CN107896851A - 一种白及土培直播快繁的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种白及土培直播快繁的方法，包括以下步骤：1)将无菌白及种子浸泡于无菌水中萌动，获得萌动种子；2)将所述萌动种子撒播至基质中，置于23～25℃自然光照培养4～6周，获得白及幼苗；3)培养所述白及幼苗2～8周获得白及种苗；培养获得所述白及种苗的过程中每隔2～4d喷施植物全营养液。本发明所述方法种子萌发率可提高到70～90％；成苗率高可达到60～70％；获得的白及种苗具有更加发达的根系与假鳞茎，白及种苗的质量更好。

Description

一种白及土培直播快繁的方法

技术领域

本发明属于白及繁殖技术领域，具体涉及一种白及土培直播快繁的方法。

背景技术

白及(Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.)为兰科白及属多年生草本植物，亦称“白芨”，是我国名贵中草药，具有收敛止血，消肿生肌，热利湿的功效(国家药典委员会，2010)，现代药理学研究表明白及具有抗癌，抗氧化，抗菌等多种效用。白及也是一种重要的工业投料，并随着应用的增加，市场需求逐步扩大。

然而，巨大的市场需求致使野生白及几乎被采挖殆尽，成为濒临灭绝的名贵中药材，被国家列为重点保护的野生药用植物之一，还被国际贸易公约(CITES)附录二录入加以保护。如何保护白及种质资源和获得大量种苗是亟待解决的现实问题。

传统的繁育白及种苗的方法主要依靠分株繁殖，但分株繁殖周期长，繁殖效率低，而且耗种量大，成本更高。建立人工繁育方法是中药材研究中常用的行之有效的方法，人工繁育方法一方面可以保护野生资源，另一方面可为规模化种植提供大量种苗。组织培养方法是目前最为常用的人工繁育方法，然而运用该技术需要配备仪器，设备，场地，人力资源等，极大的增加了成本投入。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种省时、省力、快速获得大量种苗的白及土培直播快繁的方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种白及土培直播快繁的方法，包括以下步骤：1)将无菌白及种子浸泡于无菌水中萌动，获得萌动种子；2)将所述萌动种子撒播至基质中，置于23～25℃自然光照培养4～6周，获得白及幼苗；3)培养所述白及幼苗2～8周获得白及种苗；培养获得所述白及种苗过程中每隔2～4d喷施植物全营养液。

优选的，步骤1)中所述萌动的温度为23～25℃，所述萌动的时间为2～5d。

优选的，步骤1)中所述萌动在光照和黑暗交替条件下进行，所述光照和黑暗交替放热条件为(16～20)h光照/(4～8)h黑暗交替。

优选的，步骤2)中所述基质包括泥炭土，黄土，椰丝和蛭石。

优选的，所述泥炭土，黄土，椰丝和蛭石的质量比为(4～6)：(2～4)：(1～2)：(0.3～0.7)。

优选的，步骤2)中所述幼苗培养过程中的白及2叶期苗以前，在基质表面覆盖有农用地膜。

优选的，步骤2)中培养获得所述白及幼苗过程中的湿度为85～95％。

优选的，步骤1)中所述无菌白及种子来源于无菌白及蒴果，所述无菌白及蒴果的制备方法包括以下步骤：A)酒精擦拭成熟的白及蒴果表面后用无菌水清洗，获得预消毒白及蒴果；B)升汞浸泡所述预消毒白及蒴果后用无菌水清洗，获得无菌白及蒴果。

优选的，所述升汞的质量浓度为0.08～0.12％。

优选的，步骤B)中所述浸泡的时间为5～8min。

本发明的有益效果：本发明提供的方法采用土培直播的方式，直接用无菌白及种子培养白及种苗，不需要组织培养所用的培养液以及转接分化等步骤，步骤简单、成本低；本发明所述方法采用无菌水浸泡种子萌动的方式可以大大提高白及种子的萌发率，实施例的结果表明种子萌发率可提高到70～90％；本方法在白及幼苗培养过程中喷施植物全营养液，成苗率高可达到60～70％。

进一步的，本发明采用泥炭土，黄土，椰丝和蛭石作为基质，基质肥力高，黄土配比增加，提高基质保水性，蛭石和椰丝配比加大基质的透气性，获得的白及种苗具有更加发达的根系与假鳞茎，白及种苗的质量更好。

附图说明

图1为实施例1中本发明所述白及土培直播快繁的方法培育种苗生长过程与对照种苗生长过程的对比图。

具体实施方式

本发明提供了一种白及土培直播快繁的方法，包括以下步骤：1)将无菌白及种子浸泡于无菌水中萌动，获得萌动种子；2)将所述萌动种子撒播至基质中，置于23～25℃光照培养4～6周获得白及幼苗；3)培养所述白及幼苗2～8周获得白及种苗；培养获得所述白及种苗过程中每隔2～4d喷施植物全营养液。

在本发明中，所述无菌白及种子来源于无菌白及蒴果，将所述无菌白及蒴果剪开获得无菌白及种子。在本发明中所述无菌白及蒴果的制备方法包括以下步骤：A)酒精擦拭成熟的白及蒴果表面后，用无菌水清洗获得预消毒的白及蒴果；B)升汞浸泡预消毒的白及蒴果后，用无菌水清洗获得无菌白及蒴果。

在本发明中所述成熟的白及蒴果颜色微黄；所述酒精的体积浓度优选的为75％；在本发明中优选的使用脱脂棉蘸取酒精擦拭成熟的白及蒴果表面。在用酒精擦拭后，用无菌水清洗去除酒精，所述清洗的次数优选的为1～3次，更优选的为2次。

本发明在获得预消毒的白及蒴果后，用升汞浸泡所述预消毒的白及蒴果，所述升汞的质量浓度优选的为0.08～0.12％，更优选的为0.1％；所述浸泡的时间优选的为5～8min，更优选的为7min。本发明在升汞浸泡预消毒的白及蒴果后，用无菌水清洗去除升汞，所述无菌水清洗的次数为3～7次，优选的为4～6次，更优选的为5次。本发明在无菌水清洗白及蒴果后，优选的用无菌干燥的吸水纸除去蒴果表面的水备用。

在本发明中，将无菌白及种子浸泡于无菌水中萌动，获得萌动种子。在本发明具体实施过程中，用剪刀将无菌白及蒴果剪开，将其中的无菌白及种子倒出，置于无菌水中浸泡。在本发明中优选的将所述无菌水置于无菌EP管中；所述无菌EP管的体积优选的为5～15ml，更优选的为10ml；所述无菌EP管优选的经过121℃高温湿热灭菌、烘干后的EP管。本发明中所述无菌水浸泡步骤为白及种子萌发提供足够的水分，避免在自然条件下因水分缺乏不能萌动和萌发时间不一致的情况。在本发明中，所述萌动过程的温度优选的为23～25℃，更优选的为24℃；所述萌动的时间优选的为2～5d，更优选的为3～4d。在本发明中所述萌动过程在光照和黑暗交替条件下进行，所述光照和黑暗交替的条件优选的为(16～20)h光照/(4～8)h黑暗交替，更优选的为18h光照/6h黑暗交替进行。

本发明在获得萌动种子后，将所述萌动种子撒播至基质中，置于23～25℃光照培养4～6周获得白及幼苗。本发明中所述撒播的萌动种子优选的为经显微镜观察，选择的已经初步萌动变绿，但芽未冒出的萌动种子。在本发明中所述撒播优选的为将上述萌动种子置于蒸馏水中撒播至基质中。具体的在本发明的实施例中，所述基质填装在花盆中，本发明对所述花盆的形状和大小没有特殊限定，具体的在实施过程中优选的为容积4～6L的花盆，所述花盆优选的装有2.5～3.5L基质。

在本发明中所述的基质包括基质包括泥炭土，黄土，椰丝和蛭石；所述泥炭土优选的为进口泥炭土(拉脱维亚compaqpeat公司,山东寿光益先都农业科技有限公司，货号217)；所述黄土优选的为种植地本地的黄土；在本发明中所述泥炭土，黄土，椰丝和蛭石的质量比优选的为(4～6)：(2～4)：(1～2)：(0.3～0.7)；更优选的优选的为5：3：1.5：0.5。本发明中所述泥炭土和黄土配合提高基质肥力与保水性，蛭石和椰丝配合加大基质的透气性，使获得的白及种苗具有更加发达的根系与假鳞茎，白及种苗的质量更好。

本发明在撒播后，在基质表面优选覆盖有农用地膜，所述农用地膜的作用为保温和保湿。在本发明中，培养获得所述幼苗的温度为23～25℃，优选的为24℃；所述幼苗培养的湿度优选的为85～95％，更优选的为90％；培养获得所述幼苗的时间为4～6周，优选的为5周；所述幼苗培养过程中光照条件为自然光照，所述优苗培养过程中，每周浇水；所述浇水量视基质的干湿情况而定，以花盆底部出水为限。

本发明在获得白及幼苗后，培养所述白及幼苗2～8周获得白及种苗。在本发明中所述白及幼苗长出两片叶子后，优选的将所述农用地膜撤掉。

本发明中培养获得所述白及种苗的过程中每隔2～4d喷施植物全营养液，优选的为每隔3天喷施植物全营养液；在本发明中所述植物全营养液的浓度优选为0.5～2‰，更优选的为1‰；本发明对所述植物全营养液的来源没有特殊限定，采用市售商品即可。在本发明中所述植物全营养液的喷施量优选的为10～20ml/盆，更优选的为12～18ml/盆；所述植物全营养液喷施至白及种苗根系长2～3cm后停止喷施。

本发明所述白及种苗高度优选的为4～7cm，更优选的为5～6cm。在本发明中所述植物全营养液为白及植株根系的生长提供充足水分与营养。本发明中所述白及种苗培养过程中的温度、湿度、光照条件与白及幼苗培养过程一致，在此不再赘述。本发明在获得白及种苗后，将白及种苗移栽即可。

下面结合实施例对本发明提供的一种白及土培直播快繁的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

步骤一、白及无菌蒴果制备：选择生长至微黄，成熟的白及蒴果，用浸泡75％的酒精脱脂棉擦拭其表面，无菌水清洗2次，再用浓度为0.1％的升汞浸泡8min，用无菌水清洗3次，用无菌干燥的吸水纸除去蒴果表面的水备用。

步骤二、白及种子初步萌动：取1只经过湿热法高压灭菌(121℃，压力为0.1～1.0MPa，灭菌20min)，并烘干的10ml塑料EP管，向其中加入10ml无菌蒸馏水，再将步骤一中的蒴果的用无菌剪刀剪去顶部，轻轻的将白及种子抖动至EP管中，盖好盖子，在24±1℃，18h/6h(光/暗)的光照条件下培养2d；

步骤三、播种：将进口泥炭土，本地黄土，椰丝，蛭石分别按5:3:1.5:0.5质量配比混匀，每5L的花盆中装入3L混合土备用。显微镜下观察步骤二中已经初步萌动变绿，但芽未冒出的白及种子备用。将此白及种子置入500ml的蒸馏水中，均匀的撒播在准备好的花盆中，附加农用地膜保温，转至温室中24℃的自然光条件下生长，湿度控制在90％，每周喷水一次至盆底流水。

步骤四、施肥：白及苗播种4周后，苗长出2片叶后去掉地膜，施加1‰的全营养液(MS大量+微量)，每周2次至根系长至2cm(播种后8周)，每次10ml，24℃光照培养。

步骤五、移栽：待直播苗生长至长度5cm后即获得白及种苗，将种苗移栽即可。

本实施例所述的白及土培直播快繁的方法种植的白及种苗的生长过程与对照常规的白及土培直播方法种植的白及种苗生长过程对比见图1，其中本发明接种状态为B，对照萌发状态为A；本发明萌发状态为c2，对照播种后2月生长状态为c1；本发明播种后2月生长状态为d2，对照播种后3月生长状态为d1；对照4月种苗为e1，本发明4月种苗为e2。

实施例2

步骤一、白及无菌蒴果制备：选择生长至微黄，成熟的白及蒴果，用浸泡75％的酒精脱脂棉擦拭其表面，无菌水清洗1次，再用浓度为0.1％的升汞浸泡9min，用无菌水清洗5次，用无菌干燥的吸水纸除去蒴果表面的水备用。

步骤二、白及种子初步萌动：取1只经过湿热法高压灭菌(121℃，压力为0.1～1.0MPa，灭菌20min)，并烘干的10ml塑料EP管，向其中加入10ml无菌蒸馏水，再将步骤一中的蒴果的用无菌剪刀剪去顶部，轻轻的将白及种子抖动至EP管中，盖好盖子，在24℃，18h/6h(光/暗)的光照条件下培养3d；

步骤三、播种：将进口泥炭土，本地黄土，椰丝，蛭石分别按4:3:2:0.5质量配比混匀，每5L的花盆中装入3L混合土备用。显微镜下观察步骤二中已经初步萌动变绿，但芽未冒出的白及种子备用。将此白及种子置入500ml的蒸馏水中，均匀的撒播在准备好的花盆中，附加农用地膜保温，转至温室中24℃的自然光条件下生长，湿度控制在90％，每周喷水一次至盆底流水。

步骤四、施肥：白及苗播种5周后，苗长出2片叶后去掉地膜，施加1‰的全营养液(MS大量+微量)，每周3次至根系长至3cm(播种后10周)，每次15ml，24℃光照培养。

步骤五、移栽：待直播苗生长至长度5cm后即获得白及种苗，将种苗移栽即可。

实施例3

步骤一、白及无菌蒴果制备：选择生长至微黄，成熟的白及蒴果，用浸泡75％的酒精脱脂棉擦拭其表面，无菌水清洗2次，再用浓度为0.1％的升汞浸泡8min，用无菌水清洗7次，用无菌干燥的吸水纸除去蒴果表面的水备用。

步骤二、白及种子初步萌动：取1只经过湿热法高压灭菌(121℃，压力为0.1～1.0MPa，灭菌20min)，并烘干的10ml塑料EP管，向其中加入10ml无菌蒸馏水，再将步骤一中的蒴果的用无菌剪刀剪去顶部，轻轻的将白及种子抖动至EP管中，盖好盖子，在25℃，20h/8h(光/暗)的光照条件下培养5d；

步骤三、播种：将进口泥炭土，本地黄土，椰丝，蛭石分别按5:3:1.5:0.5质量配比混匀，每5L的花盆中装入3L混合土备用。显微镜下观察步骤二中已经初步萌动变绿，但芽未冒出的白及种子备用。将此白及种子置入500ml的蒸馏水中，均匀的撒播在准备好的花盆中，附加农用地膜保温，转至温室中25℃的自然光条件下生长，湿度控制在88％，每周喷水一次至盆底流水。

步骤四、施肥：白及苗播种6周后，苗长出2片叶后去掉地膜，施加1‰的全营养液(MS大量+微量)，每周2次至根系长至3cm(播种后12周)，每次20ml，25℃光照培养。

步骤五、移栽：待直播苗生长至长度6cm后即获得白及种苗，将种苗移栽即可。

由上述实施例，本发明所述的方法步骤简单、成本低；可以大大提高白及种子的萌发率到70～90％；成苗率高可达到60～70％。本发明采用泥炭土，黄土，椰丝和蛭石作为基质，基质肥力高，蛭石和椰丝配比加大基质的透气性，获得的白及种苗具有更加发达的根系与假鳞茎，白及种苗的质量更好。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种白及土培直播快繁的方法，包括以下步骤：

1)将无菌白及种子浸泡于无菌水中萌动，获得萌动种子；

2)将所述萌动种子撒播至基质中，置于23～25℃自然光照培养4～6周，获得白及幼苗；

3)培养所述白及幼苗2～8周获得白及种苗；培养获得所述白及种苗的过程中每隔2～4d喷施植物全营养液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述萌动的温度为23～25℃，所述萌动的时间为2～5d。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述萌动在光照和黑暗交替条件下进行，所述光照和黑暗交替条件为(16～20)h光照/(4～8)h黑暗交替。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述基质包括泥炭土、黄土、椰丝和蛭石。

5.根据权利要求4所述的方法其，特征在于，所述泥炭土、黄土、椰丝和蛭石的质量比为(4～6)：(2～4)：(1～2)：(0.3～0.7)。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述基质表面覆盖有农用地膜。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中培养获得所述白及幼苗过程中的湿度为85～95％。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述无菌白及种子来源于无菌白及蒴果，所述无菌白及蒴果的制备方法包括以下步骤：

A)酒精擦拭成熟的白及蒴果表面后用无菌水清洗，获得预消毒白及蒴果；

B)升汞浸泡所述预消毒白及蒴果后用无菌水清洗，获得无菌白及蒴果。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述升汞的质量浓度为0.08～0.12％。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤B)中所述浸泡的时间为5～8min。