CN111567179A

CN111567179A - 一种促进白芨种子直播萌发的方法及萌发剂

Info

Publication number: CN111567179A
Application number: CN202010496081.4A
Authority: CN
Inventors: 任风鸣; 刘艳; 卓维; 张万超
Original assignee: CHONGQING INSTITUTE OF MEDICINAL PLANT CULTIVATION
Current assignee: CHONGQING INSTITUTE OF MEDICINAL PLANT CULTIVATION
Priority date: 2020-06-03
Filing date: 2020-06-03
Publication date: 2020-08-25
Anticipated expiration: 2040-06-03
Also published as: CN111567179B

Abstract

本发明属于植物培养技术领域，具体是涉及一种能够促进白芨种子直播萌发和直播幼苗生长的介质，营养物质以及环境条件的优化选择和萌发方法。本发明能提高白芨种子直播萌发率的介质选择有：沙壤土、细沙、赤玉土；蛭石、珍珠岩；椰糠、菌包、枯叶粉；棉花、棉纱布。选择萌发营养液组分为：1/4MS～MS的营养液、0.5mg/L～2mg/L的NAA、0mg/L～1mg/L的GA3、10～30g/L的蔗糖。选择萌发温度为15～25℃，相对湿度为50～90％,光照强度为1000～3000lx，光照时长为8～16小时/天。该介质与营养液组合，可以有效的提高白芨种子直播萌芽率。

Description

一种促进白芨种子直播萌发的方法及萌发剂

技术领域

本发明涉及植物培养技术领域，具体的是一种通过试验优化白芨种子直播萌发中萌发介质，营养液，萌发环境来提高萌发率的方法，

背景技术

白芨，又名连及草、甘根等，多年生草本球根植物，植株高18～60厘米。主要分布在中国、日本以及缅甸北部。白芨有广泛的药用价值及园林价值。可用于收敛止血，消肿生肌。用于咳血吐血，外伤出血，疮疡肿毒，皮肤皲裂；肺结核咳血，溃疡病出血；还可用于养生药膳，块茎含黏液质和淀粉等，可作糊料。而白芨作为地生兰的一种，花有紫红、白、蓝、黄和粉等色，可布置花坛，常丛植于疏林下或林缘隙地，宜在花径、山石旁丛植和盆栽室内观赏，亦可点缀于较为荫蔽的花台、花境或庭院一角。

白芨喜温暖、阴湿的环境，如野生山谷林下处。稍耐寒，长江中下游地区能露地栽培。耐阴性强，忌强光直射，夏季高温干旱时叶片容易枯黄。宜排水良好含腐殖质多的沙壤土。白芨常用分株繁殖。春季新叶萌发前或秋冬地上部枯萎后，掘起老株，分割假鳞茎进行分植，每株可分3～5株，须带顶芽，传统栽培主要靠分株繁殖。但分株繁殖周期长，繁殖效率低，而且耗种量大，劳动力大，很难满足大量栽培的需要。白芨亦可采用播种繁殖，但白芨的种子非常细小且无胚乳，因此在自然状况下很难萌发和生长，实生苗的栽培较为困难。

目前也有对白芨种子萌芽进行研究，例如发明CN201510026364.1中就公开了一种适用于白芨种子萌发的培养基：MS或1/2MS、0.1～2.0mg/L的NAA、0.8～4.0g/L的活性炭、40～60g/L的马铃薯泥、40～60g/L的香蕉泥、1～7g/L的紫苏梗、2～5g/L的威灵仙、3～10g/L的漏芦、2～9g/L的羌活、3～6g/L的紫花地丁、2～5g/L的淡竹叶、1～4g/L的山豆根、2～5g/L的天冬和4～7g/L的芦根，本制备配方还包括1～5g/L的苍术、1～3g/L的艾叶、2～3g/L的白芷、2～5g/L的苦参、3～4g/L的蛇床子、2～4g/L的白鲜皮、3～5g/L的百部、2～4g/L的黄柏和3～5g/L的洋葱。

与现有技术相比本发明是提供一种直播方法的白芨种子萌发，包含了直播优化的介质，以及营养液，两者搭配更利于白芨种子直播方式的生长，有利于大面积的直播土培方式。并且确定了较优的萌发介质，营养液，和萌发环境的条件。对比传统繁殖，其繁殖率得到提高，繁殖速度快，缩短了育苗时间，出芽存活率以及植株成活率得到提高，适用于大规模批量育苗。

发明内容

本发明目的之一在于提供一种白芨种子的营养液,该营养液的加入可以有效的提高白芨种子的萌发率。

为实现上述目的，本发明采用以下方案：

采用L9(34)正交设计，四个影响因素分别是：A(MS营养液:1/4MS、1/2MS、MS)，B(NAA：0.5mg/L、1mg/L、2mg/L)，C(GA3：0mg/L、0.5mg/L、1mg/L)，D(蔗糖：10g/L、20g/L、30g/L)。于播种后14天、28天、56天，用放大镜观察、记录萌发种子数，统计萌发率、原球茎分化(分化、未分化)率及成苗率(株高达到3cm视为成苗)

成苗率(％)＝成苗数/播种数*100％

采用SPSS19.0软件进行正交设计和方差分析。以成苗率为主要参考指标，综合评价筛选最优营养液配方。

一种用于提高白芨种子直播萌芽率的营养液，所述营养液组分：1/4MS～MS的大量元素及全量的微量元素、0.5mg/L～2mg/L的α-萘乙酸NAA、0mg/L～1mg/L的赤霉素GA3、10g/L～30g/L的蔗糖，pH为5～6。

具体的，所述营养液组分：1/2MS、2mg/Lα-萘乙酸NAA、20g/L的蔗糖，pH为5.5。

本发明目的之二在于提供一种含有上述营养液的萌发剂,选择出适用于白芨生长的萌发剂，提高白芨种子萌发率，促进种子萌发。

为实现上述目的，本发明采用以下方案：

分别选取4种类型10种萌发介质(土类：沙壤土、细沙、赤玉土，岩石类：蛭石、珍珠岩，有机质类：椰糠、菌包、枯叶粉，纤维类：棉花、棉纱布)。采用种子皿内发芽法测定萌发率。于播种后7天、14天、21天、28天，观察、记录萌发种子数，统计萌发率、原球茎分化(分化、未分化)率及萌发介质染菌数(染菌数为每皿被侵染的菌斑数)。

萌发率(％)＝萌发种子数/播种种子数*100％

原球茎分化率(％)＝分化的原球茎/总原球茎数*100％

以萌发率为主要参考指标，兼顾原球茎分化率及萌发介质染菌率(以第28天测定值为最终用于分析和比较数据)，采用SPSS19.0软件进行方差分析和多重比较(采用LSD法，SSR法进行验证，以综合评价各萌发介质性能，筛选最优的介质。

一种含有上述营养液的萌发剂，所述萌发剂由沙壤土、细沙、赤玉土，蛭石、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、棉花、棉纱布中一种或多种萌发介质和营养液组成。

具体的，所述萌发介质由赤玉土、细沙和沙壤土中一种或多种组成，与营养液的配比为6：1。

本发明目的之三在于提供了一种提高白芨种子萌发率的方法,该方法可以有效的提高白芨种子的萌发率。

为实现上述目的，本发明采用以下方案：

一种提高白芨种子直播萌发率的方法，包含以下步骤：

(1)种子的选择：采集成熟的白芨种果。9～11月，白芨蒴果由淡紫(黄)绿色逐步变为褐色、基部发硬、轻捏发出轻微嚓嚓声、种子由粘着状态变为散列状态时种子成熟。采集未破损、成熟的白芨蒴果4±1℃沙藏。

(2)种子活力的测定：随机选取白芨种果，用镊子夹破外壳取出种子，充分混匀；分别随机取100粒种子置于4个培养皿中，于25±5℃培养箱里用清水浸泡过夜，使种子充分吸胀；将吸胀的种子风干表面水分，3个皿加入0.1～0.3％TTC溶液中浸泡(实验组)，1个皿加入纯净水作为对照，置于25±5℃恒温培养箱中避光染色3～18h；从TTC溶液种取出种子，用清水将种子清洗，在显微镜下观察种胚被染色情况。

种子活力计算：种子活力(％)＝有活力的种子数/种子总数×100％(染色粒数/总粒数*100％)

(3)选取萌发介质沙壤土、细沙、赤玉土，蛭石、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、棉花、棉纱布中一种或多种，喷洒1/4MS～MS的大量元素及全量的微量元素、0.5mg/L～2mg/L的NAA、0mg/L～1mg/L的GA3、10g/L～30g/L的蔗糖的营养液；选取种子，使种子充分浸泡吸胀；取种子到盛有介质的培养皿中，进行培养，培养萌发温度为15～25℃，相对湿度为50～90％,光照强度为1000～3000lx，光照时长为8～16小时/天。

具体的，培养温度为25±1℃。

具体的，相对湿度为70％。

具体的，光照强度为1000lx。

具体的，光照时长为12小时/天。

具体的，测定种子活力的方法为TTC法，TTC溶液浓度为0.1～0.3％；染色时长为3～18小时。

本发明的有益效果在于：

(1)发明提供了白芨种子萌发适应萌发介质为赤玉土，细沙和沙壤土可以作为替用品或复配介质；萌发营养液含量：1/2MS、2mg/L NAA、0mg/L GA3、20g/L蔗糖；萌发环境条件：温度25℃、相对湿度50％、光照强度1000lx、光照时长8h，通过该方法的研究可以提高白芨种子萌发率，种苗的成活率。

(2)该发明对白芨种子萌发条件的研究，其中得出的培养步骤简单且好操作，也可依照本步骤进行大批量的培养，在保证萌发率的同时节约经济以及劳动成本

附图说明

图1为不同营养物质水平对萌发率影响的均势图。

图2为不同营养物质水平对原球茎分化率的影响的均势图。

图3为不同营养物质水平对成苗率影响的均势图。

图4为不同培养条件对萌发率影响的均势图。

图5为不同培养条件对原球茎分化率影响的均势图。

图6为不同培养条件对成苗率影响的均势图。

具体实施方式

所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1

种子活力检测：

种子活力检测采用TTC法：活种子的胚在呼吸作用过程中能进行氧化还原反应，而死种子则无此反应。当TTC渗入活种子胚细胞内作为氢受体而被脱氢辅酶(NADH2或NADPH2)上的氢还原时，无色的TTC转变为红色的三苯基甲腙(TTF)；如果种胚死亡或种胚生活力衰退，则不能染色或染色较浅，因此，可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生活力。

具体步骤为：(1)随机选取10枚白芨种果，用镊子夹破外壳取出种子，将10枚种果的种子充分混匀；(2)分别随机取100粒种子置于4个培养皿中，于25℃培养箱里用清水浸泡过夜，使种子充分吸胀。(3)将吸胀的种子风干表面水分，3个皿加入0.1％TTC溶液中浸泡(实验组)，1个皿加入纯净水作为对照，置于25℃恒温培养箱中避光染色5h。(4)从TTC溶液种取出种子，用清水将种子清洗2次，在显微镜下观察种胚被染色情况。

TTC种子活力检测显示(见表1)，用于实验的白芨种子活力最高为97％，最低为1％，平均为94.33％，种子储藏良好，活力较高，可以用于后续实验。

表1待测种子活力

实验编号	检测总粒数	染色粒数	种子活力(％)
				CK	100	0	0
S1	100	95	95.00
				S2	100	97	97.00
S3	100	91	91.00
				平均	100	94.33	94.33

实施例2

不同萌发介质对萌发率、原球茎分化率、萌发介质染菌率的影响。

不同介质对白芨种子直播萌发率的影响

分别选取4种类型10种萌发介质(土类：沙壤土、细沙、赤玉土，岩石类：蛭石、珍珠岩，有机质类：椰糠、菌包、枯叶粉，纤维类：棉花、棉纱布)。采用种子皿内发芽法测定萌发率。取上述各介质适量置于90mm培养皿中，平整表面，喷洒清水充分浸透介质。每种介质3次重复，设置内垫海绵的双层滤纸为对照。随机选取10枚白芨蒴果，剪去果皮、抖出种子、混匀，于25℃培养箱里用清水浸泡过夜，使种子充分吸胀。分别随机取充分吸水的种子到盛有介质的培养皿中，每皿100粒。置于LRH-250.GS型人工气候箱培养(温度24±1℃，光照2000Lx、12h/d)中，每7天补充一次水分。

于播种后7天、14天、21天、28天，用放大镜观察、记录萌发种子数，统计萌发率、原球茎分化(分化、未分化)率及萌发介质染菌数(染菌数为每皿被侵染的菌斑数)。

不同萌发介质上白芨种子萌发率、原球茎分化率及染菌数见表2。

表2不同介质白芨种子萌发率、原球茎分化率、染菌数

不同萌发介质中白芨种子萌发率差异显著(见表2.)。在所有介质中，在赤玉土中的萌发率最高(87％)，菌包中的萌发效率最低(53％)；仅赤玉土和纱布中的萌发率高于对照组。针对不同介质类型，在纤维类介质上的萌发率最高，土壤中次之，有机质中最低。

表3不同萌发介质萌发率方差分析

	平方和	df	均方	F	显著性
						组间	4022.303	10	402.230	53.739	0.000
组内	164.667	22	7.485
						总数	4186.970	32

表4不同萌发介质平均萌发率

Z	均值	N	标准差	极大值	极小值
						1	85.00	3	2.000	87	83
2	80.67	3	1.528	82	79
						3	83.67	3	3.215	86	80
4	87.00	3	3.055	90	84
						5	80.00	3	2.646	82	77
6	69.67	3	3.215	72	66
						7	63.00	3	3.606	67	60
8	53.67	3	2.082	56	52
						9	63.00	3	1.000	64	62
10	83.67	3	4.041	88	80
						11	86.67	3	2.082	89	85
总计	75.97	33	11.43	90	52

不同萌发介质上的萌发率进一步多重比较显示，珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉与对照组存在显著差异，但都显著低于对照组；沙壤土与赤玉土、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、棉纱布存在显著差异；细沙与珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉存在显著差异；赤玉土与沙壤土、蛭石、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉存在显著差异；蛭石与赤玉土、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、棉纱布存在显著差异；珍珠岩与所有萌发介质均存在显著差异；椰糠与沙壤土、细沙、赤玉土、蛭石、珍珠岩、椰糠、菌包、棉花、棉纱布存在显著差异；菌包与所有萌发介质均存在显著差异；枯叶粉与沙壤土、细沙、赤玉土、蛭石、珍珠岩、棉花、棉纱布存在显著差异；棉花与珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、存在显著差异；棉纱布与沙壤土、蛭石、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉存在显著差异。

表5不同萌发介质间萌发率多重比较(LSD法)

表6不同介质萌发率多重比较(SSR法)

SSR法与LSD法多重比较结果一致(表5、表6)。方差分析和多重比较表明，总体上不同介质中白芨种子萌发率的差异显著(表3)，赤玉土(87％)、棉纱布(86.67％)、细沙(83.67％)、棉花(83.67％)的萌发率较高，赤玉土和棉纱布略高于对照组，细沙和棉花略低于对照组，但4种介质间无显著差异。因此，有必要进行进一步的比较分析，以获得最佳的萌发介质。

不同介质对白芨种子原球茎分化的影响

不同介质中白芨种子萌发后原球茎分化率见表2。方差分析显示，不同介质中原球茎分化存在显著差异。赤玉土、蛭石、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、棉花、棉纱布与对照组存在显著差异，但分化率均低于对照组；沙壤土与赤玉土、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、棉花、棉纱布存在显著差异；细沙与赤玉土、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、棉花、棉纱布存在显著差异；赤玉土与所有其它类型介质存在显著差异；蛭石与赤玉土、蛭石、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、棉花、存在显著差异；珍珠岩与沙壤土、细沙、赤玉土、蛭石、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、棉纱布存在显著差异；椰糠与所有其它类型介质存在显著差异；菌包与所有萌发介质均存在显著差异；枯叶粉与沙壤土、细沙、赤玉土、蛭石、珍珠岩、棉花、棉纱布存在显著差异；棉花与沙壤土、细沙、赤玉土、蛭石、椰糠、菌包、枯叶粉、棉花、棉纱布存在显著差异；棉纱布与沙壤土、细沙、赤玉土、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、棉花、棉纱布存在显著差异。

表7不同萌发介质对原球茎分化影响的方差分析

表8不同萌发介质对原球茎分化影响的方差分析

Z	均值	N	标准差	极小值	极大值
						1	82.33	3	1.155	81	83
2	80.00	3	2.000	78	82
						3	81.67	3	3.215	78	84
4	85.33	3	3.215	84	90
						5	77.33	3	3.055	74	80
6	64.33	3	2.517	62	67
						7	52.67	3	1.528	51	54
8	43.00	3	2.646	41	46
						9	48.00	3	1.000	47	49
10	65.67	3	3.055	63	69
						11	74.33	3	3.215	72	78
总计	68.70	33	14.75	41	90

表9不同萌发介质对原球茎分化影响的多重比较(LSD法)

表10不同萌发介质对原球茎分化影响的多重比较(SSR法)

分化率最高的为赤玉土(85.33％)，且与其它所有介质存在显著差异，其次为沙壤土和细沙，二者除与蛭石无显著差异外，与其它所有介质存在显著差异。分化率最低的为菌包(43％)，其次为枯叶粉(48％)。

不同介质萌发过程中染菌率比较

白芨种子在萌发过程中，如果介质或萌发幼苗受到杂菌侵染，会严重影响后期成苗率和种苗质量。研究结果表明，不同介质受到杂菌侵染的程度具有显著差异(见表11)，其中菌包最高，棉纱布、枯树叶和椰糠也受到较高程度的侵染，赤玉土、蛭石、珍珠岩受到侵染的程度较低。(见表12)。

表11不同介质染菌率方差分析

	平方和	df	均方	F	显著性
						组间	341.636	10	34.164	18.184	.000
组内	41.333	22	1.879
						总数	382.970	32

表12不同介质染菌率比较

表13.不同介质染菌率多重比较(SSR法)

不同介质直播萌发性能综合评价

种子萌发率是成苗率的基本保障，是筛选萌发介质最重要的参考指标。其次，原球茎分化率也与成苗息息相关，是与成苗率紧紧联系的指标，分化率越高，成苗率相应越高。介质抗菌的能力也间接影响成苗率和种苗质量，染菌率越低，成苗的机会越大，最终成苗率趋于更高。研究结果表明，萌发率较高的介质为赤玉土(87％)、棉纱布(86.77％)、细沙(83.67)，三种介质萌发率无显著差异；原球茎分化率较高的介质为赤玉土(85.33％)、细沙(81.67％)、沙壤土(80％)，且赤玉土显著高于细沙、沙壤土以及其他介质；染菌率结果显示，赤玉土(0.33)、蛭石(0.67)和细沙(2.67)染菌率较低，赤玉土与蛭石、细沙不存在显著差异。综合以上三个成苗的重要指标，赤玉土是最理想的直播介质，细沙和沙壤土可以作为替用品或复配介质。研究结果表明，赤玉土萌发率(87％)、原球茎分化率(85.33％)最高，且染菌率最低，因此赤玉土是最理想的直播介质。同时细沙也具有较高的萌发率和原球茎分化率和较低的染菌率，可以将细沙作为复配介质与赤玉土搭配。后续实验表明，赤玉土与细沙3：1的比例复配，是非常适宜的白芨种子直播萌发介质。

实施例3

不同营养液配方对白芨种子萌发率、分化率、成苗率的影响

采用L9(34)正交设计，四个影响因素分别是：A(MS营养液)、B(NAA)、C(GA3)、D(蔗糖)，每个因素设置3个水平分别标记为L1\L2\L3。

表14.正交实验因素及水平

表15.不同营养液配方正交实验设计

于播种后14天、28天、56天，用放大镜观察、记录萌发种子数，统计萌发率、原球茎分化(分化、未分化)率及成苗率(株高达到3cm视为成苗)

采用SPSS19.0软件进行正交设计和方差分析。以成苗率为组要参考指标，综合评价筛选最优营养液配方。

营养液的配制

(1)大量元素配制：按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称(或编号)，浓缩倍数，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

(2)微量元素母液的配制：按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐(FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O)作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。

(3)铁盐配制：将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5～6加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。

(4)有机物母液配制：按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3％单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中中保存，贴上标签。

(5)母液最好在2～4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。

(6)生长调节剂母液配制

为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。萘乙酸(NAA)，赤霉素(GA3)，先用少量95％酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。

不同营养液配方对萌发率的影响

在播种后14天统计萌发率，28天统计分化率，56天统计成苗率。不同营养液配方对白芨种子直播萌发率、分化率及成苗率的影响见表16。

表16不同营养液配方对萌发率、分化率及成苗率的影响

不同营养液配方对萌发率影响具有显著差异。MS营养液、NAA、蔗糖不同水平对萌发率的影响具有显著差异，GA3不同水平对白芨种子直播萌发率不具有显著差异。不同营养物质对萌发率的影响程度不一样，其中MS营养液对萌发率的影响最大，影响的大小次序为MS营养液﹥NAA﹥蔗糖﹥GA3。

表17不同营养液配方对萌发率影响方差分析

源	III型平方和	df	均方	F	Sig.
						校正模型	478.519<sup>a</sup>	8	59.815	44.861	.000
截距	188668.481	1	188668.481	141501.361	.000
						A	360.519	2	180.259	135.194	.000
B	14.519	2	7.259	5.444	.014
						C	.296	2	.148	.111	.895
D	103.185	2	51.593	38.694	.000
						误差	24.000	18	1.333
总计	189171.000	27
						校正的总计	502.519	26

根据各营养物质不同水平对萌发率的影响均势见图(附图1，A、B、C、D分别为：MS营养液对萌发率影响的均势图；NAA对萌发率影响的均势图；GA3对萌发率影响的均势图；蔗糖含量对萌发率影响的均势图)，为了获得更高的萌发率，最优化组合为1/4MS+2mg/L NAA+0mg/L GA3+20g/L蔗糖。

不同营养液配方对原球茎分化率的影响

不同营养液配方对原球茎分化率影响具有显著差异。MS营养液、NAA、蔗糖不同水平对萌发率的影响具有显著差异，GA3不同水平对白芨种子原球茎分化率不具有显著差异。不同营养物质对萌发率的影响程度不一样，其中MS营养液对原球茎分化率的影响最大，MS营养液﹥NAA﹥蔗糖﹥GA3。

表18不同营养液配方对分化率影响方差分析

各营养物质不同水平对原球茎分化率的影响均势见图(附图2，A、B、C、D分别为：MS营养液对原球茎分化率的影响的均势图；NAA对原球茎分化率的影响的均势图；GA3对原球茎分化率的影响的均势图；蔗糖含量对原球茎分化率的影响的均势图)。为了获得更高的萌发率，最优化组合为1/4MS+2mg/L NAA+0mg/L GA3+20g/L蔗糖。

不同营养液配方对成苗率的影响

不同营养液配方对成苗率的影响具有显著差异。MS营养液、NAA、蔗糖不同水平对成苗率的影响具有显著差异，GA3不同水平对成苗率影响不具有显著差异。不同营养物质对萌发率的影响程度不一样，其中MS营养液对原球茎分化率的影响最大，影响的次序为MS营养液﹥NAA﹥蔗糖﹥GA3。

表19不同营养液配方对分化率影响方差分析

各营养物质不同水平对成苗率的影响均势见图(附图3，A、B、C、D分别为：MS营养液对成苗率影响的均势图；NAA对成苗率影响的均势图；GA3对成苗率影响的均势图；蔗糖含量对成苗率影响的均势图)。为了获得更高的萌发率，最优化组合为1/2MS+2mg/L NAA+0.5mg/L GA3+20g/L蔗糖。赤玉土与细河沙3：1混合作为介质，1/2MS+2mg/L NAA+20g/L蔗糖，与培养介质6：1混合为最佳萌发剂。

实施例4

不同培养条件对萌发率、分化率、成苗率的的影响

采用L9(34)正交实验设计，以前期筛选的最佳萌发介质赤玉土为介质，1/2MS+2mg/L NAA+2％蔗糖为营养液配方，考察不同培养条件对白芨种子直播萌发率、原球茎分化率、成苗率的影响。

采用L9(34)正交设计，4个影响因素分别是：A(温度)、B(相对湿度)、C(照度)、D(光照时长)，每个因素设置3个水平分别标记为L1\L2\L3。

表20正交实验因素及水平

表21正交实验设计

不同培养条件对萌发率的影响

总体上，不同培养条件对白芨种子直播萌发率存在显著影响。温度不同水平对萌发率的影响具有显著差异，湿度、照度和光照时长3个因素不同水平对萌发率无显著影响。因此单从萌发率考察，温度应选择25℃为宜(见附图4，A、B、C、D分别为：温度对萌发率影响的均势图；湿度对萌发率影响的均势图；光照强度对萌发率影响的均势图；光照时长对萌发率影响的均势图)。而其他培养条件需要进一步对分化率和成苗率考察。

表22不同培养条件对萌发率影响的方差分析

不同培养条件对原球茎分化率的影响

总体上，不同培养条件对原球茎分化有显著影响。除温度外，其它各影响因素不同水平对原球茎分化率无显著影响。因此，从提高原球茎分化率角度，温度应控制在25℃为宜(见附图5，A、B、C、D分别为：温度对分化率影响的均势图；湿度对分化率影响的均势图；光照强度对分化率影响的均势图；光照时长对分化率影响的均势图)。

表23不同培养条件对分化率影响方差分析

源	III型平方和	df	均方	F	Sig.
						校正模型	56.296<sup>a</sup>	8	7.037	3.393	.015
截距	198318.370	1	198318.370	95617.786	.000
						A	43.852	2	21.926	10.571	.001
B	6.741	2	3.370	1.625	.225
						C	4.519	2	2.259	1.089	.358
D	1.185	2	.593	.286	.755
						误差	37.333	18	2.074
总计	198412.000	27
						校正的总计	93.630	26

不同培养条件对成苗率的影响

总体上，不同培养条件对成苗率有显著影响。除温度外，其它各影响因素不同水平对原球茎分化率无显著影响。因此，为提高成苗率，温度应控制在25℃为宜(见附图6，A、B、C、D分别为：温度对成苗率影响的均势图；湿度对成苗率影响的均势图；光照强度对成苗率影响的均势图；光照时长对成苗率影响的均势图)。

表24不同培养条件对成苗率影响方差分析

综上，不同培养条件对白芨种子直播萌发具有显著影响，但各因素除温度外对萌发率、分化率及成苗率都无显著影响。在现有实验条件范围内，培养条件对白芨直播萌发效率的影响主要由于温度引起。因此，培养温度应选择最适温度25℃为宜，其它条件可根据经济性原则和实际需要进行调整。由于白芨属于喜阴植物，虽然光照强度对萌发效率的影响不具有显著差异，但本研究显示在较低光照强度下成苗率更高，因此，应选择较低的光照强度为宜。

实施例5

最优条件的萌发率测定

1实验材料

成熟的白芨种果10枚。10～11月，白芨蒴果由淡紫(黄)绿色逐步变为褐色、基部发硬、轻捏发出轻微嚓嚓声、种子由粘着状态变为散列状态时种子成熟。实验材料于2014年11月10日，在重庆市药物种植研究所植物园采集未破损、成熟的白芨蒴果4±1℃沙藏。

2仪器、设备

人工气候箱(LRH-250GS)、灭菌锅、培养皿、放大镜等。

3药品、试剂

萘乙酸(NAA)，赤霉素(GA₃)，MS培养液(大量元素：KNO3、NH4NO3、KH2PO4 MgSO4·7H2O；CaCl₂·2H2O；微量元素：MnSO4·4H2O、CoCL2.6H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·7H2O、CuSO4.5H2O4、ZnSO4·7H2O；铁盐：Na2-EDTA、FeSO4.4H2O；甘氨酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫铵素、烟酸、肌酸)、赤玉土+细沙，多菌灵。

4实验方法

采用前期筛选的最优条件赤玉土与细河沙3：1混合作为介质，1/2MS+2mg/L NAA+20g/L蔗糖，与培养介质6：1混合，培养温度25℃，相对湿度70％，光照1000lx，光照时长12小时，为白芨直播萌发的最适条件。于播种后14天、28天、56天，用放大镜观察、记录萌发种子数，统计萌发率、原球茎分化(分化、未分化)率及成苗率(株高达到3cm视为成苗)

萌发率(％)＝萌发种子数/播种种子数*100％

原球茎分化率(％)＝分化的原球茎/总原球茎数*100％

成苗率(％)＝成苗数/播种数*100％

采用SPSS19.0软件进行数据统计分析。

5.2.5实验结果

在最优条件下萌发率为91％，原球茎分化率为89％，成苗率为84％，远高于常规大田育苗(25％—30％)的成苗率。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims

1.一种用于提高白芨种子直播萌芽率的营养液，其特征在于，所述营养液组分：1/4MS～MS的大量元素及全量的微量元素、0.5mg/L～2mg/L的α-萘乙酸NAA、0mg/L～1mg/L的赤霉素GA3、10g/L～30g/L的蔗糖，pH为5～6。

2.根据权利要求1中所述的营养液，其特征在于，所述营养液组分：1/2MS、2mg/Lα-萘乙酸NAA、20g/L的蔗糖，pH为5.5。

3.一种含有权利要求1中所述营养液的萌发剂，其特征在于，所述萌发剂由沙壤土、细沙、赤玉土，蛭石、珍珠岩、椰糠、菌包、枯叶粉、棉花、棉纱布中一种或多种萌发介质和营养液组成。

4.根据权利要求3中所述的萌发剂，其特征在于，所述萌发介质为赤玉土:细沙3：1，与营养液的配比为6：1。

5.一种提高白芨种子直播萌发率的方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)采集成熟白芨种果，4±1℃沙藏；

(2)测定种子活力情况；

6.根据权利要求5中所述的方法，其特征在于，培养萌发温度为25±1℃。

7.根据权利要求5中所述的方法，其特征在于，相对湿度为70％。

8.根据权利要求5中所述的方法，其特征在于，光照强度为1000lx。

9.根据权利要求5中所述的方法，其特征在于，光照时长为12小时/天。

10.根据权利要求5中所述方法，其特征在于，所述方法测定种子活力的方法为TTC法，TTC溶液浓度为0.1～0.3％；染色时长为3～18小时。