CN111602810A - 一种益生菌黄皮微胶囊及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种益生菌黄皮微胶囊及其制备方法和应用，由黄皮经益生菌发酵，以发酵液为芯材，脱脂奶粉、海藻糖、甘油、麦芽糊精为冻干保护剂，海藻酸钠、乳清蛋白、壳聚糖为壁材，经两次包被后制备成含活性菌的黄皮微胶囊。本发明将黄皮经过益生菌发酵后，可以降低黄皮果肉的苦涩味和酸味，改善了黄皮的口感，且能够很好的保留黄皮中的有效成分，具有很好的保健效果；同时加入的益生菌也可辅助黄皮进行减肥减脂；本发明制备的微胶囊可直接作为保健食品用温水冲服，也可作为合生元添加剂应用到其他保健食品中。
Description
技术领域
本发明涉及微胶囊技术领域，具体是一种益生菌黄皮微胶囊及其制备方法和应用。
背景技术
黄皮（学名：Clausena lansium （Lour.）Skeels）芸香科，小乔木，花瓣长圆形，花丝线状，果淡黄至暗黄色，果肉乳白色，半透明，种子1-4粒；4-5月开花，7-8月结果。黄皮是中国南方果品之一，含丰富的维生素C、糖、有机酸及果胶，果皮及果核皆可入药，有消食化痰、理气功效，用于食积不化、胸膈满痛、痰饮咳喘等症，并可解郁热，理疝痛；叶性味辛凉，有疏风解表，除痰行气功效，用于防治流行性感冒、温病身热、咳嗽哮喘、水胀腹痛、疟疾、小便不利、热毒疥癞等症；根可治气痛及疝痛。黄皮的果实成熟后除可以生吃外，还可以加工制成果酱、蜜饯、饮料和糖果，具有生津止渴、消食健胃的功效。现代药理学研究也发现了其中的有效成分黄皮酰胺具有抗衰老、保肝解毒和促智的作用。
微胶囊是指一种具有聚合物壁的微型容器或包装物。微胶囊技术（Microencapsulation）是将固体、液体或气体包埋、封存在一种微型胶囊内成为一种固体微粒产品的技术。具体来说是指将某一目的物（芯或内相）用各种天然的或合成的高分子化合物连续薄膜（壁或外相）完全包覆起来，而对目的物的原有化学性质丝毫无损，然后逐渐地通过某些外部刺激或缓释作用使目的物的功能再次在外部呈现出来，或者依靠囊壁的屏蔽作用起到保护芯材的作用，微胶囊的直径一般为1～500μm，壁的厚度为0.5～150μm。微胶囊能够提高产品的稳定性，防止各种组分之间的相互干扰。
公开文献也报道了一些关于微胶囊的制备方法，例如：
1、中国专利：一种乳酸菌微胶囊的制备方法；申请号：201711288401.1；申请人：河南科技大学；摘要：本发明涉及一种乳酸菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤：一、利用乳酸菌和益生元制得合生元溶液；二、将海藻酸钠和果胶溶解于蒸馏水中，并在室温下搅拌得到粘稠状混合溶液，然后将CaCO3 粉末均匀地分散在混合溶液中得到微胶囊壁材，将微胶囊壁材与合生元溶液混合均匀，得到菌胶混合液；三、制备微胶囊。本发明制备得到的乳酸菌微胶囊既可以耐受胃酸和胆盐的作用从而在肠道更好地定植，发挥免疫调节、改善消化、抗肿瘤抗突变、调节酸碱平衡等诸多乳酸菌的益生作用，同时又使制备的微胶囊颗粒均匀且粒径在100μm左右。
2、中国专利：一种甘露寡糖合生元肠溶微胶囊的制备方法；申请号：201510430255.6；申请人：江南大学；摘要：一种肠靶向的合生元产品，其含有低聚甘露糖和乳杆菌，所述甘露低聚糖组合物通过魔芋甘露聚糖酶解获得，通过精制后单糖含量低于5%，2～7 糖含量高于 90%，益生菌的活菌数不低于2.5×1011 CFU/g。在制备工艺上经过双重保护，保证了合生元的稳定性，提高了合生元的益生效果，具有改善肠道菌群失衡，调节肠道微生态的效果。是一种绿色环保的微生态制剂。
目前还未见有关于黄皮与益生菌制备微胶囊的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种益生菌黄皮微胶囊及其制备方法，由黄皮经益生菌发酵，经两次包被后制备成含活性菌的黄皮微胶囊，降低黄皮果肉的苦涩味和酸味，改善黄皮的口感，保留黄皮中的有效成分，使其具有很好的保健效果。
本发明通过以下技术方案实现：
一种益生菌黄皮微胶囊，是以黄皮为原料，经益生菌发酵，以发酵液为芯材，脱脂奶粉、海藻糖、甘油、麦芽糊精为冻干保护剂，海藻酸钠、乳清蛋白、壳聚糖为壁材，经两次包被后制备成含活性菌的黄皮微胶囊。
具体地，所述的益生菌为嗜粘蛋白阿克曼菌及植物乳杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌中的一种或几种。
具体地，所述的冻干保护剂中各成分的质量浓度分别为：脱脂奶粉8～15％，海藻糖4～8％，甘油3～5％，麦芽糊精6～10％。
具体地，所述壁材中各成分的的质量浓度分别为：海藻酸钠2～4％，乳清蛋白2～4％，壳聚糖1～3％。
上述益生菌黄皮微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
（1）原料处理
选择七、八成熟以上，无腐烂、无病虫害的新鲜黄皮果，去核，以果皮肉∶水=1∶1～1：3的料液比打浆，根据需要用柠檬酸或碳酸氢钠调果浆pH 6.5，100℃灭菌15～20 min，冷却至42℃以下备用；
（2）发酵
取益生菌菌种，按3～8％的接种量接种至步骤（1）的果浆中，30～42℃发酵培养2～3d，得发酵液；
（3）芯材制备
发酵液于4℃、3500～4500 r/min条件下离心15～20min，得发酵上清和发酵菌泥，发酵上清经喷雾干燥制得发酵上清粉末，再与发酵菌泥混合即为发酵芯材；
（4）制备微胶囊
向发酵芯材中按比例加入冻干保护剂，混合均匀，再加入到预先制备好的海藻酸钠与乳清蛋白复合壁材溶液中，搅拌均匀制得菌悬液，菌悬液用喷雾器缓慢喷入CaCl2溶液中固化，用无菌水洗涤，过滤，得到一次包被微胶囊；一次包被微胶囊再加入到一定浓度的壳聚糖溶液中进行成膜反应固定化，过滤洗涤后冷冻干燥即得到二次包被微胶囊。
进一步地，步骤（2）所述的发酵方法具体为：首先将冻存于-80℃甘油保存的嗜粘蛋白阿克曼菌按4％的接菌量接种于添加0.5～1.5％桑叶肽或火麻肽的培养基中，37℃厌氧培养60～72 h活化两代，将活化后的嗜粘蛋白阿克曼菌联合植物乳杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌中的一种或几种按3～8％的接种量接种至步骤（1）得到的果浆中，再加入嗜粘蛋白阿克曼菌益生因子、0.5～1.5％桑叶肽或火麻肽、1～5g/L的苏氨酸、0.2～0.3％的乳果糖，于30～42℃条件下密闭发酵培养2～3 d。
步骤（3）中喷雾干燥条件为：进口温度130～150℃、出风温度70～90℃、进样量20～30 mL/min，高压泵压力12～15MPa。
步骤（4）所述的一次包被微胶囊制备条件为：采用喷雾冷凝法，向发酵芯材中按比例加入冻干保护剂，混合均匀，再加入到预先制备好的海藻酸钠与乳清蛋白复合壁材溶液中，搅拌均匀制得菌悬液，菌悬液用喷雾器缓慢喷入质量分数为2～4% CaCl2溶液中固化1～2h，用无菌水洗涤，过滤，得一次包被微胶囊。
步骤（4）所述的二次包被微胶囊制备条件为：所得一次包被微胶囊加入到预设浓度的壳聚糖溶液中，缓慢搅拌20～40min，无菌水洗涤，过滤，冷冻干燥后得到二次包被微胶囊，冷冻干燥的预冻初始温度为-30～-40℃，预冻速率0.4～0.8℃/min，预冻终点温度-60℃，干燥室压力60～80pa，加热板温度30～40℃，干燥时间为16～20 h。
如上所述的益生菌黄皮微胶囊，在合生元添加剂或保健食品中的应用，可直接作为调节肠道菌群的保健食品用温水冲服，也可作为合生元添加剂应用到其他保健食品中。
嗜粘蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila）是一种人类肠道的正常菌群，被认为在预防和/或治疗代谢病症，例如与肥胖相关的病症中起重要作用。许多证据表明嗜粘蛋白阿克曼菌与肥胖,糖尿病,心血管疾病和低度炎症呈负相关。嗜粘蛋白阿克曼菌不仅可以保护肠道上皮细胞及黏液层的完整性发挥代谢保护作用，在炎症反应过程中嗜粘蛋白阿克曼菌也能通过调节T细胞，内源性大麻素系统以及非经典Toll样受体发挥抗炎作用。
植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）是乳酸菌的一种，圆端直杆菌，厌氧或兼性厌氧，菌种为直或弯的杆状，单个、有时成对或成链状，属于同型发酵乳酸菌。植物乳杆菌能大量的产酸，使水中的pH值稳定不升高，而且其产出的酸性物质能降解重金属；能发酵戊糖或葡萄糖酸盐，终产物中85%以上是乳酸；在繁殖过程中能产出特有的乳酸杆菌素，乳酸杆菌素是一种生物型的防腐剂，具有一定的防腐作用。植物乳杆菌作为益生菌，对人类健康有着重要的促进作用，如调节胃肠道生态平衡、增强免疫力、缓解乳糖不耐症、促进营养物质吸收、降低血清胆固醇含量、预防心血管疾病和抑制肿瘤前体物质形成等功能。虽然植物乳杆菌的功效已经得到不少专家证实，但却难以有足够数量的活菌到达肠道而发挥作用，其主要原因是植物乳杆菌到达胃肠道消化系统后，受到胃酸、胆汁和其他一些消化酶等的影响而丧失活性。
双歧杆菌（Bifidobacterium）是一种革兰氏阳性、不运动、细胞呈杆状、一端有时呈分叉状、严格厌氧的细菌属。双歧杆菌是一种重要的肠道有益微生物。双歧杆菌作为一种生理性有益菌，对人体健康具有生物屏障、营养作用、抗肿瘤作用、免疫增强作用、改善胃肠道功能、抗衰老等多种重要的生理功能。在正常情况下，人体内的肠道微生物形成了一个相对平衡的状态。一旦平衡受到破坏，如服用抗生素、放疗、化疗、情绪压抑、身体衰弱、缺乏免疫力等，就会导致肠道菌群失去平衡，某些肠道微生物如产气荚膜梭菌等在肠道中过度增殖并产生氨、胺类、硫化氢、粪臭素、吲哚、亚硝酸盐、细菌毒素等有害物质，从而进一步影响机体的健康。 双歧杆菌和植物乳杆菌等有益细菌则能抑制人体有害细菌的生长，抵抗病原菌的感染，合成人体需要的维生素，促进人体对矿物质的吸收，产生醋酸、丙酸、丁酸和乳酸等有机酸刺激肠道蠕动，促进排便，防止便秘以及抑制肠道腐败作用、净化肠道环境、分解致癌物质、刺激人体免疫系统，从而提高抗病能力等方面有着重要作用。
鼠李糖乳杆菌( Lactobacillus rhamnosus)多存在于人和动物的肠道内，属于乳杆菌属，鼠李糖亚种，是厌氧耐酸、不产芽孢的一种革兰氏阳性益生菌。鼠李糖乳杆菌是一种无毒、无副作用的益生菌，其功能特性主要有调节肠道菌群、预防和治疗腹泻，促进毒素排出和提升机体免疫力，具有较高的应用价值，符合现代人类健康保健的基本需求。
本发明的有益效果：
1、本发明将原料黄皮经过益生菌发酵后，可以降低黄皮果肉的苦涩味和酸味，改善了黄皮的口感，且能够很好的保留黄皮中的有效成分，具有很好的保健效果；同时加入的益生菌也可辅助黄皮进行减肥减脂等。
2、本发明采用两次包被微胶囊技术可有效保护芯材内的益生菌，提高了益生菌的稳定性、耐贮藏、耐加工性，延长其存活时间，还具有一定的缓释效果。
3、本发明采用的益生菌菌种中除了采用传统的乳酸菌外，更加入了嗜粘蛋白阿克曼菌，嗜粘蛋白阿克曼菌在调节肥胖、糖尿病、肝脏疾病、心血管疾病等代谢类疾病中发挥着重要作用。
4、本发明制备的微胶囊可直接作为保健食品用温水冲服，也可作为合生元添加剂应用到其他保健食品中。
5、本发明的主要原料为黄皮，其来源广泛，价格低廉，收获季节可进行大批量的生产，既能解决黄皮容易腐烂不易保藏的问题，还能扩宽其用途，有利于黄皮产业的发展。
具体实施方式
为了使本发明的技术方案和优点更加清楚，下面结合本发明的实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1
一种益生菌黄皮微胶囊，黄皮经益生菌发酵，以发酵液为芯材，脱脂奶粉、海藻糖、甘油、麦芽糊精为冻干保护剂，海藻酸钠、乳清蛋白、壳聚糖为壁材，经两次包被后制备成含活性菌的黄皮微胶囊。
所述的益生菌为嗜粘蛋白阿克曼菌及植物乳杆菌。
所述的冻干保护剂中各成分的质量浓度分别为：脱脂奶粉8％，海藻糖6％，甘油4％，麦芽糊精10％。
所述壁材中各成分的的质量浓度分别为：海藻酸钠2％，乳清蛋白4％，壳聚糖2％。
上述益生菌黄皮微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
（1）原料处理
选择七、八成熟以上，无腐烂、无病虫害的新鲜黄皮果，去核，以果皮肉∶水=1∶1的料液比打浆，根据需要用柠檬酸或碳酸氢钠调果浆pH 6.5，100℃灭菌15 min，冷却至42℃备用。
（2）发酵
首先将冻存于-80℃甘油保存的嗜粘蛋白阿克曼菌按4％的接菌量接种于添加0.5％桑叶肽的培养基中，37℃厌氧培养60h活化两代，将活化后的嗜粘蛋白阿克曼菌联合植物乳杆菌（1:1）按3％的接种量接种至步骤（1）得到的果浆中，再加入嗜粘蛋白阿克曼菌益生因子、0.5％桑叶肽、1g/L的苏氨酸、0.2％的乳果糖，于35℃条件下密闭发酵培养2d。
（3）芯材制备
发酵液于4℃、3500r/min条件下离心20 min，得发酵上清和发酵菌泥，发酵上清经喷雾干燥制得发酵上清粉末，再与发酵菌泥混合即为发酵芯材；
所述喷雾干燥条件为：进口温度130℃、出风温度70℃、进样量20mL/min，高压泵压力12MPa。
（4）制备微胶囊
向发酵芯材中按比例加入冻干保护剂，混合均匀，再加入到预先制备好的海藻酸钠与乳清蛋白复合壁材溶液中，搅拌均匀制得菌悬液，菌悬液用喷雾器缓慢喷入CaCl2溶液中固化，用无菌水洗涤，过滤，得到一次包被微胶囊；一次包被微胶囊再加入到一定浓度的壳聚糖溶液中进行成膜反应固定化，过滤洗涤后冷冻干燥即得到二次包被微胶囊。
所述的一次包被微胶囊制备条件为：采用喷雾冷凝法，向发酵芯材中按比例加入冻干保护剂，混合均匀，再加入到预先制备好的海藻酸钠与乳清蛋白复合壁材溶液中，搅拌均匀制得菌悬液，菌悬液用喷雾器缓慢喷入质量分数为2% CaCl2溶液中固化2 h，用无菌水洗涤，过滤，得一次包被微胶囊。
所述的二次包被微胶囊制备条件为：所得一次包被微胶囊加入到预设浓度的壳聚糖溶液中，缓慢搅拌30 min，无菌水洗涤，过滤，冷冻干燥后得到二次包被微胶囊，冷冻干燥的预冻初始温度为-35℃，预冻速率0.6℃/min，预冻终点温度-60℃，干燥室压力70 pa，加热板温度35℃，干燥时间为18 h。
实施例2
一种益生菌黄皮微胶囊，黄皮经益生菌发酵，以发酵液为芯材，脱脂奶粉、海藻糖、甘油、麦芽糊精为冻干保护剂，海藻酸钠、乳清蛋白、壳聚糖为壁材，经两次包被后制备成含活性菌的黄皮微胶囊。
所述的益生菌为嗜粘蛋白阿克曼菌及植物乳杆菌、双歧杆菌。
所述的冻干保护剂中各成分的质量浓度分别为：脱脂奶粉12％，海藻糖4％，甘油3％，麦芽糊精8％。
所述壁材中各成分的的质量浓度分别为：海藻酸钠3％，乳清蛋白2％，壳聚糖1％。
上述益生菌黄皮微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
（1）原料处理
选择七、八成熟以上，无腐烂、无病虫害的新鲜黄皮果，去核，以果皮肉∶水=1∶2的料液比打浆，根据需要用柠檬酸或碳酸氢钠调果浆pH 6.5，100℃灭菌18min，冷却至42℃备用。
（2）发酵
首先将冻存于-80℃甘油保存的嗜粘蛋白阿克曼菌按4％的接菌量接种于添加1.0％桑叶肽的培养基中，37℃厌氧培养68 h活化两代，将活化后的嗜粘蛋白阿克曼菌联合植物乳杆菌、双歧杆菌（1:1:1）按5％的接种量接种至步骤（1）得到的果浆中，再加入嗜粘蛋白阿克曼菌益生因子、0.8％桑叶肽或火麻肽、3g/L的苏氨酸、0.25％的乳果糖，于38℃条件下密闭发酵培养3d。
（3）芯材制备
发酵液于4℃、4000 r/min条件下离心18 min，得发酵上清和发酵菌泥，发酵上清经喷雾干燥制得发酵上清粉末，再与发酵菌泥混合即为发酵芯材；
所述喷雾干燥条件为：进口温度150℃、出风温度90℃、进样量25 mL/min，高压泵压力15MPa。
（4）制备微胶囊
向发酵芯材中按比例加入冻干保护剂，混合均匀，再加入到预先制备好的海藻酸钠与乳清蛋白复合壁材溶液中，搅拌均匀制得菌悬液，菌悬液用喷雾器缓慢喷入CaCl2溶液中固化，用无菌水洗涤，过滤，得到一次包被微胶囊；一次包被微胶囊再加入到一定浓度的壳聚糖溶液中进行成膜反应固定化，过滤洗涤后冷冻干燥即得到二次包被微胶囊。
所述的一次包被微胶囊制备条件为：采用喷雾冷凝法，向发酵芯材中按比例加入冻干保护剂，混合均匀，再加入到预先制备好的海藻酸钠与乳清蛋白复合壁材溶液中，搅拌均匀制得菌悬液，菌悬液用喷雾器缓慢喷入质量分数为3%CaCl2溶液中固化1.5 h，用无菌水洗涤，过滤，得一次包被微胶囊。
所述的二次包被微胶囊制备条件为：所得一次包被微胶囊加入到预设浓度的壳聚糖溶液中，缓慢搅拌40 min，无菌水洗涤，过滤，冷冻干燥后得到二次包被微胶囊，冷冻干燥的预冻初始温度为-40℃，预冻速率0.4℃/min，预冻终点温度-60℃，干燥室压力80 pa，加热板温度40℃，干燥时间为16h。
实施例3
一种益生菌黄皮微胶囊，黄皮经益生菌发酵，以发酵液为芯材，脱脂奶粉、海藻糖、甘油、麦芽糊精为冻干保护剂，海藻酸钠、乳清蛋白、壳聚糖为壁材，经两次包被后制备成含活性菌的黄皮微胶囊。
所述的益生菌为嗜粘蛋白阿克曼菌及植物乳杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌。
所述的冻干保护剂中各成分的质量浓度分别为：脱脂奶粉15％，海藻糖8％，甘油3％，麦芽糊精6％。
所述壁材中各成分的的质量浓度分别为：海藻酸钠4％，乳清蛋白2％，壳聚糖3％。
上述益生菌黄皮微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
（1）原料处理
选择七、八成熟以上，无腐烂、无病虫害的新鲜黄皮果，去核，以果皮肉∶水=1∶3的料液比打浆，根据需要用柠檬酸或碳酸氢钠调果浆pH 6.5，100℃灭菌20 min，冷却至42℃备用。
（2）发酵
首先将冻存于-80℃甘油保存的嗜粘蛋白阿克曼菌按4％的接菌量接种于添加1.5％桑叶肽或火麻肽的培养基中，37℃厌氧培养60～72 h活化两代，将活化后的嗜粘蛋白阿克曼菌联合植物乳杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌（1:1:1:1）按8％的接种量接种至步骤（1）得到的果浆中，再加入嗜粘蛋白阿克曼菌益生因子、1.5％火麻肽、5g/L的苏氨酸、0.3％的乳果糖，于42℃条件下密闭发酵培养2.5d。
（3）芯材制备
发酵液于4℃、4500 r/min条件下离心20 min，得发酵上清和发酵菌泥，发酵上清经喷雾干燥制得发酵上清粉末，再与发酵菌泥混合即为发酵芯材；
所述喷雾干燥条件为：进口温度140℃、出风温度80℃、进样量25 mL/min，高压泵压力13MPa。
（4）制备微胶囊
向发酵芯材中按比例加入冻干保护剂，混合均匀，再加入到预先制备好的海藻酸钠与乳清蛋白复合壁材溶液中，搅拌均匀制得菌悬液，菌悬液用喷雾器缓慢喷入CaCl2溶液中固化，用无菌水洗涤，过滤，得到一次包被微胶囊；一次包被微胶囊再加入到一定浓度的壳聚糖溶液中进行成膜反应固定化，过滤洗涤后冷冻干燥即得到二次包被微胶囊。
所述的一次包被微胶囊制备条件为：采用喷雾冷凝法，向发酵芯材中按比例加入冻干保护剂，混合均匀，再加入到预先制备好的海藻酸钠与乳清蛋白复合壁材溶液中，搅拌均匀制得菌悬液，菌悬液用喷雾器缓慢喷入质量分数为4% CaCl2溶液中固化1h，用无菌水洗涤，过滤，得一次包被微胶囊。
所述的二次包被微胶囊制备条件为：所得一次包被微胶囊加入到预设浓度的壳聚糖溶液中，缓慢搅拌20min，无菌水洗涤，过滤，冷冻干燥后得到二次包被微胶囊，冷冻干燥的预冻初始温度为-30℃，预冻速率0.8℃/min，预冻终点温度-60℃，干燥室压力60pa，加热板温度30℃，干燥时间为20 h。
Claims (10)
1.一种益生菌黄皮微胶囊，其特征在于：黄皮经益生菌发酵，以发酵液为芯材，脱脂奶粉、海藻糖、甘油、麦芽糊精为冻干保护剂，海藻酸钠、乳清蛋白、壳聚糖为壁材，经两次包被后制备成含活性菌的黄皮微胶囊。
2.一种如权利要求1所述益生菌黄皮微胶囊的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）原料处理
选择七、八成熟以上，无腐烂、无病虫害的新鲜黄皮果，去核，以果皮肉∶水=1∶1～1：3的料液比打浆，根据需要用柠檬酸或碳酸氢钠调果浆pH 6.5，100℃灭菌15～20min，冷却至42℃以下备用；
（2）发酵
取益生菌菌种，按3～8％的接种量接种至步骤（1）的果浆中，30～42℃发酵培养2～3d，得发酵液；
（3）芯材制备
发酵液于4℃、3500～4500 r/min条件下离心15～20min，得发酵上清和发酵菌泥，发酵上清经喷雾干燥制得发酵上清粉末，再与发酵菌泥混合即为发酵芯材；
（4）制备微胶囊
向发酵芯材中按比例加入冻干保护剂，混合均匀，再加入到预先制备好的海藻酸钠与乳清蛋白复合壁材溶液中，搅拌均匀制得菌悬液，菌悬液用喷雾器缓慢喷入CaCl2溶液中固化，用无菌水洗涤，过滤，得到一次包被微胶囊；一次包被微胶囊再加入到一定浓度的壳聚糖溶液中进行成膜反应固定化，过滤洗涤后冷冻干燥即得到二次包被微胶囊。
3.根据权利要求1所述的益生菌黄皮微胶囊，其特征在于：所述的益生菌为嗜粘蛋白阿克曼菌及植物乳杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的益生菌黄皮微胶囊，其特征在于：所述的冻干保护剂中各成分的质量浓度分别为：脱脂奶粉8～15％，海藻糖4～8％，甘油3～5％，麦芽糊精6～10％。
5.根据权利要求1所述的益生菌黄皮微胶囊，其特征在于：所述壁材中各成分的的质量浓度分别为：海藻酸钠2～4％，乳清蛋白2～4％，壳聚糖1～3％。
6.根据权利要求2所述的益生菌黄皮微胶囊的制备方法，其特征在于：步骤（2）所述的发酵方法具体为：首先将冻存于-80℃甘油保存的嗜粘蛋白阿克曼菌按4％的接菌量接种于添加0.5～1.5％桑叶肽或火麻肽的培养基中，37℃厌氧培养60～72h活化两代，将活化后的嗜粘蛋白阿克曼菌联合植物乳杆菌、双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌中的一种或几种按3～8％的接种量接种至步骤（1）得到的果浆中，再加入嗜粘蛋白阿克曼菌益生因子、0.5～1.5％桑叶肽或火麻肽、1～5g/L的苏氨酸、0.2～0.3％的乳果糖，于30～42℃条件下密闭发酵培养2～3d。
7.根据权利要求2所述的益生菌黄皮微胶囊的制备方法，其特征在于：步骤（3）中喷雾干燥条件为：进口温度130～150℃、出风温度70～90℃、进样量20～30 mL/min，高压泵压力12～15MPa。
8.根据权利要求2所述的益生菌黄皮微胶囊的制备方法，其特征在于：步骤（4）所述的一次包被微胶囊制备条件为：采用喷雾冷凝法，向发酵芯材中按比例加入冻干保护剂，混合均匀，再加入到预先制备好的海藻酸钠与乳清蛋白复合壁材溶液中，搅拌均匀制得菌悬液，菌悬液用喷雾器缓慢喷入质量分数为2～4% CaCl2溶液中固化1～2h，用无菌水洗涤，过滤，得一次包被微胶囊。
9.根据权利要求2所述的益生菌黄皮微胶囊的制备方法，其特征在于：步骤（4）所述的二次包被微胶囊制备条件为：所得一次包被微胶囊加入到预设浓度的壳聚糖溶液中，缓慢搅拌20～40 min，无菌水洗涤，过滤，冷冻干燥后得到二次包被微胶囊，冷冻干燥的预冻初始温度为-30～-40℃，预冻速率0.4～0.8℃/min，预冻终点温度-60℃，干燥室压力60～80pa，加热板温度30～40℃，干燥时间为16～20h。
10.如权利要求1或2所述的益生菌黄皮微胶囊，在合生元添加剂或保健食品中的应用。
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