CN112313234B - 作为a2a受体拮抗剂的吡唑并三唑并嘧啶衍生物 - Google Patents

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Abstract

本文公开了一种用作A2A受体拮抗剂的吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐，以及一种包含吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐的药物组合物。本文还公开了一种使用该吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐作为A2A受体拮抗剂治疗癌症的方法。

Description

作为A2A受体拮抗剂的吡唑并三唑并嘧啶衍生物
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年4月8日提交的国际专利申请号PCT/CN 2018/082140的权益，出于所有目的将其公开内容通过引用以其全文特此结合。
技术领域
本文公开了一种用作A2A受体拮抗剂的吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐，以及一种包含吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐的药物组合物。本文还公开了一种使用该吡唑并三唑并嘧啶衍生物或其立体异构体或其药学上可接受的盐作为A2A受体拮抗剂治疗癌症的方法。
背景技术
细胞外腺苷是许多生理活性的关键内源调节剂。它通过与四种腺苷受体A1、A2A、A2B和A3相互作用发挥其调节功能。所有四种受体都属于G蛋白偶联受体超家族，但具有不同的配体亲和力、组织分布和效应子反应。通过与不同的G蛋白偶联，它们可以刺激(A2A和A2B)或抑制(A1和A3)下游腺苷酸环化酶活性，并且也参与调节其他途径，如磷脂酶C(PLC)、Ca2+和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)。
免疫系统不仅负责保护其宿主抵抗微生物侵入，而且可以从其中存在抗肿瘤免疫机制的生物体中去除改变的宿主组分。当免疫监视功能由于免疫系统本身或肿瘤细胞而减弱时，为肿瘤的发展和进展提供了有利的条件。腺苷-A2A受体信号传导作为一种新的代谢免疫检查点途径出现，该途径参与创建免疫耐受的肿瘤微环境。已经证明，肿瘤组织中的缺氧将诱导较高浓度的腺苷的积累(在生理水平下约10μM，相对于约20nM)。缺氧介导的腺苷产生是由非造血和造血细胞亚群二者中CD39和CD73外核苷酸酶的上调引起的，所述上调进而催化细胞外ATP向腺苷的转化。
通过A2A(高亲和力)和A2B(低亲和力)受体(免疫细胞亚群中的主要腺苷受体)的腺苷信号传导在保护癌组织免受免疫系统攻击中发挥重要作用。T效应细胞上激活的A2A受体增加细胞内cAMP，这进而抑制TCR触发的信号传导和抗肿瘤效应子功能，包括降低的T细胞扩增，IFN-γ释放，和增加的免疫抑制PD-1、LAG3、IL-10和TGF-β的表达。T细胞中增加的cAMP也促进cAMP反应元件(CRE)介导的转录如FoxP3，其驱动调节性T细胞表型。此外，腺苷还通过使自然杀伤(NK)细胞的细胞毒性效应子功能失效、调节免疫抑制性M2巨噬细胞极化和髓源抑制细胞(MDSC)扩增来抑制抗肿瘤免疫反应。因此，研究表达A2A受体的免疫细胞作为潜在目标以破坏肿瘤微环境中腺苷介导的免疫抑制。结果证明A2AR的遗传缺失或药理性拮抗作用可以增强已建立的免疫原性小鼠肿瘤中的内源性抗肿瘤免疫并且有效抑制肿瘤生长或转移。
WO 0192264披露了用于治疗中枢神经系统疾病、特别是帕金森病的5-氨基-吡唑并-[4,3-e]-1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶腺苷A2a受体拮抗剂，其被证明具有高血脑屏障通透性。
然而，需要A2A受体的小分子拮抗剂作为用于抗癌疗法的免疫调节剂(RobertD.Leone,Ying-Chun Lo,Jonathan D.Powell,Mini Review,A2aR antagonists:Nextgeneration checkpoint blockade for cancer immunotherapy,Computational andStructural Biotechnology Journal 13(2015)265-272)。
发明内容
意外地且惊人地，发现本文公开的吡唑并三唑并嘧啶衍生物在抗癌疗法中具有免疫调节功效，并且具有相对低的血脑屏障通透性，预期所述吡唑并三唑并嘧啶衍生物通过降低癌症治疗中潜在的CNS副作用来增加治疗窗。
本文公开了式(I)的化合物
Figure BDA0002713602000000021
或其立体异构体或其药学上可接受的盐，
其中：
X是N或C(＝O)或CRa；
Y是CH或NRa；
Figure BDA0002713602000000031
是单键或双键；
Ra独立地选自氢、-C1-6烷基、-C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基；
R是芳基或含有1或2个独立地选自-N＝或＝N-、-NH-、-O-、-S-、-SO-或-SO2-中的杂原子的5元或6元杂芳基，并且所述芳基或杂芳基任选地被至少一个取代基R15取代；
R1和R2，可以相同或不同，各自独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基，其中所述C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自独立地任选地被至少一个取代基R15取代，条件是R1和R2不都是氢；或者
R1和R2与它们所附接的碳原子一起形成包含0、1或2个独立地选自-N＝或＝N-、-NH-、-O-、-S-、-SO-或-SO2-中的杂原子的3元至12元饱和的、部分或完全不饱和的环，并且所述环任选地被至少一个取代基R15取代；
R3是氢；
R4是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、芳基、杂芳基、或杂环基，其中所述C1-6烷基、C3-8环烷基、芳基、杂芳基、或杂环基各自独立地且任选地被一个或两个取代基R5取代；或者该C3-8环烷基、芳基、杂芳基、或杂环基环上的两个相邻的R5取代基与它们所附接的原子一起形成稠环；
R5独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、-ORb、-SO2Rb、-CORb、-CO2Rb、-CONRbRc、-C(＝NRb)NRcRd、-NRbRc、-NRbCORc、-NRbCONRcRd、-NRbCO2Rc、-NRbSONRcRd、-NRbSO2NRcRd或-NRbSO2Rc，其中所述-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自独立地且任选地被一个或两个取代基R6取代。
R6独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、或-ORe，其中作为R6，所述-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自独立地且任选地被一个或两个取代基R7取代；
R7在其每次出现时独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、-C1-6烷氧基、-C1-6烷氧基-C1-6烷氧基或羟基；
Rb、Rc、Rd、Re，可以相同或不同，各自独立地是氢、-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基-、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基，其中所述C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自独立地任选被至少一个取代基R15取代；并且
R15独立地是氢、卤素、氰基、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、-C1-6烷氧基、C3-8环烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基。
在一个实施方案中，X是N并且Y是CRa，使得X和Y形成-N＝CRa-部分。Ra如式(I)所定义；优选Ra是氢或C1-3烷基；更优选Ra是氢。在优选的实施方案中，X是N并且Y是CH，使得X和Y形成-N＝CH-部分。
在另一个实施方案中，X是C(＝O)并且Y是NRa。Ra如式(I)所定义；优选Ra是氢和甲基。
在又另一个实施方案中，X是CRa并且Y是CRa，使得X和Y形成-CRa＝CRa-部分。Ra如式(I)所定义；优选每个Ra独立地选自氢或C1-3烷基；更优选Ra是氢。
在一个实施方案中，R是含有1或2个独立地选自-N＝或＝N-、-NH-、-O-或-S-中的杂原子的C-连接的5元或6元杂芳基。在优选的实施方案中，R是呋喃基、吡嗪基或噻唑基；更优选是呋喃-2-基、3-甲基吡嗪-2-基或噻唑-2-基。
在一个实施方案中，R1是氢并且R2是苯基；或R1是氢并且R2是C1-6烷基(优选C1-4烷基，例如丙基或丁-2-基)；或R1是C1-6烷基(优选C1-4烷基，例如甲基、乙基)并且R2是苯基；或R1是C1-6烷基(优选C1-4烷基，例如甲基)并且R2是吡啶基；或R1是C1-6烷基(优选C1-4烷基，例如甲基)并且R2是被杂环基、芳基或杂芳基取代的C1-6烷基(优选被苯基取代的C1-4烷基，例如苄基)。
在一个实施方案中，R1和R2与它们所附接的碳原子一起形成包含0个杂原子的3元至12元饱和环。在优选的实施方案中，R1和R2与它们所附接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、或1,2,3,4-四氢萘-1-基。
在一个实施方案中，R4是任选地被一个或两个取代基R5取代的C1-6烷基(优选C1-3烷基)，其中每个R5独立地选自芳基、杂芳基、杂环基、环烷基、-ORb或-NRbRc，如式(I)所定义。
在优选的实施方案中，R4是任选地被作为R5的芳基取代的C1-6烷基(优选C1-3烷基)，所述芳基任选地被卤素、-C1-6烷基、卤代C1-6烷基、或-ORe取代，其中Re是任选地被卤素取代的C1-6烷基。在进一步优选的实施方案中，该芳基是苯基或经取代的苯基(例如苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)。在甚至进一步优选的实施方案中，该苯基任选地被C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、F、Cl或Br取代。更优选地，该苯基任选地被甲氧基、氟、三氟甲氧基、三氟甲基或甲基取代。
特别地，R4是是苯基甲基、2-甲氧基苯基甲基、3-甲氧基苯基甲基、4-甲氧基苯基甲基、2-氟苯基甲基、2-(三氟甲氧基)苯基甲基、4-(三氟甲氧基)苯基甲基、1-苯基乙基、(S)-1-苯基乙基、(R)-1-苯基乙基、2-苯基乙基、3-(三氟甲基)苯基甲基、4-(三氟甲基)苯基甲基、3-甲基苯基甲基、4-甲基苯基甲基、4-氟苯基甲基、或苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基。
在优选的实施方案中，R4是任选地被作为R5的杂环基取代的C1-6烷基(优选C1-3烷基)，所述杂环基任选地被芳基和-ORe取代，其中所述芳基任选地被R7取代，并且Re和R7如式(I)定义。在进一步优选的实施方案中，该杂环基是包含1或2或3个独立地选自-NH-、-O-、-S-、-SO-或-SO2-中的杂原子的单环或双环的3元至12元杂环基、优选4元、5元、6元、7元或8元单环杂环基环。在甚至进一步优选的实施方案中，该杂环基环是氧杂环丁烷基、哌嗪基、四氢呋喃基、吡喃基、或吗啉代，它们各自任选地被羟基取代。
特别地，R4是(3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基、氧杂环丁-3-基甲基、2-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基、2-(哌嗪-1-基)乙基、(4-甲基哌嗪-1-基)乙基、(四氢呋喃-2-基)甲基、((S)-四氢呋喃-3-基)甲基、((R)-四氢呋喃-2-基)甲基、((S)-四氢呋喃-2-基)甲基、((R)-四氢呋喃-3-基)甲基、2-(四氢呋喃-3-基)乙基、(四氢-2H-吡喃-3-基)甲基、2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基、(4-羟基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基、(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基、或2-吗啉代乙基。
在优选的实施方案中，R4是任选地被作为R5的C3-8环烷基取代的C1-6烷基(优选C1-3烷基)，所述C3-8环烷基任选地被羟基取代。在进一步优选的实施方案中，所述C3-8环烷基是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基；优选环丙基、环丁基或环己基。特别地，R4是(1-羟基环丙基)甲基、(1-羟基环丁基)甲基或(1-羟基环己基)甲基。
在优选的实施方案中，R4是任选地被作为R5的杂芳基取代的C1-6烷基(优选C1-3烷基)，所述杂芳基任选地被卤素、C1-6烷基、C3-8环烷基、或-ORe取代，其中所述C1-6烷基和C3-8环烷基任选地被羟基取代。在进一步优选的实施方案中，该杂芳基是吡啶基，包括吡啶-2-基、吡啶-3-基或吡啶-4-基，其任选地被羟基环丁基、甲基、甲氧基或卤素取代。特别地，R4是吡啶-2-基甲基、吡啶-4-基甲基、吡啶-3-基甲基、(6-(1-羟基环丁基)吡啶-2-基)甲基、(6-甲基吡啶-2-基)甲基、(5-甲基吡啶-2-基)甲基、(4-甲基吡啶-2-基)甲基、(3-甲基吡啶-2-基)甲基、(6-甲氧基吡啶-2-基)甲基、(5-甲氧基吡啶-2-基)甲基、(4-甲氧基吡啶-2-基)甲基、(3-甲氧基吡啶-2-基)甲基、(6-氟吡啶-2-基)甲基、(5-氟吡啶-2-基)甲基、(4-氟吡啶-2-基)甲基、或(3-氟吡啶-2-基)甲基。
在优选的实施方案中，R4是任选地被作为R5的-ORb或-NRbRc取代的C1-6烷基(优选C1-3烷基)，其中Rb和Rc独立地是氢、C1-6烷基、或-C1-6烷氧基C1-6烷基。特别地，R4是2-甲氧基乙基、2-(二甲基氨基)乙基、2-(2-甲氧基乙氧基)乙基、2-(甲基氨基)乙基、2-羟丙基、(R)-2-羟丙基、或2-羟乙基。
在另一个实施方案中，R4是任选地被C1-6烷基、C1-6烷氧基、或羟基取代的C3-8环烷基，所述C3-8环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基；优选环丙基、环丁基、环戊基和环己基。在进一步优选的实施方案中，R4是4位取代的环己基，其中在4位的取代基和附接至在1位的氨基呈(顺式)或(反式)构型，优选呈(顺式)构型。在进一步优选的实施方案中，R4是3位取代的环丁基，其中在3位的取代基和附接至在1位的氨基呈(顺式)或(反式)构型，优选呈(顺式)构型。
特别地，R4是2-羟基环庚基、3-羟基环庚基、4-羟基环庚基、环己基、4-羟基-4-甲基环己基、(反式)-4-羟基环己基、(顺式)-4-羟基-4-甲基环己基、(顺式)-4-羟基环己基、(1S,4S)-4-羟基-4-甲基环己基、(1S,4S)-4-羟基环己基、(1S,2R)-2-羟基环己基、(1S,4S)-4-羟基-4-甲基环己基、(1S,2S)-2-羟基环己基、(1R,2S)-2-羟基环己基、(反式)-4-羟基-4-甲基环己基、3-羟基环己基、(1R,3R)-3-羟基环己基、(1S,3R)-3-羟基环己基、(1R,3S)-3-羟基环己基、(1S,3S)-3-羟基环己基、4-氧代环己基、乙酰氧基环己基、环戊基、3-羟基环戊基、(1S,2R)-2-羟基环戊基、(1R,2S)-2-羟基环戊基、(1R,3R)-3-羟基环戊基、(1S,3S)-3-羟基环戊基、(反式)-3-羟基环丁基、(顺式)-3-羟基环丁基、(顺式)-3-羟基-3-甲基环丁基、1-(羟甲基)环丙基、环丙基、1,2,3,4-四氢萘-1-基、或2,3-二氢-1H-茚-1-基。
在另一个实施方案中，R4是芳基，该芳基是苯基。
在另一个实施方案中，R4是杂芳基，该杂芳基是吡啶基。在优选的实施方案中，R4是吡啶-3-基、吡啶-4-基、或吡啶-2-基。
在另一个实施方案中，R4是选自吡喃基、哌啶基、吡咯烷基、四氢呋喃基、苯并二氢吡喃-4-基、或二氢苯并呋喃-3-基中的杂环基，它们各自任选地如式(I)所定义被取代。在一个实施方案中，该杂环基任选地被芳基、氧代基、或羟基取代，其中芳基进一步任选地被-C1-6烷氧基-C1-6烷氧基取代。特别地，R4是四氢-2H-吡喃-4-基、(S)-四氢-2H-吡喃-3-基、(R)-四氢-2H-吡喃-3-基、四氢-2H-吡喃-4-基、(R)-苯并二氢吡喃-4-基、(S)-苯并二氢吡喃-4-基、2,3-二氢苯并呋喃-3-基、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌啶-4-基、(R)-哌啶-3-基(E652)、(S)-哌啶-3-基、4-羟基哌啶-1-基、(S)-5-氧代吡咯烷-3-基、(S)-2-氧代吡咯烷-3-基、(3S,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基、(3S,4S)-4-羟基四氢呋喃-3-基、(3S,4S)-4-羟基四氢呋喃-3-基、或(3R,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基。
本文公开了一种药物组合物，其包含本文公开的式(I)的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂。
本文公开了一种治疗癌症的方法，其包括向对其有需要的受试者给予本文公开的式(I)的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。本文还公开了一种免疫调节患有癌症或肿瘤的受试者的方法，其包括向对其有需要的受试者给予本文公开的式(I)的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐。
本文还公开了式5和13的化合物
Figure BDA0002713602000000071
2.其中R和R15如式(I)所定义。
本文还公开了一种制备式5的化合物的方法，其包括用碱将式4的化合物水解成式5的游离酸，
Figure BDA0002713602000000081
3.其中Alk是烷基，R和R15如式(I)所定义。
在一个方面，该碱是但不限于氢氧化钠或叔丁醇钾。
在一个实施方案中，该方法进一步包括使式3与2-卤代-2-苯基乙酸酯反应以形成式4
Figure BDA0002713602000000082
在一个方面，该2-卤代-2-苯基乙酸酯是但不限于2-溴-2-苯基乙酸甲酯。
在一个实施方案中，该方法进一步包括在酸性条件的存在下重排式2的化合物以给出式3
Figure BDA0002713602000000083
在一个实施方案中，该方法进一步包括使醛与碳酰肼1反应以形成式2，
Figure BDA0002713602000000084
在一个方面，该碳酰肼是但不限于呋喃-2-碳酰肼。
本文还公开了一种制备式13的化合物的方法，其包括用碱将酯12水解成式13的游离酸，
Figure BDA0002713602000000091
在一个方面，该碱是但不限于氢氧化钠或叔丁醇钾。
在一个实施方案中，该方法进一步包括在酸性条件的存在下重排化合物11以给出式12，
Figure BDA0002713602000000092
在一个实施方案中，该方法进一步包括使式10的化合物与碳酰肼反应以获得式11的化合物，
Figure BDA0002713602000000093
在一个方面，该碳酰肼是但不限于呋喃-2-碳酰肼。
在一个实施方案中，该方法进一步包括使式9与2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛反应以获得式10的化合物，
Figure BDA0002713602000000094
在一个实施方案中，该方法进一步包括使式8的化合物与水合肼反应以形成式9，
Figure BDA0002713602000000095
在一个实施方案中，该方法进一步包括用卤化试剂在式7的化合物的α位引入一个卤原子，
Figure BDA0002713602000000101
在一个方面，该卤化试剂是但不限于N-溴代琥珀酰亚胺。
在一个实施方案中，该方法进一步包括将酸酯化，所述酸在本领域已知的标准条件下酯化以得到式7的化合物。
Figure BDA0002713602000000102
在一个方面，该酸是2-苯丙酸。
具体实施方式
以下术语在整个说明书中具有指示的含义：
如本文(包括所附权利要求书)所使用的，除非上下文另外清楚地指示，否则单数形式的词语例如“一个”、“一种”和“该”包括它们对应的复数指代物。
除非上下文另外清楚地指示，否则术语“或”用于意指术语“和/或”，并且可与术语“和/或”互换使用。
本文的术语“烷基”是指选自包含1至18个(如1至12个，进一步如1至10个，更进一步如1至8个、或1至6个、或1至4个)碳原子的直链和支链饱和烃基团中的烃基团。包含1至6个碳原子的烷基(即C1-6烷基)的例子包括但不限于甲基、乙基、1-丙基或正丙基(“n-Pr”)、2-丙基或异丙基(“i-Pr”)、1-丁基或正丁基(“n-Bu”)、2-甲基-1-丙基或异丁基(“i-Bu”)、1-甲基丙基或仲丁基(“s-Bu”)、1,1-二甲基乙基或叔丁基(“t-Bu”)、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基和3,3-二甲基-2-丁基。
本文的术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)和碘(I)。
本文的术语“卤代烷基”是指其中一个或多个氢被一个或多个卤素原子(如氟、氯、溴和碘)取代的烷基。卤代烷基的例子包括卤代C1-8烷基、卤代C1-6烷基或卤代C1-4烷基，但不限于-CF3、-CH2Cl、-CH2 CF3、-CCl2、CF3等。
本文的术语“烯基”是指选自包含至少一个C＝C双键和2至18个(如2至8个，进一步如2至6个)碳原子的直链和支链烃基团中的烃基团。烯基(例如，C2-6烯基)的例子包括但不限于乙烯基(ethenyl或vinyl)、丙-1-烯基、丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基、和己-1,3-二烯基。
本文的术语“炔基”是指选自包含至少一个C≡C三键和2至18个(如2至8个，进一步如2至6个)碳原子的直链和支链烃基团中的烃基团。炔基(例如，C2-6炔基)的例子包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1-丁炔基、2-丁炔基和3-丁炔基。
本文中的术语“烷基氧基”或“烷氧基”是指通过氧原子附接至母体分子部分的如上定义的烷基。烷氧基例如C1-6烷氧基或C1-4烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基等。
本文的术语“环烷基”是指选自包括单环和多环(例如，双环和三环)基团的饱和的和部分不饱和的环状烃基团中的烃基团。例如，环烷基可以包含3至12个(如3至10个，进一步如3至8个，进一步如3至6个、3至5个或3至4个)碳原子。甚至进一步例如，环烷基可以选自包含3至12个(如3至10个，进一步如3至8个、3至6个)碳原子的单环基团。单环环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、和环十二烷基。具体地，饱和的单环环烷基(例如，C3-8环烷基)的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。在优选的实施方案中，环烷基是含有3至6个碳原子的单环的环(缩写为C3-6环烷基)，其包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。双环环烷基的例子包括具有7至12个环原子的那些，这些环原子排列为选自[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]环系中的双环的环，或选自双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷和双环[3.2.2]壬烷中的桥接双环的环。双环环烷基的其他例子包括排列为选自[5,6]和[6,6]环系中的双环的环(如
Figure BDA0002713602000000121
)的那些，其中波浪线指示附接点。环可以是饱和的或者具有至少一个双键(即部分不饱和的)，但不是完全共轭的，并且不是芳香族的，因为芳香族在本文中进行了定义。
单独使用或与其他术语组合使用的术语“芳基”是指选自以下的基团：
5元和6元碳环芳香族环，例如苯基；
双环环系，如7元至12元双环环系，其中至少一个环是碳环和芳香族的，例如萘基和茚满基；以及
三环环系，如10元至15元三环环系，其中至少一个环是碳环和芳香族的，例如芴基。
术语“芳香族烃环”和“芳基”在本文的整个公开文本中可互换使用。在一些实施方案中，单环或双环芳香族烃环具有5至10个成环碳原子(即，C5-10芳基)。单环或双环芳香族烃环的例子包括但不限于苯基、萘-1-基、萘-2-基、蒽基、菲基等。在一些实施方案中，芳香族烃环是萘环(萘-1-基或萘-2-基)或苯基环。在一些实施方案中，芳香族烃环是苯基环。
本文的术语“杂芳基”是指选自以下的基团：
a)5元、6元或7元芳香族单环的环，其包含至少一个杂原子，例如1至4个、或在一些实施方案中1至3个、在一些实施方案中1至2个杂原子，这些杂原子选自氮(N)、硫(S)和氧(O)，其余的环原子是碳；
b)8元至12元双环的环，其包含至少一个杂原子，例如1至4个、或在一些实施方案中1至3个、或在其他实施方案中1或2个杂原子，这些杂原子选自N、O和S，其余环原子是碳，并且其中至少一个环是芳香族的并且该芳香族环中存在至少一个杂原子；以及
c)11元至14元三环的环，其包含至少一个杂原子，例如1至4个、或在一些实施方案中1至3个、或在其他实施方案中1或2个杂原子，这些杂原子选自N、O和S，其余环原子是碳，并且其中至少一个环是芳香族的并且芳香族环中存在至少一个杂原子。
当杂芳基中的S和O原子的总数超过1时，那些杂原子彼此不相邻。在一些实施方案中，杂芳基中的S和O原子的总数不大于2。在一些实施方案中，芳香族杂环中的S和O原子的总数不大于1。当杂芳基含有多于一个杂原子环成员时，杂原子可以相同或不同。杂芳基的一个或多个环中的氮原子可以被氧化以形成N-氧化物。如本文所用的术语“C-连接的杂芳基”意指杂芳基通过来自该杂芳基环的C原子的键与核心分子连接。
术语“芳香族杂环的环”和“杂芳基”在本文的整个公开文本中可互换使用。在一些实施方案中，单环或双环芳香族杂环的环具有5、6、7、8、9或10个成环成员，其中1、2、3或4个杂原子环成员独立地选自氮(N)、硫(S)和氧(O)，并且其余的环成员是碳。在一些实施方案中，单环或双环芳香族杂环的环是包含1或2个独立地选自氮(N)、硫(S)和氧(O)中的杂原子环成员的单环或双环的环。在一些实施方案中，单环或双环芳香族杂环的环是5元至6元杂芳基环，该杂芳基环为单环并且具有1或2个独立地选自氮(N)、硫(S)和氧(O)中的杂原子环成员。在一些实施方案中，单环或双环芳香族杂环的环是8元至10元杂芳基环，该杂芳基环为双环并且具有1或2个独立地选自氮、硫和氧中的杂原子环成员。
杂芳基或者单环或双环芳香族杂环的环的例子包括但不限于(如从指定优先次序1的连接位置开始编号)吡啶基(如2-吡啶基、3-吡啶基、或4-吡啶基)、噌啉基、吡嗪基、2,4-嘧啶基、3,5-嘧啶基、2,4-咪唑基、咪唑并吡啶基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基(如1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、或1,3,4-噻二唑基)、四唑基、噻吩基(如噻吩-2-基、噻吩-3-基)、三嗪基、苯并噻吩基、呋喃基(furyl或furanyl)、苯并呋喃基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲哚啉基、噁二唑基(如1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、或1,3,4-噁二唑基)、酞嗪基、吡嗪基、哒嗪基、吡咯基、三唑基(如1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、或1,3,4-三唑基)、喹啉基、异喹啉基、吡唑基、吡咯并吡啶基(如1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)、吡唑并吡啶基(如1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)、苯并噁唑基(如苯并[d]噁唑-6-基)、蝶啶基、嘌呤基、1-氧杂-2,3-二唑基、1-氧杂-2,4-二唑基、1-氧杂-2,5-二唑基、1-氧杂-3,4-二唑基、1-硫杂-2,3-二唑基、1-硫杂-2,4-二唑基、1-硫杂-2,5-二唑基、1-硫杂-3,4-二唑基、呋咱基(如呋咱-2-基、呋咱-3-基)、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、呋喃并吡啶基、苯并噻唑基(如苯并[d]噻唑-6-基)、吲唑基(如1H-吲唑-5-基)和5,6,7,8-四氢异喹啉。
本文的术语“杂环的”或“杂环”或“杂环基”是指选自包含至少一个碳原子以及至少一个杂原子如1至4个杂原子、进一步如1至3个杂原子、或进一步如1或2个杂原子的3元、4元、5元、6元、7元、8元、9元、10元、11元或12元单环、双环和三环饱和环和部分不饱和环中的环，这些杂原子选自氮(N)、硫(S)、氧(O)、-SO-或-SO2。
在一些实施方案中，杂环基是具有至少一个选自N、O和S中的杂原子的4元、5元、6元、7元或8元单环的环。在一些优选的实施方案中，杂环基是包含一个氮杂原子的4元、5元、6元、7元或8元饱和单环的环。示例性杂环基是氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、氮杂环庚烷基、和氮杂环辛烷基。在其他实施方案中，杂环基是5元、6元、7元或8元饱和单环的环，其包含一个氮原子和1个选自-NH、-O-、-S-、-SO-或-SO2-中的另外的杂原子。示例性杂环基是吗啉代、吗啉基或哌嗪基环。在一些实施方案中，杂环基是7元至12元饱和双环的环，其包含一个氮原子和0或1或2个选自-NH、-O-、-S-、-SO-或-SO2-中的另外的杂原子。在一些优选的实施方案中，杂环基是双环桥接环或螺环。
本文的“杂环”还指包含至少一个选自N、O和S中的杂原子的5元至7元杂环的环，其与5元、6元和/或7元环烷基、碳环芳香族或杂芳香族环稠合，条件是当杂环的环与碳环芳香族或杂芳香族环稠合时，附接点在杂环的环上，并且当杂环的环与环烷基稠合时，附接点可以在环烷基或杂环的环上。本文的“杂环”还指包含至少一个选自N、O和S中的杂原子的脂肪族螺环的环，条件是附接点在杂环的环上。环可以是饱和的或具有至少一个双键(即部分不饱和的)。杂环可以被氧代基取代。附接点可以是杂环的环中的碳或杂原子。杂环不是如本文所定义的杂芳基。
杂环的例子包括但不限于(如从指定为优先次序1的连接位置开始编号)1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、2,4-咪唑烷基、2,3-吡唑烷基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2,5-哌嗪基、吡喃基、吗啉基、吗啉代、2-吗啉基、3-吗啉基、环氧乙烷基、吖丙啶基、环硫乙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、1,2-二硫杂环丁烷基、1,3-二硫杂环丁烷基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、硫代吗啉基、噻噁烷基、哌嗪基、高哌嗪基、高哌啶基、氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、1,4-氧杂硫杂环己烷基、1,4-二氧杂环庚烷基、1,4-氧杂硫杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、1,4-二硫杂环庚烷基、1,4-硫杂氮杂环庚烷基和1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-二硫杂环己烷基、1,4-氮杂硫杂环己烷基、氧杂氮杂卓基、二氮杂卓基、硫杂氮杂卓基、二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、1,4-二噁烷基、1,3-二氧戊环基、吡唑啉基、吡唑烷基、二噻烷基、二硫戊环基、吡唑烷基、咪唑啉基、嘧啶酮基、1,1-二氧代-硫代吗啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基和氮杂双环[2.2.2]己基。经取代的杂环还包括被一个或多个氧代部分取代的环系，如哌啶基N-氧化物、吗啉基-N-氧化物、1-氧代-1-硫代吗啉基和1,1-二氧代-1-硫代吗啉基。
本文公开的化合物可含有不对称中心，并且因此可以作为对映异构体存在。“对映异构体”是指化合物的两种立体异构体，它们彼此是不可重叠的镜像。当本文公开的化合物具有两个或更多个不对称中心时，它们可以另外作为非对映异构体存在。对映异构体和非对映异构体属于更广泛的立体异构体类别。旨在包括作为基本上纯的拆分的对映异构体、其外消旋混合物、以及非对映异构体的混合物的所有这些可能的立体异构体。旨在包括本文公开的化合物和/或其药学上可接受的盐的所有立体异构体。除非另外特别提及，否则提及一种异构体适用于任何可能的异构体。每当未指定异构体组成时，包括所有可能的异构体。
如本文所用的术语“基本上纯的”意指目标立体异构体含有按重量计不大于35％、如不大于30％、进一步如不大于25％、甚至进一步如不大于20％的任何其他一种或多种立体异构体。在一些实施方案中，术语“基本上纯的”意指目标立体异构体含有按重量计不大于10％、例如不大于5％、如不大于1％的任何其他一种或多种立体异构体。
当本文公开的化合物含有烯属双键时，除非另有说明，否则此类双键意在包括E和Z几何异构体两者。
当本文公开的化合物含有二取代的环己基或环丁基时，位于环己基或环丁基环上的取代基可以采用顺式和反式形成。顺式形成意指两个取代基位于环上2个取代基位置的上侧，而反式将意指它们位于环的对侧。
将反应产物彼此分离和/或与起始材料分离可能是有利的。通过本领域常用的技术将每个步骤或一系列步骤的所需产物分离和/或纯化(下文中分离)至所需的均匀度。典型地，此类分离涉及多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华、或色谱法。色谱法可以涉及许多方法，包括例如：反相和正相；尺寸排阻；离子交换；高、中和低压液相色谱方法和设备；小规模分析型；模拟移动床(“SMB”)和制备型薄层或厚层色谱法；以及小规模薄层和快速色谱法的技术。本领域技术人员将应用最有可能实现所需分离的技术。
“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心的化合物的立体异构体，但它们不是彼此的镜像。通过本领域技术人员熟知的方法，诸如通过色谱法和/或分步结晶，可以基于非对映异构体混合物的物理化学差异将它们分离成其单独的非对映异构体。对映异构体可以通过以下方式来分离：通过与适当的光学活性化合物(例如，手性助剂如手性醇或莫舍酰氯(Mosher’s acid chloride))反应将对映异构体混合物转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体并且将单独的非对映异构体转化(例如，水解)成相应的纯对映异构体。也可以使用手性HPLC柱来分离对映异构体。
单一立体异构体例如基本上纯的对映异构体可以通过使用一种方法将外消旋混合物拆分来获得，该方法例如使用光学活性拆分剂形成非对映异构体(Eliel,E.和Wilen,S.Stereochemistry of Organic Compounds.New York:John Wiley&Sons,Inc.,1994；Lochmuller,C.H.,等人“Chromatographic resolution of enantiomers:Selectivereview.”J.Chromatogr.,113(3)(1975):第283-302页)。本发明的手性化合物的外消旋混合物可以通过任何合适的方法分离和分开，包括：(1)与手性化合物形成离子非对映异构体盐并且通过分级结晶或其他方法分离；(2)用手性衍生化试剂形成非对映异构体化合物，分离非对映异构体并且转化为纯立体异构体；以及(3)在手性条件下直接分离基本上纯的或富集的立体异构体。参见：Wainer,Irving W.,编辑Drug Stereochemistry:AnalyticalMethods and Pharmacology.New York:Marcel Dekker,Inc.,1993。
“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适合于与人和低等动物的组织接触使用而没有过度毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的利益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐可以在本文公开的化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱官能团与合适的有机酸反应或通过使酸性基团与合适的碱反应而单独制备。
另外，如果作为酸加成盐获得本文公开的化合物，则可以通过将酸式盐的溶液碱化来获得游离碱。相反，如果产物是游离碱，则可以按照用于从碱化合物制备酸加成盐的常规程序，通过将游离碱溶解在合适的有机溶剂中并且用酸处理该溶液来产生加成盐(如药学上可接受的加成盐)。本领域技术人员将认识到各种合成方法学，其可以在无需过度实验的情况下使用以制备无毒的药学上可接受的加成盐。
如本文所定义，“其药学上可接受的盐”包括至少一种式(I)的化合物的盐和式(I)的化合物的立体异构体的盐，如对映异构体的盐和/或非对映异构体的盐。
当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，文本的术语“给予”(administration，administering)、“治疗”(treating和treatment)意指外源性药剂、治疗剂、诊断剂或组合物与该动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。细胞的治疗涵盖试剂与该细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中该流体与该细胞接触。术语“给予”和“治疗”还意指通过试剂、诊断剂、结合化合物或者通过另一种细胞对例如细胞的体外和离体治疗。本文的术语“受试者”包括任何生物体，优选动物，更优选哺乳动物(例如大鼠、小鼠、狗、猫、兔)并且最优选人。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指这样的活性成分(如化合物)量，当被给予受试者以治疗疾病或者疾病或病症的至少一种临床症状时足以影响对该疾病、病症或症状的此类治疗。“治疗有效量”可随以下各项变化：化合物，疾病、病症和/或疾病或病症的症状，疾病、病症和/或疾病或病症的症状的严重程度，待治疗的受试者的年龄，和/或待治疗的受试者的体重。在任何给定的例子中，适当的量对于本领域技术人员来说是清楚的，或者可以通过常规实验来确定。在一些实施方案中，“治疗有效量”是本文公开的至少一种化合物和/或其至少一种立体异构体和/或其至少一种其药学上可接受的盐有效于“治疗”(如上定义)受试者的疾病或病症的量。在组合疗法的情况下，“治疗有效量”是指用于有效治疗疾病、病症或病状的组合对象的总量。
本文公开的术语“至少一个取代基”包括例如1至5个(如1至4个，进一步如1、2或3个)取代基，条件是化合价允许这种取代。例如，本文公开的“至少一个取代基R15”包括1至4个(如1至3个，进一步如1或2个)选自如本文公开的R15列表中的取代基。
包含本文公开的化合物的药物组合物可以经由口服、吸入、直肠、肠胃外或局部给予来给予至对其有需要的受试者。对于口服给予，药物组合物可以是常规固体配制品如片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊等，液体配制品如水或油悬浮液，或其他液体配制品如糖浆、溶液、悬浮液等；对于肠胃外给予，药物组合物可以是溶液、水溶液、油悬浮液浓缩物、冻干粉末等。优选地，药物组合物的配制品选自片剂、包衣片剂、胶囊、栓剂、鼻喷雾剂或注射剂，更优选片剂或胶囊。药物组合物可以是具有准确剂量的单个单位给予物。此外，药物组合物还可包含另外的活性成分。
本文公开的药物组合物的所有配制品可以通过制药领域中的常规方法生产。例如，可以将活性成分与一种或多种赋形剂混合，然后从而制造所需的配制品。“药学上可接受的赋形剂”是指适用于所需药物配制品的常规药物载体，例如：稀释剂、媒介物(如水、各种有机溶剂等)、填充剂(如淀粉、蔗糖等)、粘合剂(如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮(PVP))；润湿剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六醇；吸收载体如高岭土和皂土；润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、聚乙二醇等。此外，该药物组合物还包含其他药学上可接受的赋形剂，如分散剂、稳定剂、增稠剂、络合剂、缓冲剂、渗透促进剂、聚合物、芳香物、甜味剂、和染料。
术语“疾病”是指任何疾病、不适、病、症状或适应症，并且可以与术语“病症”或“病状”互换。
在整个说明书和随后的权利要求书中，除非上下文另有要求，否则术语“包含”和变型如“包含”(“comprises”和“comprising”)旨在指明其后的特征的存在，但不排除一个或多个其他特征的存在或添加。当在本文中使用时，术语“包含”可以用术语“含有”、“包括”替代或有时用“具有”替代。
在整个说明书和随后的权利要求书中，术语“Cn-m”指示包括端点的范围，其中n和m是整数并且指示碳数。例子包括C1-8、C1-6等。
除非在本文件的其他地方明确定义，否则本文使用的所有其他技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。
通用合成
本文公开的化合物(包括其盐)可以使用已知的有机合成技术制备，并且可以根据多种可能的合成途径中的任何一种来合成。
用于制备本文公开的化合物的反应可以在可由有机合成领域的技术人员容易选择的合适的溶剂中进行。合适的溶剂可以是在进行反应的温度(例如可以在从溶剂的沸点温度的范围的温度)下与起始材料、中间体或产物基本上不反应的。给定的反应可以在一种溶剂或多种溶剂的混合物中进行。
本领域技术人员可以容易地确定合适的保护基团的选择。
可以根据本领域已知的任何合适的方法监测反应，这些方法如NMR、UV、HPLC、LC-MS和TLC。化合物可通过多种方法纯化，这些方法包括HPLC和正相二氧化硅色谱法。
手性分析型HPLC用于对不同手性实施例进行保留时间分析，根据所用的柱、流动相、溶剂比将条件分为如下方法。
本文公开的化合物可以按照方案I和方案II制备。
方案I
Figure BDA0002713602000000191
其中R和R15如式(I)所定义。
在方案I中，可商购的醛与碳酰肼1(如呋喃-2-碳酰肼)反应以形成式2，其在酸性条件的存在下重排以给出式3。然后使式3与2-卤代-2-苯基乙酸酯(如2-溴-2-苯基乙酸甲酯)反应以形成式4，其随后通过使用碱如氢氧化钠或叔丁醇钾水解成式5的游离酸。在本领域已知的标准条件下完成酸5的进一步偶联以提供式6的化合物。
方案II
Figure BDA0002713602000000201
其中R和R15如式(I)所定义。
在方案II中，在本领域已知的标准条件下将可商购的酸(如2-苯丙酸)酯化以得到一种式7的化合物，使该化合物与卤化试剂如N-溴代琥珀酰亚胺反应以在α位引入一个卤原子。使式8的化合物与水合肼反应以形成式9。使式9与可商购的2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛反应以得到式10，使其与碳酰肼(如呋喃-2-碳酰肼)反应，并且在酸性条件的存在下进一步重排以给出式12。随后通过使用碱如氢氧化钠或叔丁醇钾将酯12水解成式13的游离酸。在本领域已知的标准条件下完成酸13的进一步偶联以提供式14的化合物。
实施例
以下实施例旨在仅仅是示例性的，并且不应被认为以任何方式进行限制。除非另有说明，否则以下所述实施例中的实验方法是常规方法。除非另有说明，否则试剂和材料均可商购。所用的全部溶剂和化学品均为分析级或化学纯的。溶剂在使用前都要再蒸馏。无水溶剂均根据标准方法或参考方法制备。用于柱色谱法的二氧化硅凝胶(100-200目)和用于薄层色谱法(TLC)的二氧化硅凝胶(GF254)可从中国的Tsingdao Haiyang Chemical Co.,Ltd.或Yantai Chemical Co.,Ltd.商购；除非另有说明，否则全部用石油醚(60℃-90℃)/乙酸乙酯(v/v)洗脱并且通过碘或磷钼酸在乙醇中的溶液来可视化。除非另有说明，否则所有萃取溶剂均经无水Na2SO4干燥。在Bruck-400核磁共振光谱仪上记录1H NMR谱，其中TMS(四甲基硅烷)作为内标物。通过使用配备有在214nm和254nm处检测的二极管阵列检测器(DAD)和离子阱(ESI源)的Agilent1100高效液相色谱-离子阱质谱仪(LC-MSD阱)记录LC/MS数据。除试剂外的所有化合物名称均由
Figure BDA0002713602000000211
14.0版生成。
在以下实施例中，使用以下缩写：
AcOH 乙酸
ACN 乙腈
Aq 含水的
盐水 饱和氯化钠水溶液
Bn 苄基
BnBr 苄基溴
BPO 过氧化苯甲酰
BSA N,O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺
CH2Cl2或DCM 二氯甲烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
Dppf 1,1"-双(二苯基膦)二茂铁
DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
DIEA或DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DMAP 4-N,N-二甲基氨基吡啶
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
Et2O或ether 乙醚
g 克
h或hr 小时
HATU 六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓
Hex 己烷
HCl 盐酸
HMDS 六甲基二硅氮烷
HPLC 高效液相色谱法
IPA 异丙醇
i-PrOH 异丙醇
LCMS 液相色谱-质谱法
mg 毫克
mL 毫升
mmol 毫摩尔
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
Min 分钟
ms或MS 质谱
Na2SO4 硫酸钠
NBS N-溴代琥珀酰亚胺
PE 石油醚
prep 制备型
Rt 保留时间
RT或rt 室温
TBAF 四丁基氟化铵
TBSCl 叔丁基二甲基甲硅烷基氯
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
μL 微升
实施例1：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-苄基-2-苯乙酰胺
Figure BDA0002713602000000231
步骤A：N'-(6-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)呋喃-2-碳酰肼
向2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(50g，0.26mol)和Et3N(28.9g，0.28mol)在DMSO(600mL)中的搅拌溶液中分批添加呋喃-2-碳酰肼(32.8g，0.26mol)。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示起始材料转化为中间体。添加NH2NH2.H2O(14mL，0.31mol)并且将溶液在70℃下搅拌3h。在减压下蒸发(油泵，在65℃下)后，向残余物中添加水(500mL)，浆化并且过滤。将饼再次用水(300mL)浆化，过滤并且干燥以给出呈黄色固体的产物。MS:M/e260(M+1)+。
步骤B：2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺
将N'-(6-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)呋喃-2-碳酰肼(17g，65mmol)在BSA(136mL)和HMDS(160mL)中的溶液在110℃下加热过夜。将溶液在60℃下在减压下浓缩。向残余物中添加水(200mL)并且浆化1h。将固体过滤，用水洗涤并且干燥以获得呈棕色固体的所需产物(13.1g，83％)。MS:M/e 242(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸甲酯
向2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(1.0g，4.2mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(1.3g，9.4mmol)和2-溴-2-苯基乙酸甲酯(1.0g，4.4mmol)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并且用EtOAc(100mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝2:1-1:3)以给出呈白色固体的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸甲酯(200mg，24.5％)。MS:M/e 390(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸甲酯(200mg，0.51mmol)在MeOH/H2O(3mL/1mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，2mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。去除大部分溶剂以给出水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3-4并且过滤，收集饼，将其干燥以给出呈白色固体的目标化合物(150mg，78.2％)。MS:M/e 376(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-苄基-2-苯乙酰胺
在室温下向苯基甲胺(285mg，2.66mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(500mg，1.33mmol)、DIEA(1.0g，7.75mmol)在DMF(15mL)中的混合物中添加HATU(760mg，2.0mmol)，并且将混合物在室温下搅拌20h。添加50mL的EtOAc并且将混合物用盐水(25mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过柱色谱法经PE/EtOAc(3:1)洗脱来纯化以给出粗产物，向该粗产物中添加20mL的2-甲氧基-2-甲基丙烷并且搅拌20min。将悬浮液过滤并且将滤饼在高真空下干燥，冻干以给出标题产物(375mg，产率：61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.44(t,J＝6.0Hz,1H),8.20(s,1H),8.15(s,2H),7.94–7.87(m,1H),7.43–7.36(m,2H),7.36–7.29(m,3H),7.29–7.22(m,2H),7.22–7.14(m,4H),6.70(dd,J＝3.6,2.0Hz,1H),6.44(s,1H),4.29(d,J＝5.6Hz,2H)。MS:M/e 465(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将实施例1分离成两种对映体立体异构体：实施例1A(较早的峰)和实施例1B(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002713602000000251
Figure BDA0002713602000000252
实施例2：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-环己基-2-苯乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(20mg，0.05mmol)、环己胺(10mg，0.10mmol)、HATU(22mg，0.06mmol)和DIEA(15mg，0.12mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1:1-100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(10mg，43.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.15(br.s,2H),7.95(s,1H),7.90(d,J＝7.9Hz,1H),7.42–7.30(m,5H),7.24(d,J＝3.4Hz,1H),6.77–6.71(m,1H),6.38(br.s,1H),3.60(s,1H),1.75–1.58(m,5H),1.29–1.18(m,5H)ppm。MS:M/e 457(M+1)+。
实施例3：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N,2-二苯乙酰胺
在室温下向苯胺(12mg，0.13mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(30mg，0.08mmol)、DIEA(50mg，0.39mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(36mg，0.09mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。添加5mL的EtOAc并且将混合物用NaHCO3(3mL x 2)、盐水(3mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EtOAc＝1:2)纯化以给出标题产物(10.0mg，产率：30％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),8.20(s,1H),8.15(s,2H),7.95(s,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,2H),7.45–7.34(m,5H),7.30(t,J＝8.0Hz,2H),7.25(d,J＝3.2Hz,1H),7.06(t,J＝7.2Hz,1H),6.79–6.70(m,1H),6.61(s,1H)。MS:M/e 451(M+1)+。
实施例4：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-甲基-2-苯乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(30mg，0.08mmol)、甲胺盐酸盐(64mg，0.96mmol)、HATU(35mg，0.09mmol)和DIPEA(30mg，0.24mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1:1-100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(5mg，16.7％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.18(br.s,2H),7.95(d,J＝0.8Hz,1H),7.82(d,J＝4.6Hz,1H),7.43–7.30(m,5H),7.24(d,J＝3.3Hz,1H),6.74(dd,J＝3.3,1.8Hz,1H),6.39(br.s,1H),2.64(d,J＝4.5Hz,3H)ppm。MS:M/e 389(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将实施例4分离成两种对映体立体异构体：实施例4A(较早的峰)和实施例4B(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002713602000000261
Figure BDA0002713602000000262
Figure BDA0002713602000000271
实施例5：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-乙基-2-苯乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(30mg，0.08mmol)、乙胺(30％，100mg，0.73mmol)、HATU(35mg，0.09mmol)和DIPEA(30mg，0.24mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1:1-100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(8.7mg，27％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.16(br.s,2H),7.99–7.88(m,2H),7.39–7.30(m,5H),7.22(dd,J＝3.4,0.7Hz,1H),6.72(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),6.36(br.s,1H),3.15–3.08(m,2H),0.99(t,J＝7.2Hz,3H)ppm。MS:M/e 403(M+1)+。
实施例6：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-甲氧基苄基)-2-苯乙酰胺
在室温下向(2-甲氧基苄基)甲胺(20mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(40mg，0.11mmol)、DIEA(150mg，1.16mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(52mg，0.14mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。添加20mL的EtOAc并且将混合物用盐水(10mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EtOAc＝1:2)纯化以给出标题产物(25.0mg，产率：49％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(t,J＝6.0Hz,1H),8.24(s,1H),8.19(s,2H),7.94(s,1H),7.43–7.30(m,5H),7.24-7.16(m,2H),7.14(d,J＝7.2Hz,1H),6.93(d,J＝8.0Hz,1H),6.86(t,J＝7.2Hz,1H),6.72(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),6.46(s,1H),4.27(d,J＝6.0Hz,2H),3.73(s,3H)。MS:M/e495(M+1)+。
实施例7：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-氟苄基)-2-苯乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(50mg，0.13mmol)、(2-氟苯基)甲胺(20mg，0.15mmol)、HATU(55mg，0.15mmol)和DIPEA(39mg，0.39mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1:1-100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(40mg，63.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(t,J＝5.9Hz,1H),8.23(s,1H),8.19(br.s,2H),7.93(dd,J＝1.7,0.8Hz,1H),7.42–7.24(m,7H),7.23(dd,J＝3.4,0.8Hz,1H),7.17–7.10(m,2H),6.72(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),6.47(br.s,1H),4.35(d,J＝5.8Hz,2H)ppm。MS:M/e483(M+1)+。
实施例8：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(2-(三氟甲氧基)苄基)乙酰胺
在室温下向(2-(三氟甲氧基)苯基)甲胺(25mg，0.13mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(40mg，0.11mmol)、DIPEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(50mg，0.13mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。添加10mL的EtOAc EA并且将混合物用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EtOAc＝1:1)纯化以给出标题产物(28.0mg，产率：48％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(t,J＝6.0Hz,1H),8.24(s,1H),8.20(s,2H),7.94(dd,J＝2.0,0.8Hz,1H),7.44–7.29(m,9H),7.23(dd,J＝3.6,0.8Hz,1H),6.72(dd,J＝3.6,1.6Hz,1H),6.49(s,1H),4.37(d,J＝6.0Hz,2H)。MS:M/e 549(M+1)+。
实施例9：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((S)-1-苯基乙基)乙酰胺
将(S)-1-苯基乙-1-胺(25.8mg，0.21mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(80mg，0.21mmol)、HATU(87.8mg，0.23mmol)和DIPEA(0.3mL，过量)在DMF(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(60mg，产率：59.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58–8.49(m,1H),8.26–8.13(m,2H),7.98–7.90(m,1H),7.42–7.18(m,11H),6.77–6.70(m,1H),6.51–6.42(m,1H),5.07–4.89(m,1H),1.42–1.30(m,3H)ppm。MS:M/e 479(M+1)+。
实施例10：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((R)-1-苯基乙基)乙酰胺
将(R)-1-苯基乙-1-胺(25.8mg，0.21mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(80mg，0.21mmol)、HATU(87.8mg，0.23mmol)和DIPEA(0.3mL，过量)在DMF(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(32mg，产率：31.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59–8.52(m,1H),8.29–8.16(m,2H),7.95(s,1H),7.44–7.16(m,11H),6.73(s,1H),6.53–6.44(m,1H),5.09–4.89(m,1H),1.44–1.29(m,3H)ppm。MS:M/e 479(M+1)+。
实施例11：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺
在室温下向四氢-2H-吡喃-4-胺(20mg，0.20mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(40mg，0.11mmol)、DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(55mg，0.14mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。添加10mL的EtOAc并且将混合物用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EtOAc＝1:2)纯化以给出标题产物(26.0mg，产率：52％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.16(s,1H),8.13(s,1H),8.05(d,J＝7.6Hz,1H),7.92(s,1H),7.38–7.25(m,5H),7.21(d,J＝3.6Hz,1H),6.70(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),6.35(s,1H),3.85–3.65(m,2H),3.29–3.24(m,2H),1.73–1.59(m,2H),1.46–1.29(m,2H)。MS:M/e459(M+1)+。
实施例12：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-环戊基-2-苯乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(50mg，0.13mmol)、环戊胺(13mg，0.15mmol)、HATU(55mg，0.15mmol)和DIPEA(39mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1:1-100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(24.5mg，42.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(s,1H),8.14(br.s,2H),7.74(d,J＝2.9Hz,1H),7.48–7.30(m,6H),7.26–7.21(m,1H),6.64(br.s,1H),6.58(s,1H),4.31–4.09(m,1H),2.12–1.83(m,2H),1.77–1.48(m,5H),1.47–1.38(m,1H)ppm。MS:M/e 443(M+1)+。
实施例13：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(1,2,3,4-四氢萘-1-基)乙酰胺
在室温下向1,2,3,4-四氢萘-1-胺(20mg，0.14mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(40mg，0.11mmol)、DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(50mg，0.13mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。添加10mL的EtOAc并且将混合物用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EtOAc＝1:2)纯化以给出标题产物(41.0mg，产率：74％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(dd,J＝8.4,5.6Hz,1H),8.29–8.10(m,3H),7.95(s,1H),7.46(d,J＝6.8Hz,1H),7.43–7.31(m,4H),7.30–7.14(m,2H),7.14–7.00(m,3H),6.74(s,1H),6.46(d,J＝13.6Hz,1H),5.10–4.95(m,1H),2.77–2.60(m,2H),1.97–1.57(m,4H)。MS:M/e 505(M+1)+。
实施例14：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2,3-二氢-1H-茚-1-基)-2-苯乙酰胺
在室温下向2,3-二氢-1H-茚-1-胺(20mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(40mg，0.11mmol)、DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(52mg，0.14mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。添加10mL的EtOAc EA并且将混合物用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EtOAc＝1:1)纯化以给出标题产物(33.0mg，产率：61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43(t,J＝7.6Hz,1H),8.30–8.03(m,3H),7.95(s,1H),7.47(d,J＝7.2Hz,1H),7.44–7.31(m,4H),7.29–7.06(m,5H),6.81–6.68(m,1H),6.46(d,J＝9.6Hz,1H),5.36(q,J＝8.0Hz,1H),2.91–2.75(m,2H),2.43–2.31(m,1H),1.89–1.71(m,1H)。MS:M/e 491(M+1)+。
实施例15：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((R)-苯并二氢吡喃-4-基)-2-苯乙酰胺
在室温下向(R)-苯并二氢吡喃-4-胺盐酸盐(20mg，0.13mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(40mg，0.11mmol)、DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(50mg，0.13mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。添加15mL的EtOAc并且将混合物用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EtOAc＝1:1)纯化以给出标题产物(13.0mg，产率：23％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64–8.50(m,1H),8.27–8.07(m,2H),7.95(s,1H),7.48–7.42(m,1H),7.41–7.20(m,5H),7.18–6.98(m,2H),6.93–6.76(m,1H),6.76–6.69(m,2H),6.45(d,J＝14.4Hz,1H),5.15–5.01(m,1H),4.27–4.00(m,2H),2.09–1.90(m,2H)。MS:M/e507(M+1)+。
实施例16：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((S)-苯并二氢吡喃-4-基)-2-苯乙酰胺
在室温下向(S)-苯并二氢吡喃-4-胺盐酸盐(20mg，0.13mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(40mg，0.11mmol)、DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(50mg，0.13mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。添加15mL的EtOAc并且将混合物用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EtOAc EA＝1:1)纯化以给出标题产物(25.0mg，产率：45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(dd,J＝13.2,8.4Hz,1H),8.29–8.05(m,3H),7.95(s,1H),7.49–7.42(m,1H),7.42–7.21(m,5H),7.17–6.98(m,2H),6.91–6.76(m,1H),6.75–6.68(m,2H),6.45(d,J＝14.4Hz,1H),5.18–5.01(m,1H),4.26–4.03(m,2H),2.12–1.90(m,2H)。MS:M/e 507(M+1)+。
实施例17：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-苯乙基-2-苯乙酰胺
在室温下向2-苯基乙-1-胺(160mg，1.32mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(450mg，1.2mmol)、DIEA(650mg，5.0mmol)在DMF(8mL)中的混合物中添加HATU(550mg，1.4mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物倒入30mL的H2O中。沉淀出白色固体并且将其过滤。将固体用H2O洗涤，在高真空下干燥并且通过柱色谱仪纯化以给出标题产物(385.0mg，产率：67％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34–8.06(m,3H),7.99–7.89(m,2H),7.39–7.31(m,5H),7.27–7.19(m,3H),7.18–7.10(m,3H),6.74(dd,J＝3.6,2.0Hz,1H),6.38(s,1H),3.42–3.34(m,2H),2.71(t,J＝7.2Hz,2H)。MS:M/e 479(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将实施例17分离成两种对映体立体异构体：实施例17A(较早的峰)和实施例17B(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002713602000000321
Figure BDA0002713602000000322
Figure BDA0002713602000000331
实施例18：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((6-(1-羟基环丁基)吡啶-2-基)甲基)-2-苯乙酰胺
Figure BDA0002713602000000332
步骤A：1-(吡啶-2-基)环丁-1-醇
在-78℃下在N2下向2-溴吡啶(5.0g，31.6mmol)在THF(60mL)中的搅拌溶液中逐滴添加n-BuLi(2.4M，16mL)的溶液。搅拌20min后，在-78℃下添加环丁酮在THF(10mL)中的溶液。添加完成后，将混合物搅拌30min并且缓慢温热至室温并且搅拌3h。将混合物在50mL的NH4Cl水溶液中淬灭，用EtOAc(50mL x 2)萃取。将合并的萃取物用盐水(50mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过柱色谱法纯化以给出呈浅黄色油的标题产物(3.5g，74％)。MS:M/e 150(M+1)+。
步骤B：乙酸1-(吡啶-2-基)环丁酯
在0℃下向1-(吡啶-2-基)环丁-1-醇(3.5g，23.5mmol)和Et3N(6.0g，59.4mmol)在CH2Cl2(50mL)中的混合物中逐滴添加DMAP(550mg，4.5mmol)，并且接着逐滴添加AcCl(2.2g，28.2mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16h。将混合物用盐水(30mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过柱色谱法纯化以给出呈浅黄色油的标题产物(1.2g，27％)。MS:M/e 192(M+1)+。
步骤C：2-(1-乙酰氧基环丁基)吡啶1-氧化物
在0℃下向乙酸1-(吡啶-2-基)环丁酯(1.2g，6.3mmol)在CH2Cl2(20mL)中的搅拌溶液中分批添加固体m-CPBA(1.6g，9.3mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16h。将混合物用CH2Cl2(30mL)稀释，用NaHCO3水溶液(10mL x 3)、盐水(10mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩以给出呈浅黄色油的标题产物(2.1g，粗品)。MS:M/e 208(M+1)+。
步骤D：乙酸1-(6-氰基吡啶-2-基)环丁酯
在室温下向2-(1-乙酰氧基环丁基)吡啶1-氧化物(1.7g，8.2mmol)和Et3N(3.0g，30mmol)在MeCN(20mL)中的混合物中添加二甲基氨基甲酰氯(1.7g，16.4mmol)，并且接着添加TMSCN(1.6g，16.4mmol)，并且将所得混合物在50℃下搅拌5h。将混合物用EtOAc EA(50mL)稀释，并且用盐水(30mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过柱色谱法纯化以给出呈浅黄色油的标题产物(420mg，24％)。MS:M/e 217(M+1)+。
步骤E：乙酸1-(6-(氨甲基)吡啶-2-基)环丁酯
将乙酸1-(6-氰基吡啶-2-基)环丁酯(420mg，1.94mmol)和Ranney Ni(500mg)在NH2/MeOH(1M，20mL)中的混合物在室温下在H2下搅拌24h。将混合物过滤并且将滤液浓缩以给出呈浅黄色油的标题产物(430mg，粗品)。MS:M/e 221(M+1)+。
步骤F：乙酸1-(6-((2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酰氨基)甲基)吡啶-2-基)环丁酯
在室温下向乙酸1-(6-(氨甲基)吡啶-2-基)环丁酯(430mg，1.95mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4，3-e][1，2，4]三唑并[1，5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(500mg，1.33mmol)、DIEA(950mg，7.3mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加HATU(600mg，1.58mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物倒入30mL的H2O中并且搅拌。沉淀出白色固体并且将其过滤。将滤饼用H2O(20mL x 2)洗涤，在空气中干燥以给出呈无色油的标题产物(245mg，产率：32％)。MS:M/e 578(M+1)+。
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((6-(1-羟基环丁基)吡啶-2-基)甲基)-2-苯乙酰胺
在室温下向乙酸1-(6-((2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酰氨基)甲基)吡啶-2-基)环丁酯(245mg，0.42mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2M，3mL)，并且将所得混合物搅拌5h。将混合物通过HCl(1M)中和至pH约7。将混合物用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的萃取物用盐水(20mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过柱色谱法和制备型TLC(EtOAc，100％)纯化以给出标题产物(135mg，59％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(t,J＝5.6Hz,1H),8.34–8.09(m,3H),7.95(s,1H),7.71(t,J＝7.6Hz,1H),7.53–7.44(m,2H),7.44–7.31(m,4H),7.25(d,J＝3.2Hz,1H),7.18(d,J＝7.6Hz,1H),6.77–6.69(m,1H),6.53(s,1H),5.66(s,1H),4.56–4.40(m,2H),2.47–2.35(m,2H),2.21–2.06(m,2H),1.86–1.60(m,2H)。MS:M/e 536(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将实施例18分离成两种对映体立体异构体：实施例18A(较早的峰)和实施例18B(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002713602000000351
Figure BDA0002713602000000352
Figure BDA0002713602000000361
实施例19：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(100mg，0.27mmol)、NH3/MeOH(4N，5mL，20mmol)、HATU(110mg，0.29mmol)和DIPEA(100mg，0.78mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1:1-100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(37mg，36.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.18(br.s,1H),7.96(s,1H),7.54(s,1H),7.47–7.31(m,5H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.74(br.s,2H),6.36(s,1H)ppm。MS:M/e375(M+1)+。
实施例20：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2,3-二氢苯并呋喃-3-基)-2-苯乙酰胺
在室温下向2,3-二氢苯并呋喃-3-胺(20mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(40mg，0.11mmol)、DIEA(70mg，0.54mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(50mg，0.13mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。添加10mL的EtOAc并且将混合物用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EtOAc＝1:1)纯化以给出标题产物(25.0mg，产率：46％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(dd,J＝33.2,7.2Hz,1H),8.35–8.03(m,3H),7.95(s,1H),7.42–7.29(m,5H),7.28–7.14(m,2H),6.94–6.84(m,1H),6.81(d,J＝8.0Hz,1H),6.73(dd,J＝3.2,2.0Hz,1H),6.43(d,J＝9.2Hz,1H),5.66–5.55(m,1H),4.75–4.59(m,1H),4.30–4.15(m,1H)。MS:M/e 493(M+1)+。
实施例21：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-甲氧基苄基)戊酰胺
Figure BDA0002713602000000371
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸乙酯
将2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(2g，8.3mmol)、2-溴戊酸乙酯(2.1g，9.9mmol)和K2CO3(2.3g，16.6mmol)在DMF(50mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。向溶液中添加水(30mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取并且用盐水(50mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(PE:EtOAc＝4:1至2:1)纯化以得到2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸乙酯(600mg，20％)。MS:M/e 370(M+1)+
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸
将NaOH溶液(324mg，在2mL水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸乙酯(600mg，1.6mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌3h。将溶液浓缩，添加水(10mL)并且用1N HCl溶液酸化至pH＝5。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的所需产物(475mg，86％)。MS:M/e 342(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-甲氧基苄基)戊酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)戊酸(50mg，0.15mmol)、(2-甲氧基苯基)甲胺(24mg，0.18mmol)、HATU(69mg，0.18mmol)和DIEA(39mg，0.3mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱法(PE:EtOAc＝1:1)纯化以得到所需产物(45mg，67％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),8.15(br.s,2H),7.95(s,1H),7.88(t,J＝4.0Hz,1H),7.25-7.10(m,3H),6.95-6.74(m,3H),5.25(dd,J＝12.0Hz,4.0Hz,1H),4.28-4.15(m,2H),3.75(s,3H),2.35-2.14(m,2H),1.19-1.11(m,2H),0.86(t,J＝8.0Hz,3H)ppm。MS:M/e 461(M+1)+。
实施例22：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(3-(三氟甲基)苄基)乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(50mg，0.13mmol)、(3-(三氟甲基)苯基)甲胺(25.5mg，0.13mmol)、HATU(56mg，0.14mmol)和DIEA(0.5mL)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(20mL)中，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤，并且通过制备型TLC纯化以得到标题化合物(15mg，产率：21.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.65–8.52(m,1H),8.24(s,1H),8.19(br.s,1H),7.98–7.88(m,1H),7.64–7.50(m,4H),7.46–7.33(m,5H),7.25(d,J＝4Hz,1H),6.78–6.71(m,1H),6.50(s,1H),4.43(d,J＝8.0Hz,2H)ppm。MS:M/e 533(M+1)+。
实施例23：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(3-甲基苄基)-2-苯乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(50mg，0.13mmol)、间甲苯基甲胺(16mg，0.13mmol)、HATU(56mg，0.14mmol)和DIEA(0.5mL)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(20mL)中，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤，并且通过制备型TLC纯化以得到标题化合物(5mg，产率：8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51–8.40(m,1H),8.24(s,1H),8.18(br.s,2H),7.98–7.91(m,1H),7.48–7.41(m,2H),7.41–7.32(m,3H),7.27–7.23(m,1H),7.21–7.14(m,1H),7.07–6.98(m,3H),6.77–6.71(m,1H),6.48(s,1H),4.30(t,J＝5.2Hz,2H),2.25(s,3H)ppm。MS:M/e 479(M+1)+。
实施例24：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(4-(三氟甲氧基)苄基)乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(50mg，0.13mmol)、(4-(三氟甲氧基)苯基)甲胺(29mg，0.15mmol)、HATU(55mg，0.15mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1:1-100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(39.3mg，55.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),8.24(s,1H),8.20(br.s,2H),7.95(s,1H),7.47–7.27(m,9H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.74(br.s,1H),6.48(s,1H),4.45–4.27(m,2H)ppm。MS:M/e549(M+1)+。
实施例25：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(4-甲基苄基)-2-苯乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(50mg，0.13mmol)、对甲苯基甲胺(19mg，0.15mmol)、HATU(55mg，0.15mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1:1-100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(15.6mg，25.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(t,J＝5.9Hz,1H),8.23(s,1H),8.18(br.s,2H),7.95(s,1H),7.49–7.31(m,5H),7.24(d,J＝3.3Hz,1H),7.16–7.05(m,4H),6.77–6.71(m,1H),6.46(s,1H),4.28(d,J＝5.9Hz,2H),2.26(s,3H)。MS:M/e 479(M+1)+。
实施例26：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(4-氟苄基)-2-苯乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(50mg，0.13mmol)、(4-氟苯基)甲胺(19mg，0.15mmol)、HATU(55mg，0.15mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1:1-100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(34.7mg，55.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(s,1H),8.23(s,1H),8.19(br.s,1H),7.96(s,1H),7.44–7.19(m,8H),7.18–7.06(m,2H),6.74(br.s,1H),6.46(s,1H),4.30(t,J＝9.7Hz,2H)。MS:M/e 483(M+1)+。
实施例27：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-甲氧基苄基)-4-甲基戊酰胺
Figure BDA0002713602000000401
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-4-甲基戊酸甲酯
向2-(呋喃-2-基)-8H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(482mg，2mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加K2CO3(552mg，4mmol)和2-溴-4-甲基戊酸甲酯(418mg，2mmol)。添加后，将反应混合物搅拌一周。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3:1-1:1)以给出2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-4-甲基戊酸甲酯(280mg，37.9％)。MS:M/e 370(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-4-甲基戊酸
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-4-甲基戊酸甲酯(200mg，0.54mmol)在MeOH/H2O(10mL/5mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，4mL)。添加后，将反应混合物搅拌过夜。去除大部分溶剂以给出水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3-4并且过滤，收集饼，将其干燥以给出呈白色固体的目标化合物(180mg，93.8％)。MS:M/e 356(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-甲氧基苄基)-4-甲基戊酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-4-甲基戊酸(36.9mg，0.1mmol)、(2-甲氧基苯基)甲胺(13.7mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3:1-1:1)纯化以给出目标化合物(35mg，74.6％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.17(s,2H),7.95(s,1H),7.82(t,J＝5.6Hz,1H),7.29–7.16(m,2H),7.09-7.07(d,J＝7.2Hz,1H),6.98–6.84(m,2H),6.74(s,1H),5.33-5.29(m,1H),4.28-4.13(m,2H),3.75(s,3H),2.43–2.32(m,1H),2.01-1.95(m,1H),1.24(s,1H),0.89-0.83(m,6H)ppm。MS:M/e 475(M+1)+。
实施例28：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(4-甲氧基苄基)-2-苯乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(50mg，0.13mmol)、(4-甲氧基苯基)甲胺(30mg，0.15mmol)、HATU(55mg，0.15mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1:1-100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(23.6mg，36.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(t,J＝6.0Hz,1H),8.23(s,1H),8.17(br.s,2H),7.95(s,1H),7.46–7.30(m,5H),7.24(d,J＝3.4Hz,1H),7.19–7.13(m,2H),6.89–6.82(m,2H),6.74(br.s,1H),6.45(s,1H),4.25(d,J＝5.8Hz,2H),3.72(s,4H)。MS:M/e 495(M+1)+。
实施例29：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(4-(三氟甲基)苄基)乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(50mg，0.13mmol)、(4-(三氟甲基)苯基)甲胺(35mg，0.15mmol)、HATU(55mg，0.15mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1:1-100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(25.7mg，37.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(t,J＝6.0Hz,1H),8.25(s,1H),8.20(br.s,2H),7.95(s,1H),7.68(d,J＝8.1Hz,2H),7.51–7.41(m,4H),7.40–7.30(m,3H),7.24(d,J＝3.3Hz,1H),6.74(br.s,1H),6.49(s,1H),4.53–4.31(m,2H)。MS:M/e 533(M+1)+。
中间体-I：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸
Figure BDA0002713602000000421
步骤A：2-苯基丙酸甲酯
在0℃下向2-苯基丙酸(5g，33.33mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中逐滴添加氯化亚砜(5.15g，50mmol)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌3h。将混合物浓缩，用冰水(20mL)淬灭，用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20:1-5:1)纯化以给出呈黄色油的2-苯基丙酸甲酯(5.22g，95.49％)。MS:M/e 165(M+1)+。
步骤B：2-溴-2-苯基丙酸甲酯
将2-苯基丙酸甲酯(5.22g，31.83mmol)、NBS(6.80g，38.19mmol)、BPO(0.385g，1.591mmol)在四氯化碳(20mL)中的混合物在70℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，将残余物用PE洗涤并且过滤，将滤液浓缩以给出呈黄色油的2-溴-2-苯基丙酸甲酯(7.57g，97.87％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55(d,J＝7.5Hz,2H),7.40–7.27(m,3H),3.80(s,3H),2.30(s,3H)
步骤C：2-肼基-2-苯基丙酸甲酯盐酸盐
向2-溴-2-苯基丙酸甲酯(15g，62.2mmol)在乙腈(200mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(80％，15.5g，249mmol)。添加后，将反应混合物温热至50℃并且搅拌3.5h。将反应混合物在真空中浓缩。向残余物中添加H2O(300mL)并且用EtOAc(200mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。向残余物中添加EtOAc(50mL)并且在0℃下添加至4M HCl/EtOAc溶液(200mL)中。添加后，将混合物在0℃下搅拌1h，然后过滤混合物，并且将滤饼用EtOAc EA(50mL)洗涤，干燥以给出呈白色固体的目标产物(9.8g，68.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,2H),7.43-7.38(m,5H),6.23(s,1H),3.73(s,3H),1.72(s,3H)ppm。MS:M/e195(M+1)+。
步骤D：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯
向2-肼基-2-苯基丙酸甲酯盐酸盐(2.38g，10.3mmol)在乙腈(30mL)中的搅拌混合物中添加2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(1.96g，10.3mmol)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物温热至70℃并且搅拌2h。向混合物中添加1M NaHCO3水溶液，并且将混合物用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥并且在真空中浓缩。将粗产物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝4:1)纯化以给出呈白色固体的目标化合物(2.2g，64.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.05(s,1H),7.35-7.31(m,5H),7.13-7.11(m,2H),3.71(s,3H),3.25(s,3H)ppm。MS:M/e 332(M+1)+。
步骤E：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯
向2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯(2.03g，6.4mmol)在DMSO(20mL)中的搅拌混合物中添加呋喃-2-碳酰肼(0.85g，6.7mmol)和DIEA(2.36g，18.3mmol)。添加后，将反应混合物在120℃下搅拌过夜。在真空中浓缩大部分溶剂，并且向残余物中添加H2O(20mL)并且搅拌1h。将混合物过滤，并且将滤饼用水洗涤。将粗产物在40℃下干燥，并且直接用于下一步骤(850mg，31.5％)。MS:M/e 422(M+1)+。
步骤F：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸甲酯
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯(750mg，1.78mmol)在BSA(7.5mL)和HMDS(7.5mL)中的混合物在110℃下搅拌过夜。将混合物在真空中浓缩以去除BSA和HMDS。向残余物中添加H2O并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并且在真空中浓缩。将粗产物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝4:1-2:1)纯化以给出呈白色固体的目标化合物(150mg，20.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(s,1H),7.64(s,1H),7.31(m,5H),7.21(d,J＝4.0Hz,1H),6.59-6.58(m,1H),3.76(s,3H),2.4(s,3H)ppm MS:M/e 404(M+1)+。
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(中间体-I)
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸甲酯(150mg，0.34mmol)在EtOH(3mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，3mL)。添加后，将反应混合物在70℃下搅拌1h。去除大部分EtOH以给出水层，然后用HCl水溶液酸化至pH＝3-4并且过滤，收集滤饼，干燥以给出呈白色固体的目标化合物(130mg，98.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.31(s,1H),8.21(s,1H),7.99(s,2H),7.95(s,1H),7.33-7.21(m,6H),6.75–6.74(m,1H),2.32(s,3H)ppm。MS:M/e 390(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将中间体-I分离成两种对映体立体异构体(中间体-Ia，较早的峰；和中间体-Ib，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002713602000000452
Figure BDA0002713602000000451
中间体-Ib可以使用以下路径合成：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸
Figure BDA0002713602000000461
步骤A：1-(1-氧代-2-苯基丙-2-基)肼-1,2-二甲酸二叔丁酯
在0℃下向(S)-2-氨基-4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酸(15g，0.08mol)在干THF(0.8L)中的搅拌溶液中添加2-苯基丙醛(53.6g，0.4mol)和DTAD(92g，0.4mol)。添加后，将反应缓慢温热至室温并且在N2下搅拌过夜。将混合物用水/盐水稀释，用EtOAc(600mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩以给出呈黄色油的目标化合物(160g，粗品)。
步骤B：2-(1,2-二(叔丁氧基羰基)肼基)-2-苯基丙酸
向步骤A的产物(120g，0.3mol)在DCM(600mL)中的溶液中添加NaH2PO4(10.08g，0.084mol)在水(150mL)中的溶液。在0℃下添加H2O2(150mL，1.46mol，约4.85当量)。然后逐滴添加75％NaClO2(46g，0.51mol，1.275当量)在水(300mL)中的溶液以保持温度低于10℃。添加后，将反应温热至室温过夜。停止搅拌，并且丢弃水层。将有机层转移至10％NaHSO3溶液(300mL)中，并且将所得混合物在室温下搅拌一小时。收集有机层并且将其用10％NaHSO3溶液(300mL)、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。向残余物中添加CH3CN(200mL)并且将混合物再次浓缩。将所得残余物用EtOAc/PE(1/3-200mL)浆化并且在室温下搅拌过夜。将沉淀物过滤，用EtOAc/PE(1/3，100mL)洗涤以给出呈白色固体的目标化合物(两个步骤，47％、41％)。
步骤C：2-肼基-2-苯基丙酸甲酯盐酸盐
在10℃-30℃下向步骤B的产物(299g，0.787mol)在MeOH(1.2L)中的混合物中逐滴添加SOCl2(187g，1.57mmol)。将所得混合物在65℃下加热过夜。将混合物冷却至室温并且浓缩以给出残余物，向该残余物中添加EtOAc(100mL)并且再次浓缩。将残余物与EtOAc(200mL)一起浆化并且过滤，收集饼以给出呈白色固体的目标化合物(176g，97％，ee％＝99.3％)。
步骤D：(R)-2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯
在室温下向步骤C的产物(11.5g，50mmol)和2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(9.6g，50mmol)在CH3CN(200mL)中的搅拌混合物中添加POCl3(7.7g，50mmol)。添加后，将反应混合物在30℃下搅拌过夜。然后将反应混合物逐滴添加至EtOAc(200mL)/K3PO4水溶液(37g，0.175mol)在H2O(200mL)中的体系中并且搅拌2h。将有机层分离，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩以给出残余物，将该残余物溶解在EtOAc(40mL)中，添加活性炭(5g)并且逐滴添加石油醚(80mL)。将混合物搅拌半小时并且过滤。将滤液浓缩以给出呈浅黄色固体的目标化合物(15g，90％)。
步骤E：(R)-2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯
向步骤D的产物(114g，0.344mol)和呋喃-2-碳酰肼(65g，0.5166mol)在DMSO(115mL)中的混合物中添加DIPEA(88g，0.6888mol)。将所得混合物在80℃下在N2下加热过夜。将混合物冷却至室温并且用PE稀释。丢弃PE层。在剧烈搅拌下将DMSO层缓慢添加至水(1.1L)中。形成悬浮液，过滤并且用水洗涤。在室温下将固体与水(500mL)一起浆化2h，过滤并且用水洗涤，在烘箱中干燥3天以给出呈棕色固体的目标化合物(125g，86％)。
步骤F：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸甲酯
向BSA(204g，1.072mol)和HMDS(161g，1.072mol)的混合物中添加步骤E的产物(90.3g，0.2144mol)。将所得混合物在115℃下加热5小时。将混合物冷却至室温并且在减压下浓缩至干。在室温下向残余物中缓慢添加EtOH(200mL)，并且将所得混合物在75℃下加热1小时。将悬浮液冷却至室温，保持在搅拌下在室温下过夜，过滤并且将饼用PE洗涤，干燥以给出呈灰白色固体的目标化合物(66g，76％)。
步骤G：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸
向步骤F的产物(20.4g，50.62mmol)在MeOH/THF(50mL/150mL)中的混合物中添加4N NaOH(63mL，253mmol)。将所得混合物在30℃(内部温度25℃-30℃)下搅拌过夜。将溶剂在减压下浓缩(浴温25℃-30℃)。向残余物中添加水(150mL)和2N HCl直至pH＝约3。形成悬浮液，过滤并且用水洗涤。收集固体并且从EtOAc(60mL)浆化以给出固体(10g)。将母液用EtOAc萃取。将有机层浓缩。将残余物从EtOAc(20mL)浆化以给出固体(6.5g)。将滤液浓缩并且将残余物用EtOH浆化以给出产物(1.1g)。将三批固体合并，共得到目标化合物(17.6g，89％)。
实施例30：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-苯乙基-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(70mg，0.18mmol)、HATU(75mg，0.20mmol)和DIEA(70mg，0.54mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加2-苯基乙-1-胺(22mg，0.18mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml*2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:2)纯化以得到产物(53.6mg，61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.95(s,3H),7.62(t,J＝4Hz,1H),7.31-7.22(m,4H),7.18-7.11(m,2H),7.10-7.01(m,5H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),3.41-3.35(m,2H),2.80-2.66(m,2H),2.25(s,3H)ppm。MS:M/e 493(M+1)+。
实施例31：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(70mg，0.18mmol)、HATU(75mg，0.20mmol)和DIPEA(70mg，0.54mmol)在THF(10ml)中的搅拌溶液中添加3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(19mg，0.18mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:5)纯化以得到产物(35.1mg，41％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),7.95(s,3H),7.45(t,J＝4Hz,1H),7.32-7.10(m,6H),6.74(s,1H),5.69(s,1H),4.39(t,J＝4Hz,2H),4.26(t,J＝4Hz,2H),3.44-3.40(m,2H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 475(M+1)+。
实施例31A：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
向(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、HATU(108mg，0.28mmol)和DIPEA(100mg，0.78mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(27mg，0.26mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:5)纯化以得到产物(53.5mg，44％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),7.96(s,3H),7.46(t,J＝4Hz,1H),7.37-7.12(m,6H),6.75(dd,J＝8Hz,4Hz,1H),5.70(s,1H),4.40(t,J＝4Hz,2H),4.26(dd,J＝8Hz,4Hz,2H),3.42(dd,J＝8Hz,4Hz,2H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 475(M+1)+。
实施例31B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、HATU(108mg，0.28mmol)和DIPEA(100mg，0.78mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(27mg，0.26mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:5)纯化以得到产物(50.3mg，41％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),7.96(s,3H),7.50-7.41(m,1H),7.37-7.10(m,6H),6.74(d,J＝4Hz,1H),5.70(s,1H),4.50-4.35(m,2H),4.32-4.19(m,2H),3.50-3.39(m,2H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 475(M+1)+。
实施例32：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-甲基-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(70mg，0.18mmol)、HATU(75mg，0.20mmol)和DIPEA(70mg，0.54mmol)在THF(10ml)中的搅拌溶液中添加甲胺盐酸盐(12mg，0.18mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:5)纯化以得到产物(38.3mg，53％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),7.98(s,2H),7.95(s,1H),7.50(q,J＝4Hz,1H),7.34-7.23(m,4H),7.14(d,J＝4Hz,2H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),2.64(d,J＝4Hz,3H),2.30(s,3H)ppm。MS:M/e 403(M+1)+。
实施例33：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(反式)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(10ml)中的搅拌溶液中添加反式-4-氨基-1-甲基环己-1-醇(17mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:5)纯化以得到产物(35.7mg，56％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.00(s,2H),7.95(s,1H),7.38(d,J＝4Hz,1H),7.32-7.24(m,4H),7.14(d,J＝4Hz,2H),6.74(dd,J＝8Hz,4Hz,1H),4.19(s,1H),3.75-3.65(m,1H),2.25(s,3H),1.75-1.66(m,1H),1.64-1.54(m,1H),1.40-1.29(m,6H),0.99(s,3H)ppm。MS:M/e 501(M+1)+。
实施例33A：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(反式)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)-2-苯基丙酰胺
向(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加反式-4-氨基-1-甲基环己-1-醇(18mg，0.14mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:5)纯化以得到产物(36.6mg，57％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.00(s,2H),7.95(s,1H),7.37(d,J＝8Hz,1H),7.33-7.24(m,4H),7.14(d,J＝8Hz,2H),6.80-6.70(m,1H),4.20(s,1H),3.79-3.55(m,1H),2.25(s,3H),1.75-1.66(m,1H),1.64-1.56(m,1H),1.40-1.29(m,6H),0.99(s,3H)ppm。MS:M/e 501(M+1)+。
实施例33B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(反式)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)-2-苯基丙酰胺
向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加反式-4-氨基-1-甲基环己-1-醇(18mg，0.14mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:5)纯化以得到产物(40.4mg，63％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.00(s,2H),7.95(s,1H),7.37(d,J＝8Hz,1H),7.33-7.24(m,4H),7.14(d,J＝8Hz,2H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),4.20(s,1H),3.76-3.63(m,1H),2.25(s,3H),1.77-1.65(m,1H),1.62-1.53(m,1H),1.40-1.29(m,6H),0.99(s,3H)ppm。MS:M/e 501(M+1)+。
实施例34：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N,2-二苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、苯胺(7.2mg，0.077mmol)、HATU(35.3mg，0.092mmol)和DIPEA(20mg，0.154mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出目标化合物(25mg，70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(s,1H),8.29(s,1H),8.04(s,2H),7.95(s,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,2H),7.38–7.22(m,6H),7.13(d,J＝7.6Hz,2H),7.05(t,J＝6.8Hz,1H),6.79–6.70(m,1H),2.47(s,3H)ppm。MS:M/e 465(M+1)+。
实施例35：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-苄基-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、苯基甲胺(8.2mg，0.077mmol)、HATU(35.3mg，0.092mmol)和DIPEA(20mg，0.154mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出目标化合物(18mg，48.9％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.09(t,J＝6.0Hz,1H),8.02(s,2H),7.95(s,1H),7.34–7.14(m,11H),6.75(d,J＝7.2Hz,1H),4.34(d,J＝6.0Hz,2H),2.37(s,3H)ppm。MS:M/e479(M+1)+。
实施例36：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(3-羟基环戊基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、3-氨基环戊-1-醇盐酸盐(21mg，0.15mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和DIPEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(23mg，38％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(d,J＝12.0Hz,1H),7.97(br.s,2H),7.95(s,1H),7.43-7.39(m,1H),7.32-7.24(m,4H),7.18-7.12(m,2H),6.74(d,J＝4.0Hz,1H),4.47(d,J＝4.0Hz,1H),4.18(br.s,1H),4.00(s,1H),2.27(s,3H),1.92-1.73(m,2H),1.67-1.59(m,2H),1.40-1.37(m,2H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+
实施例37：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(1-(羟甲基)环丙基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、(1-氨基环丙基)甲醇盐酸盐(16mg，0.13mmol)、DIPEA(60mg，0.46mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(50mg，0.13mmol)，并且将混合物在室温下搅拌3h。将混合物用15mL的EtOAc稀释，用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以在冻干后给出标题产物(28.0mg，产率61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),8.10–7.82(m,3H),7.75(s,1H),7.35–7.19(m,4H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),6.79–6.69(m,1H),4.55(t,J＝5.6Hz,1H),3.59(dd,J＝11.2,6.0Hz,1H),3.41(dd,J＝11.2,5.6Hz,1H),2.25(s,3H),0.73–0.50(m,4H)。MS:M/e 459(M+1)+。
实施例38：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((R)-2-羟丙基)-2-苯基丙酰胺
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、(R)-1-氨基丙-2-醇(20mg，0.26mmol)、DIPEA(60mg，0.46mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(50mg，0.13mmol)，并且将混合物在室温下搅拌3h。将混合物用15mL的EtOAc和5mL的盐水处理。将水层用EtOAc(5mL x 3)萃取。将合并的有机物用盐水(5mL x 5)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以在冻干后给出标题产物(12.0mg，产率：27％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝6.4Hz,1H),8.07–7.85(m,3H),7.45–7.21(m,5H),7.14(dd,J＝13.2,7.6Hz,2H),6.74(s,1H),4.55(dd,J＝11.2,4.8Hz,1H),3.78–3.61(m,1H),3.14–3.04(m,2H),2.32(s,3H),0.94(d,J＝6.0Hz,3H)。MS:M/e 447(M+1)+。
实施例39：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-甲氧基乙基)-2-苯基丙酰胺
将2-甲氧基乙-1-胺(11.6mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、HATU(43mg，0.11mmol)和DIPEA(0.2mL)在DMF(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(10mg，产率：21.8％)1。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),7.99(br.s,2H),7.96(s,1H),7.66–7.55(m,1H),7.35–7.22(m,4H),7.20–7.08(m,2H),6.78–6.64(m,1H),3.34–3.22(m,4H),3.16(s,3H),2.30(s,3H)ppm。MS:M/e 447(M+1)+。
实施例40：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-环丙基-2-苯基丙酰胺
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、(1-氨基环丙基)甲醇盐酸盐(10mg，0.17mmol)、DIPEA(55mg，0.42mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(46mg，0.12mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用10mL的EtOAc稀释，用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化，以在冻干后给出标题产物(18.0mg，产率42％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.11–7.87(m,3H),7.77(d,J＝3.6Hz,1H),7.34–7.21(m,4H),7.12(d,J＝8.0Hz,2H),6.77–6.70(m,1H),2.70–2.62(m,1H),2.27(s,3H),0.60–0.39(m,4H)。MS:M/e 429(M+1)+。
实施例41：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-吗啉乙基)-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(80mg，0.21mmol)、HATU(86mg，0.23mmol)和DIPEA(80mg，0.62mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加2-吗啉代乙-1-胺(27mg，0.21mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(5:1)纯化以得到产物(16.2mg，16％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.06(s,2H),7.99-7.94(m,2H),7.42-7.23(m,5H),7.09-7.00(m,2H),6.80-6.71(m,1H),4.00-3.94(m,2H),3.69-3.51(m,8H),3.15-3.00(m,4H),2.27(s,3H)ppm。MS:M/e 502(M+1)+。
实施例42：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、HATU(108mg，0.28mmol)和DIPEA(100mg，0.78mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲胺(43mg，0.28mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:1)纯化以得到产物(23.2mg，17％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.05(t,J＝8Hz,1H),7.98(s,2H),7.95(s,1H),7.32-7.24(m,4H),7.21-7.17(m,2H),6.80(d,J＝8Hz,1H),6.79-6.71(m,3H),5.94(s,2H),4.31-4.12(m,2H),2.35(s,3H)ppm。MS:M/e523(M+1)+。
实施例43：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-环己基-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、环己胺(7.6mg，0.077mmol)、HATU(35.3mg，0.092mmol)和DIPEA(20mg，0.154mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出目标化合物(19mg，52.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.98(s,2H),7.95(s,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.35–7.21(m,4H),7.14(d,J＝6.8Hz,2H),6.74(m,1H),4.10(s,1H),3.64(m,1H),2.26(s,3H),1.79(d,J＝11.2Hz,1H),1.61(s,5H),1.20–1.09(m,5H)ppm。MS:M/e 471(M+1)+。
实施例44：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-2-苯基丙酰胺
Figure BDA0002713602000000561
步骤A：2-(2-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮
将1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪(1g，4.24mmol)、2-(2-溴乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.08g，4.24mmol)和K2CO3(1.17g，8.48mmol)在DMF(20mL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并且过滤。收集饼，将其干燥以给出呈白色固体的目标化合物(800mg，46.1％)。MS:M/e 410(M+1)+。
步骤B：2-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙-1-胺
向步骤A的产物(800mg，1.96mmol)在EtOH(20mL)中的搅拌溶液中添加N2H4.H2O(196mg，3.91mmol)。添加后，将反应在80℃下搅拌过夜。将反应浓缩以给出残余物，将该残余物用EtOAc(40mL)洗涤并且过滤。将滤液浓缩以给出呈白色浓浆的目标化合物(490mg，89.6％)。MS:M/e 280(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、步骤B的产物(28mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出目标化合物，将该化合物通过用EtOH洗涤并且过滤进一步纯化。收集饼，将其干燥以给出目标化合物(15mg，23％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.05(s,1H),8.00–7.96(m,1H),7.34–7.15(m,7H),6.78–6.73(m,1H),6.69-6.62(m,4H),3.96-3.92(m,2H),3.64–3.57(m,2H),3.31–3.24(m,2H),3.29(s,3H)2.72-2.58(m,4H),2.43–2.31(m,6H),2.29(s,3H)ppm。MS:M/e 651(M+1)+。
实施例45：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(2-(哌嗪-1-基)乙基)丙酰胺
Figure BDA0002713602000000571
步骤A：4-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1g，5.38mmol)、2-(2-溴乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.36g，5.38mmol)和K2CO3(1.48g，10.76mmol)在DMF(20mL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并且过滤。收集饼，将其干燥以给出呈白色固体的目标化合物(700mg，36.2％)。MS:M/e 360(M+1)+。
步骤B：4-(2-氨基乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向步骤A的产物(700mg，1.95mmol)在EtOH(20mL)中的搅拌溶液中添加N2H4.H2O(195mg，3.9mmol)。添加后，将反应在80℃下搅拌过夜。将反应浓缩以给出残余物，将该残余物用EtOAc(40mL)洗涤并且过滤。将滤液浓缩以给出呈无色浓浆的目标化合物(460mg，100％)。MS:M/e 230(M+1)+。
步骤B：4-(2-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰胺基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(60mg，0.154mmol)、步骤B的产物(35.3mg，0.154mmol)、HATU(70.6mg，0.18mmol)和DIPEA(40mg，0.308mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出呈白色固体的目标化合物(34mg，36.8％)。MS:M/e 601(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(2-(哌嗪-1-基)乙基)丙酰胺
向步骤C的产物(34mg，0.057mmol)在EtOAc(3mL)中的搅拌溶液中添加EtOAc/HCl(g)(4.0M，3mL)。添加后，将反应搅拌过夜。将反应混合物浓缩至约3mL并且过滤。收集饼，将其干燥以给出目标产物(28mg，52.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.83(s,1H),9.55(s,2H),8.30(s,1H),8.04(s,1H),7.96(s,2H),7.27(dd,J＝8.4,5.1Hz,4H),7.15–7.05(m,2H),6.75(dd,J＝3.1,1.6Hz,1H),3.44(dd,J＝39.8,33.2Hz,13H),2.29(s,3H)ppm。MS:M/e501(M+1)+。
实施例46：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌啶-4-基)-2-苯基丙酰胺
Figure BDA0002713602000000581
步骤A：(1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(2.3g，10mmol)、1-溴-4-(2-甲氧基乙氧基)苯(2g，10mmol)、Pd2(dba)3(0.905g，1mmol)、X-phos(0.952g，2mmol)和Cs2CO3(6.52g，20mmol)在甲苯(30mL)中的混合物在120℃下在N2下搅拌3小时。将反应浓缩以给出残余物，将该残余物用EtOAc/H2O(50mL/20mL)处理。将有机层分离，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝8:1-3:1)纯化以给出呈黄色油的目标化合物(0.9g，25.8％)。MS:M/e 351(M+1)+。
步骤B：1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌啶-4-胺盐酸盐
向步骤A的产物(0.9g，2.57mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌溶液中添加EtOAc/HCl(g)(4.0M，4mL)。添加后，将反应搅拌过夜。将反应浓缩至约5mL并且过滤。收集饼，将其干燥以给出呈白色固体的目标化合物(680mg，92.4％)。MS:M/e 251(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌啶-4-基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、步骤B的产物(28.6mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(15mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出目标化合物(27mg，43.4％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.01(s,1H),7.95(s,1H),7.62(d,J＝7.6Hz,1H),7.35–7.23(m,4H),7.21–7.13(m,2H),6.87–6.71(m,5H),4.00–3.92(m,2H),3.88–3.75(m,1H),3.62–3.57(m,2H),3.46–3.35(m,2H),3.28(s,3H),2.71–2.58(m,2H),2.27(s,3H),1.91–1.69(m,2H),1.61–1.45(m,2H)ppm。MS:M/e 622(M+1)+。
实施例47：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,2R)-2-羟基环戊基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、(1R,2S)-2-氨基环戊-1-醇盐酸盐(13.7mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出目标化合物(27mg，57％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28–8.25(m,1H),7.98(s,2H),7.96(s,1H),7.38–7.22(m,4H),7.19–7.07(m,2H),6.95–6.81(m,1H),6.79–6.70(m,1H),4.66–4.56(m,1H),4.00–3.79(m,2H),2.34(d,J＝10.4Hz,3H),1.89(m,1H),1.78–1.54(m,3H),1.31–1.21(m,2H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例48：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1R,2S)-2-羟基环戊基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、(1S,2R)-2-氨基环戊-1-醇盐酸盐(13.7mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以给出目标化合物(31mg，65％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28–8.25(m,1H),7.98(s,2H),7.96(s,1H),7.38–7.22(m,4H),7.19–7.07(m,2H),6.95–6.81(m,1H),6.79–6.70(m,1H),4.66–4.56(m,1H),4.00–3.79(m,2H),2.34(d,J＝10.4Hz,3H),1.89(m,1H),1.78–1.54(m,3H),1.31–1.21(m,2H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例48A：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1R,2S)-2-羟基环戊基)-2-苯基丙酰胺
将(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、(1S,2R)-2-氨基环戊-1-醇盐酸盐(35.3mg，0.26mmol)、HATU(120mg，0.31mmol)和DIPEA(67mg，0.52mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以给出目标化合物(53mg，52.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28–8.25(m,1H),7.98(s,2H),7.96(s,1H),7.38–7.22(m,4H),7.19–7.07(m,2H),6.95–6.81(m,1H),6.79–6.70(m,1H),4.66–4.56(m,1H),4.00–3.79(m,2H),2.34(d,J＝10.4Hz,3H),1.89(m,1H),1.78–1.54(m,3H),1.31–1.21(m,2H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例48B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1R,2S)-2-羟基环戊基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、(1S,2R)-2-氨基环戊-1-醇盐酸盐(35.3mg，0.26mmol)、HATU(120mg，0.31mmol)和DIPEA(67mg，0.52mmol)在DMF(4mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以给出目标化合物(50mg，52.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28–8.25(m,1H),7.98(s,2H),7.96(s,1H),7.38–7.22(m,4H),7.19–7.07(m,2H),6.95–6.81(m,1H),6.79–6.70(m,1H),4.66–4.56(m,1H),4.00–3.79(m,2H),2.34(d,J＝10.4Hz,3H),1.89(m,1H),1.78–1.54(m,3H),1.31–1.21(m,2H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例49：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((四氢呋喃-2-基)甲基)丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.12mmol)、四氢呋喃-2-基甲胺(16mg，0.15mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和DIPEA(31mg，0.24mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(20mg，33％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(d,J＝8.0Hz,1H),7.94(br.s,2H),7.96(s,1H),7.47-7.43(m,1H),7.31-7.25(m,4H),7.18-7.12(m,2H),6.74(d,J＝4.0Hz,1H),3.92-3.87(m,1H),3.63-3.47(m,2H),3.28-3.08(m,2H),2.31(s,3H),1.81-1.61(m,3H),1.49-1.40(m,1H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+
实施例50：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(((R)-四氢呋喃-2-基)甲基)丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.12mmol)、(R)-(四氢呋喃-2-基)甲胺(16mg，0.15mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和DIPEA(31mg，0.24mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(20mg，33％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(d,J＝8.0Hz,1H),7.94(br.s,2H),7.96(s,1H),7.47-7.43(m,1H),7.31-7.25(m,4H),7.19-7.12(m,2H),6.74(s,1H),3.92-3.87(m,1H),3.63-3.47(m,2H),3.27-3.07(m,2H),2.31(s,3H),1.79-1.63(m,3H),1.49-1.40(m,1H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+
实施例51：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(((S)-四氢呋喃-2-基)甲基)丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.12mmol)、(S)-(四氢呋喃-2-基)甲胺(16mg，0.15mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和DIPEA(31mg，0.24mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(26mg，43％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(d,J＝8.0Hz,1H),7.94(br.s,2H),7.95(s,1H),7.47-7.43(m,1H),7.31-7.25(m,4H),7.18-7.12(m,2H),6.74(d,J＝4.0Hz,1H),3.92-3.87(m,1H),3.63-3.47(m,2H),3.28-3.08(m,2H),2.31(s,3H),1.81-1.61(m,3H),1.49-1.40(m,1H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+
实施例52：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(反式)-N-(4-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、HATU(108mg，0.28mmol)和DIPEA(100mg，0.78mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加反式-4-氨基环己-1-醇(33mg，0.28mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:5)纯化以得到产物(71.0mg，57％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),7.96(s,2H),7.95(s,1H),7.48(d,J＝8Hz,1H),7.31-7.22(m,4H),7.14(d,J＝8Hz,2H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),3.62-3.56(m,1H),3.30-3.28(m,1H),3.17(s,1H),2.24(s,3H),1.82-1.65(m,4H),1.24-1.11(m,4H)ppm。MS:M/e 487(M+1)+。
实施例52B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((反式)-4-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(6.0g，15.4mmol)、(反式)-4-氨基环己-1-醇盐酸盐(2.7g，17.9mmol)、DIPEA(7.9g，61.2mmol)在THF(60mL)中的混合物中添加HATU(6.4g，16.8mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物过滤并且向滤液中添加50mL的NaHCO3水溶液，搅拌10min并且用EtOAc(50mL x 2)萃取。将合并的萃取物用盐水(50mL x2)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过柱色谱法纯化以给出6.8g的粗产物，将该粗产物在庚烷/丙酮(3:7，100mL)中重结晶。将悬浮液过滤，用庚烷/丙酮(1:1，20mL)洗涤，在高真空下干燥2h以给出标题产物(4.5g，产率：60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),8.13–7.82(m,3H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.33–7.22(m,4H),7.18–7.11(m,2H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.49(s,1H),3.60(s,1H),3.28(s,1H),2.24(s,3H),1.86–1.63(m,4H),1.27–1.12(m,4H)。MS:M/e 487(M+1)+。
实施例53：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(((S)-四氢呋喃-3-基)甲基)丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、(S)-(四氢呋喃-3-基)甲胺(10mg，0.1mmol)和DIPEA(25mg，0.2mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(38mg，0.1mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水淬灭，用EtOAc(30mL x 2)萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。将残余物通过制备型TLC(100％EtOAc)纯化以给出标题产物(20mg，43％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝2.0Hz,1H),7.98(br.s,2H),7.95(s,1H),7.77(dd,J＝10.8Hz,5.2Hz,1H),7.35–7.22(m,4H),7.16(t,J＝6.0Hz,2H),6.74(t,J＝2.0Hz,1H),3.70–3.45(m,3H),3.36–3.28(m,1H),3.21-2.95(m,2H),2.47–2.38(m,1H),2.29(s,3H),1.90–1.71(m,1H),1.55–1.38(m,1H)。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例54：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(((R)-四氢呋喃-3-基)甲基)丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、(R)-(四氢呋喃-3-基)甲胺(10mg，0.1mmol)和DIPEA(25mg，0.2mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(38mg，0.1mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水淬灭，用EtOAc(30mL x 2)萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。将残余物通过制备型TLC(100％EtOAc)纯化以给出标题产物(28mg，60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝2.0Hz,1H),7.98(br.s,2H),7.95(s,1H),7.76(dd,J＝10.4Hz,5.2Hz,1H),7.35–7.21(m,4H),7.16(t,J＝5.6Hz,2H),6.76–6.72(m,1H),3.70–3.46(m,3H),3.32–3.25(m,1H),3.21-2.95(m,2H),2.46–2.36(m,1H),2.29(s,3H),1.90–1.69(m,1H),1.55–1.38(m,1H)。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例55：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-羟乙基)-2-苯基丙酰胺
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、2-氨基乙-1-醇(10mg，0.16mmol)、DIPEA(55mg，0.42mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(46mg，0.12mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用10mL的EtOAc稀释，用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化，以在冻干后给出标题产物(7.0mg，产率16％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.10–7.83(m,3H),7.47(t,J＝5.6Hz,1H),7.35–7.22(m,4H),7.14(d,J＝6.8Hz,2H),6.78–6.70(m,1H),4.56(t,J＝5.6Hz,1H),3.47–3.36(m,2H),3.26–3.14(m,2H),2.30(s,3H)。MS:M/e 433(M+1)+。
实施例56：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,2R)-2-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、(1R,2S)-2-氨基环己-1-醇(8.9mg，0.077mmol)、HATU(35mg，0.092mmol)和DIPEA(30mg，0.23mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(14mg，37.3％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝5.5Hz,1H),8.01–7.92(m,3H),7.31(q,J＝6.6Hz,3H),7.25(d,J＝3.4Hz,1H),7.18(d,J＝6.6Hz,1H),7.11(d,J＝6.9Hz,1H),6.78–6.74(m,2H),4.51(dd,J＝11.8,4.0Hz,1H),3.70(s,1H),3.59(s,1H),2.32(d,J＝3.1Hz,3H),1.54–1.39(m,6H),1.24(m,2H)。MS:M/e 487(M+1)+。
实施例57：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,2S)-2-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、(1S,2S)-2-氨基环己-1-醇(8.9mg，0.077mmol)、HATU(35mg，0.092mmol)和DIPEA(30mg，0.23mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(23.5mg，62.7％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(d,J＝6.5Hz,1H),7.97(d,J＝8.2Hz,3H),7.42(dd,J＝22.1,7.9Hz,1H),7.29–7.24(m,4H),7.19(d,J＝7.7Hz,1H),7.10(d,J＝7.8Hz,1H),6.75–6.74(m,1H),4.41(m,1H),3.52-3.47(m,1H),3.25–3.15(m,1H),2.30(d,J＝13.4Hz,3H),1.79(m,2H),1.59–1.53(m,2H),1.18-1.08(m,4H)。MS:M/e 487(M+1)+。
实施例58：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1R,2S)-2-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(30mg，0.077mmol)、(1S,2R)-2-氨基环己-1-醇(8.9mg，0.077mmol)、HATU(35mg，0.092mmol)和DIPEA(30mg，0.23mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(22mg，58.7％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝5.5Hz,1H),7.95(s,3H),7.31(q,J＝6.5Hz,3H),7.25(d,J＝3.3Hz,1H),7.18(d,J＝6.9Hz,1H),7.11(d,J＝7.0Hz,1H),6.76(d,J＝8.6Hz,2H),4.50(s,1H),3.70(s,1H),3.59(s,1H),2.32(d,J＝2.7Hz,3H),1.54–1.39(m,6H),1.23(m,2H)。MS:M/e 487(M+1)+。
化合物58A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,2R)-2-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺
将(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.257mmol)、(1S,2R)-2-氨基环己-1-醇(29.5mg，0.257mmol)、HATU(117mg，0.308mmol)和DIPEA(99mg，0.77mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(35mg，28.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),7.96(s,3H),7.28(m,4H),7.18(d,J＝7.4Hz,2H),6.76(d,J＝10.6Hz,2H),4.52(d,J＝3.0Hz,1H),3.70(s,2H),3.30(s,1H),2.33(s,3H),1.49–1.33(m,6H),1.23(m,2H)。MS:M/e 487(M+1)+。
化合物58B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1R,2S)-2-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.257mmol)、(1S,2R)-2-氨基环己-1-醇(29.5mg，0.257mmol)、HATU(117mg，0.308mmol)和DIPEA(99mg，0.77mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(40mg，32％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),7.96(s,3H),7.28(m,4H),7.11(d,J＝7.3Hz,2H),6.76(d,J＝9.1Hz,2H),4.49(s,1H),3.69(s,1H),3.59(s,1H),2.32(s,3H),1.47(m,6H),1.24(s,2H)。MS:M/e 487(M+1)+。
实施例59：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)丙酰胺
将(S)-四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(21mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、HATU(43mg，0.11mmol)和DIPEA(0.2mL)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(5mg，产率：10.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32–8.18(m,1H),8.07–7.92(m,3H),7.62–7.45(m,1H),7.35–7.21(m,4H),7.19–7.04(m,2H),6.75(s,1H),3.90–3.59(m,3H),3.30–3.13(m,1H),3.12–2.94(m,1H),2.27(s,3H),1.88–1.68(m,1H),1.60–1.40(m,3H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例60：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)丙酰胺
将(R)-四氢-2H-吡喃-3-胺盐酸盐(21mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、HATU(43mg，0.11mmol)和DIPEA(0.1mL)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(25mg，产率：51.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31–8.19(m,1H),8.09–7.88(m,3H),7.60–7.44(m,1H),7.35–7.20(m,4H),7.19–7.12(m,1H),7.12–7.02(m,1H),6.77–6.69(m,1H),3.88–3.56(m,3H),3.27–3.13(m,1H),3.09–2.94(m,1H),2.32–2.21(m,3H),1.87–1.70(m,1H),1.60–1.35(m,3H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例61：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((四氢-2H-吡喃-3-基)甲基)丙酰胺
将(四氢-2H-吡喃-3-基)甲胺(18mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、HATU(43mg，0.11mmol)和DIPEA(0.1mL)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(25mg，产率：62.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31–8.12(m,1H),8.07–7.83(m,3H),7.72–7.53(m,1H),7.36–7.22(m,4H),7.20–7.10(m,2H),6.86–6.62(m,1H),3.73–3.59(m,2H),3.28–3.19(m,1H),3.05–2.90(m,3H),2.29(s,3H),1.81–1.55(m,2H),1.54–1.32(m,2H),1.16–1.06(m,1H)ppm。MS:M/e 487(M+1)+。
实施例62：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-苯基丙酰胺
将N1,N1-二甲基乙烷-1,2-二胺(14mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、HATU(43mg，0.11mmol)和DIPEA(0.1mL)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(MeOH/DCM：1/5)纯化以得到标题化合物(12mg，产率：31.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.15–7.90(m,3H),7.78(br.s,1H),7.38–7.20(m,4H),7.16–6.96(m,2H),6.79–6.64(m,1H),3.50–3.37(m,2H),3.37–3.25(m,6H),2.99–2.72(m,2H),2.29(s,3H)ppm。MS:M/e 460(M+1)+。
实施例63：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-(邻甲苯基)丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(邻甲苯基)丙酸(35mg，0.09mmol)、3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(14mg，0.13mmol)、HATU(50mg，0.13mmol)和DIPEA(24mg，0.18mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(20mg，48％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.00(br.s,2H),7.95(d,J＝4.0Hz,1H),7.58(t,J＝8.0Hz,1H),7.25-7.12(m,4H),6.84(d,J＝8.0Hz,1H),6.74(d,J＝4.0Hz,1H),5.74(br.s,1H),4.25(s,2H),4.15(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,2H),3.55(dd,J1＝12.0Hz,J2＝8.0Hz,1H),3.35-3.33(m,1H),2.34(s,3H),1.97(s,3H)ppm。MS:M/e 489(M+1)+。
实施例64：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(吡啶-3-基)丙酰胺
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、吡啶-3-胺(15mg，0.16mmol)、DIPEA(75mg，0.58mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(46mg，0.12mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用10mL的EtOAc稀释，用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化，以在冻干后给出标题产物(12mg，产率26％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.99(s,1H),8.71(d,J＝2.4Hz,1H),8.33(s,1H),8.26(d,J＝3.2Hz,1H),8.17–7.97(m,3H),7.95(s,1H),7.38–7.26(m,4H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),7.10(d,J＝6.4Hz,2H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),2.47(s,3H)。MS:M/e 466(M+1)+。
实施例65：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(吡啶-4-基)丙酰胺。
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、吡啶-3-胺(15mg，0.16mmol)、DIEA(75mg，0.58mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(46mg，0.12mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用10mL的EtOAc稀释，用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化，以在冻干后给出标题产物(25mg，产率54％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),8.41(d,J＝6.0Hz,2H),8.33(s,1H),8.04(s,2H),7.95(s,1H),7.65(d,J＝6.0Hz,2H),7.37–7.22(m,4H),7.05(d,J＝6.4Hz,2H),6.78–6.70(m,1H),2.51(s,3H)。MS:M/e 466(M+1)+。
实施例66：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(吡啶-2-基甲基)丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、吡啶-2-基甲胺(10mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出目标化合物(23mg，48％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝4.4Hz,1H),8.26(s,1H),8.17(t,J＝5.6Hz,1H),8.05(s,2H),7.95(s,1H),7.74(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(d,J＝7.6Hz,1H),7.36–7.18(m,7H),6.74(s,1H),4.51–4.34(m,2H),2.39(s,3H)ppm。MS:M/e 480(M+1)+。
实施例66B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(吡啶-2-基甲基)丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、吡啶-2-基甲胺(10mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出目标化合物(26mg，54％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝4.4Hz,1H),8.26(s,1H),8.17(t,J＝5.6Hz,1H),8.05(s,2H),7.95(s,1H),7.74(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(d,J＝7.6Hz,1H),7.36–7.18(m,7H),6.74(s,1H),4.51–4.34(m,2H),2.39(s,3H)ppm。MS:M/e 480(M+1)+。
实施例67：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((R)-哌啶-3-基)丙酰胺
Figure BDA0002713602000000711
步骤A：(3R)-3-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰胺基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、(R)-3-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(20mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出呈白色固体的目标化合物(23mg，40.3％)。MS:M/e 572(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((R)-哌啶-3-基)丙酰胺
向步骤A的产物(23mg，0.04mmol)在CH2Cl2(4mL)中的搅拌溶液中添加EtOAc/HCl(g)(4.0M，1mL)。添加后，将反应搅拌过夜。将反应混合物浓缩以给出目标化合物(22mg，100％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.18–8.85(m,2H),8.27(d,J＝2.0Hz,1H),8.03(s,2H),7.96(s,1H),7.88(dd,J＝25.6,8.0Hz,1H),7.33–7.21(m,4H),7.18–7.07(m,2H),6.78–6.72(m,1H),4.21–4.04(m,1H),3.26(dd,J＝40.8,12.4Hz,1H),3.15–3.03(m,1H),2.77–2.55(m,2H),2.27(s,3H),1.89–1.38(m,4H)ppm。MS:M/e 472(M+1)+。
实施例68：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((S)-哌啶-3-基)丙酰胺
Figure BDA0002713602000000721
步骤A：(3S)-3-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰胺基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、(S)-3-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(20mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出呈白色固体的目标化合物(10mg，18.7％)。MS:M/e 572(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((R)-哌啶-3-基)丙酰胺
向步骤A的产物(23mg，0.04mmol)在CH2Cl2(4mL)中的搅拌溶液中添加EtOAc/HCl(g)(4.0M，1mL)。添加后，将反应搅拌过夜。将反应混合物浓缩以给出目标化合物(9mg，100％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.18–8.85(m,2H),8.27(d,J＝2.0Hz,1H),8.03(s,2H),7.96(s,1H),7.88(dd,J＝25.6,8.0Hz,1H),7.33–7.21(m,4H),7.18–7.07(m,2H),6.78–6.72(m,1H),4.21–4.04(m,1H),3.26(dd,J＝40.8,12.4Hz,1H),3.15–3.03(m,1H),2.77–2.55(m,2H),2.27(s,3H),1.89–1.38(m,4H)ppm。MS:M/e 472(M+1)+。
实施例69：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(顺式)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加顺式-4-氨基-1-甲基环己-1-醇(17mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:5)纯化以得到产物(39.2mg，61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),7.95(s,3H),7.47(d,J＝8Hz,1H),7.31-7.23(m,4H),7.17(d,J＝8Hz,2H)6.73(dd,J＝4,2Hz,1H),3.93(s,1H),3.61-3.52(m,1H),2.27(s,3H),1.56-1.43(m,6H),1.32-1.25(m,2H),1.06(s,3H)ppm。MS:M/e 501(M+1)+。
实施例69A：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(顺式)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)-2-苯基丙酰胺
向(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、HATU(108mg，0.28mmol)和DIPEA(100mg，0.78mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加顺式-4-氨基-1-甲基环己-1-醇(33mg，0.26mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:4)纯化以得到产物(70.1mg，54％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.06-7.88(m,3H),7.47(d,J＝8Hz,1H),7.31-7.22(m,4H),7.16(d,J＝8Hz,2H),6.79-6.70(m,1H),3.93(s,1H),3.64-3.52(m,1H),2.26(s,3H),1.56-1.45(m,6H),1.32-1.22(m,2H),1.05(s,3H)ppm。MS:M/e 501(M+1)+。
实施例69B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(顺式)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)-2-苯基丙酰胺
向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.26mmol)、HATU(108mg，0.28mmol)和DIPEA(100mg，0.78mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加顺式-4-氨基-1-甲基环己-1-醇(33mg，0.26mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:4)纯化以得到产物(65.5mg，51％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),8.10-7.88(m,3H),7.48(d,J＝8Hz,1H),7.32-7.24(m,4H),7.16(d,J＝8Hz,2H),6.73(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),3.93(s,1H),3.66-3.51(m,1H),2.26(s,3H),1.58-1.42(m,6H),1.32-1.22(m,2H),1.05(s,3H)ppm。MS:M/e 501(M+1)+。
实施例70：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酰胺。
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酸(50mg，0.1mmol)、3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(13mg，0.13mmol)、DIPEA(70mg，0.54mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(50mg，0.13mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用盐水(10mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EtOAc/MeOH＝2:1)纯化，以在冻干后给出标题产物(16mg，产率32％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.03–7.83(m,3H),7.37–7.19(m,3H),7.07(d,J＝8.0Hz,1H),6.82(t,J＝7.6Hz,1H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),6.38(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),5.73(s,1H),4.38–4.18(m,4H),3.69(s,3H),3.51–3.38(m,2H),2.37(s,3H)。MS:M/e 505(M+1)+。
实施例71：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1-羟基环丁基)甲基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、1-(氨甲基)环丁-1-醇(12mg，0.12mmol)、DIPEA(50mg，0.39mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(46mg，0.12mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用盐水(10mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EA100％)纯化，以在冻干后给出标题产物(39mg，产率83％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.08–7.83(m,3H),7.36–7.27(m,3H),7.25(dd,J＝3.2,0.4Hz,1H),7.19–7.10(m,2H),6.98(t,J＝5.6Hz,1H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),5.02(s,1H),3.27(d,J＝5.6Hz,2H),2.35(s,3H),1.96–1.68(m,4H),1.60–1.48(m,1H),1.43–1.30(m,1H)。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例72：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1-羟基环己基)甲基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、1-(氨甲基)环己-1-醇(20mg，0.12mmol)、DIPEA(50mg，0.39mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(46mg，0.12mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用盐水(10mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EA100％)纯化，以在冻干后给出标题产物(27mg，产率54％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.14–7.78(m,3H),7.39–7.27(m,3H),7.25(d,J＝3.2Hz,1H),7.20–7.05(m,2H),6.98(t,J＝5.6Hz,1H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.17(s,1H),3.13(d,J＝5.2Hz,2H),2.35(s,3H),1.50–1.02(m,10H)。MS:M/e 501(M+1)+。
实施例73：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.2570mmol)、2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙-1-胺(40mg，0.3085mmol)、HATU(146mg，0.3856mmol)、DIPEA(99mg，0.7712mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(DCM/MeOH＝40:1-10:1)纯化以给出产物(62mg，48.2％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.00(s,2H),7.95(d,J＝0.9Hz,1H),7.53(t,J＝5.6Hz,1H),7.34–7.20(m,4H),7.15(dd,J＝8.0,1.4Hz,2H),6.74(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),3.76–3.66(m,2H),3.15(q,J＝6.6Hz,2H),3.04(dd,J＝23.4,11.6Hz,2H),2.28(s,3H),1.51–1.39(m,2H),1.37–1.27(m,2H),1.26–1.17(m,1H),1.02(ddd,J＝23.9,12.0,4.2Hz,2H)。MS:M/e 501(M+1)+。
实施例74：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(2-(四氢呋喃-3-基)乙基)丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.2570mmol)、2-(四氢呋喃-3-基)乙-1-胺(35mg，0.3085mmol)、HATU(146mg，0.3856mmol)、DIPEA(99mg，0.7712mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(DCM/MeOH＝40:1-10:1)纯化以给出产物(64mg，51.2％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.97(s,2H),7.95(s,1H),7.62(t,J＝6.1Hz,1H),7.27(dd,J＝14.1,5.7Hz,4H),7.15(d,J＝7.4Hz,2H),6.74(dd,J＝3.3,1.7Hz,1H),3.74–3.67(m,1H),3.65(dd,J＝9.3,4.7Hz,1H),3.53(dd,J＝7.6,3.5Hz,1H),3.19–3.04(m,3H),2.29(s,3H),2.03–1.84(m,2H),1.47(dd,J＝12.0,5.6Hz,2H),1.41–1.33(m,1H)。MS:M/e 487(M+1)+。
实施例75：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.2570mmol)、2-(2-甲氧基乙氧基)乙-1-胺(37mg，0.3085mmol)、HATU(146mg，0.3856mmol)、DIPEA(99mg，0.7712mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(DCM/MeOH＝40:1-10:1)纯化以给出目标产物(85mg，67.48％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),7.98(s,2H),7.95(s,1H),7.56(t,J＝5.6Hz,1H),7.34–7.22(m,4H),7.15(dd,J＝7.7,1.5Hz,2H),6.74(dd,J＝3.3,1.8Hz,1H),3.46–3.37(m,4H),3.29(dd,J＝5.6,3.0Hz,3H),3.22(dd,J＝13.2,6.0Hz,1H),3.13(s,3H),2.28(s,3H)。MS:M/e 491(M+1)+。
实施例76：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(顺式)-N-(4-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加顺式-4-氨基环己-1-醇盐酸盐(20mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:5)纯化以得到产物(37.4mg，60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.10-7.90(m,3H),7.41(d,J＝8Hz,1H),7.32-7.23(m,4H),7.15(d,J＝8Hz,2H)6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),4.25(s,1H),3.71-3.62(m,2H),2.28(s,3H),1.56-1.37(m,8H)ppm。MS:M/e487(M+1)+。
实施例76A：(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(顺式)-N-(4-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺
向(S)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(150mg，0.39mmol)、HATU(161mg，0.42mmol)和DIPEA(149mg，1.16mmol)在THF(20ml)中的搅拌溶液中添加顺式-4-氨基环己-1-醇盐酸盐(58mg，0.39mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:4)纯化以得到产物(103.9mg，55％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.09-7.90(m,3H),7.42(d,J＝8Hz,1H),7.35-7.24(m,4H),7.15(d,J＝8Hz,2H),6.86-6.70(m,1H),4.27(s,1H),3.75-3.60(m,2H),2.28(s,3H),1.59-1.38(m,8H)ppm。MS:M/e 487(M+1)+。
实施例76B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(顺式)-N-(4-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺
向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(150mg，0.39mmol)、HATU(161mg，0.42mmol)和DIPEA(149mg，1.16mmol)在THF(20ml)中的搅拌溶液中添加顺式-4-氨基环己-1-醇盐酸盐(58mg，0.39mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:4)纯化以得到产物(123.1mg，66％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.08-7.90(m,3H),7.42(d,J＝8Hz,1H),7.33-7.24(m,4H),7.15(d,J＝8Hz,2H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),4.27(d,J＝4Hz,1H),3.71-3.61(m,2H),2.28(s,3H),1.57-1.38(m,8H)ppm。MS:M/e 487(M+1)+。
实施例77：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(吡啶-2-基)丙酰胺
Figure BDA0002713602000000781
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰氯。
将在SOCl2(10mL)中的40mg的2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸在70℃下加热1小时。将溶液浓缩至干。添加20mL CH2Cl2，并且将所得混合物再次浓缩以去除SOCl2残余物，以给出呈浅棕色油的标题产物(45mg，粗品)，该产物直接用于下一步骤。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(吡啶-2-基)丙酰胺。
在室温下向吡啶-2-胺(25mg，0.27mmol)和DIEA(130mg，1.0mmol)在CH2Cl2(2mL)中的搅拌混合物中添加2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰氯(45mg，粗品)在CH2Cl2(3mL)中的溶液，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用10mL的CH2Cl2稀释，用NaHCO3(5mL x 2)、盐水(5mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化，以在冻干后给出标题产物(8mg，产率：17％)。1H NMR(400MHz,CD3OD/CDCl3＝2:1)δ8.29(s,1H),8.25–8.16(m,2H),7.86(t,J＝8.8Hz,1H),7.71(d,J＝0.8Hz,1H),7.39–7.28(m,3H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),7.20–7.14(m,1H),7.12–7.05(m,2H),6.64(dd,J＝3.6,2.0Hz,1H),2.38(s,3H)。MS:M/e466(M+1)+。
实施例78：2-(5-氨基-2-(3-甲基吡嗪-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
Figure BDA0002713602000000791
步骤A：3-甲基吡嗪-2-甲酸甲酯
在0℃下向MeOH(50mL)的搅拌溶液中逐滴添加SOCl2(8.6g，72.4mmol)。然后将3-甲基吡嗪-2-甲酸(5g，36.2mmol)添加至反应中。将混合物在60℃下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩，并且将残余物溶解在EtOAc(50mL)中。将有机相用饱和NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。将有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用EtOAc/PE＝1/1洗脱)纯化以得到呈黄色固体的标题化合物(3.9g，产率：70.9％)。MS:M/e153(M+1)+。
步骤B：3-甲基吡嗪-2-碳酰肼
在室温下向步骤A的产物(0.9g，5.9mmol)在MeOH(20mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(1.5g，23.7mmol)。将混合物在60℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，并且将残余物溶解在EtOAc(30mL)中。将有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。残余物(460mg，产率：51.1％)直接用于下一步骤。MS:M/e 153(M+1)+。
步骤C：2-(6-氨基-4-(2-(3-甲基吡嗪-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯(1g，3mmol)、步骤B的产物(460mg，3mmol)和Et3N(610mg，6mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在100℃下搅拌过夜。将反应冷却至室温。将混合物倒入水(30mL)中。从体系中形成沉淀物。在室温下搅拌30min后，将混合物过滤。收集固体并且在空气中干燥。黄色固体(1.6g，粗品)直接用于下一步骤。MS:M/e 448(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(3-甲基-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸甲酯
将步骤C的产物(1g，2.2mmol)在BSA(5mL)和HMDS(5mL)中的混合物在100℃下搅拌过夜。将反应冷却至室温并且在减压下浓缩。将残余物溶解在H2O(10mL)和MeOH(10mL)中。将混合物在80℃下搅拌2小时。去除MeOH，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤并且在空气中干燥。棕色固体(300mg，两个步骤的产率：37.5％)直接用于下一步骤。MS:M/e 430(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(3-甲基吡嗪-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸
在室温下向步骤D的产物在MeOH(6mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2mL)。将混合物在室温下搅拌过夜。去除溶剂，并且将残余物溶解在水(20mL)中。将混合物用HCl水溶液(2M)酸化至pH＝3-4。从体系中沉淀出固体。将混合物过滤并且收集固体。白色固体在空气中干燥并且直接用于下一步骤。MS:M/e 416(M+1)+。
步骤F：2-(5-氨基-2-(3-甲基吡嗪-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(33mg，0.32mmol)、2-(5-氨基-2-(3-甲基吡嗪-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(89mg，0.21mmol)、HATU(102mg，0.26mmol)和DIPEA(0.1mL)在DMF(5mL)中的混合物在0℃下搅拌2小时。然后将混合物温热至室温并且搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(15mg，产率：14.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73–8.64(m,2H),8.30(s,1H),8.05(br.s,2H),7.53–7.46(m,1H),7.36–7.25(m,3H),7.21–7.13(m,2H),5.71(s,1H),4.46–4.36(m,2H),4.28(t,J＝8Hz,2H),3.44(t,J＝8Hz,2H),2.88(s,3H),2.35(s,3H)ppm。MS:M/e 501(M+1)+。
实施例79：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(氧杂环丁-3-基甲基)-2-苯基丙酰胺
将氧杂环丁-3-基甲胺(13.4mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、HATU(43mg，0.11mmol)和DIPEA(0.1mL)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(15mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(18mg，产率：38.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.00(br.s,2H),7.97–7.93(m,1H),7.83(t,J＝8Hz,1H),7.32–7.24(m,4H),7.19–7.13(m,2H),6.78–6.71(m,1H),4.60–4.45(m,2H),4.29–4.16(m,2H),3.47–3.39(m,1H),3.35–3.28(m,1H),3.21–3.07(m,1H),2.28(s,3H)ppm。MS:M/e459(M+1)+。
实施例80：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((4-羟基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将4-(氨甲基)四氢-2H-吡喃-4-醇(20mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、HATU(43mg，0.11mmol)和DIPEA(0.1mL)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(15mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(22mg，产率：41.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.05–7.87(m,3H),7.35–7.23(m,4H),7.22–7.09(m,3H),6.77–6.70(m,1H),4.44(s,1H),3.57–3.46(m,4H),3.19–3.11(m,2H),2.34(s,3H),1.54–1.42(m,2H),1.33–1.23(m,2H)ppm。MS:M/e 503(M+1)+。
实施例81：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-(甲基氨基)乙基)-2-苯基丙酰胺
将N1-甲基乙烷-1,2-二胺(11.4mg，0.15mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、HATU(43mg，0.11mmol)和DIPEA(0.1mL)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(15mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(5mg，产率：10.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.01–7.90(m,1H),7.88–7.80(m,1H),7.33–7.21(m,4H),7.14–7.06(m,2H),6.79–6.69(m,1H),3.37–3.26(m,2H),2.96–2.74(m,2H),2.45(s,3H),2.30(s,3H)ppm。MS:M/e 446(M+1)+。
实施例82：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-苯乙酰胺
将3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(132mg，1.28mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(400mg，1.07mmol)、HATU(43mg，1.07mmol)和DIPEA(276mg，2.14mmol)在DMF(20mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(60mL)中并且用EtOAc(40mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(120mg，产率：24.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.17(br.s,2H),8.09(t,J＝8Hz,1H),7.98–7.91(m,1H),7.44–7.30(m,5H),7.24(d,J＝4Hz,1H),6.74(dd,J＝4,2Hz,1H),6.48(s,1H),5.86(s,1H),4.42–4.29(m,4H),3.51–3.42(m,2H)ppm。MS:M/e461(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将实施例82分离成两种对映体立体异构体(实施例82A，较早的峰；和实施例82B，较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002713602000000831
Figure BDA0002713602000000832
实施例83：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(吡啶-4-基甲基)丙烯酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、吡啶-4-基甲胺(10mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出目标化合物(26mg，54.2％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(d,J＝6.0Hz,2H),8.26(s,1H),8.21(d,J＝5.6Hz,1H),8.08(s,2H),7.97–7.93(m,1H),7.42–7.14(m,8H),6.77–6.71(m,1H),4.41-4.29(m,2H),2.38(s,3H)ppm。MS:M/e 480(M+1)+。
实施例84：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(吡啶-3-基甲基)丙烯酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、吡啶-3-基甲胺(10mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(石油醚/EtOAc＝1:2)纯化以给出目标化合物(22mg，45.9％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53–8.49(m,1H),8.42(dd,J＝5.2,2.8Hz,1H),8.25–8.19(m,2H),8.02(s,2H),7.95(s,1H),7.73(m,1H),7.37–7.15(m,7H),6.77–6.69(m,1H),4.44–4.29(m,2H),2.35(s,3H)ppm。MS:M/e 480(M+1)+。
实施例85：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-(间甲苯基)丙酰胺
Figure BDA0002713602000000841
步骤A：2-(间甲苯基)丙酸甲酯
在-78℃下在N2气氛下向二异丙基氨基锂(LDA)(在THF中2M，10mL，20mmol)在THF(60mL)中的冷却溶液中逐滴添加2-(间甲苯基)乙酸甲酯(3g，18mmol)在THF(5mL)中的溶液。添加后，将溶液再搅拌20min，然后逐滴添加CH3I(7.8g，55mmol)。允许将混合物温热至室温持续2h。TLC显示反应完成。将反应混合物用水(5mL)淬灭，用乙酸乙酯(30mL)萃取并且用盐水(20mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱法(PE:EtOAc＝50:1)纯化以得到呈无色油的产物(2.6g，81％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.26-7.20(m,1H),7.11-7.07(m,3H),3.70-3.68(m,1H),3.66(s,3H),2.35(s,3H),1.49(d,J＝8.0Hz,3H)ppm。
步骤B：2-溴-2-(间甲苯基)丙酸甲酯
在-78℃下在N2气氛下向二异丙基氨基锂(LDA)(在THF中2M，3.1mL，6.2mmol)在THF(30mL)中的冷却溶液中逐滴添加2-(间甲苯基)丙酸甲酯(1g，5.6mmol)在THF(2mL)中的溶液。将溶液再搅拌30min，然后逐滴添加三甲基氯硅烷(TMSCl)(671mg，6.2mmol)。允许将混合物在室温下温热2h，然后冷却至-78℃。分批添加NBS(2g，11.2mmol)，并且将溶液在-78℃下搅拌1h。允许反应混合物经1h达到室温，然后用饱和NaHCO3溶液淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取。将有机层干燥，浓缩并且通过柱色谱法(PE:EtOAc＝50:1)纯化以得到产物(1g，70％)。
步骤C：2-肼基-2-(间甲苯基)丙酸甲酯
将NH2NH2.H2O(625mg，10mmol)添加至2-溴-2-(间甲苯基)丙酸甲酯(500mg，2mmol)在CH3CN(5mL)中的溶液中。将反应混合物在60℃下加热1h。TLC显示反应完成。将溶液浓缩，添加水(10mL)并且用乙酸乙酯(10mL)萃取。将有机相浓缩，添加HCl/EtOAc(2M，2mL)并且蒸发以得到呈HCl盐的产物(380mg，80％)。MS:M/e 209(M+1)+。
步骤D：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯
将2-肼基-2-(间甲苯基)丙酸甲酯盐酸盐(380mg，1.5mmol)和2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(300mg，1.5mmol)在CH3CN(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，并且然后在50℃下加热3h。将反应混合物蒸发，添加水(10mL)并且用乙酸乙酯(10mL)萃取。将有机相干燥，浓缩，并且通过柱色谱法(PE:EtOAc＝6:1)进一步纯化以得到呈白色固体的所需产物(300mg，56％)。MS:M/e 346(M+1)+
步骤E：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯(300mg，0.87mmol)、呋喃-2-碳酰肼(109mg，0.87mmol)和DIPEA(225mg，1.74mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在120℃下加热过夜。在油泵下蒸发溶剂。向残余物中添加水(10mL)，浆化并且过滤。将滤饼用水洗涤，干燥以得到粗产物，该粗产物直接用于下一步骤(260mg，68％)。MS:M/e 436(M+1)+
步骤F：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯(260mg，0.60mmol)在BSA(2mL)和HMDS(2mL)中的溶液在120℃下加热3h。将溶剂在油泵下蒸发。向残余物中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩，并且通过柱色谱法(PE:EtOAc＝5:1)纯化以得到呈白色固体的所需产物(110mg，44％)。MS:M/e 418(M+1)+
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(间甲苯基)丙酸
将NaOH溶液(50mg，1.25mmol，在1mL的水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(间甲苯基)丙酸甲酯(110mg，0.26mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中。将溶液在室温下搅拌过夜。将溶剂蒸发。向残余物中添加水(5mL)，用2M HCl酸化至pH＝2-3。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的产物(40mg，38％)。MS:M/e 404(M+1)+
步骤H：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-(间甲苯基)丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(间甲苯基)丙酸(50mg，0.12mmol)、3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(19mg，0.18mmol)、HATU(69mg，0.18mmol)和DIPEA(31mg，0.24mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(25mg，42％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),7.95(br.s,3H),7.43(t,J＝8.0Hz,1H),7.25(d,J＝4.0Hz,1H),7.18(t,J＝8.0Hz,1H),7.11(s,1H),7.08(br.s,1H),6.90(d,J＝8.0Hz,1H),6.74(d,J＝4.0Hz,1H),5.72(s,1H),4.40(t,J＝8.0Hz,2H),4.30-4.26(m,2H),3.43(t,J＝8.0Hz,2H),2.27(s,3H),2.08(s,3H)ppm。MS:M/e 489(M+1)+
实施例86：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-(4-甲氧基苯基)丙酰胺
Figure BDA0002713602000000871
步骤A：2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯
在0℃下向2-(4-甲氧基苯基)丙酸(5g，27.78mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中逐滴添加氯化亚砜(4.96g，41.67mmol)，添加后，将反应混合物在室温下搅拌3h。将混合物浓缩，用冰水(20mL)淬灭，用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20:1-5:1)纯化以得到呈黄色油的2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(5.20g，96.49％)。MS:M/e 195(M+1)+。
步骤B：2-溴-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯
在-78℃下向2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(5.20g，26.80mmol)在THF(20mL)中的溶液中逐滴添加二异丙基氨基锂(LDA)(20mL，40.21mmol)并且搅拌1h。然后在-78℃下向反应混合物中逐滴添加三甲基氯硅烷(TMSCl)(3.51g，32.16mmol)并且搅拌1h。然后在-78℃下向反应混合物中添加NBS(7.16g，40.21mmol)并且搅拌1h。添加后，将反应混合物缓慢温热至室温并且搅拌2h。将混合物过滤，将滤液浓缩并且用PE洗涤并且过滤，将滤液浓缩以给出呈黄色油的2-溴-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(4.31g，58.90％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.22(d,J＝8.6Hz,2H),6.87(d,J＝2.7Hz,2H),3.65(s,3H),2.67(s,3H),2.30(s,3H)。
步骤C：2-肼基-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯
将2-溴-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(4.31g，15.79mmol)、水合肼(3.95g，63.15mmol)在ACN(20mL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将混合物用DCM(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用水(10mL x 3)和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩以给出呈棕色油的2-肼基-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(2.36g，66.73％)。MS:M/e 225(M+1)+。
步骤D：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯
将2-肼基-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(2.36g，10.54mmol)、2-氨基-4,6-二氯-1,6-二氢嘧啶-5-甲醛(2.01g，10.54mmol)在ACN(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜，然后温热至70℃并且搅拌2h。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10:1-2:1)纯化以给出呈黄色固体的产物(2.10g，55.06％)。MS:M/e 362(M+1)+。
步骤E：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(2.10g，5.801mmol)、呋喃-2-碳酰肼(1.46g，11.60mmol)、DIPEA(2.24g，17.40mmol)在DMSO(5mL)中的混合物在120℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(20mLx 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10:1-1:1)纯化以给出呈黄色固体的产物(2.01g，76.83％)。MS:M/e 452(M+1)+。
步骤F：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(2.01g，4.457mmol)、(E)-N-(三甲基甲硅烷基)亚氨逐乙酸三甲基甲硅烷基酯(3mL)、HMDS(3mL)的混合物在120℃下搅拌过夜。将反应混合物浓缩，在50℃下在MeOH(10mL)和水(2mL)中搅拌1h。然后浓缩并且通过柱色谱法(石油醚//EtOAc＝10:1-1:1)纯化以给出呈白色固体的产物(1.66g，86.02％)。MS:M/e 434(M+1)+。
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(4-甲氧基苯基)丙酸
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(1.66g，3.834mmol)、氢氧化锂(1.53g，38.34mmol)在MeOH(5mL)和水(2mL)中的混合物在50℃下搅拌过夜。将反应混合物用盐酸酸化，用EtOAc(20mLx 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10:1-1:2)纯化以给出呈白色固体的产物(1.33g，82.80％)。MS:M/e 420(M+1)+。
步骤H：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-(4-甲氧基苯基)丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(4-甲氧基苯基)丙酸(100mg，0.2387mmol)、3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(49mg，0.4773mmol)、HATU(181mg，0.4773mmol)、DIPEA(92mg，0.7160mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(DCM/MeOH＝40:1-10:1)纯化以给出产物(70mg，58.19％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),7.96(s,1H),7.93(s,2H),7.42(t,J＝5.5Hz,1H),7.24(d,J＝2.7Hz,1H),7.13(d,J＝8.7Hz,2H),6.86(d,J＝8.6Hz,2H),6.77–6.71(m,1H),5.75(s,1H),4.41(t,J＝6.3Hz,2H),4.28(dd,J＝10.4,6.5Hz,2H),3.73(s,3H),3.42(d,J＝5.6Hz,2H),2.31(s,3H)。MS:M/e 505(M+1)+。
实施例87：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-氟苯基)丙酸(100mg，0.2457mmol)、3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(38mg，0.3685mmol)、HATU(146mg，0.3685mmol)、DIPEA(95mg，0.73712mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物倒入H2O(5mL)中并且用EtOAc(5mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(DCM/MeOH＝40:1-10:1)纯化以给出产物(82mg，67.83％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.00(s,2H),7.96(s,1H),7.44(t,J＝5.7Hz,1H),7.38(dd,J＝12.7,7.2Hz,1H),7.25(d,J＝3.1Hz,1H),7.20(dd,J＝11.8,8.4Hz,1H),7.10(t,J＝7.6Hz,1H),6.80–6.65(m,2H),5.69(s,1H),4.36(d,J＝6.3Hz,1H),4.33(d,J＝6.3Hz,1H),4.27(d,J＝6.3Hz,1H),4.21(d,J＝6.3Hz,1H),3.52(dd,J＝13.5,6.3Hz,1H),3.37(d,J＝5.4Hz,1H),2.44(s,3H)。MS:M/e 493(M+1)+。
实施例88：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1-羟基环丙基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将1-(氨甲基)环丙-1-醇(23.8mg，0.19mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(33mg，0.26mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤，并且通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以给出标题化合物(5mg，产率：8.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),8.02–7.88(m,3H),7.76(s,1H),7.35–7.21(m,4H),7.16–7.04(m,2H),6.79–6.68(m,1H),4.56(t,J＝4Hz,1H),3.64–3.53(m,1H),3.48–3.38(m,1H),2.25(s,3H),0.77–0.62(m,3H),0.60–0.46(m,1H)ppm。MS:M/e 459(M+1)+。
实施例89：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-(吡啶-3-基)丙酰胺
Figure BDA0002713602000000911
步骤A：2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯
在-78℃下在N2下向2-(吡啶-3-基)乙酸乙酯(13.7g，85mmol)在150mL的THF中的搅拌溶液中添加LDA(47mL，2.0M)。将所得混合物搅拌30min。逐滴添加MeI(32.0g，225mmol)。允许将反应混合物温热至室温并且搅拌20h。将混合物用150mL的H2O淬灭，用EtOAc(150mL x 3)萃取。将有机萃取物合并，用盐水(150mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将残余物通过柱色谱法用PE/EtOAc(5:1-3:1)洗脱来纯化以给出呈浅黄色油的标题产物(8.1g，53％)。MS:M/e 180(M+1)+。
步骤B：2-溴-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯。
在-78℃下在N2下向2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯(8.1g，45.2mmol)在THF(100mL)中的搅拌溶液中添加LDA(25mL，2.0M)。将所得混合物搅拌30min。添加TMSCl(5.4g，50mmol)，并且将所得混合物在室温下搅拌1小时。再次冷却至-78℃后，向混合物中添加NBS(12.0g，67mmol)。将所得混合物在-78℃下搅拌30min并且搅拌2h。将混合物用100mL的H2O淬灭，用EtOAc(100mL x 3)萃取。将有机萃取物合并，用盐水(100mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩至干以给出呈棕色油的标题产物(9.8g，粗品)，该产物直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.80(d,J＝2.4Hz,1H),8.56(dd,J＝4.8,1.2Hz,1H),7.96(ddd,J＝8.0,2.4,1.6Hz,1H),7.31(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),4.31–4.23(m,2H),2.33(s,3H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤C：2-肼基-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯。
在室温下向2-溴-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯(9.8g，粗品)在MeCN(100mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(20mL，320mmol)，并且将所得混合物在50℃下搅拌16h。将混合物用100mL的EtOAc和100mL的盐水处理。将水层用EtOAc(100mL x 3)萃取。将合并的有机物用盐水(100mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩至干以给出呈棕色油的标题产物(7.8g，粗品)。MS:M/e 210(M+1)+。
步骤D：2-(1-乙氧基-1-氧代-2-(吡啶-3-基)丙-2-基)肼-1-甲酸叔丁酯。
在0℃下向2-肼基-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯(7.8g，粗品)和Et3N(12.0g，120mmol)在CH2Cl2(100mL)中的混合物中逐滴添加Boc2O(9.5g，43.5mmol)，并且将所得混合物在室温下搅拌3h。将混合物浓缩并且将所得残余物通过柱色谱法经PE/EtOAc(2:1-1:1)洗脱来纯化以给出呈棕色油的标题产物(3.05g，3个步骤为22％)。MS:M/e 310(M+1)+。
步骤E：2-肼基-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯盐酸盐。
向2-(1-乙氧基-1-氧代-2-(吡啶-3-基)丙-2-基)肼-1-甲酸叔丁酯(3.05g，9.8mmol)在EtOAc(20mL)中的搅拌溶液中添加HCl/二噁烷(20mL，4M)，并且将所得混合物在室温下搅拌40h。将混合物浓缩至干以给出呈棕色固体的标题产物(2.7g，产率：95％)。MS:M/e 210(M+1)+。
步骤F：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯。
将2-肼基-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯盐酸盐(550mg，2.24mmol)和2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(430mg，2.25mmol)在POCl3(10mL)中的混合物在60℃下搅拌4h。将所得混合物浓缩至干并且将所得油用20mL的EtOAc稀释，用Na2CO3的水溶液处理，用盐水(10mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过柱色谱法(PE/EtOAc＝3:1-1:1)纯化以给出呈浅黄色固体的标题产物(180mg，23％)。MS:M/e 347(M+1)+。
步骤G：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯。
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯(25mg，0.072mmol)、呋喃-2-碳酰肼(20mg，0.158mmol)和DIEA(50mg，0.387mmol)在DMSO(1mL)中的混合物在110℃下加热4h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(EtOAc/MeOH＝30:1)纯化以给出呈浅棕色固体的标题产物(15mg，粗品)。MS:M/e 437(M+1)+。
步骤H：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯。
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯(15mg，粗品)、HMDS(2.5mL)和BSA(2.5mL)的混合物在110℃下加热7h。将混合物浓缩至干。添加2mL的MeOH并且将溶液在60℃下搅拌20min。将所得残余物用10mL的EtOAc稀释，用NaHCO3(2mL)、盐水(2mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(EA100％)纯化以给出呈白色固体的标题产物(5mg，粗品)，该产物直接用于下一步骤。M/e 419(M+1)+。
步骤I：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(吡啶-3-基)丙酸
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(吡啶-3-基)丙酸乙酯(5mg，粗品)在THF(2mL)中的溶液中添加NaOH水溶液(2M，2mL)，并且将所得混合物在50℃下搅拌3h。将混合物通过HCl(1M)酸化至pH约3并且浓缩至干。将所得白色固体用CH2Cl2/MeOH(3:1，10mL)处理。将悬浮液过滤并且将滤液浓缩至干以给出呈浅黄色固体的标题产物(6mg，粗品)，该产物直接用于下一步骤。M/e 391(M+1)+。
步骤J：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-(吡啶-3-基)丙酰胺
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(吡啶-3-基)丙酸(6mg，粗品)、3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(10mg，0.1mmol)、DIPEA(30mg，0.23mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(15mg，0.04mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2h。将混合物用10mL的EtOAc稀释，用盐水(3mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝10:1)纯化2次，以在冻干后给出标题产物(2.5mg，4个步骤的产率：7.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.49(d,J＝2.0Hz,1H),8.45(dd,J＝4.8,1.2Hz,1H),8.23(s,1H),7.76(dd,J＝1.6,0.4Hz,1H),7.74–7.68(m,1H),7.39(dd,J＝8.0,4.0Hz,1H),7.26(d,J＝2.8Hz,1H),6.67(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.54(t,J＝6.4Hz,2H),4.43(dd,J＝6.4,2.4Hz,2H),3.67–3.50(m,2H),2.42(s,3H)。MS:M/e 476(M+1)+。
实施例90：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1R,2S)-2-羟基环戊基)-2-苯乙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(37.5mg，0.1mmol)、(1S,2R)-2-氨基环戊-1-醇(13.76mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(100％EtOAc)纯化以给出目标化合物(20mg，43.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.22(s,2H),7.97–7.94(m,1H),7.75-7.68(m,1H),7.44–7.31(m,5H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.76–6.71(m,1H),6.46(d,J＝5.2Hz,1H),4.82(dd,J＝16.4,11.0Hz,1H),4.05–3.82(m,2H),1.96–1.39(m,6H)ppm。MS:M/e 459(M+1)+。
实施例91：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,2R)-2-羟基环己基)-2-苯乙酰胺。
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯乙酸(50mg，0.13mmol)、(1R,2S)-2-氨基环己-1-醇(25mg，0.16mmol)、DIPEA(85mg，0.66mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(61mg，0.16mmol)，并且将混合物在室温下搅拌3h。将混合物用10mL的EtOAc稀释，用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化，以在冻干后给出标题产物(35mg，产率：57％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43–8.05(m,3H),7.95(s,1H),7.69(dd,J＝22.4,8.4Hz,1H),7.47–7.28(m,5H),7.24(d,J＝3.6Hz,1H),6.74(s,1H),6.44(d,J＝5.2Hz,1H),4.69(dd,J＝41.2,4.0Hz,1H),3.82–3.58(m,2H),1.63–1.38(m,6H),1.29–1.20(m,2H)。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例92：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(顺式)-N-(4-羟基环己基)-2-苯乙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(56mg，0.15mmol)和DIPEA(52mg，0.40mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加顺式-4-氨基环己-1-醇盐酸盐(20mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用PE:EtOAc(1:10)纯化以得到产物(35.3mg，56％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),8.16(s,2H),8.01-7.92(m,2H),7.40-7.32(m,5H),7.24(d,J＝4Hz,1H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),6.41(s,1H),4.37(d,J＝4Hz,1H),3.71-3.60(m,2H),1.61-1.39(m,8H)ppm。MS:M/e473(M+1)+。
通过手性制备型HPLC将实施例92分离成两种对映体立体异构体：实施例92A(较早的峰)和实施例92B(较晚的峰)。手性分离条件如下所示。
Figure BDA0002713602000000951
Figure BDA0002713602000000952
Figure BDA0002713602000000961
实施例93：1-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酰胺
Figure BDA0002713602000000962
步骤A：1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸甲酯
在室温下向1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸(7.04g，40mmol)在CH3OH(60mL)中的混合物中逐滴添加SOCl2(9.52g，80mmol)。将反应在65℃下加热过夜。将混合物冷却至室温并且浓缩至干。将残余物用EtOAc(160mL)稀释，用饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩以给出呈油的产物(7.2g，95％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.18–7.09(m,4H),3.84(t,J＝5.6Hz,1H),3.71(s,3H),2.91–2.70(m,2H),2.22–2.08(m,1H),2.05–1.91(m,2H),1.85–1.70(m,1H)。MS:M/e 191(M+1)+。
步骤B：1-溴-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸甲酯
在-70℃下向LDA(20.5mL，2mol/L，41.1mmol)在THF(60mL)中的混合物中逐滴添加步骤A的产物(7.1g，37.3mmol)在THF(30mL)中的溶液。将反应在-70℃下搅拌0.5小时并且逐滴添加氯三甲基硅烷(4.83g，44.7mmol)。然后将反应混合物温热至室温持续2小时。将混合物冷却至-70℃并且分批添加NBS(7.97g，44.7mmol)。添加后，将反应在-70℃下搅拌一小时，并且将反应混合物温热至室温。将混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，用EtOAc(50mL)萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩以给出呈油的产物(10g，粗品)。
步骤C：1-肼基-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸甲酯
向步骤B的产物(10g，粗品)在CH3CN(100mL)中的混合物中添加NH2NH2.H2O(8.15g，130mmol)。将反应在50℃下加热3小时。将混合物冷却至室温并且浓缩。将残余物用EtOAc(100mL)稀释，用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩以给出产物(8g，粗品)MS:M/e221(M+1)+。
步骤D：2-(1-(甲氧基羰基)-1,2,3,4-四氢萘-1-基)肼-1-甲酸叔丁酯向步骤C的产物(8g，粗品)在DCM(150mL)中的混合物中添加BOC2O(6.34g，29mmol)和三乙胺(TEA)(10.9g，108mmol)。将反应在室温下搅拌5小时。将反应用水淬灭，用DCM(50mL x 2)萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。将残余物通过柱色谱法(EtOAc:PE＝1:6)纯化以给出呈固体的目标产物(4g，3个步骤，33.4％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.24-7.17(m,1H),7.16–7.05(m,3H),6.49(s,1H),3.71(s,3H),2.95–2.76(m,2H),2.35–2.09(m,3H),1.91–1.82(m,1H),1.42(s,9H)MS:M/e 321(M+1)+。
步骤E：1-肼基-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸甲酯盐酸盐
向步骤D的产物(4g，12.5mmol)在DCM(20mL)中的混合物中添加4M HCl在EtOAc中(10mL，40mmol)的溶液。将反应在室温下搅拌过夜。将混合物浓缩以给出白色固体(3.2g，约100％)。MS:M/e 221(M+1)+。
步骤F：1-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸甲酯
将1-肼基-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸甲酯盐酸盐(0.7g，2.7mmol)和2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(0.52g，2.7mmol)在MeCN(30ml)中的溶液在室温下搅拌过夜，并且然后加热至70℃。将反应混合物在70℃下搅拌1h。完成后，将混合物过滤。将滤液在减压下浓缩。将所得残余物通过柱色谱法用PE:EtOAc(5:1)纯化以得到呈浅黄色固体的产物(0.66g，68％)。MS:M/e 358(M+1)+。
步骤G：1-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸甲酯
将1-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸甲酯(0.66g，1.8mmol)、呋喃-2-碳酰肼(0.28g，2.2mmol)和DIPEA(0.48g，3.7mmol)在DMSO(15ml)中的溶液在110℃下搅拌过夜。完成后，将反应混合物在减压下浓缩以去除DMSO。将H2O添加至残余物中并且搅拌。将浆液过滤以得到呈浅黄色固体的粗产物(0.97g)，该粗产物不经进一步纯化直接用于下一步骤。MS:M/e 448(M+1)+。
步骤H：1-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸甲酯
将1-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸甲酯(0.97g，粗品)在BSA(15ml)中的溶液在110℃下搅拌过夜。完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用EtOH稀释，并且然后在80℃下搅拌2h。将溶液自然冷却至室温，并且然后过滤以得到呈浅黄色固体的产物(0.24g)。MS:M/e 430(M+1)+。
步骤I：1-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸
向1-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸酯(0.24g，0.56mmol)在EtOH(10ml)中的溶液中添加NaOH(0.22g，5.5mmol)在H2O(2ml)中的溶液。将混合物加热至80℃，并且然后搅拌3h。完成后，将反应混合物在减压下浓缩以去除EtOH。将残余物用H2O稀释，并且然后用HCl水溶液(4N)酸化至pH＝3-4。将沉淀物过滤，洗涤，并且然后干燥以得到呈浅黄色固体的产物(0.2g，86％)。MS:M/e 416(M+1)+。
步骤J：1-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酰胺
向1-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-1,2,3,4-四氢萘-1-甲酸(100mg，0.24mmol)和HATU(138mg，0.36mmol)在THF(10ml)中的搅拌溶液中添加3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(28mg，0.27mmol)和DIPEA(94mg，0.73mmol)。将混合物在室温下搅拌2h。完成后，将反应混合物在减压下浓缩以去除溶剂。将残余物用DCM(20ml)稀释，并且然后用H2O(10ml X 2)洗涤。将有机溶液干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(30:1)纯化以得到产物(30.8mg，26％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),8.04-7.90(m,3H),7.44(t,J＝8Hz,1H),7.28-7.16(m,4H),7.11(t,J＝8Hz,1H),6.76-6.71(m,1H),5.72(s,1H),4.46(t,J＝8Hz,2H),4.33(d,J＝4Hz,1H),4.30(d,J＝8Hz,1H),3.48-3.42(m,2H),2.92-2.76(m,2H),1.27-1.23(m,4H)ppm。MS:M/e 501(M+1)+。
实施例94：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1R,3R)-3-羟基环戊基)-2-苯基丙酰胺
将(1R,3R)-3-氨基环戊-1-醇(17mg，0.12mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、HATU(46.9mg，0.12mmol)和DIPEA(0.2mL)在DMF(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过combiflash(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(35mg，产率：74.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27–8.20(m,1H),8.03–7.92(m,3H),7.61–7.55(m,1H),7.33–7.23(m,4H),7.18–7.08(m,2H),6.76–6.70(m,1H),4.41(t,J＝4Hz,1H),4.37–4.24(m,1H),4.12–4.02(m,1H),2.27(s,3H),2.01–1.88(m,1H),1.84–1.68(m,2H),1.63–1.49(m,1H),1.45–1.29(m,2H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例95：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,3S)-3-羟基环戊基)-2-苯基丙酰胺
将(1S,3S)-3-氨基环戊-1-醇(17mg，0.12mmol)、2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、HATU(46.9mg，0.12mmol)和DIPEA(0.2mL)在DMF(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过combiflash(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(30mg，产率：63.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27–8.18(m,1H),8.04–7.85(m,3H),7.63–7.52(m,1H),7.35–7.21(m,4H),7.17–7.04(m,2H),6.79–6.68(m,1H),4.41(t,J＝4Hz,1H),4.36–4.22(m,1H),4.15–3.94(m,1H),2.27(s,3H),2.05–1.85(m,1H),1.84–1.67(m,2H),1.65–1.49(m,1H),1.46–1.27(m,2H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例96：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(顺式)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)-2-苯乙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基乙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(56mg，0.15mmol)和DIPEA(52mg，0.40mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加顺式-4-氨基-1-甲基环己-1-醇(17mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(30:1)纯化以得到产物(26.2mg，40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.16(s,2H),7.95(s,1H),7.91(d,J＝8Hz,1H),7.42-7.32(m,5H),7.25(d,J＝4Hz,1H),6.73(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),6.38(s,1H),4.01(s,1H),3.57-3.47(m,1H),1.56-1.43(m,5H),1.34-1.28(m,3H),1.07(s,3H)ppm。MS:M/e 487(M+1)+。
实施例97：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)丙烯酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、(四氢-2H-吡喃-4-基)甲胺(29.6mg，0.257mmol)、HATU(53.5mg，0.14mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，在真空中浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(30mg，48.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),7.96(d,J＝5.9Hz,3H),7.64(t,J＝5.9Hz,1H),7.27(dt,J＝9.9,4.8Hz,4H),7.15(d,J＝6.8Hz,2H),6.78–6.71(m,1H),3.74(s,2H),3.20(t,J＝11.7Hz,2H),2.99(m,2H),2.29(s,3H),1.71(s,1H),1.48–1.35(m,2H),1.05(m,2H)。MS:M/e487(M+1)+。
实施例98：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、四氢-2H-吡喃-4-胺(26mg，0.257mmol)、HATU(53.5mg，0.141mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(22mg，36.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),7.97(d,J＝10.1Hz,3H),7.67(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(dd,J＝12.6,5.4Hz,4H),7.14(d,J＝6.9Hz,2H),6.74(s,1H),3.88(s,1H),3.76(d,J＝4.6Hz,2H),3.30(s,2H),2.26(s,3H),1.68(m,2H),1.41(m,2H)。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例99：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(3-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、3-氨基环己-1-醇(14.8mg，0.128mmol)、HATU(53.5mg，0.14mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(16mg，25.7％)。δ8.21(d,J＝4.7Hz,1H),7.95(s,3H),7.61(d,J＝7.9Hz,1H),7.36–7.21(m,4H),7.19–7.11(m,2H),6.74(s,1H),3.71(s,1H),3.42(s,1H),3.10–3.05(m,1H),2.27(s,3H),1.61(m,3H),1.24–1.09(m,5H)。MS:M/e 487(M+1)+。
实施例100：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((S)-5-氧代吡咯烷-3-基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、(S)-4-氨基吡咯烷-2-酮(25.6mg，0.256mmol)、HATU(53.5mg，0.128mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(25mg，41.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(d,J＝24.4Hz,1H),7.95(s,3H),7.84(s,1H),7.74(d,J＝10.1Hz,1H),7.27(dd,J＝14.7,7.1Hz,5H),7.17(d,J＝7.1Hz,1H),6.74(s,1H),4.31(m,1H),3.13(d,J＝5.5Hz,2H),2.31(s,3H),2.27(s,2H)。MS:M/e 472(M+1)+。
实施例101：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(哌啶-4-基)丙酰胺
Figure BDA0002713602000001031
步骤A：4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰胺基)哌啶-1-甲酸酯
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.256mmol)、4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(102.8mg，0.514mmol)、HATU(117.2mg，0.308mmol)和DIPEA(66mg，0.514mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出呈白色固体的目标化合物(120mg，82％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.97(d,J＝11.6Hz,3H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.32–7.21(m,4H),7.15(d,J＝6.5Hz,2H),6.74(dd,J＝3.3,1.7Hz,1H),3.85(s,3H),2.71(d,J＝16.8Hz,2H),2.25(s,3H),1.71(m,2H),1.35(s,9H),1.26(m,2H)。MS:M/e 572(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(哌啶-4-基)丙酰胺
将4-(2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰胺基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(190mg，0.33mmol)在4M HCl/EtOAc(20ml)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物过滤，并且将滤饼用EtOAc洗涤。将产物中添加到1M NaHCO3溶液中并且用DCM(20mL x 2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在真空中浓缩以给出产物(120mg，77.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6))δ8.23(s,1H),7.95(s,3H),7.54(d,J＝7.6Hz,1H),7.26(dd,J＝13.8,5.6Hz,4H),7.14(d,J＝7.3Hz,2H),6.74(s,1H),3.70(s,1H),2.85(s,2H),2.44(s,2H),2.27(s,3H),2.08(s,1H),1.66(m,2H),1.24(m,2H)。MS:M/e 472(M+1)+。
实施例102：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(反式)-N-(3-羟基环丁基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.128mmol)、反式-3-氨基环丁-1-醇(17.5mg，0.141mmol)、HATU(53.5mg，0.128mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(60mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(35mg，59.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),7.96(d,J＝10.3Hz,3H),7.89(d,J＝6.6Hz,1H),7.26(dd,J＝11.0,5.4Hz,4H),7.11(d,J＝7.3Hz,2H),6.74(s,1H),4.90(s,1H),4.26(d,J＝6.2Hz,1H),4.08(s,1H),2.28(s,3H),2.21–2.11(m,2H),2.03(m,2H)。MS:M/e 459(M+1)+。
实施例102B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(反式)-N-(3-羟基环丁基)-2-苯基丙酰胺
向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加反式-3-氨基环丁-1-醇盐酸盐(18mg，0.15mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15mlx 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(20:1)纯化以得到产物(41.8mg，71％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),7.98(s,2H),7.95(s,1H),7.89(d,J＝8Hz,1H),7.30-7.23(m,4H),7.11(d,J＝8Hz,2H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),4.91(s,1H),4.30-4.22(m,1H),4.13-4.05(m,1H),2.28(s,3H),2.24-2.11(m,2H),2.07-1.98(m,2H)ppm。MS:M/e 459(M+1)+。
实施例103：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-苯基丁酰胺
Figure BDA0002713602000001051
步骤A：2-苯基丁酸甲酯
在0℃下向2-苯基丁酸(5g，30.49mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中逐滴添加氯化亚砜(54.4g，45.73mmol)，添加后，将反应混合物在室温下搅拌3h。将混合物浓缩，用冰水(20mL)淬灭，用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝20:1-5:1)纯化以给出呈黄色油的2-苯基丁酸甲酯(5.12g，94.35％)。MS:M/e 179(M+1)+。
步骤B：2-溴-2-苯基丁酸甲酯
将2-苯基丁酸甲酯(5.12g，28.76mmol)、NBS(6.14g，34.52mmol)、BPO(0.348g，1.438mmol)在四氯化碳(20mL)中的混合物在70℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，将残余物用PE洗涤并且过滤，将滤液浓缩以给出呈黄色油的2-溴-2-苯基丁酸甲酯(7.08g，95.77％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46(d,J＝7.8Hz,2H),7.38–7.28(m,J＝19.2,6.3Hz,3H),3.78(s,3H),2.57–2.38(m,2H),0.98(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤C：2-肼基-2-苯基丁酸甲酯盐酸盐
向2-溴-2-苯基丁酸甲酯(2g，7.8mmol)和K2CO3(2.16mg，15.7mmol)在DMF(20ml)中的搅拌溶液中添加水合肼(1.95g，31.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24h。完成后，将反应混合物倒入水(30ml)中，然后将其用EtOAc(30ml X 3)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩以去除溶剂。将残余物用EtOAc(50ml)稀释，并且然后用H2O(25ml x 2)洗涤以去除水合肼。将所得有机溶液浓缩以得到残余物。将残余物用HCl水溶液(4M)酸化，并且然后用EtOAc(25ml X 2)洗涤以去除易溶于EtOAc中的杂质。将水溶液在减压下浓缩并且干燥以得到呈白色固体的产物(1.0g，52.6％)，该产物不经进一步纯化直接用于下一步骤1H NMR。(400MHz,DMSO-d6)δ7.41(d,J＝4Hz,4H),7.39-7.35(m,1H),3.72(s,3H),2.21-2.14(m,2H),0.74(t,J＝8Hz,3H)ppm。MS:M/e 209(M+1)+。
步骤D：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丁酸甲酯
向2-肼基-2-苯基丁酸甲酯盐酸盐(1g，4.09mmol)在乙腈(30ml)中的搅拌溶液中添加2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(0.94g，4.90mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h，并且然后加热至60℃，将其在60℃下搅拌2h。完成后，将反应混合物过滤。将滤液在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过柱色谱法用PE:EtOAc(4:1)纯化以得到呈黄色固体的产物(0.55g，39％)。MS:M/e 346(M+1)+。
步骤E：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丁酸甲酯
将2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丁酸甲酯(0.55g，1.59mmol)、呋喃-2-碳酰肼(0.20g，1.59mmol)和DIEA(0.41g，3.18mmol)在DMSO(15ml)中的混合物在110℃下搅拌15h。完成后，将反应混合物倒入H2O(15ml)中，并且然后用EtOAc(20ml x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过柱色谱法用PE:EtOAc(1:2)纯化以得到呈浅黄色固体的产物(0.57g，82％)。MS:M/e 436(M+1)+。
步骤F：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丁酸甲酯
将2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丁酸甲酯(0.57g，1.31mmol)在BSA(5ml)和HMDS(5ml)中的溶液在110℃下搅拌15h。完成后，将反应混合物浓缩。将残余物用NaHCO3水溶液(饱和，15ml)稀释，并且然后用EtOAc(20ml x3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过柱色谱法用PE:EtOAc(10:1)纯化以得到呈黄色固体的产物(0.28g，51％)。MS:M/e418(M+1)+。
步骤G：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丁酸
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丁酸甲酯(0.28g，0.67mmol)在乙醇(15ml)中的搅拌溶液中添加NaOH(0.27g，6.75mmol)在H2O(5ml)中的溶液。将混合物在70℃下搅拌4h。完成后，将反应混合物浓缩以去除乙醇。将残余物用H2O(15ml)稀释，并且然后用HCl水溶液(4M)酸化至pH＝3-4。将沉淀物过滤。将滤饼用H2O(15ml)洗涤，并且然后干燥以得到呈白色固体的产物(0.25g，92％)。MS:M/e 404(M+1)+。
步骤H：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-苯基丁酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丁酸(50mg，0.12mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(47mg，0.36mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(14mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml X 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(20:1)纯化以得到目标产物(21.0mg，35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),7.95(s,1H),7.92(s,2H),7.69(t,J＝4Hz,1H),7.38-7.19(m,6H),6.74(s,1H),5.68(s,1H),4.34(t,J＝4Hz,2H),4.22(d,J＝4Hz,2H),3.47-3.37(m,2H),2.84(q,J＝8Hz,2H),0.79(t,J＝8Hz,3H)ppm。MS:M/e 489(M+1)+。
实施例104：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1s,3s)-3-羟基环丁基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.129mmol)、(1s,3s)-3-氨基环丁-1-醇(17.5mg，0.141mmol)、HATU(53.7mg，0.141mmol)和DIPEA(49.7mg，0.385mmol)在THF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(石油醚EtOAc＝0:1)纯化以给出目标化合物(26mg，44％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.95(s,3H),7.84(d,J＝7.2Hz,1H),7.27(t,J＝6.6Hz,4H),7.12(d,J＝7.1Hz,2H),6.74(s,1H),4.95(d,J＝5.6Hz,1H),3.75(d,J＝6.8Hz,2H),2.28(s,3H),2.08(s,2H),1.73(dd,J＝18.1,9.3Hz,2H)。ppm。MS:M/e459(M+1)+。
实施例104B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(顺式)-N-(3-羟基环丁基)-2-苯基丙酰胺
向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加顺式-3-氨基环丁-1-醇盐酸盐(18mg，0.15mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15mlx 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(20:1)纯化以得到产物(32.7mg，55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.04-7.93(m,3H),7.84(d,J＝8Hz,1H),7.31-7.24(m,4H),7.12(d,J＝8Hz,2H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),4.95(s,1H),3.81-3.71(m,2H),2.49-2.39(m,2H),2.28(s,3H),1.74(q,J＝8Hz,2H)ppm。MS:M/e 459(M+1)+。
实施例105：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,3S)-3-羟基-3-甲基环丁基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.129mmol)、(1s,3s)-3-氨基-1-甲基环丁-1-醇(20mg，0.198mmol)、HATU(53.7mg，0.141mmol)和DIPEA(33mg，0.256mmol)在THF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩，并且通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝0:1)纯化以给出目标化合物(32mg，53.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.96(d,J＝5.4Hz,3H),7.83(d,J＝7.1Hz,1H),7.35–7.18(m,4H),7.11(d,J＝6.7Hz,2H),6.74(dd,J＝3.3,1.7Hz,1H),4.82(s,1H),3.84(m,1H),2.27(s,3H),2.19(m,2H),1.92(t,J＝8.1Hz,2H),1.20(s,3H)。ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例105B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-(顺式)-N-(3-羟基-3-甲基环丁基)-2-苯基丙酰胺
向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加(顺式)-3-氨基-1-甲基环丁-1-醇盐酸盐(20mg，0.15mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用EtOAc(30ml)稀释，并且然后用H2O(15ml x 2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(20:1)纯化以得到产物(42.1mg，69％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.05-7.91(m,3H),7.82(d,J＝8Hz,1H),7.32-7.24(m,4H),7.12(d,J＝8Hz,2H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),4.79(s,1H),3.90-3.78(m,1H),2.28(s,3H),2.24-2.15(m,2H),1.96-1.88(m,2H),1.20(s,3H)ppm。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例106：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3S,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、(3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-醇盐酸盐(13.9mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc 100％)纯化以给出目标化合物(20mg，42.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(d,J＝12.9Hz,1H),8.05–7.92(m,3H),7.37–7.23(m,4H),7.15–7.02(m,3H),6.77–6.70(m,1H),5.21(s,1H),4.23–4.07(m,2H),3.98–3.76(m,2H),3.48–3.36(m,2H),2.33(d,J＝4.4Hz,3H)ppm。MS:M/e 475(M+1)+。
实施例106B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3S,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、(3R,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-醇盐酸盐(13.9mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc 100％)纯化以给出目标化合物(24mg，50.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝1.2Hz,1H),8.08–7.92(m,3H),7.83(dd,J＝22.4,6.8Hz,1H),7.45–7.20(m,4H),7.16–7.05(m,2H),6.79–6.70(m,1H),5.19–5.09(m,1H),4.26–4.04(m,2H),3.96–3.84(m,1H),3.69–3.48(m,2H),3.47–3.38(m,1H),2.29(s,3H)ppm。MS:M/e 475(M+1)+。
实施例107：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3S,4S)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、(3S,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-醇(10.3mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc 100％)纯化以给出目标化合物(21mg，44.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(d,J＝1.6Hz,1H),8.08–7.93(m,3H),7.92–7.78(m,1H),7.36–7.21(m,4H),7.19–7.04(m,2H),6.82–6.70(m,1H),5.15(dd,J＝10.8,4.1Hz,1H),4.29–4.03(m,2H),3.95–3.60(m,2H),3.56–3.39(m,2H),2.29(s,3H)ppm。MS:M/e 475(M+1)+。
实施例107B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3S,4S)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(38.9mg，0.1mmol)、(3S,4S)-4-氨基四氢呋喃-3-醇(10.3mg，0.1mmol)、HATU(45mg，0.12mmol)和DIPEA(25.8mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc 100％)纯化以给出目标化合物(23mg，48.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),7.96(s,3H),7.39–7.21(m,4H),7.18–6.99(m,3H),6.84–6.67(m,1H),5.21(d,J＝3.6Hz,1H),4.22–4.09(m,2H),3.93–3.73(m,2H),3.49–3.39(m,2H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 475(M+1)+。
实施例108：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(6-甲基吡啶-2-基)甲胺(24mg，0.19mmol)、HATU(72mg，0.19mmol)和DIPEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(35mg，56％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.08(t,J＝4.0Hz,1H),8.02(br.s,2H),7.95(s,1H),7.61(t,J＝8.0Hz,1H),7.34-7.23(m,6H),7.18(d,J＝8.0Hz,1H),7.05(d,J＝4.0Hz,1H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.43-4.33(m,2H),2.39(s,3H),2.33(s,3H)ppm。MS:M/e 494(M+1)+。
实施例108B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(6-甲基吡啶-2-基)甲胺(24mg，0.19mmol)、HATU(72mg，0.19mmol)和DIPEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(12mg，19％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.09(t,J＝4.0Hz,1H),8.02(br.s,2H),7.95(s,1H),7.63(s,1H),7.34-7.30(m,3H),7.27-7.19(m,4H),7.07(s,1H),6.74(dd,J1＝3.2Hz,J2＝1.6Hz,1H),4.44-4.33(m,2H),2.39(s,3H),2.34(s,3H)ppm。MS:M/e 494(M+1)+。
实施例109：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((5-甲基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(6-(氨甲基)吡啶-3-基)甲胺(24mg，0.19mmol)、HATU(72mg，0.19mmol)和DIPEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(42mg，66％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,2H),8.14(t,J＝4.0Hz,1H),8.03(br.s,2H),7.95(s,1H),7.60(s,1H),7.34-7.21(m,7H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.44-4.35(m,2H),2.38(s,3H),2.25(s,3H)ppm。MS:M/e 494(M+1)+。
实施例109B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((5-甲基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(6-(氨甲基)吡啶-3-基)甲胺(24mg，0.19mmol)、HATU(72mg，0.19mmol)和DIPEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(40mg，63％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.23(br.s,1H),8.11(t,J＝4.0Hz,1H),8.03(br.s,2H),7.95(s,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,1H),7.33-7.28(m,4H),7.25-7.22(m,3H),6.74(dd,J＝3.2Hz,1.6Hz,1H),4.43-4.33(m,2H),2.38(s,3H),2.23(s,3H)ppm。MS:M/e 494(M+1)+。
实施例110：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((4-甲基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(4-甲基吡啶-2-基)甲胺(24mg，0.19mmol)、HATU(72mg，0.19mmol)和DIPEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(24mg，38％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.24(d,J＝8.0Hz,1H),8.12(t,J＝4.0Hz,1H),8.02(br.s,2H),7.95(s,1H),7.34-7.22(m,6H),7.01(d,J＝4.0Hz,1H),6.97(s,1H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.45-4.34(m,2H),2.39(s,3H),2.20(s,3H)ppm。MS:M/e 494(M+1)+。
实施例110B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((4-甲基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(4-甲基吡啶-2-基)甲胺(24mg，0.19mmol)、HATU(72mg，0.19mmol)和DIPEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(40mg，63％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.24(d,J＝8.0Hz,1H),8.12(t,J＝4.0Hz,1H),8.03(br.s,2H),7.95(d,J＝4.0Hz,1H),7.34-7.29(m,3H),7.26-7.21(m,3H),7.01(d,J＝4.0Hz,1H),6.97(s,1H),6.74(dd,J1＝3.2Hz,J2＝1.6Hz,1H),4.45-4.35(m,2H),2.39(s,3H),2.20(s,3H)ppm。MS:M/e494(M+1)+。
实施例111：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-甲基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(3-甲基吡啶-2-基)甲胺(24mg，0.19mmol)、HATU(72mg，0.19mmol)和DIPEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(54mg，85％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.07(d,J＝4.0Hz,1H),7.93(m,4H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.35-7.20(m,6H),7.14(t,J＝4.0Hz,1H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.45(d,J＝4.0Hz,2H),2.39(s,3H),2.24(s,3H)ppm。MS:M/e 494(M+1)+。
实施例111B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-甲基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(3-甲基吡啶-2-基)甲胺(24mg，0.19mmol)、HATU(72mg，0.19mmol)和DIPEA(34mg，0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(45mg，71％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.07(d,J＝4.0Hz,1H),7.96-7.92(m,4H),7.53(d,J＝8.0Hz,1H),7.36-7.31(m,3H),7.25-7.20(m,3H),7.15-7.12(m,1H),6.74(dd,J1＝3.2Hz,J2＝1.6Hz,1H),4.44(d,J＝4.0Hz,2H),2.39(s,3H),2.23(s,3H)ppm。MS:M/e 494(M+1)+。
实施例112：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((6-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.129mmol)、(6-甲氧基吡啶-2-基)甲胺(32.7mg，0.256mmol)、HATU(53.7mg，0.141mmol)和DIPEA(49.7mg，0.385mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(40mg，61.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝2.4Hz,1H),8.01-7.95(m,4H),7.65(dd,J＝11.0,4.6Hz,1H),7.30-7.22(m,6H),6.98(d,J＝6.8Hz,1H),6.77–6.69(m,1H),6.63(d,J＝8.1Hz,1H),4.35(s,2H),3.70(d,J＝1.9Hz,3H),2.40(s,3H)。ppm。MS:M/e 510(M+1)+。
实施例112B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((6-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.256mmol)、(6-甲氧基吡啶-2-基)甲胺(42mg，0.307mmol)、HATU(116mg，0.307mmol)和DIPEA(66mg，0.512mmol)在THF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱法(甲醇/EtOAc＝1:50)纯化以给出目标化合物(120mg，92.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.24(d,J＝5.3Hz,1H),8.13(t,J＝5.5Hz,1H),7.96(d,J＝0.8Hz,3H),7.30(t,J＝7.0Hz,3H),7.25(d,J＝3.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.0Hz,2H),6.82(d,J＝5.6Hz,2H),6.74(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),4.39(d,J＝5.6Hz,2H),3.76(s,3H),2.40(s,3H)。ppm。MS:M/e 510(M+1)+。
实施例113B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((5-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)和DIPEA(70mg，0.54mmol)在THF(1mL)中的混合物中添加HATU(54mg，0.14mmol)并且将混合物在室温下搅拌10min。添加(5-甲氧基吡啶-2-基)甲胺(20mg，0.14mmol)的溶液，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用5mL的EtOAc稀释，用盐水(3mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(EtOAc，100％)纯化，并且将所得固体冻干以给出标题产物(45mg，产率：69％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.17–8.07(m,2H),8.02(s,2H),7.97–7.92(m,1H),7.38–7.26(m,5H),7.26–7.19(m,3H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.46–4.26(m,2H),3.78(s,3H),2.38(s,3H)。MS:M/e 510(M+1)+。
实施例114：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((4-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.129mmol)、(4-甲氧基吡啶-2-基)甲胺(32.7mg，0.256mmol)、HATU(53.7mg，0.141mmol)和DIPEA(49.7mg，0.385mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(42mg，64.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝2.4Hz,1H),8.26-8.23(m,2H),8.14-8.10(m,3H),7.31-7.19(m,6H),6.82-6.80(m,2H),6.74–6.70(m,1H),4.35(s,2H),3.70(d,J＝1.9Hz,3H),2.40(s,3H)。MS:M/e510(M+1)+。
实施例114B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((4-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.256mmol)、(4-甲氧基吡啶-2-基)甲胺(42mg，0.307mmol)、HATU(116mg，0.307mmol)和DIPEA(66mg，0.512mmol)在THF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱法(甲醇/EtOAc＝1:50)纯化以给出目标化合物(120mg，92.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.24(d,J＝5.3Hz,1H),8.13(t,J＝5.5Hz,1H),7.96(d,J＝0.8Hz,3H),7.30(t,J＝7.0Hz,3H),7.25(d,J＝3.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.0Hz,2H),6.82(d,J＝5.6Hz,2H),6.74(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),4.39(d,J＝5.6Hz,2H),3.76(s,3H),2.40(s,3H)。ppm。MS:M/e 510(M+1)+。
实施例115：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.129mmol)、(3-甲氧基吡啶-2-基)甲胺(35mg，0.257mmol)、HATU(73mg，0.19mmol)和DIPEA(64mg，0.5mmol)在THF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩，并且通过柱色谱法(EtOAc)纯化以给出目标化合物(12mg，18.4％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6))δ8.27(s,1H),7.95(s,2H),7.84(d,J＝4.9Hz,1H),7.70(s,1H),7.38–7.27(m,4H),7.23(t,J＝8.0Hz,4H),6.74(s,1H),4.44(d,J＝4.3Hz,2H),3.79(s,3H),2.38(s,3H)。MS:M/e 510.1(M+1)+。
实施例115B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-甲氧基吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.256mmol)、(3-甲氧基吡啶-2-基)甲胺(42mg，0.307mmol)、HATU(116mg，0.307mmol)和DIPEA(66mg，0.512mmol)在THF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱法(甲醇/EtOAc＝1:50)纯化以给出目标产物(110mg，84.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),8.01–7.95(m,3H),7.94(d,J＝0.9Hz,1H),7.64(t,J＝7.8Hz,1H),7.35–7.27(m,3H),7.27–7.18(m,3H),6.98(d,J＝7.4Hz,1H),6.74(dd,J＝3.4,1.7Hz,1H),6.62(d,J＝8.2Hz,1H),4.35(d,J＝5.1Hz,2H),3.70(s,3H),2.40(s,3H)。ppm.MS:M/e510(M+1)+。
实施例116：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((6-氟吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.12mmol)、(6-氟吡啶-2-基)甲胺二盐酸盐(30mg，0.15mmol)、DIPEA(100mg，0.77mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(60mg，0.16mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用NaHCO3(10mL)、盐水(10mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩。添加3mL的EtOAc并且将悬浮液搅拌30min并且过滤。将滤饼冻干以给出标题产物(25mg，产率：42％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),8.22(t,J＝6.0Hz,1H),8.06(s,2H),7.98–7.88(m,2H),7.39(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H),7.36–7.19(m,6H),7.00(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.45–4.27(m,2H),2.39(s,3H)。MS:M/e498(M+1)+。
实施例117：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((5-氟吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加(5-氟吡啶-2-基)甲胺(18mg，0.14mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用H2O(15ml)洗涤，并且然后用DCM(20ml x 2)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(30:1)纯化以得到产物(35.7mg，56％)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4Hz,1H),8.26(s,1H),8.23(t,J＝4Hz,1H),8.06(s,2H),7.95(s,1H),7.67(td,J＝8Hz,4Hz,1H),7.53(dd,J＝8Hz,4Hz,1H),7.34-7.21(m,6H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),4.41(qd,J＝16Hz,4Hz,2H),2.38(s,3H)ppm。MS:M/e 498(M+1)+。
实施例117B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((5-氟吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(1.54g，3.96mmol)、HATU(1.65g，4.34mmol)和DIPEA(1.53g，15.15mmol)在THF(30ml)中的搅拌溶液中添加(5-氟吡啶-2-基)甲胺(0.50g，3.97mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用H2O(20ml)洗涤，并且然后用DCM(25ml X 2)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过柱色谱法用DCM:MeOH(30:1)纯化以得到产物(1.37g，70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝4Hz,1H),8.26(s,1H),8.23(t,J＝4Hz,1H),8.05(s,2H),7.95(s,1H),7.67(td,J＝8Hz,4Hz,1H),7.53(dd,J＝8Hz,4Hz,1H),7.34-7.20(m,6H),6.74(s,1H),4.41(qd,J＝16Hz,4Hz,2H),2.38(s,3H)ppm。MS:M/e 498(M+1)+。
实施例118：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((4-氟吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加(4-氟吡啶-2-基)甲胺(18mg，0.14mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用H2O(15ml)洗涤，并且然后用DCM(20ml X 2)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(30:1)纯化以得到产物(26.2mg，41％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(dd,J＝8Hz,4Hz,1H),8.27(s,1H),8.23(t,J＝4Hz,1H),8.02(s,2H),7.96(s,1H),7.35-7.08(m,8H),6.78-6.71(m,1H),4.45(d,J＝8Hz,2H),2.40(s,3H)ppm。MS:M/e 498(M+1)+。
实施例118B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((4-氟吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加(4-氟吡啶-2-基)甲胺(18mg，0.14mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用H2O(15ml)洗涤，并且然后用DCM(20ml x 2)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(30:1)纯化以得到产物(25.0mg，39％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(dd,J＝8Hz,4Hz,1H),8.27(s,1H),8.23(t,J＝4Hz,1H),8.01(s,2H),7.96(d,J＝4Hz,1H),7.34-7.08(m,8H),6.74(dd,J＝4Hz,2Hz,1H),4.45(d,J＝4Hz,2H),2.40(s,3H)ppm。MS:M/e498(M+1)+。
实施例119：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加(3-氟吡啶-2-基)甲胺(18mg，0.14mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用H2O(15ml)洗涤，并且然后用DCM(20ml X 2)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(30:1)纯化以得到产物(33.6mg，53％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,2H),8.05-7.88(m,4H),7.65(t,J＝8Hz,1H),7.37-7.18(m,7H),6.74(s,1H),4.53(qd,J＝16Hz,4Hz,2H),2.35(s,3H)ppm。MS:M/e 498(M+1)+。
实施例119B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)在THF(15ml)中的搅拌溶液中添加(3-氟吡啶-2-基)甲胺(18mg，0.14mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。完成后，将反应混合物用H2O(15ml)洗涤，并且然后用DCM(20ml X 2)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且然后在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过制备型TLC用DCM:MeOH(30:1)纯化以得到产物(45.2mg，71％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25-8.21(m,2H),8.02-7.90(m,4H),7.64(t,J＝8Hz,1H),7.37-7.18(m,7H),6.74(dd,J＝8Hz,4Hz,1H),4.53(qd,J＝16Hz,4Hz,2H),2.35(s,3H)ppm。MS:M/e 498(M+1)+。
实施例120：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1R,3R)-3-羟基环己基)-2-苯乙酰胺
实施例121：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,3R)-3-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺
实施例122：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,3S)-3-羟基环己基)-2-苯乙酰胺
实施例123：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,3R)-3-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(1R,3S)-3-氨基环己-1-醇盐酸盐(23mg，0.15mmol)、DIPEA(70mg，0.54mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(60mg，0.16mmol)，并且将混合物在室温下搅拌5h。将混合物用15mL的EA稀释，用NaHCO3(10mL)、盐水(10mL x3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(EtOAc 100％)纯化以给出标题产物(16mg，产率：26％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(d,J＝4.4Hz,1H),8.12–7.78(m,3H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.34–7.22(m,4H),7.21–7.10(m,2H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.53(dd,J＝7.2,4.0Hz,1H),3.80–3.65(m,1H),3.51–3.37(m,1H),2.27(s,3H),1.95–1.75(m,1H),1.72–1.51(m,3H),1.22–1.07(m,3H),1.06–0.93(m,1H)。MS:M/e487(M+1)+。
实施例124：
Figure BDA0002713602000001211
实施例125：
Figure BDA0002713602000001212
实施例126：
Figure BDA0002713602000001221
实施例127：
Figure BDA0002713602000001222
实施例128：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(4-氧代环己基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、4-氨基环己-1-酮盐酸盐(50mg，0.3mmol)、DIPEA(100mg，0.77mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(60mg，0.16mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用盐水(10mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC纯化，并且将所得固体冻干以给出标题产物(39mg，产率：62％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.12–7.86(m,3H),7.73(d,J＝7.6Hz,1H),7.34–7.22(m,4H),7.14(d,J＝6.8Hz,2H),6.74(dd,J＝2.8,1.6Hz,1H),4.25–4.13(m,1H),2.46–2.37(m,2H),2.27(s,3H),2.21–2.12(m,2H),2.07-2.01(m,1H),1.98–1.91(m,1H),1.72–1.57(m,2H)。MS:M/e 485(M+1)+。
实施例128B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(4-氧代环己基)-2-苯基丙酰胺。
Figure BDA0002713602000001223
步骤A：4-氨基环己-1-酮盐酸盐。
向(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，4.7mmol)在EtOAc中的搅拌溶液中添加HCl/二噁烷的溶液(4M，10mL)，并且将所得混合物在室温下搅拌4h。将沉淀出的白色固体过滤，用EtOAc(5mL)洗涤，在高真空下干燥以给出呈白色固体的标题产物(650mg，产率：92％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ3.23–3.07(m,1H),2.14–2.04(m,2H),1.97–1.86(m,2H),1.67–1.52(m,2H),1.51–1.39(m,2H)。
步骤B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(4-氧代环己基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(400mg，1.03mmol)、4-氨基环己-1-酮盐酸盐(180mg，1.2mmol)、DIPEA(650mg，5mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加HATU(450mg，1.2mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用30mL的EtOAc稀释，用盐水(20mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过柱色谱法经PE/EtOAc(1:1-1:2)洗脱来纯化，并且将所得固体冻干以给出标题产物(255mg，产率：53％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.13–7.88(m,3H),7.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.34–7.22(m,4H),7.17–7.10(m,2H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.25–4.13(m,1H),2.48–2.37(m,2H),2.22–2.11(m,2H),2.11–2.02(m,1H),2.01–1.92(m,1H),1.73–1.58(m,2H)。MS:M/e 485(M+1)+。
实施例129：
Figure BDA0002713602000001231
实施例130：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((6-(1-羟基环丁基)吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
Figure BDA0002713602000001241
步骤A：乙酸1-(6-((2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰胺基)甲基)吡啶-2-基)环丁酯
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、乙酸1-(6-(氨甲基)吡啶-2-基)环丁酯盐酸盐(40mg，0.15mmol)和DIEA(100mg，0.77mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(60mg，0.16mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用NaHCO3(10mL)、盐水(10mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩以给出呈浅黄色油的标题产物(90mg，粗品)，该产物直接用于下一步骤。MS:M/e 592(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((6-(1-羟基环丁基)吡啶-2-基)甲基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向乙酸1-(6-((2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰胺基)甲基)吡啶-2-基)环丁酯(90mg，粗品)在MeOH(2mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2M，2mL)，并且将所得混合物搅拌5h。将混合物通过HCl(1M)中和至pH约7。将混合物用EtOAc(5mL x 3)萃取。将合并的萃取物用盐水(5mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过柱色谱法和制备型TLC(EA，100％)纯化以给出标题产物(48mg，2个步骤的产率：68％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.13–7.98(m,3H),7.97–7.92(m,1H),7.70(t,J＝7.6Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.34–7.20(m,7H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),5.62(s,1H),4.47(d,J＝5.2Hz,2H),2.43–2.31(m,5H),2.15–2.03(m,2H),1.85–1.71(m,1H),1.68–1.55(m,1H)。MS:M/e 550(M+1)+。
实施例131：
Figure BDA0002713602000001251
实施例132：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-甲基-3-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲基-3-苯基丙酸(70mg，0.17mmol)、3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(27mg，0.26mmol)、HATU(99mg，0.26mmol)和DIPEA(44mg，0.34mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(50mg，60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),8.01(br.s,2H),7.96(s,1H),7.25-7.20(m,2H),7.11-7.07(m,3H),6.77-6.73(m,1H),6.70(d,J＝6.7Hz,2H),5.62(s,1H),4.42-4.33(m,2H),4.22(dd,J1＝19.5Hz,J2＝6.4Hz,2H),4.10(d,J＝13.7Hz,1H),3.49-3.40(m,2H),3.24(dd,J1＝13.6Hz,J2＝5.6Hz,1H),1.73(s,3H)ppm。MS:M/e 489(M+1)+。
实施例133：2-(5-氨基-2-(噻唑-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
Figure BDA0002713602000001261
步骤A：噻唑-5-甲酸甲酯
向噻唑-5-甲酸甲酯(1g，7.75mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加乙二酰氯(2ml，24mmol)和DMF(50mg，0.67mmol)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌2h。将混合物在真空中浓缩，并且向残余物中添加DCM(20ml)，接着添加甲醇(1.5ml)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩以给出无色油(1.3g，100％)，该无色油直接用于下一步骤。MS:M/e 144.0(M+1)+。
步骤B：噻唑-5-碳酰肼
向噻唑-5-甲酸甲酯(1.3g，7.75mmol)在乙醇(30mL)中的搅拌混合物中添加水合肼(2ml)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌3h。将反应混合物过滤。将滤饼用EtOH(10ml)洗涤并且在50℃下干燥以给出白色固体，该白色固体直接用于下一步骤(820mg，74％)。MS:M/e 144.0(M+1)+。
步骤C：2-(6-氨基-4-(2-(噻唑-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯
向2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯(331mg，1mmol)在t-BuOH(5mL)中的搅拌混合物中添加噻唑-5-碳酰肼(143mg，1mmol)。添加后，将反应混合物在120℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温并且过滤。将滤饼用t-BuOH洗涤并且干燥以给出呈白色固体的产物(400mg，91.3％)，该产物可直接用于下一步骤。MS:M/e 439.0(M+1)+。
步骤D：2-(5-氨基-2-(噻唑-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸甲酯
将2-(6-氨基-4-(2-(噻唑-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-苯基丙酸甲酯(460mg，1.09mmol)在BSA(5mL)和HMDS(5mL)中的混合物在110℃下搅拌过夜。将混合物在真空中浓缩以去除BSA和HMDS。向残余物中添加EtOH(20ml)并且在70℃下搅拌1h。形成白色沉淀物。将混合物冷却至室温并且过滤。将滤饼用EtOH洗涤并且在50℃下干燥以给出呈白色固体的产物(220mg，52.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.17(s,2H),8.11(d,J＝3.1Hz,1H),8.04(d,J＝3.1Hz,1H),7.31(d,J＝6.0Hz,3H),7.16–7.05(m,2H),3.75(s,3H),2.31(s,3H).ppm MS:M/e 421.0(M+1)+。
步骤E：2-(5-氨基-2-(噻唑-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸
向2-(5-氨基-2-(噻唑-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸甲酯(100mg，0.34mmol)在EtOH(10mL)中的搅拌混合物中添加NaOH水溶液(2.0M，10mL)。添加后，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在真空中浓缩。向残余物中添加H2O并且用HCl水溶液调节至pH＝3-4。将混合物过滤，收集滤饼，将其干燥以给出呈白色固体的目标化合物(70mg，71.8％)。MS:M/e 407.0(M+1)+。
步骤F：2-(5-氨基-2-(噻唑-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-苯基丙酰胺
将步骤E的产物(50mg，0.123mmol)、3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(25mg，0.246mmol)、HATU(71mg，0.184mmol)和DIPEA(30mg，0.246mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(甲醇/EtOAc＝1/50)纯化以给出目标化合物(48mg，80％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),8.11(d,J＝3.2Hz,1H),8.09–7.98(m,3H),7.43(d,J＝6.0Hz,1H),7.30(t,J＝6.8Hz,3H),7.17(d,J＝6.6Hz,2H),5.70(s,1H),4.46–4.36(m,2H),4.34–4.19(m,2H),3.42(d,J＝3.2Hz,2H),2.34(s,3H)。ppm。MS:M/e 492.1(M+1)+。
实施例134：
Figure BDA0002713602000001281
实施例135：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1R,3S)-3-羟基环戊基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、(1S,3R)-3-氨基环戊-1-醇盐酸盐(17mg，0.12mmol)、DIEA(50mg，0.39mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(46mg，0.12mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用盐水(10mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EtOAc)纯化，以在冻干后给出标题产物(28mg，产率58％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(d,J＝10.8Hz,1H),8.11–7.78(m,3H),7.41(dd,J＝10.8,8.0Hz,1H),7.35–7.22(m,4H),7.17(d,J＝6.8Hz,1H),7.13(d,J＝6.8Hz,1H),6.78–6.69(m,1H),4.56–4.42(m,1H),4.27–4.09(m,1H),4.08–3.94(m,1H),2.28(d,J＝3.6Hz,3H),1.92–1.70(m,2H),1.68–1.55(m,2H),1.46–1.32(m,2H)。MS:M/e473(M+1)+。
实施例136：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,3R)-3-羟基环戊基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(40mg，0.1mmol)、(1R,3S)-3-氨基环戊-1-醇盐酸盐(17mg，0.12mmol)、DIPEA(50mg，0.39mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(46mg，0.12mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用盐水(10mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EtOAc)纯化，以在冻干后给出标题产物(25mg，产率52％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(d,J＝11.2Hz,1H),8.13–7.77(m,3H),7.46–7.35(m,1H),7.34–7.21(m,4H),7.17(d,J＝6.8Hz,1H),7.13(d,J＝6.8Hz,1H),6.74(dd,J＝3.6,2.0Hz,1H),4.51–4.43(m,1H),4.24–4.11(m,1H),4.08–3.95(m,1H),2.28(d,J＝4.0Hz,3H),1.95–1.72(m,2H),1.67–1.54(m,2H),1.47–1.32(m,2H)。MS:M/e 473(M+1)+。
实施例137：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-(3-甲氧基苯基)丙酰胺
Figure BDA0002713602000001291
步骤A：2-(3-甲氧基苯基)丙酸甲酯
在-78℃下向2-(3-甲氧基苯基)乙酸甲酯(10g，55.6mmol)在THF(100mL)中的搅拌溶液中经1小时缓慢添加LDA(2M，33mL，66.7mmol)。然后将MeI(10.4mL，167mmol)添加至反应中。将混合物温热至室温并且搅拌过夜。将反应用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并且用EtOAc萃取(100mL x 2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝1:5)纯化以得到呈黄色油的标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.31–7.17(m,1H),6.94–6.76(m,3H),3.80–3.75(m,1H),3.74(s,3H),3.58(s,3H),1.37(d,J＝8Hz,3H)ppm。MS:M/e 195(M+1)+。
步骤B：2-溴-2-(3-甲氧基苯基)丙酸甲酯
在-78℃下在N2下向步骤A的产物(1g，5.2mmol)在THF(20mL)中的搅拌溶液中缓慢添加LDA(2M，2.7mL，5.4mmol)。将反应在-78℃下搅拌30min。将TBSCl(0.6g，5.5mmol)缓慢添加至反应中。将反应温热至室温并且在50℃下搅拌2小时。将反应冷却至-78℃并且将NBS(1.38g，7.7mmol)添加至反应中。然后将混合物温热至室温并且搅拌过夜。将混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并且用EtOAc萃取(20mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。残余物(粗品，1.7g，黄色油)直接用于下一步骤。MS:M/e 193(M-79)+。
步骤C：2-肼基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸甲酯
在室温下向步骤B的产物(3.4g，12.6mmol)在CH3CN(40mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(80％，3.1g，50.4mmol)。将混合物在50℃下搅拌过夜。将溶剂在减压下浓缩。将残余物溶解在水(40mL)中并且用EtOAc(40mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。残余物(粗品，2.82g，黄色油)直接用于下一步骤。MS:M/e 225(M+1)+。
步骤D：2-(1-甲氧基-2-(3-甲氧基苯基)-1-氧代丙烷2-基)肼-1-甲酸叔丁酯
在0℃下向步骤C的产物(2.82g，12.6mmol)和Et3N(1.9mL，15.1mmol)在DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加(Boc)2O(2.7g，12.6mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将反应用水(40mL)淬灭并且用DCM(50mL x 2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝1:2)纯化以得到呈黄色固体的标题化合物(1.6g，三个步骤的产率：39％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.96(br.s,1H),7.23(t,J＝8.0Hz,1H),6.99(s,1H),6.94–6.87(m,1H),6.86–6.79(m,1H),3.75(s,3H),3.62(s,3H),1.47(s,3H),1.35(s,9H)ppm。MS:M/e 325(M+1)+。
步骤E：2-肼基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸甲酯盐酸盐
在室温下将步骤D的产物(1.6g，4.9mmol)溶解在HCl/1,4-二噁烷(4M，50mL)中。将混合物在室温下搅拌4小时。将混合物在减压下浓缩。将呈黄色固体的残余物(1g，产率：90.9％)直接用于下一步骤。MS:M/e 225(M+1)+。
步骤F：2-(6-氨基-4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(3-甲氧基苯基)丙酸甲酯盐酸盐
在室温下向步骤E的产物(410mg，1.6mmol)在CH3CN中的搅拌溶液中添加2-氨基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛(300mg，1.6mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物在40℃下搅拌4小时。将混合物过滤并且将固体在空气中干燥。黄色固体(606mg，95.4％)直接用于下一步骤。MS:M/e 362(M+1)+。
步骤G：2-(6-氨基-4-(2-(呋喃-2-羰基)肼基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-2-(3-甲氧基苯基)丙酸甲酯
将呋喃-2-碳酰肼(192mg，1.5mmol)、步骤F的产物(606mg，1.5mmol)和Et3N(308mg，3mmol)在DMSO(2mL)中的混合物在100℃下搅拌过夜。将反应冷却至室温。将混合物倒入水(10mL)中。从体系中形成沉淀物。在室温下搅拌30min后，将混合物过滤。收集固体并且在空气中干燥。黄色固体(400mg，产率：59.1％)直接用于下一步骤。MS:M/e 452(M+1)+。
步骤H：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3-甲氧基苯基)丙酸甲酯
将步骤G的产物(400mg，0.89mmol)在BSA(8mL)和HMDS(8mL)中的混合物在100℃下搅拌过夜。将反应冷却至室温并且在减压下浓缩。将残余物溶解在H2O(10mL)和MeOH(10mL)中。将混合物在60℃下搅拌2小时。去除MeOH，并且从体系中沉淀出固体。将固体过滤并且在空气中干燥。棕色固体(350mg，产率：90.9％)直接用于下一步骤。MS:M/e 434(M+1)+。
步骤I：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(3-甲氧基苯基)丙酸
在室温下向步骤H的产物(350mg，0.81mmol)在MeOH(6mL)中的搅拌溶液中添加NaOH水溶液(2M，2mL)。将混合物在60℃下搅拌3小时。将反应在减压下浓缩。将残余物溶解在水(10mL)中并且通过HCl水溶液(2M)酸化至PH＝3-4。从体系中沉淀出固体。将混合物过滤并且收集固体。将白色固体(210mg，产率：61.9％)在空气中干燥并且直接用于下一步骤。MS:M/e 420(M+1)+。
步骤J：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-(3-甲氧基苯基)丙酰胺
将3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(17.2mg，0.17mmol)、步骤I的产物(70mg，0.17mmol)、HATU(63.5mg，0.17mmol)和DIEA(0.1mL，过量)在DMF(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水(10mL)中并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc：100％)纯化以得到标题化合物(32mg，产率：38％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),8.04–7.87(m,3H),7.44(t,J＝6Hz,1H),7.25(d,J＝3Hz,1H),7.21(d,J＝8Hz,1H),6.86(dd,J＝8,3Hz,1H),6.77–6.72(m,2H),6.69(d,J＝8.0Hz,1H),5.71(s,1H),4.47–4.38(m,2H),4.28(t,J＝6Hz,2H),3.69(s,3H),3.46–3.39(m,2H),2.32(s,3H)ppm。MS:M/e 505(M+1)+。
实施例138：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-甲基丙酰胺
Figure BDA0002713602000001321
步骤A：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲基丙酸甲酯
将2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(1.5g，6.2mmol)、2-溴-2-甲基丙酸甲酯(1.3g，7.4mmol)和K2CO3(1.7g，12.4mmol)在DMF(80mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。向溶液中添加水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取并且用盐水(50mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，浓缩并且通过柱色谱法(PE:EtOAc＝3:1至1:1)纯化以得到2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲基丙酸甲酯(65mg，3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(s,1H),8.06(br.s,2H),7.95(d,J＝4.0Hz,1H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),6.73(t,J＝4.0Hz,1H),3.67(s,3H),1.87(s,6H)ppm。MS:M/e 342(M+1)+。
步骤B：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲基丙酸
将NaOH溶液(30mg，在2mL的水中)添加至2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲基丙酸甲酯(65mg，0.19mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将溶液浓缩，添加水(5mL)并且用1NHCl溶液酸化至pH＝5。将沉淀的固体过滤并且干燥以得到呈白色固体的所需产物(53mg，85％)。MS:M/e 328(M+1)+。
步骤C：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基)-2-甲基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-甲基丙酸(50mg，0.15mmol)、3-(氨甲基)氧杂环丁-3-醇(24mg，0.22mmol)、HATU(84mg，0.22mmol)和DIPEA(39mg，0.30mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h。向溶液中添加水(5mL)，用乙酸乙酯(10mL)萃取并且用盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥，浓缩并且通过制备型TLC(EtOAc)纯化以得到所需产物(15mg，24％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),7.94(br.s,3H),7.23(d,J＝4.0Hz,1H),7.17(t,J＝4.0Hz,1H),6.74-6.73(m,1H),5.64(s,1H),4.36(d,J＝8.0Hz,2H),4.22(d,J＝8.0Hz,2H),3.34(s,2H),1.87(s,6H)ppm。MS:M/e 413(M+1)+。
实施例139：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((顺式)-4-羟基环己基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酰胺
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酸(50mg，0.12mmol)、顺式-4-氨基环己-1-醇盐酸盐(22mg，0.15mmol)、DIPEA(65mg，0.5mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(57mg，0.15mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用盐水(10mL x3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EA/MeOH＝50:1)纯化以给出标题产物(23mg，产率37％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.10–7.83(m,3H),7.38–7.18(m,3H),7.05(d,J＝8.4Hz,1H),6.84(t,J＝7.6Hz,1H),6.79–6.68(m,1H),6.56(d,J＝6.8Hz,1H),4.29(s,1H),3.73–3.55(m,5H),2.27(s,3H),1.64–1.25(m,8H)。MS:M/e 517(M+1)+
实施例140：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((顺式)-4-羟基-4-甲基环己基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酰胺。
在室温下向2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-(2-甲氧基苯基)丙酸(50mg，0.12mmol)、(顺式)-4-氨基-1-甲基环己-1-醇(19mg，0.15mmol)、DIPEA(65mg，0.5mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(57mg，0.15mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用盐水(10mL x3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且将所得油通过制备型TLC(EtOAc)纯化以给出标题产物(39mg，产率61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),8.07–7.87(m,3H),7.34–7.21(m,3H),7.05(d,J＝7.6Hz,1H),6.83(t,J＝7.2Hz,1H),6.78–6.71(m,1H),6.53(d,J＝6.8Hz,1H),3.96(s,1H),3.66(s,3H),3.58–3.40(m,1H),2.25(s,3H),1.68–1.58(m,1H),1.55–1.38(m,4H),1.35–1.21(m,3H),1.05(s,3H)。MS:M/e 531(M+1)+。
实施例141B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((3-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基)丙酰胺。
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)和DIPEA(70mg，0.54mmol)在THF(1mL)中的混合物中添加HATU(54mg，0.14mmol)并且将混合物在室温下搅拌10min。添加(3-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲胺盐酸盐(30mg，0.14mmol)在THF(1mL)中的悬浮液，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用5mL的EtOAc稀释，用盐水(3mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩。并且将所得残余物通过制备型TLC(PE/EA，1:1)纯化，并且将所得固体冻干以给出标题产物(28mg，产率：40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(d,J＝4.4Hz,1H),8.26(s,1H),8.14(d,J＝7.6Hz,1H),8.10–7.80(m,4H),7.58–7.41(m,1H),7.40–7.19(m,6H),6.74(s,1H),4.75–4.56(m,2H),2.38(s,3H)。MS:M/e 548(M+1)+。
实施例142B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基)丙酰胺。
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲胺二盐酸盐(35mg，0.14mmol)、DIPEA(70mg，0.54mmol)在THF(1mL)中的混合物中添加HATU(56mg，0.15mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用10mL的EA稀释，用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EA＝1:2)纯化，并且将所得固体冻干以给出标题产物(55mg，产率：78％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(s,1H),8.32(t,J＝5.6Hz,1H),8.28(s,1H),8.19(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),8.10(s,2H),7.95(s,1H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.36–7.28(m,3H),7.27–7.22(m,3H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.60–4.40(m,2H),2.39(s,3H)。MS:M/e 548(M+1)+。
实施例143B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基)丙酰胺。
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲胺二盐酸盐(35mg，0.14mmol)、DIPEA(70mg，0.54mmol)在THF(1mL)中的混合物中添加HATU(56mg，0.15mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用10mL的EtOAc稀释，用盐水(5mL x3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EA＝1:2)纯化，并且将所得固体冻干以给出标题产物(42mg，产率：54％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78–8.67(m,1H),8.34(t,J＝6.0Hz,1H),8.24(s,1H),8.15–7.87(m,3H),7.64–7.57(m,2H),7.35–7.28(m,3H),7.26(d,J＝3.2Hz,1H),7.19–7.10(m,2H),6.75(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.55(d,J＝6.0Hz,2H),2.41(s,3H)。MS:M/e 548(M+1)+。
实施例144B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基)丙酰胺。
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲胺二盐酸盐(35mg，0.14mmol)、DIPEA(70mg，0.54mmol)在THF(1mL)中的混合物中添加HATU(56mg，0.15mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用10mL的EtOAc稀释，用盐水(5mL x3)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(PE/EA＝1:2)纯化，并且将所得固体冻干以给出标题产物(28mg，产率：36％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34–8.24(m,2H),8.19–7.98(m,3H),7.95(s,1H),7.80–7.71(m,2H),7.36–7.27(m,3H),7.27–7.20(m,3H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.62–4.37(m,2H),2.39(s,3H)。MS:M/e 548(M+1)+。
实施例145B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(四氢-2H-噻喃-4-基)丙酰胺
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(236mg，1.54mmol)、四氢-2H-噻喃-4-胺盐酸盐(500mg，1.28mmol)、DIPEA(660mg，5.12mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加HATU(585mg，1.54mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用50mL的EtOAc稀释，用盐水(20mL x3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过柱色谱法纯化以给出粗产物，将该粗产物在室温下在庚烷/EtOAc(1:1，10mL)中浆化20min，过滤。将滤饼在高真空下干燥10min以给出标题产物(560mg，产率：75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.11–7.85(m,3H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.32–7.22(m,4H),7.20–7.10(m,2H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),3.79–3.62(m,1H),2.70–2.52(m,4H),2.25(s,3H),2.11–1.91(m,2H),1.57–1.42(m,2H)。MS:M/e 489(M+1)+。
实施例146B-1或146B-2：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1S,4s)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)-2-苯基丙酰胺或(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((1R,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)-2-苯基丙酰胺
Figure BDA0002713602000001371
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基-N-(四氢-2H-噻喃-4-基)丙酰胺(160mg，0.33mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加NaIO4(85mg，0.4mmol)在H2O(1mL)中的溶液，并且将所得混合物在室温下搅拌3h。向混合物中添加5mL的H2O，用CH2Cl2(10mL x 3)萃取。将合并的萃取物用盐水(20mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝20:1)纯化以给出两种产物：146B-1和146B-2。146B-1：70mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),8.13–7.89(m,3H),7.86(d,J＝8.4Hz,1H),7.35–7.10(m,6H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),3.97–3.79(m,1H),2.90–2.79(m,2H),2.76–2.63(m,2H),2.25(s,3H),2.13–1.93(m,2H),1.85–1.66(m,2H)。MS:M/e 505(M+1)+。146B-2：25mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.15–7.82(m,3H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.33–7.19(m,4H),7.17–7.06(m,2H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.08–3.88(m,1H),3.14–3.01(m,2H),2.73–2.60(m,2H),2.25(s,3H),2.17–1.98(m,2H),1.73–1.53(m,2H)。MS:M/e 505(M+1)+。
实施例147：2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)-2-苯基丙酰胺
将2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.257mmol)、2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-胺(36.8mg，0.257mmol)、HATU(117.8mg，0.308mmol)和DIPEA(66.3mg，0.514mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型HPLC纯化以给出目标产物(10mg，30.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.03(s,2H),7.96(s,1H),7.71(s,1H),7.34-7.23(m,4H),7.11(d,J＝6.4Hz,2H),6.76-6.74(m,1H),3.62–2.83(m,12H),2.78(s,3H),2.29(s,3H)ppm。MS:M/e 515(M+1)+。
实施例147B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)-2-苯基丙酰胺
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(100mg，0.257mmol)、2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-胺(36.8mg，0.257mmol)、HATU(117.8mg，0.308mmol)和DIPEA(66.3mg，0.514mmol)在DMF(3mL)中的混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入H2O(10mL)中并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并且通过制备型HPLC纯化以给出目标产物(35mg，26.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.03(s,2H),7.96(s,1H),7.71(s,1H),7.34-7.23(m,4H),7.11(d,J＝6.4Hz,2H),6.76-6.74(m,1H),3.62–2.83(m,12H),2.78(s,3H),2.29(s,3H)ppm。MS:M/e515(M+1)+。
实施例148B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-(4-羟基哌啶-1-基)乙基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(50mg，0.13mmol)、1-(2-氨基乙基)哌啶-4-醇(20mg，0.14mmol)、DIPEA(70mg，0.54mmol)在THF(2mL)中的混合物中添加HATU(53mg，0.14mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用10mL的EtOAc稀释，用盐水(5mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝10:1)纯化，并且将所得固体冻干以给出标题产物(15mg，产率：23％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δ8.29(s,1H),7.94(s,1H),7.39–7.24(m,4H),7.20–7.02(m,2H),6.76(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),3.58–3.33(m,3H),3.32–2.80(m,6H),2.29(s,3H),1.95–1.76(m,2H),1.74–1.42(m,2H)。MS:M/e 516(M+1)+。
实施例149B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-(4-羟基环己基)乙基)-2-苯基丙酰胺
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(75mg，0.19mmol)、4-(2-氨基乙基)环己-1-醇(30mg，0.21mmol)、DIPEA(100mg，0.77mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(86mg，0.22mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用盐水(10mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(EtOAc，100％)纯化，并且将所得固体冻干以给出标题产物(62mg，产率：63％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),8.15–7.81(m,3H),7.53(dt,J＝17.6,5.6Hz,1H),7.35–7.21(m,4H),7.18–7.11(m,2H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),3.63(s,1H),3.27–3.07(m,3H),2.29(s,3H),1.78–1.65(m,1H),1.65–1.51(m,1H),1.50–1.42(m,1H),1.34–1.21(m,5H),1.10–0.72(m,3H)。MS:M/e 515(M+1)+。
实施例150B：(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-(2-(6-甲基吡啶-2-基)乙基)-2-苯基丙酰胺。
在室温下向(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酸(75mg，0.19mmol)、2-(6-甲基吡啶-2-基)乙-1-胺(35mg，0.26mmol)、DIPEA(100mg，0.77mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加HATU(86mg，0.22mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16h。将混合物用20mL的EtOAc稀释，用盐水(10mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(EtOAc，100％)纯化，并且将所得固体冻干以给出标题产物(48mg，产率：50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(s,1H),8.10–7.85(m,3H),7.61(s,1H),7.51–7.34(m,1H),7.33–7.21(m,4H),7.16–7.07(m,2H),7.05–6.78(m,2H),6.75(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),3.57–3.43(m,2H),3.01–2.80(m,2H),2.29(s,3H),2.25(s,3H)。MS:M/e 508(M+1)+。
实施例151B：(顺式)-4-((R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-2-苯基丙酰胺基)环己基乙酸酯。
将(R)-2-(5-氨基-2-(呋喃-2-基)-7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-7-基)-N-((顺式)-4-羟基环己基)-2-苯基丙酰胺(50mg，0.1mmol)在Ac2O(2mL)中的溶液在70℃下加热4h。将溶液浓缩，用10mL的EtOAc稀释，用NaHCO3水溶液(5mL)、盐水(5mL x2)洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩，通过制备型HPLC纯化以给出标题产物(35mg，产率：66％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.11–7.86(m,3H),7.57(d,J＝7.8Hz,1H),7.34–7.22(m,4H),7.21–7.12(m,2H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),4.86–4.67(m,1H),3.85–3.67(m,1H),2.28(s,3H),1.92(s,3H),1.70–1.44(m,8H)。MS:M/e 529(M+1)+。
细胞培养和转染
将HEK293细胞维持在含5％CO2的加湿的37℃环境中补充有10％胎牛血清(FBS，Thermo Scientific)、100单位/mL青霉素(Gibco)和0.1mg/mL链霉素(Gibco)的Dulbecco改进Eagle培养基(DMEM，Gibco)中。编码野生型人A2A受体(A2AR)的质粒(在pcDNA3.1中)由Genscript(南京，中国)合成。根据制造商的说明，使用Lipofectamin 2000(ThermoFisherScientific)在具有4×105个细胞的6孔板中进行质粒的转染。建立稳定表达A2AR的细胞克隆并且将其维持在除另外有G-418的与HEK293细胞相同的完全培养基(Gibico)中。使用免疫印迹和FACS方法测定每个单细胞克隆中A2AR的表达水平。然后用pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro](Promega)荧光素酶报告基因质粒转染HEK293-A2AR稳定细胞，以建立HEK293-A2AR-luc2p/CRE/Hygro稳定细胞系。
荧光素酶报告基因测定
将HEK293-A2AR-luc2p/CRE/Hygro细胞以5,000个细胞/孔的密度接种在含有1％FBS和1U/mL腺苷脱氨酶(ADA)的DMEM(Sigma)中。18h后，用3nM CGS21680加上A2AR拮抗剂的系列稀释液处理细胞，所述拮抗剂的系列稀释液是在含有1％FBS的DMEM中制备的浓度为0.1-10000nM的本文公开的化合物。孵育5h后，根据制造商的说明书使用Bright-Glo荧光素酶测定系统(Promega)测量细胞中的荧光素酶活性。使用PHERAstar FS读板器(BMGLabtech)测量发光信号。将来自10μM preladenant处理的发光强度设定为0％。测定在3nMCGS21680存在下的最大发光强度，并且将其设定为100％。从整个化合物浓度范围内的剂量依赖性抑制曲线计算IC50值。
腺苷受体结合测定
使用以下方案在放射性配体竞争性结合测定(由法国Cerep进行)中测定测试化合物对四种人腺苷受体A1、A2A、A2B和A3的结合亲和力。对于A1受体(A1R)，将来自用A1R转染的CHO细胞的膜匀浆用1nM[3H]DPCPX在含有50mM Tris-HCl(pH 7.4)、5mM MgCl2、1mMEDTA/Tris和2UI/mL ADA的缓冲液中在不存在或存在该测试化合物的情况下在22℃下孵育60min。对于A2AR，将来自用A2AR转染的HEK293细胞的膜匀浆用6nM[3H]CGS21680在含有50mM Tris-HCl(pH 7.4)、10mM MgCl2和2UI/mL ADA的缓冲液中在不存在或存在测试化合物的情况下在22℃下孵育120min。对于A2B受体(A2BR)，将来自用A2BR转染的HEK293细胞的膜匀浆用5nM[3H]CPX在含有10mM Hepes/Tris(pH 7)、1mM MgCl2和1mM EDTA的缓冲液中在不存在或存在测试化合物的情况下在22℃下孵育60min。对于A3受体(A3R)，将来自用A3R转染的HEK293细胞的膜匀浆用0.15nM[125I]AB-MECA在含有50mM Tris-HCl(pH 7.4)、5mMMgCl2、1mM EDTA和2UI/mL ADA的缓冲液中在不存在或存在该测试化合物的情况下在22℃下孵育120min。分别在A1R、A2AR、A2BR、A3R结合测定中，在未标记的1μM DPCPX、10μM NECA、100μM NECA和1μM IB-MECA的存在下测定非特异性结合。孵育后，将样品快速过滤并且用冰冷的50mM Tris-HCl洗涤。然后将过滤器干燥并且使用闪烁混合物(Microscint 0，Packard)在闪烁计数器(Topcount，Packard)中计数以得到放射活性。对每个测定进行重复实验。结果表示为对照放射性配体特异性结合的抑制百分比。
小鼠BBB测定
使小鼠适应1周，然后以18-30g体重使用。将禁食小鼠以10mg/kg的剂量口服给药。在给药后1、2和4小时，将收集在含有作为抗凝血剂的K2EDTA的管中的来自心脏血液的血浆样品和切除的大脑半球立即冷冻并且在-80℃下储存直至进行生物分析。通过LC-MS/MS测定该化合物的总浓度。将脑匀浆浓度转换为脑浓度，用于计算脑与血浆的比率。
表1：荧光素酶报告基因测定的结果
Figure BDA0002713602000001411
Figure BDA0002713602000001421
Figure BDA0002713602000001431
Figure BDA0002713602000001441
Figure BDA0002713602000001451
Figure BDA0002713602000001461
Figure BDA0002713602000001471
Figure BDA0002713602000001481
表2：结合测定的结果
Figure BDA0002713602000001482
表3：在1h时小鼠BBB测定的结果
Figure BDA0002713602000001483
Figure BDA0002713602000001491
BLOQ：低于定量限
血浆为11ng/ml，并且脑为5ng/g。

Claims (62)

1.一种式(I)的化合物
Figure FDA0003465902320000011
或其立体异构体或其药学上可接受的盐，
其中：
X是N并且Y是CRa，使得X和Y形成-N＝CRa-部分；
Ra独立地选自氢、-C1-6烷基、-C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基；
R是芳基或含有1或2个独立地选自-N＝或＝N-、-NH-、-O-、-S-、-SO-或-SO2-中的杂原子的5元或6元杂芳基，并且所述芳基或杂芳基任选地被至少一个取代基R15取代；
R1和R2，可以相同或不同，各自独立地选自氢、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基，其中所述C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自独立地任选地被至少一个取代基R15取代，条件是R1和R2不都是氢；或者
R1和R2与它们所附接的碳原子一起形成包含0、1或2个独立地选自-N＝或＝N-、-NH-、-O-、-S-、-SO-或-SO2-中的杂原子的3元至12元饱和的、部分或完全不饱和的环，并且所述环任选地被至少一个取代基R15取代；
R3是氢；
R4是氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、芳基、杂芳基、或杂环基，其中所述C1-6烷基、C3-8环烷基、芳基、杂芳基、或杂环基各自独立地且任选地被一个或两个取代基R5取代；或者该C3-8环烷基、芳基、杂芳基、或杂环基环上的两个相邻的R5取代基与它们所附接的原子一起形成稠环；
R5独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、-ORb、-SO2Rb、-CORb、-CO2Rb、-CONRbRc、-C(＝NRb)NRcRd、-NRbRc、-NRbCORc、-NRbCONRcRd、-NRbCO2Rc、-NRbSONRcRd、-NRbSO2NRcRd、或-NRbSO2Rc，其中所述-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自独立地且任选地被一个或两个取代基R6取代；
R6独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、C3-8环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、或-ORe，其中作为R6，所述-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自独立地且任选地被一个或两个取代基R7取代；
R7在其每次出现时独立地是氢、卤素、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CN、-NO2、氧代基、-C1-6烷氧基、-C1-6烷氧基-C1-6烷氧基或羟基；
Rb、Rc、Rd、Re，可以相同或不同，各自独立地是氢、-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基-、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基，其中所述C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自独立地任选被至少一个取代基R15取代；并且
R15独立地是氢、卤素、氰基、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、卤代C1-6烷基、卤代C2-6烯基、卤代C2-6炔基、-C1-6烷氧基、C3-8环烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基。
2.权利要求1的化合物，其中Ra是氢或C1-3烷基。
3.权利要求1的化合物，其中Ra是氢。
4.权利要求1的化合物，其中R是含有1或2个独立地选自-N＝或＝N-、-NH、-O-或-S-中的杂原子的C-连接的5元或6元杂芳基。
5.权利要求4的化合物，其中R是呋喃基、吡嗪基或噻唑基。
6.权利要求4的化合物，其中R是呋喃-2-基、3-甲基吡嗪-2-基或噻唑-2-基。
7.权利要求1的化合物，其中R1是氢并且R2是苯基；或R1和R2与它们所附接的碳原子一起形成包含0个杂原子的3元至12元饱和环。
8.权利要求1的化合物，其中R1是氢并且R2是C1-6烷基。
9.权利要求8的化合物，其中R2是C1-4烷基。
10.权利要求8的化合物，R2是丙基或丁-2-基。
11.权利要求1的化合物，其中R1是C1-6烷基并且R2是苯基。
12.权利要求11的化合物，其中R1是C1-4烷基。
13.权利要求11的化合物，其中R1是甲基或乙基。
14.权利要求1的化合物，其中R1是C1-6烷基并且R2是吡啶基。
15.权利要求14的化合物，其中R1是C1-4烷基。
16.权利要求14的化合物，其中R1是甲基。
17.权利要求1的化合物，其中R1是C1-6烷基并且R2是被杂环基、芳基或杂芳基取代的C1-6烷基。
18.权利要求17的化合物，其中R1是C1-4烷基，R2是被苯基取代的C1-4烷基。
19.权利要求17的化合物，其中R1是甲基，R2是苄基。
20.权利要求1的化合物，其中R4是任选地被一个或两个取代基R5取代的C1-6烷基，其中每个R5独立地选自芳基、杂芳基、杂环基、环烷基、-ORb或-NRbRc，如式(I)所定义。
21.权利要求20的化合物，其中R4是任选地被一个或两个取代基R5取代的C1-3烷基。
22.权利要求1的化合物，其中R4是任选地被作为R5的芳基取代的C1-6烷基，所述芳基任选地被卤素、-C1-6烷基、卤代C1-6烷基、或-ORe取代，其中Re是任选地被卤素取代的C1-6烷基。
23.权利要求22的化合物，其中R4是任选地被作为R5的芳基取代的C1-3烷基，该芳基是苯基或经取代的苯基。
24.权利要求22的化合物，其中该芳基是苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基。
25.权利要求22或23的化合物，其中该苯基任选地被C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、F、Cl或Br取代。
26.权利要求22或23的化合物，其中该苯基任选地被甲氧基、氟、三氟甲氧基、三氟甲基、或甲基取代。
27.权利要求22或23的化合物，其中R4是是苯基甲基、2-甲氧基苯基甲基、3-甲氧基苯基甲基、4-甲氧基苯基甲基、2-氟苯基甲基、2-(三氟甲氧基)苯基甲基、4-(三氟甲氧基)苯基甲基、1-苯基乙基、(S)-1-苯基乙基、(R)-1-苯基乙基、2-苯基乙基、3-(三氟甲基)苯基甲基、4-(三氟甲基)苯基甲基、3-甲基苯基甲基、4-甲基苯基甲基、4-氟苯基甲基、或(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基。
28.权利要求1的化合物，其中R4是任选地被作为R5的杂环基取代的C1-6烷基，所述杂环基任选地被芳基和-ORe取代，其中所述芳基任选地被R7取代，并且Re和R7如式(I)定义。
29.权利要求28的化合物，其中R4是任选地被作为R5的杂环基取代的C1-3烷基。
30.权利要求28或29的化合物，其中该杂环基是包含1或2或3个独立地选自-N＝或＝N-、-NH-、-O-、-S-、-SO-或-SO2-中的杂原子的单环或双环的3元至12元杂环基环。
31.权利要求28或29的化合物，其中该杂环基是包含1或2或3个独立地选自-N＝或＝N-、-NH-、-O-、-S-、-SO-或-SO2-中的杂原子的4元、5元、6元、7元或8元单环杂环基环。
32.权利要求28或29的化合物，其中该杂环基环是氧杂环丁烷基、哌嗪基、四氢呋喃基、吡喃基、或吗啉代，它们各自任选地被羟基取代。
33.权利要求28或29的化合物，其中R4是(3-羟基氧杂环丁-3-基)甲基、氧杂环丁-3-基甲基、2-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基、2-(哌嗪-1-基)乙基、(4-甲基哌嗪-1-基)乙基、(四氢呋喃-2-基)甲基、((S)-四氢呋喃-3-基)甲基、((R)-四氢呋喃-2-基)甲基、((S)-四氢呋喃-2-基)甲基、((R)-四氢呋喃-3-基)甲基、2-(四氢呋喃-3-基)乙基、(四氢-2H-吡喃-3-基)甲基、2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基、(4-羟基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基、(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基、或2-吗啉代乙基。
34.权利要求1的化合物，其中R4是任选地被作为R5的C3-8环烷基取代的C1-6烷基，所述C3-8环烷基任选地被羟基取代。
35.权利要求1的化合物，其中R4是任选地被作为R5的C3-8环烷基取代的C1-3烷基，所述C3-8环烷基任选地被羟基取代。
36.权利要求34或35的化合物，其中所述C3-8环烷基是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、或环辛基。
37.权利要求34或35的化合物，其中所述C3-8环烷基是环丙基、环丁基、或环己基。
38.权利要求34或35的化合物，其中R4是(1-羟基环丙基)甲基、(1-羟基环丁基)甲基、或(1-羟基环己基)甲基。
39.权利要求1的化合物，其中R4是任选地被作为R5的杂芳基取代的C1-6烷基，所述杂芳基任选地被卤素、C1-6烷基、C3-8环烷基、或-ORe取代，其中所述C1-6烷基和C3-8环烷基任选地被羟基取代。
40.权利要求1的化合物，其中R4是任选地被作为R5的杂芳基取代的C1-3烷基，所述杂芳基任选地被卤素、C1-6烷基、C3-8环烷基、或-ORe取代，其中所述C1-6烷基和C3-8环烷基任选地被羟基取代。
41.权利要求39或40的化合物，其中该杂芳基是吡啶基，包括吡啶-2-基、吡啶-3-基或吡啶-4-基，其任选地被羟基环丁基、甲基、甲氧基、或卤素取代。
42.权利要求39或40的化合物，其中R4是吡啶-2-基甲基、吡啶-4-基甲基、吡啶-3-基甲基、(6-(1-羟基环丁基)吡啶-2-基)甲基、(6-甲基吡啶-2-基)甲基、(5-甲基吡啶-2-基)甲基、(4-甲基吡啶-2-基)甲基、(3-甲基吡啶-2-基)甲基、(6-甲氧基吡啶-2-基)甲基、(5-甲氧基吡啶-2-基)甲基、(4-甲氧基吡啶-2-基)甲基、(3-甲氧基吡啶-2-基)甲基、(6-氟吡啶-2-基)甲基、(5-氟吡啶-2-基)甲基、(4-氟吡啶-2-基)甲基、或(3-氟吡啶-2-基)甲基。
43.权利要求1的化合物，其中R4是任选地被作为R5的-ORb或-NRbRc取代的C1-6烷基，其中Rb和Rc独立地是氢、C1-6烷基、或C1-6烷氧基C1-6烷基-。
44.权利要求1的化合物，其中R4是任选地被作为R5的-ORb或-NRbRc取代的C1-3烷基，其中Rb和Rc独立地是氢、C1-6烷基、或C1-6烷氧基C1-6烷基-。
45.权利要求43或44的化合物，其中R4是2-甲氧基乙基、2-(二甲基氨基)乙基、2-(2-甲氧基乙氧基)乙基、2-(甲基氨基)乙基、2-羟丙基、(R)-2-羟丙基、或2-羟乙基。
46.权利要求1的化合物，其中R4是任选地被C1-6烷基、C1-6烷氧基或羟基取代的C3-8环烷基，所述C3-8环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
47.权利要求46的化合物，其中所述C3-8环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
48.权利要求46或47的化合物，其中R4是4位取代的环己基，其中在4位的取代基和附接至在1位的氨基呈(顺式)或(反式)构型。
49.权利要求48的化合物，其中在4位的取代基和附接至在1位的氨基呈(顺式)。
50.权利要求46或47的化合物，其中R4是3位取代的环丁基，其中在3位的取代基和附接至在1位的氨基呈(顺式)或(反式)构型。
51.权利要求50的化合物，其中在3位的取代基和附接至在1位的氨基呈(顺式)构型。
52.权利要求46或47的化合物，其中R4是2-羟基环庚基、3-羟基环庚基、4-羟基环庚基、5-羟基环庚基、环己基、4-羟基-4-甲基环己基、(反式)-4-羟基环己基、(顺式)-4-羟基-4-甲基环己基、(顺式)-4-羟基环己基、(1S,4S)-4-羟基-4-甲基环己基、(1S,4S)-4-羟基环己基、(1S,2R)-2-羟基环己基、(1S,4S)-4-羟基-4-甲基环己基、(1S,2S)-2-羟基环己基、(1R,2S)-2-羟基环己基、(反式)-4-羟基-4-甲基环己基、3-羟基环己基、(1R,3R)-3-羟基环己基、(1S,3R)-3-羟基环己基、(1R,3S)-3-羟基环己基、(1S,3S)-3-羟基环己基、4-氧代环己基、乙酰氧基环己基、环戊基、2-羟基环戊基、3-羟基环戊基、(1S,2R)-2-羟基环戊基、(1S,2S)-2-羟基环戊基、(1R,2S)-2-羟基环戊基、(1R,3R)-3-羟基环戊基、(1S,3S)-3-羟基环戊基、(1S,3R)-3-羟基环戊基、(1R,3S)-3-羟基环戊基、(反式)-3-羟基环丁基、(顺式)-3-羟基环丁基、(顺式)-3-羟基-3-甲基环丁基、1-(羟甲基)环丙基、环丙基、1,2,3,4-四氢萘-1-基、或2,3-二氢-1H-茚-1-基。
53.权利要求1的化合物，其中R4是芳基，该芳基是苯基。
54.权利要求1的化合物，其中R4是杂芳基，该杂芳基是吡啶基。
55.权利要求54的化合物，其中R4是吡啶-3-基、吡啶-4-基、或吡啶-2-基。
56.权利要求1的化合物，其中R4是选自吡喃基、哌啶基、吡咯烷基、四氢呋喃基、苯并二氢吡喃-4-基、或二氢苯并呋喃-3-基中的杂环基，它们各自任选地如式(I)所定义被取代。
57.权利要求56的化合物，其中该杂环基任选地被芳基、氧代基、或羟基取代，其中芳基进一步任选地被-C1-6烷氧基-C1-6烷氧基取代。
58.权利要求56的化合物，其中R4是四氢-2H-吡喃-4-基、(S)-四氢-2H-吡喃-3-基、(R)-四氢-2H-吡喃-3-基、四氢-2H-吡喃-4-基、(R)-苯并二氢吡喃-4-基、(S)-苯并二氢吡喃-4-基、2,3-二氢苯并呋喃-3-基、1-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌啶-4-基、(R)-哌啶-3-基(E652)、(S)-哌啶-3-基、4-羟基哌啶-1-基、哌啶-4-基、(S)-5-氧代吡咯烷-3-基、(S)-2-氧代吡咯烷-3-基、(R)-2-氧代吡咯烷-3-基、4-氧代环己-1-基、(3S,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基、(3S,4S)-4-羟基四氢呋喃-3-基、(3S,4S)-4-羟基四氢呋喃-3-基、或(3R,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基。
59.一种化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐，该化合物选自：
Figure FDA0003465902320000071
Figure FDA0003465902320000081
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Figure FDA0003465902320000151
Figure FDA0003465902320000161
Figure FDA0003465902320000171
Figure FDA0003465902320000181
Figure FDA0003465902320000191
Figure FDA0003465902320000201
Figure FDA0003465902320000211
Figure FDA0003465902320000221
Figure FDA0003465902320000231
Figure FDA0003465902320000241
Figure FDA0003465902320000251
Figure FDA0003465902320000261
Figure FDA0003465902320000271
Figure FDA0003465902320000281
Figure FDA0003465902320000291
Figure FDA0003465902320000301
60.一种药物组合物，其包含权利要求1-59中任一项的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂。
61.权利要求1-59中任一项的化合物或其立体异构体或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
62.式5和13的化合物
Figure FDA0003465902320000311
其中R和R15如权利要求1-58中任一项所定义。
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