(m,1H),5.77(s,2H),5.28-5.23(m,1H),5.20(s,1H),4.94-4.91(m,1H),3.88-3.83(m,1H),3.28-3.26(m,3H),2.90(s,3H),2.44-2.40(m,2H),2.09-1.99(m,5H),1.38(s,3H)。
实施例82、83和84：(S*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和(R*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮以及(3-氨基-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000921
步骤1：3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔丁酯
Figure BDA0002603691860000931
向250mL圆底烧瓶中(1atm)中，加入3-氰基-4-哌啶酮-1-羧酸叔丁酯(5g，22.30mmol，1.00当量)、NH2NH2H2O(11.1g，223mmol，10.00当量)和EtOH(100mL)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，将残余物施加具有用氯仿/甲醇(95/5)的硅胶柱上。得到4.9g(93％)的3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔丁基酯，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:239。
步骤2：叔丁基(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和叔丁基(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000932
向50mL圆底烧瓶中，加入3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-羧酸叔丁酯(227.8mg，0.96mmol，1.00当量)、EDCI(275.6mg，1.44mmol，1.00当量)、HOBt(193.8mg，1.43mmol，1.50当量)、6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-羧酸酸(200mg，0.96mmol，1.50当量)、TEA(289.9mg，2.87mmol，3.00当量)和DMF(10mL)。所得溶液在25℃下搅拌过夜，然后加水(40mL)将反应淬灭，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取所得溶液并合并有机层和在真空下浓缩。通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)对残余物进行纯化。得到170mg(41％)的叔丁基(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为黄色油状物，MS(ES,m/z)[M+H]+:430；和184mg(45％)的(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为黄色油状物。MS(ES,m/z)[M+H]+:430。
步骤3：叔丁基(S*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮和叔丁基(R*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000941
通过制备-手性-HPLC在以下条件下分离出叔丁基-(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(170mg，0.40mmol，1.00当量)，柱：CHIRAL ART Cellulose-SB S-5um，2×25cm，5um；流动相A：Hex--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：15分钟内从20B到20B；254/220nm；Rt1：8.38min；Rt2：10.99分钟。得到76.5mg(45％)的叔丁基(S*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为黄色油状物，MS(ES,m/z)[M+H]+:430；和77.2mg(45％)的叔丁基(R*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色油状物，MS(ES,m/z)[M+H]+:430。
步骤4：(S*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000942
向50mL圆底烧瓶中，加入叔丁基(S*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(76.5mg，0.18mmol，1.00当量)和二氯甲烷(10mL)。随后在室温搅拌下逐滴添加三氟乙酸(1mL)。所得溶液在25℃下搅拌30分钟，所得混合物在真空下浓缩。使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化，柱：XBridge Prep C18 OBD柱；19×150mm 5um；流动相A：水(10mM NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：10分钟内从10％B到40％B；254/220nm；Rt:9.53分钟。将收集的组分冻干，得到13.8mg(24％)的(S*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:330；(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.76-6.72(m,1H),6.55-6.51(m,1H),6.42(s,2H),5.12(s,1H),5.04-5.00(m,1H),3.51(s,2H),3.25-3.20(m,2H),2.85-2.86(m,2H),2.46-2.42(m,2H),2.12-1.98(m,5H)。
步骤5：(R*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000951
向50mL圆底烧瓶中，加入叔丁基(R*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(77.2mg，0.18mmol，1.00当量)和二氯甲烷(10mL)，随后在室温搅拌下逐滴加入三氟乙酸(1mL)。所得溶液在25℃下搅拌30分钟，所得混合物在真空下浓缩。使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化，柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，5μm，19×150mm；流动相A：水(10mM NH4HCO3)；流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：9分钟内从5％B到50％B；254nm；Rt:8.85分钟。将收集的组分冻干，得到4.8mg(8％)的(R*)-(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:330；(DMSO-d6,400MHz,ppm):δ6.75-6.72(m,1H),6.55-6.52(m,1H),6.44(s,2H),5.13(s,1H),5.03-5.00(m,1H),3.52(s,2H),3.26-3.21(m,2H),2.96-2.90(m,2H),2.46-2.41(m,2H),2.10-1.90(m,5H)。
步骤6：(3-氨基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮
Figure BDA0002603691860000952
向50mL圆底烧瓶中，加入叔丁基(3-氨基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮(150mg，0.35mmol，1.00当量)和二氯甲烷(10mL)。随后在室温搅拌下逐滴加入三氟乙酸(1mL)。所得溶液在室温下搅拌30分钟，所得混合物在真空下浓缩。使用Prep-HPLC在以下条件下对粗产物进行纯化，柱：XBridgePrep C18 OBD柱；19×150mm 5um；流动相A：水(10mM NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：7分钟内从25％B到55％B；254/220nm；Rt:6.03分钟。将收集的组分冻干，得到19.2mg(17％)的(3-氨基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)(6-氟-8-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)甲酮，为白色固体。MS(ES,m/z)[M+H]+:330，(DMSO-d6,300MHz,ppm):δ6.74-6.70(m,1H),6.55-6.51(m,1H),5.61(s,2H),5.09(s,1H),4.96-4.93(m,1H),3.47(s,2H),3.39-3.36(m,1H),3.24-3.18(m,1H),2.83-2.75(m,7H),2.09-1.92(m,5H)。
通过使用类似于上述的方法制备以下实施例：
表1：实施例列表
Figure BDA0002603691860000971
Figure BDA0002603691860000981
Figure BDA0002603691860000991
Figure BDA0002603691860001001
Figure BDA0002603691860001011
Figure BDA0002603691860001021
Figure BDA0002603691860001031
Figure BDA0002603691860001041
Figure BDA0002603691860001051
Figure BDA0002603691860001061
Figure BDA0002603691860001071
Figure BDA0002603691860001081
Figure BDA0002603691860001091
Figure BDA0002603691860001101
Figure BDA0002603691860001111
Figure BDA0002603691860001121
Figure BDA0002603691860001131
Figure BDA0002603691860001141
Figure BDA0002603691860001151
Figure BDA0002603691860001161
可以通过类似于与上述的方法制备本申请的以下其他种类。
Figure BDA0002603691860001171
Figure BDA0002603691860001181
Figure BDA0002603691860001191
Figure BDA0002603691860001201
Figure BDA0002603691860001211
Figure BDA0002603691860001221
Figure BDA0002603691860001231
如本文所用，并如本领域技术人员所理解的，除非进一步明确限制，否则对“化合物”的叙述旨在包括该化合物的盐。在一个具体实施例中，术语“化合物”是指该化合物或制药上可接受的盐。
术语“药学上可接受的盐”是指由制药上可接受的无毒酸或无毒碱(包括无机酸和无机碱以及有机酸和有机碱)所制备的盐。当本发明的化合物为碱性时，盐可以由制药上可接受的无毒酸(包括无机酸和有机酸)制备。适用于本发明化合物的药学上可接受的酸加成盐包括，乙酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸(苯磺酸盐)、苯甲酸、硼酸、丁酸、樟脑酸、樟脑磺酸、碳酸、柠檬酸、乙二磺酸、乙磺酸、乙二胺四乙酸、甲酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟基萘酸、羟基乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、萘磺酸、硝酸、油酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、新戊酸、聚半乳糖醛、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、单宁酸、酒石酸、戊酸、对甲苯磺酸等。当所述化合物包含酸性侧链时，适用于本申请化合物的药学上可接受的碱加成盐包括但不限于，由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制成的金属盐，或者由赖氨酸、精氨酸、N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制成的有机盐。药学上可接受的盐还在适当时包括(适当时)，无毒的铵阳离子和与具有1至20个碳原子的烷基连接的羧酸根、磺酸根和膦酸根阴离子。
本文还提供了包含上述化合物或其药学上可接受的盐形式，以及药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。
虽然可将式I或式II的化合物作为原料化学品施用，但是优选将它们作为药物组合物施用。根据另一方面，本申请提供一种药物组合物，其包含式I或式II的化合物或其制药上可接受的盐，以及一种或多种其药学上可接受的载体以及任选地一种或多种其他治疗成分。在与制剂的其他成分相容且对接受者无害的意义上，载体必须是“可接受的”。
制剂包括适合口服，肠胃外(包括皮下，皮内，肌内，静脉内和关节内)，直肠和局部(包括皮肤，颊，舌下和眼内)给药的制剂。最合适的途径可能取决于接受者的状况和病症。所述制剂可以方便地以单位剂型存在，并且可以通过制药领域公知的任何方法制备。所有方法都包括使式I或式II化合物或其制药上可接受的盐(“活性成分”)与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，通过将活性成分与液体载体或细小的固体载体或两者均匀且紧密地结合，然而如果有必要，将产品成型为所需制剂来制备制剂。
适用于口服给药的本申请制剂可以离散单位存在，例如胶囊、扁囊剂或片剂，每个均包含预定量的活性成分、粉末或颗粒、在水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液，或水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。活性成分也可以为丸剂、冲剂或糊剂的形式存在。
可通过压制或模制，任选地与一种或多种辅助成分一起制成片剂。可以通过在合适的机器中将自由流动形式的活性成分如粉末或颗粒压缩，任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑剂、表面活性剂或分散剂混合来制备压制的片剂。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物来制备。片剂可以任选地被包衣或刻痕，并且可以被配制，以提供其中的活性成分的持续，延迟或控制释放。
用于肠胃外给药的制剂包括水性和非水性的无菌注射溶液，其可含有使制剂与预期受体的血液等渗的抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和溶质。肠胃外给药的制剂还包括水性和非水性的无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂和增稠剂。制剂可以在多剂量容器的单位剂量中存在，例如密封的安瓿瓶和小瓶，并且可以在冷冻干燥(冻干)条件下储存，仅需要添加无菌液体载体，例如盐水、磷酸盐。在使用前立即使用缓冲液(PBS)等。临时注射溶液和悬浮液可以由前述类型的无菌粉末，颗粒和片剂制备。
抑制凝血因子XIIa的化合物可用于治疗通常受益于抗凝剂的疾病和病症，例如静脉血栓形成。在凝血酶和其他凝血因子存在下选择性抑制凝血因子XIIa的那些化合物还可用于治疗非炎症性疾病和具有炎症成分的疾病。因此，本文提供的化合物可以用于治疗炎症、免疫性疾病、与血管舒张相关的病理或血栓形成。该方法包括，例如，向患者施用治疗有效量的式I或式II的化合物。
在以下试验中对本申请的化合物进行了测试。
因子XIIa(FXIIa)的抑制活性：
在96孔透明底板中，向每个孔添加80μl分析缓冲液。分析缓冲液由0.5×Hank的平衡盐溶液(Invitrogen)，25mM HEPES pH 7.4(Invitrogen)缓冲液和0.5×Tris缓冲盐水和Tween-20 0.05％(Santa Cruz Biotechnology)组成。首先将测试化合物溶解在DMSO(Sigma)中，然后将4μl加入含有测定缓冲液的测试孔中。使用自动多通道移液器进行系列稀释可产生约1-100μM的浓度范围。将人FXIIa(酶研究实验室)在测定缓冲液中稀释至最终浓度12.5nM。将80μl的该酶溶液添加至测定孔。酶/化合物的混合物在室温下培养10分钟。将显色底物(Pefachrome XIIa；酶研究实验室)以400μM的最终浓度添加到测定孔中。将测定板以1500g旋转1分钟，然后在SpectraMax M2板读数器(λ＝405nm)中在37°下读取。活性被定量为吸光度的变化速率，其对应于底物裂解速率。将IC50值确定为抑制剂浓度，该浓度产生50％无任何抑制剂的对照孔变化率。对于活性<1μM的化合物，以较低的浓度范围(通常为10-1000nM)重复测定。
选择性的相对筛选：
凝血酶。在96孔白色不透明板上，向每个孔添加80μl分析缓冲液。添加测试化合物，并如上所述连续稀释，以产生约1-100μM的浓度范围。将人α-凝血酶(酶研究实验室)在测定缓冲液中稀释至最终浓度为12.5nM。将80μl的该酶溶液添加至测定孔。酶/化合物的混合物在室温下培养10分钟。将荧光底物(Boc-Val-Pro-Arg-7-酰胺基-4-甲基香豆素；Sigma)添加到测定孔中，最终浓度为20μM。将测定板以1500g离心1分钟，然后在SpectraMaxM2板读取器(λex＝380nm和λem＝460nm)中在37°下读取。将活性定量为荧光的变化速率，其对应于底物裂解的速率。将IC50值确定为抑制剂浓度，该浓度产生50％无任何抑制剂的对照孔变化率。对于活性<1μM的化合物，以较低的浓度范围(通常为10-1000nM)重复测定。
因子Xa。在96孔白色不透明板上，向每个孔添加80μl分析缓冲液。添加测试化合物，并如上所述连续稀释，以产生约1-100μM的浓度范围。将人FXa(酶研究实验室)在测定缓冲液中稀释至最终浓度12.5nM。将80μl的该酶溶液添加至测定孔。酶/化合物混合物在室温下培养10分钟。将荧光底物(Pefafluor FXa；酶研究实验室)以80μM的最终浓度添加到测定孔中。将测定板以1500g离心1分钟，然后在SpectraMax M2板读取器(λex＝380nm和λem＝460nm)中在37°下读取。将活性定量为荧光的变化速率，其对应于底物裂解的速率。将IC50值确定为抑制剂浓度，该浓度产生50％无任何抑制剂的对照孔变化率。
因子XIa。在96孔透明底板中，向每个孔添加80μl分析缓冲液。添加测试化合物，并如上所述连续稀释，以产生约1-100μM的浓度范围。将人FXIa(酶研究实验室)在测定缓冲液中稀释至最终浓度12.5nM。将80μl的该酶溶液添加至测定孔。酶/化合物混合物在室温下培养10分钟。将显色底物(Pefachrome FXIa 3371；酶研究实验室)添加到测定孔中，最终浓度为100μM。将测定板以1500g旋转1分钟，然后在SpectraMax M2板读数器(λ＝405)中在37°下读取。活性被定量为吸光度的变化速率，其对应于底物裂解的速率。将IC50值确定为抑制剂浓度，该浓度产生50％无任何抑制剂的对照孔变化率。
血浆激肽释放酶。在96孔白色不透明板上，向每个孔添加80μl分析缓冲液添。添加测试化合物，并如上所述连续稀释，以产生约1-100μM的浓度范围。将人血浆激肽释放酶(酶研究实验室)在测定缓冲液中稀释至最终浓度12.5nM。将80μl的该酶溶液添加至测定孔。酶/化合物混合物在室温下培养10分钟。把荧光底物(Z-Phe-Arg 7-氨基-4-甲基香豆素；Sigma)添加到测定孔中，最终浓度为50μM。将测定板以1500g离心1分钟，然后在SpectraMaxM2板读取器(λex＝380nm和λem＝460nm)中在37°下读取。将活性定量为荧光的变化速率，其对应于底物裂解的速率。将IC50值确定为抑制剂浓度，该浓度产生50％无任何抑制剂的对照孔变化率。
上述屏幕中某些实施例的测试结果如表2所示，其中IC50以μM表示：
表2
Figure BDA0002603691860001261
Figure BDA0002603691860001271
Figure BDA0002603691860001281
Figure BDA0002603691860001291
Figure BDA0002603691860001301
Figure BDA0002603691860001311
Figure BDA0002603691860001321
为了确认体内疗效，在类风湿性关节炎模型中研究了实施例35。DBA/1小鼠中的胶原诱导的关节炎(CIA)是类风湿关节炎最常用的动物模型之一。胶原诱导关节炎在胶原诱导的关节炎中发生的关节炎症类似于类风湿关节炎患者的炎症。减轻人的类风湿关节炎的治疗剂(例如非甾类抗炎药，皮质类固醇，甲氨蝶呤等)在胶原诱导的关节炎中也是有效的，并且在小鼠胶原诱导的关节炎模型中的功效对于类风湿关节炎的功效具有极好的预测价值。通过用在弗氏完全佐剂中乳化的II型胶原蛋白免疫，然后用在弗氏不完全佐剂中乳化的II型胶原蛋白加强免疫来诱导胶原诱导的关节炎。免疫接种三至四个星期后，老鼠的爪子发炎。免疫时开始治疗，持续6周。将小鼠以平衡的方式分配给各组，以在免疫时达到相似的体重。胶原诱导的关节炎的评分是盲目的，评分人不清楚这两种治疗，也不知道每种动物的之前分数。动物的得分是所有四个爪子得分的总和，范围为0-16，其中每个爪子的得分如下：0表示正常爪子；1表示一只脚趾发炎肿胀；2表示一个以上脚趾(但不是整个爪子)发炎和肿胀，或整个爪子轻度肿胀；3表示整个爪子发红肿胀；4表示严重发炎，肿胀或僵硬的的爪子。
与安慰剂相比，实施例35的化合物显著改善了疾病表型：
Figure BDA0002603691860001322

Claims (35)

1.一种如下式I或式II所示的化合物：
Figure FDA0002603691850000011
其中
R1是任选被取代的双环系统；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、(C1-C4)酰胺基、(C1-C4)氟烷基、(C1-C4)氟烷氧基和(C1-C6)氧杂烷基；
X1和X2中的一个选自-O-和-N(QR5)-，另一个选自-CR3R4-；
Q选自直接键、-CH2-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR6-、-SO2-和-SO2NR6-；
R3、R4、R6和R7独立地选自氢和(C1-C6)烷基；
R5选自氢、(C1-C6)烷基、羟基(C2-C6)烷基、三至七元碳环和三至七元杂环。
2.根据权利要求1的化合物，其中R1是6:6或6:5的双环，任选地被选自以下的一个至三个取代基取代：卤素、羟基、氨基、氰基、氧代、(C1-C6)脂族烃基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、(C1-C4)酰基氨基、(C1-C4)烷基磺酰基、[(C1-C4)烷基磺酰基]氨基、(C1-C4)氟烷基、(C1-C4)氟烷氧基、(C1-C6)氧杂烷基、芳基和杂芳基。
3.根据权利要求2的化合物，其中所述任选被取代的双环系统选自，任选取代的吲哚、异吲哚、羟吲哚、四氢吲哚、四氢化萘、二氢吲哚、异吲哚啉、四氢喹啉、四氢异喹啉、3,4-二氢-1H-异苯并吡喃、3,4-二氢-2H-苯并吡喃、苯并呋喃、二氢苯并呋喃、四氢苯并呋喃、苯并噻吩、四氢苯并噻吩、吲唑、四氢吲唑、2,3-二氢-1H-茚、萘、四氢化萘、萘啶、四氢萘啶和异苯并二氢吡喃。
4.根据权利要求2的化合物，其中R1是含氮双环。
5.A根据权利要求4的化合物，其中R1是任选被取代的四氢喹啉、吲哚或四氢吲哚。
6.根据权利要求3的化合物，其中R1任选地被下述的一个或多个取代基取代：卤素、(C1-C6)脂族烃基、(C1-C4)氟烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)酰胺基、(C1-C4)烷基磺酰基、苯基和吡啶基。
7.根据权利要求6的化合物，其中R1任选地被下述的一个或两个取代基取代：氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、三氟甲基、甲氧基、甲磺酰基、乙酰胺基、苯基和吡啶基。
8.根据权利要求2的化合物，其中R1选自
Figure FDA0002603691850000021
其中
R10选自H、卤素、(C1-C4)烷基和(C3-C6)环烷基；
R11选自H和甲氧基；以及
R12选自H和(C1-C4)烷基。
9.根据权利要求2的化合物，其中R1为
Figure FDA0002603691850000022
其中
R13和R14独立地选自H、卤素、(C1-C4)烷基、氟代(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C4)酰胺基、(C1-C4)烷基磺酰基、苯基和吡啶基；以及
R15a和R15b独立地选自-H和-(C1-C4)烷基，或者R15a和R15b一起为氧代。
10.根据权利要求9的化合物，其中标有星号的碳在(R)绝对构型中>90％e.e.。
11.根据权利要求9的化合物，其中标有星号的碳在(S)绝对构型中>90％e.e.。
12.根据权利要求6的化合物，其中R1是任选被取代的四氢-1,8-萘啶。
13.根据权利要求1的化合物，其中X1是-CR3R4-，和X2是-O-。
14.根据权利要求1的化合物，其中X1是-O-，和X2是-CR3R4-。
15.根据权利要求1的化合物，其中X1是-CR3R4-，和X2是-N(QR5)-。
16.根据权利要求1的化合物，其中X1是-N(QR5)-，和X2是-CR3R4-。
17.根据权利要求1的化合物，其中R2和R7独立地选自氢和甲基。
18.根据权利要求17的化合物，其中R2和R7都是氢。
19.根据权利要求17的化合物，其中R2是氢，和R7是甲基。
20.根据权利要求13-19任一项的化合物，其中R3和R4均为氢。
21.根据权利要求1或15-19任一项的化合物，其中Q选自直接键、-CH2-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR6-、-SO2-和-SO2NR6-；和R6是氢或甲基。
22.根据权利要求21的化合物，其中R5选自H、(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、羟基(C2-C6)烷基、氟甲基、二氟甲基、苯基、吡啶基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基。
23.根据权利要求1-19任一项的化合物，其是如式II所示的化合物：
Figure FDA0002603691850000031
24.根据权利要求1-19任一项的化合物，其是如式I所示的化合物：
Figure FDA0002603691850000032
25.根据权利要求24的化合物，其中R3和R4均为氢；Q选自直接键、-CH2-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR6-、-SO2-和-SO2NR6-；R6和R7是氢或甲基，且R5选自H、(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基、氟甲基、二氟甲基、苯基、吡啶基、氧杂环丁基、四氢呋喃基和四氢吡喃基。
26.一种用于抑制受试者的因子XIIa的方法，包括向所述受试者施用抑制量的根据权利要求1至19任一项所述的化合物。
27.一种用于抑制受试者的因子XIIa的方法，包括向所述受试者施用抑制量的根据权利要求26所述的化合物。
28.一种在凝血酶和激肽释放酶存在下选择性抑制因子XIIa的方法，包括使抑制量的根据权利要求1-19任一项的化合物与因子XIIa接触。
29.根据权利要求27的体内方法。
30.根据权利要求28的体外方法。
31.一种用于治疗患者的炎症的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的根据权利要求1至19任一项所述的化合物。
32.一种用于治疗患者的免疫失调的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的根据权利要求1至19任一项所述的化合物。
33.一种治疗患者的血管扩张的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的根据权利要求1至19任一项所述的化合物。
34.一种治疗患者的血栓形成的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的根据权利要求1至19任一项所述的化合物。
35.一种用于治疗患者的类风湿性关节炎的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的根据权利要求1至19任一项所述的化合物。
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