CN111562368A - SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种SARS‑CoV‑2中和抗体检测试剂盒,其包括固相载体、SARS‑CoV‑2的S蛋白的第一抗原以及第二抗原;所述第二抗原标记有信号物质。通过免疫诊断技术来实现检测中和抗体来判断新冠病毒是否感染以及是否存在感染风险,该方法理论可靠,实际可行,只需在二级生物安全实验室就可完成。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学检测领域,具体而言,涉及一种SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒。
背景技术
冠状病毒科分为α、β、γ和δ4个属,α、β属的冠状病毒可感染哺乳动物和人。严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coro-navirus 2,SARS-CoV-2)属于β属的新型冠状病毒,圆形或椭圆形,直径60~140nm,电镜下呈皇冠样形状。与2002年出现的SARS-CoV类似,SARS-CoV-2同属于Sarbecovirus亚属(冠状病毒科,冠状病毒属),都是依靠人细胞表面ACE2蛋白作为细胞进入受体。蛋白序列分析发现,SARS-CoV-2与SARS-CoV的7个保守非结构蛋白氨基酸相似度为94.6%。
现有的对SARS-CoV-2的检测方法主要有核酸检测和抗体检测,主要方法有荧光PCR法、酶联免疫吸附法、胶体金层析法、化学发光法,其中核酸检测灵敏度高,特异性强,准确度高,但是对操作要求相对较高,检测时间长。抗体检测灵敏度较高,特异性较强,但是需要在被感染7~14天后才能出现IgM/IgG抗体。而且目前这些方法只能检测是否处于感染期,并不能针对治愈后患者是否存在再感染风险,以及普通大众是否存在暴露及感染风险等进行确认。
新型冠状病毒中和抗体是新型冠状病毒肺炎患者在染病的数天或约一周后血液内产生的一种抗体。中和抗体具有识别病毒表面的S蛋白(spike protein)的受体结合域(receptor binding domain,RBD)、阻断其与细胞表面血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)的结合的功能,从而发挥抗病毒作用。因此,中和抗体的检测可决定是否能够更安全地重返工作岗位或参加更多的社交活动,现阶段确认康复患者或无症状感染者有无再度感染风险,后期随着疫苗的研制成功并广泛应用,可作为疫苗效果的的评价指标。
新型冠状病毒的检测方法主要包括核酸检测和抗体检测,核酸检测对仪器的要求标准高,操作繁琐,耗时长,检测费用昂贵;抗体检测方法包括磁微粒化学发光发、胶体金法、普通化学发光法和酶联免疫法等,普通化学发光法检测时间长,检测效率低,主要依靠纯手动加样,操作繁琐,导致实验结果易误差大;酶促反应不够彻底,且易受温度、时间及材料浓度等外部干扰因素影响,检测时特异性低、灵敏度差、检测范围窄。
发明内容
为了实现本发明的上述目的,特采用以下技术方案:
本发明涉及一种SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒,其包括固相载体、SARS-CoV-2的S蛋白的第一抗原以及第二抗原;
所述第二抗原标记有信号物质。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
本发明所提供的新冠病毒中和抗体检测试剂盒,采用双抗原夹心法技术对冠病毒中和抗体进行检测,该方法理论可靠,实际可行,只需在二级生物安全实验室就可完成,且采用新冠病毒S蛋白抗原包被在固相载体上,新冠病毒中和抗体标记在例如发光标记物或酶标记物上,采用磁微粒化学发光法等技术结合例如化学发光仪测定,或者利用胶体金等免疫层析技术来进行快速诊断结果,判断血清或者血浆中的新冠病毒中和抗体。该种免疫分析技术下,灵敏度高,操作简单,检测时间小于1小时,结果重复性好,干扰因素少,特异性强。
该试剂盒可用于测定新冠病毒治愈患者体内中和抗体的含量,判断是否存在再次感染的风险;还可用于判断接受新冠抗体疫苗注射后,体内是否产生免疫抗体,是否存在暴露及感染的风险。该试剂盒还用于检测普通人群中中和抗体的含量,用于判断是否可以回到工作场所或者公共场所中。
具体实施方式
现将详细地提供本发明实施方式的参考,其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上,对本领域技术人员而言,显而易见的是,可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如,作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中,来产生更进一步的实施方式。
因此,旨在本发明覆盖落入所附权利要求的范围及其等同范围中的此类修改和变化。本发明的其它对象、特征和方面公开于以下详细描述中或从中是显而易见的。本领域普通技术人员应理解本讨论仅是示例性实施方式的描述,而非意在限制本发明更广阔的方面。
本发明涉及一种SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒,其包括固相载体、SARS-CoV-2的S蛋白的第一抗原以及第二抗原;
所述第二抗原标记有信号物质。
通过免疫诊断技术来实现检测中和抗体来判断新冠病毒是否感染以及是否存在感染风险,该方法理论可靠,实际可行,只需在二级生物安全实验室就可完成。
其中,所述固相载体与所述SARS-CoV-2的S蛋白抗原的第一抗原可以预先偶联好,也可以分别包装于所述试剂盒中,使用时再进行偶联。
SARS-CoV-2的S蛋白抗原可以为S蛋白全长片段,或是其部分片段。这样的片段能够与内源性的SARS-CoV-2中和抗体以及所述竞争性物质特异性的结合,例如RBD蛋白。
在一些实施方式中,所述固相载体选自磁颗粒、玻片、微孔滤膜、设置有加样孔的板材以及化学发光板中的一种;
所述微孔滤膜优选为硝酸纤维膜。
在一些实施方式中,所述磁颗粒为Fe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子,或它们与有机高分子材料的复合体。
磁微粒化学发光法以磁微粒为固相载体,其颗粒体积小,表面积大,扩大了反应面积,大大提高了反应灵敏度高,同时操作更加简便、迅速、无污染,能够借助分析仪器实现检测过程全自动化的测定,胶体金法可以实现一次单一人份的检测,有效的避免了交叉污染的风险,操作便捷,可直接目视判断,有利于在各级医院的快速广泛的开展。因而上述两种方法为本发明的优选方法。
在一些实施方式中,所述磁颗粒的表面修饰有一种或多种活性功能基团,所述活性功能基团包括-OH、-COOH、-NH2、-CHO、以及-SO3H中的一种或多种。
所述磁微粒可直接与新冠病毒S蛋白抗原偶联,也可将磁微粒用桥接物介导进行偶联。
桥接物可以选自蛋白、标记物-抗标记物复合物或适用于羧基和/或伯胺的交联剂中一种或多种;
所述蛋白可以选自牛血清白蛋白、卵白蛋白、钥孔血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白以及多聚赖氨酸中的至少一种。
所述标记物-抗标记物复合物中标记物/抗标记物的组合选自生物素或其衍生物/链霉亲和素(streptavidin),生物素或其衍生物/亲和素(avidin),生物素或其衍生物/中性抗生物素蛋白(NeutrAvidin),生物素或其衍生物/抗生物素或其衍生物抗体,半抗原/抗体,抗原/抗体,肽/抗体,受体/配体,地高辛/地高辛配基,碳水化合物/凝集素和多核苷酸/互补的多核苷酸;
其中生物素的衍生物为D-生物素、活化生物素、生物胞素、乙二胺生物素、尸胺生物素或脱硫生物素中的任一种。
所述适用于羧基和/或伯胺的交联剂选自二环己基碳二亚胺(DCC)、碳二亚胺(EDC)、N-羟基苯并三氮唑(HOBt)或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)。
在本发明中,信号物质指能够提供被检测的信号的物质,在一些实施方式中,所述信号指示物选自发色团、地高辛标记探针、电子致密物质、胶体金及可检测信号的酶中的任一种或多种。下面非限定部分列出这些标记:
·产生可检测信号的酶,如通过比色法、荧光和发光来检测,如辣根过氧化物酶,碱性磷酸酶,β-半乳糖苷酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。
·发色团,如荧光、量子点、荧光微球、发光化合物和染料。
·具有能被电子显微镜或通过其电特性,如传导性、电流分析、电压测量和电阻等检测的电子密度的基团。
·可检测基团,如其分子大小足以诱导在其物理和/或化学特性上可检测的修饰;这种检测可通过光学方法(如衍射、表面胞质团共振,表面变异和接触变异角度)或物理方法(如原子力谱学和隧道效应)实现。
·电子致密物质,如放射性分子(如32P,35S或125I)。
在一些具体的实施方式中,所述发色团选自发光化合物,进一步选自吖啶酯及其衍生物、金刚烷、鲁米诺、异鲁米诺等,进一步的,所述吖啶酯及其衍生物选自吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯对甲基磺酰胺及吖啶酯三氟甲基磺酰胺中的一种或多种。
在一些实施方式中,所述试剂盒还包括SARS-CoV-2中和抗体校准品溶液、SARS-CoV-2中和抗体标准品、稀释用缓冲液、洗脱液、保护蛋白溶液、发光底物溶液和反应杯中的至少一种。
在一些实施方式中,所述稀释用缓冲液中含有防腐剂。
在一些实施方式中,所述防腐剂选自硫柳汞、叠氮钠、抗生素类、proclin中的至少一种;所述硫柳汞的浓度不大于1‰;所述叠氮钠的浓度不大于1‰;所述抗生素类包括庆大霉素等;所述proclin的浓度不大于2‰。
在一些实施方式中,所述保护蛋白溶液中的保护蛋白选自新生牛血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白中的至少一种。
保护蛋白可以提供良好稳定反应环境,使抗原/抗体保持天然构象。本发明试剂盒中的抗原/抗体可以溶于所述保护蛋白溶液再包装于试剂盒中。
校准品中蛋白浓度低,易失活,可以采用1-30%质量浓度的保护蛋白降低溶液的极性,为蛋白提供可长期稳定保存的疏水环境。
在一些实施方式中,所述稀释用缓冲液中的表面活性剂包括吐温或Triton,优选为体积浓度为0.1%~1%的吐温20。
在一些实施方式中,所述Triton选自Triton X-100、Tween-20、Tween-80、TritonX-405、Triton X-114、Triton X-10、Triton X-40中的一种或多种。
表面活性剂能够在试剂加入到反应体系时,降低表面张力,提高分散性和稳定性。
在一些实施方式中,所述稀释用缓冲液中含有磷酸氢二钠2.5~3.2g/L、磷酸二氢钠0.3~0.4g/L,氯化钠8~9g/L,以及体积浓度为0.1%~1%的吐温20。
在一些实施方式中,所述稀释用缓冲液中含有磷酸氢二钠2.9g/L、磷酸二氢钠0.3g/L,氯化钠8.78g/L,以及体积浓度为0.1%的吐温20。所述稀释用缓冲液可以用于稀释与固相载体(例如磁颗粒)偶联的所述第一抗原。
在一些实施方式中,所述稀释用缓冲液中含有磷酸氢二钠2.68g/L、磷酸二氢钠0.39g/L,氯化钠8.5g/L,以及体积浓度为0.1%的吐温20。所述稀释用缓冲液可以用于稀释标记有信号物质(例如吖啶酯)的所述第二抗原。
本发明还涉及一种检测SARS-CoV-2中和抗体的方法,包括使用如上所述的试剂盒检测受试者血液样品中的SARS-CoV-2中和抗体。
上述用途的受试者可以指患者或怀疑携带有SARS-CoV-2的动物,特别是哺乳动物,例如蝙蝠、果子狸;优选为灵长类动物,更优选为人。
在一些实施方式中,受试者包括感染者、康复者、无症状感染者、疫苗接种者等。
在一些实施方式中,所述血液样品为血清或血浆,进一步优选为发病7天内急性期血清以及发病后第3~4周的恢复期血清。
所述方法可用于SARS-CoV-2的诊断。
所述方法可以用于诊断新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。
实施例1
本发明提供一种新冠病毒中和抗体磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法,具体步骤如下:
1)磁微粒标记的新型冠状病毒S蛋白抗原,包括磁微粒保存液的制备;
2)吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白抗原,包括稀释液的制备;
3)新型冠状病毒中和抗体校准品1的制备;
4)新型冠状病毒中和抗体校准品2的制备。
其他可能需要的材料:全自动免疫检验系统用底物A液、全自动免疫检验系统用底物B液、清洗液、反应杯,实验过程所需的纯化水。
所述步骤1)中磁微粒保存液的配制包括如下步骤:
1.1称取磷酸氢二钠2.87g,磷酸二氢钾0.27g,氯化钠8.18g、氯化钾0.20g、蔗糖50.00g于1L的容器中,加入适量的纯化水搅拌使其完全溶解;
1.2用移液器移取1.00mL proclin 300于10mL纯化水的烧杯中,完全溶解后倒入上述1L的容器中,加入纯化水至900mL并充分搅拌均匀;
1.3调节pH计测量溶液pH,使其控制在7.2-7.4之间;
1.4称取胰蛋白胨5.00g加入上述1L容器中,搅拌均匀,使其充分溶解;
1.5定容至1L,用0.2μm滤器过滤,过滤后贴好标签于2-8℃无菌环境下贮存。
所述步骤1)中磁微粒标记新型冠状病毒S蛋白抗原的制备包括如下步骤:
1.6将带羧基的磁微粒与碳二亚胺(EDC)分别按质量比1:1-3的比例混合;
1.7按每毫克磁微粒分别加入5-40μg抗原的比例加入新型冠状病毒S蛋白抗原,磁微粒与抗原质量比为100:1;
1.8在混匀情况下20-28℃分别标记0.5-2小时;
1.9标记后采用终浓度25mM的甘氨酸封闭多余的位点,22-26℃反应0.5小时,至少洗涤三次,用磁微粒保存液进行保存;
1.10采用方阵滴定法调试最佳浓度,用磁微粒保存液按照最佳浓度稀释磁微粒标记新型冠状病毒S蛋白抗原得到测新型冠状病毒中和抗体磁微粒,于2-8℃贮存;
所述步骤2)中稀释液的配制包括如下步骤:
2.1称取磷酸氢二钠2.90g,磷酸二氢钠0.30g,氯化钠8.78g于1L的容器中,加入适量的纯化
水搅拌,用移液器移取1.00mL吐温20搅拌使其完全溶解;
2.2用移液器移取1.00mL proclin 300于10mL纯化水的烧杯中,完全溶解后倒入上述1L的容
器中,加入纯化水至900mL并充分搅拌均匀;
2.3调节pH计测量溶液pH,使其pH控制在7.2-7.4之间;
2.4称取BSA(牛血清白蛋白)10g加入上述1L容器中,搅拌均匀,使其充分溶解;
2.5定容至1L,用0.2μm滤器过滤,过滤后贴好标签于2-8℃无菌环境下贮存;
所述步骤2)中吖啶酯标记新型冠状病毒S蛋白抗原的制备包括如下步骤:
2.6分别取10mol新型冠状病毒S蛋白,按照每10mol抗体分别加入吖啶酯25-200mol标记;
2.7加入戊二醛至戊二醛质量浓度为0.75-1.5%,在20-28℃条件下反应0.5-2小时,戊二醛为双功能团试剂,通过氨基连接单抗与吖啶酯,吖啶酯一般采用此方法标记。
2.8用pH 7.2-7.4的0.01M PBS透析,至少换液三次,透析后加入等体积甘油-20℃存放;
2.9采用方阵滴定法确定吖啶酯标记新型冠状病毒S蛋白抗原的最适工作浓度,用稀释液进行稀释,混匀即可,置2-8℃存放。
3.所述步骤3)和4)中校准品稀释液的配制:
3.1称取磷酸氢二钠2.68g,磷酸二氢钠0.39g,氯化钠8.5g于1L的容器中,加入适量的纯化水搅拌,用移液器移取1mL吐温20搅拌使其完全溶解;
3.2用移液器移取1mL proclin 300于10mL纯化水的烧杯中,完全溶解后倒入上述1L的容器中,加入纯化水至900mL并充分搅拌均匀;
3.3调节pH计测量溶液pH,使其pH控制在7.2-7.4之间;
3.4称取BSA 10g加入上述1L容器中,搅拌均匀,使其充分溶解;
3.5定容至1L,用0.2μm滤器过滤,过滤后贴好标签于2-8℃无菌环境下贮存。该稀释液为校准品稀释液。
3.6用校准品稀释液稀释新冠病毒中和抗体纯品至工作浓度。
本发明试剂盒的优点是采用了微粒子化学发光免疫分析技术,排除了人为和环境的影响,提高了试剂精密度;用微粒子做固相载体,扩大了反应表面积,线性范围更宽;全自动化,其操作更加简便易行。上述一种新冠病毒中和抗体检测试剂盒,采用双抗原夹心法联合磁微粒化学发光技术,使用磁微粒标记可以增大反应的灵敏度,吖啶酯作为标记物的直接化学发光,反应不需要催化剂,只要碱性环境即可进行,反应迅速,可以完全捕捉反应产生的光子,背景发光低,信噪比高,干扰因素少,在样本测定过程中实现了全自动化,使得浓度的检测可以简单、方便、快速、批量地进行,同时保证检测的系统误差较小。
实施例2
一种新型冠状病毒中和抗体快速诊断试剂盒的制备方法,试剂盒的卡盒中含有新型冠状病毒中和抗体检测试纸条,所述试纸条是由样品垫、金标垫、反应膜和吸水层依次粘贴在上,试纸条选择玻璃纤维做样品垫,吸水纸做吸水层,有粘附作用的纸卡做衬卡;所述金标垫是由胶体金标记的新型冠状病毒抗原载于玻璃纤维垫上制成,所述反应膜是在硝酸纤维膜上包被新型冠状病毒S蛋白抗原制成检测线,同时包被鼠抗IgG抗体制成质控线,具体制备方法包括以下步骤:
1.金标垫的制备
其是将胶体金标记的新型冠状病毒抗原载于载体玻璃纤维垫上,在硅化处理后的玻璃容器中加入浓度为0.01%的氯金酸,加热至沸腾,搅动下按照体积比100:2加入浓度为1%的柠檬酸三钠,继续煮沸25分钟,冷去后用超纯水恢复到原体积,制成直径为25nm左右的
胶体金颗粒,用0.lM K2CO3溶液调节胶体金pH为7.0,将胶体金与新型冠状病毒抗原混合,调节比例使抗原的最终浓度为3-6μg/ml,室温震荡反应30分钟,然后加入5%PEG2000至终浓度为0.25%,泪匀后室温静置5分钟,15000rpm离心30分钟后,弃去上请,加入与胶体金等体积的洗脱液充分溶解沉淀物,同样转速离心,弃去上清后,将沉淀用1/10初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解,4℃保存待用,用其包被玻璃纤维,每毫升胶体金标记抗体铺约10-15平方厘米的玻璃纤维垫,冷冻真空干燥后,分别切成0.4-0.6cm2金标垫块;所述洗脱液的组成配方为:pH9.3的Tris-HCl 0.05M、BSA10g/L;所述保存液的组成配方为:pH9.3的Tris-HCl 0.05M、蔗糖5g/L、BSA5g/L、甘氨酸lg/L、吐温-20 0.1lmL/L、硫柳汞钠0.5g/L、酷蛋白2g/L;
2.反应膜的制备
其是在硝酸纤维膜上包被新型冠状病毒S蛋白制成检测线,同时包被鼠抗IgG抗体制成质控线,选择0.01M pH7.5磷酸盐缓冲液作为包被液,所述包被液的组成配方为:Na2HPO4·12H2O 2.68g、NaH2PO4·2H2O 0.39g、超纯水1000mL;先用包被液冲洗划膜仪管道,设定划膜仪移动速度和包被浓度,然后加入检测线抗体和对照线抗原,在硝酸纤维膜上划线,检测线位于膜中间位置,质控线在检测线上方,二者的宽度为0.7-lmm且质控线和检测线相距4-5mm,包被后膜置室温晾40分钟,封闭液中浸泡5分钟,室温晾40分钟,保存特用;所述封闭液的组成配方为:BSA 20g、NaN30.5g、0.01M pH7.5 PB 1000mL;
3.试纸条的组装
将所述样品垫切成长度30cm和宽度28mm,金标垫切成长度30cm和宽度10-15mm,反应膜切成长度30cm和宽度25mm,水层剪切成长度30cm和宽度27mm,然后依次将其贴在衬卡上,组成大板后,切割成长度8cm和宽度3mm的单个人份试纸条,最后装入卡盒内。
本发明应用层析式双抗原夹心法的原理,将胶体金标记的新型冠状病毒抗原载于玻璃纤维垫上制成金标垫;反应膜是在硝酸纤维膜上包被新型冠状病毒S蛋白制成检测线,同时包被鼠抗IgG抗体制成质控线。当待检测样本中含有新型冠状病毒中和抗体,形成检测线和质控线两条紫红色线,判为阳性,反之则只有一条紫红色线,判为阴性。本发明的优点是:具有较高的特异
性和灵敏度,检测迅速、方便、快捷,操作简便,无需专门的设施,很少出现假阴性和假阳性的问题,对于新型冠状病毒的临床诊断与指导治疗具有重要作用;制备方法简便、稳定、重复性好。试剂盒采用胶体金诊断分析技术,用于检测人血清或血浆中的新型冠状病毒中和抗体,对指导和帮助新型冠状病毒的早期诊断和临床治疗与预防有重要作用。胶体金法新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒将以其快速、简单、经济等优点成为继磁微粒化学发光发后又一检测新型冠状病毒中和抗体的主要方法。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒,其包括固相载体、SARS-CoV-2的S蛋白的第一抗原以及第二抗原;
所述第二抗原标记有信号物质。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述固相载体选自磁颗粒、玻片、微孔滤膜、设置有加样孔的板材以及化学发光板中的一种。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述微孔滤膜为硝酸纤维膜。
4.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述磁颗粒为Fe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子,或它们与有机高分子材料的复合体。
5.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述磁颗粒的表面修饰有一种或多种活性功能基团,所述活性功能基团包括-OH、-COOH、-NH2、-CHO、以及-SO3H中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述信号物质选自发色团、地高辛标记探针、电子致密物质、胶体金及产生可检测信号的酶中的任一种或多种。
7.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述发色团选自发光化合物,进一步选自吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯对甲基磺酰胺及吖啶酯三氟甲基磺酰胺中的一种或多种。
8.根据权利要求1~7任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括SARS-CoV-2中和抗体校准品溶液、SARS-CoV-2中和抗体标准品、稀释用缓冲液、洗脱液、保护蛋白溶液、发光底物溶液和反应杯中的至少一种。
9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述保护蛋白溶液中的保护蛋白选自新生牛血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白中的至少一种。
10.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述稀释用缓冲液中的表面活性剂包括吐温或Triton,优选为体积浓度为0.1%~1%的吐温20。
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