CN111607654A - 朱鹮微卫星多态位点及筛选方法、引物对组合及扩增方法 - Google Patents

朱鹮微卫星多态位点及筛选方法、引物对组合及扩增方法 Download PDF

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Abstract

朱鹮微卫星多态位点及筛选方法、引物对组合及扩增方法。本发明涉及朱鹮微卫星多态位点鉴定技术领域，特别是涉及朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，包括：引物对一：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；引物对二：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示等。本发明解决现有技术中朱鹮亲子鉴定的准确度较低的问题。本发明开发一套有效的、用于朱鹮亲子鉴定的引物对组合和朱鹮微卫星多态位点，朱鹮微卫星多态位点对于准确鉴定朱鹮亲缘关系、构建清晰的朱鹮人工种群谱系档案有重要意义，继而优化繁殖策略和改善种群遗传结构也具有重要的意义。

Description

朱鹮微卫星多态位点及筛选方法、引物对组合及扩增方法
技术领域
本发明涉及朱鹮微卫星多态位点鉴定技术领域，特别是涉及朱鹮微卫星多态位点及筛选方法、引物对组合及扩增方法。
背景技术
在动物的人工圈养种群的管理中，为了种群能够健康长期的发展，需要系统构建动物的谱系以避免近交，提高动物种群的遗传多样性和遗传质量。谱系管理的核心是进行亲子鉴定，主要采用的是共显性的微卫星DNA。它是基因组中的串联重复序列，由侧翼序列和核心序列构成，核心序列由2-6个碱基的重复单元组成，而侧翼序列决定了微卫星在基因组的位置。实践中，通过对待测样品的DNA进行多个微卫星位点的长度多态性检测，根据孟德尔定律排除可疑样本，从而确定亲缘关系。
朱鹮是我国一级保护野生动物，人工迁地保护种群采用一对一饲养和多对混养自由配对的模式，当某些个体的环志脱落，常造成谱系档案尤其是新生幼雏资料的不准确。目前，虽然已有10个微卫星位点用于朱鹮亲子鉴定，但是由于朱鹮微卫星DNA普遍存在多态性低的特点，每个位点仅有2-3条等位基因，使得在双亲未知的情况下，累计的亲权识别(亲权鉴定)概率仅有68.4％；亲本一方已知，累计亲权(父权或母权)的识别概率也只有90.1％。此外，实验中发现，某些二碱基重复的位点存在分型困难等问题，易导致基因型的读取错误。这些现存问题均降低了朱鹮亲子鉴定的准确度。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，用于解决现有技术中朱鹮亲子鉴定的准确度较低的问题，同时，本发明还将提供一种朱鹮微卫星多态位点的引物对组合的PCR扩增方法；此外，本发明还将提供一种朱鹮微卫星多态位点和一种朱鹮微卫星多态位点的筛选方法。本发明开发一套有效的、用于朱鹮亲子鉴定的引物对组合和朱鹮微卫星多态位点，朱鹮微卫星多态位点对于准确鉴定朱鹮亲缘关系、构建清晰的朱鹮人工种群谱系档案有重要意义，继而优化繁殖策略和改善种群遗传结构也具有重要的意义。
为实现上述目的及其他相关目的，
本发明的第一方面，提供一种朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，所述引物对组合包括：
引物对一：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
引物对二：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
微卫星位点命名以“物种拉丁文缩写-重复单元碱基数目-筛选实验的位点排列顺序表示，Nini-3-11(引物对五)代表朱鹮的三碱基重复的第11个实验位点。
根据Cervus计算结果，我们得到第一套朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，具体为Nini-5-15(引物对一)、Nini-5-5(引物对二)这两个微卫星位点，用于同胞未知的个体识别鉴定，鉴定概率至少为98.32％。
进一步地，所述引物对组合还包括：
引物对三：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
引物对四：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；
引物对五：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。
根据Cervus计算结果，我们得到第二套朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，具体为Nini-5-15(引物对一)、Nini-5-5(引物对二)、Nini-5-12(引物对三)、Nini-5-11(引物对四)、Nini-3-11(引物对五)这五个微卫星位点，用于亲本配对关系已知的亲子鉴定，鉴定概率至少为98.53％。
进一步地，所述引物对组合还包括：
引物对六：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。
根据Cervus计算结果，我们得到第三套朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，具体为Nini-5-15(引物对一)、Nini-5-5(引物对二)、Nini-5-12(引物对三)、Nini-5-11(引物对四)、Nini-3-11(引物对五)、Nini-4-7(引物对六)这六个微卫星位点，用于同胞已知的个体识别，鉴定概率至少为98.93％。
进一步地，所述引物对组合还包括：
引物对七：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；
引物对八：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.16所示；
引物对九：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示。
根据Cervus计算结果，我们得到第四套朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，具体为Nini-5-15(引物对一)、Nini-5-5(引物对二)、Nini-5-12(引物对三)、Nini-5-11(引物对四)、Nini-3-11(引物对五)、Nini-4-7(引物对六)、Nini-5-14(引物对七)、Nini-4-25(引物对八)、Nini-5-10(引物对九)这九个微卫星位点，用于亲本一方已知的亲子鉴定，鉴定概率至少为98.04％。
进一步地，所述引物对组合还包括：
引物对十：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示；
引物对十一：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示。
根据Cervus计算结果，我们得到第四套朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，具体为Nini-5-15(引物对一)、Nini-5-5(引物对二)、Nini-5-12(引物对三)、Nini-5-11(引物对四)、Nini-3-11(引物对五)、Nini-4-7(引物对六)、Nini-5-14(引物对七)、Nini-4-25(引物对八)、Nini-5-10(引物对九)、Nini-4-34(引物对十)、Nini-6-10(引物对十一)这十一个微卫星位点；当朱鹮亲本双方均未知时，十一个微卫星位点组合的父本或母本的鉴定识别概率至少为90.12％，比已开发的微卫星亲子鉴定体系的鉴定概率提高了21.72％(现有技术中概率仅有68.4％)。
整体而言，朱鹮是高度近交的种群，遗传多样性极低，已开发的微卫星位点的等位基因数目多为两条。本发明所采用的微卫星位点的等位基因数目在3-4个，故使用较少的微卫星位点，即可达到较好的鉴定效果。相比于已开发的微卫星分子标记，本发明所使用的个体识别鉴定、亲本一方已知的亲子鉴定、亲本配对关系已知的亲子鉴定的微卫星位点数目均少于已发表微卫星鉴定体系，且鉴定概率也高于已开发微卫星鉴定体系。根据不同的遗传学问题，有针对的选择相应的微卫星分子标记组合进行个体识别和亲子鉴定，可节约实验成本、时间成本。
本发明的第二方面，提供一种朱鹮微卫星多态位点的引物对组合的PCR扩增方法，包括如下步骤：
S1、配制PCR体系：1.8～2.0体积份数的10x EasyTaq buffer，1.5～1.7体积份数的2.5mM的dNTP，1.1～1.3体积份数的10μmol/L的上述引物对，0.15～0.25体积份数的5U/μL的EasyTaq酶，15.5～16.5体积份数的灭菌超纯水；
S2、PCR扩增：将步骤一所述的PCR体系进行PCR扩增；其中扩增条件为：先在94～96℃预变性4.5～5.5min；再以下列条件进行28～32个循环：94～96℃变性30s，58～62℃退火30s，71～73℃延伸30s；最后在71～73℃总延伸4.5～5.5min。
进一步地，所述S1中20μL的PCR体系为：2μL的10x EasyTaq buffer，1.6μL的2.5mM的dNTP，1.2μL的10μmol/L的引物对，0.2μL的5U/μL的EasyTaq酶，10～20ng的朱鹮DNA，余量为灭菌超纯水；
所述S2中扩增条件为：先在95℃预变性5min；再以下列条件进行30个循环：95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s；最后在72℃总延伸5min。
本发明的第三方面，提供一种朱鹮微卫星多态位点，包括：
所以引物对一对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示；
所以引物对二对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示；
所以引物对三对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示；
所以引物对四对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示；
所以引物对五对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示；
所以引物对六对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.28所示；
所以引物对七对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示；
所以引物对八对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.30所示；
所以引物对九对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示；
所以引物对十对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示；
所以引物对十一对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示。
已开发的微卫星鉴定体系，主要以二碱基重复单元微卫星位点为主，鬼影带滑动常导致将纯合基因型误读成杂合基因型。而本发明中所使用的朱鹮微卫星多态位点是三碱基、四碱基和五碱基重复，分型清晰，易于读取，不会造成由于鬼影带的滑动导致基因型读取错误，进而影响鉴定效果的问题。
本发明的第四方面，提供一种朱鹮微卫星多态位点的筛选方法，包括如下步骤：
步骤一、将朱鹮进行全基因组重测序的个体的基因组和朱鹮参考基因组进行比对，得到具有变异的微卫星位点；
步骤二、将上述微卫星位点进行群体验证，筛选出上述朱鹮微卫星多态位点。
如上所述，本发明的朱鹮微卫星多态位点及筛选方法、引物对组合及扩增方法，具有以下有益效果：
1、本发明所采用的微卫星位点的等位基因数目在3-4个，故使用较少的微卫星位点，即可达到较好的鉴定效果。相比于已开发的微卫星分子标记，本发明所使用的个体识别鉴定、亲本一方已知的亲子鉴定、亲本配对关系已知的亲子鉴定的微卫星位点数目均少于已发表微卫星鉴定体系，且鉴定概率也高于已开发微卫星鉴定体系。根据不同的遗传学问题，有针对的选择相应的微卫星分子标记组合进行个体识别和亲子鉴定，可节约实验成本、时间成本。
2、本发明中所使用的朱鹮微卫星多态位点是三碱基、四碱基和五碱基重复，分型清晰，易于读取，不会造成由于鬼影带的滑动导致基因型读取错误，进而影响鉴定效果的问题。
3、本发明开发的朱鹮微卫星多态位点扩增稳定，分型清晰。相比于现有技术，本发明的朱鹮亲子鉴定概率得到了提升，也提供了针对不同遗传学问题的相应的微卫星分子标记组合(最少位点的组合)，节约实验成本、时间成本和劳动成本。
4、本发明的朱鹮微卫星多态位点可广泛应用于国内外各个朱鹮繁育种群的亲缘鉴定、谱系管理，也可用于野外朱鹮的个体识别、种群的动态调查、种群多样性等研究中。
附图说明
图1为在Nini-5-15(对应引物对一)的等位基因分型电泳图。
图2为在Nini-5-5(对应引物对二)的等位基因分型电泳图。
图3为在Nini-5-12(对应引物对三)的等位基因分型电泳图。
图4为在Nini-5-11(对应引物对四)的等位基因分型电泳图。
图5为在Nini-3-11(对应引物对五)的等位基因分型电泳图。
图6为在Nini-4-7(对应引物对六)的等位基因分型电泳图。
图7为在Nini-5-14(对应引物对七)的等位基因分型电泳图。
图8为在Nini-4-25(对应引物对八)的等位基因分型电泳图。
图9为在Nini-5-10(对应引物对九)的等位基因分型电泳图。
图10为在Nini-4-34(对应引物对十)的等位基因分型电泳图。
图11为在Nini-6-10(对应引物对十一)的等位基因分型电泳图。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
1、多态微卫星标记的获取(朱鹮微卫星多态位点的筛选方法)
步骤一、从朱鹮参考基因组(Genbank:GCF_000708225.1)中找出所有的微卫星位点，将朱鹮进行全基因组重测序的个体(SRX1533754)的基因组和朱鹮参考基因组进行比对，找出具有变异的微卫星位点。
步骤二、微卫星位点可能在不同种群的扩增效率不同，为了验证分子标记扩增的稳定性，随机选择来自陕西楼观台、河南董寨、浙江下渚湖的32个朱鹮样品进行了群体验证，筛选出三碱基到六碱基重复的扩增稳定、分型清晰、群体多态的微卫星位点。
2、上述筛选出来的朱鹮微卫星多态位点具体如下：
所以引物对一对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示；
所以引物对二对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示；
所以引物对三对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示；
所以引物对四对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示；
所以引物对五对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示；
所以引物对六对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.28所示；
所以引物对七对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示；
所以引物对八对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.30所示；
所以引物对九对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示；
所以引物对十对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示；
所以引物对十一对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示。
上述十一个朱鹮微卫星多态位点的位置如表格1所示：
表格1
Figure BDA0002526497580000061
Figure BDA0002526497580000071
3、上述微卫星位点对应的引物对具体如下：
Nini-5-15(引物对一)：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
Nini-5-5(引物对二)：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
Nini-5-12(引物对三)：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
Nini-5-11(引物对四)：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；
Nini-3-11(引物对五)：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；
Nini-4-7(引物对六)：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；
Nini-5-14(引物对七)：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；
Nini-4-25(引物对八)：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；
Nini-5-10(引物对九)：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；
Nini-4-34(引物对十)：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示；
Nini-6-10(引物对十一)：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示。
4、PCR扩增
PCR体系为：
2μL含10x EasyTaq buffer(含Mg2+)；
1.6μL 2.5mM的dNTP(脱氧核糖核苷三磷酸)；
上述引物对组合的上下游(浓度均为10μmol/L)各加0.6μL；
0.2μL 5U/μL的EasyTaq酶；
10ng的DNA(朱鹮DNA)；
补加灭菌超纯水至体系为20μL。
上述试剂购自北京全式金生物技术有限公司。引物对组合中的各引物对由上海生工生物工程(上海)股份有限公司合成，引物上游的5’端加入荧光标记TARMR、FAM或HEX的一种。上述朱鹮DNA是按照Axygen血液基因组提取试剂盒说明书对32只朱鹮的血棉样品进行基因组DNA提取，-20℃保存备用。
扩增条件：先在95℃预变性5min；再以下列条件进行30个循环：95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s；最后在72℃总延伸5min。退火温度可以上下浮动2℃。
上述十一个引物对对应的重复单元类型和退火温度具体如表格2所示：
表格2
基因位点 重复单元类型 退火温度/℃ 荧光标记
Nini-5-15(引物对一) TAGAA 59.5 TAMRA
Nini-5-5(引物对二) TATTC 60.0 TAMRA
Nini-5-12(引物对三) TAGAA 60.5 TAMRA
Nini-5-11(引物对四) TTCTT 58.0 TAMRA
Nini-3-11(引物对五) ATT 60.0 FAM
Nini-4-7(引物对六) AAAC 60.0 HEX
Nini-5-14(引物对七) TATTC 60.0 FAM
Nini-4-25(引物对八) ATGG 59.0 FAM
Nini-5-10(引物对九) CTATC 60.0 TAMRA
Nini-4-34(引物对十) AAAT 59.0 FAM
Nini-6-10(引物对十一) AAAAAC 60.5 FAM
基因分型：上述PCR产物送往上海生工生物工程(上海)股份有限公司，在3730基因测序仪上进行长度检测，统计所有微卫星位点的等位基因的长度。用11个微卫星位点对河南、陕西、浙江3个来源地共32只朱鹮检测，共检出37条等位基因，每个位点的等位基因数目为3～4。具体地，十一个微卫星位点的等位基因信息如表格3所示：表格3
Figure BDA0002526497580000091
5、亲子鉴定和个体识别的最少微卫星组合：利用Cervus 3.0.3计算每组微卫星组合的个体识别鉴定概率、同胞已知的个体识别鉴定概率、父本或母本的鉴定概率、父母对的鉴定概率以及每个位点的PIC(多态性信息含量)。微卫星位点数目越多，个体识别概率和亲权的鉴定概率越高，实验成本也越高。为了寻找个体识别和亲子鉴定最佳的微卫星位点的数目，我们按照多态性指数(PIC)由高到低对11个微卫星分子标记进行排序，并由前两个位点、前三个位点、前四个位点依次组合微卫星位点，进行个体识别概率和亲子鉴定概率的计算，得到鉴定概率在98％以上的最少的微卫星位点组合。具体地，用于个体识别、亲子鉴定的微卫星位点组合如表格4所示：
表格4
Figure BDA0002526497580000101
Figure BDA0002526497580000111
6、结果与分析：
1、筛选出的11个多态性微卫星位点在陕西楼观台、河南董寨、浙江下渚湖的32个朱鹮样本均扩增成功，分型峰图清晰易读(图1-图11)。已开发的微卫星鉴定体系，主要以二碱基重复单元微卫星位点为主，鬼影带滑动常导致将纯合基因型误读成杂合基因型。而本文中所使用的微卫星分子标记是三碱基、四碱基和五碱基重复，分型清晰，易于读取(图1-图11)，不会造成由于鬼影带的滑动导致基因型读取错误，进而影响鉴定效果的问题。
其中，图1为三只朱鹮在Nini-5-15位点上等位基因分型电泳图，分别代表陕西楼观台、河南董寨、浙江下渚湖，图中(a)为陕西楼观台、(b)为河南董寨、(c)为浙江下渚湖。
图2为三只朱鹮个体在Nini-5-5位点上等位基因分型电泳图，朱鹮分别来自(a)为陕西楼观台、(b)为河南董寨、(c)为浙江下渚湖。
图3为三只朱鹮在Nini-5-12位点等位基因分型电泳图，朱鹮分别来自(a)为陕西楼观台、(b)为河南董寨、(c)为浙江下渚湖。
图4为三只朱鹮在Nini-5-11位点等位基因分型电泳图，朱鹮分别来自(a)为陕西楼观台、(b)为河南董寨、(c)为浙江下渚湖。
图5为三只朱鹮在Nini-3-11位点等位基因分型电泳图，朱鹮分别来自(a)为陕西楼观台、(b)为河南董寨、(c)为浙江下渚湖。
图6为三只朱鹮在Nini-4-7位点等位基因分型电泳图，朱鹮分别来自(a)为陕西楼观台、(b)为河南董寨、(c)为浙江下渚湖。
图7为三只朱鹮在Nini-5-14位点等位基因分型电泳图，朱鹮分别来自(a)为陕西楼观台、(b)为河南董寨、(c)为浙江下渚湖。
图8为三只朱鹮在Nini-4-25位点等位基因分型电泳图，朱鹮分别来自(a)为陕西楼观台、(b)为河南董寨、(c)为浙江下渚湖。
图9为三只朱鹮在Nini-5-10位点等位基因分型电泳图，朱鹮分别来自(a)为陕西楼观台、(b)为河南董寨、(c)为浙江下渚湖。
图10为三只朱鹮在Nini-4-34位点等位基因分型电泳图，朱鹮分别来自(a)为陕西楼观台、(b)为河南董寨、(c)为浙江下渚湖。
图11为三只朱鹮在Nini-6-10位点等位基因分型电泳图，朱鹮分别来自(a)为陕西楼观台、(b)为河南董寨、(c)为浙江下渚湖。
2、根据Cervus计算结果，我们得到五套分别用于同胞未知的个体识别、同胞已知的个体识别、亲本一方已知的亲子鉴定、亲本配对关系已知的亲子鉴定、用于朱鹮亲本双方均未知的亲子鉴定，使相应鉴定概率达到98％以上的最小微卫星组合(表4)。尤其是第五套组合，当朱鹮亲本双方均未知时，11个联合微卫星位点的父本或母本的鉴定识别概率为90.12％，比已开发的微卫星亲子鉴定体系的鉴定概率提高了21.72％。根据不同的遗传学问题，有针对的选择相应的微卫星分子标记组合进行个体识别和亲子鉴定，可节约实验成本、时间成本。
综上所述，本发明开发一套有效的、用于朱鹮亲子鉴定的引物对组合和朱鹮微卫星多态位点，朱鹮微卫星多态位点对于准确鉴定朱鹮亲缘关系、构建清晰的朱鹮人工种群谱系档案有重要意义，继而优化繁殖策略和改善种群遗传结构也具有重要的意义。所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
SEQUENCE LISTING
<110> 四川省自然资源科学研究院，峨眉山生物资源实验站
<120> 朱鹮微卫星多态位点及筛选方法、引物对组合及扩增方法
<130> 2020
<160> 33
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gccccttagc tagctttgga 20
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gcaactaacc cactgcatgt g 21
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ggcagttgta ggtcccttcc 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ccaccgtctc tctgcagttt 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ccctgcagtt gctgaatgga 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
aactggtcag gcagttggac 20
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
ccaaacagac tgagtacctg gg 22
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
acctggctct gtaaagtgtg a 21
<210> 9
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
tcatccaagg tgcttttcct ca 22
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
cggcagtcct gatctgtgaa 20
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
gccttgatag cttttgtgtc ca 22
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
acacacactc acacaaggaa 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
tgaaggacct tcccatccca 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
ccatttctga ccagccgact 20
<210> 15
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
tgagcaggtt tgtacgctga 20
<210> 16
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
cacccacaac cctctgagtc 20
<210> 17
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
tggtaggtcc cttccaactg a 21
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
tgcctgtcca gggaactatt g 21
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
tggggcaatt cagagatgct 20
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
tgtgctagca ccaggtcttg 20
<210> 21
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
agttcagtca acggcagttc a 21
<210> 22
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
cagcagagca ttactaagct gt 22
<210> 23
<211> 277
<212> DNA
<213> 朱鹮(Nipponia nippon)
<400> 23
gccccttagc tagctttgga cacctgtact gtagatttct acctccaaac tgtcctcttc 60
acacactcct ttaggtcagt atcatctgac ctagtttaaa tagctgcttt atgcagaggt 120
gactgtagaa gtgcctcttt cattccctta aatgtagaat agaatagaat agaatagaat 180
agaatagaat agaatagaat agaatagaat gagtatttca gttggaaggc acctacaaag 240
atcatctagc aaagaacaca tgcagtgggt tagttgc 277
<210> 24
<211> 157
<212> DNA
<213> 朱鹮(Nipponia nippon)
<400> 24
ggcagttgta ggtcccttcc aactgaaatt atcgttatcg tattctattc tattctattc 60
tattctattc tattctattc tattctattc tattctattc ttttctggca cattttctga 120
agtttaagga tgtctgaaaa ctgcagagag acggtgg 157
<210> 25
<211> 168
<212> DNA
<213> 朱鹮(Nipponia nippon)
<400> 25
ccctgcagtt gctgaatgga agttagaata gaatagaata gaatagaata gaatagaata 60
gaatagaata gaatagaata gaatagaaca gaacagaaca gaacagaata gattatttca 120
gttggaagcg acctacaacg atcatctagt ccaactgcct gaccagtt 168
<210> 26
<211> 263
<212> DNA
<213> 朱鹮(Nipponia nippon)
<400> 26
ccaaacagac tgagtacctg ggttttcttg agtaatctat ttgaagaaaa ggaacacaaa 60
acctcctcat ttttctttga cacactggat catgtgtgat aaatgaaaag gcctggtttt 120
tcttttcttc ttttcttttc ttttcttttc ttttcttttc ttttcttttc ttttcttttc 180
ttttcttttc ttttcttttc ttttttcttt tcttttctct tgctataaat tcattacttg 240
tgtcacactt tacagagcca ggt 263
<210> 27
<211> 266
<212> DNA
<213> 朱鹮(Nipponia nippon)
<400> 27
tcatccaagg tgcttttcct caaaagactt gattacaaag tatgcataaa atggttgcag 60
atatttttaa gattagtatt agcattatta ttattattat tattagtttt attcaggata 120
tttgaaagac taatgcagtg caaaatgaga ctcctcatcc caccatcaat ttaggtttca 180
caaaataaga tttttcccca aaatatttct gtagataata ttaatgcatg ccatcatctt 240
tgtattttca cagatcagga ctgccg 266
<210> 28
<211> 174
<212> DNA
<213> 朱鹮(Nipponia nippon)
<400> 28
gccttgatag cttttgtgtc catcttaaaa acaaacaaac aaacaaacaa acaaacaaac 60
aaaccaaaaa acaaataaac aaaccaacaa aacaaaaaaa caacctcatt taaggtaaga 120
tttttagatc atcctaataa tttcatcata acatttcctt gtgtgagtgt gtgt 174
<210> 29
<211> 280
<212> DNA
<213> 朱鹮(Nipponia nippon)
<400> 29
tgaaggacct tcccatccca cccagcatgt gctgcagccc catgaccctg tgtggccagc 60
ctggaagtgg tcaggcaggt ggactagatg attgttgtag gttccttcca actaaagtat 120
tttattctat tctattctat tctattctat tctattctat tctattctat tctattctgt 180
tctgttaaca tttatcatcc tgatgcagag caacagtgca tgcatgtaat gggatgtgca 240
ggtgtggagc ctgctgtgcg agtcggctgg tcagaaatgg 280
<210> 30
<211> 203
<212> DNA
<213> 朱鹮(Nipponia nippon)
<400> 30
tgagcaggtt tgtacgctga tgttcctttc tatgttacat cagtacggga gaaaaagctt 60
tttaaaagaa ggaggctaac aagtgtccaa attaggacat taaggcatgg atggatggat 120
ggatggatgg atggagatgg atggatggat gaccaggtgg ataccatccc agctgggtga 180
tgggactcag agggttgtgg gtg 203
<210> 31
<211> 262
<212> DNA
<213> 朱鹮(Nipponia nippon)
<400> 31
tggtaggtcc cttccaactg aattattctg ttctattcta gtctagtcta gtctagtcta 60
tcctatccta tcctatccta tcctatctta tcctatccta ttctattcta tcctatccta 120
tcctattcta tcctattcta ttctattcta ttttattcta ttctattcta atgtaatatt 180
tagaaaatgc tggggattcc ttattagatt ttgttctgcc tttgcagaat ctcattgacc 240
tcaatagttc cctggacagg ca 262
<210> 32
<211> 219
<212> DNA
<213> 朱鹮(Nipponia nippon)
<400> 32
tggggcaatt cagagatgct aatgtaaaat aaataaataa ataaataaat aaacaaaccc 60
ccaagtaatg tgtgcatcac atctcctttc ctcagttcct ttgtattgcc tctggctgag 120
gcccacccag aagagcctaa gtattggtta atgtctcatt tctgaaaata ggatatatta 180
caagtaggtt tcccttctgc aagacctggt gctagcaca 219
<210> 33
<211> 211
<212> DNA
<213> 朱鹮(Nipponia nippon)
<400> 33
agttcagtca acggcagttc atttcttaca gtctcccact gttgtaaagc atgcaatcgt 60
attagtatag catcactccc taaggaaaaa acaaaaacaa aaacaaaaac aaaaacaaaa 120
acaaacttca taggtagaca ttgataaaaa ggagaaatag tgtattgtaa taattagtat 180
tttcattgta cagcttagta atgctctgct g 211

Claims (9)

1.一种朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合包括：
引物对一：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.2所示；
引物对二：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.4所示。
2.根据权利要求1所述的一种朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合还包括：
引物对三：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.6所示；
引物对四：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.8所示；
引物对五：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.10所示。
3.根据权利要求2所述的一种朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合还包括：
引物对六：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.12所示。
4.根据权利要求3所述的一种朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合还包括：
引物对七：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.14所示；
引物对八：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.16所示；
引物对九：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.18所示。
5.根据权利要求4所述的一种朱鹮微卫星多态位点的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合还包括：
引物对十：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO.20所示；
引物对十一：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示。
6.一种朱鹮微卫星多态位点的引物对组合的PCR扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、配制PCR体系：1.8~2.0体积份数的10 x EasyTaq buffer ，1.5~1.7体积份数 的2.5mM的dNTP，1.1~1.3体积份数的10μmol/L的如权利要求1~5任一项所述的引物对，0.15~0.25体积份数 的5U/μL的EasyTaq酶， 15.5~16.5体积份数的灭菌超纯水；
S2、PCR扩增：将步骤一所述的PCR体系进行PCR扩增；其中扩增条件为：先在94~95℃预变性3~5min；再以下列条件进行28~32个循环：94~95℃变性30s，58~62℃退火30s，71~73℃延伸30s；最后在71~73℃总延伸4.5~5.5min。
7.根据权利要求6所述的一种朱鹮微卫星多态位点的引物对组合的PCR扩增方法，其特征在于：
所述S1中20μL 的PCR体系为：2μL的10 x EasyTaq buffer ，1.6μL的2.5mM的dNTP，1.2μL的10μmol/L的如权利要求1~5任一项所述的引物对，0.2μL的5U/μL的EasyTaq酶，10~20ng的朱鹮DNA，余量为灭菌超纯水；
所述S2中扩增条件为：先在95℃预变性5min；再以下列条件进行30个循环：95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s；最后在72℃总延伸5min。
8.一种朱鹮微卫星多态位点，其特征在于，包括：
所以引物对一对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示；
所以引物对二对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示；
所以引物对三对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示；
所以引物对四对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示；
所以引物对五对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示；
所以引物对六对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.28所示；
所以引物对七对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示；
所以引物对八对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.30所示；
所以引物对九对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示；
所以引物对十对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示；
所以引物对十一对应的微卫星位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示。
9.一种朱鹮微卫星多态位点的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、将朱鹮进行全基因组重测序的个体的基因组和朱鹮参考基因组进行比对，得到具有变异的微卫星位点；
步骤二、将上述微卫星位点进行群体验证，筛选出如权利要求8所述的朱鹮微卫星多态位点。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112980971A (zh) * 2021-04-20 2021-06-18 成都大熊猫繁育研究基地 绿尾虹雉同舍鸟蛋亲缘关系鉴定的微卫星引物组合及应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101880719A (zh) * 2010-07-16 2010-11-10 中国水产科学研究院黄海水产研究所 大菱鲆亲子鉴定的微卫星多重pcr方法
CN108588239A (zh) * 2018-06-05 2018-09-28 浙江大学 朱鹮微卫星多态位点、鉴定方法及特异引物序列

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101880719A (zh) * 2010-07-16 2010-11-10 中国水产科学研究院黄海水产研究所 大菱鲆亲子鉴定的微卫星多重pcr方法
CN108588239A (zh) * 2018-06-05 2018-09-28 浙江大学 朱鹮微卫星多态位点、鉴定方法及特异引物序列

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HUANG Y等: "Screening and application of microsatellite markers for genetic diversity analysis of oriental white stork (Ciconia boyciana)" *
WANG H等: "Structural characteristics of di-nucleotide/tetra-nucleotide repeat microsatellite DNA in Pachyhynobius shangchengensisgenomes and its effect on isolation" *
何陆平: "鹮多态性微卫星位点的筛选及物种的遗传多样性研究" *
张永德等: "朱鹮随机微卫星扩增多态DNA(RMAPD)研究" *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112980971A (zh) * 2021-04-20 2021-06-18 成都大熊猫繁育研究基地 绿尾虹雉同舍鸟蛋亲缘关系鉴定的微卫星引物组合及应用
CN112980971B (zh) * 2021-04-20 2022-06-07 成都大熊猫繁育研究基地 绿尾虹雉同舍鸟蛋亲缘关系鉴定的微卫星引物组合及应用

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