CN112469722A - 作为a2a受体拮抗剂的吡唑并三唑并嘧啶衍生物 - Google Patents

作为a2a受体拮抗剂的吡唑并三唑并嘧啶衍生物 Download PDF

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Abstract

本文公开了一种用作A2A受体拮抗剂的吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐，以及一种包含吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐的药物组合物。本文还公开了一种使用所述吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐作为A2A受体拮抗剂治疗癌症的方法。

Description

作为A2A受体拮抗剂的吡唑并三唑并嘧啶衍生物
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年7月23日提交的国际专利申请号PCT/CN2018/096633的权益，出于所有目的将其公开内容通过引用以其全文特此结合。
技术领域
本文公开了一种用作A2A受体拮抗剂的吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐，以及一种包含吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐的药物组合物。本文还公开了一种使用所述吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐作为A2A受体拮抗剂治疗癌症的方法。
背景技术
细胞外腺苷是许多生理活性的关键内源调节剂。它通过与四种腺苷受体A1、A2A、A2B和A3相互作用发挥其调节功能。所有四种受体都属于G蛋白偶联受体超家族，但具有不同的配体亲和力、组织分布和效应子反应。通过与不同的G蛋白偶联，它们可以刺激(A2A和A2B)或抑制(A1和A3)下游腺苷酸环化酶活性，并且也参与调节其他途径，如磷脂酶C(PLC)、Ca2+和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)。
免疫系统不仅负责保护其宿主抵抗微生物侵入，而且可以从其中存在抗肿瘤免疫机制的生物体中去除改变的宿主组分。当免疫监视功能由于免疫系统本身或肿瘤细胞而减弱时，为肿瘤的发展和进展提供了有利的条件。腺苷-A2A受体信号传导作为一种新的代谢免疫检查点途径出现，所述途径参与创建免疫耐受的肿瘤微环境。已经证明，肿瘤组织中的缺氧将诱导较高浓度的腺苷的积累(约10μM，相对于在生理水平下约20nM)。缺氧介导的腺苷产生是由非造血和造血细胞亚群二者中CD39和CD73外核苷酸酶的上调引起的，所述上调进而催化细胞外ATP向腺苷的转化。
通过A2A(高亲和力)和A2B(低亲和力)受体(免疫细胞亚群中的主要腺苷受体)的腺苷信号传导在保护癌组织免受免疫系统攻击中发挥重要作用。T效应细胞上激活的A2A受体增加细胞内cAMP，这进而抑制TCR触发的信号传导和抗肿瘤效应子功能，包括降低的T细胞扩增，IFN-γ释放，和增加的免疫抑制PD-1、LAG3、IL-10和TGF-β的表达。T细胞中增加的cAMP也促进cAMP反应元件(CRE)介导的转录如FoxP3，其驱动调节性T细胞表型。此外，腺苷还通过使自然杀伤(NK)细胞的细胞毒性效应子功能失效、调节免疫抑制性M2巨噬细胞极化和髓源抑制细胞(MDSC)扩增来抑制抗肿瘤免疫反应。因此，研究表达A2A受体的免疫细胞作为潜在目标以破坏肿瘤微环境中腺苷介导的免疫抑制。结果证明A2AR的遗传缺失或药理性拮抗作用可以增强已建立的免疫原性小鼠肿瘤中的内源性抗肿瘤免疫并且有效抑制肿瘤生长或转移。
WO 0192264披露了用于治疗中枢神经系统疾病、特别是帕金森病的5-氨基-吡唑并-[4,3-e]-1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶腺苷A2a受体拮抗剂，其被证明具有高血脑屏障通透性。
然而，需要A2A受体的小分子拮抗剂作为用于抗癌疗法的免疫调节剂(RobertD.Leone,Ying-Chun Lo,Jonathan D.Powell,Mini Review,A2aR antagonists:Nextgeneration checkpoint blockade for cancer immunotherapy,Computational andStructural Biotechnology Journal 13(2015)265-272)。
发明内容
出乎意料且令人惊奇的是，发现本文公开的吡唑并三唑并嘧啶衍生物在抗癌疗法中具有免疫调节功效。诸位发明人发现，与其中R1和R2均为氢的化合物相比，式(Ia)或(Ib)中的R1和R2的取代显著改善了作为A2A受体拮抗剂的化合物的活性。
在第一实施方案中，本文公开了式(Ia)或(Ib)的吡唑并三唑并嘧啶衍生物。第一实施方案包括以下方面：
方面1.一种式(Ia)或式(Ib)的化合物
Figure BDA0002909572560000031
或者
Figure BDA0002909572560000032
或其立体异构体、或其药学上可接受的盐，
其中：
R是芳基或包含1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员的5元或6元杂芳基，并且所述环任选地被至少一个取代基R8取代；
R1和R2，可以相同或不同，各自独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基，其中所述C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自独立地任选地被至少一个取代基R8取代，条件是R1和R2中的至少一个不是氢；或者
R1和R2与它们所附接的碳原子一起形成3至12元饱和的、部分或完全不饱和的环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员，并且所述环任选地被至少一个取代基R8取代；
R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成3至12元环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代；
R5独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、-OR5a、-SO2R5a、-COR5a、-CO2R5a、-CONR5aR5b、-C(＝NR5a)NR5bR5c、-NR5aR5b、-NR5aCOR5b、-NR5aCONR5bR5c、-NR5aCO2R5b、-NR5aSONR5bR5c、-NR5aSO2NR5bR5c、或-NR5aSO2R5b，其中，作为R5，所述-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基中的每一个独立地并且任选地被一个或两个或三个取代基R6取代；
R5a、R5b和R5c可以相同或不同，它们各自独立地是氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选地被一个或两个取代基R5d取代；
R5d独立地是氢、卤素、氰基、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、-C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基-、C2-6烯基氧基-、C2-6炔基氧基-、卤代C1-6烷氧基-、卤代C2-6烯基氧基-、卤代C2-6炔基氧基-、C3-8环烷基氧基-、环烷基、杂环基、杂环基氧基-、芳基、芳基氧基-、杂芳基或杂芳基氧基-；
R6独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、-OR6a、-SO2R6a、-COR6a、-CO2R6a、-CONR6aR6b、-C(＝NR6a)NR6bR6c、-NR6aR6b、-NR6aCOR6b、-NR6aCONR6bR6c、-NR6aCO2R6b、-NR6aSONR6bR6c、-NR6aSO2NR6bR6c、或-NR6aSO2R6b；
R6a、R6b和R6c可以相同或不同，它们各自独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C3-8环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选地被一个或两个或三个取代基R7取代；或
(R6a和R6b)、和/或(R6b和R6c)、和/或(R6c和R6a)与它们所附接的一个或多个原子一起形成3至12元饱和的、部分或完全不饱和的环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，并且所述环任选地被至少一个取代基R8取代；
R7独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、-OR7a、-SO2R7a、-COR7a、-CO2R7a、-CONR7aR7b、-C(＝NR7a)NR7bR7c、-NR7aR7b、-NR7aCOR7b、-NR7aCONR7bR7c、-NR7aCO2R7b、-NR7aSONR7bR7c、-NR7aSO2NR7bR7c、或-NR7aSO2R7b，其中所述-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自独立地任选地被一个或两个选自卤素、羟基、-C1-6烷基、-C1-6烷氧基、氧代基、氰基和氨基的取代基取代；
R7a、R7b、和R7c各自独立地是氢、-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基-、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基；并且
R8独立地是氢、卤素、氰基、氧代基、氨基、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、-C1-6烷氧基、C3-8环烷基氧基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基。
方面2：根据方面1的化合物，其中R是含有1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员的C-连接的5元或6元杂芳基。
方面3：根据方面5的化合物，其中R是呋喃基、吡嗪基或噻唑基；优选是呋喃-2-基、3-甲基吡嗪-2-基或噻唑-2-基。
方面4：根据方面1的化合物，其中R1是氢或C1-6烷基，优选是氢、甲基、乙基；更优选是氢；并且R2是任选地被苯基或-C1-6烷氧基(优选甲氧基)取代的C1-6烷基(优选是甲基、异丙基、乙基、丙基、丁基、或异丁基)；任选地被卤素或C1-6烷氧基(例如苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、4-甲氧基苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-三氟甲基苯基、3,4-二氟苯基)取代的芳基(即苯基或萘基)；-C3-8环烷基(优选环丙基)、或杂环基(优选4至7元单环饱和杂环基，其包含一个选自氧、氮和任选氧化的硫的杂原子作为环成员)。
方面5：根据方面1至4中任一项的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成3元、4元、5元、6元、7元、8元、或9元单环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面6：根据方面5的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成3元、4元、5元、6元、7元、8元、或9元单环，所述环包含0个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面7：根据方面5的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成3元、4元、5元、6元、7元、8元、或9元单环，所述环包含1个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面8：根据方面7的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成3元、4元、5元、6元、7元、8元、或9元单环，所述环包含一个另外的氮杂原子作为环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面9：根据方面5至9中任一项的化合物，其中所述环是饱和的。
方面10：根据方面5的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成氮杂环丁烷基
Figure BDA0002909572560000061
吡咯烷基
Figure BDA0002909572560000062
或哌啶基
Figure BDA0002909572560000063
环，所述环各自任选地被如对式(Ia)或(Ib)所定义的R5取代。
方面11：根据方面5的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成任选地被如对式(Ia)或(Ib)所定义的R5取代的哌嗪基环(即
Figure BDA0002909572560000064
)。
方面12：根据方面1至4中任一项的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成7元、8元、9元、10元、11元、或12元二环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面13：根据方面12的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成7元、8元、9元、10元、11元、或12元二环稠合环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面14：根据方面12的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成7元、8元、9元、10元、11元、或12元二环稠合环，所述环包含0个或1个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面15：根据方面12的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成10元二环稠合环，所述环包含0个或1个另外的氮杂原子作为环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面16：根据方面15的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成
Figure BDA0002909572560000071
环，每个所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面17：根据方面12的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成7元、8元、9元、10元、11元、或12元二环螺环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面18：根据方面17的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成氮杂螺[3.3]庚烷、氮杂螺[3.5]壬烷、氮杂螺[3.4]辛烷、氮杂螺[5.5]十一烷、或氮杂螺[4.5]癸烷，每个包含0个或1个另外的氮原子或氧原子作为环成员，并且所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面19：根据方面18的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成
Figure BDA0002909572560000072
环，并且所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
方面20：根据方面5至19中任一项的化合物，其中所述环被一个R5取代。
方面21：根据方面5至19中任一项的化合物，其中所述环被两个R5取代。
方面22：根据方面21的化合物，其中所述环被一个C1-6烷基(优选甲基)取代并且进一步被一个R5取代。
方面23：根据方面20至22中任一项的化合物，其中R5是卤素、-C1-6烷基、芳基、-OR5a、或-CO2R5a，其中R5a是如对式(Ia)或(Ib)所定义的。
方面24：根据方面23的化合物，其中R5是-CO2R5a，其中R5a是-C1-6烷基，优选甲基。
方面25：根据方面23的化合物，其中R5是-OR5a，其中R5a是任选地被一个R5d取代的-C1-6烷基，其中R5d是氢、卤素(优选氟)、或-C1-6烷氧基。
方面26：根据方面23的化合物，其中R5是-OR5a，其中R5a是三氟甲氧基、甲氧基、甲氧基乙氧基、或羟基。
方面27：根据方面23的化合物，其中R5是任选地被一个或两个或三个取代基R6取代的苯基，其中R6是如对式(Ia)或(Ib)所定义的。
方面28：根据方面27的化合物，其中R5是苯基，任选地被一个或两个或三个取代基R6取代，其中R6独立地是卤素(优选氟)、-OR6a、或NR6aR6bC(O)-，其中R6a和R6b是如对式(Ia)或(Ib)所定义的。
方面29：根据方面28的化合物，其中R5是任选地被一个取代基R6取代的苯基，其中
R6是NR6aR6bC(O)-，其中
R6a和R6b各自独立地是氢、-C1-6烷基、或-C3-8环烷基，所述-C1-6烷基和-C3-8环烷基各自任选地被一个R7取代，其中
R7是杂环基，优选3至8元杂环，其包含一个或两个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员，任选地被羟基、-C1-6烷基、或-C1-6烷氧基取代。
方面30：根据方面28的化合物，其中R5是任选地被一个取代基R6取代的苯基，其中
R6是NR6aR6bC(O)-，其中
R6a和R6b各自独立地是氢、-C1-6烷基、或-C3-8环烷基，所述-C1-6烷基任选地被一个R7取代，其中
R7是3至8元饱和单环杂环，其包含一个选自氮或氧的杂原子作为环成员(优选氧杂环丁烷基)，任选地被羟基取代。
方面31：根据方面28的化合物，其中R5是任选地被一个取代基R6取代的苯基，其中
R6是NR6aR6bC(O)-，其中
R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成3至12元饱和环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员。
方面32：根据方面31的化合物，其中R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成3至8元饱和单环，所述环包含0个或1个独立地选自氮或氧的另外的杂原子作为环成员。
方面33：根据方面32的化合物，其中R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成6元饱和单环，所述环包含0个或1个另外的氮杂原子作为环成员。
方面34：根据方面31的化合物，其中R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成哌啶基环。
方面35：根据方面28的化合物，其中R5是任选地被一个或两个卤素取代并且进一步任选地被一个取代基R6取代的苯基，其中
R6是-OR6a，其中
R6a是任选地被一个R7取代的-C1-6烷基，其中
R7是杂环基、-OR7a、或-NR7aR7b，其中
R7a和R7b各自独立地是氢、-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基-；并且
所述杂环基任选地被卤素、羟基、或-C1-6烷基取代。
方面36：根据方面35的化合物，其中所述作为R7的杂环基是4元、5元、6元、7元、或8元杂环基，其包含一个或两个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员，任选地被-C1-6烷基取代；优选是5元或6元杂环基，其包含一个或两个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员。
方面37：根据方面36的化合物，其中R7是吗啉基、吗啉代(morpholino)、吡咯烷基、吡咯烷子基(pyrrolidino)、4-甲基哌嗪基、或哌啶基。
方面38：根据方面35的化合物，其中R6是-OR6a，其中R6a是任选地被一个R7取代的-C1-6烷基，其中R7是-OR7a，其中R7a是氢、-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基-。
方面39：根据方面35的化合物，其中R6是-OR6a，其中R6a是任选地被一个R7取代的-C1-6烷基，其中R7是-NR7aR7b，其中R7a和R7b是氢、或-C1-6烷基。
方面40：根据方面35的化合物，其中R6是甲氧基乙氧基-、甲氧基乙氧基乙氧基-、2-羟基乙氧基、2-羟基丙氧基-、氨基乙氧基-、N,N-二甲基氨基乙氧基-、或N-甲基氨基乙氧基-。
方面41：方面1的化合物，其为化合物编号A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22、A23、A24、A25、A26、A27、A28、A29、A30、A31、A32、A33、A34、A35、A36、A37、A38、A39、A40、A41、A42、A43、A44、A45、A46、A47、A48、A49、A50、A51、A52、A53、A54、A55、A56、A57、A58、A59、A60、A61、A62、A63、A64、A65、A66、A67、A68、A69、A70、A71、A72、A73、A74、A75、A76、A77、A78、A79、A80、A81、A82、A83、A84、A85、A86、A87、A88、A89、A90、A91、A92、A93、A94、A95、A96、A97、A98、A99、A100、A101、A102、A103、A104、A105、A106、A107、A108、B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9、B10、B11、B12、B13、B14、B15、B16、B17、B18、B19、B20、B21、B22、B23、B24、B25、B26、B27、B28、B29、B30、B31、B32、B33、B34、C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、D1、或D2。
在第二实施方案中，本文公开了一种药物组合物，其包含方面1至41中任一项的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的赋形剂。
在第三实施方案中，本文公开了一种治疗癌症的方法，其包括向对其有需要的受试者给予方面1至41中任一项的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
具体实施方式
以下术语在整个说明书中具有指示的含义：
如本文(包括所附权利要求书)所使用的，除非上下文另外清楚地指示，否则单数形式的词语例如“一个”、“一种”和“所述”包括它们对应的复数指代物。
除非上下文另外清楚地指示，否则术语“或”用于意指术语“和/或”，并且可与术语“和/或”互换使用。
本文的术语“烷基”是指选自包含1至18个(如1至12个，进一步如1至10个，更进一步如1至8个、或1至6个、或1至4个)碳原子的直链和支链饱和烃基团的烃基团。含有1至6个碳原子的烷基(即C1-6烷基)的例子包括但不限于甲基、乙基、1-丙基或正丙基(“n-Pr”)、2-丙基或异丙基(“i-Pr”)、1-丁基或正丁基(“n-Bu”)、2-甲基-1-丙基或异丁基(“i-Bu”)、1-甲基丙基或仲丁基(“s-Bu”)、1,1-二甲基乙基或叔丁基(“t-Bu”)、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基和3,3-二甲基-2-丁基。
本文的术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)和碘(I)。
本文的术语“卤代烷基”是指其中一个或多个氢被一个或多个卤素原子(如氟、氯、溴和碘)替代的烷基。卤代烷基的例子包括卤代C1-8烷基、卤代C1-6烷基或卤代C1-4烷基，但不限于-CF3、-CH2Cl、-CH2 CF3、-CCl2、CF3等。
本文的术语“烯基”是指选自包含至少一个C＝C双键和2至18个(如2至8个，进一步如2至6个)碳原子的直链和支链烃基团的烃基团。烯基(例如，C2-6烯基)的例子包括但不限于次乙基或乙烯基、丙-1-烯基、丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基和己-1,3-二烯基。
本文的术语“炔基”是指选自直链和支链烃基的烃基，其包含至少一个C≡C三键和2至18个(如2至8个，进一步如2至6个)碳原子。炔基(例如，C2-6炔基)的例子包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1-丁炔基、2-丁炔基和3-丁炔基。
本文中的术语“烷基氧基”或“烷氧基”是指通过氧原子附接至母体分子部分的如上定义的烷基。烷氧基例如C1-6烷氧基或C1-4烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基等。
术语“烷氧基-烷基-”是指进一步被如上定义的烷氧基取代的如上定义的烷基。烷氧基-烷基-例如C1-8烷氧基-C1-8烷基-或C1-6烷氧基-C1-6烷基-的例子包括但不限于甲氧基甲基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、异丙氧基甲基、或丙氧基甲基等。
本文的术语“环烷基”是指选自包括单环和多环(例如，双环和三环)基团的饱和和部分不饱和环状烃基团的烃基团。例如，环烷基可含有3至12个(如3至10个，进一步如3至8个，进一步如3至6个、3至5个或3至4个)碳原子。甚至进一步例如，环烷基可选自含有3至12个(如3至10个，进一步如3至8个，3至6个)碳原子的单环基团。单环环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、和环十二烷基。具体地，饱和的单环的环烷基(例如，C3-8环烷基)的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。在优选的实施方案中，环烷基是含有3至6个碳原子的单环(缩写为C3-6环烷基)，其包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。双环环烷基的例子包括具有7至12个环原子的那些，这些环原子排列为选自[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]环系的双环，或排列为选自双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷和双环[3.2.2]壬烷的桥接双环。双环烷基的其他例子包括排列为选自[5,6]和[6,6]环系的双环(如
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)的那些，其中波浪线指示附接点。环可以是饱和的或者具有至少一个双键(即部分不饱和的)，但不是完全共轭的，并且不是芳香族的，因为芳香族在本文中进行了定义。
单独使用或与其他术语组合使用的术语“芳基”是指选自以下的基团：
ο5元和6元碳环芳香族环，例如苯基；
ο双环环系，如7至12元双环环系，其中至少一个环是碳环和芳香族的，例如萘基和茚满基；以及
ο三环环系，如10至15元三环环系，其中至少一个环是碳环和芳香族的，例如芴基。
术语“芳香族烃环”和“芳基”在本文的整个公开文本中可互换使用。在一些实施方案中，单环或双环芳香族烃环具有5至10个成环碳原子(即，C5-10芳基)。单环或双环芳香族烃环的例子包括但不限于苯基、萘-1-基、萘-2-基、蒽基、菲基等。在一些实施方案中，芳香族烃环是萘环(萘-1-基或萘-2-基)或苯环。在一些实施方案中，芳香族烃环是苯环。
本文的术语“杂芳基”是指选自以下的基团：
ο5元、6元或7元芳香族单环，其包含至少一个杂原子，例如1至4个、或在一些实施方案中1至3个、在一些实施方案中1至2个杂原子，这些杂原子选自氮(N)、硫(S)和氧(O)，其余的环原子是碳；
ο8至12元双环，其包含至少一个杂原子例如1至4个杂原子，或在一些实施方案中包含1至3个杂原子，或在其他实施方案中包含1或2个杂原子，这些杂原子选自氮、氧或任选氧化的硫(作为一个或多个环成员)，其余环原子是碳，并且其中至少一个环是芳香族的且芳香族环中存在至少一个杂原子；以及
ο11至14元三环，其包含至少一个杂原子例如1至4个杂原子，或在一些实施方案中包含1至3个杂原子，或在其他实施方案中包含1或2个杂原子，这些杂原子选自氮、氧或任选氧化的硫(作为一个或多个环成员)，其余环原子是碳，并且其中至少一个环是芳香族的且芳香族环中存在至少一个杂原子。
当杂芳基中S和O原子的总数超过1时，那些杂原子彼此不相邻。在一些实施方案中，杂芳基中S和O原子的总数不大于2。在一些实施方案中，芳香族杂环中S和O原子的总数不大于1。当杂芳基含有多于一个杂原子环成员时，杂原子可以相同或不同。杂芳基的一个或多个环中的氮原子可被氧化形成N-氧化物。
如本文所用的术语“C-连接的杂芳基”意指杂芳基通过来自所述杂芳基环的C原子的键与核心分子连接。
本文使用的术语“任选氧化的硫”是指S、SO或SO2。
术语“芳香族杂环”和“杂芳基”在本文的整个公开文本中可互换使用。在一些实施方案中，单环或双环芳香族杂环具有5个、6个、7个、8个、9个或10个成环成员，其中1个、2个、3个或4个杂原子环成员独立地选自氮(N)、硫(S)和氧(O)，并且其余的环成员是碳。在一些实施方案中，单环或双环芳香族杂环是包含1或2个独立地选自氮(N)、硫(S)和氧(O)的杂原子环成员的单环或双环。在一些实施方案中，单环或双环芳香族杂环是5至6元杂芳基环，所述杂芳基环为单环并且具有1个或2个独立地选自氮(N)、硫(S)和氧(O)的杂原子环成员。在一些实施方案中，单环或双环芳香族杂环是8至10元杂芳基环，所述杂芳基环为双环并且具有1个或2个独立地选自氮、硫和氧的杂原子环成员。
杂芳基或者单环或双环芳香族杂环的例子包括但不限于(如从指定优先次序1的连接位置开始编号)吡啶基(如2-吡啶基、3-吡啶基、或4-吡啶基)、噌啉基、吡嗪基、2,4-嘧啶基、3,5-嘧啶基、2,4-咪唑基、咪唑并吡啶基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基(如1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、或1,3,4-噻二唑基)、四唑基、噻吩基(如噻吩-2-基、噻吩-3-基)、三嗪基、苯并噻吩基、呋喃基(furyl或furanyl)、苯并呋喃基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲哚啉基、噁二唑基(如1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、或1,3,4-噁二唑基)、酞嗪基、吡嗪基、哒嗪基、吡咯基、三唑基(如1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、或1,3,4-三唑基)、喹啉基、异喹啉基、吡唑基、吡咯并吡啶基(如1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)、吡唑并吡啶基(如1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)、苯并噁唑基(如苯并[d]噁唑-6-基)、蝶啶基、嘌呤基、1-氧杂-2,3-二唑基、1-氧杂-2,4-二唑基、1-氧杂-2,5-二唑基、1-氧杂-3,4-二唑基、1-硫杂-2,3-二唑基、1-硫杂-2,4-二唑基、1-硫杂-2,5-二唑基、1-硫杂-3,4-二唑基、呋咱基(如呋咱-2-基、呋咱-3-基)、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、呋喃并吡啶基、苯并噻唑基(如苯并[d]噻唑-6-基)、吲唑基(如1H-吲唑-5-基)和5,6,7,8-四氢异喹啉。
“杂环基”、“杂环”或“杂环的”是可互换的并且是指包含一个或多个选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为环成员的非芳香族杂环基，其余环成员是碳，包括单环、稠合、桥接和螺环，即包括单环杂环基、桥接杂环基、螺杂环基和稠合杂环基。本文使用的术语“任选氧化的硫”是指S、SO或SO2。
术语“单环杂环基”是指单环基团，其中至少一个环成员是选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子。杂环可以是饱和的或部分饱和的。
示例性的单环4至9元杂环基包括但不限于(如从指定优先级1的连接位置编号)吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、咪唑烷-2-基、咪唑烷-4-基、吡唑烷-2-基、吡唑烷-3-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、2,5-哌嗪基、吡喃基、吗啉基、吗啉代、吗啉-2-基、吗啉-3-基、环氧乙烷基、氮丙啶-1-基、氮丙啶-2-基、氮杂环辛烷-1-基、氮杂环辛烷-2-基、氮杂环辛烷-3-基、氮杂环辛烷-4-基、氮杂环辛烷-5-基、环硫乙烷基、氮杂环丁烷-1-基、氮杂环丁烷-2-基、氮杂环丁烷-3-基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、1,2-二硫杂环丁烷基、1,3-二硫杂环丁烷基、二氢吡啶、四氢吡啶、硫代吗啉基、噻噁烷基、哌嗪基、高哌嗪基、高哌啶基、氮杂环庚烷-1-基、氮杂环庚烷-2-基、氮杂环庚烷-3-基、氮杂环庚烷-4-基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、1,4-氧杂硫杂环己烷基、1,4-二氧杂环庚烷基、1,4-氧杂硫杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、1,4-二硫杂环庚烷基、1,4-硫杂氮杂环庚烷基和1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-二硫杂环己烷基、1,4-氮杂硫杂环己烷基、氧杂氮杂卓基、二氮杂卓基、硫杂氮杂卓基、二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、1,4-二噁烷基、1,3-二氧戊环基、吡唑啉基、吡唑烷基、二硫杂环己烷基、二硫戊环基、吡唑烷基、咪唑啉基、嘧啶酮基、或1,1-二氧代-硫代吗啉基。
术语“螺杂环基”是指具有通过一个共同碳原子(称为螺原子)连接的环的5至20元多环杂环基，其包含一个或多个选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为环成员，其余环成员是碳。螺杂环基的一个或多个环可含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子体系。优选地，螺杂环基是6至14元，并且更优选是7至12元。根据常见的螺原子数量，螺杂环基被分为单螺杂环基、二螺杂环基、或聚螺杂环基，并且优选是指单螺杂环基或二螺杂环基，并且更优选是4元/4元、3元/5元、4元/5元、4元/6元、5元/5元、或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的代表性例子包括但不限于以下基团：2,3-二氢螺[茚-1,2'-吡咯烷](如2,3-二氢螺[茚-1,2'-吡咯烷]-1'-基)、1,3-二氢螺[茚-2,2'-吡咯烷](如1,3-二氢螺[茚-2,2'-吡咯烷]-1'-基)、氮杂螺[2.4]庚烷(如5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)、氮杂螺[3.4]辛烷(如6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)、2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷(如2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)、氮杂螺[3.4]辛烷(如6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)、氮杂螺[3.4]辛烷(如6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)、1,7-二氧杂螺[4.5]癸烷、2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷(如2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬-7-基)、7-氧杂-螺[3.5]壬基和5-氧杂-螺[2.4]庚基。
术语“稠合杂环基”是指5至20元多环杂环基，其中体系中的每个环与另一个环共有相邻的一对原子(碳和碳原子或碳和氮原子)，包含一个或多个选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为环成员，其余环成员是碳。稠合杂环基团的一个或多个环可含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子体系。优选地，稠合杂环基是6至14元，并且更优选是7至10元。根据环的元数，稠合杂环基分为二环、三环、四环或多环稠合杂环基，优选指代二环或三环稠合杂环基，并且更优选为5元/5元、或5元/6元二环稠合杂环基。稠合杂环的代表性例子包括但不限于以下基团：八氢环戊[c]吡咯(例如，八氢环戊[c]吡咯-2-基)、八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢异吲哚基、异吲哚啉基(例如，异吲哚啉-2-基)、八氢-苯并[b][1,4]二噁英。
术语“桥接杂环基”是指5至14元多环杂环烷基，其中体系中每两个环共有两个不连续的原子，其包含一个或多个选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为环成员，其余环成员是碳。桥接杂环基的一个或多个环可含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子体系。优选地，桥接杂环基是6至14元，并且更优选是7至10元。根据环的元数，桥接杂环基分为二环、三环、四环或多环桥接杂环基，并且优选指代二环、三环或四环桥接杂环基，更优选为二环或三环桥接杂环基。桥接杂环基的代表性例子包括但不限于以下基团：2-氮杂双环[2.2.1]庚基、氮杂双环[3.1.0]己基、2-氮杂双环[2.2.2]辛基和2-氮杂双环[3.3.2]癸基。
本文公开的化合物可以含有不对称中心，并且因此可以作为对映异构体存在。“对映异构体”是指化合物的两种立体异构体，它们彼此是不可重叠的镜像。在本文公开的化合物具有两个或更多个不对称中心的情况下，它们可以另外作为非对映异构体存在。对映异构体和非对映异构体属于更广泛的立体异构体类别。旨在包括作为基本上纯的拆分的对映异构体、其外消旋混合物、以及非对映异构体的混合物的所有这些可能的立体异构体。旨在包括本文公开的化合物和/或其药学上可接受的盐的所有立体异构体。除非另外特别提及，否则提及一种异构体适用于任何可能的异构体。每当未指定异构体组成时，包括所有可能的异构体。
如本文所用的术语“基本上纯的”意指目标立体异构体含有不超过35％(如不超过30％，进一步如不超过25％，甚至进一步如不超过20％)(按重量计)的任何其他一种或多种立体异构体。在一些实施方案中，术语“基本上纯的”意指目标立体异构体含有不超过10％(例如不超过5％，如不超过1％)(按重量计)的任何其他一种或多种立体异构体。
当本文公开的化合物含有烯属双键时，除非另有说明，否则此类双键意在包括E和Z几何异构体两者。
当本文公开的化合物含有二取代的环己基或环丁基时，位于环己基或环丁基环上的取代基可以采用顺式和反式形成。顺式形式意指两个取代基都存在于碳上2个取代基位置的上侧，而反式意指它们位于相对侧。
将反应产物彼此分离和/或与起始材料分离可能是有利的。通过本领域常用的技术将每个步骤或一系列步骤的所需产物分离和/或纯化(下文中分离)至所需的均匀度。通常，此类分离涉及多相提取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱。色谱可以涉及许多方法，包括例如：反相和正相；尺寸排阻；离子交换；高、中和低压液相色谱方法和设备；小规模分析型；模拟移动床(“SMB”)和制备型薄层或厚层色谱；以及小规模薄层和快速色谱的技术。本领域技术人员将应用最有可能实现所需分离的技术。
“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心的化合物的立体异构体，但它们不是彼此的镜像。通过本领域技术人员熟知的方法，诸如通过色谱和/或分步结晶，可以基于非对映异构体混合物的物理化学差异将它们分离成其单独的非对映异构体。对映异构体可以通过以下方式来分离：通过与适当的光学活性化合物(例如，手性助剂如手性醇或莫舍酰氯(Mosher's acid chloride))反应将对映异构体混合物转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体并将各自的非对映异构体转化(例如，水解)成相应的纯的对映异构体。对映异构体也可以通过使用手性HPLC柱来分离。
单一立体异构体例如基本上纯的对映异构体可以通过使用一种方法将外消旋混合物拆分来获得，所述方法例如使用光学活性拆分剂形成非对映异构体(Eliel,E.和Wilen,S.Stereochemistry of Organic Compounds.New York:John Wiley&Sons,Inc.,1994；Lochmuller,C.H.,等人“Chromatographic resolution of enantiomers:Selectivereview.”J.Chromatogr.,113(3)(1975):第283-302页)。本发明的手性化合物的外消旋混合物可以通过任何合适的方法分离和分开，包括：(1)与手性化合物形成离子非对映异构体盐并且通过分级结晶或其他方法分离；(2)用手性衍生化试剂形成非对映异构体化合物，分离非对映异构体并且转化为纯立体异构体；以及(3)直接在手性条件下分离基本上纯的或富集的立体异构体。参见：Wainer,Irving W.,编辑Drug Stereochemistry:AnalyticalMethods and Pharmacology.New York:Marcel Dekker,Inc.,1993。
“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适合于与人和低等动物的组织接触使用而没有过度毒性、刺激、过敏反应等并与合理的利益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐可以在本文公开的化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱官能团与合适的有机酸反应或通过使酸性基团与合适的碱反应而单独制备。
另外，如果作为酸加成盐获得本文公开的化合物，则可以通过碱化酸式盐的溶液来获得游离碱。相反，如果产物是游离碱，则可以按照用于从碱化合物制备酸加成盐的常规程序，通过将游离碱溶解在合适的有机溶剂中并用酸处理所述溶液来产生加成盐(如药学上可接受的加成盐)。本领域技术人员将认识到可以在无需过度实验的情况下使用各种合成方法来制备无毒的药学上可接受的加成盐。
如本文所定义，“其药学上可接受的盐”包括至少一种式(Ia)或(Ib)的化合物的盐和式(Ia)或(Ib)的化合物的立体异构体的盐，如对映异构体的盐和/或非对映异构体的盐。
当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，术语“给予”(administration，administering)、“治疗”(treating和treatment)意指外源性药剂、治疗剂、诊断剂或组合物与所述动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。细胞的治疗涵盖试剂与所述细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中所述流体与所述细胞接触。术语“给予”和“治疗”还意指通过试剂、诊断剂、结合化合物或者通过另一种细胞对例如细胞的体外和离体治疗。本文的术语“受试者”包括任何生物体，优选动物，更优选哺乳动物(例如大鼠、小鼠、狗、猫、兔)且最优选人。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指活性成分(如化合物)的如下量，当所述化合物被给予受试者以治疗疾病或者疾病或障碍的至少一种临床症状时所述量足以影响对所述疾病、障碍或症状的这种治疗。“治疗有效量”可随以下各项变化：化合物，疾病、障碍，和/或疾病或障碍的症状，疾病、障碍和/或疾病或障碍的症状的严重程度，待治疗的受试者的年龄，和/或待治疗的受试者的体重。在任何给定的例子中，适当的量对于本领域技术人员来说是清楚的，或者可以通过常规实验来确定。在一些实施方案中，“治疗有效量”是本文公开的至少一种化合物和/或其至少一种立体异构体和/或其至少一种其药学上可接受的盐有效于“治疗”(如上定义)受试者的疾病或障碍的量。在组合治疗的情况下，“治疗有效量”是指用于有效治疗疾病、障碍或病症的组合对象的总量。
包含本文公开的化合物的药物组合物可以经由口服、吸入、直肠、肠胃外或局部给药给予至对其有需要的受试者。对于口服给予，药物组合物可以是常规固体配制品如片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊等，液体配制品如水或油悬浮液，或其他液体配制品如糖浆、溶液、悬浮液等；对于肠胃外给予，药物组合物可以是溶液、水溶液、油悬浮液浓缩物、冻干粉末等。优选地，药物组合物的配制品选自片剂、包衣片剂、胶囊、栓剂、鼻喷雾剂或注射剂，更优选片剂或胶囊。药物组合物可以是具有准确剂量的单个单位给药。此外，药物组合物还可包含另外的活性成分。
本文公开的药物组合物的所有配制品可以通过制药领域中的常规方法生产。例如，可以将活性成分与一种或多种赋形剂混合，然后从而制造所需的配制品。“药学上可接受的赋形剂”是指适用于所需药物配制品的常规药物载体，例如：稀释剂、媒介物(如水、各种有机溶剂等)、填充剂(如淀粉、蔗糖等)、粘合剂(如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮(PVP))；润湿剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六醇；吸收载体如高岭土和皂土；润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、聚乙二醇等。此外，所述药物组合物还包含其他药学上可接受的赋形剂，如分散剂、稳定剂、增稠剂、络合剂、缓冲剂、渗透促进剂、聚合物、芳香剂甜味剂和染料。
术语“疾病”是指任何疾病、不适、病、症状或适应症，并且可以与术语“障碍”或“病症”互换。
在整个说明书和随后的权利要求书中，除非上下文另有要求，否则术语“包括”和变型如“包括”(“comprises”和“comprising”)旨在说明其后的特征的存在，但不排除存在或添加一个或多个其他功能。当在本文中使用时，术语“包含”可以用术语“含有”、“包括”替代或有时用“具有”替代。
在整个说明书和随后的权利要求书中，术语“Cn-m”指示包括端点的范围，其中n和m是整数并且指示碳数。例子包括C1-8、C1-6等。
除非在本文件的其他地方明确定义，否则本文使用的所有其他技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。
通用合成
本文公开的化合物(包括其盐)可以使用已知的有机合成技术制备，并且可以根据多种可能的合成途径中的任何一种来合成。
用于制备本文公开的化合物的反应可以在可由有机合成领域的技术人员容易选择的合适的溶剂中进行。合适的溶剂可以是在进行反应的温度(例如可以在从室温至溶剂的沸点范围内的温度)下与起始材料、中间体或产物基本上不反应的。给定的反应可以在一种溶剂或多种溶剂的混合物中进行。
本领域技术人员可以容易地确定合适的保护基团的选择。
可以根据本领域已知的任何合适的方法监测反应，这些方法如NMR、UV、HPLC、LC-MS和TLC。化合物可通过多种方法纯化，这些方法包括HPLC和正相二氧化硅色谱法。
手性分析型HPLC用于不同手性例子的保留时间分析，根据所用的柱、流动相、溶剂比将条件分为以下方法。
本文公开的化合物可以按照方案I和方案II制备。
方案I
Figure BDA0002909572560000201
其中R和R6是如对式(Ia)或(Ib)所定义的。
在方案I中，可商购的醛与碳酰肼1(如呋喃-2-碳酰肼)反应以形成式2，其在酸性条件的存在下重排以得到式3。然后使式3与2-卤代-2-苯基乙酸酯(如2-溴-2-苯基乙酸甲酯)反应以形成式4，其随后通过使用碱如氢氧化钠或叔丁醇钾水解成式5的游离酸。在本领域已知的标准条件下完成酸5的进一步偶联以提供式6的化合物。
方案II
Figure BDA0002909572560000202
其中R、R6和R3和R4是如对式(Ia)或(Ib)所定义的。
在方案II中，在本领域已知的标准条件下将可商购的酸(如2-苯丙酸)酯化以得到一种式7的化合物，使所述化合物与卤化试剂如N-溴代琥珀酰亚胺反应以在α位引入一个卤原子。使式8的化合物与水合肼反应以形成式9。使式9与可商购的2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛反应以得到式10，使其与碳酰肼(如呋喃-2-碳酰肼)反应，并且在酸性条件的存在下进一步重排以得到式12。随后通过使用碱如氢氧化钠或叔丁醇钾将酯12水解成式13的游离酸。在本领域已知的标准条件下完成酸13的进一步偶联以提供式14的化合物。
实施例
以下实施例旨在仅仅是示例性的，并且不应被认为以任何方式进行限制。除非另有说明，否则以下所述实施例中的实验方法是常规方法。除非另有说明，否则试剂和材料均可商购。所用的全部溶剂和化学品均为分析级或化学纯的。溶剂在使用前都要再蒸馏。无水溶剂均根据标准方法或参考方法制备。用于柱色谱法的二氧化硅凝胶(100-200目)和用于薄层色谱法(TLC)的二氧化硅凝胶(GF254)可从中国的Tsingdao Haiyang Chemical Co.,Ltd.或Yantai Chemical Co.,Ltd.商购；除非另有说明，否则全部用石油醚(60℃-90℃)/乙酸乙酯(v/v)洗脱并且通过碘或磷钼酸在乙醇中的溶液来可视化。除非另有说明，否则所有萃取溶剂均经无水Na2SO4干燥。在Bruck-400核磁共振光谱仪上记录1H NMR谱，其中TMS(四甲基硅烷)作为内标物。通过使用配备有在214nm和254nm处检测的二极管阵列检测器(DAD)和离子阱(ESI源)的Agilent1100高效液相色谱-离子阱质谱仪(LC-MSD阱)记录LC/MS数据。除试剂外的所有化合物名称均由
Figure BDA0002909572560000211
14.0版生成。
在以下实施例中，使用以下缩写：
AcOH 乙酸
Aq 水溶液
盐水 饱和氯化钠水溶液
Bn 苄基
BnBr 溴化苄
BPO 过氧化苯甲酰
BSA N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺
CH2Cl2或DCM 二氯甲烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
Dppf 1,1’-双(二苯基膦)二茂铁
DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯
DIEA或DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DMAP 4-N,N-二甲基氨基吡啶
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
Et2O或醚 乙醚
g 克
h或hr 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐
Hex 己烷
HCl 盐酸
HMDS 六甲基二硅氮烷
HPLC 高效液相色谱
IPA 异丙醇
i-PrOH 异丙醇
LCMS 液相色谱-质谱法
mg 毫克
mL 毫升
mmol 毫摩尔
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
Min 分钟
ms或MS 质谱
Na2SO4 硫酸钠
NBS N-溴代琥珀酰亚胺
PE 石油醚
prep 制备型
Rt 保留时间
Rt或rt 室温
TBAF 四丁基氟化铵
TBSCl 叔丁基二甲基甲硅烷基氯
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱
μL 微升
化合物A1：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000231
步骤A：N'-(6-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)呋喃-2-碳酰肼
Figure BDA0002909572560000232
向2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(50g，0.26mol)和Et3N(28.9g，0.28mol)在DMSO(600mL)中的搅拌溶液中分批添加呋喃-2-碳酰肼(32.8g，0.26mol)。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示起始材料转化为中间体。添加NH2NH2.H2O(14mL，0.31mol)并且将溶液在70℃下搅拌3小时。在减压下蒸发(油泵，在65℃下)后，向残余物中添加水(500mL)，浆化并且过滤。将滤饼再次用水(300mL)浆化，过滤并且干燥以得到呈黄色固体的产物。MS:M/e 260(M+1)+
步骤B：2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002909572560000233
将N'-(6-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)呋喃-2-碳酰肼(17g，65mmol)在BSA(136mL)和HMDS(160mL)中的溶液在110℃下加热过夜。将溶液在60℃下在减压下浓缩。向残余物中添加水(200mL)并且浆化1小时。将固体过滤，用水洗涤并且干燥以获得呈棕色固体的所需产物(13.1g，83％)。MS:M/e242(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002909572560000241
室温下，向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(500mg，2.07mmol)在DMF(20mL)和K2CO3(344mg，2.49mmol)中的搅拌溶液中添加2-氯丙酸乙酯(339mg，2.49mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水(20mL)稀释，并用EA(20mL x2)萃取。将残余物(N1和N2位置化合物的混合物)直接用于下一步骤。MS:M/e 342(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)丙酸
Figure BDA0002909572560000242
在室温下向步骤C的产物(707mg，粗品，2.07mmol)在MeOH(12mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2.0M，4mL)。添加后，将混合物在60℃下搅拌3小时。将反应在减压下浓缩。将残余物溶解在水(20mL)中并且通过HCl溶液(2M)中和至pH＝3至4。在减压下浓缩水相。将残余物(N1和N2位置化合物的混合物，含有NaCl)直接用于下一步骤。MS:M/e 314(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000243
将步骤D的产物(200mg，0.64mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(190mg，0.7mmol)、HATU(267mg，0.7mmol)和Et3N(322mg，3.19mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并用EA(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，得到标题化合物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.18–8.13(m,2H),7.99–7.90(m,1H),7.26–7.21(m,1H),6.96(d,J＝8.0Hz,2H),6.85(d,J＝8.0Hz,2H),6.77–6.71(m,1H),5.81–5.68(m,1H),4.04–3.96(m,2H),3.60–3.53(m,4H),3.52–3.37(m,2H),3.28(s,3H),3.20–2.93(m,4H),1.61(d,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 532(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物A1分离成两种对映体立体异构体(化合物A1a，较早的峰；和化合物A1b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000251
Figure BDA0002909572560000252
化合物A2：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-3-甲基丁-1-酮
Figure BDA0002909572560000253
Figure BDA0002909572560000261
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-3-甲基丁酸甲酯和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑 并[1,5-c]嘧啶-8-基)-3-甲基丁酸甲酯。
Figure BDA0002909572560000262
将2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(330mg，1.37mmol)、2-溴-3-甲基丁酸甲酯(330mg，1.70mmol)和K2CO3(400mg，2.90mmol)在DMF(7mL)中的混合物在50℃加热16小时。将混合物用EA(30mL)稀释，并过滤悬浮液。将滤液用盐水(15mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。通过制备型TLC纯化所得残余物，得到呈白色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-3-甲基丁酸甲酯(70mg)，MS:M/e 356(M+1)+；以及呈白色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-3-甲基丁酸甲酯(170mg)，MS:M/e 356(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-3-甲基丁酸
Figure BDA0002909572560000263
在室温下向步骤A的产物(60mg，0.17mmol)在MeOH(2mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2M，1mL)，并将所得混合物搅拌2小时。将混合物用HCl(1M)中和并浓缩至干燥。添加5mL混合溶剂(CH2Cl2/MeOH＝3:1)并搅拌10分钟。将悬浮液过滤，并将滤液浓缩，得到呈白色固体的标题产物(52mg，90％)。MS:M/e 342(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-3-甲基丁-1-酮
Figure BDA0002909572560000271
在室温下向步骤B的产物(52mg，0.15mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(52mg，0.22mmol)、DIEA(100mg，0.78mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(70mg，0.18mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。添加20mL的EA并且将混合物用盐水(10mLx3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(EA/MeOH＝20:1)纯化以得到标题产物(46.0mg，产率：55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40–8.10(m,3H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝3.6Hz,1H),6.82–6.71(m,5H),5.20(d,J＝9.6Hz,1H),4.00–3.92(m,2H),3.80–3.71(m,1H),3.69–3.62(m,2H),3.61–3.56(m,2H),3.53–3.45(m,1H),3.27(s,3H),3.06–2.97(m,1H),2.97-2.90(m,1H),2.84–2.69(m,2H),2.32–2.23(m,1H),1.04(d,J＝6.8Hz,3H),0.60(d,J＝6.8Hz,3H)。MS:M/e 560(M+1)+。
化合物A3：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-甲基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000272
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-甲基丙酸甲酯和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑 并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-甲基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000281
将2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(1.5g，6.2mmol)、2-溴-2-甲基丙酸甲酯(1.3g，7.4mmol)和K2CO3(1.7g，12.4mmol)在DMF(80mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。向溶液中添加水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取并且用盐水(50mL)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝3:1至1:1)纯化以得到2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲基丙酸甲酯(65mg，3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(s,1H),8.06(br.s,2H),7.95(d,J＝4.0Hz,1H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),6.73(t,J＝4.0Hz,1H),3.67(s,3H),1.87(s,6H)ppm。MS:M/e 342(M+1)+以及2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-甲基丙酸甲酯(1.2g，57％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H),7.95(s,1H),7.67(br.s,1H),7.18(s,1H),6.74(t,J＝4.0Hz,1H),3.64(s,3H),1.87(s,6H)ppm。MS:M/e 342(M+1)+
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-甲基丙酸
Figure BDA0002909572560000282
将NaOH溶液(30mg，在2mL的水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲基丙酸甲酯(65mg，0.19mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将溶液浓缩，添加水(5mL)并且用1NHCl溶液酸化至pH＝5。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的所需产物(53mg，85％)。MS:M/e 328(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-甲基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000291
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲基丙酸(53mg，0.16mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(38mg，0.16mmol)、HATU(73mg，0.19mmol)和DIEA(42mg，0.32mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝2:1至EA)纯化以得到所需产物(34mg，39％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.07(br.s,2H),7.94(s,1H),7.21(d,J＝4.0Hz,1H),6.73-6.66(m,5H),3.93(d,J＝4.0Hz,2H),3.63(br.s,2H),3.56(d,J＝4.0Hz,2H),3.31(s,3H),2.89(br.s,4H),2.42(br.s,2H),1.83(s,6H)ppm。MS:M/e 546(M+1)+
化合物A4：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丁-1-酮
Figure BDA0002909572560000292
步骤A：4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560000293
向4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(10.0g，36mmol)在CH3CN(250mL)中的搅拌溶液中添加NaH(3.0g，125mmol)，将反应混合物在50℃下搅拌30分钟。然后将1-溴-2-甲氧基乙烷(6.0g，43.5mmol)添加到反应中。添加后，将反应混合物在60℃下搅拌过夜。除去大部分溶剂，并将残余物用H2O(50mL)溶解，然后用HCl水溶液酸化至pH＝6至7，用EtOAc(200mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到呈黄色油状物的4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(16g，粗品)。MS:M/e 337(M+1)+。
步骤B：1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪
Figure BDA0002909572560000301
向4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(16.0g，粗品)在DCM(100mL)中的搅拌混合物中添加TFA(100mL)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌3小时，除去大部分溶剂，并将所述残余物溶于H2O(50mL)中，用EtOAc(50mL)萃取，然后用NaOH水溶液调节至pH＝9至10，并用EtOAc(200mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到呈灰色固体的1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(10g，88.8％)。MS:M/e 237(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)丁酸甲酯和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5- c]嘧啶-8-基)丁酸甲酯
Figure BDA0002909572560000302
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(300mg，1.25mmol)在DMF(30mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(345mg，2.5mmol)和2-溴-丁酸甲酯(270mg，1.5mmol)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1至1:1)纯化，得到呈白色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)丁酸甲酯(120mg，56.1％)和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)丁酸甲酯(100mg，46.8％)。MS:M/e 342(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)丁酸
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)丁酸甲酯(120mg，0.35mmol)在MeOH/H2O(3mL/1mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，1mL)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌5小时。去除大部分溶剂以得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并且过滤，收集滤饼，干燥以得到呈白色固体的目标化合物(100mg，87.1％)。MS:M/e 328(M+1)+。
Figure BDA0002909572560000311
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丁-1-酮
Figure BDA0002909572560000312
将步骤D的产物(80mg，0.25mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(80mg，0.34mmol)、HATU(100mg，0.25mmol)和TEA(80mg，0.79mmol)在CH3CN(20mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(40mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(30mg，22.0％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.18(br,2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝2.7Hz,1H),6.83–6.76(m,4H),6.74(d,J＝1.5Hz,1H),5.56–5.48(m,1H),3.98(d,J＝3.7Hz,2H),3.69(s,1H),3.63–3.46(m,5H),3.27(s,3H),3.06–2.91(m,2H),2.80(s,1H),2.44(s,1H),2.21–2.09(m,2H),0.79(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。MS:M/e 546(M+1)+。
化合物A5：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000313
Figure BDA0002909572560000321
步骤A：N'-(6-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)呋喃-2-碳酰肼
Figure BDA0002909572560000322
向2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(50g，0.26mol)和Et3N(28.9g，0.28mol)在DMSO(600mL)中的搅拌溶液中分批添加呋喃-2-碳酰肼(32.8g，0.26mol)。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示起始材料转化为中间体。添加NH2NH2.H2O(14mL，0.31mol)并且将溶液在70℃下搅拌3小时。在减压下蒸发(油泵，在65℃下)后，向残余物中添加水(500mL)，浆化并且过滤。将滤饼再次用水(300mL)浆化，过滤并且干燥以得到呈黄色固体的产物。MS:M/e 260(M+1)+
步骤B：2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺
Figure BDA0002909572560000323
将N'-(6-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)呋喃-2-碳酰肼(17g，65mmol)在BSA(136mL)和HMDS(160mL)中的溶液在110℃下加热过夜。将溶液在60℃下在减压下浓缩。向残余物中添加水(200mL)并且浆化1小时。将固体过滤，用水洗涤并且干燥以得到呈棕色固体的所需产物(13.1g，83％)。MS:M/e 242(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)戊酸乙酯和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5- c]嘧啶-8-基)戊酸乙酯
Figure BDA0002909572560000331
将2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(2g，8.3mmol)、2-溴戊酸乙酯(2.1g，9.9mmol)和K2CO3(2.3g，16.6mmol)在DMF(50mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。向溶液中添加水(30mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取并且用盐水(50mL)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，浓缩并通过柱色谱(PE:EA＝4:1至2:1)纯化，得到2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸乙酯(600mg，20％)和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)戊酸乙酯(810mg，25％)。MS:M/e 370(M+1)+
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)戊酸
Figure BDA0002909572560000332
将NaOH溶液(324mg，在2mL水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸乙酯(600mg，1.6mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌3小时。将溶液浓缩，添加水(10mL)并且用1N HCl溶液酸化至pH＝5。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的所需产物(475mg，86％)。MS:M/e342(M+1)+
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000333
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸(350mg，1mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(241mg，1mmol)、HATU(456mg，1.2mmol)和DIEA(258mg，2mmol)在DMF(20mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(15mL)，用乙酸乙酯(20mL)萃取并且用盐水(20mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱法(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到所需产物(330mg，57％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.17(br.s,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),6.79-6.73(m,5H),5.58(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz 1H),3.98-3.95(m,2H),3.69-3.52(m,6H),3.27(s,3H),3.00-2.79(m,3H),2.16-2.02(m,3H),1.23-1.09(m,2H),0.87(t,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 560(M+1)+
通过手性制备型HPLC将化合物A5分离成两种对映体立体异构体(化合物A5a，较早的峰；和化合物A5b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000341
Figure BDA0002909572560000342
化合物A6：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000343
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸(375mg，1.1mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(338mg，1.2mmol)、HATU(502mg，1.3mmol)和DIEA(284mg，2.2mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到所需产物(480mg，73％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.16(br.s,2H),7.95(s,1H),7.23(s,1H),6.82-6.73(m,5H),5.60-5.56(m,1H),4.04-3.96(m,2H),3.60-3.42(m,10H),3.23(s,3H),3.05-2.94(m,2H),2.67(br.s,1H),2.33(br.s,1H),2.06-1.99(m,2H),1.24-1.10(m,1H),0.92-0.85(m,3H)ppm。MS:M/e 604(M+1)+
通过手性制备型HPLC将化合物A6分离成两种对映体立体异构体(化合物A6a，较早的峰；和化合物A6b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000351
Figure BDA0002909572560000352
化合物A7：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000353
Figure BDA0002909572560000361
步骤A：4-(4-(2-溴乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560000362
将4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯、1,2-二溴-乙烷和K2CO3在丙酮中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水(300mL)稀释，并用EA(300mL x3)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(用EA:PE 1:5洗脱)纯化以得到呈黄色油状物的标题化合物(3.2g，产率：32.3％)。MS:M/e 385(M+1)+。
步骤B：4-(4-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560000363
将步骤A的产物(6.2g，16.1mmol)和异吲哚啉-1,3-二酮(2.98g，16.1mmol)在DMF(100mL)中的混合物在80℃下搅拌2小时。用水(200mL)淬灭反应，并从体系中形成沉淀物。将混合物过滤并且收集固体。黄色固体在空气中干燥并且直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.97–7.68(m,4H),6.94–6.70(m,4H),4.30–4.06(m,2H),3.99–3.84(m,2H),3.46–3.37(m,4H),2.97–2.84(m,4H),1.41(s,9H)ppm。MS:M/e 452(M+1)+。
步骤C：2-(2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0002909572560000371
将步骤B的产物(6.2g，16.1mmol)在HCl/1,4-二噁烷(100mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。从体系中形成固体。过滤混合物，并用EA(50mL)洗涤固体。将白色固体(3.7g，产率：93.7％)在空气中干燥并且直接用于下一步骤。MS:M/e 352(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002909572560000372
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(3g，12.4mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(2.06mg，14.9mmol)和2-氯丙酸乙酯(2.03mg，14.9mmol)。将反应用水(50mL)淬灭并且用EA(50mL x3)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(石油醚/EA＝1:1)纯化以得到呈白色固体的标题化合物(1g，47.2％)。MS:M/e 342(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)丙酸
Figure BDA0002909572560000373
在室温下向步骤D的产物(1g，2.9mmol)在MeOH(24mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2.0M，8mL)。将混合物在室温下搅拌过夜。去除溶剂，并且将残余物溶解在水(20mL)中。将混合物用HCl水溶液(2M)酸化至pH＝3至4。从体系中沉淀出固体。将混合物过滤并且收集固体。将白色固体(620mg，93.8％)在空气中干燥并且直接用于下一步骤。MS:M/e 314(M+1)+。
步骤F：2-(2-(4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑 并[1,5-c]嘧啶-7-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0002909572560000381
将步骤C的产物(564mg，1.6mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)丙酸(步骤E的产物，500mg，1.6mmol)、HATU(668mg，1.76mmol)和Et3N(1mL，过量)在DMF(20mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(40mL)中，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤并且在空气中干燥。将黄色固体(510mg，产率：49.1％)不经进一步纯化而用于下一步骤。MS:M/e 647(M+1)+。
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000382
在室温下向步骤F的产物在EtOH(10mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(1mL)。将混合物在70℃下搅拌3小时。将反应冷却至室温并且过滤。将滤液在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化以得到标题化合物(120mg，产率：29.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝4Hz,1H),6.85–6.76(m,4H),6.75–6.72(m,1H),5.75(q,J＝6.7Hz,1H),3.82(t,J＝6Hz,2H),3.75–3.36(m,4H),3.08–2.78(m,6H),1.60(d,J＝8Hz,3H)ppm。MS:M/e 517(M+1)+。
化合物A8：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丁-1-酮
Figure BDA0002909572560000383
Figure BDA0002909572560000391
步骤A：2-(2-甲氧基乙氧基)乙基甲磺酸酯
Figure BDA0002909572560000392
向2-(2-甲氧基乙氧基)乙-1-醇(10g，83.3mmol)和TEA(26g，257mmol)在DCM(300mL)中的搅拌混合物中添加MsCl(14g，122.8mmol)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。将大部分溶剂除去以得到水层，用NaHCO3水溶液洗涤，并用EtOAc(200mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到呈黄色油状物的目标化合物(11g，66.3％)。MS:M/e 199(M+1)+。
步骤B：4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560000393
向4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(10.0g，36mmol)在CH3CN(200mL)中的搅拌溶液中添加NaH(3.0g，125mmol)，将反应混合物在50℃下搅拌30分钟。然后将2-(2-甲氧基乙氧基)乙基甲磺酸酯(8.5g，43mmol)添加到反应中。添加后，将反应混合物在60℃下搅拌过夜。除去大部分溶剂，并将残余物用H2O(50mL)溶解，然后用HCl水溶液酸化至pH＝6至7，并用EtOAc(200mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝30％EtOAc)纯化以得到呈黄色油状物的目标化合物(13g，94.7％)。MS:M/e 381(M+1)+。
步骤C：1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪
Figure BDA0002909572560000394
向4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(13.0g，34.1mmol)在DCM(100mL)中的搅拌混合物中添加TFA(100mL)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌3小时，除去大部分溶剂，并将所述残余物溶于H2O(50mL)中，然后用NaOH水溶液调节至pH＝9至10，并用EtOAc(200mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到呈灰色固体的1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(8g，83.5％)。MS:M/e281(M+1)+
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丁-1-酮
Figure BDA0002909572560000401
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)丁酸(50mg，0.15mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(65mg，0.23mmol)、HATU(86mg，0.23mmol)和TEA(30mg，0.30mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(41mg，46.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.18(br.,2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝3.4Hz,1H),6.83–6.76(m,4H),6.74(dd,J＝3.2,1.7Hz,1H),5.51(dd,J＝8.4,6.0Hz,1H),3.99–3.95(m,2H),3.69–3.65(m,2H),3.60–3.53(m,4H),3.47–3.41(m,3H),3.26–3.20(m,4H),3.06–2.91(m,2H),2.81(s,1H),2.42(s,1H),2.24–2.06(m,2H),0.79(t,J＝7.3Hz,3H)ppm。MS:M/e 590(M+1)+。
化合物A9：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000402
将1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(30.8mg，0.11mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)丙酸(31mg，0.1mmol)、HATU(42mg，0.11mmol)和Et3N(0.2mL，过量)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(15mL)中并且用EA(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EA：100％)纯化以得到标题化合物(8mg，产率：13.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26–8.14(m,3H),7.96(s,1H),7.25(d,J＝4Hz,1H),6.86–6.77(m,4H),6.76–6.71(m,1H),5.80–5.72(m,1H),4.03–3.93(m,2H),3.73–3.64(m,3H),3.60–3.52(m,4H),3.48–3.41(m,3H),3.24(s,3H),3.07–2.81(m,4H),1.61(d,J＝8Hz,3H)ppm。MS:M/e576(M+1)+。
化合物A10：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)己-1-酮
Figure BDA0002909572560000411
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)己酸甲酯和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5- c]嘧啶-8-基)己酸甲酯
Figure BDA0002909572560000412
将2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(1.5g，6.2mmol)、2-溴己酸甲酯(1.5g，7.4mmol)和K2CO3(1.7g，12.4mmol)在DMF(50mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。向溶液中添加水(20mL)，用乙酸乙酯(40mL)萃取并且用盐水(40mL)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝3:1至1:1)纯化以得到2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)己酸甲酯(380mg，16％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.16(br.s,2H),7.95(d,J＝4.0Hz,1H),7.24(d,J＝4.0Hz,1H),6.74(d,J＝4.0Hz,1H),5.38-5.34(dd,J＝12.0Hz,4.0Hz 1H),3.64(s,3H),2.72-2.16(m,2H),1.29-1.00(m,4H),0.82-0.79(m,3H)ppm。MS:M/e 370(M+1)+以及2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)己酸甲酯(310mg，13％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,1H),7.95(s,1H),7.68(br.s,2H),7.20(d,J＝4.0Hz,1H),6.75-6.73(m,1H),5.31(dd,J＝12.0Hz,4.0Hz 1H),3.64(s,3H),2.33-2.15(m,2H),1.28-1.02(m,4H),0.84-0.80(m,3H)ppm。MS:M/e 370(M+1)+
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)己酸
Figure BDA0002909572560000421
将NaOH溶液(160mg，在2mL水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)己酸甲酯(380mg，1mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将溶液浓缩，添加水(10mL)并且用1N HCl溶液酸化至pH＝5。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的所需产物(355mg，97％)。MS:M/e356(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)己-1-酮
Figure BDA0002909572560000422
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)己酸(50mg，0.14mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(33mg，0.14mmol)、HATU(64mg，0.17mmol)和DIEA(36mg，0.28mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱法(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到所需产物(40mg，49％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.17(br.s,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),6.80-6.73(m,5H),5.56(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz 1H),3.98-3.96(m,2H),3.69-3.48(m,6H),3.27(s,3H),3.00-2.79(m,3H),2.41-2.07(m,3H),1.28-1.02(m,4H),0.82(t,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e574(M+1)+
通过手性制备型HPLC将化合物A10分离成两种对映体立体异构体(化合物A10a，较早的峰；和化合物A10b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000431
Figure BDA0002909572560000432
化合物A11：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)己-1-酮
Figure BDA0002909572560000433
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)己酸(320mg，0.9mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(277mg，1.0mmol)、HATU(410mg，1.1mmol)和DIEA(233mg，1.8mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(20mL)萃取并且用盐水(20mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱法(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到所需产物(350mg，63％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.17(br.s,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),6.80-6.73(m,5H),5.56(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),3.97(t,J＝4.0Hz,2H),3.68-3.42(m,13H),3.00-2.73(m,3H),2.41-2.07(m,3H),1.35-1.19(m,3H),1.03-1.02(m,1H),0.81(t,J＝4.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 618(M+1)+
通过手性制备型HPLC将化合物A11分离成两种对映体立体异构体(化合物A11a，较早的峰；和化合物A11b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000441
Figure BDA0002909572560000442
化合物A12：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-3-甲基丁-1-酮
Figure BDA0002909572560000443
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-3-甲基丁酸(85mg，0.25mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(77mg，0.27mmol)、DIEA(150mg，1.16mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加HATU(105mg，0.27mmol)，并且将混合物在室温下搅拌4小时。添加20mL的EA并且将混合物用盐水(10mLx3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(EA/MeOH＝20:1)纯化以得到标题产物(66.0mg，产率：44％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35–8.05(m,3H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝3.2Hz,1H),6.85–6.70(m,5H),5.20(d,J＝10.0Hz,1H),4.00–3.91(m,2H),3.80–3.70(m,1H),3.70–3.60(m,3H),3.58–3.52(m,2H),3.52–3.45(m,1H),3.45–3.40(m,2H),3.23(s,3H),3.05–2.90(m,2H),2.85-2.70(m,2H),2.35–2.21(m,1H),1.04(d,J＝6.4Hz,3H),0.61(d,J＝6.8Hz,3H)。MS:M/e 604(M+1)+。
化合物A13：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000451
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-苯基乙酸甲酯和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑 并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-苯基乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000452
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(1.0g，4.2mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(1.3g，9.4mmol)和2-溴-2-苯基乙酸甲酯(1.0g，4.4mmol)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并且用EtOAc(100mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至1:3)纯化得到呈白色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸甲酯(200mg，24.5％)和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-苯基乙酸甲酯(360mg，44.0％)。MS:M/e 390(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-苯基乙酸
Figure BDA0002909572560000461
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸甲酯(200mg，0.51mmol)在MeOH/H2O(3mL/1mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，2mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。去除大部分溶剂以得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并且过滤，收集滤饼，干燥以得到呈白色固体的目标化合物(150mg，78.2％)。MS:M/e 376(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000462
将步骤B的产物(50mg，0.13mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(55mg，0.23mmol)、HATU(75mg，0.20mmol)和TEA(40mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌5小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(42mg，54.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(s,1H),7.92(s,1H),7.70(br.,2H),7.59–7.43(m,5H),7.15(d,J＝3.4Hz,1H),7.11(s,1H),6.86–6.77(m,4H),6.75–6.69(m,1H),4.03–3.95(m,2H),3.80–3.71(m,1H),3.71–3.57(m,3H),3.50–3.40(m,1H),3.34(s,2H),3.28(s,3H),3.10–3.01(m,2H),2.98–2.87(m,2H)ppm。MS:M/e 594(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物A13分离成两种对映体立体异构体(化合物A13a，较早的峰；和化合物A13b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000471
Figure BDA0002909572560000472
化合物A14：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000473
将步骤B的产物(50mg，0.13mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(40mg，0.14mmol)、HATU(84mg，0.22mmol)和TEA(40mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(33mg，39.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.16(br.,2H),7.95(s,1H),7.43–7.31(m,5H),7.24(d,J＝2.9Hz,1H),6.86(s,1H),6.81–6.78(m,4H),6.74(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),4.01–3.94(m,2H),3.70–3.65(m,2H),3.55(dd,J＝5.7,3.8Hz,2H),3.44(dd,J＝5.7,3.7Hz,3H),3.35(s,3H),3.23(s,3H),3.05–2.87(m,2H),2.71–2.54(m,2H)ppm。MS:M/e 638(M+1)+。
化合物A15：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-环丙基-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000481
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-环丙基乙酸乙酯
Figure BDA0002909572560000482
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(1.0g，4.2mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(1.3g，9.4mmol)和2-溴-2-环丙基乙酸乙酯(1.2g，5.8mmol)。添加后，将反应混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并且用EtOAc(100mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至1:2)纯化得到呈白色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-环丙基乙酸乙酯(400mg，51.4％)和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-环丙基乙酸乙酯(500mg，64.7％)。MS:M/e 368(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-环丙基乙酸
Figure BDA0002909572560000483
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-环丙基乙酸乙酯(400mg，1.1mmol)在MeOH/H2O(9mL/2mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(4.0M，2mL)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌3小时。去除大部分溶剂以得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并且过滤，收集滤饼，干燥以得到呈白色固体的目标化合物(200mg，53.5％)。MS:M/e 340(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-环丙基-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000491
将步骤B的产物(50mg，0.15mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(45mg，0.19mmol)、HATU(84mg，0.22mmol)和TEA(30mg，0.30mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(28mg，33.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.18(d,2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝2.6Hz,1H),6.79–6.76(m,4H),6.74(s,1H),4.87(d,J＝9.5Hz,1H),4.05–3.89(m,2H),3.81–3.68(m,1H),3.64–3.56(m,3H),3.56–3.38(m,2H),3.27(s,3H),3.01(s,1H),2.93–2.74(m,2H),2.35–2.23(m,1H),1.86–1.74(m,1H),0.94–0.82(m,1H),0.74–0.61(m,1H),0.57–0.39(m,3H)。MS:M/e 558(M+1)+。
化合物A16：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000492
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-4-甲基戊酸甲酯和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑 并[1,5-c]嘧啶-8-基)-4-甲基戊酸甲酯
Figure BDA0002909572560000501
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(482mg，2mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(552mg，4mmol)和2-溴-4-甲基戊酸甲酯(418mg，2mmol)。添加后，将反应混合物搅拌一周末。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1至1:1)纯化得到呈白色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-4-甲基戊酸甲酯(280mg，37.9％)和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-4-甲基戊酸甲酯(213mg，28.8％)。MS:M/e 370(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002909572560000502
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-4-甲基戊酸甲酯(200mg，0.54mmol)在MeOH/H2O(10mL/5mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，4mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。去除大部分溶剂以得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并且过滤，收集滤饼，干燥以得到呈白色固体的目标化合物(180mg，93.8％)。MS:M/e 356(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000511
将步骤B的产物(50mg，0.14mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(33mg，0.14mmol)、HATU(64mg，0.168mmol)和DIPEA(36mg，0.28mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(30mg，37.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.18(s,2H),7.95(d,J＝0.8Hz,1H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.83–6.72(m,5H),5.64(m,1H),4.00–3.93(m,2H),3.70(m,1H),3.62–3.43(m,5H),3.27(s,3H),3.02(m,2H),2.77(m,1H),2.45–2.35(m,1H),2.29–2.17(m,1H),1.86-1.83(m,1H),1.32–1.21(m,1H),0.95(d,J＝6.4Hz,3H),0.83(d,J＝6.4Hz,3H)ppm。MS:M/e 574(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物A16分离成两种对映体立体异构体(化合物A16a，较早的峰；和化合物A16b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000512
Figure BDA0002909572560000513
化合物A17：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000521
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-4-甲基戊酸(50mg，0.14mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(39.4mg，0.14mmol)、HATU(64mg，0.168mmol)和DIPEA(36mg，0.28mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(30mg，34.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.18(s,2H),7.95(d,J＝0.8Hz,1H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.85–6.75(m,4H),6.74(m,1H),5.64(dd,J＝10.0,4.8Hz,1H),4.00–3.90(m,2H),3.68(m,3H),3.64–3.51(m,4H),3.48–3.40(m,3H),3.23(s,3H),3.11–2.92(m,2H),2.77(m,1H),2.46–2.35(m,1H),2.30–2.16(m,1H),1.85(m,1H),1.28(m,1H),0.95(d,J＝6.4Hz,3H),0.83(d,J＝6.4Hz,3H)ppm。MS:M/e618(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物A17分离成两种对映体立体异构体(化合物A17a，较早的峰；和化合物A17b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000522
Figure BDA0002909572560000523
Figure BDA0002909572560000531
化合物A18：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000532
将N,N-二甲基-2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-胺盐酸盐(100mg，0.35mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)丙酸(100mg，0.32mmol)、HATU(134mg，0.35mmol)和DIEA(1mL，过量)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤，并且通过制备型HPLC纯化以得到标题化合物(5mg，产率：3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33–8.08(m,3H),7.96(s,1H),7.67–7.36(m,2H),7.24(d,J＝4.0Hz,1H),7.07(d,J＝8.0Hz,2H),6.74(s,1H),5.86–5.74(m,1H),4.42–4.31(m,4H),4.03–3.69(m,4H),3.54–3.32(m,4H),2.86–2.74(m,6H),1.64(d,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 545(M+1)+。
化合物A19：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-3-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000533
Figure BDA0002909572560000541
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-3-苯基丙酸甲酯和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑 并[1,5-c]嘧啶-8-基)-3-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000542
将2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(300mg，1.25mmol)、2-溴-3-苯基丙酸甲酯(330mg，1.36mmol)和K2CO3(400mg，2.90mmol)在DMF(7mL)中的混合物在室温下加热20小时并且在50℃加热5小时。将混合物用EA(30mL)稀释，并过滤悬浮液。将滤液用盐水(15mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。通过制备型TLC纯化所得残余物，得到呈白色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-3-苯基丙酸甲酯(130mg)，MS:M/e 404(M+1)+，以及2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-3-苯基丙酸甲酯(125mg)。MS:M/e 404(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-3-苯基丙酸
Figure BDA0002909572560000543
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-3-苯基丙酸甲酯(120mg，0.25mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2M，2mL)，并且将所得混合物搅拌2小时。将混合物用HCl(2M)中和并浓缩至干燥，得到白色固体。添加20mL混合溶剂(CH2Cl2/MeOH＝3:1)并搅拌10分钟。将悬浮液过滤，并将滤液浓缩，得到呈白色固体的标题产物(95mg，96％)。MS:M/e390(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-3-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000551
在室温下向步骤B的产物(45mg，0.12mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(45mg，0.19mmol)、DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(75mg，0.20mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加30mL的EA并且将混合物用盐水(15mLx3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(CH2Cl2/EA/MeOH＝10:10:1)纯化，并且将所得产物通过制备型HPLC纯化以得到标题产物(32.0mg，产率：44％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),8.15–8.0(m,2H),7.94(s,1H),7.22(d,J＝3.2Hz,1H),7.18–7.11(m,2H),7.11–7.05(m,3H),6.77(s,4H),6.73(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),5.82(t,J＝7.6Hz,1H),4.01–3.91(m,2H),3.70–3.62(m,1H),3.62–3.57(m,2H),3.56–3.51(m,2H),3.46(d,J＝7.6Hz,2H),3.30(s,1H),3.27(s,3H),2.95–2.87(m,1H),2.85–2.70(m,2H),2.45–2.35(m,1H)。MS:M/e 608(M+1)+。
化合物A20：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000552
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸(30mg，0.09mmol)、1-(2,4-二氟苯基)哌嗪(19mg，0.09mmol)、HATU(41mg，0.1mmol)和DIEA(23mg，0.18mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到所需产物(26mg，56％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.15(br.s,2H),7.95(s,1H),7.23-7.14(m,2H),6.96-6.93(m,2H),6.74(s,1H),5.60-5.57(m,1H),3.72-3.51(m,4H),2.93-2.69(m,3H),2.40(br.s,1H),2.18-1.99(m,2H),1.23-1.11(m,2H),0.89-0.86(m,3H)ppm。MS:M/e 522(M+1)+
化合物A21：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-环丙基-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000561
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-环丙基乙酸(50mg，0.15mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(50mg，0.18mmol)、HATU(84mg，0.22mmol)和TEA(30mg，0.30mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(21mg，23.3％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.16(s,1H),7.75(s,1H),7.25(d,J＝3.4Hz,1H),6.85–6.75(m,4H),6.69–6.62(m,1H),5.00(d,J＝9.7Hz,1H),4.06–3.96(m,2H),3.94–3.83(m,1H),3.79–3.73(m,2H),3.71–3.56(m,4H),3.55–3.45(m,3H),3.33(s,3H),3.06(s,1H),2.90(s,2H),2.40(s,1H),1.88(t,J＝8.9Hz,1H),0.78(t,J＝8.5Hz,1H),0.57–0.46(m,3H)。MS:M/e 602(M+1)+。
化合物A22：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000562
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-4-甲基戊酸(35.5，0.1mmol)、1-(2,4-二氟苯基)哌嗪(19.8mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至3:1)纯化以得到目标化合物(40mg，74.6％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.15(s,2H),7.95(m,1H),7.23(d,J＝3.2Hz,1H),7.21–7.12(m,1H),7.02–6.91(m,2H),6.74(m,1H),5.64(dd,J＝9.6,4.4Hz,1H),3.74(m,1H),3.62(m,2H),3.49(m,1H),2.94(m,2H),2.75(m,1H),2.39(m,1H),2.31–2.19(m,1H),1.91–1.80(m,1H),1.27(mz,1H),0.95(d,J＝6.4Hz,3H),0.83(d,J＝6.4Hz,3H)ppm。MS:M/e536(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物A22分离成两种对映体立体异构体(化合物A22a，较早的峰；和化合物A22b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000571
Figure BDA0002909572560000572
化合物A23：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000573
Figure BDA0002909572560000581
步骤A：1-溴-2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯
Figure BDA0002909572560000582
将4-溴-3-氟苯酚(5g，26.1mmol)、1-溴-2-甲氧基乙烷(4g，28.7mmol)和K2CO3(7.2g，52.2mmol)在CH3CN(50mL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(200mL)中并且用EtOAc(100mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，在高真空下浓缩以得到呈黄色油状物的目标化合物(5.7g，87.3％)。MS:M/e 249/251(M+1)+。
步骤B：4-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560000583
将步骤A的产物(3.5g，14mm)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.6g，14mmol)、Pd(dba)3(1.28g，1.4mmol)、X-phos(1.3g，2.8mmol)和Cs2CO3(9.2g，28mmol)在甲苯(100mL)中的混合物在120℃下搅拌5小时。除去大部分甲苯以得到残余物，将所述残余物用EtOAc/H2O(100mL/50mL)处理。将有机层分离，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至10:1)纯化以得到呈黄色油状物的目标化合物(2.5g，50.4％)。MS:M/e355(M+1)+。
步骤C：1-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐
Figure BDA0002909572560000584
向步骤B的产物(1.25g，3.53mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌混合物中添加EtOAc/HCl(g)(4.0M，5mL)。添加后，将反应混合物搅拌一周末。过滤反应混合物，并收集滤饼，干燥，得到呈褐色固体的目标化合物(500mg，48.8％)。MS:M/e 255(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000591
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-4-甲基戊酸(35.5mg，0.1mmol)、步骤C的产物(29mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)和DIPEA(38.7mg，0.3mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(40mg，76.6％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.16(s,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝2.8Hz,1H),6.89-6.64(m,4H),5.64(m,1H),4.01(m,2H),3.71(m,1H),3.60(m,4H),3.47(m,1H),3.27(s,3H),2.88(m,2H),2.69(m,1H),2.37-2.20(m,2H),1.86-1.84(m,1H),1.32–1.24(m,1H),0.94(d,J＝6.4Hz,3H),0.83(d,J＝6.4Hz,3H)ppm。MS:M/e 592(M+1)+。
化合物A24：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000592
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸(30mg，0.09mmol)、1-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(26mg，0.09mmol)、HATU(41mg，0.1mmol)和DIEA(23mg，0.18mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到所需产物(23mg，43％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.14(br.s,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),6.74-6.64(m,4H),5.60-5.56(m,1H),4.04-4.00(m,2H),3.60-3.53(m,6H),3.27(s,3H),2.89-2.67(m,3H),2.18-1.99(m,3H),1.23-1.11(m,2H),0.94-0.86(m,3H)ppm。MS:M/e 578(M+1)+
通过手性制备型HPLC将化合物A24分离成两种对映体立体异构体(化合物A24a，较早的峰；和化合物A24b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000601
Figure BDA0002909572560000602
化合物A25：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000603
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸(40mg，0.12mmol)、1-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪三氟乙酸盐(51mg，0.13mmol)、HATU(55mg，0.14mmol)和DIEA(36mg，0.28mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到所需产物(45mg，64％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.16(br.s,2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝4.0Hz,1H),6.75-6.65(m,3H),5.59-5.56(m,1H),4.03-4.00(m,2H),3.63-3.50(m,6H),3.26(s,3H),2.85-2.69(m,3H),2.39-1.99(m,3H),1.12-1.05(m,2H),0.93-0.86(m,3H)ppm。MS:M/e596(M+1)+
化合物A26：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-3-甲氧基-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000611
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-3-甲氧基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000612
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(1.0g，4.2mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(1.3g，9.4mmol)和2-溴-1,3-二甲氧基丙-1-酮(1.0g，5.5mmol)。添加后，将反应混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并且用EtOAc(100mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至1:2)纯化得到呈白色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-3-甲氧基丙酸甲酯(300mg，41.5％)和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-3-甲氧基丙酸甲酯(80mg，11.1％)。MS:M/e 358(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-3-甲氧基丙酸
Figure BDA0002909572560000621
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-3-甲氧基丙酸甲酯(400mg，1.2mmol)在MeOH/H2O(9mL/2mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(4.0M，2mL)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌3小时。去除大部分溶剂以得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并且过滤，收集滤饼，干燥以得到呈白色固体的目标化合物(140mg，36.3％)。MS:M/e 344(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-3-甲氧基-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000622
将步骤B的产物(50mg，0.15mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(40mg，0.18mmol)、HATU(84mg，0.22mmol)和TEA(30mg，0.30mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(11mg，13.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(br.s,3H),7.95(d,J＝0.9Hz,1H),7.24(d,J＝2.9Hz,1H),6.82–6.72(m,6H),5.79(dd,J＝8.4,5.3Hz,1H),4.06–3.94(m,4H),3.76–3.69(m,1H),3.61–3.56(m,2H),3.53–3.47(m,2H),3.27(s,3H),3.21(s,3H),3.08–3.01(m,1H),2.98–2.92(m,1H),2.80–2.73(m,1H),2.30–2.23(m,1H)ppm。MS:M/e562(M+1)+。
化合物A27：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-3-甲氧基-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000623
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-3-甲氧基丙酸(50mg，0.15mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(45mg，0.19mmol)、HATU(84mg，0.22mmol)和TEA(30mg，0.30mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(19mg，20.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(br.s,3H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝2.9Hz,1H),6.82–6.72(m,6H),5.79(dd,J＝8.4,5.3Hz,1H),4.07–3.94(m,4H),3.69–3.64(m,3H),3.57–3.53(m,4H),3.43(dd,J＝5.8,3.7Hz,3H),3.22(s,3H),3.20(s,3H),3.07–3.00(m,1H),2.97–2.91(m,1H),2.81–2.72(m,1H),2.30–2.23(m,1H)ppm。MS:M/e 606(M+1)+。
化合物A28：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(4-氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000631
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(4-氟苯基)乙酸乙酯
Figure BDA0002909572560000632
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(964mg，4mmol)在DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(1.1g，8mmol)，然后逐滴添加2-溴-2-(4-氟苯基)乙酸乙酯(1g，4mmol)在DMF(2mL)中的溶液。添加后，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并且用EtOAc(50mL x4)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到残余物，将残余物通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至100％EtOAc)纯化，得到呈白色固体的目标化合物(300mg，17.8％)。MS:M/e 422(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(4-氟苯基)乙酸
Figure BDA0002909572560000641
向步骤A的产物(300mg，0.71mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(4mL，2.0M)。添加后，将反应混合物搅拌3小时。除去大部分MeOH，得到水层，将水层用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并过滤。收集滤饼，将其干燥以得到呈白色固体的目标化合物(172mg，61.6％)。MS:M/e 394(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(4-氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000642
将步骤B的产物(30mg，0.076mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(18mg，0.076mmol)、HATU(34.4mg，0.09mmol)和DIPEA(19.6mg，0.152mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌2小时。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并且用EtOAc(20mL x2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物，将其通过制备型TLC(EtOAc)进一步纯化，得到目标化合物(5mg，10.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),8.17(s,2H),7.95(s,1H),7.51–7.40(m,2H),7.27–7.15(m,3H),6.90(s,1H),6.80(m,4H),6.74(s,1H),3.97(m,2H),3.73–3.55(m,4H),3.38–3.32(m,2H),3.28(s,3H),2.96(m,2H),2.64(m,2H)ppm。MS:M/e 612(M+1)+。
化合物A29：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(4-甲氧基苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000651
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000652
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(482mg，2mmol)在DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(552mg，4mmol)，然后逐滴添加2-溴-2-(4-甲氧基苯基)乙酸甲酯(518mg，2mmol)在DMF(2mL)中的溶液。添加后，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并且用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到残余物，将残余物通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至100％EtOAc)纯化，得到呈白色固体的目标化合物(100mg，11.9％)。MS:M/e 420(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酸
Figure BDA0002909572560000653
向步骤A的产物(100mg，0.238mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(3mL，2.0M)。添加后，将反应混合物搅拌3小时。除去大部分MeOH，得到水层，将水层用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并过滤。收集滤饼，将其干燥以得到呈白色固体的目标化合物(68mg，70.5％)。MS:M/e 406(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(4-甲氧基苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000661
将步骤B的产物(30mg，0.074mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(17.48mg，0.074mmol)、HATU(34.4mg，0.09mmol)和DIPEA(19.6mg，0.152mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌2小时。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并且用EtOAc(20mL x)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(20mg，43.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.16(s,1H),8.14(s,2H),7.95(s,1H),7.38-7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.94-6.92(d,J＝8.8Hz,2H),6.86–6.76(m,4H),6.74(m,1H),4.01–3.95(m,2H),3.75(s,3H),3.68(m,1H),3.63–3.54(m,3H),3.28(s,3H),3.0-2.90(m,2H),2.77–2.54(m,2H)ppm。MS:M/e 624(M+1)+。
化合物A30：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000662
步骤A：4-(4-(2-溴乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560000671
在室温下向4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(7g，25.2mmol)和K2CO3(7g，52.9mmol)在丙酮(150mL)中的搅拌溶液中添加1,2-二溴乙烷(10g，52.9mmol)。将混合物在60℃下搅拌4天。将混合物用水(200mL)淬灭并且用EA(200mL x3)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(石油醚/EA＝3:1)纯化以得到呈黄色油状物的标题化合物(4g，产率：41.4％)。MS:M/e 385(M+1)+。
步骤B：4-(4-(2-(甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560000672
在室温下向步骤A的产物(1g，粗品)在CH3CN中的搅拌溶液中添加甲胺(2.5mL，40％水溶液)。将混合物在密封管中加热至95℃，保持12小时。将反应冷却至室温并且在减压下浓缩。将残余物溶解在水(10mL)中并且用DCM(20mL x)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将呈黄色油状物的残余物(1g，粗品)直接用于下一步骤。MS:M/e336(M+1)+。
步骤C：N-甲基-2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-胺盐酸盐
Figure BDA0002909572560000673
将步骤B的产物(1.2g，粗品)在HCl/1,4-二噁烷(4M，20mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。从体系中沉淀出固体。过滤混合物，并用EA(20mL)洗涤固体。将固体(750mg，两个步骤的产率：87.2％)在空气中干燥并且直接用于下一步骤。MS:M/e 236(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560000674
将步骤C的产物(294mg，0.96mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)丙酸(200mg，0.64mmol)、HATU(364mg，0.96mmol)和DIEA(1mL，过量)在DMF(20mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(20mL)中，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤，并且通过制备型HPLC纯化以得到标题化合物(25mg，产率：7.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.22(br.s,2H),8.81(s,1H),7.96(s,1H),7.80(br.s,2H),7.64–7.49(m,2H),7.24–7.15(m,1H),7.13–6.99(m,2H),6.74(s,1H),6.07–5.82(m,1H),4.37–4.20(m,2H),4.17–3.75(m,4H),3.56–3.23(m,6H),2.60(t,J＝4Hz,3H),1.73(d,J＝8Hz,3H)ppm。MS:M/e 531(M+1)+。
化合物A31：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2-甲氧基苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000681
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000682
将2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(8g，33.1mmol)、2-溴-2-(2-甲氧基苯基)乙酸甲酯(9.4g，36.4mmol)和K2CO3(9.1g，66.2mmol)在DMF(100mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。向溶液中添加水(60mL)，用乙酸乙酯(60mL)萃取并且用盐水(60mL)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝3:1至1:1)纯化以得到2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)乙酸甲酯(1.4g，10％)。MS:M/e 420(M+1)+
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)乙酸
Figure BDA0002909572560000691
将NaOH溶液(240mg，在5mL的水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)乙酸甲酯(650mg，1.5mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将溶液浓缩，添加水(20mL)并且用1N HCl溶液酸化至pH＝5。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的所需产物(450mg，72％)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.22(br.s,1H),8.25-8.15(m,3H),7.95(s,1H),7.36(t,J＝8.0Hz,1H),7.25-7.22(m,2H),7.07(d,J＝8.0Hz,1H),6.96(t,J＝8.0Hz,1H),6.76(s,1H),6.75-6.73(m,1H),3.80(s,3H)ppm。MS:M/e 406(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2-甲氧基苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000692
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)乙酸(450mg，1.1mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(314mg，1.3mmol)、HATU(494mg，1.30mmol)和DIEA(284mg，2.2mmol)在DMF(50mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取并且用盐水(30mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到所需产物(480mg，70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(br.s,3H),7.95(s,1H),7.38-7.34(m,1H),7.25(d,J＝4.0Hz,1H),7.09-7.06(m,2H),7.00(s,1H),6.95(t,J＝8.0Hz,1H),6.79(s,4H),6.75-6.73(m,1H),3.98(t,J＝4.0Hz,2H),3.81(s,3H),3.80-3.74(m,1H),3.61-3.53(m,3H),3.37-3.35(m,1H),3.30-3.27(m,4H),3.05-2.95(m,1H),2.90-2.80(m,1H),2.73-2.65(m,1H),2.47-2.50(m,1H)ppm。MS:M/e 624(M+1)+
通过手性制备型HPLC将化合物A31分离成两种对映体立体异构体(化合物A31a，较早的峰；和化合物A31b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000701
Figure BDA0002909572560000702
化合物A32：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)己-1-酮
Figure BDA0002909572560000703
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)己酸(50mg，0.14mmol)、N,N-二甲基-2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-胺盐酸盐(40mg，0.14mmol)、HATU(64mg，0.17mmol)和DIEA(36mg，0.28mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型HPLC纯化以得到呈TFA盐的所需产物(15mg，18％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.65(br.s,1H),8.20(s,1H),8.18(br.s,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),6.85-6.74(m,5H),5.56(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),4.20(t,J＝4.0Hz,2H),3.74(br.s,1H),3.53-3.46(m,5H),3.05-2.96(m,2H),2.78-2.65(m,7H),2.33(br.s,1H),2.16-2.07(m,2H),1.28-1.23(m,3H),1.03-1.01(m,1H),0.81(t,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 587(M+1)+
化合物A33：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(萘-2-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000711
步骤A：2-(萘-2-基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000712
在0℃向2-(萘-2-基)乙酸(5g，26.7mmol)在MeOH(100mL)中的搅拌溶液中逐滴添加SOCl2(4g，29.6mmol)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。除去大部分MeOH，得到残余物，然后用EtOAc(50mL)处理，并用K2CO3水溶液、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到呈黄色油状物的目标化合物(4.5g，84.3％)。
步骤B：2-溴-2-(萘-2-基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000713
向步骤A的产物(1g，5mmol)在CCl4(10mL)中的搅拌溶液中添加NBS(0.95g，5.5mmol)并添加HBr水溶液(48％，2滴)。然后将混合物回流2小时。将反应混合物冷却至室温并过滤。将滤液浓缩，通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1)纯化，得到呈无色油状物的目标化合物(0.72g，51.6％)。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(萘-2-基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000721
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(0.62g，2.58mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(0.71g，5.16mmol)，然后添加步骤B的产物(0.72g，2.58mmol)。添加后，将反应混合物搅拌一周末。将反应混合物倒入H2O(25mL)中并且用EtOAc(15mL x4)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(80mg，7％)。MS:M/e 440(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(萘-2-基)乙酸
Figure BDA0002909572560000722
向步骤C的产物(80mg，0.18mmol)在MeOH(15mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2.0M，3mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。除去大部分MeOH，得到水层，然后酸化至pH＝3至4并过滤。收集滤饼，将其干燥以得到呈白色固体的目标化合物(70mg，91.5％)。MS:M/e426(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(萘-2-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000723
将步骤D的产物(70mg，0.164mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(38.8mg，0.164mmol)、HATU(75mg，0.196mmol)和DIPEA(42.3mg，0.328mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至1:2)纯化以得到目标化合物(60mg，56.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),8.17(s,2H),7.92-7.87(m,5H),7.61–7.49(m,3H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),7.04(s,1H),6.78(s,4H),6.74(s,1H),3.99–3.93(m,2H),3.71(m,2H),3.60(m,2H),3.40(m,2H),3.28(s,3H),2.99(m,2H),2.64(m,2H)ppm。MS:M/e 644(M+1)+。
化合物A34：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000731
步骤A：2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000732
在0℃向2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酸(5g，24.5mmol)在MeOH(50mL)中的搅拌溶液中逐滴添加SOCl2(3.45g，29.45mmol)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。除去大部分MeOH，得到残余物，然后用EtOAc(20mL x)处理，并用K2CO3水溶液、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到呈无色油状物的目标化合物(5.3g，99％)。
步骤B：2-溴-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000741
向步骤A的产物(1g，4.58mmol)在CCl4(15mL)中的搅拌溶液中添加NBS(0.9g，5.04mmol)并添加HBr水溶液(48％，2滴)。然后将混合物回流3小时。将反应混合物冷却至室温并过滤。将滤液浓缩以得到呈无色油状物的目标化合物(1.3g，95.6％)。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000742
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(0.482g，2mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(0.552g，4mmol)，然后添加步骤B的产物(0.594g，2mmol)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至1:2)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(140mg，15.3％)。MS:M/e458(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酸
Figure BDA0002909572560000743
向步骤C的产物(140mg，0.3mmol)在MeOH(15mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2.0M，4mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。除去大部分MeOH，得到水层，然后酸化至pH＝3至4并过滤。收集滤饼，将其干燥以得到呈白色固体的目标化合物(109mg，80％)。MS:M/e444(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000751
将步骤D的产物(44mg，0.1mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(23.6mg，0.1mmol)、HATU(45.8mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至1:1)纯化以得到目标化合物(48mg，72.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.19(s,2H),7.95(s,1H),7.74(d,J＝8.0Hz,2H),7.56(d,J＝8.0Hz,2H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),7.01(s,1H),6.82–6.74–6.83(m,3H),6.74(s,1H),4.00–3.95(m,2H),3.75-3.58(m,4H),3.40(m,1H),3.28(s,3H),3.08–2.90(m,2H),2.76(m,1H),2.56(m,1H)ppm。M/e 662(M+1)+。
化合物A35：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)己-1-酮
Figure BDA0002909572560000752
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)己酸(50mg，0.14mmol)、N-甲基-2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-胺盐酸盐(38mg，0.14mmol)、HATU(64mg，0.17mmol)和DIEA(36mg，0.28mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将溶液浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到呈TFA盐的产物(5mg，6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(br.s,2H),8.20(s,1H),8.18(br.s,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),6.85-6.74(m,5H),5.56(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),4.10(t,J＝4.0Hz,2H),3.74-3.53(m,4H),3.28-2.79(m,5H),2.62(t,J＝4.0Hz,3H),2.33-2.07(m,3H),1.28-1.23(m,3H),1.02(br.s,1H),0.81(t,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 573(M+1)+
化合物A36：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000761
步骤A：2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000762
在室温下向2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸(5.0g，24.5mmol)在MeOH(50mL)中的搅拌溶液中逐滴添加SOCl2(2mL)并将所得混合物搅拌3小时。浓缩混合物，用EA(50mL)稀释，用NaHCO3水溶液(50mL x)、盐水(50mL x)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，得到呈淡黄色油状物的标题产物(5.05g，95％)。MS:M/e 219(M+1)+。
步骤B：2-溴-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000763
向2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(2.0g，9.2mmol)在CCl4(20mL)中的搅拌溶液中添加NBS(1.9g，10.7mmol)并且然后添加HBr/AcOH(3滴)。将所得混合物回流4小时。过滤混合物，并浓缩滤液，用EA(30mL)稀释，用盐水(20mL x2)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，得到呈浅黄色油状物的标题产物(2.36g，粗品)。MS:M/e 297,299(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000771
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(250mg，1.0mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(550Mg，3.6mmol)，并且然后添加2-溴-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(900mg，粗品，约1mmol)。将所得混合物在50℃下搅拌16小时。将混合物用CH2Cl2(30mL)稀释，用盐水(15mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱纯化所得残余物，得到呈浅黄色油状物的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(120mg，粗品)，以及呈浅黄色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(60mg，粗品)。MS:M/e 458(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸
Figure BDA0002909572560000772
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(120mg，粗品)在MeOH(4mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2M，1mL)，并且将所得混合物搅拌4小时。将混合物用HCl(1M)中和并浓缩至干燥。添加5mL混合溶剂(CH2Cl2/MeOH＝3:1)并搅拌10分钟。将悬浮液过滤，并将滤液浓缩，得到呈白色固体的标题产物(90mg，粗品)。MS:M/e 444(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000781
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸(90mg，0.2mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(58mg，0.24mmol)、DIEA(150mg，1.16mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(95mg，0.25mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加20mL的EA并且将混合物用盐水(5mLx3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC纯化以得到标题产物(18.0mg，产率：14％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.27–8.08(m,2H),7.95(s,1H),7.81(s,1H),7.75–7.66(m,1H),7.65–7.56(m,2H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),7.04(s,1H),6.83–6.75(m,4H),6.75–6.71(m,1H),4.00–3.94(m,2H),3.72–3.62(m,2H),3.62–3.56(m,2H),3.49–3.39(m,1H),3.28(s,3H),3.03–2.88(m,3H),2.74–2.68(m,1H),2.59–2.52(m,1H)。MS:M/e 662(M+1)+。
化合物A37：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000782
将N,N-二甲基-2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-胺盐酸盐(42mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(56mg，0.15mmol)和DIEA(0.5mL，过量)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤，并且通过制备型HPLC纯化以得到标题化合物(10mg，产率：12.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.16(br.s,2H),7.95(s,1H),7.44–7.31(m,5H),7.24(d,J＝4Hz,1H),7.16–7.03(m,2H),7.01–6.92(m,2H),6.88(s,1H),6.78–6.71(m,1H),4.30–4.21(m,2H),3.88–3.64(m,2H),3.60–3.42(m,4H),3.22–3.09(m,2H),2.88–2.80(m,6H),2.80–2.73(m,1H)ppm。MS:M/e 607(M+1)+。
化合物A38：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000791
步骤A：2-(2-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000792
将含有5滴浓H2SO4的2-(2-(三氟甲基)苯基)乙酸(5g，24.5mmol)在甲醇(30mL)中的溶液加热回流2小时。将反应混合物蒸发，用乙酸乙酯(20mL)稀释，用NaHCO3溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤。将有机层干燥并浓缩，得到呈油状物的产物(4.7g，88％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.73-7.64(m,2H),7.54-7.49(m,2H),3.90(s,2H),3.62(s,3H)ppm。MS:M/e 219(M+1)+
步骤B：2-溴-2-(2-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000793
将2-(2-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(2g，9mmol)、N-溴代琥珀酰亚胺(1.7g，10mmol)和AIBN(150mg，0.9mmol)在CHCl3(15mL)中的混合物在80℃加热过夜。将溶液浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝10:1)纯化以得到产物(1.5g，56％)。MS:M/e 297(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000801
将2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(0.5g，2mmol)、2-溴-2-(2-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(733mg，2.5mmol)和K2CO3(552mg，4mmol)在DMF(15mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。向溶液中添加水(15mL)，用乙酸乙酯(15mL)萃取并且用盐水(20mL)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝至2:1)纯化以得到2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(120mg，13％)。MS:M/e 458(M+1)+
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)乙酸
Figure BDA0002909572560000802
将NaOH溶液(52mg，在1mL的水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)乙酸甲酯(120mg，0.26mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将溶液浓缩，添加水(5mL)并且用1N HCl溶液酸化至pH＝5。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的所需产物(100mg，86％)。MS:M/e 444(M+1)+
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000811
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)乙酸(50mg，0.11mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(32mg，0.14mmol)、HATU(53mg，0.14mmol)和DIEA(28mg，0.22mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并通过柱色谱(PE:EA＝1:1)和制备型TLC(EA)纯化，得到产物(10mg，14％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.21(br.s,2H),7.95(s,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(t,J＝8.0Hz,1H),7.61(t,J＝8.0Hz,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),7.24(d,J＝4.0Hz,1H),7.02(s,1H),6.82-6.77(m,4H),6.75-6.73(m,1H),3.98(t,J＝4.0Hz,2H),3.78-3.77(m,1H),3.65-3.51(m,3H),3.32-3.23(m,5H),3.07-3.05(m,1H),2.92-2.90(m,1H),2.69-2.59(m,2H)ppm。MS:M/e 662(M+1)+
化合物A39：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000812
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸(212mg，0.62mmol)、N,N-二甲基-2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-胺(178mg，0.62mmol)、HATU(284mg，0.74mmol)和DIPEA(160mg，1.24mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x4)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(CH2Cl2/MeOH＝10:1，包含5％NH3.H2O)纯化以得到目标化合物(120mg，33.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.16(s,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝3.2Hz,1H),6.86–6.75(m,4H),6.72(m,1H),5.58(m,1H),3.94(t,J＝5.6Hz,2H),3.69(m,1H),3.51(m,3H),3.29(s,1H),3.05-2.94(m,2H),2.79(m,1H),2.58(m,2H),2.41(m,1H),2.20(s,6H),2.18–1.97(m,2H),1.11(m,1H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)ppm。MS:M/e 573(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物A39分离成两种对映体立体异构体：化合物A39a和化合物A39b(化合物A39a，较早的峰，和化合物A39b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000821
Figure BDA0002909572560000822
化合物A40：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3,4-二氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000823
Figure BDA0002909572560000831
步骤A：2-(3,4-二氟苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000832
向2-(3,4-二氟苯基)乙酸(5g，29mmol)在MeOH(50mL)中的搅拌溶液中添加SOCl2(3mL，116mmol)，将反应混合物在65℃搅拌5小时。除去大部分溶剂，并将此残余物用H2O(50mL)溶解，然后用NaHCO3水溶液调节至pH＝7至8，并用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到呈黄色油状物的2-(3,4-二氟苯基)乙酸甲酯(4.5g，粗品)。MS:M/e 1877(M+1)+。
步骤B：2-溴-2-(3,4-二氟苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000833
向2-(3,4-二氟苯基)乙酸甲酯(4.5g，粗品)在CCl4(50mL)中的搅拌混合物中添加NBS(6.0g，33.7mmol)和HBr/HOAc(1.0mL)。添加后，将反应混合物在85℃下搅拌3小时。滤出反应固体，浓缩滤液，并将此残余物用H2O(50mL)溶解，用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到呈黄色油状物的2-溴-2-(3,4-二氟苯基)乙酸甲酯(4.0g，粗品)。MS:M/e 266(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3,4-二氟苯基)乙酸甲酯和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e] [1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-(3,4-二氟苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000841
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(500mg，2.07mmol)在DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(750mg，5.4mmol)和2-溴-2-(3,4-二氟苯基)乙酸甲酯(610mg，2.3mmol)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1至1:1)纯化得到呈黄色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3,4-二氟苯基)乙酸甲酯(200mg，45.3％)和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-(3,4-二氟苯基)乙酸甲酯(240mg，54.4％)。MS:M/e 426(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3,4-二氟苯基)乙酸
Figure BDA0002909572560000842
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3,4-二氟苯基)乙酸甲酯(200mg，0.47mmol)在MeOH/H2O(4.0mL/1.5mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，1mL)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌5小时。去除大部分溶剂以得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并且过滤，收集滤饼，干燥以得到呈白色固体的目标化合物(150mg，77.7％)。MS:M/e 412(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3,4-二氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000843
将步骤D的产物(50mg，0.12mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(40mg，0.17mmol)、HATU(50mg，0.13mmol)和DIEA(80mg，0.23mmol)在DMF(10mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(40mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(23mg，30.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.18(br,2H),7.95(s,1H),7.52–7.38(m,2H),7.24(d,J＝3.3Hz,1H),7.21(s,1H),6.93(s,1H),6.84–6.76(m,4H),6.74(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),4.00–3.95(m,2H),3.68–3.57(m,4H),3.48–3.39(m,1H),3.32(s,3H),3.30(s,1H),3.03–2.91(m,2H),2.81–2.70(m,1H),2.62–2.54(m,1H)ppm。MS:M/e 630(M+1)+。
化合物A41：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000851
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000852
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(482mg，2mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加K2CO3(552mg，4mol)，然后添加2-溴-2-(3-甲氧基苯基)乙酸甲酯(518mg，2mmol)，然后将混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(30mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1至1:1)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(186mg，22％)。MS:M/e420(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酸
Figure BDA0002909572560000861
向步骤A的产物(186mg，0.44mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2.0M，4mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。除去大部分MeOH，得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并过滤。收集滤饼，将其干燥以得到呈白色固体的目标化合物(133mg，74.6％)。MS:M/e 406(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(3-甲氧基苯基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000862
将步骤B的产物(133mg，0.328mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(77.5mg，0.328mmol)、HATU(150mg，0.393mmol)和DIEPA(84mg，0.626mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(120mg，58.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.16(s,2H),7.95(m,1H),7.30-7.26(t,J＝8.0Hz,1H),7.24(dd,J＝3.2,0.8Hz,1H),6.97-6.89(m,3H),6.83(s,1H),6.78(m,4H),6.74(m,1H),4.00–3.94(m,2H),3.72(s,3H),3.69-3.63(m,2H),3.62–3.57(m,2H),3.49-3.41(m,2H),3.28(s,3H),3.03-2.87(m,2H),2.68-2.60(m,2H)ppm。MS:M/e 624(M+1)+。
化合物A42：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3-氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000871
步骤A：2-(3-氟苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000872
在0℃向2-(3-氟苯基)乙酸(1.54g，10mmol)在MeOH(20mL)中的搅拌混合物中逐滴添加SOCl2(2.38g，20mmol)。添加后，将反应搅拌过夜。除去大部分溶剂，得到残余物，将其溶于EtOAc(30mL)，并用K2CO3水溶液、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩，得到呈无色油状物的目标化合物(1.51g，90％)。
步骤B：2-溴-2-(3-氟苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000873
向步骤A的产物(1g，5.95mmol)在CCl4(10mL)中的搅拌溶液中添加NBS(1.16g，6.54mmol)，然后添加HBr水溶液(40％，2滴)。添加后，将反应混合物回流3天。将反应混合物冷却至室温并过滤，并收集滤液，得到呈无色油状物的目标化合物(1.4g，99％)。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3-氟苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000881
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(482mg，2mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(552mg，4mmol)，然后添加步骤B的产物(494mg，2mmol)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1至1:1)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(140mg，17.2％)。MS:M/e408(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3-氟苯基)乙酸
Figure BDA0002909572560000882
向步骤C的产物(140mg，0.18mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2.0M，3mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。除去大部分MeOH，得到水层，然后酸化至pH＝3至4并过滤。收集滤饼，将其干燥以得到呈白色固体的目标化合物(100mg，74％)。MS:M/e394(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3-氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000883
将步骤D的产物(46mg，0.117mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(27.6mg，0.17mmol)、HATU(53.6mg，0.14mmol)和DIPEA(30mg，0.234mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(32mg，44.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.20(s,2H),7.97–7.94(m,1H),7.44-7.38(m,1H),7.27–7.14(m,4H),6.92(s,1H),6.79(s,4H),6.74(m,1H),4.00–3.95(m,2H),3.65(m,2H),3.62–3.57(m,2H),3.42(m,1H),3.31(m,1H),3.28(s,3H),2.96(m,2H),2.69(m,2H),2.55(m,1H)ppm。MS:M/e 612(M+1)+。
化合物A43：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000891
步骤A：2-(2-氟苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000892
在室温下，将亚硫酰氯(5mL)逐滴添加到2-(2-氟苯基)乙酸(5g，32.5mmol)在甲醇(20mL)中的溶液中。添加后，将混合物搅拌过夜。在减压下蒸发溶剂，并将残余物直接用于下一步骤(5.4g，100％)MS:M/e 169(M+1)+。
步骤B：2-溴-2-(2-氟苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000893
将2-(2-氟苯基)乙酸甲酯(5.4g，32.5mmol)、N-溴代琥珀酰亚胺(6.4g，36mmol)和AIBN(267mg,1.6mmol)在CCl4(50mL)中的混合物在80℃下加热3小时。将溶液浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝50:1)纯化以得到产物(7.1g，92％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60-6.43(m,2H),7.27-7.24(m,2H),6.18(s,1H),3.74(s,3H)ppm。MS:M/e 247(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(2-氟苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560000901
将2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(3g，12.4mmol)、2-溴-2-(2-氟苯基)乙酸甲酯(3.6g，14.9mmol)和K2CO3(3.4g，24.8mmol)在DMF(30mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。向溶液中添加水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取并且用盐水(30mL)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝2:1)纯化以得到2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)乙酸甲酯(1.05g，21％)。MS:M/e 408(M+1)+
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(2-氟苯基)乙酸
Figure BDA0002909572560000902
将NaOH溶液(400mg，在5mL的水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)乙酸甲酯(1.05g，2.6mmol)在甲醇(15mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将溶液浓缩，添加水(10mL)并且用1N HCl溶液酸化至pH＝5。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的所需产物(930mg，93％)。MS:M/e 394(M+1)+
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(2-氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000903
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)乙酸(930mg，2.4mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(835mg，3.5mmol)、HATU(1.1g，2.8mmol)和DIEA(609mg，4.7mmol)在DMF(50mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(30mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取并且用盐水(50mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到产物(890mg，62％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.25(br.s,2H),7.96(s,1H),7.45-7.41(m,1H),7.23-7.12(m,4H),6.97(s,1H),6.82-6.77(m,4H),6.75-6.73(m,1H),3.98(t,J＝4.0Hz,2H),3.73-3.59(m,4H),3.92-3.89(m,2H),3.28(s,3H),2.98(br.s,2H),2.66-2.62(m,2H)ppm。MS:M/e 612(M+1)+
通过手性制备型HPLC将化合物A43分离成两种对映体立体异构体(化合物A43a，较早的峰；和化合物A43b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000911
Figure BDA0002909572560000912
化合物A44：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000913
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(37.5mg，0.1mmol)、1-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(29mg，0.1mmol)和HATU(46mg，0.12mmol)在DMF(2mL)中的混合物搅拌过夜。将混合物倾倒到H2O(15mL)中并用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(34mg，55.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.15(s,2H),7.95(s,1H),7.39-7.34(m,5H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.90–6.63(m,5H),4.05–3.97(m,2H),3.68-3.59(m,4H),3.45-3.35(m,2H),3.28(s,3H),2.89-2.85(m,2H)ppm。MS:M/e 612(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物A44分离成两种对映体立体异构体：化合物A44a、化合物A44b(化合物A44a，较早的峰，和化合物A44b，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000921
Figure BDA0002909572560000922
化合物A45：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560000923
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸(60mg，0.18mmol)、1-(4-氟苯基)哌嗪盐酸盐(42mg，0.19mmol)、HATU(82mg，0.22mmol)和DIEA(47mg，0.36mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到所需产物(58mg，66％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.18(br.s,2H),7.95(s,1H),7.24(d,J＝4.0Hz,1H),7.01-6.73(m,5H),5.60(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),3.71-3.49(m,4H),3.09-2.86(m,3H),2.48(br.s,1H),2.16-1.99(m,2H),1.28-1.20(m,2H),1.10-0.86(m,3H)ppm。MS:M/e 504(M+1)+
化合物A46：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((S)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000931
步骤A：(S)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560000932
将1-溴-4-(2-甲氧基乙氧基)苯(1.84g，8mmol)、(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.76g，8.8mmol)、Pd2(dba)3(732mg，0.8mmol)、X-phos(761mg，1.6mmol)和Cs2CO3(5.2g，16mmol)在甲苯(50mL)中的混合物在90℃下在N2下搅拌16小时。将混合物用EA(20mL)稀释，并且过滤得到的悬浮液。浓缩滤液，并通过柱色谱(用EA:PE＝1:8洗脱)纯化残余物，得到呈浅黄色油状物的标题产物(1.8g，粗品)。MS:M/e 351(M+1)+。
步骤B：(S)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪盐酸盐
Figure BDA0002909572560000941
在室温下向(S)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.8g，5.12mmol)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中添加2M HCl在二噁烷(15mL)中的溶液，并将所得溶液在室温下搅拌16小时。将反应用水(50mL)淬灭，用CH2Cl2(40mL x3)萃取。收集水层并浓缩，得到呈浅黄色泡沫状物的标题产物(1.2g)，将其直接用于下一步骤。MS:M/e 251(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-((S)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000942
在室温下向(S)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪(388mg，1.2mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(412mg，1.1mmol)、DIPEA(425mg，3.3mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加HATU(420mg，1.1mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。用水(40mL)淬灭反应，形成悬浮液。过滤悬浮液，并通过柱色谱(DCM:MeOH＝50:1)纯化固体，得到标题产物(330mg，产率：49％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36–8.10(m,3H),7.95(s,1H),7.55–7.30(m,5H),7.24(d,J＝2.0Hz,1H),6.95–6.70(m,6H),4.04–3.95(m,2H),3.93–3.76(m,1H),3.76–3.64(m,1H),3.63–3.56(m,2H),3.53–3.45(m,1H),3.28(s,3H),3.24–3.12(m,1H),3.00-2.65(m,2H),2.41–2.29(m,1H),0.91–0.70(m,2H),0.55–0.42(m,1H)。MS:M/e 608(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物A46分离成两种对映体立体异构体：化合物A46a(快异构体)和化合物A46b(慢异构体)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000943
Figure BDA0002909572560000944
Figure BDA0002909572560000951
化合物A47：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((R)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000952
步骤A：(R)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560000953
将1-溴-4-(2-甲氧基乙氧基)苯(1.84g，8mmol)、(R)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.76g，8.8mmol)、Pd2(dba)3(732mg，0.8mmol)、X-phos(761mg，1.6mmol)和Cs2CO3(5.2g，16mmol)在甲苯(50mL)中的混合物在100℃下在N2下搅拌16小时。将混合物用EA(20mL)稀释，并且过滤得到的悬浮液。浓缩滤液，并通过柱色谱(用EA:PE＝1:8洗脱)纯化，得到呈浅黄色油状物的标题产物(2.3g，粗品)。MS:M/e 351(M+1)+。
步骤B：(R)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪盐酸盐
Figure BDA0002909572560000961
在室温下向(R)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.3g，粗品)在CH2Cl2(40mL)中的溶液中添加2M HCl在二噁烷(20mL)中的溶液，并将所得溶液在室温下搅拌16小时。将反应用水(60mL)淬灭，用CH2Cl2(30mL x3)萃取。收集水层并浓缩，得到呈HCl盐的标题产物(1.8g)，将其直接用于下一步骤。MS:M/e 251(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((R)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000962
在室温下向(R)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪(388mg，1.2mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(412mg，1.1mmol)、DIPEA(425mg，3.3mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加HATU(420mg，1.1mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。用水(40mL)淬灭反应，形成悬浮液。过滤悬浮液，并通过柱色谱(DCM:MeOH＝30:1)纯化固体，得到标题产物(490mg，产率：80.7％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30–8.05(m,3H),7.95(s,1H),7.55–7.30(m,5H),7.28–7.20(m,1H),6.89(s,1H),6.85–6.69(m,5H),4.04–3.94(m,2H),3.93–3.80(m,1H),3.75–3.64(m,1H),3.63–3.56(m,2H),3.53–3.45(m,1H),3.28(s,3H),3.24–3.12(m,1H),3.00-2.65(m,2H),2.42–2.29(m,1H),0.91–0.70(m,2H),0.55–0.41(m,1H)。MS:M/e 608(M+1)+。
通过制备型SFC将化合物A47分离成两种对映体立体异构体：化合物A47a(快异构体)和化合物A47b(慢异构体)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560000963
Figure BDA0002909572560000964
Figure BDA0002909572560000971
化合物A48：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000972
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(37.5，0.1mmol)、1-(2,4-二氟苯基)哌嗪(19.8mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝4:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(42mg，75.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.15(s,2H),7.95(d,J＝0.8Hz,1H),7.45–7.30(m,5H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),7.20-7.14(m,1H),6.98-6.95(m,2H),6.85(s,1H),6.74(m,1H),3.67(m,2H),3.44-3.40(m,2H),2.91(m,2H),2.58(m,2H)ppm。MS:M/e 556(M+1)+。
化合物A49：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000973
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.133mmol)、1-(4-氟苯基)哌嗪盐酸盐(28.9mg，0.133mmol)、HATU(61mg，0.159mmol)和DIPEA(34.3mg，0.266mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(20mg，28％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.16(s,1H),7.95(s,1H),7.40-7.30(m,5H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),7.02(t,J＝8.8Hz,2H),6.89-6.82(m,3H),6.74–6.71(m,1H),3.71-3.55(m,2H),3.49-3.32(m,2H),3.01(m,2H),2.72(m,2H)ppm。MS:M/e 538(M+1)+。
化合物A50：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((R)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560000981
步骤A：1-溴-4-(2-甲氧基乙氧基)苯
Figure BDA0002909572560000982
将1-溴-2-甲氧基乙烷(5.0g，36.0mmol)、4-溴苯酚(5.0g，29.1mmol)和K2CO3(8.0g，58.0mmol)在DMF(40mL)中的混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用100mL PE稀释，用NaOH(2M，30mL x2)、盐水(50mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，得到呈无色油状物的标题产物(7.5g，95％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝8.8Hz,2H),6.81(d,J＝8.8Hz,2H),4.13–4.02(m,2H),3.77–3.71(m,2H),3.45(s,3H)。
步骤B：(R)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0002909572560000991
将1-溴-4-(2-甲氧基乙氧基)苯(650mg，2.83mmol)、(R)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(650mg，3.25mmol)、Pd2(dba)3(250mg，0.27mmol)、X-phos(250mg，0.52mmol)和Cs2CO3(1.85g，5.7mmol)在甲苯(10mL)中的混合物在90℃下在N2下搅拌16小时。将混合物浓缩，用EA(30mL)稀释所得残余物，并且过滤得到的悬浮液。浓缩滤液，并通过柱色谱纯化，得到呈黄色油状物的标题产物(580mg，粗品)。MS:M/e 351(M+1)+。
步骤C：(R)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪盐酸盐。
Figure BDA0002909572560000992
在室温下向(R)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(570mg，1.62mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中添加CF3COOH(3mL)，并将所得红色溶液在室温下搅拌3小时。浓缩混合物。添加10mL HCl(2M，水溶液)，并用EA(10mL x2)萃取溶液。除去有机层，并将水层浓缩至干燥，得到呈浅棕色油状物的标题产物(280mg，62％)。MS:M/e 251(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-((R)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮。
Figure BDA0002909572560000993
在室温下向(R)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪盐酸盐(280mg，1.0mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(400mg，1.1mmol)、DIEA(500mg，3.9mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加HATU(460mg，1.2mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物倒入30mL的H2O中。沉淀出白色固体并且将其过滤。将滤饼用H2O(20mL)洗涤，在空气中干燥。将所得固体通过柱色谱纯化以得到标题产物(315mg，产率：52％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29–8.01(m,3H),7.95(s,1H),7.49–7.29(m,5H),7.24(s,1H),6.90–6.77(m,5H),6.74(s,1H),4.77–4.30(m,1H),4.00–3.94(m,2H),3.62–3.57(m,2H),3.55–3.41(m,1H),3.28(s,3H),3.24–2.61(m,3H),2.47–2.15(m,2H),1.22(d,J＝7.2Hz,2H),1.12(d,J＝6.4Hz,1H)。MS:M/e 608(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物A50分离成两种对映体立体异构体：化合物A50a(较早的峰)，和化合物A50b(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560001001
Figure BDA0002909572560001002
化合物A51：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,3-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560001003
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸(50mg，0.15mmol)、1-(2,3-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(50mg，0.16mmol)、HATU(61mg，0.16mmol)和DIEA(39mg，0.3mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到所需产物(31mg，36％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.15(br.s,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),6.87-6.66(m,3H),5.58(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),4.12-4.09(m,2H),3.62-3.50(m,6H),3.28(s,3H),2.89-2.67(m,3H),2.36(br.s,1H),2.03-1.99(m,2H),1.23-1.10(m,2H),0.87(t,J＝4.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 596(M+1)+
化合物A52：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((S)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001011
步骤A：(S)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0002909572560001012
将1-溴-4-(2-甲氧基乙氧基)苯(230mg，1.0mmol)、(S)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(230mg，1.1mmol)、Pd2(dba)3(88mg，0.09mmol)、X-phos(90mg，0.20mmol)和Cs2CO3(650mg，2mmol)在甲苯(4mL)中的混合物在90℃下在N2下搅拌16小时。将混合物用EA(20mL)稀释，并且过滤得到的悬浮液。浓缩滤液，并通过柱色谱纯化，得到呈浅黄色油状物的标题产物(120mg，粗品)。MS:M/e 351(M+1)+。
步骤B：(S)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪
Figure BDA0002909572560001013
在室温下向(S)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.34mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中添加CF3COOH(2mL)，并将所得溶液在室温下搅拌16小时。将混合物浓缩至干燥，得到呈浅黄色油状物的标题产物(95mg，粗品)，将其直接用于下一步骤。MS:M/e 251(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-((S)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮。
Figure BDA0002909572560001021
在室温下向(S)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪(95mg，0.26mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(105mg，0.28mmol)、DIEA(150mg，1.2mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(120mg，0.32mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用10mL EA稀释，用NaHCO3(水溶液5mL x2)、盐水(5mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，通过制备型TLC纯化，得到标题产物(25mg，产率：15％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31–8.03(m,3H),7.95(s,1H),7.51–7.28(m,5H),7.24(s,1H),6.91–6.69(m,6H),4.74–4.29(m,1H),4.26–3.83(m,3H),3.70–3.49(m,3H),3.28(s,3H),3.15–2.85(m,2H),2.71–2.59(m,1H),2.35–2.14(m,1H),1.27–1.09(m,3H)。MS:M/e 608(M+1)+。
化合物A53：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560001022
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸(50mg，0.15mmol)、1-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(46mg，0.16mmol)、HATU(61mg，0.16mmol)和DIEA(39mg，0.32mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到所需产物(43mg，51％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.18(br.s,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),6.97-6.95(m,1H),6.73-6.57(m,3H),5.58(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),4.09-4.02(m,2H),3.61-3.51(m,6H),3.28(s,3H),3.01-2.83(m,3H),2.44(br.s,1H),2.16-2.00(m,2H),1.23-1.09(m,2H),0.91-0.85(m,3H)ppm。MS:M/e 578(M+1)+
化合物A54：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560001031
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸(50mg，0.15mmol)、1-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(54mg，0.18mmol)、HATU(69mg，0.18mmol)和DIEA(39mg，0.3mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到所需产物(49mg，56％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.15(br.s,2H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),7.13-7.07(m,1H),6.94-6.88(m,1H),6.74-6.73(m,1H),5.58(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),4.09(t,J＝4.0Hz,2H),3.61-3.51(m,6H),3.28(s,3H),2.89-2.73(m,2H),2.41(br.s,1H),2.21-1.99(m,2H),1.23-1.09(m,2H),0.90-0.86(m,3H)ppm。MS:M/e 596(M+1)+
化合物A55：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001032
Figure BDA0002909572560001041
步骤A：4-溴-2-氟-1-(2-甲氧基乙氧基)苯
Figure BDA0002909572560001042
将4-溴-2-氟苯酚(2g，10.47mmol)、1-溴-2-甲氧基乙烷(1.6g，11.52mmol)和K2CO3(2.89g，20.94mmol)在DMF(10mL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，在高真空下浓缩以得到呈无色油状物的目标化合物(2.6g，99％)。
步骤B：4-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001043
将步骤A的产物(2.6g，10.47mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.6g，10.47mmol)、Pd2(dba)3(0.95g，1.04mmol)、X-phos(0.99g，2.08mmol)和Cs2CO3(6.8g，20.94mmol)在甲苯(150mL)中的混合物在120℃下搅拌2小时。除去大部分甲苯以得到残余物，将所述残余物用EtOAc/H2O(60mL/30mL)处理。将有机层分离，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至3:1)纯化以得到呈黄色油状物的目标化合物(2g，54％)。MS:M/e355(M+1)+。
步骤C：1-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐
Figure BDA0002909572560001044
向步骤B的产物(2g，5.65mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌混合物中添加EtOAc/HCl(g)(4.0M，10mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。过滤反应混合物，并收集滤饼，干燥，得到呈褐色固体的目标化合物(1.47g，90％)。MS:M/e 255(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001051
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(37.5mg，0.1mmol)、步骤C的产物(29mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(25mg，40.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.16(s,2H),7.95(s,1H),7.43–7.31(m,5H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),7.00-6.96(t,J＝9.2Hz,1H),6.86(s,1H),6.81-6.73(m,2H),6.58-6.56(m,1H),4.07–4.00(m,2H),3.65-3.59(m,4H),3.41(m,2H),3.28(s,3H),3.01(m,2H),2.68(m,2H)ppm。MS:M/e 612(M+1)+。
化合物A56：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,3-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001052
步骤A：1-溴-2,3-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯
Figure BDA0002909572560001053
将4-溴-2,3-二氟苯酚(2g，9.56mmol)、1-溴-2-甲氧基乙烷(1.46g，10.52mmol)和K2CO3(2.6g，19.12mmol)在DMF(10mL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(30mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，在高真空下浓缩以得到呈无色油状物的目标化合物(2.55g，100％)。
步骤B：4-(2,3-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001061
将步骤A的产物(1g，3.73mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.69g，3.73mmol)、Pd2(dba)3(0.34g，0.373mmol)、X-phos(0.35g，0.746mmol)和Cs2CO3(2.4g，7.46mmol)在甲苯(50mL)中的混合物在120℃下在N2下搅拌2小时。除去大部分甲苯以得到残余物，将所述残余物用EtOAc/H2O(60mL/30mL)处理。将有机层分离，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至3:1)纯化以得到呈黄色油状物的目标化合物(620mg，44.7％)。MS:M/e 373(M+1)+。
步骤C：1-(2,3-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐
Figure BDA0002909572560001062
向步骤B的产物(620mg，1.67mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌溶液中添加EtOAc/HCl(g)(4.0M，5mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。过滤反应混合物，并收集滤饼，干燥，得到呈白色固体的目标化合物(323mg，62.7％)。MS:M/e 273(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(2,3-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001063
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(37.5mg，0.1mmol)、步骤C的产物(30.8mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(30mL x2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至1:2)纯化以得到目标化合物(20mg，31.7％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.15(s,2H),7.95(s,1H),7.43–7.33(m,5H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.92-6.85(m,2H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),6.68(m,1H),4.16–4.09(m,2H),3.74–3.59(m,4H),3.45-3.40(m,2H),3.29(s,3H),2.90(m,2H),2.55(m,2H)ppm。MS:M/e 630(M+1)+。
化合物A57：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001071
步骤A：1-溴-2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯
Figure BDA0002909572560001072
将4-溴-2,5-二氟苯酚(2g，9.56mmol)、1-溴-2-甲氧基乙烷(1.46g，10.52mmol)和K2CO3(2.6g，19.12mmol)在DMF(10mL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，在高真空下浓缩以得到呈无色油状物的目标化合物(2.59g，99％)。
步骤B：4-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001073
将步骤A的产物(1g，3.73mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.69g，3.73mmol)、Pd2(dba)3(0.34g，0.373mmol)、X-phos(0.35g，0.746mmol)和Cs2CO3(2.4g，7.46mmol)在甲苯(50mL)中的混合物在120℃下在N2下搅拌2小时。除去大部分甲苯以得到残余物，将所述残余物用EtOAc/H2O(50mL/20mL)处理。将有机层分离，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至3:1)纯化以得到呈黄色油状物的目标化合物(583mg，42％)。MS:M/e 373(M+1)+。
步骤C：1-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐
Figure BDA0002909572560001081
向步骤B的产物(583mg，1.56mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌混合物中添加EtOAc/HCl(g)(4.0M，5mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。过滤反应混合物，并收集滤饼，干燥，得到呈白色固体的目标化合物(300mg，62.3％)。MS:M/e 273(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001082
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(37.5mg，0.1mmol)、步骤C的产物(30.8mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至1:2)纯化以得到目标化合物(25mg，40.9％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.15(s,2H),7.95(s,1H),7.41-7.32(m,5H),7.24-7.23(d,J＝3.2Hz,1H),7.13-7.07(m,1H),6.91-6.84(m,2H),6.73(m,1H),4.09(m,2H),3.73–3.56(m,4H),3.39(m,2H),3.29(s,3H),2.89(m,2H),2.57(m,2H)ppm。MS:M/e 630(M+1)+。
化合物A58：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(哌啶-4-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001091
步骤A：4-(1-溴-2-甲氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001092
在-78℃下，将4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.57g，10mmol)在THF(10mL)中的溶液逐滴添加到LHMDS(17.5mL，1.0M)中，然后将混合物搅拌2小时，在-78℃下逐滴添加TMSCl(1.89g，17.5mmol)。再搅拌2小时后，逐滴添加Br2(1.92g，12mmol)。将混合物在此温度下搅拌1小时，并在0℃下搅拌30分钟。将混合物用HCl水溶液淬灭，用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至1:1)纯化以得到呈无色油状物的目标化合物(1.9g，56％)。MS:M/e 336/338(M+1)+。
步骤B：4-(1-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c] 嘧啶-7-基)-2-甲氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001093
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(482mg，2mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(552mg，4mmol)，然后添加步骤A的产物(806.4mg，2.4mmol)。添加后，将反应混合物搅拌2天。将混合物倾倒到H2O(15mL)中并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝4:1至1:1)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(168mg，16.9％)。MS:M/e497(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙酸
Figure BDA0002909572560001101
向步骤B的产物(168mg，0.338mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2M，2mL)。添加后，将反应搅拌过夜。除去大部分MeOH，得到水层，将其酸化至pH＝3至4并过滤。收集滤饼，将其干燥以得到呈白色固体的目标化合物(150mg，92％)。MS:M/e 483(M+1)+。
步骤D：4-(1-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c] 嘧啶-7-基)-2-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁 酯
Figure BDA0002909572560001102
将C的产物(336mg，0.72mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(170mg，0.72mmol)、HATU(330mg，0.864mmol)和DIPEA(186mg，1.44mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将混合物倾倒到H2O(15mL)中并用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至100％EtOAc)纯化以得到粗产物，将其通过制备型TLC(EtOAc)进一步纯化，得到呈白色固体的目标化合物(30mg，6％)。MS:M/e 701(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(哌啶-4-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001103
向步骤D的产物(30mg，0.043mmol)在CH2Cl2(3mL)中的搅拌溶液中添加HCl(g)/EtOAc(4.0M，1mL)。添加后，将混合物搅拌过夜。将混合物浓缩以得到目标化合物(20mg，70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.24(s,2H),7.95(s,1H),7.52(s,2H),7.23(d,J＝2.8Hz,1H),6.99(d,J＝8.4Hz,2H),6.73(s,1H),5.37(d,J＝9.6Hz,1H),4.16–3.74(m,6H),3.61(s,2H),3.44(m,2H),3.27(s,5H),3.14(m,1H),3.02–2.71(m,4H),2.07-1.97(m,1H),1.71–1.54(m,1H),1.47–1.29(m,1H),1.07(m,1H),0.91(m,1H)ppm。MS:M/e 601(M+1)+。
化合物A59：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001111
步骤A：4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001112
将1-溴-4-(2-甲氧基乙氧基)苯(1g，4.3mmol)、2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(930mg，4.3mmol)、X-Phos(409mg，0.76mmol)、Pd2(dba)3(394mg，0.4mmol)和Cs2CO3(2.8g，8.6mmol)在甲苯(20mL)中的混合物在95℃加热过夜。蒸发溶剂。向残余物中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(20mL)萃取，并通过柱色谱(PE:EA＝10:1)纯化，得到产物(1.1g，70％)。MS:M/e365(M+1)+
步骤B：1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3,5-二甲基哌嗪
Figure BDA0002909572560001121
在烧瓶中将HCl在乙酸乙酯(4M，10mL)中的溶液添加到4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯中(1.1g，3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将溶液浓缩，添加水(10mL)，用NaHCO3溶液碱化并用乙酸乙酯(10mL)萃取。将有机层干燥并浓缩，得到产物，将其直接用于下一步骤。MS:M/e 265(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001122
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3,5-二甲基哌嗪(48mg，0.16mmol)、HATU(61mg，0.16mmol)和DIEA(33mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到产物(25mg，29％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(d,J＝4.0Hz,1H),8.13(br.s,2H),7.95(br.s,1H),7.41-7.37(m,5H),7.26-7.24(m,1H),6.87-6.81(m,5H),6.74(br.s,1H),4.60(s,1H),4.01-3.98(m,3H),3.62-3.60(t,J＝4.0Hz,2H),3.29(s,3H),3.22(d,J＝8.0Hz,1H),2.69-2.43(m,2H),1.30-1.24(m,5H),1.04(d,J＝8.0Hz,1H),0.94-0.91(m,1H)ppm。MS:M/e 622(M+1)+
化合物A60：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(1-甲基哌啶-4-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001123
Figure BDA0002909572560001131
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(哌啶-4-基)乙酸甲酯盐酸盐
Figure BDA0002909572560001132
向4-(1-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(246mg，0.496mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌溶液中添加HCl(g)/EtOAc(4.0M，4mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩，得到目标化合物(196mg，100％)，将其直接用于下一步骤。MS:M/e 397(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(1-甲基哌啶-4-基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001133
向步骤A的产物(196mg，0.496mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中添加HCHO水溶液(37％，2mL)和AcOH(1mL)，然后将混合物搅拌30分钟，然后添加NaBH3CN(62.5mg，0.992mmol)并搅拌2小时。除去大部分MeOH，得到残余物，然后用EtOAc(20mL)萃取。弃去有机层，并用K2CO3将水层碱化至pH＝11至12，然后用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到呈白色固体的目标化合物(165mg，81.1％)。MS:M/e411(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(1-甲基哌啶-4-基)乙酸
Figure BDA0002909572560001141
向步骤B的产物(165mg，0.402mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2.0M，2mL)。添加后，将混合物搅拌过夜。用HCl水溶液将混合物酸化至pH＝5至6，然后浓缩，得到残余物，将所述残余物用CH2Cl2/MeOH(10mL/2mL)洗涤并过滤。将滤液浓缩以得到呈白色固体的目标化合物(133mg，83.5％)。MS:M/e 397(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(1-甲基哌啶-4-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001142
将步骤C的产物(133mg，0.336mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(80mg，0.336mmol)、HATU(154mg，0.403mmol)和DIPEA(87mg，0.672mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入H2O(15mL)中并且过滤。收集滤饼，干燥并通过制备型HPLC纯化，得到目标化合物(25mg，12％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,3H),7.95(s,1H),7.23(d,J＝2.8Hz,1H),6.87–6.67(m,5H),5.29(d,J＝9.6Hz,1H),3.97(m,2H),3.79-3.74(m,1H),3.65-3.58(m,4H),3.48(m,1H),3.27(s,3H),3.06-2.92(m,4H),2.73(m,2H),2.32-2.24(m,4H),1.91-1.83(m,1H),1.45–1.09(m,3H),0.96–0.80(m,1H)ppm。MS:M/e 615(M+1)+。
化合物A61：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001143
Figure BDA0002909572560001151
步骤A：2-(4-溴苯氧基)乙基乙酸酯
Figure BDA0002909572560001152
将2-溴乙基乙酸酯(5.8g，34.9mmol)、4-溴苯酚(5.0g，29.1mmol)和K2CO3(8.0g，58.0mmol)在DMF(50mL)中的混合物在60℃下搅拌24小时。将混合物过滤，并将滤液用100mLEA稀释，用盐水(50mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥。将所得残余物通过柱色谱纯化以得到呈浅黄色油状物的标题产物(6.2g，69％)。MS:M/e 259,261(M+1)+。
步骤B：4-(4-(2-乙酰氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001153
将2-(4-溴苯氧基)乙基乙酸酯(2.0g，7.7mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.0g，10.7mmol)、Pd2(dba)3(600mg，0.65mmol)、X-phos(650mg，1.36mmol)和Cs2CO3(5.5g，16.9mmol)在甲苯(20mL)中的混合物在90℃下在N2下搅拌16小时。将混合物通过硅藻土垫过滤，并浓缩滤液，并通过柱色谱纯化，得到呈棕色油状物的标题产物(1.85g，66％)。MS:M/e 365(M+1)+。
步骤C：4-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001154
在室温下向4-(4-(2-乙酰氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(600mg，1.65mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加NaOH水溶液(2M，5mL)并搅拌5小时。添加20mL EA并将所得溶液用盐水(20mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，得到呈浅黄色油状物的标题产物(280mg，粗品)。MS:M/e 323(M+1)+。
步骤D：2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-醇
Figure BDA0002909572560001161
在室温下向4-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(280mg，0.87mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌溶液中添加CF3COOH(3mL)，并将所得溶液在室温下搅拌5小时。将混合物浓缩至干燥。添加5mL NaHCO3水溶液，并将所得混合物用CH2Cl2(5mL x3)萃取。将合并的有机物用盐水(5mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩以得到呈浅黄色油状物的标题产物(120mg，粗品)。MS:M/e 223(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001162
在室温下向2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-醇(40mg，0.18mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(65mg，0.17mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加10mL的EA并且将混合物用盐水(10mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(CH2Cl2/EA＝1:2)纯化以得到标题产物(9.5mg，产率：9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28–8.05(m,3H),7.95(s,1H),7.47–7.29(m,5H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.92–6.76(m,5H),6.75–6.71(m,1H),3.87(t,J＝4.8Hz,2H),3.79–3.52(m,6H),3.02–2.89(m,2H),2.68–2.58(m,2H)。MS:M/e 580(M+1)+。
化合物A62：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-羟基丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001171
步骤A：((1-溴丙-2-基)氧基)(叔丁基)二甲基硅烷
Figure BDA0002909572560001172
向1-溴丙-2-醇(1.39g，10mmol)在CH2Cl2(20mL)中的搅拌溶液中添加1H-咪唑(0.8g，1.2mmol)，然后添加TBSCl(1.8g，1.2mmol)。添加后，将反应搅拌过夜。将混合物用H2O、盐水洗涤，用Na2SO4干燥并在真空中浓缩，得到呈无色油状物的目标化合物(2.1g，83％)。
步骤B：4-(4-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁 酯
Figure BDA0002909572560001173
将步骤A的产物(500mg，1.97mmol)、4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(547mg，1.97mmol)和K2CO3(544mg，3.94mmol)在DMF(5mL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将混合物倾倒到H2O(10mL)中并用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并在真空中浓缩，得到残余物，将所述残余物通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝5:1至1:1)纯化，得到呈黄色油状物的目标化合物(200mg，44.4％)。MS:M/e 451(M+1)+。
步骤C：1-(4-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙氧基)苯基)哌嗪
Figure BDA0002909572560001174
向步骤B的产物(80mg，0.177mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌溶液中添加TFA(1mL)。搅拌2小时后，用K2CO3将混合物碱化至pH＝10至12，用CH2Cl2(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到目标化合物(粗产物，100％)，将其直接用于下一步骤。MS:M/e 351(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基 乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001181
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(66mg，0.177mmol)、步骤C的产物(0.177mmol)、HATU(81mg，0.212mmol)和DIPEA(45mg，0.354mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(15mL)中然后用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝3:1至100％EtOAc)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(20mg，20％)。MS:M/e 708(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-羟基丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001182
向步骤D的产物(20mg，0.028mmol)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加TBAF(20mg)。添加后，将反应混合物搅拌2天。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化，得到呈TFA盐的目标化合物(10mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.15(s,2H),7.95(s,1H),7.43–7.30(m,5H),7.24-7.23(d,J＝3.2Hz,1H),6.86(s,1H),6.79(m,4H),6.74(s,1H),3.88(m,1H),3.76–3.70(m,2H),2.96(m,4H),2.67(m,2H),2.04–1.94(m,1H),1.56-1.46(m,2H),1.12-1.10(d,J＝6.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 594(M+1)+。
中间体-I：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸
Figure BDA0002909572560001191
步骤A：2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001192
在0℃下向2-苯基丙酸(5g，33.33mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中逐滴添加氯化亚砜(5.15g，50mmol)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌3h。将混合物浓缩，用冰水(20mL)淬灭，用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至5:1)纯化以得到呈黄色油状物的2-苯基丙酸甲酯(5.22g，95.49％)。MS:M/e 165(M+1)+。
步骤B：2-溴-2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001193
将2-苯基丙酸甲酯(5.22g，31.83mmol)、NBS(6.80g，38.19mmol)、BPO(0.385g，1.591mmol)在四氯化碳(20mL)中的混合物在70℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，将残余物用PE洗涤并且过滤，将滤液浓缩以得到呈黄色油状物的2-溴-2-苯基丙酸甲酯(7.57g，97.87％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55(d,J＝7.5Hz,2H),7.40-7.27(m,3H),3.80(s,3H),2.30(s,3H)
步骤C：2-肼基-2-苯基丙酸甲酯盐酸盐
Figure BDA0002909572560001201
向2-溴-2-苯基丙酸甲酯(15g，62.2mmol)在乙腈(200mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(80％，15.5g，249mmol)。添加后，将反应混合物加温至50℃并且搅拌3.5小时。将反应混合物在真空中浓缩。向残余物中添加H2O(300mL)并且用EA(200mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。向残余物中添加EA(50mL)并且在0℃下添加至4M HCl/EA溶液(200mL)中。添加后，将混合物在0℃下搅拌1小时，然后过滤混合物，并且将滤饼用EA(50mL)洗涤，干燥以得到呈白色固体的目标产物(9.8g，68.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,2H),7.43-7.38(m,5H),6.23(s,1H),3.73(s,3H),1.72(s,3H)ppm。MS:M/e 195(M+1)+。
步骤D：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001202
向2-肼基-2-苯基丙酸甲酯盐酸盐(2.38g，10.3mmol)在乙腈(30mL)中的搅拌混合物中添加2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(1.96g，10.3mmol)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物加温至70℃并且搅拌2小时。向混合物中添加1M NaHCO3水溶液，并且将混合物用EA(50mL x3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥并且在真空中浓缩。将粗产物通过柱色谱(石油醚/EA＝4:1)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(2.2g，64.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.05(s,1H),7.35-7.31(m,5H),7.13-7.11(m,2H),3.71(s,3H),3.25(s,3H)ppm。MS:M/e 332(M+1)+。
步骤E：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2- 苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001203
向2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯(2.03g，6.4mmol)在DMSO(20mL)中的搅拌混合物中添加呋喃-2-碳酰肼(0.85g，6.7mmol)和DIEA(2.36g，18.3mmol)。添加后，将反应混合物在120℃下搅拌过夜。在真空中浓缩大部分溶剂，并且向残余物中添加H2O(20mL)并且搅拌1小时。将混合物过滤，并且将滤饼用水洗涤。将粗产物在40℃下干燥，并且直接用于下一步骤(850mg，31.5％)。MS:M/e 422(M+1)+。
步骤F：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001211
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯(750mg，1.78mmol)在BSA(7.5mL)和HMDS(7.5mL)中的混合物在110℃下搅拌过夜。将混合物在真空中浓缩以去除BSA和HMDS。向残余物中添加H2O并且用EA(20mL x3)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。将粗产物通过柱色谱(石油醚/EA＝4:1至2:1)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(150mg，20.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(s,1H),7.64(s,1H),7.31(m,5H),7.21(d,J＝4.0Hz,1H),6.59-6.58(m,1H),3.76(s,3H),2.4(s,3H)ppm。MS:M/e 404(M+1)+。
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-苯基丙酸(中间体-I)
Figure BDA0002909572560001212
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸甲酯(150mg，0.34mmol)在EtOH(3mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，3mL)。添加后，将反应混合物在70℃下搅拌1小时。去除大部分EtOH以得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并且过滤，收集滤饼，干燥以得到呈白色固体的目标化合物(130mg，98.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.31(s,1H),8.21(s,1H),7.99(s,2H),7.95(s,1H),7.33-7.21(m,6H),6.75–6.74(m,1H),2.32(s,3H)ppm。MS:M/e 390(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将中间体-I分离成两种对映体立体异构体(中间体-Ia，较早的峰；和中间体-Ib，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560001221
Figure BDA0002909572560001222
使用以下路径合成中间体-Ib：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸
Figure BDA0002909572560001223
步骤A：(R)-1-(1-氧代-2-苯基丙-2-基)肼-1,2-二甲酸二叔丁酯
Figure BDA0002909572560001231
在0℃下向(S)-2-氨基-4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酸(15g，0.08mol)在干THF(0.8L)中的搅拌溶液中添加2-苯基丙醛(53.6g，0.4mol)和偶氮二甲酸二叔丁酯(DTAD 92g，0.4mol)。添加后，将反应缓慢加温至室温并且在N2下搅拌过夜。将混合物用水/盐水稀释，用EA(600mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到呈黄色油状物的目标化合物(160g，粗品)。
步骤B：(R)-2-(1,2-二(叔丁氧基羰基)肼基)-2-苯基丙酸
Figure BDA0002909572560001232
向步骤A的产物(120g，0.3mol)在DCM(600mL)中的溶液中添加NaH2PO4(10.08g，0.084mol)在水(150mL)中的溶液。在0℃下添加H2O2(150mL，1.46mol，约4.85当量)。然后逐滴添加75％NaClO2(46g，0.51mol，1.275当量)在水(300mL)中的溶液以保持温度低于10℃。添加后，将反应加温至室温过夜。停止搅拌，并且弃去水层。将有机层转移至10％NaHSO3溶液(300mL)中，并且将所得混合物在室温下搅拌一小时。收集有机层并且将其用10％NaHSO3溶液(300mL)、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。向残余物中添加CH3CN(200mL)并且将混合物再次浓缩。将所得残余物用EA/PE(1/3至200mL)浆化并且在室温下搅拌过夜。将沉淀物过滤，用EA/PE(1/3，100mL)洗涤以得到呈白色固体的目标化合物(两个步骤，47％、41％)。
步骤C：(R)-2-肼基-2-苯基丙酸甲酯盐酸盐
Figure BDA0002909572560001233
在10℃至30℃下向步骤B的产物(299g，0.787mol)在MeOH(1.2L)中的混合物中逐滴添加SOCl2(187g，1.57mmol)。将所得混合物在65℃下加热过夜。将混合物冷却至室温并且浓缩以得到残余物，向所述残余物中添加EA(100mL)并且再次浓缩。将残余物与EA(200mL)一起浆化并且过滤，收集滤饼以得到呈白色固体的目标化合物(176g，97％，ee％＝99.3％)。
步骤D：(R)-2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001241
在室温下向步骤C的产物(11.5g，50mmol)和2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(9.6g，50mmol)在CH3CN(200mL)中的搅拌混合物中添加POCl3(7.7g，50mmol)。添加后，将反应混合物在30℃下搅拌过夜。然后将反应混合物逐滴添加到EtOAc(200mL)/K3PO4水溶液(37g，0.175mol)在H2O(200mL)中的体系中并搅拌2h。将有机层分离，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到残余物，将所述残余物溶解在EtOAc(40mL)中，添加活性炭(5g)并且逐滴添加石油醚(80mL)。将混合物搅拌半小时并且过滤。将滤液浓缩以得到呈浅黄色固体的目标化合物(15g，90％)。
步骤E：(R)-2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1- 基)-2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001242
向步骤D的产物(114g，0.344mol)和呋喃-2-碳酰肼(65g，0.5166mol)在DMSO(115mL)中的混合物中添加DIPEA(88g，0.6888mol)。将所得混合物在80℃下在N2下加热过夜。将混合物冷却至室温并且用PE稀释。弃去PE层。在剧烈搅拌下将DMSO层缓慢添加至水(1.1L)中。形成悬浮液，过滤并且用水洗涤。在室温下将固体与水(500mL)一起浆化2h，过滤并且用水洗涤，在烘箱中干燥3天以得到呈棕色固体的目标化合物(125g，86％)。
步骤F：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5- c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001243
向BSA(204g，1.072mol)和HMDS(161g，1.072mol)的混合物中添加步骤E的产物(90.3g，0.2144mol)。将所得混合物在115℃下加热5小时。将混合物冷却至室温并且在减压下浓缩至干燥。在室温下向残余物中缓慢添加EtOH(200mL)，并且将所得混合物在75℃下加热1小时。将悬浮液冷却至室温，保持在搅拌下在室温下过夜，过滤并且将滤饼用PE洗涤，干燥以得到呈灰白色固体的目标化合物(66g，76％)。
步骤G：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5- c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸
Figure BDA0002909572560001251
向步骤F的产物(20.4g，50.62mmol)在MeOH/THF(50mL/150mL)中的混合物中添加4N NaOH(63mL，253mmol)。将所得混合物在30℃(内部温度25℃至30℃)下搅拌过夜。将溶剂在减压下浓缩(浴温25℃至30℃)。向残余物中添加水(150mL)和2N HCl直至pH＝约3。形成悬浮液，过滤并且用水洗涤。收集产物并且从EA(60mL)浆化以得到产物(10g)。将母液用EA萃取。浓缩有机层。将残余物用EA(20mL)浆化，得到产物(6.5g)。将滤液浓缩并且将残余物用EtOH浆化以得到产物(1.1g将三批产物合并，共得到目标化合物(17.6g，89％)。
化合物A63：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001252
将中间体-I(137mg，0.35mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(88mg，0.37mmol)、HATU(136.8mg，0.36mmol)和DIPEA(91mg，0.7mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并用EA(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EA＝1:2)纯化以得到目标化合物(79mg，37.17％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.35-7.19(m,6H),6.76–6.70(m,5H),3.96-3.94(m,2H),3.70(m,2H),3.59–3.57(m,2H),3.27(s,3H),2.95(m,6H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 608(M+1)+。
化合物A63a：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001261
将(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(22mg，0.09mmol)、HATU(35mg，0.09mmol)和DIPEA(19mg，0.15mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并用EA(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，在真空中浓缩并且通过柱色谱(EA)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(30mg，64.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.36–7.14(m,6H),6.73(m,5H),3.99–3.91(m,2H),3.69(s,2H),3.59–3.52(m,2H),3.27(s,3H),2.95(m,4H),2.33(s,3H)。MS:M/e 608(M+1)+。
化合物A63b：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001262
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(22mg，0.09mmol)、HATU(35mg，0.09mmol)和DIPEA(19mg，0.15mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并用EA(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，在真空中浓缩并且通过柱色谱(EA)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(31mg，64.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.38–7.11(m,6H),6.73(m,5H),4.00–3.89(m,2H),3.69(s,2H),3.62–3.57(m,2H),3.27(s,3H),2.95(s,4H),2.33(s,3H)。MS:M/e 608(M+1)+。
化合物A64：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001271
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、1-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(37.3mg，0.128mmol)、HATU(58.3mg，0.154mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到目标化合物(23mg，28.75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.43–7.11(m,6H),6.85–6.66(m,3H),6.64-6.55(m,1H),4.02(m,2H),3.85–3.55(m,5H),3.26(s,3H),3.15–2.73(m,5H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 626(M+1)+。
化合物A64a：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001272
将(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、1-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(37.3mg，0.128mmol)、HATU(58.3mg，0.154mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(30mg，37.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.43–7.11(m,6H),6.85–6.66(m,3H),6.64-6.55(m,1H),4.02(m,2H),3.85–3.55(m,5H),3.26(s,3H),3.15–2.73(m,5H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 626(M+1)+。
化合物A64b：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001281
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、1-(2-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(37.3mg，0.128mmol)、HATU(58.3mg，0.154mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(30mg，37.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.43–7.11(m,6H),6.85–6.66(m,3H),6.64-6.55(m,1H),4.02(m,2H),3.85–3.55(m,5H),3.26(s,3H),3.15–2.73(m,5H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 626(M+1)+。
化合物A65：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001282
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、1-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(39.5mg，0.128mmol)、HATU(58.3mg，0.154mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到目标化合物(22mg，26.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.38–7.21(m,4H),7.18(d,J＝7.2Hz,2H),7.10-7.04(m,1H),6.85–6.67(m,2H),4.17–4.02(m,2H),3.67(m,4H),3.27(s,3H),3.11–2.75(m,5H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e644(M+1)+。
化合物A65a：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001291
将(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(70mg，0.18mmol)、1-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(55.5mg，0.18mmol)、HATU(82mg，0.22mmol)和DIPEA(46mg，0.36mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(50mg，43.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.38–7.21(m,4H),7.18(d,J＝7.2Hz,2H),7.10-7.04(m,1H),6.85–6.67(m,2H),4.17–4.02(m,2H),3.67(m,4H),3.27(s,3H),3.11–2.75(m,5H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 644(M+1)+。
化合物A65b：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001292
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(70mg，0.18mmol)、1-(2,5-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(55.5mg，0.18mmol)、HATU(82mg，0.22mmol)和DIPEA(46mg，0.36mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(45mg，38.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.38–7.21(m,4H),7.18(d,J＝7.2Hz,2H),7.10-7.04(m,1H),6.85–6.67(m,2H),4.17–4.02(m,2H),3.67(m,4H),3.27(s,3H),3.11–2.75(m,5H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 644(M+1)+。
化合物A66：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001301
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、1-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(37.3mg，0.128mmol)、HATU(58.3mg，0.154mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到目标化合物(27mg，33.75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.07(s,2H),7.95(s,1H),7.41–7.13(m,6H),6.93(t,J＝9.6Hz,1H),6.78–6.65(m,2H),6.50(d,J＝8.8Hz,1H),4.08–3.94(m,2H),3.82–3.55(m,5H),3.14–2.84(m,5H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 626(M+1)+。
化合物A66a：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001302
将(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(70mg，0.18mmol)、1-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(53mg，0.18mmol)、HATU(82mg，0.22mmol)和DIPEA(46mg，0.36mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(35mg，31.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.07(s,2H),7.95(s,1H),7.41–7.13(m,6H),6.93(t,J＝9.6Hz,1H),6.78–6.65(m,2H),6.50(d,J＝8.8Hz,1H),4.08–3.94(m,2H),3.82–3.55(m,5H),3.14–2.84(m,5H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 626(M+1)+。
化合物A66b：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001311
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(70mg，0.18mmol)、1-(3-氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(53mg，0.18mmol)、HATU(82mg，0.22mmol)和DIPEA(46mg，0.36mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(38mg，33.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.07(s,2H),7.95(s,1H),7.41–7.13(m,6H),6.93(t,J＝9.6Hz,1H),6.78–6.65(m,2H),6.50(d,J＝8.8Hz,1H),4.08–3.94(m,2H),3.82–3.55(m,5H),3.14–2.84(m,5H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 626(M+1)+。
化合物A67：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,3-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001312
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、1-(2,3-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(39.5mg，0.128mmol)、HATU(58.3mg，0.154mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到目标化合物(33mg，41％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.96(s,1H),7.42–7.13(m,6H),6.83(t,J＝8.8Hz,1H),6.77–6.71(m,1H),6.56(t,J＝8.8Hz,1H),4.12–4.05(m,2H),3.90–3.57(m,5H),3.18–2.78(m,5H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 644(M+1)+。
化合物A68：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001321
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-(2,4-二氟苯基)哌嗪(25mg，0.13mmol)、HATU(59mg，0.16mmol)和DIEA(33mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝2:1)和制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)纯化以得到所需产物(20mg，28％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(br.s,2H),7.95(d,J＝4.0Hz,1H),7.30-7.11(m,7H),6.92-6.86(m,2H),6.74(d,J＝4.0Hz,1H),3.71(br.s,2H),3.45-3.40(m,2H),3.16-2.90(m,4H),2.35(s,3H)ppm。MS:M/e 570(M+1)+
化合物A69：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2-氟苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001322
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-(2-氟苯基)哌嗪(24mg，0.13mmol)、HATU(60mg，0.16mmol)和DIEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(DCM:MeOH＝30:1)纯化以得到所需产物(20mg，29％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(br.s,2H),7.95(d,J＝4.0Hz,1H),7.31-7.18(m,6H),7.09-6.74(m,5H),3.73-3.39(m,4H),3.16-2.90(m,4H),2.35(s,3H)ppm。MS:M/e 552(M+1)+
化合物A70：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001331
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-(4-氟苯基)哌嗪盐酸盐(28mg，0.13mmol)、HATU(60mg，0.16mmol)和DIEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(DCM:MeOH＝30:1)和制备型HPLC纯化以得到所需产物(16mg，23％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(br.s,2H),7.95(d,J＝4.0Hz,1H),7.33-7.18(m,6H),6.96-6.94(m,2H),6.82-6.73(m,3H),3.72-3.36(m,4H),3.17-2.91(m,4H),2.35(s,3H)ppm。MS:M/e 552(M+1)+
化合物A70a：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001332
将(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-(4-氟苯基)哌嗪盐酸盐(33mg，0.15mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩，并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到呈白色固体的所需产物(32mg，46％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(br.s,2H),7.95(s,1H),7.34-7.18(m,6H),6.97(t,J＝8.0Hz,2H),6.82-6.73(m,3H),3.75-3.45(m,4H),3.20-2.80(m,4H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 552(M+1)+
化合物A70b：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001333
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-(4-氟苯基)哌嗪盐酸盐(33mg，0.15mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩，并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到呈白色固体的所需产物(35mg，49％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.07(br.s,2H),7.95(s,1H),7.31-7.18(m,6H),6.96-6.93(m,2H),6.82-6.74(m,3H),3.75-3.45(m,4H),3.20-2.80(m,4H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 552(M+1)+
化合物A71：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001341
将N,N-二甲基-2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-胺盐酸盐(113mg，0.45mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(177mg，0.45mmol)、HATU(172mg，0.45mmol)和Et3N(92mg，0.9mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(20mL)中，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤，并且通过制备型HPLC纯化以得到标题化合物(120mg，产率：42.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.09(br.s,2H),7.95(s,1H),7.37–7.27(m,3H),7.24(d,J＝4Hz,1H),7.21–7.13(m,2H),6.86–6.72(m,5H),4.19–4.11(m,4H),3.81–3.62(m,2H),3.48–3.39(m,2H),3.09–2.85(m,4H),2.85–2.73(m,6H),2.35–2.28(m,3H)ppm。MS:M/e 621(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物A71分离成两种对映体立体异构体化合物A71a(较早的峰)，和化合物71b(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560001342
Figure BDA0002909572560001343
Figure BDA0002909572560001351
化合物A72：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((S)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001352
在室温下向(S)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪2,2,2-三氟乙酸酯(220mg，0.60mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(105mg，0.27mmol)、DIEA(200mg，1.5mmol)在DMF(4mL)中的混合物中添加HATU(130mg，0.34mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用20mL EA稀释，用NaHCO3(水溶液10mL x2)、盐水(10mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，通过制备型TLC和制备型HPLC纯化，得到标题产物(12mg，产率：6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36–8.23(m,1H),8.19–7.99(m,2H),7.95(s,1H),7.46–7.09(m,6H),6.83–6.62(m,5H),4.00–3.91(m,2H),3.61–3.49(m,4H),3.27(s,3H),3.08–2.63(m,4H),2.35–2.13(m,4H),1.34–1.08(m,3H)。MS:M/e 622(M+1)+。
化合物A73：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((R)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001353
在室温下向(R)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪盐酸盐(100mg，0.35mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(88mg，0.23mmol)、DIEA(150mg，1.16mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加HATU(115mg，0.30mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用20mL EA稀释，用NaHCO3(水溶液10mL x2)、盐水(10mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，通过制备型TLC和制备型HPLC纯化，得到标题产物(32mg，产率：19％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34(d,J＝18.0Hz,1H),8.26–7.99(m,2H),7.96(s,1H),7.39–7.14(m,6H),7.01–6.67(m,5H),4.08–3.90(m,2H),3.88–3.51(m,4H),3.27(d,J＝1.6Hz,3H),3.22–2.58(m,4H),2.42–2.13(m,4H),0.96–0.40(m,3H)。MS:M/e 622(M+1)+。
化合物A74：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((S)-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-3-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001361
在室温下向(S)-1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-2-甲基哌嗪盐酸盐(100mg，0.35mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(88mg，0.23mmol)、DIEA(150mg，1.16mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加HATU(115mg，0.30mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用20mL EA稀释，用NaHCO3(水溶液10mL x2)、盐水(10mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，通过制备型TLC和制备型HPLC纯化，得到标题产物(28mg，产率：17％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34(d,J＝18.0Hz,1H),8.26–8.01(m,2H),7.96(s,1H),7.40–7.06(m,6H),6.96–6.52(m,5H),4.08–3.92(m,2H),3.92–3.45(m,4H),3.27(d,J＝2.0Hz,3H),3.23–2.52(m,4H),2.44–2.11(m,4H),0.95–0.27(m,3H)。MS:M/e 622(M+1)+。
化合物A75：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(间甲苯基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001371
步骤A：2-(间甲苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001372
在-78℃下在N2气氛下向LDA(在THF中2M，10mL，20mmol)在THF(60mL)中的冷却溶液中逐滴添加2-(间甲苯基)乙酸甲酯(3g，18mmol)在THF(5mL)中的溶液。添加后，将溶液再搅拌20分钟，然后逐滴添加CH3I(7.8g，55mmol)。将混合物加温至室温保持2小时。TLC显示反应完成。将反应混合物用水(5mL)淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取并且用盐水(20mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝50:1)纯化以得到呈无色油状物的产物(2.6g，81％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.26-7.20(m,1H),7.11-7.07(m,3H),3.70-3.68(m,1H),3.66(s,3H),2.35(s,3H),1.49(d,J＝8.0Hz,3H)ppm。
步骤B：2-溴-2-(间甲苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001373
在-78℃下在N2气氛下向LDA(在THF中2M，3.1mL，6.2mmol)在THF(30mL)中的冷却溶液中逐滴添加2-(间甲苯基)丙酸甲酯(1g，5.6mmol)在THF(2mL)中的溶液。将溶液再搅拌30分钟，然后逐滴添加TMSCl(671mg，6.2mmol)。将混合物加温至室温保持2小时，然后冷却至-78℃。分批添加NBS(2g，11.2mmol)，并且将溶液在-78℃下搅拌1小时。使反应混合物经1小时达到室温，然后用饱和NaHCO3溶液淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝50:1)纯化以得到产物(1g，70％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35-7.19(m,4H),3.79(s,3H),2.37(s,3H),2.29(s,3H)ppm。
步骤C：2-肼基-2-(间甲苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001381
将NH2NH2.H2O(625mg，10mmol)添加至2-溴-2-(间甲苯基)丙酸甲酯(500mg，2mmol)在CH3CN(5mL)中的溶液中。将反应混合物在60℃下加热1小时。TLC显示反应完成。将溶液浓缩，添加水(10mL)并且用乙酸乙酯(10mL)萃取。将有机相浓缩，添加HCl/EA(2M，2mL)并且蒸发以得到呈HCl盐的产物(380mg，80％)。MS:M/e 209(M+1)+
步骤D：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001382
将2-肼基-2-(间甲苯基)丙酸甲酯盐酸盐(380mg，1.5mmol)和2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(300mg，1.5mmol)在CH3CN(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，并且然后在50℃下加热3小时。将反应混合物蒸发，添加水(10mL)并且用乙酸乙酯(10mL)萃取。将有机相干燥，浓缩，并且通过柱色谱(PE:EA＝6:1)进一步纯化以得到呈白色固体的所需产物(300mg，56％)。MS:M/e 346(M+1)+
步骤E：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2- (间甲苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001383
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯(300mg，0.87mmol)、呋喃-2-碳酰肼(109mg，0.87mmol)和DIEA(225mg，1.74mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在120℃下加热过夜。在油泵下蒸发溶剂。向残余物中添加水(10mL)，浆化并且过滤。将滤饼用水洗涤，干燥以得到粗产物，将所述粗产物直接用于下一步骤(260mg，68％)。MS:M/e 436(M+1)+
步骤F：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001391
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯(260mg，0.60mmol)在BSA(2mL)和HMDS(2mL)中的溶液在120℃下加热3小时。将溶剂在油泵下蒸发。向残余物中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩，并且通过柱色谱(PE:EA＝5:1)纯化以得到呈白色固体的所需产物(110mg，44％)。MS:M/e 418(M+1)+
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(间甲苯基)丙酸
Figure BDA0002909572560001392
将NaOH溶液(50mg，1.25mmol，在1mL的水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯(110mg，0.26mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中。将溶液在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂。向残余物中添加水(5mL)，用2M HCl酸化至pH＝2至3。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的产物(40mg，38％)。MS:M/e 404(M+1)+
步骤H：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(间甲苯基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001401
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(间甲苯基)丙酸(25mg，0.06mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(18mg，0.07mmol)、HATU(27mg，0.07mmol)和DIEA(16mg，0.12mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型HPLC纯化以得到所需产物(12mg，32％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.08(br.s,2H),7.95(s,1H),7.25-7.19(m,2H),7.11(s,1H),7.09(s,1H),6.96(d,J＝8.0Hz,1H),6.77-6.74(m,5H),4.30(br.s,4H),3.96(t,J＝4.0Hz,2H),3.58(t,J＝4.0Hz,2H),3.27(s,3H),2.99(br.s,4H),2.33(s,3H),2.28(s,3H)ppm。MS:M/e622(M+1)+
化合物A76：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(3-吗啉代丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001402
将4-(3-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)吗啉(100mg，0.33mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、HATU(110mg，0.3mmol)和DIEA(100mg，0.78mmol)在DMF(10mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(30mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝0至5％MeOH)纯化以得到目标化合物(13.5mg，6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(s,1H),8.17(br,2H),8.04(s,1H),7.46–7.32(m,4H),7.31–7.25(m,2H),6.86–6.77(m,5H),3.95(t,J＝6.3Hz,2H),3.88–3.71(m,2H),3.66–3.58(m,4H),3.39(s,1H),3.22–2.91(m,4H),2.50–2.36(m,10H),1.93–1.84(m,2H)ppm。MS:M/e 677(M+1)+。
化合物A76a：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(3-吗啉代丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001411
将4-(3-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)吗啉(45mg，0.15mmol)、(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(55mg，0.15mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(40mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝0至5％MeOH)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(34mg，38.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.09(br,2H),7.95(d,J＝0.9Hz,1H),7.37–7.27(m,3H),7.24(d,J＝3.4Hz,1H),7.22–7.14(m,2H),6.76–6.70(m,5H),3.86(t,J＝6.3Hz,2H),3.79–3.62(m,2H),3.60–3.49(m,5H),3.11–2.86(m,4H),2.41–2.26(m,10H),1.78(dd,J＝13.4,7.0Hz,2H)ppm。MS:M/e 677(M+1)+。
化合物A76b：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(3-吗啉代丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001412
将4-(3-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)吗啉(45mg，0.15mmol)、(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(55mg，0.15mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(40mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝0至5％MeOH)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(26mg，29.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(br,2H),7.95(s,1H),7.36–7.27(m,3H),7.24(d,J＝3.4Hz,1H),7.22–7.15(m,2H),6.77–6.68(m,5H),3.86(t,J＝6.3Hz,3H),3.79–3.62(m,2H),3.61–3.50(m,5H),3.09–2.84(m,4H),2.41–2.25(m,10H),1.85–1.73(m,2H)ppm。MS:M/e 677(M+1)+。
化合物A77：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001421
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、1-(3-甲氧基苯基)哌嗪盐酸盐(29.5mg，0.128mmol)、HATU(58.3mg，0.154mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到目标化合物(20mg，27.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.07(s,2H),7.95(s,1H),7.37–7.17(m,6H),7.06-7.0(m,1H),6.74(m,1H),6.40–6.27(m,3H),3.86–3.47(m,2H),3.64(s,3H),3.21–2.84(m,4H),2.76–2.55(m,1H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 564(M+1)+。
化合物A78：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001422
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、1-(2-甲氧基苯基)哌嗪盐酸盐(29.5mg，0.128mmol)、HATU(58.3mg，0.154mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到目标化合物(23mg，31.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(d,J＝15.4Hz,1H),8.09(s,2H),7.98–7.93(m,1H),7.37–7.17(m,6H),6.97–6.82(m,2H),6.81–6.71(m,2H),6.69–6.62(m,1H),3.89–3.58(m,2H),3.68(s,3H),3.14-2.78(m,4H),2.45-2.17(m,2H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 564(M+1)+。
化合物A79：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(4-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001431
步骤A：1-(4-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001432
将1-(4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(1.5g，6.8mmol)、1-(3-氯丙基)吡咯烷(1.0g，6.8mmol)和Cs2CO3(4.4g，13.5mmol)在DMF(20ml)中的混合物在60℃下搅拌15h。完成后，将反应混合物倒入水(30ml)中，并且然后用DCM(20ml*3)萃取。将合并的有机层用水(20ml)洗涤，用Na2SO4干燥，然后浓缩以除去溶剂。将残余物用MTBE和PE浆化，然后过滤，得到呈白色固体的1-(4-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(1.8g，80％)。MS:M/e 332(M+1)+
步骤B：1-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪
Figure BDA0002909572560001433
将1-(4-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(1.65g，5.0mmol)在浓HCl(20mL)和H2O(20ml)中的溶液在70℃下搅拌3h。完成后，将反应混合物用NaOH碱化至pH＝9至10，然后用DCM(25ml*3)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到呈黄色固体的1-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪(1.5g，100％)。MS:M/e 290(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-苯基-1-(4-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001441
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、HATU(108mg，0.28mmol)和DIEA(100mg，0.78mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加1-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪(74mg，0.26mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml*2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(20:1)纯化以得到产物(11.3mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.33-7.18(m,6H),6.74-6.72(m,5H),3.87(t,J＝4Hz,2H),3.80-3.52(m,2H),3.33-3.31(m,2H),3.23-2.62(m,6H),2.47-2.35(m,4H),2.33(s,3H),1.85-1.78(m,2H),1.71-1.58(m,4H)ppm。MS:M/e 661(M+1)+。
化合物A79a：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(4-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001442
向(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在THF(10ml)中的搅拌溶液中添加1-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪(37mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml*2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(20:1)纯化以得到呈白色固体的产物(54.9mg，65％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.96(s,1H),7.33-7.18(m,6H),6.83-6.68(m,5H),3.92(t,J＝4Hz,2H),3.83-3.60(m,2H),3.58-3.45(m,3H),3.25-3.18(m,2H),3.10-2.84(m,6H),2.68-2.61(m,1H),2.33(s,3H),2.10-1.92(m,4H),1.90-1.79(m,2H)ppm。MS:M/e 661(M+1)+。
化合物A79b：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(4-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001451
向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在THF(10ml)中的搅拌溶液中添加1-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪(37mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml*2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(20:1)纯化以得到呈白色固体的产物(49.2mg，58％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.33-7.18(m,6H),6.79-6.71(m,5H),3.92(t,J＝4Hz,2H),3.83-3.60(m,2H),3.58-3.42(m,3H),3.25-3.17(m,2H),3.08-2.85(m,6H),2.70-2.61(m,1H),2.33(s,3H),2.10-1.93(m,4H),1.90-1.80(m,2H)ppm。MS:M/e 661(M+1)+。
化合物A80：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001452
Figure BDA0002909572560001461
步骤A：1-(4-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001462
将1-(4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(5.5g，25mmol)、4-(2-氯乙基)吗啉(4.5g，25mmol)和Cs2CO3(12g，37mmol)在DMF(150mL)中的混合物搅拌过夜。将混合物倾倒到H2O(150mL)中并用DCM(150mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到呈黄色固体的1-(4-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(4.5g，粗品)。MS:M/e 334(M+1)+。
步骤B：4-(2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)吗啉
Figure BDA0002909572560001463
将1-(4-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(1.5g，粗品)和HCl(6N，20mL)的混合物在60℃下搅拌3小时。然后用NaOH水溶液将反应酸化至pH＝6至7，并用DCM(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩得到呈深红色固体的4-(3-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)吗啉(1.0g，粗品)。MS:M/e 292(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001464
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(80mg，0.21mmol)、HATU(88mg，0.23mmol)和DIPEA(80mg，0.62mmol)在THF(10ml)中的搅拌溶液中添加4-(2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)吗啉(80mg，0.26mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml*2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(20:1)纯化以得到产物(12.4mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.38-7.26(m,3H),7.24(d,J＝4Hz,1H),7.20(d,J＝8Hz,2H),6.80-6.69(m,5H),3.94(t,J＝4Hz,2H),3.87-3.50(m,6H),3.33-3.31(m,1H),3.11-2.82(m,4H),2.65-2.63(m,1H),2.62-2.55(t,J＝4Hz,2H),2.45-2.42(m,4H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 663(M+1)+。
化合物A80a：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001471
将4-(2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)吗啉(50mg，0.17mmol)、(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(55mg，0.15mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(40mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝0至5％MeOH)纯化以得到目标化合物(18mg，20.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.07(br.s,2H),7.95(s,1H),7.36–7.26(m,3H),7.24(d,J＝2.9Hz,1H),7.22–7.14(m,2H),6.80–6.67(m,5H),3.94(t,J＝5.8Hz,2H),3.81–3.63(m,1H),3.59–3.49(m,4H),3.30(s,1H),2.95(s,4H),2.60(t,J＝5.8Hz,2H),2.46–2.37(m,5H),2.36–2.25(m,4H)ppm。MS:M/e 663(M+1)+。
化合物A80b：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001472
将4-(2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)吗啉(45mg，0.15mmol)、(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(55mg，0.15mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(40mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝0至5％MeOH)纯化以得到目标化合物(10.6mg，12.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(br.s,2H),7.95(s,1H),7.37–7.26(m,3H),7.24(d,J＝3.4Hz,1H),7.22–7.12(m,2H),6.80–6.69(m,5H),3.94(t,J＝5.8Hz,2H),3.82–3.61(m,1H),3.59–3.50(m,4H),3.30(s,1H),3.12–2.80(m,4H),2.60(t,J＝5.8Hz,2H),2.47–2.38(m,5H),2.33(s,4H)ppm。MS:M/e 663(M+1)+。
化合物A81：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001481
步骤A：4-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001482
将DIAD(2.6g，13mmol)逐滴添加到4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3g，11mmol)、2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-醇(2.3g，16mmol)和PPh3(4.3g，16mmol)在THF(50mL)中的溶液中。将所得混合物在室温下搅拌过夜。向溶液中添加水(20mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取并且用盐水(20mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)纯化以得到呈无色油状物的所需产物(3.3g，75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.90-6.81(m,4H),3.98(t,J＝8.0Hz,2H),3.44(t,J＝4.0Hz,4H),2.94(t,J＝4.0Hz,4H),2.63(t,J＝8.0Hz,2H),2.46-2.30(m,8H),2.13(s,3H),1.41(s,9H)ppm。MS:M/e 405(M+1)+
步骤B：1-甲基-4-(2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)哌嗪盐酸盐
Figure BDA0002909572560001491
将HCl/EA溶液(2M，5mL)添加到4-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.3g，8.2mmol)在EA(20mL)中的溶液中。立即沉淀出白色固体。将混合物在室温下搅拌过夜。过滤白色固体，用乙酸乙酯(10mL)洗涤并干燥，得到呈HCl盐的产物(3.5g，96％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.13(br.s,1H),9.46(s,2H),7.06-6.97(m,4H),5.84(br.s,4H),4.38(d,J＝4.0Hz,2H),3.82-3.53(m,10H),3.32-3.23(m,8H),2.82(s,3H)ppm。MS:M/e305(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001492
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-甲基-4-(2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)哌嗪盐酸盐(72mg，0.16mmol)、HATU(61mg，0.16mmol)和DIPEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM:MeOH＝15:1)纯化以得到所需产物(40mg，46％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(br.s,2H),7.95(s,1H),7.31-7.18(m,6H),6.75-6.70(m,5H),3.94(t,J＝8.0Hz,2H),3.70(br.s,2H),2.94(br.s,4H),2.64-2.51(m,9H),2.49-2.30(m,9H)ppm。MS:M/e 676(M+1)+
化合物A82：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001501
步骤A：4-(4-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001502
将DIAD(2.6g，13mmol)逐滴添加到4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3g，11mmol)、3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-醇(2.5g，16mmol)和PPh3(4.3g，16mmol)在THF(50mL)中的溶液中。将所得混合物在室温下搅拌过夜。向溶液中添加水(20mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取并且用盐水(20mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM:MeOH＝15:1)纯化以得到呈无色油状物的所需产物(3.5g，78％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.88(d,J＝8.0Hz,2H),6.81(d,J＝8.0Hz,2H),3.90(t,J＝8.0Hz,2H),3.44(t,J＝4.0Hz,4H),2.94(t,J＝4.0Hz,4H),2.38-2.30(m,10H),2.14(s,3H),1.82-1.79(m,2H),1.41(s,9H)ppm。MS:M/e419(M+1)+
步骤B：1-甲基-4-(3-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)哌嗪盐酸盐
Figure BDA0002909572560001503
将HCl/EA溶液(2M，5mL)添加到4-(4-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.5g，8.4mmol)在EA(20mL)中的溶液中。立即沉淀出白色固体。将混合物在室温下搅拌过夜，并且TLC显示反应完成。过滤白色固体，用乙酸乙酯(10mL)洗涤并干燥，得到呈HCl盐的产物(3.8g，100％)。MS:M/e 319(M+1)+
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001511
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-甲基-4-(3-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)哌嗪盐酸盐(74mg，0.16mmol)、HATU(61mg，0.16mmol)和DIPEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM:MeOH＝15:1)纯化以得到所需产物(35mg，40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(br.s,2H),7.95(s,1H),7.33-7.18(m,6H),6.75-6.72(m,5H),3.86(t,J＝8.0Hz,2H),3.69(br.s,2H),2.94(br.s,4H),2.67-2.50(m,9H),2.45-2.33(m,9H),1.80(s,2H)ppm。MS:M/e 690(M+1)+
化合物A83：4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N-((3-羟基氧杂环丁烷-3-基)甲基)苯甲酰胺
Figure BDA0002909572560001512
步骤A：4-(4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001521
向哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.0g，4.6mmol)和4-溴苯甲酸甲酯(0.85g，4.6mmol)在甲苯(30mL)中的溶液中添加x-phose(421mg，0.46mmol)、Pd(dba)2(438g，0.92mmol)和Cs2CO3(3.0g，9.2mmol)并将混合物在120℃下加热2小时。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至1:2)纯化以得到呈黄色固体的目标化合物(600mg，40.6％)。MS:M/e 321(M+1)+。
步骤B：4-(哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0002909572560001522
向4-(4-(甲氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
(600mg，1.9mmol)在EA(20mL)中的溶液中添加HCl/EA(20mL，4M)，并将混合物在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，收集滤饼，干燥，得到呈黄色固体的目标化合物(400mg，82.2％)。MS:M/e 221(M+1)+。
步骤C：4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0002909572560001523
将步骤B的产物(80mg，0.32mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、HATU(100mg，0.26mmol)和DIEA(100mg，0.78mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到呈黄色固体的目标化合物(100mg，65％)。MS:M/e 592(M+1)+。
步骤D：4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸
Figure BDA0002909572560001531
向4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(100mg，0.17mmol)在MeOH/H2O(4mL/1mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(4.0M，1mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。去除大部分溶剂以得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并且过滤，收集滤饼，干燥以得到呈白色固体的目标化合物(80mg，81.4％)。MS:M/e 578(M+1)+。
步骤E：4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N-((3-羟基氧杂环丁烷-3-基)甲基)苯甲酰 胺
Figure BDA0002909572560001532
将步骤D的产物(40mg，0.07mmol)、3-(氨基甲基)氧杂环丁-3-醇(20mg，0.19mmol)、HATU(40mg，0.1mmol)和DIEA(30mg，0.23mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到呈黄色固体的目标化合物(20mg，43.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.30(br,1H),8.08(br,2H),7.96–7.93(m,1H),7.69(d,J＝8.9Hz,2H),7.36–7.16(m,6H),6.82(d,J＝9.0Hz,2H),6.74(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),5.85(br,1H),4.45(d,J＝6.5Hz,2H),4.34(d,J＝6.5Hz,2H),3.83–3.56(m,2H),3.50(d,J＝6.0Hz,2H),3.30(s,1H),3.27–3.14(m,2H),3.12–2.91(m,2H),2.86–2.72(m,1H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 663(M+1)+。
化合物A84：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丁-1-酮
Figure BDA0002909572560001541
步骤A：2-肼基-2-苯基丁酸甲酯盐酸盐
Figure BDA0002909572560001542
向2-溴-2-苯基丁酸甲酯(2g，7.8mmol)和K2CO3(2.16mg，15.7mmol)在DMF(20ml)中的搅拌溶液中添加水合肼(1.95g，31.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24h。完成后，将反应混合物倒入水(30ml)中，然后将其用EA(30ml X3)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩以去除溶剂。将残余物用EA(50ml)稀释，并且然后用H2O(25ml x2)洗涤以去除水合肼。将所得有机溶液浓缩以得到残余物。将残余物用HCl水溶液(4M)酸化，并且然后用EA(25ml X2)洗涤以去除易溶于EA中的杂质。将水溶液在减压下浓缩并且干燥以得到呈白色固体的产物(1.0g，52.6％)，将所述产物不经进一步纯化直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.41(d,J＝4Hz,4H),7.39-7.35(m,1H),3.72(s,3H),2.21-2.14(m,2H),0.74(t,J＝8Hz,3H)ppm。MS:M/e 209(M+1)+。
步骤B：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丁酸甲酯
Figure BDA0002909572560001543
向2-肼基-2-苯基丁酸甲酯盐酸盐(1g，4.09mmol)在乙腈(30ml)中的搅拌溶液中添加2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(0.94g，4.90mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h，并且然后加热至60℃，将其在60℃下搅拌2h。完成后，将反应混合物过滤。将滤液在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过柱色谱用PE:EA(4:1)纯化以得到呈黄色固体的产物(0.55g，39％)。MS:M/e 346(M+1)+。
步骤C：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2- 苯基丁酸甲酯
Figure BDA0002909572560001551
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丁酸甲酯(0.55g，1.59mmol)、呋喃-2-碳酰肼(0.20g，1.59mmol)和DIEA(0.41g，3.18mmol)在DMSO(15ml)中的溶液在110℃下搅拌15h。完成后，将反应混合物倒入H2O(15ml)中，并且然后用EA(20ml X3)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过柱色谱用PE:EA(1:2)纯化以得到呈浅黄色固体的产物(0.57g，82％)。MS:M/e 436(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-苯基丁酸甲酯
Figure BDA0002909572560001552
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丁酸甲酯(0.57g，1.31mmol)在BSA(5ml)和HMDS(5ml)中的溶液在110℃下搅拌15h。完成后，将反应混合物浓缩。将残余物用NaHCO3水溶液(饱和，15ml)稀释，并且然后用EA(20ml X3)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过柱色谱用PE:EA(10:1)纯化以得到呈黄色固体的产物(0.28g，51％)。MS:M/e 418(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-苯基丁酸
Figure BDA0002909572560001561
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丁酸甲酯(0.28g，0.67mmol)在乙醇(15ml)中的搅拌溶液中添加NaOH(0.27g，6.75mmol)在H2O(5ml)中的溶液。将混合物在70℃下搅拌4h。完成后，将反应混合物浓缩以去除乙醇。将残余物用H2O(15ml)稀释，并且然后用HCl水溶液(4M)酸化至pH＝3至4。将沉淀物过滤。将滤饼用H2O(15ml)洗涤，并且然后干燥以得到呈白色固体的产物(0.25g，92％)。MS:M/e 404(M+1)+。
步骤F：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丁-1-酮
Figure BDA0002909572560001562
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丁酸(0.12g，0.30mmol)、HATU(0.12g，0.33mmol)和DIEA(0.12g，0.89mmol)在THF(10ml)中的搅拌溶液中添加1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(70mg，0.30mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15mlX2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EA(1:5)纯化以得到产物(35.9mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(s,1H),8.07(s,2H),7.95(s,1H),7.44(d,J＝4Hz,2H),7.38(d,J＝4Hz,2H),7.34-7.22(m,2H),6.77-6.65(m,5H),3.94(t,J＝4Hz,2H),3.56(t,J＝4Hz,2H),3.51-3.40(m,2H),3.26(s,3H),3.15-2.86(m,3H),2.77(q,2H),2.70-2.63(m,1H),2.60-2.51(m,2H),0.63(t,J＝8Hz,3H)ppm。MS:M/e 622(M+1)+。
化合物A85：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(4-(4-(3-(哌啶-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001571
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(70mg，0.18mmol)、HATU(75mg，0.20mmol)和DIEA(70mg，0.54mmol)在THF(10ml)中的搅拌溶液中添加1-(4-(3-(哌啶-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪(55mg，0.18mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(10:1)纯化以得到产物(33.4mg，28％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.35-7.27(m,3H),7.25(d,J＝4Hz,1H),7.20(d,J＝8Hz,2H),6.75-6.70(m,5H),3.85(t,J＝4Hz,2H),3.78-3.52(m,2H),3.31-3.29(m,2H),3.10-2.85(m,4H),2.33(s,3H),1.86-1.76(m,2H),1.52-1.34(m,7H),1.24-1.06(m,5H)ppm。MS:M/e 675(M+1)+。
化合物A86：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3-氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001572
步骤A：2-(3-氟苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001573
在0℃下向2-(3-氟苯基)乙酸(5g，32.47mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中逐滴添加氯化亚砜(5.80g，48.70mmol)，添加后，将反应混合物在室温下搅拌3h。将混合物浓缩，用冰水(20mL)淬灭，用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至5:1)纯化以得到呈黄色油状物的2-(3-氟苯基)乙酸甲酯(5.12g，93.87％)。MS:M/e 169(M+1)+。
步骤B：2-(3-氟苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001581
在-78℃下，向LDA(44.64mmol)在THF(20mL)中的溶液中逐滴添加2-(3-氟苯基)乙酸甲酯(5g，29.76mmol)。添加后，将反应混合物缓慢加温至室温并搅拌2h。然后在-40℃下向反应混合物中添加碘甲烷(12.68g，89.29mmol)。添加后，将反应混合物缓慢加温至室温并搅拌2h。将混合物用冰水(20mL)淬灭，用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至5:1)纯化以得到呈黄色油状物的2-(3-氟苯基)丙酸甲酯(4.12g，76.07％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30–7.25(m,1H),7.07(d,J＝7.7Hz,1H),7.02(d,J＝9.9Hz,1H),6.95(td,J＝8.4,1.7Hz,1H),3.67(s,3H),1.50(d,J＝7.2Hz,3H)。MS:M/e 183(M+1)+。
步骤C：2-溴-2-(3-氟苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001582
将2-(3-氟苯基)丙酸甲酯(4.12g，22.64mmol)、NBS(4.84g，27.16mmol)、BPO(0.274g，1.132mmol)在四氯化碳(20mL)中的混合物在70℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，将残余物用PE洗涤并且过滤，将滤液浓缩以得到呈黄色油状物的2-溴-2-(3-氟苯基)丙酸甲酯(5.32g，90.38％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34–7.28(m,1H),7.07(d,J＝7.7Hz,1H),7.02(d,J＝9.3Hz,1H),6.95(td,J＝8.4,2.3Hz,1H),3.81(s,3H),2.29(s,3H)。
步骤D：2-(3-氟苯基)-2-肼基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001583
将2-溴-2-(3-氟苯基)丙酸甲酯(5.32g，20.46mmol)、水合肼(4.84g，81.85mmol)在CH3CN(20mL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将混合物用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用水(10mL x3)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到呈棕色油状物的2-(3-氟苯基)-2-肼基丙酸甲酯(3.10g，71.46％)。MS:M/e 213(M+1)+。
步骤E：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(3-氟苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001591
将2-(3-氟苯基)-2-肼基丙酸甲酯(3.10g，14.62mmol)、2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(2.79g，14.62mmol)在CH3CN(20mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，然后加温至70℃并且搅拌2h。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至2:1)纯化以得到呈黄色固体的产物(4.03g，78.97％)。MS:M/e 350(M+1)+。
步骤F：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2- (3-氟苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001592
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(3-氟苯基)丙酸甲酯(4.03g，11.55mmol)、呋喃-2-碳酰肼(1.75g，13.86mmol)、DIPEA(2.98g，23.09mmol)在DMSO(5mL)中的混合物在120℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(20mLx3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至1:1)纯化以得到呈黄色固体的产物(4.39g，86.60％)。MS:M/e 440(M+1)+。
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3-氟苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001593
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(3-氟苯基)丙酸甲酯(4.39g，9.95mmol)、(E)-N-(三甲基甲硅烷基)乙酰亚胺三甲基甲硅烷基酯(3mL)、六甲基二硅氮烷(HMDS，3mL)的混合物在120℃下搅拌过夜。将反应混合物浓缩，在50℃下在MeOH(10mL)和水(2mL)中搅拌1h。然后浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至1:1)纯化以得到呈白色固体的产物(3.75g，89.5％)。MS:M/e 422(M+1)+。
步骤H：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3-氟苯基)丙酸
Figure BDA0002909572560001601
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3-氟苯基)丙酸甲酯(3.75g，8.91mmol)、氢氧化锂(3.74g，89.07mmol)在MeOH(5mL)和水(2mL)中的混合物在50℃下搅拌过夜。将反应混合物用盐酸酸化，用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至1:2)纯化以得到呈白色固体的产物(3.45g，95.16％)。MS:M/e 408(M+1)+。
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(3-氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001602
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3-氟苯基)丙酸(3.45g，8.48mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(2.40g，10.17mmol)、HATU(4.83g，12.71mmol)、DIPEA(3.28g，25.43mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(3.75g，70.78％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36(s,1H),8.13(s,2H),7.97–7.94(m,1H),7.33(dd,J＝14.6,8.2Hz,1H),7.24(dd,J＝3.4,0.7Hz,1H),7.12(td,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.05(d,J＝11.1Hz,1H),6.88(d,J＝8.2Hz,1H),6.84(s,1H),6.80(d,J＝7.9Hz,3H),6.74(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),4.00–3.94(m,3H),3.88–3.64(m,2H),3.62–3.56(m,3H),3.27(s,3H),3.18–2.65(m,6H),2.38(s,3H)。MS:M/e 626(M+1)+。
化合物A87：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001611
步骤A：2-(2-氟苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001612
在0℃下向2-(2-氟苯基)乙酸(5g，32.47mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中逐滴添加氯化亚砜(5.80g，48.70mmol)，添加后，将反应混合物在室温下搅拌3h。将混合物浓缩，用冰水(20mL)淬灭，用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至5:1)纯化以得到呈黄色油状物的2-(2-氟苯基)乙酸甲酯(5.23g，95.88％)。MS:M/e 169(M+1)+。
步骤B：2-(2-氟苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001613
在-78℃下，向LDA(44.64mmol)在THF(20mL)中的溶液中逐滴添加2-(2-氟苯基)乙酸甲酯(5g，29.76mmol)。添加后，将反应混合物缓慢加温至室温并搅拌2h。然后在-40℃下向反应混合物中添加碘甲烷(12.68g，89.29mmol)。添加后，将反应混合物缓慢加温至室温并搅拌2h。将混合物用冰水(20mL)淬灭，用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至5:1)纯化以得到呈黄色油状物的2-(2-氟苯基)丙酸甲酯(4.33g，79.94％)。MS:M/e 183(M+1)+。
步骤C：2-溴-2-(2-氟苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001621
将2-(2-氟苯基)丙酸甲酯(4.33g，23.79mmol)、NBS(5.08g，28.55mmol)、BPO(0.288g，1.190mmol)在四氯化碳(20mL)中的混合物在70℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，将残余物用PE洗涤并且过滤，将滤液浓缩以得到呈黄色油状物的2-溴-2-(2-氟苯基)丙酸甲酯(5.66g，91.50％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.76(td,J＝8.1,1.6Hz,1H),7.37–7.30(m,1H),7.19(td,J＝7.7,1.1Hz,1H),7.03(ddd,J＝11.4,8.2,1.1Hz,1H),3.80(s,3H),2.25(s,3H)。
步骤D：2-(2-氟苯基)-2-肼基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001622
将2-溴-2-(2-氟苯基)丙酸甲酯(5.66g，21.77mmol)、水合肼(5.14g，87.08mmol)在CH3CN(20mL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将混合物用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用水(10mL x3)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到呈棕色油状物的2-(2-氟苯基)-2-肼基丙酸甲酯(2.95g，63.92％)。MS:M/e 213(M+1)+。
步骤E：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(2-氟苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001623
将2-(2-氟苯基)-2-肼基丙酸甲酯(2.95g，13.92mmol)、2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(2.69g，13.91mmol)在CH3CN(20mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，然后加温至70℃并且搅拌2h。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至2:1)纯化以得到呈黄色固体的2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(2-氟苯基)丙酸甲酯(3.56g，73.33％)。MS:M/e 350(M+1)+。
步骤F：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2- (2-氟苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001631
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(2-氟苯基)丙酸甲酯(3.56g，10.20mmol)、呋喃-2-碳酰肼(1.54g，12.24mmol)、DIPEA(2.63g，20.28mmol)在DMSO(5mL)中的混合物在120℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(20mLx3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至1:1)纯化以得到呈黄色固体的2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(2-氟苯基)丙酸甲酯(3.95g，88.21％)。MS:M/e 440(M+1)+。
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(2-氟苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001632
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(2-氟苯基)丙酸甲酯(3.95g，8.997mmol)、(E)-N-(三甲基甲硅烷基)乙酰亚胺三甲基甲硅烷基酯(3mL)、HMDS(3mL)的混合物在120℃下搅拌过夜。将反应混合物浓缩，在50℃下在MeOH(10mL)和水(2mL)中搅拌1h。然后浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至1:1)纯化以得到呈白色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)丙酸甲酯(3.30g，87.12％)。MS:M/e 422(M+1)+。
步骤H：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(2-氟苯基)丙酸
Figure BDA0002909572560001633
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)丙酸甲酯(3.30g，7.838mmol)、氢氧化锂(3.14g，78.38mmol)在MeOH(5mL)和水(2mL)中的混合物在50℃下搅拌过夜。将反应混合物用盐酸酸化，用EtOAc(20mLx3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至1:2)纯化以得到呈白色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)丙酸(2.87g，89.74％)。MS:M/e 408(M+1)+。
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(2-氟苯基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001641
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)丙酸(2.87g，7.052mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(2.00g，8.462mmol)、HATU(4.02g，10.58mmol)、DIPEA(2.73g，21.15mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(3.45g，78.16％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.09(s,2H),7.95(s,1H),7.39(dd,J＝12.6,7.0Hz,1H),7.25(q,J＝8.4Hz,2H),7.10(t,J＝7.5Hz,1H),6.78–6.66(m,6H),3.96(m,2H),3.72(s,8H),3.58(m,2H),3.27(s,3H),2.44(s,3H)。MS:M/e 626(M+1)+。
化合物A88：3-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
Figure BDA0002909572560001642
步骤A：3-(哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0002909572560001651
向3-(哌嗪-1-基)苯甲酸(1g，4.85mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液中逐滴添加SOCl2(1.15g，9.76mmol)。添加后，将反应混合物在60℃下搅拌过夜。除去大部分溶剂，得到残余物，将其用EtOAc/K2CO3水溶液处理，并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到呈无色油状物的目标化合物(0.5g，46.8％)。MS:M/e 221(M+1)+。
步骤B：3-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0002909572560001652
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(300mg，0.77mmol)、步骤A的产物(170mg，0.77mmol)、HATU(353mg，0.92mmol)和DIPEA(199mg，1.54mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并用盐水萃取，用Na2SO4干燥，浓缩并通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝4:1至1:1)纯化，得到呈白色固体的目标化合物(412mg，90.5％)。MS:M/e 592(M+1)+。
步骤C：3-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸
Figure BDA0002909572560001653
向步骤C的产物(410mg，0.69mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2.0M，10mL)。添加后，将反应搅拌过夜。除去大部分MeOH，得到水层，将水层用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩以得到呈白色固体的目标化合物(350mg，87.9％)。MS:M/e 578(M+1)+。
步骤D：3-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
Figure BDA0002909572560001661
将步骤C的产物(50mg，0.087mmol)、二甲胺盐酸盐(7.1mg，0.087mmol)、HATU(40mg，0.104mmol)和DIPEA(22.4mg，0.174mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中然后用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝10:1)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(21mg，40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.07(s,2H),7.95(s,1H),7.38–7.14(m,7H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),6.77–6.68(m,3H),3.89–3.56(m,2H),325-2.95(m,4H),2.91(s,3H),2.80(s,3H),2.76–2.56(m,2H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 605(M+1)+。
化合物A89：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(4-(3-(哌啶-1-羰基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001662
将3-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(50mg，0.087mmol)、哌啶(7.4mg，0.087mmol)、HATU(40mg，0.104mmol)和DIPEA(22.4mg，0.174mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中然后用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(PE/EA＝1:2)纯化以得到目标化合物(27mg，48.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.07(s,2H),7.95(s,1H),7.40–7.13(m,7H),6.84(d,J＝8.4Hz,1H),6.75-6.72(m,1H),6.70–6.63(m,2H),3.86–3.42(m,4H),3.26–2.86(m,6H),2.34(s,3H),1.64–1.21(m,8H)ppm。MS:M/e 645(M+1)+。
化合物A90：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(4-(3-(环己氨基羰基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001663
将3-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(50mg，0.087mmol)、环己胺(8.6mg，0.087mmol)、HATU(40mg，0.104mmol)和DIPEA(22.4mg，0.174mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中然后用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EA)纯化以得到目标化合物(28mg，48.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.08(s,2H),8.01(d,J＝8.0Hz,1H),7.95(s,1H),7.40–7.15(m,9H),6.95–6.86(m,1H),6.77–6.71(m,1H),3.80-3.62(mz,2H),3.26–2.92(m,4H),2.85–2.59(m,2H),2.35(s,3H),1.75(m,4H),1.66–1.53(m,1H),1.38–1.18(m,5H),1.19–1.03(m,1H)ppm。MS:M/e 659(M+1)+。
化合物A91：3-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N-((3-羟基氧杂环丁烷-3-基)甲基)苯甲酰胺
Figure BDA0002909572560001671
将3-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(50mg，0.087mmol)、3-(氨基甲基)氧杂环丁烷-3-醇(8.9mg，0.087mmol)、HATU(40mg，0.104mmol)和DIPEA(22.4mg，0.174mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中然后用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝10:1)纯化以得到目标化合物(27mg，46.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(t,J＝6.0Hz,1H),8.32(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.39-7.17(m,9H),6.97-6.92(m,1H),6.76-6.71(m,1H),5.83(s,1H),4.45(d,J＝6.4Hz,2H),4.36(d,J＝6.4Hz,2H),3.86–3.58(m,2H),3.51(d,J＝6.0Hz,2H),3.26–2.86(m,4H),2.85–2.62(m,2H),2.35(s,3H)ppm。MS:M/e 663(M+1)+。
化合物A92：4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N-甲基苯甲酰胺
Figure BDA0002909572560001681
将4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(40mg，0.07mmol)、甲胺盐酸盐(20mg，0.30mmol)、HATU(40mg，0.1mmol)和DIEA(30mg，0.23mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到呈黄色固体的目标化合物(8.5mg，20.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.09(br,3H),7.95(d,J＝0.9Hz,1H),7.63(d,J＝8.9Hz,2H),7.38–7.15(m,6H),6.80(d,J＝8.9Hz,2H),6.74(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),3.87–3.54(m,2H),3.28–3.13(m,3H),3.10–2.92(m,2H),2.71(d,J＝4.4Hz,4H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 591(M+1)+。
化合物A93：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001682
步骤A：2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001691
在-78℃下在N2下向2-(2-甲氧基苯基)乙酸甲酯(5.0g，27.7mmol)在60mL的THF中的搅拌溶液中添加LDA(15mL，2.0M)。将所得混合物搅拌30min。逐滴添加MeI(12.0g，84.5mmol)。将反应混合物加温至室温并且搅拌5小时。将混合物用50mL的H2O淬灭，用EA(50mL x3)萃取。将有机萃取物合并，用盐水(50mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将残余物通过柱色谱纯化以得到呈浅黄色油状物的标题产物(4.9g，91％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.27–7.16(m,2H),6.97–6.91(m,1H),6.87(d,J＝8.0Hz,1H),4.05(q,J＝7.2Hz,1H),3.82(s,3H),3.65(s,3H),1.45(d,J＝7.2Hz,3H)。
步骤B：2-溴-2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯。
Figure BDA0002909572560001692
在-78℃下在N2下向2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯(2.9g，14.9mmol)在30mL的THF中的搅拌溶液中添加LDA(8.5mL，2.0M)。将所得混合物搅拌30min。添加TMSCl(1.8g，16.5mmol)，并且将所得混合物在室温下搅拌2小时。在-78℃下向混合物中添加NBS(4.2g，23.5mmol)。将所得混合物在-78℃下搅拌1小时。然后将反应混合物加温至室温并再搅拌1小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液(30mL)淬灭，用EA(50mL x2)萃取。将合并的萃取物用盐水(50mL x2)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩以得到呈浅棕色油状物的标题产物(3.3g，粗品)，将所述产物直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.76(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.37–7.30(m,1H),7.01(t,J＝7.6Hz,1H),6.86(d,J＝8.0Hz,1H),3.81(s,3H),3.74(s,3H),2.21(s,3H)。
步骤C：2-肼基-2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯。
Figure BDA0002909572560001693
在室温下向2-溴-2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯(3.3g，12.1mmol)在MeCN(20mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(5mL，100mmol)，并在50℃下搅拌所得混合物16小时。添加20mLEA并将混合物用盐水(20mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩至干燥，得到呈棕色油状物的标题产物(2.9g，粗品)。MS:M/e 225(M+1)+。
步骤D：2-(1-甲氧基-2-(2-甲氧基苯基)-1-氧代丙烷-2-基)肼-1-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0002909572560001701
在0℃下向2-肼基-2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯(280mg，1.0mmol)和Et3N(5.0g，50mmol)在CH2Cl2(20mL)中的混合物中逐滴添加Boc2O(3.3g，15.1mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌16小时。将混合物浓缩，用30mL EA稀释，并用盐水(20mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化以得到呈浅棕色油状物的标题产物(660mg，3个步骤8％)。MS:M/e 325(M+1)+。
步骤E：2-肼基-2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯盐酸盐。
Figure BDA0002909572560001702
向2-(1-甲氧基-2-(2-甲氧基苯基)-1-氧代丙-2-基)肼-1-甲酸叔丁酯(660mg，2.04mmol)在EA(10mL)中的搅拌溶液中添加HCl/EA(3mL，4M)，并将所得混合物在室温下搅拌24小时。将混合物浓缩至干燥，添加10mL EA，并再次浓缩所得悬浮液，以除去过量的HCl，得到呈灰色固体的标题产物(520mg，粗品)。MS:M/e 225(M+1)+。
步骤F：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酸 甲酯。
Figure BDA0002909572560001703
将2-肼基-2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯盐酸盐(510mg，2.0mmol)和2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(385mg，2.0mmol)在MeCN(14mL)中的混合物在室温下搅拌16小时。然后将所得混合物在70℃下加热1小时。冷却至室温。添加1.0mL DIEA。将混合物浓缩并用20mL EA稀释，用盐水(10mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱(PE/EA＝7:1至3:1)和制备型TLC(PE/EA＝2:1)纯化所得残余物，得到呈无色固体的标题产物(136mg，2个步骤19％)。MS:M/e 362(M+1)+。
步骤G：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2- (2-甲氧基苯基)丙酸甲酯。
Figure BDA0002909572560001711
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯(136mg，0.37mmol)、呋喃-2-碳酰肼(70mg，0.55mmol)和DIEA(300mg，2.32mmol)在DMSO(2mL)中的混合物在110℃下加热16小时。将混合物倒入20mL H2O中。沉淀出淡黄色固体，并将其过滤，用H2O(10mL)洗涤。将滤饼在灯下干燥，得到呈浅黄色固体的标题产物(52mg，粗品)。MS:M/e 452(M+1)+。
步骤H：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯。
Figure BDA0002909572560001712
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯(52mg，粗品)、HMDS(1.5mL)和BSA(1.5mL)的混合物在110℃下加热16小时。将混合物浓缩至干燥。将所得残余物用10mL EA稀释，用盐水(5mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EA＝2:1)纯化以得到呈浅黄色油状物的标题产物(22mg，粗品)。M/e 434(M+1)+。
步骤I：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酸
Figure BDA0002909572560001721
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酸甲酯(22mg，粗品)在MeOH中的溶液中添加NaOH水溶液(4M，2mL)，并且将所得混合物在室温下搅拌16小时。用HCl(2M)酸化至pH约5后浓缩混合物。将固体用CH2Cl2/MeOH(3:1，20mL)处理。将悬浮液过滤，并将滤液浓缩至干燥，得到呈浅黄色固体的标题产物(20mg，粗品)。M/e 420(M+1)+。
步骤J：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001722
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酸(20mg，粗品)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(20mg，0.085mmol)、DIEA(50mg，0.38mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(27mg，0.071mmol)，并且将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用10mL EA稀释，用NaHCO3(5mLx2)、盐水(5mL x2)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，并通过制备型TLC(EA：100％)纯化所得油状物，冻干后得到标题产物(19.0mg，产率：4个步骤8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.04(s,2H),7.96(s,1H),7.31(t,J＝7.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.2Hz,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,1H),6.87(t,J＝7.6Hz,1H),6.81–6.64(m,6H),4.00–3.93(m,2H),3.94–3.80(m,1H),3.77(s,3H),3.62–3.57(m,2H),3.51–3.35(m,1H),3.28(s,3H),3.24–2.90(m,3H),2.78–2.61(m,2H),2.39(s,3H),2.04–1.93(m,1H)。MS:M/e 638(M+1)+。
化合物A94：2-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N-环己基苯甲酰胺
Figure BDA0002909572560001731
步骤A：2-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯
Figure BDA0002909572560001732
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)丙酸(500mg，1.285mmol)、2-(哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(424mg，1.928mmol)、HATU(977mg，2.571mmol)、DIPEA(497mg，3.856mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(5mL)中并且用EtOAc(5mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(603mg，79.2％)。MS:M/e 592(M+1)+。
步骤B：2-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸
Figure BDA0002909572560001733
将2-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(603mg，1.019mmol)、氢氧化锂(204mg，5.093mmol)在MeOH(5mL)和水(2mL)中的混合物在50℃下搅拌过夜。将反应混合物用盐酸酸化，用EtOAc(5mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(490mg，83.4％)。MS:M/e 578(M+1)+。
步骤C：2-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N-环己基苯甲酰胺
Figure BDA0002909572560001741
将2-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(100mg，0.1733mmol)、环己胺(21mg，0.2080mmol)、HATU(79mg，0.2080mmol)、DIPEA(67mg，0.5199mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(5mL)中并用DCM(5mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(85mg，74.54％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.82(d,J＝7.8Hz,1H),8.32(s,1H),8.14(s,2H),7.96(s,1H),7.59(d,J＝7.6Hz,1H),7.37–7.27(m,4H),7.27–7.17(m,3H),7.09(t,J＝7.4Hz,1H),7.01(d,J＝8.0Hz,1H),6.74(dd,J＝3.0,1.6Hz,1H),3.72(s,2H),3.62(dd,J＝11.1,7.2Hz,2H),2.92(s,5H),2.33(s,3H),1.73(d,J＝22.9Hz,2H),1.58(t,J＝13.1Hz,2H),1.45(d,J＝12.6Hz,1H),1.25–1.11(m,J＝14.6,10.4Hz,2H),1.09–0.90(m,3H)。MS:M/e 659(M+1)+。
化合物A95：2-(5-氨基-2-(3-甲基吡嗪-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001742
Figure BDA0002909572560001751
步骤A：3-甲基吡嗪-2-甲酸甲酯
Figure BDA0002909572560001752
在0℃下向MeOH(50mL)的搅拌溶液中逐滴添加SOCl2(8.6g，72.4mmol)。然后将3-甲基吡嗪-2-甲酸(5g，36.2mmol)添加至反应中。将混合物在60℃下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩，并且将残余物溶解在EA(50mL)中。将有机相用饱和NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。将有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(用EA/PE＝1/1洗脱)纯化以得到呈黄色固体的标题化合物(3.9g，产率：70.9％)。MS:M/e 153(M+1)+。
步骤B：3-甲基吡嗪-2-碳酰肼
Figure BDA0002909572560001753
在室温下向步骤A的产物(0.9g，5.9mmol)在MeOH(20mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(1.5g，23.7mmol)。将混合物在60℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，并且将残余物溶解在EA(30mL)中。将有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物(460mg，产率：51.1％)直接用于下一步骤。MS:M/e 153(M+1)+。
步骤C：2-(6-氨基-4-(2-(3-甲基吡嗪-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1- 基)-2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001761
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯(1g，3mmol)、步骤B的产物(460mg，3mmol)和Et3N(610mg，6mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在100℃下搅拌过夜。将反应冷却至室温。将混合物倒入水(30mL)中。从体系中形成沉淀物。在室温下搅拌30min后，将混合物过滤。收集固体并且在空气中干燥。将黄色固体(1.6g，粗品)直接用于下一步骤。MS:M/e 448(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(3-甲基吡嗪-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001762
将步骤C的产物(1g，2.2mmol)在BSA(5mL)和HMDS(5mL)中的混合物在100℃下搅拌过夜。将反应冷却至室温并且在减压下浓缩。将残余物溶解在H2O(10mL)和MeOH(10mL)中。将混合物在80℃下搅拌2小时。去除MeOH，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤并且在空气中干燥。将棕色固体(300mg，两个步骤的产率：37.5％)直接用于下一步骤。MS:M/e 430(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(3-甲基吡嗪-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸
Figure BDA0002909572560001763
在室温下向步骤D的产物在MeOH(6mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2mL)。将混合物在室温下搅拌过夜。去除溶剂，并且将残余物溶解在水(20mL)中。将混合物用HCl水溶液(2M)酸化至pH＝3至4。从体系中沉淀出固体。将混合物过滤并且收集固体。将白色固体在空气中干燥并且直接用于下一步骤。MS:M/e 416(M+1)+。
步骤F：2-(5-氨基-2-(3-甲基吡嗪-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1, 5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001771
将1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(102mg，0.43mmol)、步骤E的产物(180mg，0.43mmol)、HATU(179mg，0.47mmol)和Et3N(0.1mL，过量)在DMF(2mL)中的混合物在0℃下搅拌2小时。然后将反应加温至室温并搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EA(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EA：100％)纯化以得到呈白色固体的标题化合物(15mg，产率：5.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(d,J＝4Hz,2H),8.40(s,1H),8.26(br.s,2H),7.53–7.40(m,2H),7.38–7.26(m,3H),7.17(d,J＝8Hz,2H),7.00(d,J＝8.0Hz,2H),4.11–4.02(m,2H),3.69–3.60(m,2H),3.54–3.36(m,2H),3.28(s,3H),3.23–2.97(m,2H),2.89(s,3H),2.56–2.50(m,4H),2.41(s,3H)ppm。MS:M/e 634(M+1)+。
化合物A96：2-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
Figure BDA0002909572560001772
将2-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(100mg，0.1733mmol)、二甲胺盐酸盐(17mg，0.2080mmol)、HATU(79mg，0.2080mmol)、DIPEA(67mg，0.5199mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(5mL)中并用DCM(5mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到产物(73mg，69.74％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(d,J＝6.6Hz,1H),8.14(s,2H),7.96(s,1H),7.37–7.20(m,7.2Hz,6H),7.18(d,J＝7.1Hz,1H),7.06–6.95(m,2H),6.86(t,J＝8.9Hz,1H),6.74(s,1H),3.62–3.37(m,4H),3.13–2.69(m,8H),2.32(s,3H),1.47–1.26(m,6H)。MS:M/e 605(M+1)+。
化合物A97：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-甲基-3-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001781
步骤A：四氟硼酸重氮苯盐(benzenediazonium tetrafluoroborate)
Figure BDA0002909572560001782
在0℃下向苯胺(5g，0.054mol)在HBF4(水溶液，30％，20ml)和H2O(20ml)中的搅拌溶液中添加NaNO2(7.4g，0.11mol)在H2O(20ml)中的溶液。将反应混合物在0℃下搅拌1h。完成后，将沉淀物过滤。将滤饼用丙酮和MTBE重结晶，得到呈白色固体的产物(7.6g，74％)。
步骤B：2-碘-2-甲基-3-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001783
在0℃至10℃下向四氟硼酸重氮苯盐(7g，36.5mmol)和甲基丙烯酸甲酯(4.0g，40.0mmol)在DMF(30ml)中的搅拌溶液中添加KI(6.7g，40.4mmol)在H2O(15ml)中的溶液。将反应混合物在0℃至20℃下搅拌3h。完成后，将反应混合物倒入水(30ml)中，并且然后用EA(30ml X3)萃取。将合并的有机层用水(20ml)洗涤，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩得到残余物。将残余物通过用PE:EA(20:1)的柱色谱纯化以得到呈浅黄色液体的产物(4.8g，43％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32-7.26(m,3H),7.23-7.16(m,2H),3.79(s,3H),3.75(d,J＝8Hz,1H),3.45(d,J＝8Hz,1H),2.00(s,3H)ppm
步骤C：2-肼基-2-甲基-3-苯基丙酸甲酯盐酸盐
Figure BDA0002909572560001791
将2-碘-2-甲基-3-苯基丙酸甲酯(4.2g，13.8mmol)和水合肼(3.45g，55.2mmol)在MeCN(35ml)中的溶液在25℃下搅拌24h。完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用EA(35ml)稀释，并且然后用H2O(20ml x2)洗涤以去除水合肼。将有机层浓缩以得到残余物。将残余物用HCl(水溶液，1M，30ml)稀释，并且然后用EA(20ml X2)洗涤。将水层冻干，得到呈白色固体的产物(1.2g，36％)。MS:M/e 209(M+1)+。
步骤D：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-甲基-3-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001792
将2-肼基-2-甲基-3-苯基丙酸甲酯盐酸盐(1.1g，5.29mmol)和2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(1.0g，5.29mmol)在MeCN(25ml)中的溶液在室温下搅拌过夜，并且然后在70℃下搅拌3h。完成后，将反应混合物过滤。将滤液在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过柱色谱用PE:EA(10:1)纯化以得到呈黄色固体的产物(0.57g，31％)。MS:M/e 346(M+1)+。
步骤E:2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2- 甲基-3-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001801
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-甲基-3-苯基丙酸甲酯(0.55g，1.59mmol)、呋喃-2-碳酰肼(0.22g,1.75mmol)和DIEA(0.41g，3.18mmol)在DMSO(10ml)中的溶液在110℃下搅拌过夜。完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过柱色谱用PE:EA(1:10)纯化以得到呈黄色固体的产物(0.30g，43％)。MS:M/e436(M+1)+。
步骤F：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-甲基-3-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560001802
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-甲基-3-苯基丙酸甲酯(0.30g，0.69mmol)在BSA(5ml)和HMDS(5ml)中的溶液在110℃下搅拌过夜。完成后，将反应混合物在减压下浓缩以得到残余物。将残余物用NaHCO3(水溶液，20ml)稀释，并且然后用EA(20ml X2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，并且然后通过制备型TLC用PE:EA(1:1)纯化，得到呈黄色固体的产物(0.15g，51％)。MS:M/e 418(M+1)+。
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-甲基-3-苯基丙酸
Figure BDA0002909572560001803
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲基-3-苯基丙酸甲酯(0.15g，0.36mmol)和NaOH(0.14g，3.60mmol)在EtOH(10ml)和H2O(2ml)中的溶液在70℃下搅拌2h。完成后，将反应混合物在减压下浓缩以去除EtOH。将残余物用H2O(10ml)稀释，并且然后用HCl(水溶液，4M)酸化至pH＝3至4。将沉淀物过滤，用水洗涤，并且然后干燥以得到呈黄色固体的产物(0.10g，69％)。MS:M/e 404(M+1)+。
步骤H：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-甲基-3-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001811
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲基-3-苯基丙酸(0.10g，0.25mmol)、HATU(0.10g，0.26mmol)和DIEA(0.10g，0.78mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(0.059g，0.25mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EA(1:3)纯化以得到产物(13mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.14(s,3H),7.95(s,1H),7.22(d,J＝4Hz,1H),7.15-7.05(m,3H),6.78-6.63(m,7H),3.96-3.89(m,3H),3.81-3.58(m,2H),3.56(t,J＝4Hz,2H),3.54-3.42(m,5H),3.25(s,3H),3.09-2.90(m,2H),1.79(s,3H)ppm。MS:M/e 622(M+1)+。
化合物A98：4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N-环己基苯甲酰胺
Figure BDA0002909572560001812
向4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(80mg，0.14mmol)、HATU(79mg，0.21mmol)和DIPEA(54mg，0.42mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加环己胺(21mg，0.21mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15mlX2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(10:1)纯化以得到产物(15.3mg，17％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.84(d,J＝8Hz,1H),7.65(d,J＝8Hz,2H),7.38-7.16(m,6H),6.79(d,J＝8Hz,2H),6.74(s,1H),3.90-3.55(m,3H),3.25-3.11(m,2H),3.10-2.72(m,4H),2.34(s,3H),1.79-1.65(m,4H),1.60-1.54(m,1H),1.31-1.22(m,5H)ppm。MS:M/e 659(M+1)+。
化合物A99：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(4-(2-(哌啶-1-羰基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001821
将2-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(100mg，0.1733mmol)、哌啶(18mg，0.2080mmol)、HATU(79mg，0.2080mmol)、DIPEA(67mg，0.5199mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(5mL)中并用DCM(5mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(82mg，73.47％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(d,J＝6.6Hz,1H),8.14(s,2H),7.96(s,1H),7.37–7.20(m,6H),7.18(d,J＝7.1Hz,1H),7.06–6.95(m,2H),6.86(t,J＝8.9Hz,1H),6.74(s,1H),3.82(s,1H),3.62–3.37(m,4H),3.19–2.56(m,65.0Hz,10H),2.32(s,3H)。MS:M/e 645(M+1)+。
化合物A100：2-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N-((3-羟基氧杂环丁烷-3-基)甲基)苯甲酰胺
Figure BDA0002909572560001822
将2-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(100mg，0.1733mmol)、3-(氨基甲基)氧杂环丁烷-3-醇(21mg，0.2080mmol)、HATU(79mg，0.2080mmol)、DIPEA(67mg，0.5199mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(5mL)中并用DCM(5mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(82mg，73.47％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),8.30(s,1H),8.10(s,2H),7.96(s,1H),7.77(d,J＝7.5Hz,1H),7.39–7.26(m,7.1Hz,4H),7.26–7.17(m,3H),7.14(t,J＝7.4Hz,1H),6.97(d,J＝8.0Hz,1H),6.74(s,1H),5.97(s,1H),4.35–4.24(m,4H),3.76(s,2H),3.57(s,2H),3.05(s,2H),2.89(s,4H),2.35(s,3H)。MS:M/e 645(M+1)+。
化合物A101：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(4-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001831
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(70mg，0.18mmol)、HATU(75mg，0.20mmol)和DIEA(70mg，0.54mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加1-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪(62mg，0.20mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(5:1)纯化以得到产物(35.9mg，31％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.09(s,2H),7.96(s,1H),7.37-7.28(m,3H),7.27-7.15(m,3H),6.82(d,J＝8Hz,2H),6.76(d,J＝8Hz,3H),4.17(t,J＝4Hz,2H),3.91-3.60(m,2H),3.59-3.39(m,4H),3.31-3.29(m,1H),3.23-2.70(m,7H),2.33(s,3H),2.00-1.80(m,4H)ppm。MS:M/e 647(M+1)+。
化合物A102：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(4-(4-(哌啶-1-羰基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001832
向4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(80mg，0.14mmol)、HATU(79mg，0.21mmol)和DIPEA(54mg，0.42mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加哌啶(18mg，0.21mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(10:1)纯化以得到产物(4.5mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.08(s,2H),7.95(s,1H),7.35-7.29(m,3H),7.23(d,J＝4Hz,1H),7.18(t,J＝8Hz,4H),6.79(d,J＝12Hz,2H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),3.90-3.52(m,2H),3.42-3.37(m,3H),3.31(s,2H),3.27-2.85(m,5H),2.34(s,3H),1.60-1.55(m,2H),1.49-1.41(m,4H)ppm。MS:M/e 645(M+1)+。
化合物A103：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(邻甲苯基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001841
步骤A：2-(邻甲苯基)丙酸乙酯
Figure BDA0002909572560001842
在-78℃下在N2气氛下向LDA(在THF中2M，16.7mL，33.4mmol)在THF(80mL)中的冷却溶液中逐滴添加2-(邻甲苯基)乙酸乙酯(5.4g，30.3mmol)在THF(10mL)中的溶液。添加后，将溶液再搅拌20分钟，然后逐滴添加CH3I(12.9g，90.9mmol)。将混合物加温至室温过夜，并且然后用水(30mL)淬灭。将水层用乙酸乙酯(100mL)萃取。将有机层用盐水(80mL)洗涤，干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝50:1)纯化以得到呈无色油状物的产物(5.5g，95％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.27-7.13(m,4H),4.16-4.07(m,2H),3.96-3.91(m,1H),2.37(s,3H),1.46(d,J＝8.0Hz,3H),1.19(t,J＝8.0Hz,3H)ppm。
步骤B：2-溴-2-(邻甲苯基)丙酸乙酯
Figure BDA0002909572560001851
在-78℃下在N2气氛下向LDA(在THF中2M，11.5mL，23mmol)在THF(130mL)中的冷却溶液中逐滴添加2-(邻甲苯基)丙酸乙酯(4g，20.8mmol)在THF(10mL)中的溶液。将溶液再搅拌30分钟，然后逐滴添加TMSCl(2.5g，23mmol)。将混合物加温至室温保持2小时，然后冷却至-78℃。分批添加NBS(7.4g，41.6mmol)，并且将溶液在-78℃下搅拌1小时。使反应混合物经1小时达到室温并搅拌2小时。用饱和NaHCO3溶液淬灭后，将溶液用乙酸乙酯(100mL)萃取。将有机层干燥，浓缩，得到粗产物(5.6g，粗品)，将其直接用于下一步骤。
步骤C：2-肼基-2-(邻甲苯基)丙酸乙酯盐酸盐
Figure BDA0002909572560001852
将NH2NH2.H2O(10mL，0.2mol)添加至2-溴-2-(邻甲苯基)丙酸乙酯(5.6g，20.8mmol)在CH3CN(50mL)中的溶液中。将反应混合物在60℃下加热过夜。将溶液浓缩，添加水(20mL)并且用乙酸乙酯(30mL x3)萃取。将合并的有机层干燥，浓缩，添加HCl/EA(2M，5mL)并蒸发，得到呈HCl盐的产物(3.6g，67％)。MS:M/e 223(M+1)+
步骤D：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(邻甲苯基)丙酸乙酯
Figure BDA0002909572560001861
将2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(2.6g，13.8mmol)和2-肼基-2-(邻甲苯基)丙酸乙酯(3.6g，13.8mmol)在CH3CN(35mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，并且然后在50℃下加热3小时。将反应混合物过滤。将滤液蒸发，添加水(20mL)并用乙酸乙酯(20mL)萃取。将有机相干燥，浓缩，并且通过柱色谱(PE:EA＝5:1)进一步纯化以得到呈白色固体的所需产物(1.2g，25％)。MS:M/e 360(M+1)+
步骤E：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2- (邻甲苯基)丙酸乙酯
Figure BDA0002909572560001862
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(邻甲苯基)丙酸乙酯(1.2g，3.3mmol)、呋喃-2-碳酰肼(416mg，3.3mmol)和DIEA(852mg，6.6mmol)在DMSO(15mL)中的混合物在115℃下加热过夜。在油泵下蒸发溶剂。向残余物中添加水(10mL)，浆化并且过滤。将滤饼用水洗涤，干燥以得到粗产物，将所述粗产物直接用于下一步骤(1.1g，73％)。MS:M/e 450(M+1)+
步骤F：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(邻甲苯基)丙酸乙酯
Figure BDA0002909572560001863
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(邻甲苯基)丙酸乙酯(400mg，1mmol)在BSA(2mL)和HMDS(2mL)中的溶液在120℃下加热3小时。将溶剂在油泵下蒸发。向残余物中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(15mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩，并且通过柱色谱(PE:EA＝10:1至3:1)纯化以得到呈白色固体的所需产物(50mg，13％)。MS:M/e 432(M+1)+
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-(邻甲苯基)丙酸
Figure BDA0002909572560001871
将NaOH溶液(24mg，0.6mmol，在1mL的水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(邻甲苯基)丙酸乙酯(25mg，0.06mmol)在乙醇(2mL)中的溶液中。将溶液在70℃加热3小时。将溶剂蒸发。向残余物中添加水(2mL)，用2M HCl酸化至pH＝3至4。将溶液冻干，得到粗产物，将其用于下一步骤(20mg，粗品)。MS:M/e 404(M+1)+
步骤H：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(邻甲苯基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001872
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(邻甲苯基)丙酸(20mg，0.05mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(12mg，0.05mmol)、HATU(23mg，0.06mmol)和DIPEA(13mg，0.10mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EA)纯化以得到所需产物(5mg，17％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.11(br.s,2H),8.02(s,1H),7.31-7.18(m,4H),6.94(d,J＝8.0Hz,1H),6.85-6.80(m,5H),4.03(t,J＝4.0Hz,2H),3.90(br.s,1H),3.65(t,J＝4.0Hz,2H),3.60(br.s,1H),3.34(s,3H),3.30-2.80(m,6H),2.52(s,3H),2.36(s,3H)ppm。MS:M/e 622(M+1)+
化合物A104：4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
Figure BDA0002909572560001881
向4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(80mg，0.14mmol)、HATU(79mg，0.21mmol)和DIPEA(54mg，0.42mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加二甲胺盐酸盐(17mg，0.21mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(10:1)纯化以得到产物(13.5mg，16％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.07(s,2H),7.95(s,1H),7.37-7.29(m,3H),7.25-7.18(m,5H),6.79(d,J＝8Hz,2H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),3.95-3.50(m,3H),3.24-2.95(m,5H),2.90(s,6H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e605(M+1)+。
化合物A105：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2,4-二甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001882
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、1-(2,4-二甲氧基苯基)哌嗪盐酸盐(20mg，0.077mmol)、HATU(35.3mg，0.093mmol)和DIPEA(20mg，0.134mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到目标化合物(23mg，50.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.09(s,2H),7.96(s,1H),7.37–7.17(m,6H),6.75(m,1H),6.56(d,J＝8.4Hz,1H),6.45(d,J＝2.4Hz,1H),6.32(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),3.67(m,1H),3.65(d,J＝4.4Hz,6H),3.31(s,1H),3.16-2.6(m,4H),2.33(s,3H),2.31–2.09(m,2H)ppm。MS:M/e 594(M+1)+。
化合物A106：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001891
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、1-(2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(23.3mg，0.077mmol)、HATU(35.3mg，0.093mmol)和DIPEA(20mg，0.134mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以得到目标化合物(25mg，50.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.09(s,2H),7.96(s,1H),7.38–7.17(m,6H),6.78–6.72(m,1H),6.55(d,J＝8.4Hz,1H),6.46(s,1H),6.33(d,J＝8.4Hz,1H),4.07–3.91(m,2H),3.66(s,5H),3.62–3.57(m,2H),3.27(s,3H),3.12–2.69(m,4H),2.33(s,3H),2.31–2.07(m,2H)ppm。MS:M/e 638(M+1)+。
化合物A107：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001892
步骤A：4-(4-(2-溴乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001893
向4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(7g，25.1mmol)在乙腈(150mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(10g，72.4mmol)和1,2-二溴乙烷(10g，53.3mmol)。添加后，将反应混合物搅拌4天。将反应混合物过滤。将滤液倾倒到H2O(150mL)中并用EtOAc(100mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝4:1)纯化以得到呈白色固体的4-(4-(2-溴乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.5g，15.6％)。MS:M/e 385(M+1)+。
步骤B：4-(4-(2-(甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001901
向4-(4-(2-溴乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(218mg，0.57mmol)在MeCN/H2O(10mL/1mL)中的混合物中添加甲胺盐酸盐(330mg，5mmol)和DIEA(774mg，6mmol)。添加后，将反应混合物密封并在90℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，向混合物中添加H2O(20ml)，并用DCM(20mL x3)萃取混合物。将合并的有机相用Na2SO4干燥，在真空中浓缩，并通过柱色谱(DCM/MeOH＝20:1至5:1)纯化，得到呈白色固体的目标化合物(130mg，68.4％)。MS:M/e 336(M+1)+。
步骤C：N-甲基-2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-胺
Figure BDA0002909572560001902
将步骤B的产物(130mg，0.39mmol)在HCl/EA(4M，10ml)中的混合物在室温下搅拌2h。将混合物过滤，并将滤饼用EtOAc(10ml)洗涤，在40℃下干燥，得到呈白色固体的产物(80mg，87.7％)。MS:M/e 236(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001903
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、HATU(35mg，0.092mmol)和DIPEA(90mg，0.697mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌0.5h。经15分钟将N-甲基-2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-胺(64mg，0.237mmol)在DMF(2ml)中的溶液缓慢添加到混合物中。将反应混合物在室温下搅拌1h。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且过滤。将滤饼干燥并通过制备型HPLC纯化，得到目标化合物(8mg，17.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),8.32(s,1H),8.09(s,2H),7.95(s,1H),7.26(m,6H),6.79(m,5H),4.08(m,2H),3.70(m,4H),3.27(s,3H),2.97(s,4H),2.61(s,2H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 607.2(M+1)+。
化合物A108：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001911
步骤A：(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷
Figure BDA0002909572560001912
向2-溴乙-1-醇(8.8mg，70.5mmol)在DCM(50mL)中的搅拌混合物中添加TBDMSCl(10.6g，70.5mmol)和咪唑(9.6g，141mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。向混合物中添加H2O(100ml)并且用DCM(50mL x3)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在真空中浓缩以得到呈无色液体的产物(16g，96.3％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d6)δ3.80(t,J＝6.5Hz,2H),3.30(t,J＝6.5Hz,2H),0.82(s,9H)。MS:M/e 356(M+1)+。
步骤B：4-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560001913
在0℃下向4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(278mg，1mmol)在DMF(5ml)中的混合物中添加NaH(160mg，4mmol，60％在油中)。将混合物在室温下搅拌30分钟并添加(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(476mg，2mmol)。将所得溶液在70℃下搅拌过夜。将混合物冷却至0℃并添加H2O。将混合物用EA(50mL x3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，在真空中浓缩，并通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2/1至1/1)纯化，得到呈白色固体的目标化合物(110mg，34.2％)。MS:M/e 323(M+1)+。
步骤C：2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-醇
Figure BDA0002909572560001921
将4-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11mg，0.34mmol)在HCl/EA(4M，10ml)中的混合物在室温下搅拌2h。将混合物过滤，并将滤饼用EtOAc(10ml)洗涤，在40℃下干燥，得到呈白色固体的产物(70mg，92.7％)。MS:M/e 223(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(4-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001922
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-醇(40mg，0.18mmol)、HATU(35mg，0.092mmol)和DIPEA(60mg，0.46mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且过滤。将滤饼干燥并通过制备型HPLC纯化，得到目标化合物(20mg，43.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.09(s,2H),7.95(s,1H),7.36–7.15(m,6H),6.75(dd,J＝6.7,4.9Hz,5H),4.53(s,4H),3.85(t,J＝5.0Hz,2H),3.71(s,1H),3.64(t,J＝4.9Hz,2H),2.99(s,4H),2.34(s,3H)。MS:M/e 594(M+1)+。
化合物A81a：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001931
将(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-甲基-4-(2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)哌嗪盐酸盐(72mg，0.16mmol)、HATU(61mg，0.16mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)和制备型HPLC纯化以得到呈TFA盐的所需产物(50mg，50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.09(br.s,2H),7.95(s,1H),7.31-7.18(m,6H),6.81-6.75(m,5H),4.08(s,2H),3.70-2.97(m,18H),2.80(s,3H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 676(M+1)+
化合物A81b：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001932
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-甲基-4-(2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)哌嗪盐酸盐(72mg，0.16mmol)、HATU(61mg，0.16mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)和制备型HPLC纯化以得到呈TFA盐的所需产物(40mg，40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.09(br.s,2H),7.95(s,1H),7.33-7.18(m,6H),6.81-6.74(m,5H),4.09(s,2H),3.70-2.97(m,18H),2.80(s,3H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 676(M+1)+
化合物A82a：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001941
将(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-甲基-4-(3-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)哌嗪盐酸盐(72mg，0.16mmol)、HATU(61mg，0.16mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM:MeOH＝15:1)和制备型HPLC纯化以得到呈TFA盐的所需产物(45mg，44％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.08(br.s,2H),7.95(s,1H),7.31-7.18(m,6H),6.75-6.72(m,5H),3.86(t,J＝8.0Hz,2H),3.70(br.s,2H),2.93(br.s,4H),2.74-2.50(m,5H),2.50-2.33(m,9H),1.80(s,2H)ppm。MS:M/e 690(M+1)+
化合物A82b：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560001942
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-甲基-4-(3-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)哌嗪盐酸盐(72mg，0.16mmol)、HATU(61mg，0.16mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM:MeOH＝15:1)和制备型HPLC纯化以得到呈TFA盐的所需产物(48mg，47％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.09(br.s,2H),7.95(d,J＝4.0Hz,1H),7.33-7.18(m,6H),6.75-6.74(m,5H),3.91(t,J＝8.0Hz,2H),3.7-2.50(m,21H),2.33(s,3H),1.96(s,2H)ppm。MS:M/e 690(M+1)+
化合物B1：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N,N-二甲基-2-苯基乙酰胺
Figure BDA0002909572560001951
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(37.5mg，0.1mmol)、二甲胺(2M，6.75mL)和HATU(46mg，0.12mmol)在DMF(2mL)中的混合物搅拌过夜。将混合物倾倒到H2O(15mL)中并用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝2:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(10mg，24.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18(s,1H),8.15(br.s,1H),7.95(s,1H),7.35(m,5H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.79(s,1H),6.74(m,1H),2.88(s,3H),2.77(s,3H)ppm。MS:M/e 403(M+1)+。
化合物B2：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(哌啶-1-基)乙-1-酮。
Figure BDA0002909572560001952
在室温下向哌啶(10mg，0.12mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(30mg，0.08mmol)、DIEA(50mg，0.39mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(36mg，0.09mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加5mL的EA并且将混合物用NaHCO3(3mL x2)、盐水(3mL x2)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EA＝1:2)纯化以得到标题产物(12.0mg，产率：34％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(s,1H),8.13(s,2H),7.95(s,1H),7.43–7.31(m,5H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.78(s,1H),6.75–6.70(m,1H),3.63–3.50(m,1H),3.44–3.33(m,2H),3.27–3.18(m,1H),1.55–1.36(m,4H),1.12–1.00(m,1H),1.00–0.88(m,1H)。MS:M/e443(M+1)+。
化合物B3：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001953
在室温下向1,2,3,4-四氢异喹啉(200mg，1.5mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(400mg，1.07mmol)、DIPEA(620mg，4.8mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加HATU(460mg，1.2mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物倒入20mL的H2O中。沉淀出白色固体并且将其过滤。将固体用H2O洗涤，在高真空下干燥并且通过柱色谱纯化以得到标题产物(335.0mg，产率：46％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.38–8.02(m,3H),7.95(s,1H),7.46–6.92(m,11H),6.74(s,1H),4.75–4.32(m,2H),3.81–3.46(m,2H),2.84–2.63(m,1H),2.42–2.32(m,1H)。MS:M/e491(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物B3分离成两种对映体立体异构体：化合物B3a(较早的峰)，和化合物B3b(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560001961
Figure BDA0002909572560001962
化合物B4：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001963
在室温下向1,2,3,4-四氢喹啉(20mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(40mg，0.11mmol)、DIPEA(100mg，0.77mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(50mg，0.13mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加20mL的EA并且将混合物用盐水(20mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EA＝1:2)纯化以得到标题产物(21.0mg，产率：39％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34–7.99(m,3H),7.95(s,1H),7.72(d,J＝7.6Hz,1H),7.56–7.17(m,6H),7.17–7.07(m,2H),7.04–6.78(m,2H),6.74(s,1H),3.80–3.49(m,2H),1.92–1.60m,2H),1.37–1.16(m,2H)。MS:M/e 491(M+1)+。
化合物B5：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(7-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001971
在室温下向7-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉(20mg，0.12mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(40mg，0.11mmol)、DIPEA(100mg，0.77mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(50mg，0.13mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加20mL的EA并且将混合物用盐水(10mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EA＝1:2)纯化以得到标题产物(16.0mg，产率：28％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24–8.03(m,3H),7.95(s,1H),7.50–7.26(m,6H),7.24(s,1H),7.21–7.03(m,2H),6.95–6.88(m,1H),6.74(s,1H),4.78–4.33(m,2H),3.80–3.49(m,2H),2.84–2.27(m,2H)。MS:M/e 525(M+1)+。
化合物B6：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(7-(三氟甲氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001972
在室温下向7-(三氟甲氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉(35mg，0.16mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、DIPEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(65mg，0.17mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加10mL的EA并且将混合物用盐水(10mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EA＝1:2)纯化以得到标题产物(25.0mg，产率：36％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34–8.01(m,3H),7.95(s,1H),7.50–6.59(m,11H),4.85–4.37(m,2H),3.89–3.47(m,2H),2.89–2.29(m,2H)。MS:M/e 575(M+1)+。
化合物B7：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(6-氟-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001981
在室温下向6-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉(200mg，1.32mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(400mg，1.1mmol)、DIEA(550mg，4.3mmol)在DMF(8mL)中的混合物中添加HATU(480mg，1.3mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加50mL的EA并且将混合物用盐水(20mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过柱色谱纯化以得到标题产物(175.0mg，产率：32％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29–8.04(m,3H),7.95(s,1H),7.51–6.69(m,11H),4.81–4.28(m,2H),3.86–3.47(m,2H),2.86–2.71(m,1H),2.41–2.35(m,1H)。MS:M/e 509(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物B7分离成两种对映体立体异构体：化合物B7a(较早的峰)，和化合物B7b(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560001982
Figure BDA0002909572560001983
Figure BDA0002909572560001991
化合物B8：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(3,4-二氢-2,7-萘啶-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001992
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、1,2,3,4-四氢-2,7-萘啶(21.4mg，0.16mmol)、HATU(60.8mg，0.16mmol)和DIEA(0.1mL)在DMF(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应用水(5mL)稀释并且用EA(10mL x2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(EA：100％)纯化以得到标题化合物(9mg，产率：14％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(s,1H),8.28(d,J＝4Hz,1H),8.22–8.04(m,3H),8.00–7.83(m,1H),7.46–7.20(m,6H),7.08(d,J＝4Hz,1H),6.95(s,1H),6.74(s,1H),4.84–4.61(m,1H),4.55–4.33(m,1H),3.83–3.70(m,1H),3.64–3.55(m,1H),2.87–2.74(m,1H),2.40–2.27(m,1H)ppm。MS:M/e 492(M+1)+。
化合物B9：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(5,8-二氢-1,7-萘啶-7(6H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560001993
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、5,6,7,8-四氢-1,7-萘啶(21.4mg，0.16mmol)、HATU(60.8mg，0.16mmol)和DIEA(0.1mL)在DMF(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应用水(5mL)稀释并且用EA(10mL x2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(EA：100％)纯化以得到标题化合物(10mg，产率：15.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41–8.32(m,1H),8.23–8.06(m,3H),7.95(s,1H),7.55–7.28(m,6H),7.24(d,1H),7.21–7.05(m,1H),7.01–6.91(m,1H),6.74(s,1H),4.78–4.62(m,1H),4.54–4.24(m,1H),3.87–3.71(m,1H),3.70–3.55(m,1H),2.88–2.73(m,1H),2.41–2.30(m,1H)ppm。MS:M/e 492(M+1)+。
化合物B10：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(8-氟-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002001
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、8-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐(30mg，0.16mmol)、HATU(61mg，0.16mmol)和DIEA(34mg，0.26mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到产物(15mg，23％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19-8.05(m,2H),7.95(s,1H),7.44-7.17(m,7H),7.08-6.90(m,3H),6.74-6.71(m,1H),4.73-4.29(m,2H),3.82-3.54(m,1H),2.35(br.s,2H)ppm。MS:M/e 509(M+1)+
化合物B11：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(7-氟-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002002
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、7-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐(30mg，0.16mmol)、HATU(61mg，0.16mmol)和DIEA(34mg，0.26mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到产物(15mg，23％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19-8.09(m,2H),7.95(s,1H),7.36-7.24(m,6H),7.11-6.90(m,4H),6.74(br.s,1H),4.74-4.39(m,2H),3.76-3.49(m,2H),2.98-2.75(m,2H),2.33(s,1H)ppm。MS:M/e 509(M+1)+
化合物B12：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(5-氟-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002011
在室温下向5-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐(30mg，0.16mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(65mg，0.17mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加20mL的EA并且将混合物用盐水(10mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EA＝1:2)纯化以得到标题产物(26.0mg，产率：39％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34–7.89(m,4H),7.49–7.04(m,7H),7.04–6.48(m,4H),4.81–4.34(m,2H),3.84–3.51(m,2H),2.88–2.21(m,2H)。MS:M/e 509(M+1)+。
化合物B13：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(7,8-二氢-1,6-萘啶-6(5H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002012
在室温下向5,6,7,8-四氢-1,6-萘啶(23mg，0.17mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(65mg，0.17mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加20mL的EA并且将混合物用盐水(10mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(EA/MeOH＝20:1)纯化以得到标题产物(28.0mg，产率：44％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40–8.23(m,1H),8.24–7.90(m,4H),7.69–6.70(m,10H),4.81–4.35(m,2H),4.00–3.56(m,2H),2.98–2.35(m,2H)。MS:M/e 492(M+1)+。
化合物B14：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(7-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002021
步骤A：7-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560002022
将1,2,3,4-四氢异喹啉-7-醇(300mg，2mmol)、(Boc)2O(480mg，2.2mmol)和三乙胺(404mg，4mmol)在DCM(10mL)中的溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩，得到粗产物，将其直接用于下一步骤(500mg，100％)。MS:M/e 250(M+1)+
步骤B：7-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560002023
将7-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(500mg，2mmol)、1-溴-2-甲氧基乙烷(558mg，4mmol)和K2CO3(552mg，4mmol)在DMF(10mL)中的溶液在室温下搅拌过夜。向反应混合物中添加水(10mL)，用EA(10mL)萃取，并用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩，得到粗产物，将其通过柱色谱(PE:EA＝10:1)纯化，得到产物(160mg，26％)。MS:M/e 308(M+1)+
步骤C：7-(2-甲氧基乙氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐
Figure BDA0002909572560002031
向7-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(60mg，0.2mmol)在EA(2mL)中的溶液中添加HCl/EA(4M，2mL)。将混合物在室温下搅拌2小时，然后在减压下蒸发并直接用于下一步骤。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(7-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002032
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(72mg，0.2mmol)、7-(2-甲氧基乙氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐(40mg，0.2mmol)、HATU(114mg，0.3mmol)和DIEA(52mg，0.4mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到产物(30mg，28％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(s,1H),8.17(br.s,2H),7.95(s,1H),7.39-7.24(m,6H),6.93-6.91(m,2H),6.80(s,1H),6.74-6.62(m,2H),4.69-4.59(m,1H),4.38(s,1H),4.04(t,J＝4.0Hz,1H),3.83-3.75(m,1H),3.68-3.46(m,4H),3.29(s,2H),3.22(s,1H),2.72-2.68(m,1H),2.27(s,1H)ppm。MS:M/e 565(M+1)+
化合物B15：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5- c]嘧啶-7-基)-1-(6-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002033
Figure BDA0002909572560002041
步骤A：6-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560002042
向6-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(500mg，2mmol)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(552mg，4mmol)和1-溴-2-甲氧基乙烷(305.8mg，2.2mmol)。添加后，将反应混合物搅拌2天。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到呈棕色油状物的目标化合物(0.62g，100％)。MS:M/e 308(M+1)+。
步骤B：6-(2-甲氧基乙氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐
Figure BDA0002909572560002043
向步骤A的产物(0.62g，2mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌溶液中添加EtOAc/HCl(4.0M，4mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。过滤反应混合物，并收集滤饼，干燥，得到呈白色固体的目标化合物(400mg，82.1％)。MS:M/e 208(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(6-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002044
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.133mol)、步骤B的产物(27.6mg，0.133mmol)、HATU(60mg，0.16mmol)和DIPEA(34mg，0.266mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型HPLC纯化以得到目标化合物(15mg，20％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24–8.07(m,3H),7.95(s,1H),7.42-7.31(m,5H),7.25-7.24(m,1H),7.14–6.48(m,5H),4.69–4.27(m,2H),4.02-3.85(m,1H),3.81–3.47(m,4H),3.27(d,J＝6.6Hz,3H),2.86–2.64(m,1H),2.34(m,1H)ppm。MS:M/e 565(M+1)+。
化合物B16：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(8-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002051
步骤A：8-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560002052
向8-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(500mg，2mmol)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(552mg，4mmol)和1-溴-2-甲氧基乙烷(305.8mg，2.2mmol)。添加后，将反应混合物搅拌2天。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到呈棕色油状物的目标化合物(0.63g，100％)。MS:M/e 308(M+1)+。
步骤B：8-(2-甲氧基乙氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐
Figure BDA0002909572560002061
向步骤A的产物(0.63g，2mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌溶液中添加EtOAc/HCl(4.0M，4mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。过滤反应混合物，并收集滤饼，干燥，得到呈白色固体的目标化合物(350mg，71.8％)。MS:M/e 208(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-1-(8-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002062
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.133mol)、步骤B的产物(27.6mg，0.133mmol)、HATU(60mg，0.16mmol)和DIPEA(34mg，0.266mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的目标化合物(20mg，26.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24–8.05(m,3H),7.95(s,1H),7.50–7.28(m,5H),7.24(d,J＝2.8Hz,1H),7.17–6.28(m,5H),4.70–4.34(m,2H),4.03(m,2H),3.78–3.49(m,4H),3.28-3.24(d,J＝32.4Hz,3H),2.70–2.60(m,1H),2.21(m,1H)ppm。MS:M/e 565(M+1)+。
化合物B17：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(7-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002063
在室温下向7-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(26mg，0.17mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、DIPEA(80mg，0.62mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(65mg，0.17mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加20mL的EA并且将混合物用盐水(10mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EA＝1:2)纯化以得到标题产物(25.0mg，产率：28％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ8.27–7.96(m,1H),7.97–7.73(m,3H),7.46–7.37(m,2H),7.37–7.25(m,3H),7.20(d,J＝3.2Hz,1H),7.07–6.75(m,4H),6.74–6.66(m,1H),4.75–4.28(m,2H),3.83–3.48(m,2H),2.94–2.59(m,2H),2.32–2.00(m,3H)。MS:M/e 505(M+1)+。
化合物B18：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002071
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.129mmol)、1,2,3,4-四氢异喹啉(17mg，0.129mmol)、HATU(50mg，0.129mmol)和DIPEA(33mg，0.258mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并用EA(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EA＝1:2)纯化以得到目标化合物(37mg，56.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.03-7.83(m,3H),7.27-7.21(m,6H),6.96(s,1H),6.82(s,1H),6.73(s,1H),6.61-6.48(m,1H),6.20(s,1H),4.75-4.67(m,1H),4.00(d,J＝16.0Hz,1H),3.76(d,J＝16.0Hz,1H),3.55(s,1H),2.89(s,1H),2.70(d,J＝17.7Hz,1H),2.31(s,3H)ppm。MS:M/e 505(M+1)+。
化合物B19：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(6-氟-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002072
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.129mmol)、6-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉(24.2mg，0.129mmol)、HATU(50mg，0.129mmol)和DIPEA(33mg，0.258mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并用EA(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EA＝1:2)纯化以得到目标化合物(28mg，41.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),7.94(s,3H),7.40–7.11(m,6H),6.99-6.82(m,1H),6.73(s,1H),6.62(s,1H),6.27-6.22(m,1H),4.74-4.64(m,1H),3.96(d,J＝16.1Hz,1H),3.74-7.70(m,1H),3.52(s,1H),2.89(m,1H),2.73(m,1H),2.30(s,3H)ppm。MS:M/e 523(M+1)+。
化合物B20：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N,N-二甲基-2-苯基丙酰胺
Figure BDA0002909572560002081
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、二甲胺盐酸盐(6.3mg，0.077mmol)、HATU(35.3mg，0.092mmol)和DIPEA(20mg，0.154mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝10:1)纯化以得到目标化合物(17mg，53％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(d,J＝1.7Hz,1H),8.05(s,2H),7.96(s,1H),7.37-7.23(m,4H),7.19-7.14(m,2H),6.79–6.70(m,1H),2.90(s,3H),2.32(s,6H)ppm。MS:M/e 417(M+1)+。
化合物B21：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002082
步骤A：4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c] 嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560002091
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.2570mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(57mg，0.3085mmol)、HATU(146mg，0.3856mmol)、DIPEA(99mg，0.7712mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(96mg，67.0％)。MS:M/e 558(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-苯基-1-(哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002092
将4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(96mg，0.1723mmol)在HCl于二噁烷(3mL，4mol/L)中的溶液中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物浓缩并通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化，得到呈白色固体的产物(63mg，79.98％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.12(s,2H),7.96(s,1H),7.31(dd,J＝15.9,8.3Hz,3H),7.25(d,J＝3.2Hz,1H),7.17(d,J＝7.1Hz,2H),6.75(d,J＝1.4Hz,1H),3.58(s,2H),3.19–2.63(m,6H),2.30(s,3H)。MS:M/e 458(M+1)+。
化合物B22：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002093
将2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷(15mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、HATU(43mg，0.11mmol)和DIPEA(0.2mL)在DMF(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EA(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EA：100％)纯化以得到呈白色固体的标题化合物(19mg，产率：39.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.04(br.s,2H),7.97–7.89(m,1H),7.35–7.21(m,4H),7.07–6.90(m,2H),6.81–6.66(m,1H),4.69–4.42(m,3H),4.35(s,1H),4.24–4.03(m,2H),3.83–3.68(m,1H),3.10–2.93(m,1H),2.30(s,3H)ppm。MS:M/e 471(M+1)+。
化合物B23：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(吡咯烷-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002101
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、吡咯烷(10mg，0.14mmol)、DIEA(55mg，0.42mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(46mg，0.12mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用10mL的EA稀释，用盐水(5mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油状物通过制备型TLC(EA：100％)纯化，以在冻干后得到标题产物(8.0mg，产率18％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(d,J＝1.6Hz,1H),8.05(s,2H),7.96(s,1H),7.38–7.21(m,4H),7.14(d,J＝8.0Hz,2H),6.77–6.71(m,1H),3.55–3.38(m,2H),2.67–2.59(m,1H),2.40–2.30(m,4H),1.69–1.49(m,4H)。MS:M/e 443(M+1)+。
化合物B24：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(氮杂环丁烷-1-基)-2-苯基丙-1-酮。
Figure BDA0002909572560002102
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、氮杂环丁烷(10mg，0.17mmol)、DIEA(55mg，0.42mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(46mg，0.12mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用10mL的EA稀释，用盐水(5mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油状物通过制备型TLC(EA：100％)纯化，以在冻干后得到标题产物(21mg，产率49％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.05(s,2H),7.96(s,1H),7.39–7.18(m,4H),7.04(d,J＝7.2Hz,2H),6.75(s,1H),4.11–3.77(m,2H),3.67–3.47(m,1H),3.04–2.80(m,1H),2.32(s,3H),2.07–1.90(m,2H)。MS:M/e 429(M+1)+。
化合物B25：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002111
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、HATU(108mg，0.28mmol)和DIEA(100mg，0.78mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加4-甲基哌啶-4-醇(33mg，0.28mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EA(1:5)纯化以得到产物(6.65mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.07(s,2H),7.96(s,1H),7.36-7.28(m,3H),7.24(d,J＝4Hz,1H),7.19(d,J＝8Hz,2H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),4.22(s,1H),4.18-3.95(m,1H),3.16-3.01(m,1H),2.99-2.78(m,2H),2.28(s,3H),1.19-1.16(m,4H),0.92(s,3H)ppm。MS:M/e 487(M+1)+。
化合物B26：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002112
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.2570mmol)、7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷(39mg，0.3085mmol)、HATU(146mg，0.3856mmol)、DIPEA(99mg，0.7712mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(62mg，48.43％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.07(s,2H),7.96(s,1H),7.32–7.23(m,4H),7.04(d,J＝6.5Hz,2H),6.75(dd,J＝3.3,1.7Hz,1H),3.72(q,J＝9.6Hz,2H),3.47–3.33(m,4H),2.33(s,3H),1.48(dd,J＝12.5,6.0Hz,2H),1.36–1.20(m,4H)。MS:M/e 499(M+1)+。
化合物B27：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002121
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.2570mmol)、1-甲基哌嗪(31mg，0.3085mmol)、HATU(146mg，0.3856mmol)、DIPEA(99mg，0.7712mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(76mg，62.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.10(s,2H),7.96(d,J＝0.9Hz,1H),7.35–7.27(m,3H),7.25(d,J＝3.3Hz,1H),7.13(s,2H),6.75(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),3.59(dd,J＝10.1,6.2Hz,2H),3.33(s,3H),3.11(dd,J＝7.2,4.2Hz,2H),2.33(s,3H)。MS:M/e 472(M+1)+。
化合物B28：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((S)-3-甲氧基哌啶-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002122
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、(S)-3-甲氧基哌啶(8.9mg，0.077mmol)、HATU(35mg，0.092mmol)和DIPEA(30mg，0.23mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并用EA(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，在真空中浓缩并且通过柱色谱(EA)纯化以得到目标化合物(20mg，53.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.07(s,2H),7.96(s,1H),7.31-7.20(m,6H),6.74(dd,J＝3.1,1.7Hz,1H),3.97(s,1H),3.3–3.14(m,4H),2.82-2.67(m,3H),2.29(d,J＝15.4Hz,3H),1.66(m,2H),1.23(m,2H)。MS:M/e 487(M+1)+。
化合物B29：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((S)-3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002131
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加(S)-3-甲氧基吡咯烷盐酸盐(18mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EA(1:5)纯化以得到产物(30.1mg，50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30-8.22(m,1H),8.04(s,2H),7.96(s,1H),7.36-7.10(m,6H),6.81-6.70(m,1H),3.83-3.47(m,3H),3.32-3.23(m,2H),3.15-2.86(m,3H),2.40-2.24(m,4H),1.70-1.67(m,1H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
化合物B30：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((R)-3-甲氧基吡咯烷-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002132
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加(R)-3-甲氧基吡咯烷盐酸盐(18mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EA(1:5)纯化以得到产物(26.5mg，44％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30-8.22(m,1H),8.05(s,2H),7.95(s,1H),7.37-7.11(m,6H),6.80-6.70(m,1H),3.83-3.44(m,3H),3.32-3.30(m,2H),3.15-2.86(m,3H),2.40-2.28(m,4H),1.71-1.66(m,1H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
化合物B31：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((R)-3-甲氧基哌啶-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002141
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加(R)-3-甲氧基哌啶(15mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EA(1:5)纯化以得到产物(15.6mg，25％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.07(s,2H),7.96(s,1H),7.38-7.12(m,6H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),4.28-3.86(m,1H),3.28(s,3H),3.26-3.08(m,2H),2.85-2.70(m,2H),2.36-2.16(m,4H),1.73-1.59(m,1H),1.31-1.03(m,2H)ppm。MS:M/e 487(M+1)+。
化合物B32：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-((R)-3-羟基哌啶-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002142
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加(R)-哌啶-3-醇盐酸盐(18mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EA(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EA(1:5)纯化以得到产物(40.5mg，67％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.05(s,2H),7.96(s,1H),7.35-7.12(m,6H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),4.97-4.00(m,2H),3.32-2.80(m,4H),2.40-2.20(m,4H),1.69-1.59(m,1H),1.28-1.01(m,2H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
化合物B33：7-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸甲酯
Figure BDA0002909572560002151
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.2570mmol)、7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸甲酯(56mg，0.3085mmol)、HATU(146mg，0.3856mmol)、DIPEA(99mg，0.7712mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(74mg，57.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.05(s,2H),7.95(d,J＝0.9Hz,1H),7.35–7.26(m,3H),7.25(d,J＝3.4Hz,1H),7.18(d,J＝7.1Hz,2H),6.74(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),3.93(s,3H),3.53(s,3H),3.00(s,2H),2.79(s,2H),2.28(s,4H),1.97–1.65(m,J＝46.8Hz,4H),1.44(d,J＝40.8Hz,2H)。MS:M/e 555(M+1)+。
化合物B34：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-1-(2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002152
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.2570mmol)、2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷(39mg，0.3085mmol)、HATU(146mg，0.3856mmol)、DIPEA(99mg，0.7712mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到呈白色固体的产物(74mg，57.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.06(s,1H),7.96(s,1H),7.38–7.26(m,3H),7.25(d,J＝3.3Hz,1H),7.18(d,J＝7.0Hz,2H),6.74(dd,J＝3.2,1.7Hz,1H),4.16(s,4H),3.47(s,2H),2.80(s,2H),1.68(s,2H),1.10(d,J＝36.9Hz,2H)。MS:M/e 499(M+1)+。
化合物C1：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002161
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)丙酸乙酯
Figure BDA0002909572560002162
室温下，向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(500mg，2.07mmol)在DMF(20mL)和K2CO3(344mg，2.49mmol)中的搅拌溶液中添加2-氯丙酸乙酯(339mg，2.49mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水(20mL)稀释，并用EA(20mL x2)萃取。将残余物(N1和N2位置化合物的混合物)直接用于下一步骤。MS:M/e 342(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)丙酸
Figure BDA0002909572560002171
在室温下向步骤A的产物(707mg，粗品，2.07mmol)在MeOH(12mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2.0M，4mL)。添加后，将混合物在60℃下搅拌3小时。将反应在减压下浓缩。将残余物溶解在水(20mL)中并且通过HCl溶液(2M)中和至pH＝3至4。在减压下浓缩水相。将残余物(N1和N2位置化合物的混合物，含有NaCl)直接用于下一步骤。MS:M/e 314(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002172
将步骤B的产物(200mg，0.64mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(190mg，0.7mmol)、HATU(267mg，0.7mmol)和Et3N(322mg，3.19mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并用EA(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，得到呈白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,1H),7.98–7.89(m,1H),7.71(s,2H),7.23–7.15(m,1H),7.04(d,J＝8.0Hz,2H),6.89(d,J＝8.0Hz,2H),6.76–6.70(m,1H),5.86(q,J＝6.8Hz,1H),4.07–4.00(m,2H),3.91–3.73(m,2H),3.72–3.66(m,2H),3.64–3.59(m,2H),3.30(s,3H),3.25–3.00(m,4H),1.71(d,J＝6.9Hz,3H)ppm。MS:M/e 532(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物C1分离成两种对映体立体异构体：化合物C1a(较早的峰)，和化合物C1b(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560002173
Figure BDA0002909572560002174
Figure BDA0002909572560002181
化合物C2：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-3-甲基丁-1-酮
Figure BDA0002909572560002182
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-3-甲基丁酸
Figure BDA0002909572560002183
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-3-甲基丁酸甲酯(150mg，0.42mmol)在MeOH(4mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2M，2mL)，并且将所得混合物搅拌2小时。将混合物用HCl(1M)中和并浓缩至干燥。添加5mL混合溶剂(CH2Cl2/MeOH＝3:1)并搅拌10分钟。将悬浮液过滤，并将滤液浓缩，得到呈白色固体的标题产物(125mg，87％)。MS:M/e 342(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-3-甲基丁-1-酮
Figure BDA0002909572560002191
在室温下向步骤A的产物(120mg，0.35mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(120mg，0.51mmol)和DIEA(250mg，1.94mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加HATU(160mg，0.42mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。添加30mL的EA并且将混合物用盐水(10mLx3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(EA/MeOH＝20:1)纯化以得到标题产物(57.0mg，产率：29％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(d,J＝1.2Hz,1H),7.96(s,1H),7.67(s,2H),7.21(d,J＝3.6Hz,1H),6.89(d,J＝8.0Hz,2H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),6.78–6.73(m,1H),5.42(d,J＝10.0Hz,1H),4.04–3.98(m,2H),3.98–3.88(m,1H),3.82–3.67(m,2H),3.66–3.59(m,3H),3.31(s,3H),3.06–2.92(m,3H),2.88–2.80(m,1H),2.76–2.64(m,1H),1.03(d,J＝6.4Hz,3H),0.77(d,J＝6.8Hz,3H)。MS:M/e 560(M+1)+。
化合物C3：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-甲基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002192
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-2-甲基丙酸
Figure BDA0002909572560002201
将NaOH溶液(352mg，在5mL的水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-甲基丙酸甲酯(750mg，2.2mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将溶液浓缩，添加水(10mL)并且用1NHCl溶液酸化至pH＝5。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的所需产物(670mg，93％)。MS:M/e 328(M+1)+
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-甲基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002202
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-甲基丙酸(100mg，0.3mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(72mg，0.3mmol)、HATU(137mg，0.36mmol)和DIEA(78mg，0.6mmol)在DMF(15mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(20mL)萃取并且用盐水(20mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩，并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到呈白色固体的所需产物(135mg，81％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,80℃)δ8.74(s,1H),7.87(s,1H),7.41(br.s,2H),7.15(d,J＝4.0Hz,1H),6.76-6.74(m,4H),6.69(s,1H),3.97(t,J＝4.0Hz,2H),3.58(t,J＝4.0Hz,2H),3.10-3.29(m,4H),3.28(s,3H),2.83(br.s,4H),1.83(s,6H)ppm。MS:M/e 546(M+1)+
化合物C4：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丁-1-酮
Figure BDA0002909572560002203
Figure BDA0002909572560002211
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)丁酸
Figure BDA0002909572560002212
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)丁酸甲酯(100mg，0.29mmol)在MeOH/H2O(3.0mL/0.5mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，0.5mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。去除大部分溶剂以得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并且过滤，收集滤饼，干燥以得到呈白色固体的目标化合物(80mg，84.1％)。MS:M/e 328(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丁-1-酮
Figure BDA0002909572560002213
将步骤A的产物(100mg，0.31mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(80mg，0.24mmol)、HATU(120mg，0.32mmol)和TEA(100mg，0.99mmol)在CH3CN(10mL)中的混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(21mg，15.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),7.95(s,1H),7.65(br,2H),7.19(d,J＝3.1Hz,1H),6.92–6.78(m,4H),6.74(d,J＝1.3Hz,1H),5.73–5.60(m,1H),4.02–3.96(m,2H),3.76(d,J＝12.8Hz,2H),3.66–3.58(m,4H),3.34(s,3H),3.10–2.83(m,4H),2.22–2.09(m,2H),0.87(t,J＝7.1Hz,3H)。MS:M/e546(M+1)+。
化合物C5：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560002221
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)戊酸
Figure BDA0002909572560002222
将NaOH溶液(304mg，在2mL水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)戊酸乙酯(700mg，1.9mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌3小时。将溶液浓缩，添加水(10mL)并且用1N HCl溶液酸化至pH＝5。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的所需产物(600mg，92％)ppm。MS:M/e 342(M+1)+
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560002223
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)戊酸(250mg，0.73mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(173mg，0.73mmol)、HATU(333mg，0.9mmol)和DIEA(181mg，1.4mmol)在DMF(20mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(20mL)萃取并且用盐水(20mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩，并且通过柱色谱(PE:EA＝2:1至EA)纯化以得到呈白色固体的所需产物(310mg，76％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),7.94(s,1H),7.65(br.s,2H),7.18(d,J＝4.0Hz,1H),6.83-6.73(m,5H),5.70(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),4.01-3.98(m,2H),3.76-3.60(m,6H),3.29(s,3H),2.98-2.90(m,4H),2.16-1.99(m,2H),1.30-1.17(m,2H),0.91(t,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 560(M+1)+
通过手性制备型HPLC将化合物C5分离成两种对映体立体异构体：化合物C5a(较早的峰)，和化合物C5b(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560002231
Figure BDA0002909572560002232
化合物C6：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-甲基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002233
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-甲基丙酸(50mg，0.15mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(43mg，0.15mmol)、HATU(69mg，0.18mmol)和DIEA(39mg，0.3mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱法(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到所需产物(32mg，36％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.85(s,1H),7.94(s,1H),7.68(br.s,2H),7.16(d,J＝4.0Hz,1H),6.76(s,1H),6.74-6.72(m,4H),3.95(t,J＝4.0Hz,2H),3.65(t,J＝4.0Hz,2H),3.54-3.52(m,2H),3.43-3.41(m,2H),3.36(br.s,3H),3.22(s,3H),2.80(br.s,5H),1.80(s,6H)ppm。MS:M/e 590(M+1)+
化合物C7：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560002241
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)戊酸(50mg，0.15mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(41mg，0.15mmol)、HATU(69mg，0.18mmol)和DIEA(390mg，0.3mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱法(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到所需产物(38mg，42％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),7.94(s,1H),7.65(br.s,2H),7.18(d,J＝4.0Hz,1H),6.84-6.73(m,5H),5.70(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),3.99(m,2H),3.70-3.41(m,10H),3.24(s,3H),2.99-2.91(m,4H),2.17-1.99(m,2H),1.30-1.18(m,2H),0.91(t,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 604(M+1)+
化合物C8：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丁-1-酮
Figure BDA0002909572560002242
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)丁酸(50mg，0.15mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(65mg，0.23mmol)、HATU(86mg，0.23mmol)和TEA(30mg，0.30mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(21mg，23.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),7.94(d,J＝1.0Hz,1H),7.67(br.,2H),7.19(d,J＝3.4Hz,1H),6.94–6.83(m,4H),6.73(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),5.64(dd,J＝8.8,6.1Hz,1H),4.03–3.98(m,2H),3.80–3.76(m,2H),3.68–3.65(m,4H),3.56(dd,J＝5.7,3.8Hz,2H),3.45(dd,J＝5.7,3.7Hz,2H),3.24(s,3H),3.15–2.89(m,4H),2.25–2.06(m,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)ppm。MS:M/e 590(M+1)+。
化合物C9：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002251
将1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(60mg，0.21mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)丙酸(30mg，0.1mmol)、HATU(40mg，0.11mmol)和DIPEA(0.4mL，过量)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(20mL)中并且用EA(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EA：100％)纯化以得到呈白色固体的标题化合物(5mg，产率：8.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),7.94(s,1H),7.65(br.s,2H),7.19(s,1H),6.96–6.78(m,4H),6.73(s,1H),5.94–5.72(m,1H),4.09–3.92(m,2H),3.84–3.51(m,8H),3.49–3.42(m,2H),3.24(s,3H),3.10–2.87(m,4H),1.80–1.59(m,3H)ppm。MS:M/e 576(M+1)+。
化合物C10：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)己-1-酮
Figure BDA0002909572560002252
Figure BDA0002909572560002261
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)己酸
Figure BDA0002909572560002262
将NaOH溶液(160mg，在2mL水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)己酸甲酯(380mg，1.0mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将溶液浓缩，添加水(10mL)并且用1N HCl溶液酸化至pH＝5。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的所需产物(355mg，97％)。MS:M/e356(M+1)+
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)己-1-酮
Figure BDA0002909572560002263
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)己酸(50mg，0.14mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(33mg，0.14mmol)、HATU(64mg，0.17mmol)和DIEA(36mg，0.28mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩，并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到呈白色固体的所需产物(16mg，20％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),7.94(d,J＝4.0Hz,1H),7.65(br.s,2H),7.18(d,J＝4.0Hz,1H),6.87-6.73(m,5H),5.67(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),4.02-3.98(m,2H),3.75-3.60(m,6H),3.29(s,3H),3.00-2.89(m,4H),2.19-2.03(m,2H),1.35-1.13(m,4H),0.85(t,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 574(M+1)+
化合物C11：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)己-1-酮
Figure BDA0002909572560002271
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)己酸(50mg，0.14mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(39mg，0.14mmol)、HATU(64mg，0.17mmol)和DIEA(36mg，0.28mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱法(PE:EA＝1:1至EA)纯化以得到所需产物(25mg，29％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),7.94(s,1H),7.65(br.s,2H),7.18(d,J＝4.0Hz,1H),6.88-6.73(m,5H),5.67(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),3.99(t,J＝4.0Hz,2H),3.76-3.55(m,8H),3.46-3.43(m,5H),3.06-2.90(m,4H),2.19-2.06(m,2H),1.35-1.13(m,4H),0.85(t,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 618(M+1)+
化合物C12：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-3-甲基丁-1-酮
Figure BDA0002909572560002272
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-3-甲基丁酸(55mg，0.16mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(50mg，0.18mmol)、DIEA(100mg，0.77mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(68mg，0.18mmol)，并且将混合物在室温下搅拌4小时。添加20mL的EA并且将混合物用盐水(10mLx3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(EA/MeOH＝20:1)纯化以得到标题产物(35.0mg，产率：36％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.68(s,1H),7.94(d,J＝1.2Hz,1H),7.65(s,2H),7.19(d,J＝3.6Hz,1H),6.92–6.77(m,4H),6.73(dd,J＝3.2,2.0Hz,1H),5.40(d,J＝10.4Hz,1H),4.04–3.96(m,2H),3.95–3.85(m,1H),3.80–3.65(m,4H),3.64–3.52(m,3H),3.44–3.42(m,2H),3.23(s,3H),3.03–2.90(m,3H),2.85–2.78(m,1H),2.72–2.62(m,1H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H),0.75(d,J＝6.4Hz,3H)。MS:M/e 604(M+1)+。
化合物C13：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002281
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)丙酸
Figure BDA0002909572560002282
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)丙酸乙酯(800g，2.35mmol)在MeOH(20mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2.0M，6.4mL)。将混合物在室温下搅拌过夜。去除溶剂，并且将残余物溶解在水(20mL)中。将混合物用HCl水溶液(2M)酸化至pH＝3至4。从体系中沉淀出固体。将混合物过滤并且收集固体。将白色固体(450mg，61.3％)在空气中干燥并且直接用于下一步骤。MS:M/e 314(M+1)+。
步骤B：2-(2-(4-(4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑 并[1,5-c]嘧啶-8-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0002909572560002291
将步骤A的产物(150mg，0.48mmol)、2-(2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(185mg，0.53mmol)、HATU(200mg，0.53mmol)和DIEA(0.5mL，过量)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(20mL)中，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤并且在空气中干燥。将黄色固体(200mg，产率：64.5％)不经进一步纯化而用于下一步骤。MS:M/e 647(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002292
在室温下向步骤B的产物在EtOH(30mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(2mL)。将混合物在回流下搅拌过夜。从体系中沉淀出棕色固体。将混合物过滤并且收集固体。将固体溶解在EtOH中，并将混合物在回流下搅拌过夜。将混合物过滤并且将固体在空气中干燥。得到呈棕色固体的标题化合物(55mg，产率：34.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),7.94(s,1H),7.65(s,2H),7.19(d,J＝4Hz,1H),6.90(d,J＝12Hz,2H),6.82(d,J＝12Hz,2H),6.73(dd,J＝4,2Hz,1H),5.99–5.71(m,1H),3.83(t,J＝6Hz,2H),3.78–3.67(m,2H),3.68–3.56(m,2H),3.12–2.88(m,4H),2.83(t,J＝6Hz,2H),1.70(d,J＝8Hz,3H)ppm。MS:M/e 517(M+1)+。
化合物C14：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002293
Figure BDA0002909572560002301
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-2-苯基乙酸
Figure BDA0002909572560002302
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-苯基乙酸甲酯(360mg，0.92mmol)在MeOH/H2O(9mL/3mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，2mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。去除大部分溶剂以得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并且过滤，收集滤饼，干燥以得到呈白色固体的目标化合物(200mg，57.8％)。MS:M/e 376(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002303
将步骤A的产物(50mg，0.13mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(55mg，0.23mmol)、HATU(75mg，0.20mmol)和TEA(40mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌5小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到呈白色固体的目标化合物(40mg，50.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(s,1H),7.92(s,1H),7.70(br.,2H),7.59–7.43(m,5H),7.15(d,J＝3.4Hz,1H),7.11(s,1H),6.86–6.77(m,4H),6.75–6.69(m,1H),4.03–3.95(m,2H),3.80–3.71(m,1H),3.71–3.57(m,4H),3.50–3.40(m,1H),3.34(s,1H),3.28(s,3H),3.10–3.01(m,1H),2.98–2.87(m,2H)ppm。MS:M/e 594(M+1)+。
化合物C15：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002311
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(40mg，0.14mmol)、HATU(84mg，0.22mmol)和TEA(40mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(32mg，37.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(s,1H),7.93(s,1H),7.77–7.66(m,2H),7.59–7.46(m,5H),7.15(d,J＝3.3Hz,1H),7.11(s,1H),6.86–6.78(m,5H),6.75–6.69(m,1H),4.02–3.96(m,2H),3.80–3.61(m,5H),3.60–3.54(m,2H),3.50–3.41(m,3H),3.24(s,3H),3.09–2.98(m,2H),2.98–2.88(m,2H)ppm。MS:M/e 638(M+1)+。
化合物C16：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-环丙基-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002312
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-7-基)-2-环丙基乙酸乙酯和2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三 唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-环丙基乙酸乙酯
Figure BDA0002909572560002321
将2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(5.0g，20.7mmol)、2-溴-2-环丙基乙酸乙酯(6.4g，31.1mmol)和K2CO3(7.1g，51.4mmol)在DMF(50mL)中的混合物在50℃加热16小时。将混合物用EA(200mL)稀释，并过滤悬浮液。将滤液用盐水(50mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得油状物通过用PE/EA(5:1至2:1)洗脱的柱色谱纯化，得到呈浅黄色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-环丙基乙酸乙酯(1.4g)，MS:M/e 368(M+1)+，以及呈浅黄色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-环丙基乙酸乙酯(1.9g)，MS:M/e 368(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-2-环丙基乙酸
Figure BDA0002909572560002322
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-环丙基乙酸乙酯(1.8g，4.9mmol)在MeOH(30mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(1M，15mL)，并且将所得混合物搅拌4小时。将混合物用HCl(1M)中和至pH＝6。沉淀出白色固体并且将其过滤，并将滤饼在IR灯下干燥，得到呈白色固体的标题产物(1.4g，84％)。MS:M/e340(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-2-环丙基-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002323
在室温下向步骤B的产物(600mg，1.77mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(460mg，1.95mmol)、DIEA(550mg，4.26mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加HATU(750mg，2.0mmol)，并且将混合物在室温下搅拌14小时。将混合物倒入40mL H2O中，并将白色沉淀过滤。通过柱色谱(DCM/MeOH＝50:1至30:1)纯化滤饼，得到标题产物(428mg，78％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(s,1H),7.94(s,1H),7.64(s,2H),7.19(d,J＝3.2Hz,1H),6.87(dd,J＝28.4,8.4Hz,4H),6.74(s,1H),5.13(d,J＝9.6Hz,1H),4.08–3.96(m,2H),3.89–3.71(m,2H),3.70–3.55(m,4H),3.29(s,3H),3.07–2.91(m,4H),1.84–1.63(m,1H),0.80–0.62(m,3H),0.53–0.38(m,1H)。MS:M/e 558(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物C16分离成两种对映体立体异构体：化合物C16a(较早的峰)，和化合物C16b(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560002331
Figure BDA0002909572560002332
化合物C17：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮
Figure BDA0002909572560002333
Figure BDA0002909572560002341
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-4-甲基戊酸
Figure BDA0002909572560002342
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-4-甲基戊酸甲酯(270mg，0.73mmol)在MeOH/H2O(10mL/5mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，4mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。去除大部分溶剂以得到水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3至4并且过滤，收集滤饼，干燥以得到呈白色固体的目标化合物(200mg，77％)。MS:M/e 356(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮
Figure BDA0002909572560002343
将步骤A的产物(50mg，0.14mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(33mg，0.14mmol)、HATU(64mg，0.168mmol)和DIPEA(36mg，0.28mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(20mg，24.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,1H),7.94(d,J＝0.8Hz,1H),7.65(s,2H),7.26–7.10(m,1H),6.85(dd,J＝25.6,9.2Hz,4H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),5.70(m,1H),4.05–3.95(m,2H),3.74(s,2H),3.67–3.53(m,4H),3.30(s,3H),3.13–2.96(m,2H),2.91(m,2H),2.28–2.15(m,1H),1.91–1.77(m,1H),1.43–1.27(m,1H),0.96(d,J＝6.4Hz,3H),0.88(d,J＝6.4Hz,3H)ppm。MS:M/e 574(M+1)+。
化合物C18：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮
Figure BDA0002909572560002351
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-4-甲基戊酸(50mg，0.14mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(39.4mg，0.14mmol)、HATU(64mg，0.168mmol)和DIPEA(36mg，0.28mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到呈TFA盐的目标化合物，将其用K2CO3水溶液处理，用EtOAc(15mL x2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩以得到目标化合物(10mg，11.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,1H),7.94(s,1H),7.65(s,2H),7.18(d,J＝3.2Hz,1H),6.85(dd,J＝25.2,9.2Hz,4H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),5.70(dd,J＝10.4,4.8Hz,1H),4.36(t,J＝5.2Hz,1H),4.04–3.96(m,2H),3.81–3.52(m,8H),3.45(m,2H),3.24(s,3H),3.13-2.84(m,4H),2.22(m,1H),1.83(m,1H),1.35(m,1H),0.97(d,J＝6.4Hz,3H),0.87(d,J＝6.4Hz,3H)ppm。MS:M/e 618(M+1)+。
化合物C19：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002352
步骤A：4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0002909572560002361
在0℃下向4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2g，7.2mmol)在DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加NaH(0.36g，9.4mmol)。将混合物在0℃下搅拌30分钟。然后将2-氯-N,N-二甲基乙-1-胺(1g，9.4mmol)添加至反应中。将反应在室温下搅拌过夜。将反应用水(20mL)淬灭并且用DCM(20mL x3)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物(粗品)直接用于下一步骤。MS:M/e 350(M+1)+。
步骤B：N,N-二甲基-2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-胺盐酸盐
Figure BDA0002909572560002362
在室温下将步骤A的粗产物溶解在HCl/1,4-二噁烷(4M，20mL)中。将混合物在室温下搅拌4小时。从体系中沉淀出棕色固体。将混合物过滤并且收集固体。将固体(500mg，产率：27.9％)在空气中干燥并且直接用于下一步骤。MS:M/e 250(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002363
将步骤B的产物(50mg，0.18mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)丙酸(50mg，0.16mmol)、HATU(67mg，0.18mmol)和DIEA(0.5mL，过量)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤，并且通过制备型HPLC纯化以得到标题化合物(8mg，产率：9.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.82(s,1H),7.96(s,1H),7.89–7.68(m,2H),7.63–7.35(m,2H),7.20(d,J＝4Hz,1H),7.10(d,J＝8Hz,2H),6.74(s,1H),5.91(d,J＝8Hz,1H),4.38(s,2H),3.96–3.78(m,6H),3.57–3.43(m,4H),2.90–2.72(m,6H),1.81–1.67(m,3H)ppm。MS:M/e 545(M+1)+。
化合物C20：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-3-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002371
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-3-苯基丙酸
Figure BDA0002909572560002372
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-3-苯基丙酸甲酯(115mg，0.28mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2M，2mL)，并且将所得混合物搅拌2小时。将混合物用HCl(2M)中和并浓缩至干燥。添加20mL混合溶剂(CH2Cl2/MeOH＝3:1)并搅拌2小时。将悬浮液过滤，并将滤液浓缩，得到呈白色固体的标题产物(90mg，81％)。MS:M/e 390(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-3-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002373
在室温下向步骤A的产物(45mg，0.12mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(45mg，0.19mmol)、DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(75mg，0.20mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。添加30mL的EA并且将混合物用盐水(15mLx3)洗涤，用Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(CH2Cl2/EA/MeOH＝10:10:1)纯化，并且将所得产物通过制备型HPLC纯化以得到标题产物(45mg，产率：64％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,1H),7.94(s,1H),7.65(s,2H),7.31–7.20(m,4H),7.20–7.12(m,2H),6.89–6.77(m,4H),6.73(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),6.01(t,J＝7.2Hz,1H),4.07–3.93(m,2H),3.75–3.58(m,5H),3.58–3.52(m,1H),3.51–3.45(m,2H),3.29(s,3H),3.00–2.89(m,1H),2.89–2.74(m,2H),2.74–2.65(m,1H)。MS:M/e 608(M+1)+。
化合物C21：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)戊-1-酮
Figure BDA0002909572560002381
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)戊酸(50mg，0.15mmol)、1-(2,4-二氟苯基)哌嗪(32mg，0.16mmol)、HATU(69mg，0.18mmol)和DIEA(39mg，0.3mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱(PE:EA＝1:1)纯化以得到所需产物(49mg，64％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,1H),7.95(s,1H),7.66(br.s,2H),,7.19-6.96(m,4H),6.74-6.73(m,1H),5.71-5.67(m,1H),3.78-3.65(m,4H),2.94-2.83(m,4H),2.19-1.99(m,2H),1.33-1.17(m,2H),0.92(t,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 522(M+1)+
化合物C22：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-环丙基-1-(4-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002382
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-环丙基乙酸(50mg，0.15mmol)、1-(4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)哌嗪(50mg，0.18mmol)、HATU(84mg，0.22mmol)和TEA(30mg，0.30mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝1:1至100％EtOAc)纯化以得到目标化合物(38mg，42.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.84(s,1H),7.95(s,1H),7.66(br,2H),7.20(d,J＝3.1Hz,1H),6.90(d,J＝9.0Hz,2H),6.83(d,J＝8.9Hz,2H),6.76–6.72(m,1H),5.14(d,J＝9.7Hz,1H),4.04–3.95(m,2H),3.85–3.75(m,2H),3.73–3.63(m,5H),3.60–3.53(m,2H),3.50–3.42(m,2H),3.37–3.31(m,1H),3.28–3.24(m,2H),3.01–2.92(m,3H),1.75(d,J＝3.8Hz,1H),0.78–0.66(m,3H),0.46(d,J＝5.5Hz,1H)。MS:M/e 602(M+1)+。
化合物C23：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮
Figure BDA0002909572560002391
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-4-甲基戊酸(35.5mg，0.1mmol)、1-(2,4-二氟苯基)哌嗪(19.8mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至3:1)纯化以得到目标化合物(20mg，37.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,1H),7.94(s,1H),7.65(s,2H),7.25–7.17(m,2H),7.03(m,2H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),5.69(m,1H),3.76(s,2H),3.64(m,2H),3.05-2.93(m,2H),2.91–2.79(m,2H),2.28–2.17(m,1H),1.89–1.78(m,1H),1.35(m,1H),0.97(d,J＝6.4Hz,3H),0.88(d,J＝6.4Hz,3H)ppm。MS:M/e 536(M+1)+。
化合物C24：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-(甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002392
将N-甲基-2-(4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙-1-胺盐酸盐(294mg，0.96mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)丙酸(200mg，0.64mmol)、HATU(291mg，0.78mmol)和DIEA(1mL，过量)在DMF(20mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(20mL)中，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤，并且通过制备型HPLC纯化以得到标题化合物(50mg，产率：14.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31(br.s,2H),8.23(s,1H),8.18(br.s,1H),8.01–7.90(m,1H),7.75–7.52(m,2H),7.30–7.20(m,1H),7.16–7.03(m,2H),6.80–6.68(m,1H),5.87–5.69(m,1H),4.29(t,J＝4Hz,2H),4.17–3.72(m,4H),3.64–3.24(m,5H),3.17–2.93(m,1H),2.59(t,J＝4Hz,3H),1.65(d,J＝8Hz,3H)ppm。MS:M/e 531(M+1)+。
化合物C25：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002401
步骤A：2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560002402
在0℃下向2-苯基丙酸(5g，33.33mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中逐滴添加氯化亚砜(5.15g，50mmol)，添加后，将反应混合物在室温下搅拌3h。将混合物浓缩，用冰水(20mL)淬灭，用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝20:1至5:1)纯化以得到呈黄色油状物的2-苯基丙酸甲酯(5.22g，95.49％)。MS:M/e 165(M+1)+。
步骤B：2-溴-2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560002411
将2-苯基丙酸甲酯(5.22g，31.83mmol)、NBS(6.80g，38.19mmol)、BPO(0.385g，1.591mmol)在四氯化碳(20mL)中的混合物在70℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，将残余物用PE洗涤并且过滤，将滤液浓缩以得到呈黄色油状物的2-溴-2-苯基丙酸甲酯(7.57g，97.87％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55(d,J＝7.5Hz,2H),7.40–7.27(m,3H),3.80(s,3H),2.30(s,3H)
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-2-苯基丙酸甲酯
Figure BDA0002909572560002412
将2-溴-2-苯基丙酸甲酯(7.57g，31.15mmol)、2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(7.51g，31.15mmol)、碳酸钾(8.60g，62.30mmol)在DMF(30mL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将混合物用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用水(10mL x3)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩以得到呈白色固体的产物(7.62g，60.70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36(s,1H),7.94(d,J＝0.8Hz,1H),7.71(s,2H),7.46–7.40(m,3H),7.30–7.25(m,2H),7.15(d,J＝3.4Hz,1H),6.72(dd,J＝3.3,1.8Hz,1H),3.77(s,3H),2.30(s,3H)。MS:M/e 404(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-2-苯基丙酸
Figure BDA0002909572560002413
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-苯基丙酸甲酯(7.62g，18.91mmol)、氢氧化锂(7.563g，189.1mmol)在MeOH(10mL)和水(5mL)中的混合物在50℃下搅拌过夜。将反应混合物用盐酸酸化，用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(石油醚/EtOAc＝10:1至1:2)纯化以得到呈白色固体的产物(6.20g，84.29％)。MS:M/e 390(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-2-苯基丙-1-酮
Figure BDA0002909572560002421
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.2571mmol)、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(91mg，0.3856mmol)、HATU(146mg，0.3856mmol)、DIPEA(99mg，0.7712mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱(DCM/MeOH＝40:1至10:1)纯化以得到产物(92mg，58.96％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,1H),7.94(s,1H),7.71(s,2H),7.39(dq,J＝14.0,7.0Hz,3H),7.20(d,J＝7.3Hz,2H),7.17(d,J＝3.3Hz,1H),6.86–6.79(m,4H),6.73(dd,J＝3.1,1.7Hz,1H),4.01–3.97(m,2H),3.83–3.69(m,4H),3.62–3.58(m,2H),3.28(s,3H),3.01(s,4H),2.29(s,3H)。MS:M/e 608(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将化合物C25分离成两种对映体立体异构体：化合物C25a(较早的峰)，和化合物C25b(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002909572560002422
Figure BDA0002909572560002431
化合物D2：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮和化合物D1:2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002432
步骤A：2-氯-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(获得)
Figure BDA0002909572560002433
向1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(135mg，0.5mmol)、2-溴乙酸(70mg，0.5mmol)和HATU(190mg，0.5mmol)在DMF(4mL)中的混合物中添加TEA(101mg，1mmol)。将反应在室温下搅拌过夜。将混合物用水(30mL)淬灭，用DCM(30mL x3)萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。通过柱色谱(用EA:PE＝1:1洗脱)纯化残余物，得到呈固体的产物(125mg，80％)。产物是2-氯-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮。MS:M/e313(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧 啶-8-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-酮和2-(5-氨基-2-(呋喃-2- 基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯 基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0002909572560002441
向步骤A的产物(125mg，0.4mmol)和2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(80mg，0.33mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加K2CO3(68mg，0.49mmol)。将反应在室温下搅拌4天。将反应用水(30mL)淬灭，用DCM(50mL x4)萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，得到两种异构体(13mg+5mg)。
化合物D2：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),7.94(s,1H),7.67(br.s,2H),7.21(d,J＝3.6Hz,1H),6.97(d,J＝8.8Hz,2H),6.87(d,J＝8.8Hz,2H),6.76–6.72(m,1H),5.40(s,2H),4.03(t,J＝4.8Hz,2H),3.80–3.67(m,4H),3.63(t,J＝4.8Hz,2H),3.30(s,3H),3.17–3.11(m,2H),3.09–3.02(m,2H)；MS:M/e 518(M+1)+。
化合物D1：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(s,1H),8.10(br.s,2H),7.95(s,1H),7.25(d,J＝3.2Hz,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),6.86(d,J＝8.8Hz,2H),6.76–6.72(m,1H),5.30(s,2H),4.02(t,J＝4.0Hz,2H),3.80–3.70(m,4H),3.63(t,J＝4.0Hz,2H),3.28(s,3H),3.16–3.108(m,2H),3.05–2.96(m,2H)；MS:M/e 518(M+1)+。
细胞培养和转染
将HEK293细胞维持在含5％CO2的加湿的37℃环境中补充有10％胎牛血清(FBS，Thermo Scientific)、100单位/mL青霉素(Gibco)和0.1mg/mL链霉素(Gibco)的Dulbecco改进Eagle培养基(DMEM，Gibco)中。编码野生型人A2A受体(A2AR)的质粒(在pcDNA3.1中)由Genscript(南京，中国)合成。根据制造商的说明，使用Lipofectamin 2000(ThermoFisherScientific)在具有4×105个细胞的6孔板中进行质粒的转染。建立稳定表达A2AR的细胞克隆并且将其维持在除另外有G-418的与HEK293细胞相同的完全培养基(Gibico)中。使用免疫印迹和FACS方法测定每个单细胞克隆中A2AR的表达水平。然后用pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro](Promega)萤光素酶报告基因质粒转染HEK293-A2AR稳定细胞，以建立HEK293-A2AR-luc2p/CRE/Hygro稳定细胞系。
萤光素酶报告基因测定
将HEK293-A2AR-luc2p/CRE/Hygro细胞以5,000个细胞/孔的密度接种在含有1％FBS和1U/mL腺苷脱氨酶(ADA)的DMEM(Sigma)中。18h后，用3nM CGS21680加上A2AR拮抗剂的系列稀释液处理细胞，所述拮抗剂的系列稀释液是在含有1％FBS的DMEM中制备的浓度为0.1至10000nM的本文公开的化合物。孵育5h后，根据制造商的说明书使用Bright-Glo萤光素酶测定系统(Promega)测量细胞中的萤光素酶活性。使用PHERAstar FS读板器(BMGLabtech)测量发光信号。将来自10μM preladenant处理的发光强度设定为0％。测定在3nMCGS21680存在下的最大发光强度，并且将其设定为100％。从整个化合物浓度范围内的剂量依赖性抑制曲线计算IC50值。
腺苷受体结合测定
使用以下方案在放射性配体竞争性结合测定(由法国Cerep进行)中测定测试化合物对四种人腺苷受体A1、A2A、A2B和A3的结合亲和力。对于A1受体(A1R)，将来自用A1R转染的CHO细胞的膜匀浆用1nM[3H]DPCPX在含有50mM Tris-HCl(pH 7.4)、5mM MgCl2、1mMEDTA/Tris和2UI/mL ADA的缓冲液中在不存在或存在所述测试化合物的情况下在22℃下孵育60分钟。对于A2AR，将来自用A2AR转染的HEK293细胞的膜匀浆用6nM[3H]CGS21680在含有50mM Tris-HCl(pH 7.4)、10mM MgCl2和2UI/mL ADA的缓冲液中在不存在或存在测试化合物的情况下在22℃下孵育120min。对于A2B受体(A2BR)，将来自用A2BR转染的HEK293细胞的膜匀浆用5nM[3H]CPX在含有10mM Hepes/Tris(pH 7)、1mM MgCl2和1mM EDTA的缓冲液中在不存在或存在测试化合物的情况下在22℃下孵育60min。对于A3受体(A3R)，将来自用A3R转染的HEK293细胞的膜匀浆用0.15nM[125I]AB-MECA在含有50mM Tris-HCl(pH 7.4)、5mMMgCl2、1mM EDTA和2UI/mL ADA的缓冲液中在不存在或存在所述测试化合物的情况下在22℃下孵育120min。分别在A1R、A2AR、A2BR、A3R结合测定中，在未标记的1μM DPCPX、10μMNECA、100μM NECA和1μM IB-MECA的存在下测定非特异性结合。孵育后，将样品快速过滤并且用冰冷的50mM Tris-HCl洗涤。然后将过滤器干燥并且使用闪烁混合物(Microscint 0，Packard)在闪烁计数器(Topcount，Packard)中计数以得到放射活性。对每个测定进行重复实验。结果表示为对照放射性配体特异性结合的抑制百分比。
小鼠BBB测定
使小鼠适应1周，然后以18至30g体重使用。将禁食小鼠以10mg/kg的剂量口服给药。在给药后1、2和4小时，将收集在含有作为抗凝血剂的K2EDTA的管中的来自心脏血液的血浆样品和切除的大脑半球立即冷冻并且在-80℃下储存直至进行生物分析。通过LC-MS/MS测定所述化合物的总浓度。将脑匀浆浓度转换为脑浓度，用于计算脑与血浆的比率。
表1：萤光素酶报告基因测定的结果
Figure BDA0002909572560002461
Figure BDA0002909572560002471
Figure BDA0002909572560002481
Figure BDA0002909572560002491
Figure BDA0002909572560002492
Figure BDA0002909572560002501
表2：结合测定的结果
Figure BDA0002909572560002502
Figure BDA0002909572560002511
表3：在1h时小鼠BBB测定的结果
Figure BDA0002909572560002512
应当理解，如果在本文提到了任何现有技术公开案，则这一参考文献并不构成承认所述公开案构成任何国家的本领域的一般常识的一部分。
通过标识引用而在本文提到的所有公开案、专利、专利申请和公开的专利申请的公开内容特此通过引用以其整体并入本文。
尽管为了理解清楚的目的，已经通过说明和实施例详细地描述了前述发明，但是对于本领域技术人员清楚的是，可以实施某些较小的改变和修改。因此，描述和实施例不应解释为限制本发明的范围。

Claims (43)

1.一种式(I)的化合物
Figure FDA0002909572550000011
或者
Figure FDA0002909572550000012
或其立体异构体、或其药学上可接受的盐，
其中：
R是芳基或包含1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员的5元或6元杂芳基，并且所述环任选地被至少一个取代基R8取代；
R1和R2可以相同或不同，它们各自独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基，其中所述C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自独立地任选地被至少一个取代基R8取代，条件是R1和R2中的至少一个不是氢；或者
R1和R2与它们所附接的碳原子一起形成3至12元饱和的、部分或完全不饱和的环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员，并且所述环任选地被至少一个取代基R8取代；
R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成3至12元环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代；
R5独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、-OR5a、-SO2R5a、-COR5a、-CO2R5a、-CONR5aR5b、-C(＝NR5a)NR5bR5c、-NR5aR5b、-NR5aCOR5b、-NR5aCONR5bR5c、-NR5aCO2R5b、-NR5aSONR5bR5c、-NR5aSO2NR5bR5c、或-NR5aSO2R5b，其中，作为R5，所述-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基中的每一个独立地并且任选地被一个或两个或三个取代基R6取代；
R5a、R5b和R5c可以相同或不同，它们各自独立地是氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选被一个或两个取代基R5d取代；
R5d独立地是氢、卤素、氰基、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、-C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷氧基-、C2-6烯基氧基-、C2-6炔基氧基-、卤代C1-6烷氧基-、卤代C2-6烯基氧基-、卤代C2-6炔基氧基-、C3-8环烷基氧基-、环烷基、杂环基、杂环基氧基-、芳基、芳基氧基-、杂芳基或杂芳基氧基-；
R6独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、-OR6a、-SO2R6a、-COR6a、-CO2R6a、-CONR6aR6b、-C(＝NR6a)NR6bR6c、-NR6aR6b、-NR6aCOR6b、-NR6aCONR6bR6c、-NR6aCO2R6b、-NR6aSONR6bR6c、-NR6aSO2NR6bR6c、或-NR6aSO2R6b；
R6a、R6b和R6c可以相同或不同，它们各自独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-C3-8环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地任选地被一个或两个或三个取代基R7取代；或
(R6a和R6b)、和/或(R6b和R6c)、和/或(R6c和R6a)与它们所附接的一个或多个原子一起形成3至12元饱和的、部分或完全不饱和的环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，并且所述环任选地被至少一个取代基R8取代；
R7独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、-OR7a、-SO2R7a、-COR7a、-CO2R7a、-CONR7aR7b、-C(＝NR7a)NR7bR7c、-NR7aR7b、-NR7aCOR7b、-NR7aCONR7bR7c、-NR7aCO2R7b、-NR7aSONR7bR7c、-NR7aSO2NR7bR7c、或-NR7aSO2R7b，其中所述-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自独立地任选地被一个或两个选自卤素、羟基、-C1-6烷基、-C1-6烷氧基、氧代基、氰基和氨基的取代基取代；
R7a、R7b、和R7c各自独立地是氢、-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基-、-C2-6烯基、-C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基；并且
R8独立地是氢、卤素、氰基、氧代基、氨基、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、-C1-6烷氧基、C3-8环烷基氧基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基。
2.根据权利要求1的化合物，其中R是含有1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员的C-连接的5元或6元杂芳基。
3.根据权利要求2的化合物，其中R是呋喃基、吡嗪基或噻唑基；优选是呋喃-2-基、3-甲基吡嗪-2-基或噻唑-2-基。
4.根据权利要求1的化合物，其中R1是氢或C1-6烷基，优选氢、甲基、乙基；更优选氢；并且R2是任选地被苯基或-C1-6烷氧基(优选甲氧基)取代的C1-6烷基(优选甲基、异丙基、乙基、丙基、丁基、或异丁基)；任选地被卤素或C1-6烷氧基取代的芳基(即苯基或萘基)；-C3-8环烷基(优选环丙基)、或杂环基。
5.根据权利要求1至4中任一项的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成3元、4元、5元、6元、7元、8元、或9元单环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
6.根据权利要求5的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成3元、4元、5元、6元、7元、8元、或9元单环，所述环包含0个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
7.根据权利要求5的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成3元、4元、5元、6元、7元、8元、或9元单环，所述环包含1个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
8.根据权利要求7的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成3元、4元、5元、6元、7元、8元、或9元单环，所述环包含一个另外的氮杂原子作为环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
9.根据权利要求5至9中任一项的化合物，其中所述环是饱和的。
10.根据权利要求5的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成氮杂环丁烷基
Figure FDA0002909572550000041
吡咯烷基
Figure FDA0002909572550000042
或哌啶基
Figure FDA0002909572550000043
环，所述环各自任选地被如对式(Ia)或(Ib)所定义的R5取代。
11.根据权利要求5的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成任选地被如对式(Ia)或(Ib)所定义的R5取代的哌嗪基环(即
Figure FDA0002909572550000044
)。
12.根据权利要求1至4中任一项的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成7元、8元、9元、10元、11元、或12元二环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
13.根据权利要求12的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成7元、8元、9元、10元、11元、或12元二环稠合环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
14.根据权利要求12的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成7元、8元、9元、10元、11元、或12元二环稠合环，所述环包含0个或1个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
15.根据权利要求12的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成10元二环稠合环，所述环包含0个或1个另外的氮杂原子作为环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
16.根据权利要求15的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成
Figure FDA0002909572550000045
环，每个所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
17.根据权利要求12的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成7元、8元、9元、10元、11元、或12元二环螺环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
18.根据权利要求17的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成各自包含0个或1个另外的氮原子或氧原子作为环成员的氮杂螺[3.3]庚烷、氮杂螺[3.5]壬烷、氮杂螺[3.4]辛烷、氮杂螺[5.5]十一烷、或氮杂螺[4.5]癸烷，并且所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
19.根据权利要求18的化合物，其中R3和R4与它们所附接的氮原子一起形成
Figure FDA0002909572550000051
环，并且所述环任选地被一个或两个或三个取代基R5取代。
20.根据权利要求5至19中任一项的化合物，其中所述环被一个R5取代。
21.根据权利要求5至19中任一项的化合物，其中所述环被两个R5取代。
22.根据权利要求21的化合物，其中所述环被一个C1-6烷基(优选甲基)取代并且进一步被一个R5取代。
23.根据权利要求20至22中任一项的化合物，其中R5是卤素、-C1-6烷基、芳基、-OR5a、或-CO2R5a，其中R5a是如对式(Ia)或(Ib)所定义的。
24.根据权利要求23的化合物，其中R5是-CO2R5a，其中R5a是-C1-6烷基，优选甲基。
25.根据权利要求23的化合物，其中R5是-OR5a，其中R5a是任选地被一个R5d取代的-C1-6烷基，其中R5d是氢、卤素(优选氟)、或-C1-6烷氧基。
26.根据权利要求23的化合物，其中R5是-OR5a，其中R5a是三氟甲氧基、甲氧基、甲氧基乙氧基、或羟基。
27.根据权利要求23的化合物，其中R5是任选地被一个或两个或三个取代基R6取代的苯基，其中R6是如对式(Ia)或(Ib)所定义的。
28.根据权利要求27的化合物，其中R5是任选地被一个或两个或三个取代基R6取代的苯基，其中R6独立地是卤素(优选氟)、-OR6a、或NR6aR6bC(O)-，其中R6a和R6b是如对式(Ia)或(Ib)所定义的。
29.根据权利要求28的化合物，其中R5是任选地被一个取代基R6取代的苯基，其中
R6是NR6aR6bC(O)-，其中
R6a和R6b各自独立地是氢、-C1-6烷基、或-C3-8环烷基，所述-C1-6烷基和-C3-8环烷基各自任选地被一个R7取代，其中
R7是杂环基，优选3至8元杂环，其包含一个或两个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员，任选地被羟基、-C1-6烷基、或-C1-6烷氧基取代。
30.根据权利要求28的化合物，其中R5是任选地被一个取代基R6取代的苯基，其中
R6是NR6aR6bC(O)-，其中
R6a和R6b各自独立地是氢、-C1-6烷基、或-C3-8环烷基，所述-C1-6烷基任选地被一个R7取代，其中
R7是3至8元饱和单环杂环，其包含一个选自氮或氧的杂原子作为环成员(优选氧杂环丁烷基)，任选地被羟基取代。
31.根据权利要求28的化合物，其中R5是任选地被一个取代基R6取代的苯基，其中
R6是NR6aR6bC(O)-，其中
R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成3至12元饱和环，所述环包含0个、1个或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的另外的杂原子作为一个或多个环成员。
32.根据权利要求31的化合物，其中R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成3至8元饱和单环，所述环包含0个或1个独立地选自氮或氧的另外的杂原子作为环成员。
33.根据权利要求32的化合物，其中R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成6元饱和单环，所述环包含0个或1个另外的氮杂原子作为环成员。
34.根据权利要求31的化合物，其中R6a和R6b与它们所附接的氮原子一起形成哌啶基环。
35.根据权利要求28的化合物，其中R5是任选地被一个或两个卤素取代并且进一步任选地被一个取代基R6取代的苯基，其中
R6是-OR6a，其中
R6a是任选地被一个R7取代的-C1-6烷基，其中
R7是杂环基、-OR7a、或-NR7aR7b，其中
R7a和R7b各自独立地是氢、-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基-；并且
所述杂环基任选地被卤素、羟基、或-C1-6烷基取代。
36.根据权利要求35的化合物，其中所述作为R7的杂环基是4元、5元、6元、7元、或8元杂环基，其包含一个或两个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员，任选地被-C1-6烷基取代；优选是5元或6元杂环基，其包含一个或两个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫的杂原子作为一个或多个环成员。
37.根据权利要求36的化合物，其中R7是吗啉基、吗啉代、吡咯烷基、吡咯烷子基、4-甲基哌嗪基、或哌啶基。
38.根据权利要求35的化合物，其中R6是-OR6a，其中R6a是任选地被一个R7取代的-C1-6烷基，其中R7是-OR7a，其中R7a是氢、-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基-。
39.根据权利要求35的化合物，其中R6是-OR6a，其中R6a是任选地被一个R7取代的-C1-6烷基，其中R7是-NR7aR7b，其中R7a和R7b是氢、或-C1-6烷基。
40.根据权利要求35的化合物，其中R6是甲氧基乙氧基-、甲氧基乙氧基乙氧基-、2-羟基乙氧基、2-羟基丙氧基-、氨基乙氧基-、N,N-二甲基氨基乙氧基-、或N-甲基氨基乙氧基-。
41.权利要求1的化合物，其为化合物编号A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22、A23、A24、A25、A26、A27、A28、A29、A30、A31、A32、A33、A34、A35、A36、A37、A38、A39、A40、A41、A42、A43、A44、A45、A46、A47、A48、A49、A50、A51、A52、A53、A54、A55、A56、A57、A58、A59、A60、A61、A62、A63、A64、A65、A66、A67、A68、A69、A70、A71、A72、A73、A74、A75、A76、A77、A78、A79、A80、A81、A82、A83、A84、A85、A86、A87、A88、A89、A90、A91、A92、A93、A94、A95、A96、A97、A98、A99、A100、A101、A102、A103、A104、A105、A106、A107、A108、B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9、B10、B11、B12、B13、B14、B15、B16、B17、B18、B19、B20、B21、B22、B23、B24、B25、B26、B27、B28、B29、B30、B31、B32、B33、B34、C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、D1、或D2。
42.一种药物组合物，其包含权利要求1-41中任一项的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的赋形剂。
43.一种治疗癌症的方法，其包括向对其有需要的受试者给予权利要求1-41中任一项的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
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