CN113075401A - 新型冠状病毒总抗体检测试剂盒 - Google Patents

新型冠状病毒总抗体检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN113075401A
CN113075401A CN202011549351.XA CN202011549351A CN113075401A CN 113075401 A CN113075401 A CN 113075401A CN 202011549351 A CN202011549351 A CN 202011549351A CN 113075401 A CN113075401 A CN 113075401A
Authority
CN
China
Prior art keywords
novel coronavirus
antibody
reagent
kit
coronavirus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202011549351.XA
Other languages
English (en)
Inventor
胡雪凇
唐仁陶
于猛
孟令敏
高威
孙成艳
刘春平
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dirui Medical Technology Co Ltd
Changchun Dirui Industrial Co Ltd
Original Assignee
Dirui Medical Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dirui Medical Technology Co Ltd filed Critical Dirui Medical Technology Co Ltd
Priority to CN202011549351.XA priority Critical patent/CN113075401A/zh
Publication of CN113075401A publication Critical patent/CN113075401A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，属于化学发光体外诊断技术领域。本发明的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，包括：链酶亲和素磁微粒、吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白和生物素标记的新型冠状病毒S蛋白。该试剂盒采用链酶亲和素磁微粒‑生物素‑吖啶酯体系，夹心法检测新型冠状病毒总抗体，可以同时检测新型冠状病毒IgA抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG抗体和IgM抗体，检测结果完全可以代表新型冠状病毒总抗体结果，具有灵敏度更高，检出率更高的优点，且可直接用于全自动化学法光免疫分析仪上，无需大型仪器设备配合，成本较低，且无放射性污染，可大规模的开展和推广。

Description

新型冠状病毒总抗体检测试剂盒
技术领域
本发明属于化学发光体外诊断技术领域，涉及一种新型冠状病毒总抗体检测试剂盒。
背景技术
新型冠状病毒属于冠状病毒β属，是单链RNA病毒。病毒颗粒具有典型的冠状病毒特征，包膜表面覆有棒状突起，通常称之为棘突蛋白，可以与人体细胞表面的ACE-2受体结合，从而感染机体。由于部分感染此病毒的患者症状不明显，且该病毒的传染性较强，因此对于患者的确诊尤为重要。
因此，新型冠状病毒总抗体检测具有及其重大的临床应用价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种新型冠状病毒总抗体检测试剂盒。
本发明的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，包括：
链酶亲和素磁微粒；
吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白；
生物素标记的新型冠状病毒S蛋白。
优选的是，所述含有链酶亲和素磁微粒的粒径为1～3μm。
优选的是，所述吖啶酯与新型冠状病毒S蛋白的摩尔比为(1～10):1，尤其优选的为3:1。
优选的是，所述生物素与新型冠状病毒S蛋白的摩尔比为(1～10):1，尤其优选的为5:1。
优选的是，所述新型冠状病毒总抗体检测试剂盒包括R1试剂、R2试剂和 R3试剂；
R1试剂为含有链酶亲和素磁微粒的缓冲液；
R2试剂为含有吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白的缓冲液；
R3试剂为含有生物素标记的新型冠状病毒S蛋白的缓冲液。
更优选的是，所述R1试剂中，链酶亲和素磁微粒的浓度为0.01％～1％，尤其优选的为0.05％～0.072％，最优选为0.072％。
更优选的是，所述R1试剂中，缓冲液包括50mM MES、0.05％吐温-20和 0.05％Proclin300，pH6.5。
更优选的是，所述R2试剂中，吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白的浓度为 0.1μg/mL～2μg/mL，尤其优选为1μg/mL。
更优选的是，所述R2试剂中，缓冲液包括100mmol/L PB、0.1％～2.0％NaCl、0.01％～1％Tween-20、0.1％～0.3％proclin-300、0.01％～0.2％NaN3、2mmol/L EDTA-2Na、0.1％～2％BGG、0.1％～5％BSA和0.1％～2％酪蛋白，pH6.0。
更优选的是，所述R3试剂中，生物素标记的新型冠状病毒S蛋白的浓度为 0.1μg/mL～2μg/mL，尤其优选为0.7μg/mL。
更优选的是，所述R3试剂中，缓冲液包括100mmol/L PB、0.1％～2.0％NaCl、0.01％～1％Tween-20、0.01％～0.3％proclin-300、0.01％～0.2％NaN3、2mmol/L EDTA-2Na、0.1％～2％BGG和0.1％～5％BSA，pH7.6。
优选的是，所述新型冠状病毒总抗体检测试剂盒包括校准品、质控品中的一种或两种。
更优选的是，取新型冠状病毒S IgG抗体，用校准品基质稀释成2.00S/CO，作为高值校准品，取校准品基质赋值结果为0.40S/CO，作为低值校准品；
取新型冠状病毒S IgG抗体，用质控品基质稀释成2.00S/CO，作为阳性质控品，取质控品基质赋值结果为0.40S/CO，作为阴性质控品。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒采用链酶亲和素磁微粒-生物素- 吖啶酯体系，夹心法检测新型冠状病毒总抗体，可以同时检测新型冠状病毒IgA 抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG抗体和IgM抗体，检测结果完全可以代表新型冠状病毒总抗体结果。
本发明的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，具有更高的灵敏度，更高的检出率。
本发明的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒可直接用于全自动化学法光免疫分析仪上，无需大型仪器设备配合，成本较低，且无放射性污染，可大规模的开展和推广。
具体实施方式
为了进一步理解本发明，下面结合具体实施方式对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。
本发明的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，包括：链酶亲和素磁微粒、吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白和生物素标记的新型冠状病毒S蛋白。优选包括R1试剂、R2试剂和R3试剂，R1试剂为含有链酶亲和素磁微粒的缓冲液， R2试剂为含有吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白的缓冲液，R3试剂为含有生物素标记的新型冠状病毒S蛋白的缓冲液。还可以包括校准品和质控品中的一种或两种。
上述技术方案中，R1试剂中，链酶亲和素磁微粒的浓度为0.01％(m/v)～1％ (m/v)，尤其优选的为0.05％(m/v)～0.072％(m/v)，最优选为0.072％(m/v)；缓冲液包括50mMMES、0.05％吐温-20和0.05％Proclin300，pH6.5；链酶亲和素磁微粒的粒径为1～3μm。
上述技术方案中，R2试剂中，吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白的浓度为 0.1μg/mL～2μg/mL，尤其优选为1μg/mL；缓冲液包括100mmol/L PB、0.1％～2.0％ NaCl、0.01％～1％Tween-20、0.1％～0.3％proclin-300、0.01％～0.2％NaN3、2mmol/L EDTA-2Na、0.1％～2％BGG、0.1％～5％BSA和0.1％～2％酪蛋白，pH6.0；吖啶酯与新型冠状病毒S蛋白的摩尔比为(1～10):1，尤其优选的为3:1。吖啶酯可以为N-羟基丁二酰亚胺(NHS)-吖啶酯，结构式如式Ⅰ所示：
Figure RE-GDA0003051820430000031
式Ⅰ中，R1为
Figure RE-GDA0003051820430000041
R2和R3独立地选自：H、
Figure RE-GDA0003051820430000042
中的一种，n＝1-12；
R4为
Figure RE-GDA0003051820430000043
n＝1-12；
R5为
Figure RE-GDA0003051820430000044
上述技术方案中，R3试剂中，生物素标记的新型冠状病毒S蛋白的浓度为 0.1μg/mL～2μg/mL，尤其优选为0.7μg/mL；缓冲液包括100mmol/L PB、0.1％～2.0％ NaCl、0.01％～1％Tween-20、0.01％～0.3％proclin-300、0.01％～0.2％NaN3、2mmol/L EDTA-2Na、0.1％～2％BGG和0.1％～5％BSA，pH7.6；生物素与新型冠状病毒S 蛋白的摩尔比为(1～10):1，尤其优选的为5:1。生物素的结构式可以如式Ⅱ或式Ⅲ所示：
Figure RE-GDA0003051820430000045
式Ⅱ式Ⅲ
式Ⅱ和式Ⅲ中，n＝1-13。
上述技术方案中，取新型冠状病毒S IgG抗体，用校准品基质稀释成2.00 S/CO，作为高值校准品，取校准品基质赋值结果为0.40S/CO，作为低值校准品；
上述技术方案中，取新型冠状病毒S IgG抗体，用质控品基质稀释成2.00S/CO，作为阳性质控品，取质控品基质赋值结果为0.40S/CO，作为阴性质控品。
上述新型冠状病毒总抗体检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、R1试剂的制备
取链霉亲和素磁颗粒溶液，加入TBST溶液充分混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁颗粒，以缓冲液重复清洗后，用缓冲液稀释，得到R1试剂。
步骤二、R2试剂的制备
取新型冠状病毒S蛋白，用10KDa超滤离心管进行超滤离心，将原料缓冲液置换为标记缓冲液，离心机转速为9000rpm，离心时间为30min。原料缓冲液由20mM PB和0.01％SDS组成，pH 7.4；标记缓冲液由100mmol/L PB和 150mmol/L NaCl组成，pH6.0。
按照吖啶酯:新型冠状病毒S蛋白的摩尔比为(1～10):1加入吖啶酯原液，混匀，37℃标记4h。
标记反应结束后，加入封闭缓冲液，封闭时间为1h。封闭缓冲液由 100mmol/L PB、150mmol/L NaCl和10％赖氨酸，pH6.0。
封闭后用10KDa超滤离心管进行超滤离心，除去未偶联的吖啶酯，用缓冲液稀释，得到R2试剂。
步骤三、R3试剂的制备
取新型冠状病毒S蛋白，用10KDa超滤离心管进行超滤离心，将原料缓冲液置换为标记缓冲液，离心机转速为9000rpm，离心时间为30min。原料缓冲液由20mM PB和0.01％SDS组成，pH 7.4；标记缓冲液由100mmol/L PB和 150mmol/L NaCl组成，pH8.0。
按照生物素：新型冠状病毒S蛋白的摩尔比为(1～10):1，加入生物素原液，混匀，37℃标记4h。
标记反应结束后，加入封闭缓冲液，封闭时间为1h。封闭缓冲液由 100mmol/L PB、150mmol/L NaCl和10％赖氨酸，pH8.0。
封闭后用10KDa超滤离心管进行超滤离心，除去未偶联的生物素分子，用缓冲液稀释，得到R3试剂。
步骤四、校准品制备
取新型冠状病毒S IgG抗体，用校准品基质稀释成2.00S/CO，作为高值校准品，取校准品基质赋值结果为0.40S/CO，作为低值校准品。
步骤五、质控品制备
取新型冠状病毒S IgG抗体，用质控品基质稀释成2.00S/CO，作为阳性质控品，取质控品基质赋值结果为0.40S/CO，作为阴性质控品。
本发明的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒用于新型冠状病毒总抗体检测时，先测试校准品，校准合格后再测试质控品，质控品测试结果落在靶值范围内认为试剂质控合格，开始测试样本，根据样本发光值计算样本浓度。
本发明的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒的使用方法为：
以全自动化学发光免疫分析仪(CM180)为检测工具，方法学为双抗体夹心法，样本量10μL，R1试剂量40μL，R2试剂量50μL，R3试剂量50μL。反应杯中加入样本10μL，再分别加入R1试剂40uL和R3试剂50μL，孵育18min；洗涤；加入R2试剂50μL，孵育5min，洗涤。将反应物送入暗室，一次加入发光激发液A液(HNO3+H2O2溶液)和B液(NaOH溶液)进行反应，最后记录相对发光强度(RLU)。根据仪器内射频卡内的公式将检测出的相对发光强度 (RLU)带入计算浓度值。
在本发明中所使用的术语，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义，除非另有说明。为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合实施例对本发明作进一步的详细介绍。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、装置、仪器、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，包括：R1试剂、R2试剂、R3试剂、校准品和质控品。
R1试剂为含有0.072％的链酶亲和素磁微粒(3.0μm)的缓冲液，缓冲液由 50mMMES、0.05％吐温-20和0.05％Proclin300组成，pH6.5。
R2试剂为含有1μg/mL的吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白(标记摩尔比 3:1)的缓冲液，缓冲液由100mmol/L PB、0.9％NaCl、0.05％Tween-20、0.2％ proclin-300、0.1％NaN3、2mmol/L EDTA-2Na、1％BGG、2％BSA和0.5％酪蛋白组成，pH6.0。
R3试剂为含有0.7μg/mL的生物素标记的新型冠状病毒S蛋白(标记摩尔比5:1)的缓冲液，缓冲液由100mmol/L PB、0.9％NaCl、0.05％Tween-20、0.05％ proclin-300、0.02％NaN3、2mmol/L EDTA-2Na，0.1％BGG和0.1％BSA组成， pH7.6。
上述新型冠状病毒总抗体检测试剂盒的制备：
步骤一、R1试剂的制备
取链霉亲和素磁颗粒溶液，加入TBST溶液充分混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁颗粒，以缓冲液重复清洗3次后，用缓冲液稀释，得到R1试剂；缓冲液由50mM MES、0.05％吐温-20和0.05％ Proclin300组成，pH6.5。
步骤二、R2试剂的制备
取0.5mg新型冠状病毒S蛋白，用10KDa超滤离心管进行超滤离心，将原料缓冲液置换为标记缓冲液，离心机转速为9000rpm，离心时间为30min。原料缓冲液由20mM PB和0.01％SDS组成，pH 7.4；标记缓冲液由100mmol/L PB 和150mmol/L NaCl组成，pH6.0。
按照吖啶酯:新型冠状病毒S蛋白的摩尔比为3:1加入吖啶酯原液，混匀， 37℃标记4h。
标记反应结束后，加入封闭缓冲液，封闭时间为1h。封闭缓冲液由100mmol/L PB、150mmol/L NaCl和10％赖氨酸组成，pH6.0。
封闭后用10KDa超滤离心管进行超滤离心，除去未偶联的吖啶酯。超滤结束后，测定蛋白浓度，作为中间品保存，用于试剂配制。
取中间品和缓冲液，配制成吖啶酯标记新型冠状病毒S蛋白浓度为1.0μg /mL的R2试剂。缓冲液由100mmol/L PB、0.9％NaCl、0.05％Tween-20、0.2％ proclin-300、0.1％NaN3、2mmol/L EDTA-2Na、1％BGG、2％BSA和0.5％酪蛋白组成，pH6.0。
步骤三、R3试剂的制备：
取0.5mg新型冠状病毒S蛋白，用10KDa超滤离心管进行超滤离心，将缓冲液置换为标记缓冲液，离心机转速为9000rpm，离心时间为30min。原料缓冲液由20mM PB和0.01％SDS组成，pH 7.4；标记缓冲液由100mmol/L PB和 150mmol/L NaCl组成，pH8.0。
按照生物素：新型冠状病毒S蛋白摩尔比为5:1，加入生物素原液，混匀，37℃标记4h。
标记反应结束后，加入封闭缓冲液，封闭时间为1h。封闭缓冲液由 100mmol/L PB、150mmol/L NaCl和10％赖氨酸组成，pH8.0。
封闭后用10KDa超滤离心管进行超滤离心，除去未偶联的生物素分子。超滤结束后，测定蛋白浓度，作为中间品保存。用于试剂配制。
取中间品和缓冲液，配制成新型冠状病毒S蛋白浓度为0.7μg/mL的R3试剂。缓冲液由100mmol/L PB、0.9％NaCl、0.05％Tween-20、0.05％proclin-300、 0.02％NaN3、2mmol/LEDTA-2Na、0.1％BGG和0.1％BSA组成，pH7.6。
步骤四、校准品制备
取新型冠状病毒S IgG抗体，用校准品基质稀释成2.00S/CO，作为高值校准品；取校准品基质赋值结果为0.40S/CO，作为低值校准品。
步骤五、质控品制备
取新型冠状病毒S IgG抗体，用质控品基质稀释成2.00S/CO，作为阳性质控品；取质控品基质赋值结果为0.40S/CO，作为阴性质控品。
实施例2
新型冠状病毒IgG抗体企业参考品的制备：
1.设计依据
新型冠状病毒IgG抗体企业参考品设计方案是根据新型冠状病毒IgG抗体检测试剂(酶免法)国家参考品、新型冠状病毒IgG抗体检测试剂国家参考品、2019新型冠状病毒抗原/抗体检测试剂注册技术审评要点(试行)为依据设计的。
2.设计目的
本品系用新型冠状病毒IgG抗体阴性和阳性样本组成，适用于本发明的化学发光免疫分析法和现有技术中的胶体金法对新型冠状病毒IgG抗体、新型冠状病毒总抗体诊断试剂的质量评价。
3.设计内容
企业参考品组成如下，样本来源于医院收集/商品化样本：
3.1阴性参考品：用于控制诊断试剂的特异性。由25支阴性样本组成，其中纳入冠状病毒229E、冠状病毒NL63、冠状病毒OC43、冠状病毒HKU1、甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒(Yamagata、Victoria)抗体、副流感病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体、腺病毒抗体、EB病毒抗体、麻疹病毒抗体、人巨细胞病毒抗体、腮腺炎病毒抗体、水痘-带状疱疹病毒抗体、肺炎支原体抗体、肺炎衣原体抗体、风疹病毒抗体、弓形虫抗体、单纯疱疹病毒抗体、柯萨奇病毒抗体、丙肝病毒抗体、梅毒螺旋体抗体、获得性免疫缺陷病毒抗体、抗核抗体、HAMA 样本。以上干扰及特异性样本需经相应检测试剂盒进行确认后使用，每种样本一份。
3.2阳性参考品：用于控制诊断试剂对新型冠状病毒IgG抗体、新型冠状病毒总抗体样品的检出能力。由10支强、中、弱阳性样本组成，以新型冠状病毒总抗体试剂浓度范围进行设定，见下表，其中阳性样本应包含不同来源及特征的新型冠状病毒感染样本，各5支。
表1新型冠状病毒IgG抗体企业阳性参考品浓度范围
Figure RE-GDA0003051820430000091
3.3最低检测限参考品：用于控制诊断试剂的最低检测量，由10支样本组成，设置L1浓度范围为18～24S/CO，进行2倍稀释，依次共完成10个稀释系列，将10个稀释梯度的样本依次标记为L1～L10，其中包含检测限水平 (0.5～1.5S/CO)。
3.4精密度参考品：用于控制诊断试剂的精密性。由4支样本组成，其中包含阴性、最低检测限附近(0.5～1.5S/CO)、中等偏弱阳(3～6S/CO)和弱阳 (2.0～3.0S/CO)的样本，样本依次标记为J1～J4。
3.5参考品规格：
(1)阴性参考品25支，0.1mL/支
(2)阳性参考品10支，0.1mL/支
(3)最低检测限参考品10支，0.1mL/支
(4)精密度参考品4支，0.5mL/支
注：配制前，需将样本进行灭活处理，灭活条件60℃水浴1h。
4.检测标准
4.1阴性参考品符合率25支阴性参考品检测符合率(-/-)为25/25。
4.2阳性参考品符合率10支阳性参考品检测符合率(+/+)为10/10。
4.3最低检测限：L1～L3应均为阳性，L4～L10可为阳性或阴性。
4.4精密度参考品，其中：
4.4.1化学发光免疫分析法：精密度参考品(J1、J2、J3)，分别平行检测10 次，其中J1结果应均为阴性，S/CO值的标准差(SD)应不高于0.2S/CO；J2 结果可阴可阳，J3结果应均为阳性，S/CO值的变异系数(CV)均应不高于10％。
4.4.2胶体金法：精密度参考品(J1、J3、J4)其中J1结果应均为阴性；J3 结果均为阳性，J4结果应均为阳性。
5.储藏条件
置于-20℃或以下条件下保存。
6.注意事项
6.1本参考品应按有传染性物品处理，应根据我国针对新型冠状病毒相关生物安全性的法律法规、指南、标准等进行操作和处理。
6.2根据验证结果，判定企业参考品稳定性。
实施例3
新型冠状病毒IgM抗体企业参考品的制备：
1.设计依据
新型冠状病毒IgM抗体企业参考品设计方案是根据新型冠状病毒IgM抗体检测试剂(酶免法)国家参考品、新型冠状病毒IgM抗体检测试剂国家参考品、 2019新型冠状病毒抗原/抗体检测试剂注册技术审评要点(试行)为依据设计的。
2.设计目的
本品系用新型冠状病毒IgM抗体阴性和阳性样本组成，适用于迪瑞化学发光免疫分析法和胶体金法新型冠状病毒IgM抗体、新型冠状病毒总抗体诊断试剂的质量评价。
3.设计内容
企业参考品组成如下，样本来源于医院收集/商品化样本：
3.1阴性参考品：用于控制诊断试剂的特异性。由25支阴性样本组成，其中纳入冠状病毒229E、冠状病毒NL63、冠状病毒OC43、冠状病毒HKU1、甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒(Yamagata、Victoria)抗体、副流感病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体、腺病毒抗体、EB病毒抗体、麻疹病毒抗体、人巨细胞病毒抗体、腮腺炎病毒抗体、水痘-带状疱疹病毒抗体、肺炎支原体抗体、肺炎衣原体抗体、风疹病毒抗体、弓形虫抗体、单纯疱疹病毒抗体、柯萨奇病毒抗体、丙肝病毒抗体、梅毒螺旋体抗体、获得性免疫缺陷病毒抗体、抗核抗体、HAMA 样本。以上干扰及特异性样本需经相应检测试剂盒进行确认后使用，每种样本一份。
3.2阳性参考品：用于控制诊断试剂对新型冠状病毒IgM抗体、新型冠状病毒总抗体样品的检出能力。由10支强、中、弱阳性样本组成，以新型冠状病毒总抗体试剂浓度范围进行设定，见下表，其中阳性样本应包含不同来源及特征的新型冠状病毒感染样本，各5支。
表2新型冠状病毒IgM抗体企业阳性参考品浓度范围
Figure RE-GDA0003051820430000111
Figure RE-GDA0003051820430000121
3.3最低检测限参考品：用于控制诊断试剂的最低检测量，由10支样本组成，设置L1浓度范围为18～24S/CO，进行2倍稀释，依次共完成10个稀释系列，将10个稀释梯度的样本依次标记为L1～L10，其中包含检测限水平 (0.5～1.5S/CO)。
3.4精密度参考品：用于控制诊断试剂的精密性。由4支样本组成，其中包含阴性、最低检测限附近(0.5～1.5S/CO)、中等偏弱阳(3～6S/CO)和弱阳 (2.0～3.0S/CO)的样本，样本依次标记为J1～J4。
3.5参考品规格：
(1)阴性参考品25支，0.1mL/支
(2)阳性参考品10支，0.1mL/支
(3)最低检测限参考品10支，0.1mL/支
(4)精密度参考品4支，0.5mL/支
注：配制前，需将样本进行灭活处理，灭活条件60℃水浴1小时。
4.检测标准
4.1阴性参考品符合率25支阴性参考品检测符合率(-/-)为25/25。
4.2阳性参考品符合率10支阳性参考品检测符合率(+/+)为10/10。
4.3最低检测限：L1～L3应均为阳性，L4～L10可为阳性或阴性。
4.4精密度参考品，其中：
4.4.1化学发光免疫分析法：精密度参考品(J1、J2、J3)，分别平行检测 10次，其中J1结果应均为阴性，S/CO值的标准差(SD)应不高于0.2S/CO； J2结果可阴可阳，J3结果应均为阳性，S/CO值的变异系数(CV)均应不高于10％。
4.4.2胶体金法：精密度参考品(J1、J3、J4)其中J1结果应均为阴性；J3 结果均为阳性，J4结果应均为阳性。
5.储藏条件
置于-20℃或以下条件下保存。
6.注意事项
6.1本参考品应按有传染性物品处理，应根据我国针对新型冠状病毒相关生物安全性的法律法规、指南、标准等进行操作和处理。
6.2根据验证结果，判定企业参考品稳定性。
对实施例1制备的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒性能评估：
1、新型冠状病毒IgG抗体企业参考品测试
(1)阴性参考品符合率
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgG抗体企业阴性参考品，结果如表3：
表3新型冠状病毒IgG抗体企业阴性参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000131
Figure RE-GDA0003051820430000141
(2)阳性参考品符合率
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgG抗体企业阳性参考品，结果如表4：
表4新型冠状病毒IgG抗体企业阳性参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000142
Figure RE-GDA0003051820430000151
(3)最低检测限
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgG抗体企业最低检测限参考品，结果如表5：
表5新型冠状病毒IgG抗体最低检测限参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000152
(4)精密度
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgG抗体精密度参考品，重复检测 10次，计算10次测量结果的平均值
Figure RE-GDA0003051820430000153
和标准差SD，根据公式(1)计算变异系数(CV)。
Figure RE-GDA0003051820430000154
式中：CV—变异系数；
SD—测量结果的标准差；
Figure RE-GDA0003051820430000155
—测量结果的平均值
表6新型冠状病毒IgG抗体精密度参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000161
2、新型冠状病毒IgM抗体企业参考品测试
(1)阴性参考品符合率
用实施例1试剂盒检测新型冠状病毒IgM抗体企业阴性参考品，结果如表 7：
表7新型冠状病毒IgM抗体企业阴性参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000162
Figure RE-GDA0003051820430000171
(2)阳性参考品符合率
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgM抗体企业阳性参考品，结果如表8：
表8新型冠状病毒IgM抗体企业阳性参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000172
Figure RE-GDA0003051820430000181
(3)最低检测限
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgM抗体企业最低检测限参考品，结果如表9：
表9新型冠状病毒IgM抗体最低检测限参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000182
(4)精密度
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgM抗体精密度参考品，重复检测 10次，计算10次测量结果的平均值
Figure RE-GDA0003051820430000183
和标准差SD，根据公式(1)计算变异系数(CV)。
表10新型冠状病毒IgM抗体精密度参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000191
3、新型冠状病毒IgG抗体国家参考品的验证测试：
(1)国家阴性参考品符合率
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgG抗体国家阴性参考品，结果如表11。
表11新型冠状病毒IgG抗体国家阴性参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000192
Figure RE-GDA0003051820430000201
结果判定：
国家阴性参考品符合率的合格指标为：应不低于24/25，本次测试结果为 24/25，符合国家阴性参考品符合率要求，判定合格。
(2)国家阳性参考品符合率
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgG抗体国家阳性参考品，结果如表12：
表12新型冠状病毒IgG抗体国家阳性参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000202
Figure RE-GDA0003051820430000211
结果判定：
国家阳性参考品符合率的合格指标为：应为10/10，本次测试结果为10/10，符合国家阳性参考品符合率要求，判定合格。
(3)国家最低检测限参考品
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgG抗体国家最低检测限参考品，结果如表13：
表13新型冠状病毒IgG抗体国家最低检测限参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000212
Figure RE-GDA0003051820430000221
结果判定：
国家最低检测限参考品的合格指标为：L1～L2为阳性，L3～L10为阳性或阴性，本次测试结果为L1～L2为阳性，L3为阳性，L4～L10为阴性，符合国家最低检测限参考品合格要求，判定合格。
(4)国家精密度参考品
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgG抗体国家精密度参考品，结果如表14
表14新型冠状病毒IgG抗体国家精密度参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000222
结果判定：
国家精密度参考品的合格指标为：平行检测10次，结果应均为阳性，检测值的变异系数(CV)应不高于15％。本次测试结果为10次均为阳性，变异系数(CV) 为9.67％，符合国家精密度参考品合格要求，判定合格。
4、新型冠状病毒IgM抗体国家参考品的验证测试：
(1)国家阴性参考品符合率
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgM抗体国家阴性参考品，结果如表15：
表15新型冠状病毒IgM抗体国家阴性参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000231
Figure RE-GDA0003051820430000241
结果判定：
国家阴性参考品符合率的合格指标为：应不低于24/25，本次测试结果为 24/25，符合国家阴性参考品符合率要求，判定合格。
(2)国家阳性参考品符合率
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgM抗体国家阳性参考品，结果如表16：
表16新型冠状病毒IgM抗体国家阳性参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000242
结果判定：
国家阳性参考品符合率的合格指标为：应为10/10，本次测试结果为10/10，符合国家阳性参考品符合率要求，判定合格。
(3)最低检测限
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgM抗体国家最低检测限参考品，结果如表17：
表17新型冠状病毒IgM抗体国家最低检测限参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000251
结果判定：
国家最低检测限参考品的合格指标为：L1～L3为阳性，L4～L10为阳性或阴性，本次测试结果为L1～L3为阳性，L4～L10为阴性，符合国家最低检测限参考品合格要求，判定合格。
(4)精密度
用实施例1的试剂盒检测新型冠状病毒IgM抗体国家精密度参考品，结果如表18
表18新型冠状病毒IgM抗体国家精密度参考品检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000252
Figure RE-GDA0003051820430000261
结果判定：
国家精密度参考品的合格指标为：平行检测10次，结果应均为阳性，检测值的变异系数(CV)应不高于15％。本次测试结果为10次均为阳性，变异系数(CV) 为12.63％，符合国家精密度参考品合格要求，判定合格。
5、实时稳定性研究
用实施例1的试剂盒分0时间和6个月检测校准品L和H(批号：20200504)，结果如表19：
表19实时稳定性研究检测结果
Figure RE-GDA0003051820430000262
结果判定：实时稳定性研究合格指标为：衰减不大于15％，本次结果为6 个月实时稳定性研究，均符合指标要求，判定合格。由于新冠特殊性，到目前为止还不到一年，所以6个月实时稳定性研究并不能作为试剂真正效期，截至目前只能说试剂效期6个月没有问题，后续还需要对试剂实时稳定性进行持续验证。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，其特征在于，包括：
链酶亲和素磁微粒；
吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白；
生物素标记的新型冠状病毒S蛋白。
2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，其特征在于，所述链酶亲和素磁微粒的粒径为1～3μm。
3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯与新型冠状病毒S蛋白的摩尔比为(1～10):1。
4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，其特征在于，所述生物素与新型冠状病毒S蛋白的摩尔比为(1～10):1。
5.根据权利要求1～4任何一项所述的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒总抗体检测试剂盒包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；
R1试剂为含有链酶亲和素磁微粒的缓冲液；
R2试剂为含有吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白的缓冲液；
R3试剂为含有生物素标记的新型冠状病毒S蛋白的缓冲液。
6.根据权利要求5所述的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中，链酶亲和素磁微粒的浓度为0.01％～1％，缓冲液含有50mM MES、0.05％吐温-20和0.05％Proclin300，pH6.5。
7.根据权利要求5所述的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中，吖啶酯标记的新型冠状病毒S蛋白的浓度为0.1μg/mL～2μg/mL，缓冲液含有100mmol/LPB、0.1％～2％NaCl、0.01％～1％Tween-20、0.1％～0.3％proclin-300、0.01％～0.2％NaN3、2mmol/L EDTA-2Na、0.1％～2％BGG、0.1％～5％BSA和0.1％～2％酪蛋白，pH6.0。
8.根据权利要求5所述的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，其特征在于，所述R3试剂中，生物素标记的新型冠状病毒S蛋白的浓度为0.1μg/mL～2μg/mL，缓冲液含有100mmol/LPB、0.1％～2％NaCl、0.01％～1％Tween-20、0.01％～0.3％proclin-300、0.01％～0.2％NaN3、2mmol/L EDTA-2Na、0.1％～2％BGG和0.1％～5％BSA，pH7.6。
9.根据权利要求1～4任何一项所述的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒总抗体检测试剂盒包括校准品、质控品中的一种或两种。
10.根据权利要求9所述的新型冠状病毒总抗体检测试剂盒，其特征在于，取新型冠状病毒S IgG抗体，用校准品基质稀释成2.00S/CO，作为高值校准品，取校准品基质赋值结果为0.40S/CO，作为低值校准品；
取新型冠状病毒S IgG抗体，用质控品基质稀释成2.00S/CO，作为阳性质控品，取质控品基质赋值结果为0.40S/CO，作为阴性质控品。
CN202011549351.XA 2020-12-24 2020-12-24 新型冠状病毒总抗体检测试剂盒 Pending CN113075401A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011549351.XA CN113075401A (zh) 2020-12-24 2020-12-24 新型冠状病毒总抗体检测试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011549351.XA CN113075401A (zh) 2020-12-24 2020-12-24 新型冠状病毒总抗体检测试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113075401A true CN113075401A (zh) 2021-07-06

Family

ID=76609159

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011549351.XA Pending CN113075401A (zh) 2020-12-24 2020-12-24 新型冠状病毒总抗体检测试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113075401A (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110146692A (zh) * 2019-05-28 2019-08-20 迪瑞医疗科技股份有限公司 一种基于吖啶酯化学发光、链霉亲和素磁珠-生物素放大反应体系及检测试剂盒
CN111562368A (zh) * 2020-06-18 2020-08-21 威海威高生物科技有限公司 SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110146692A (zh) * 2019-05-28 2019-08-20 迪瑞医疗科技股份有限公司 一种基于吖啶酯化学发光、链霉亲和素磁珠-生物素放大反应体系及检测试剂盒
CN111562368A (zh) * 2020-06-18 2020-08-21 威海威高生物科技有限公司 SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111337682B (zh) 一种新型冠状病毒IgM/IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒
CN111337673B (zh) 一种用于新型冠状病毒免疫检测的合成多肽组合物及应用
CN105352946B (zh) 一种使用磁微粒化学发光定量检测抗SS-B抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法
EP0355099B1 (en) Immunoglobulin assay method
CN107817232A (zh) 用于进行过敏症和自身免疫性疾病的诊断测定的自动化免疫分析系统
CN103278651A (zh) 一种肌红蛋白纳米磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
CN104237513A (zh) 一种甲状腺过氧化物酶抗体磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒
CN104155449A (zh) 一种检测TORCH IgM抗体的方法及试剂盒和该试剂盒的制备方法
CN113075402A (zh) 一种新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒
CN111474340B (zh) 一种用于新型冠状病毒检测的酶标记的抗原、制备方法及试剂盒与应用
CN101539576A (zh) 乙型肝炎病毒前s1抗原化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法
CN110346557A (zh) 一种检测试剂盒
CN114184604A (zh) 一种用于检测神经丝轻链的试剂盒及其方法与应用
CN110672850A (zh) 甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒及其制备方法
CN115639367A (zh) 一种检测抗角蛋白抗体IgG的化学发光免疫试剂盒及应用
CN106324254A (zh) 一种抗胰岛素抗体检测试剂盒及其检测方法
CN107860914A (zh) 一种抗线粒体抗体IgG的检测试剂盒及其检测方法
EP0201211A1 (en) Method and compositions for visual solid phase immunoassays based on luminescent microspheric particles
CN107462721B (zh) 细胞角蛋白19片段的板式化学发光法检测试剂盒及制备方法
CN113777326A (zh) 一种高特异检测肝素结合蛋白的试剂盒及其应用
CN109142743A (zh) 一种自免肝抗体的多项检测试剂盒
CN113075401A (zh) 新型冠状病毒总抗体检测试剂盒
CN111007248A (zh) 一种检测风疹病毒IgM抗体的化学发光免疫分析试剂盒
JPH03502248A (ja) アッセイ用水性洗浄液、診断試験キット及び単純ヘルペスウイルスの測定方法
CN109975538A (zh) 一种检测牛结核病IFN-γ和牛副结核病抗体的试纸条及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20210706