CN113238046A - 检测冠状病毒抗体的试剂盒、冠状病毒抗体的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及检测冠状病毒抗体的试剂盒、冠状病毒抗体的检测方法。本发明提供的试剂盒可用于检测冠状病毒抗体，其利用抗人IgG抗体或其活性功能片段可以结合冠状病毒疫苗原液与冠状病毒抗体的结合物的特性，从而实现对样本中冠状病毒抗体的检测。该试剂盒用于检测冠状病毒抗体时，检测过程无需在BSL‑3实验室进行即可快速获得检测结果，具有操作简便、特异性高、检测通量高的优点。

Description

检测冠状病毒抗体的试剂盒、冠状病毒抗体的检测方法

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种检测冠状病毒抗体的试剂盒，冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段在制备检测冠状病毒抗体检测试剂中的用途，以及一种冠状病毒抗体的检测方法。

背景技术

冠状病毒(Coronavirus)是自然界广泛存在的一大类病毒，是直径约80～120nm的RNA病毒。目前已发现有七种可感染人类的冠状病毒，分别是人冠状病毒229E(HCoV-229E)、HCoV-OC43、SARS病毒(SARS-CoV)、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、MERS病毒(MERS-CoV)以及新型冠状病毒(SARS-CoV-2)。

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)是由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引发的急性呼吸道传染病，在全球各国大规模爆发并急速扩散，目前已成为全球性重大的公共卫生事件，并成为人类历史上致死人数最多的流行病之一。

新型冠状病毒包含四种主要的结构蛋白：刺突(Spike，S)蛋白、膜(Membrane，M)蛋白、包膜(Envelope，E)蛋白和核衣壳(Nucleocapsid，N)蛋白。S蛋白是位于病毒囊膜表面的同源三聚体蛋白，由N端的S1亚基和C端的S2亚基组成。SARS-CoV-2通过位于S1亚基中的受体结合结构域(Receptor Binding Domain，RBD)识别和结合宿主细胞表面的血管紧张素转化酶2(Angiotensin-converting Enzyme 2，ACE2)，触发细胞膜融合级联反应，从而进入细胞造成感染。

面对肆虐的新冠疫情，新型冠状病毒疫苗被认为是新型冠状病毒的首选防护手段。已批准使用的疫苗III期临床试验中，尽管接种疫苗的受试者有一定的感染率，但相对于安慰剂组，已经证明了疫苗对疾病的保护力。同时，疫苗临床及相关研究数据显示，中和抗体在防止(或减轻)新型冠状病毒感染中起着重要的作用，因此对于中和抗体的检测也至关重要。中和抗体检测的实验室“金标准”是感染抑制试验，主要包括蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test，PRNT)和微量中和试验(Micro-neutralization assay，MNA)。对于新冠中和抗体的检测，两种方法均将定量SARS-CoV-2病毒与不同稀释度的待测样本混合后，接种到单层Vero细胞上。通过细胞的病毒变程度，建立抑制曲线，评估样本中中和抗体的滴度。两种方法中均涉及SARS-CoV-2活病毒，对试验环境的生物安全等级要求高。

发明内容

本发明目的在于提供一种检测冠状病毒抗体的试剂盒，以及一种冠状病毒抗体的检测方法，旨在解决现有冠状病毒抗体检测技术中存在的对生物安全级别要求高、操作复杂、检测通量低的技术问题。

为了实现上述发明目的，本发明一方面，提供了一种检测冠状病毒抗体的试剂盒，其包括冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段。

本发明提供的试剂盒，利用冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段作为试剂盒组分，从而实现对冠状病毒抗体的检测，具有操作简便、特异性高、检测通量高的优点，可满足大规模检测的需求。

本发明另一方面，提供了冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段在制备检测冠状病毒抗体检测试剂中的用途。

本发明利用抗人IgG抗体或其活性功能片段可以结合冠状病毒疫苗原液与冠状病毒抗体的结合物的特性，从而实现对样本中冠状病毒抗体的检测。该试剂盒可以实现对冠状病毒抗体的定量检测，且检测过程无需在BSL-3实验室进行即可快速获得检测结果，具有操作简便、特异性高、检测通量高的优点。

本发明最后一方面，提供了一种冠状病毒抗体的检测方法，其包括如下步骤：

提供待测样本、冠状病毒疫苗原液、抗人IgG抗体或其活性功能片段、固相载体和发光底物，其中，所述抗人IgG抗体或其活性功能片段标记有信号标记物；

将所述待测样本、所述冠状病毒疫苗原液和所述固相载体进行混合处理，得到第一结合物；

将所述第一结合物与所述抗人IgG抗体或其活性功能片段进行混合处理，得到第二结合物；

将所述第二结合物与所述发光底物进行混合反应，测量所述混合反应产生的光子数，所述光子数与所述待测样本中冠状病毒中和抗体的含量成正比。

本发明提供的冠状病毒抗体检测方法利用间接法检测原理，以冠状病毒疫苗原液作为固相抗原，通过结合待测样本中的冠状病毒抗体后形成第一结合物，再与标记有信号标记物的抗人IgG结合或其活性功能片段形成第二结合物用于发光检测。该检测方法可以快速检测待测样本中的冠状病毒抗体，具有操作简便、特异性高、检测通量高的优点，可满足大规模检测的需求。

附图说明

图1表示实施例提供的试剂盒在检测时的定标曲线。

具体实施方式

本发明实施例提供了一种检测冠状病毒抗体的试剂盒，其包括冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段。

本发明实施例提供的试剂盒，利用冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段作为试剂盒组分，从而实现对冠状病毒抗体的检测，具有操作简便、特异性高、检测通量高的优点，可满足大规模检测的需求。

本发明实施例提供的试剂盒中，冠状病毒疫苗原液是制备冠状病毒疫苗的中间产物，包括但不限于冠状病毒灭活疫苗原液、冠状病毒亚单位疫苗原液、冠状病毒载体(如腺病毒载体、水疱性口炎病毒载体)疫苗原液、冠状病毒减毒活疫苗原液等，优选冠状病毒灭活疫苗原液。其中，冠状病毒是系统分类上属于套式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)的病毒，包括但不限于SARS-CoV-2、SARS-CoV、MERS-CoV等。本发明实施例提供的冠状病毒疫苗原液可按照本领域常规的制备冠状病毒疫苗的方法制备获得，例如，在制备新型冠状病毒灭活疫苗原液时，可通过将SARS-CoV-2接种于Vero细胞，经培养、收获、灭活、纯化步骤，获得新型冠状病毒灭活疫苗原液。

本发明实施例中，冠状病毒抗体包括冠状病毒中和抗体。冠状病毒抗体与冠状病毒中和抗体具有好的相关性，因此，本发明实施例提供的试剂盒在检测冠状病毒抗体的同时，可实现对冠状病毒中和抗体的定性检测。

在一些实施例中，冠状病毒疫苗原液为新型冠状病毒疫苗原液，相应地，包含该新型冠状病毒疫苗原液的试剂盒可用于检测的冠状病毒抗体为新型冠状病毒抗体。

进一步地，新型冠状病毒抗体包括新型冠状病毒中和抗体。

本发明实施例中，抗人IgG抗体是一种与人IgG抗体特异性结合的抗体，包括但不限于鼠抗人IgG抗体、兔抗人IgG抗体、山羊抗人IgG抗体、绵羊抗人IgG抗体、鸡抗人IgG抗体等。

在一些实施例中，试剂盒包括捕获组分和检测组分，且该捕获组分包括灌装病毒疫苗原液和固相载体，检测组分包括标记有信号标记物的抗人IgG抗体或其活性功能片段。

固相载体用于负载冠状病毒疫苗原液。在一些实施例中，固相载体包括但不限于培养板、化学发光板、磁性颗粒、荧光微球、试纸、芯片中的至少一种。

信号标记物用于标记鼠抗人IgG抗体或其活性功能片段，在检测过程中，通过加入发光底物以检测发光强度，从而实现对待测样本中相关组分的定性和定量。该信号标记物包括但不限于化学发光标记物、电化学发光标记物、量子点、荧光微球中的至少一种，其中，化学发光标记物包括但不限于碱性磷酸酶、鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯、辣根过氧化物酶等；电化学发光标记物包括但不限于三联吡啶钌；量子点包括但不限于金量子点、CdSe量子点、ZnCdSe量子点等。

在一些实施例中，试剂盒还包括稀释基质，用于对捕获组分、检测组分、中和组分中的至少一种进行稀释。稀释基质包括但不限于磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris(三羟甲基氨基甲烷)等。

在一些实施例中，试剂盒还包括样本处理液、样本稀释液中的至少一种，用于对样本中的干扰物质进行处理或对样本进行稀释。

本发明实施例提供的检测冠状病毒抗体的试剂盒可用于检测冠状病毒抗体，特别是新型冠状病毒抗体。

本发明实施例还提供了冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段在制备检测冠状病毒抗体检测试剂中的用途。

本发明实施例利用抗人IgG抗体或其活性功能片段可以结合冠状病毒疫苗原液与冠状病毒抗体的结合物的特性，从而实现对样本中冠状病毒抗体的检测。同时，由于冠状病毒抗体与冠状病毒中和抗体具有高度相关性，因此还可实现对冠状病毒中和抗体的定性。本发明实施例提供的冠状病毒疫苗原液和抗人IgG抗体制备的冠状病毒抗体检测试剂，其检测过程无需在P3实验室进行即可快速获得检测结果，具有操作简便、特异性高、检测通量高的优点。

关于冠状病毒中和抗体，研究发现在新冠康复者血浆中和抗体的种类众多，且病毒中和活性较高的中和抗体主要靶向S-RBD上的不同表位，针对其它非RBD表位的单克隆抗体则中和活性相对较低。此外，还有多种非S-RBD区域的中和抗体和多种可能的保护机制，如N末端结构域(NTD)中和抗体即为新型冠状病毒中和抗体的重要部分。NTD区域中和抗体的中和曲线与RBD区域中和曲线不一致，这可能是由于NTD中和抗体的保护机理不同于RBD区域中和抗体，并通过阻止/干扰病毒S-RBD与宿主细胞ACE2受体结合起保护作用。本发明实施例以冠状病毒疫苗原液而非其它抗原作为试剂盒的组分，是基于以下原因：冠状病毒S蛋白是由三聚体构成，RBD位于每个S蛋白单体的尖端。RBD有两种构象，分别为“向下(down)”和“向上(up)”，RBD从“向下(down)”构象翻转到“向上(up)”构象，从而暴露一个称为受体结合基序(receptor-binding motif)的隐藏位点，进而与ACE2结合。研究发现，能阻断/干扰冠状病毒RBD区域与ACE2结合的中和抗体中，有一部分中和抗体的位点与ACE2的结合位点重叠，而另一部分中和抗体的位点与ACE2不重叠，中和抗体与RBD结合后可使RBD处于“向下(down)”构象，或影响S蛋白融合前的稳定性，进而阻断/干扰RBD与ACE2的结合。因此，采用RBD作为试剂盒组分检测冠状病毒中和抗体时，仅能检出与ACE2的结合位点重叠的那一部分中和抗体。而本发明实施例采用冠状病毒疫苗原液作为试剂盒组分，则可检出多种区域的中和抗体，降低漏检率，还可显著提升冠状病毒中和抗体的检测灵敏度。

本发明实施例中的“样本”或“待测样本”，是指血液样本(如，血清或血浆)，其来源为哺乳动物受试者，该受试者包括患有、疑似患有或携带冠状病毒的感染群体、康复群体、无症状感染群体、已接种疫苗群体等。

本发明实施例中，将冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段用于制备检测冠状病毒抗体检测试剂时，冠状病毒疫苗原液包括但不限于冠状病毒灭活疫苗原液、冠状病毒亚单位疫苗原液、冠状病毒载体(如腺病毒载体、水疱性口炎病毒载体)疫苗原液、冠状病毒减毒活疫苗原液等，优选冠状病毒灭活疫苗原液。

本发明实施例中，将冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段用于制备检测冠状病毒抗体检测试剂时，冠状病毒抗体包括冠状病毒中和抗体。

在一些实施例中，冠状病毒疫苗原液为新型冠状病毒疫苗原液，相应地，用于制备检测冠状病毒抗体检测试剂时，该冠状病毒抗体为新型冠状病毒抗体。

进一步地，新型冠状病毒抗体包括新型冠状病毒中和抗体。

本发明实施例中，将冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段用于制备检测冠状病毒抗体检测试剂时，抗人IgG抗体包括但不限于鼠抗人IgG抗体、兔抗人IgG抗体、山羊抗人IgG抗体、绵羊抗人IgG抗体、鸡抗人IgG抗体等。

相应地，本发明实施例还提供了一种冠状病毒抗体的检测方法，其包括如下步骤：

S1、提供待测样本、冠状病毒疫苗原液、抗人IgG抗体或其活性功能片段、固相载体和发光底物，其中，抗人IgG抗体或其活性功能片段标记有信号标记物；

S2、将待测样本、冠状病毒疫苗原液和固相载体进行混合处理，得到第一结合物；

S3、将第一结合物与抗人IgG抗体或其活性功能片段进行混合处理，得到第二结合物；

S4、将第二结合物与发光底物进行混合反应，测量混合反应产生的光子数，光子数与待测样本中冠状病毒抗体的含量成正比。

本发明实施例提供的冠状病毒抗体检测方法利用间接法检测原理，以冠状病毒疫苗原液作为固相抗原，通过结合待测样本中的冠状病毒抗体后形成第一结合物，再与标记有信号标记物的抗人IgG结合或其活性功能片段形成第二结合物用于发光检测。该检测方法可以快速检测待测样本中的冠状病毒抗体，具有操作简便、特异性高、检测通量高的优点，可满足大规模检测的需求。同时，由于冠状病毒抗体与冠状病毒中和抗体具有高度相关性，因此还可实现对冠状病毒中和抗体的定性。

具体地，S1中，待测样本、冠状病毒疫苗原液、抗人IgG或其活性功能片段、固相载体、信号标记物的定义、具体选择等如前文所述，此处不再赘述。发光底物，在本发明实施例中用于与信号标记物发生作用或反应从而产生光子，经检测设备检测发光强度，实现待测样本中的冠状病毒中和抗体的定量。在一些实施例中，发光底物包括3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷(AMPPD)、三丙胺、四甲基联苯胺中的至少一种。

S2中，将待测样本、冠状病毒疫苗原液和固相载体进行混合处理的方法可以选择本领域的常规方法。本发明实施例对于冠状病毒疫苗原液负载于固相载体上的方法没有特别限制，既可以在混合处理之前，事先将冠状病毒疫苗原液负载于固相载体上，也可以在混合处理的过程中，使冠状病毒疫苗原液负载于固相载体上。负载方法包括但不限于吸附、化学键偶联、生物素-亲和素结合、与抗体识别结合等方式。在混合处理时，负载于固相载体上的冠状病毒疫苗原液与待测样本中的冠状病毒抗体结合，在结合力的作用下，待测样本中的冠状病毒抗体通过冠状病毒疫苗原液负载于固相载体上，去除未结合的物质，得到第一结合物。

S3中，第一结合物与抗人IgG抗体或其活性功能片段进行混合处理的方法可以选择本领域的常规方法。在混合处理的过程中，标记有信号标记物的抗人IgG抗体或其活性功能片段在结合力的作用下，通过待测样本中的冠状病毒抗体负载于固相载体上，待测样本中的冠状病毒抗体含量越多，相应地可结合的抗人IgG抗体或其活性功能片段也越多。经去除未结合的物质，得到第二结合物。

S4中，通过将第二结合物与发光底物进行混合反应，由于第二结合物中有标记有信号标记物的抗人IgG抗体或其活性功能片段，该信号标记物在发光底物的作用下产生发光效应，对产生的光子数进行检测，根据光子数检测结果可知待测样本中是否含有冠状病毒抗体，以及相应冠状病毒抗体的含量；同时也可得知待测样本中是否含有冠状病毒中和抗体。以下以信号标记物为碱性磷酸酶、发光底物为AMPPD为例进行详细说明：AMPPD与碱性磷酸酶混合时，AMPPD被碱性磷酸酶所分解并脱去一个磷酸基，生成不稳定的中间产物。该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光。

可以理解的是，由于标记有信号标记物的IgG抗体或其活性功能片段可特异性地与待测样本中的冠状病毒抗体结合，因此检测结果中，产生光子数的量与待测样本中冠状病毒抗体的含量成正比，根据标准曲线即可得出待测样本中冠状病毒抗体的含量。

在一些实施例中，用于检测混合反应所产生光子数的方法包括酶联免疫吸附剂测定法、化学发光测定法、电化学发光测定法、免疫层析法、上转换发光检测法、下转换发光检测法中的至少一种。

为使本发明上述实施细节和操作能清楚地被本领域技术人员理解，以及本发明实施例检测冠状病毒抗体的试剂盒及其应用、冠状病毒抗体的检测方法的进步性能显著的体现，以下通过实施例来举例说明上述技术方案。

实施例

本实施例提供了新型冠状病毒疫苗原液与鼠抗人IgG抗体用于新型冠状病毒抗体的检测方法及相应的试剂盒。该试剂盒中，捕获组分的主要成分为包被有新型冠状病毒疫苗原液的固相载体，检测组分的主要成分为标记有信号标记物的鼠抗人IgG抗体。

1.1试剂的制备

1.1.1捕获组分制备工艺

将新型冠状病毒灭活疫苗原液(中国生物技术股份有限公司)包被于磁性微珠(Thermo Fisher)表面。下面详细描述相应的包被方法：

首先将新型冠状病毒灭活疫苗原液进行前处理，通过透析去除其缓冲基质中的保护组分。按照每毫克磁性微珠(简称磁珠)加入0.5μg至40μg的新型冠状病毒灭活疫苗原液的比例进行包被。在反应过程中磁珠表面的羧基在EDC/NHS催化下与新型冠状病毒灭活疫苗原液的氨基进行偶联。典型的制备过程为：取20mg表面修饰有羧基的磁珠，超声分散于10mM MES缓冲液中，加入80mg EDC和120mg NHS，超声混合均匀后，置于37℃摇床15min。之后在处理后的磁珠中，按照比例加入新型冠状病毒灭活疫苗原液，混匀，并置于37℃摇床反应10h至18h。清洗封闭后，制备得到包被有新型冠状病毒灭活疫苗原液的磁珠包被物。将磁珠包被物稀释于50mM MES缓冲液(0.5MNaCl、0.5％BSA、0.05％吐温20，pH＝6.0)，磁珠包被物浓度为0.2～1.0mg/mL。

1.1.2检测组分制备工艺

将与人IgG抗体特异性结合的鼠、兔、山羊、绵羊、鸡等抗体标记信号标记物，信号标记物为碱性磷酸酶。使用50mM MES(2-吗啉乙磺酸)pH＝6.0的缓冲液对信号标记物进行稀释。稀释后信号标记物的浓度在约10ng/mL至约2ug/mL的范围内，优选为约50ng/mL，制备得检测组分。其中碱性磷酸酶来自罗氏制药、人IgG抗体特异性结合的鼠抗体来自MeridianLife Science。

1.2样本检测

试剂盒采用两步化学发光免疫分析法，其检测原理如下：

1.2.1将样本、包被着新型冠状病毒灭活疫苗原液的超顺磁性磁微粒(磁珠)添加到反应管中，经过孵育，样本中的新型冠状病毒抗体与包被在磁珠表面的新型冠状病毒灭活疫苗原液位点结合。反应完成后，磁场吸住磁珠，洗去未结合的物质，得到第一结合物。

1.2.2将碱性磷酸酶(信号标记物)标记的小鼠抗人IgG抗体加到反应管中孵育，1.2.1形成的第一结合物和信号标记物标记的小鼠抗人IgG抗体结合形成“新型冠状病毒灭活疫苗原液包被的磁珠-新型冠状病毒IgG抗体-碱性磷酸酶标记的小鼠抗人IgG抗体”复合物；反应完成后，磁场吸住磁珠，洗去未结合的物质，得到第二结合物。

1.2.3将化学发光底物液添加到反应管内，发光底物(3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷，AMPPD)被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光。再通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进行测量，所产生光子的量与样本内新型冠状病毒IgG抗体的含量成正比。定标曲线如图1所示。

1.3阳性判断值的确定

收集83例采集自新冠肺炎确诊病例(核酸检测为阳性)的咽拭子样本作为阳性样本，以及116例采集自新冠肺炎排除病例的咽拭子样本(核酸检测为阴性)作为阴性样本。样本测试前离心处理(相对离心力1000g，离心时间5min)，并转移上清液进至洁净的样本管中，按“1.2样本检测”进行测试，得到各样本中抗体的浓度值。采用受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)的方法对样本测试的结果进行统计分析，得到该试剂盒的阳性判断值(Cut-off值)为10AU/mL。

1.4试剂反应条件的确定

1.4.1反应样本量的确定如表1所示。

表1 反应样本量的确定

样本量	5μL	10μL	20μL	30μL	50μL
						样本1	6503	7388	6630	7084	7138
样本2	22631	46075	48133	51603	56493
						样本3	80013	159819	152430	174021	190524
样本4	451813	813130	890925	1023394	1083152
						信噪比1(RLU<sub>样本2</sub>/RLU<sub>样本1</sub>)	3.48	6.24	7.26	7.28	7.91
信噪比2(RLU<sub>样本3</sub>/RLU<sub>样本1</sub>)	12.30	21.63	22.99	24.57	26.69
						信噪比3(RLU<sub>样本4</sub>/RLU<sub>样本1</sub>)	69.48	110.05	134.39	144.47	151.75

通过表1可以看出，信噪比和信号值随样本量增加而增加。样本量在5μL～20μL时，信噪比和信号值随样本量增加显著升高，继续提升样本量(20μL～50μL)，信噪比提升不显著。由于样本量的增加感染风险会增加，因此优选样本量20μL。

1.4.2反应时间的确定如表2和表3所示。

表2 反应时间的确定

通过表2可以看出，信噪比和信号值随第一步孵育时间增加而增加。第一步孵育时间在10min～20min时，信噪比和信号值随样本量增加显著升高，继续提升孵育时间(20min～30min)，信噪比和信号值提升不显著，因此第一步孵育时间选择20min。

表3 反应时间的确定

通过表3可以看出，信噪比随第二步孵育时间增加变化不显著。信号值随第二步孵育时间增加而增加。第二步孵育时间由2min提升至10min，信号值显著升高，继续提升孵育时间，信号值提升不显著，因此第二步孵育时间选择10min。

1.4.3组分浓度的确定如表4和表5所示。

表4 组分浓度的确定

通过表4可以看出，信噪比和信号值随磁珠浓度增加而增加。磁珠浓度在0.2-0.7mg/mL时，信噪比和信号值随磁珠浓度的增加显著升高，继续提升磁珠浓度(0.7-1.0mg/mL)，信噪比提升不显著，因此磁珠浓度选择0.7mg/mL。

表5 组分浓度的确定

通过表5可以看出，当酶标浓度为10ng/mL-50ng/mL，信号值和信噪比随着酶标浓度的增加而增加。但酶标浓度为50ng/mL-80ng/mL时，信号值和信噪比升高不显著，因此酶标浓度选择50ng/mL。

1.5检测结果

1.5.1病毒中和试验

病毒中和试验采用固定病毒稀释血清法。试验需先滴定病毒毒价，试验时将其稀释成每一单位剂量含100个TCID50，再将待检血清倍比稀释加等量100个TCID50/mL的病毒液，混匀后37℃孵育2h，每一稀释度接种细胞培养板，每孔0.1mL。5％CO₂ 37℃培养箱培养4天后，记录出现CPE孔数。按Karber法计算中和价，即50％细胞被保护时抗血清的最大稀释度。

1.5.2以“1.4”所得各试剂含量制备得到的试剂盒并应用其优选反应条件作为实验组，重组RBD IgG试剂盒作为对照组-1，重组RBD+ACE2试剂盒作为对照组-2。其中，对照组-1试剂盒中的捕获组分主要成分为包被有重组新型冠状病毒S1-RBD的磁性微珠，S1-RBD来自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；检测组分的主要成分为标记有碱性磷酸酶的鼠抗人IgG抗体；对照组-2试剂盒中的捕获组分主要成分为包被有重组新型冠状病毒S1-RBD的磁性微珠，S1-RBD来自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；检测组分的主要成分为标记有碱性磷酸酶的ACE2蛋白。病毒中和试验对比结果如表6和表7所示。

表6 实验组的病毒中和试验结果

表7 对照组-1的病毒中和试验结果

表8 对照组-2的病毒中和试验结果

通过表6、7和8可以看出，与对照组-1和对照组-2比较，实验组在阴性符合率不变的条件下，阳性符合率提高，即灵敏度提高。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种检测冠状病毒抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括捕获组分和检测组分，其中，所述捕获组分包括所述冠状病毒疫苗原液和固相载体，所述检测组分包括标记有信号标记物的所述抗人IgG抗体或其活性功能片段。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述冠状病毒疫苗原液包括冠状病毒灭活疫苗原液、冠状病毒亚单位疫苗原液、冠状病毒载体疫苗原液、冠状病毒减毒活疫苗原液中的至少一种。

4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述冠状病毒疫苗原液为新型冠状病毒疫苗原液；和/或

所述冠状病毒抗体包括冠状病毒中和抗体。

5.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体包括培养板、化学发光板、磁性颗粒、荧光微球、试纸、芯片中的至少一种；和/或

所述信号标记物包括化学发光标记物、电化学发光标记物、量子点、荧光微球中的至少一种。

6.冠状病毒疫苗原液以及抗人IgG抗体或其活性功能片段在制备检测冠状病毒抗体检测试剂中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述冠状病毒疫苗原液为新型冠状病毒疫苗原液；和/或

所述冠状病毒抗体包括冠状病毒中和抗体。

8.一种冠状病毒抗体的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

提供待测样本、冠状病毒疫苗原液、抗人IgG抗体或其活性功能片段、固相载体和发光底物，其中，所述抗人IgG抗体或其活性功能片段标记有信号标记物；

将所述待测样本、所述冠状病毒疫苗原液和所述固相载体进行混合处理，得到第一结合物；

将所述第一结合物与所述抗人IgG抗体或其活性功能片段进行混合处理，得到第二结合物；

将所述第二结合物与所述发光底物进行混合反应，测量所述混合反应产生的光子数，所述光子数与所述待测样本中冠状病毒中和抗体的含量成正比。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述冠状病毒疫苗原液包括冠状病毒灭活疫苗原液、冠状病毒亚单位疫苗原液、冠状病毒载体疫苗原液、冠状病毒减毒活疫苗原液中的至少一种。

10.根据权利要求8或9所述的检测方法，其特征在于，所述冠状病毒疫苗原液为新型冠状病毒疫苗原液；和/或

所述冠状病毒抗体包括冠状病毒中和抗体。

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