JPS62249999A - 非ａ非ｂ型ウイルス性肝炎検出用試薬および免疫酵素法による前記肝炎の診断法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の利用分野 この発明は、非Ａ非Ｂ型ウィルス性肝炎を検出する新規
な試薬およびこのタイプの肝炎を免疫酵素的方法によっ
て診断する方法に関する。

（ロ）従来の技術と問題点 非Ａ非Ｂ型肝炎は、肝炎Ａ型ウィルス（）−ＩＡＶ＞、
肝炎Ｂ型ウィルス（ＨＢＶ）　、またはサイトメガロウ
ィルス（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ　）　、エプ
スタイン−パールウィルス（Ｅ　ｐｓｔｅｉｎ　−Ｂ　
ａｒｒ　　ｖｉｒｕｓ　）もしくは黄熱病ウィルス（ｙ
ｅ＋＋ｏｗ　　ｆｅＶｅｒｖｉｒｕｓ　）のようなその
他の公知のヒト肝炎ウィルスに基因しないウィルス感染
性肝炎と定義されている。非Ａ非Ｂ型肝炎は、数種の異
なるウィルスによる一群の疾病のようである。

ヨーロッパと北米において、輸血による肝炎のケースの
９５％は、Ｅ　、　Ｔａｂｏｒ　（Ｌ　ａｎｃｅｔ　、
　１９８５゜ｉ　　：　　７４３〜７４５）　ｎよびり
、Ｇ、Ｗｏｎａら（ｌ　ａｎｃｅｔ、１９８０．　ｉｉ
　：　８７６〜８７９）に報告されているように、Ｂ型
肝炎と同様に非経口で伝染される感染源によるものであ
る。

最近の疫学的データは、Ａ型肝炎のように糞便−経口ル
ートにより伝染され事実上輸血では伝染されない型の非
Ａ非Ｂ型ウィルス性肝炎（ＮＡＮＢＨ）が存在すること
を示した。この種の流行病は、いくつか報告されてきた
（Ｍ、　Ｓ、　５ａｔａｙａｎら、ｌ　ｎｔｅｒｖｉｒ
ｏｌｏｇｙ、　１９８３．２０：　　２３−３１　：　
Ｅ　、Ｈ。

Ｂ　ｅｌａｂｂｅｓら、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｖｉｒｏｌ
、、　１９８５．１６：２５７−２６３：Ｍ、　Ａ、　
Ｋａｎｅら、　ＪＡＶＡ、　１９ｇ４゜２５２：　３１
４０〜３１４５；　Ｍ、　Ｓ、　Ｋｈｕｒｏｏ　、　Ａ
ｍ　、　Ｊ　。

Ｍｅｄ、　、　１９８０．６８：　　８１８〜８２４）
　。これらの流行病は、糞便−経口モードの伝染をする
上水道が原因であり患者の糞から得た試料中に、２７／
ａのウィルス粒子が電子顕微鏡で観察された（Ｍ、Ｓ。

１３ａｌａｙａｎら　、　　　ｌ　　ｎｔｅｒｖｉｒｏ
ｌｏｇｙ、　　　１９８３．　２０：　　　２３−３１
；Ｍ、Ａ、Ｋａｎｅら、　ＪＡＭＡ、　１９８４．　２
５２゜３１４０−３１４５）。

非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルスが、肝硬変、非樹立の悪性肝癌
などのような重篤な肝臓病を引起こすことは知られてい
る。従ってこれらのウィルスの同定や、これらのウィル
スに関連する抗原・抗体系の検出を行うことが、早期に
診断したり適切な予防を速やかに行うのに最も重要であ
る。

この発明で特に提案される診断試薬や診断法には、輸血
中に伝染される非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルスに関連する抗原
の検出法が含まれる。

５ＨＩＲＡＳＨＩら（Ｔ　ｈｅ　　Ｌ　ａｎｃｅｔ　、
　１９７８年１０月２１日、　　８５３−８５６頁）は
、逆電気泳動法（ｃｏｕｎｔｅｒｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏ
ｒｅｓｉｓ）によって、輸血が原因の非Ａ非Ｂ型肝炎に
かかつているヒトに抗原・抗体系を検出し、１９７９年
５月２１日付米国特許願第４０９２１号の優先権を主張
する１９８０年５月２０日出願のＰＣＴｌＣＴｌ全出願
公開第８０１０２５９８号て、（ＮＡＮＢＨ）に関連す
る抗原を検出する免疫学的試験法を特許請求している。

この試験法では、感染していると考えられる哺乳類由来
の血清の試料を、ＮＡＮＢＨに感染していることが分か
つているドナー哺乳類の血清由来の抗体と反応させて、
ＮＡＮＢＨ抗原の存在を、逆電気泳動法で形成された免
疫沈降素によって間接的に検出するか、又はラジオイム
ノアッセイ、グロースゲル中の拡散法、ラテックス上で
の受身血球凝集法や受身凝集法、補体結合法もしくはＥ
ＬＩＳＡ試験法のような直接法で検出する。

さらにＰＣＴ国際出願第ＷＯ８２７００２０５号明ＩＩ
１書り、直径が約４Ｏｎｌｌｌの核を有し非Ａ非Ｂ型肝
炎を起こす原因であるといわれる直径が５０〜６０ｎｍ
のウィルス粒子を開示している。このウィルス粒子を含
有する４つの試料が、ザ　アメリカン　タイプ　カルチ
ャー　コレクション（ｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎ　　ＴＶ
ｏｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　）
ニ寄託１号ＶＲ−２０１１，ＶＲ−２０１２，ＶＲ−２
０１３およびＶ　Ｒ−２０１４で寄託されている。

開示されている粒子は、検出試験に用いるため、放射能
標識することができる。

他の著者らは、ＮＡＮＢＨに関連する抗原を単離し、こ
の単離した抗原を用いて非Ａ非Ｂ型ウィルス性肝炎のウ
ィルスによって起る感染症を診断する試薬を製造しよう
と試みてきた。特に、出願人がトレボ（ＴＲＥＰＯ）の
１９８１年３月２０日付はフランス特許第８１０６３８
５号は、血清もしくは肝エキスを超遠心分離し、得られ
た遠心残留物を非イオン性界面活性剤で処理し、次いで
分画して純粋なＮＡＮＢＣ抗原を含有するフラクション
を単離する（適切な場合、次いでイオン性界面活性剤で
処理してＡ（］　ＮＡＮＢｅを単離する）ことによって
新規なＮＡＮＢＩ−１抗原を単離する方法を開示してい
る。またこのフランス特許におけるひとつの変形に対応
する別の提案によれば、上記のように超遠心分離を行な
い、存在するウィルス粒子をすへて除去した後、ガンマ
−グロブリンを除去し、Ａａ　ＮＡＮＢｅを沈澱させて
濃縮し、得られたＡｏ　ＮＡＮＢｅ含有の濃縮フラクシ
ョンを、ヘパリンを固着した支持体のクロマトグラフィ
に付して、Ａａ　ＮＡＮＢｅを溶離して集めている。ト
レポのフランス特許による診断用試薬は、少なくともひ
とつのＮＡＮＢＣ，ＮＡＮＢｅもしくはＮＡＮＢｓ抗原
および／又は少なくともひとつの抗−ＮＡＮＢＣ、抗−
ＮＡＮＢｅもしくは抗−ＮＡＮＢｓ特異性の抗体が固着
された固体支持体からなっており、特にその診断用試薬
の支持体が抗−（ヒトガンマグロブリン）抗体を持って
いる場合、その抗原は、その支持体から分離され、被検
血清中に対応する抗体が存在するならば、その抗体によ
ってのみ固定される。

同様に、１９８１年６月２日の日本国の優先権を主張す
る、出願人がＥＩＳＡＩで１９８２年６月２日付出願の
ヨーＯツバ特許出願公開第６６２９６号は、ＮＡＮＢ肝
炎で死亡した患者の検死解剖によって得た肝臓から、超
遠心分離法を含む蛋白質分画の通常の方法で精製するこ
とによってＮＡＮＯ肝炎関連の抗原を分離する方法を開
示し、この抗原をそ−〇　− の物理化学的性質で定義している。このヨーロッパ特許
願の抗原は、羊の赤血球のような受身血球凝集反応に適
切な基質の粒子、ラジオイムノアッセイ用のトレーサー
同位体またはＥＬＩＳＡ試験法を行うのに適切な酵素か
らなる物質と接合される。

しかし、現在まで、流行性ＮＡＮＢ肝炎が関連する抗原
・抗体系の同定を可能にするいかなる手段も提案されて
いないようである。

（ハ）問題点を解決するための手段と作用この発明の目
的は、流行性非Ａ非Ｂ型ウィルス性肝炎の検出を検出可
能にする試薬およびこの試薬を用いる診断法を提供する
にある。

この発明は、流行性ＮＡＮＢウィルス性肝炎に°かかっ
ていることが分かつている患者の糞便のエキスで人工的
に感染させたサルの血清から単離したＩｇＭからなる抗
−ＮＡＮＢＨ抗体に関する。

またこの発明は、流行性ＮＡＮＢ肝炎にかかつている患
者の糞便のエキスを摂取させて人工的に感染させたサル
の血清から抗−ＮＡＮＢＨ抗体を単離する方法であって
、前記血清を、０．ＩＭ　）−リスＮａ　ＣＱＷｌｍＨ
ｐＨ８，０中（１）デ”Ｆストラ＞’ｊル（１）カラム
を用いるクロマトグラフィで処理して抗−ＮＡＮＢＨＩ
！ｌ　Ｍを単離することからなる方法に関する。

この発明による抗−ＮＡＮＢＨＩ！ｌ　Ｍの単離法の態
様では、用いられる入■的に感染させたサルの血清は、
接種して２７日経過以後に採取される。

またこの発明は、固体支持体の特にポリ塩化ビニル（Ｐ
ＶＣ）板に固定された抗−ＮＡＮＢ）１ＩｇＭからなる
、流行性ＮＡＮＢウィルス性肝炎全肝炎可能にする試薬
に関する。

またこの発明は、この発明によって単離された抗＝ＮＡ
ＮＢＨＩｑ　Ｍを１２Ｆ！のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）当
り５０μｇ程度の蛋白質濃度で、固体支持体の特にＰＶ
Ｃ板に４℃で１８〜２４時間接触させることによって、
前記支持体に前記ＩｇＭを固定することからなる流行性
ＮＡＮＢウィルス性肝炎全肝炎可能な試薬の製造方法に
関する。

この発明による、流行性ＮＡＮＢウィルス性肝炎性用炎
検出用試薬方法の一態様では、抗−ＮＡＮＢＨ−１！Ｉ
Ｍで被覆されたＰＶＣプレートが０．１％のウシ血清ア
ルブミン（ＢＳＡ）と０．１％のライ−ン２０　（Ｔｗ
ｅｅｎ　　２０）を含有するＰＢＳの層で覆われる。

またこの発明は、ＩｇＭで被覆されたプレートで構成さ
れている検出試薬を、糞便エキスとともに３７℃で１時
間培養し、次いで流行性ＮＡＮＢＨから回復しつつある
患者の血清から精製し酵素で標識をつけたＩｇＧフラク
ションと、適切な展開基質の存在下で培養することから
なる流行性ＮＡＮＢウィルス性肝炎全肝炎法を提供する
ものである。

この発明の診断法の好ましい態様では、前記ＩｇＧフラ
クションはβ−ガラクトシダーゼで標識が付され、適切
な展開基質は好ましくはオルソニトロフェニル−β−Ｄ
−ガラクトピラノシドからなるものである。

またこの発明は、この発明の抗−ＮＡＮＢＨＩｇＭに関
連して、流行性ＮＡＮＢウィルス性肝炎を検出するため
に用いられる、酵素で標識を付けた、流行性ＮＡＮＢ肝
炎から回復中の患者の血清由来のＩｇＧに関する。

さらにこの発明は、これらＩｇＧの製造法に関し、すな
わら、流行性ＮＡＮＢＨから回復中の思考の血清を、Ｄ
ＥＡＥ−トリスアクリル（Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ）のカラ
ムのクロマトグラフィに付して精製し、このようにして
単離されたＩｏＧを適切な酵素、好ましくはβ−ガラク
トシダーゼで公知の方法により標識を付けることからな
るＩｇＧの製造法である。

上記の事項以外のこの発明に含まれる他の事項は下記の
記載によって明らかになるであろう。

この発明の物質の製造法を示す下記の実施例によってこ
の発明がより明確に理解されるであろう。

しかし、この実施例は単に、この発明の目的を例証する
ためのものであって、この発明を何等限定するものでは
ない。

（ニ）実施例 １　　出　　　として使用される　炎　イルスのＮＡＮ
Ｂ特性の測定 急性の流行性ＮＡＮＢウィルス性肝炎全肝炎っていると
推定される３７人の患者（象牙海岸のＴＯＲＴＩＹＡ地
区）から黄痕になった第１週に、血清の試料を採取した
。

これらの試料は、ウィルスのＮＡＮＢ特性を確実に立証
するために下記の検出試験に付した。

市販のＥＬＩＳＡキット〔アボット・ラボラトリイズ（
ＡＢＢＯＴＴ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）　、シ
カゴ、イリノイ州〕を利用して肝炎Ａ型ウィルスと肝炎
Ｂ型ウィルスとを検出する試験、すなわち抗−Ａ型つィ
ルスＩｇＧ又はＩｇＭを検出するＨＡＶＡＢ試験； Ａａ　ＨＢｓを検出する’ＡＵＳＺＹＭＥ”試験：Ａａ
　ＨＢｅを検出するＨＢｅ　−Ｅ　ＩＡ試験：肝炎Ｂ型
ウィルスのキャプシドに対応する全抗体ヲ測定スル”　
ＣＯＲＺ　Ｙ　Ｍ　Ｅ　”試験；肝炎Ｂ型ウィルスのキ
ャプシドに対応する特異的ＩＱＭを測定する”ＣＯＲＺ
ＹＭＥ　　Ｍ”試験：ＣＭＶに対応する抗体を測定する
ための、　　　　Ｓｃｈｍｉｔｚらの［Ｊ、　　Ｇｅｎ
、　　Ｖｉｒｏｌ、、　　１９８０．　５０：ρ５９〜
６８］の免疫酵素試験； Ｑａｒｄｎｅｒら著”　Ｒａｐｉｄ　　ｖｉｒｕｓ　　
　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　　：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　
　ｏｆ　　ｉｍｍｕｎｏｒｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ”。

１３　ｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ発行、ロンドン、　１９
８０年、第２７６〜２７８頁の免疫蛍光分析法によるエ
プスタイン−バール　ウィルスに対応するＩｇＭの測定
；および ｌ　ｈｕｉｌｌｉｅｒらのＡｎｎ、　　Ｖｉｒｏｌ、　
　（Ｉｎ５ｔ、　　Ｐａ５ｔｕｒ　）　、　１９８３年
、　　１３４Ｅ、第　３４９〜３５９頁の技術の免疫捕
獲法（１ｎｕｎｕｎｏｃａｐｔｕｒｅ　）による抗−黄
熱病ＩｇＭの測定である。

ＮＡＮＢＨにかかっていると考えられる患者由来の、試
験された血清の３７の試料のすべてに、抗−ＶＨＡ抗体
が含有されていたが、上記ＩｇＭの類に属する抗−ＶＨ
Ａ特異性抗体は含有されていなかった。

３７の血清中の３２は抗−ＨＢｃ抗体（肝炎Ｂ型ウィル
スのキャプシドの抗原に対応する抗体）を有していたが
、上記Ｉ（１Ｍ免疫グロブリンの類に属する抗−ＨＢＣ
特異性抗体はもっていなかった。

２人の患者は、Ｂ型肝炎の表面抗原 （Ａ（ｌ　Ｈａｓ　）の検出試験で陽性であったがＢ型
肝炎に特異的なＡａ　ＨＢｅ抗原の検出試験では陰性で
あった。

これらの血清学的結果は、肝炎Ａ型ウィルスもしくは肝
炎Ｂ型ウィルスが、上記患者が犠牲になった流行病の原
因であるということを否定し、また上記のＩｇＭ、抗−
〇ＭＶ、抗−エブーエプスタイン−バールウィルスは抗
−黄熱病の類に属することが知られている抗体に特異的
ではなかった。

、？−糞　エキスの　゛ ユニ　３７人の患者の内の１０人から、病気の徴候が現
われた最初の数日間に大便の試料を採取した。

これらの試料を、１０％糞便エキスを含有する、１％の
ヒト血清アルブミン含有ＰＢＳを製造するのに用いた。

これらの糞便エキスをホモジナイズし次いで遠心分離に
付して透明にした。

旦　透明化した糞便エキスを０．４５　膚ミリボアー（
ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　）フィルターで濾過し、次イテ０
．２２　）ａのＨＡ型メンブレンディスクからなるフィ
ルターで濾過し、その後、下記２．３０項に記載したの
と同様にして感染させたサルの血清由来の１ｇＭフラク
ションの等容積と、３７℃で１時間次いで４℃で一夜反
応させた。得られた反応混合物を２ｏ、ｏｏｏｏで２０
分間遠心分離し、残渣をＰＢＳ中に懸濁された。得られ
た製剤の一部を蒸溜水に透析し、ｐＨ７，２にてリンタ
ングステン酸でネガティブ染色し、次いでシーメンス社
製電子顕微鏡で試験した。

２．３．　　透明化した糞便エキスを水で濃度１０％ま
で希釈して接種物を作製し、これを麻酔をかけた４頭の
アフリカザル（３＠のセロピテクス・エティオブス（Ｃ
ｅｒｏｐｉｔｈｅｃｕｓ　　ａｅｔｈｉｏｐｓ）と１頭
のエリスロセブス・バタス（Ｅ　ｒｙｔｈｒｏｃｅｂｕ
ｓｐａｔａｓ　）　）に２鱈づつ経口投与した。

これらのサル由来の血清と糞便の試料を、上記接種物投
与前と、投与して２７日後に採取した。

ユニ　　　−Ｎ　　ＮＢＨＩ　　Ｍの ３１、　　上記２．３０項に記載したのと同様にして感
染させたサルの血清を、０．１Ｍトリス−ＮａＣ！Ｑ緩
衝液Ｐ１４８．０中のセファデックスＧ−２００（）７
−マシア社製のアガロースゲル）のクロマトグラフィに
付して、抗−ＮＡＮＢＨＩａ　Ｍを単離した。

３．２．　　単離した抗−ＮＡＮＢＨＩＱ　Ｍを、ＰＢ
Ｓ　１　ｘｌ当す５０ｕａ　（Ｄ蛋白質濃度Ｔ−ＰＶＣ
板（ＮＵＮＣ−ＩＭＭＬＩＮＯ−ＰＬＡＴＥＳ社、デン
マーク供給）に、４℃で２４時間接触させてこの板に固
定した。

このように処理したプレートを０．１％のＢＳＡと０．
１％（７）Ｔｗｅｅｎ２０含有のＰＢＳで覆った。

ＮＡＮＢＨから回復しつつある患者の血清を、ＤＥＡＥ
−トリスアクリルのカラムのクロマトグラフィに付して
精製することによってひとつの１１１１Ｇフラクシヨン
を得、得られた精製ｆｏＧをβ−ガラクトシダーゼで標
識を付けた。

−１Ω　− ５　　　　ＮＡＮＢＨ ５，１，摂取前に採取したサルの血清から単離したＩ（
ＩＩＭを用いてＰＶＣ板を被覆し、対照物として利用し
た。

５２　　　ＮＡＮＢ肝炎の診断法を確立するこころみか
なされた患者の糞便から上記２．１６項に記載したのと
同様にして作製された糞便エキス（１：２０ｖ／Ｖ）を
、上記３．２０項に記載したのと同様にして抗−ＮＡＮ
ＢＨＩ（Ｉ　Ｍで覆ったプレート上で３７℃にて１時間
培養し、次いで展開発色基質としてのオルソニトロフェ
ニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドの存在上、上記４項
に記載したのと同様にして得た、β−ガラクトシダーゼ
で標識をつけたＩｏＧのフラクション（２００μ（Ｊ／
ｉ１）と共に培養した。

ＪＪ、　　サルに接種して２７日後に採取したサル血清
から単離した特異的ＩｇＭは、ＮＡＮＢ肝炎にかかって
いる患者の糞便中に存在する抗原と特異的に結合し、こ
のように結合した抗原は、前記の、酵素で標識を付され
たＩｇＧによって検出される。

Ｕ屈Ｊ己り 前記第２．１０項に記載したのと同様にして作製した、
ＮＡＮＢ）−１にかかっていると考えられる患者から採
取した糞便のエキス１０個のうちの５個のなかに、ＮＡ
ＮＢ）Ｉに関連する抗原を検出することができたが、他
の胃賜伝染病にかかっているヨーロッパの患者由来の糞
便のエキス３０個のいずれにも検出することができなか
ったく後記表参照）。接種して２７日後に単離されたＩ
ｇＭを用いる免疫酵素試験で陽性であった試料はすべて
、接種前に採取した血清から単離したＩｃ＋Ｍを用いた
対照系では陰性であることか分かった。恐らくウィルス
粒子と考えられる凝集物が、４人の患者の血清から単離
したＩｇＭ抗体と、同じ患者由来の糞便エキスとの反応
後、電子顕微鏡下で観察された。

下記表に示したように、感染患者の糞便内に存在する流
行性ＮＡＮＢ肝炎の抗原と、肝炎Ａ型ウィルスもしくは
肝炎Ｂ型の抗原との間に血清学的関係は全くない。この
表は事実、糞便試料中のＮＡＮＢ抗原の存在を検出する
免疫酵素試験で得た試験結果を示している。すなわち、
実験的に感染させたサルの血清から単離し、同相（ＰＶ
Ｃ板）に固定された４つのＩｇＭ抗体の中の３つは、流
行性のＮＡＮＢ肝炎にががっている患者由来の糞便の試
料中に存在する抗原を特異的に固定する。

流行性ＮＡＮＢ肝炎から回復中の患者の血清がら単離さ
れたＩｏＧフラクションをβ−ガラクトシダーゼで標識
をつけ展開剤として用いた（゛＊第２のフラクションで
得られた結果は第１のフラクシヨンで得られた結果と一
致していた）。下記表で照合した試験結果は、ＰｌＮ比
で表わされている（　Ｐ　／’　Ｎ比は、陰性の対照試
料の平均の吸収に対する試験された試料の吸収の比であ
る）。正常な糞便の６つの異なるエキスを陰性対照試料
として用いた。接種前のサルの血清から単離したｆｉｌ
ｌＭで被覆したプレート上で行った対照試験では陰性の
試験結果（Ｐ／Ｎ＜　２．１）が得られた。　　　　′
表 流行性ＮＡＮＢ肝炎に関連する抗原の免疫酵素的測定結
果＊第２１頁第１Ｏ〜ＩＬ行参照。

この発明が基礎としている流行性ＮＡＮＢ肝炎のウィル
スの同定法によって、この型の肝炎の病因学的原因と考
えられたものが肝炎Ａ型ウィルスと肝炎Ｂ型ウィルスの
両者と無関係であり、それが輸血によって伝染されるＮ
ＡＮＢ肝炎の２つのタイプと異なることが示された。

この発明によれば、感染動物の血清から単離されたＩｑ
Ｍによって、流行性ＮＡＮＢ肝炎にかかっている患者の
糞便中に存在するＮＡＮＢＨウィルスに関連する抗原を
免疫酵素的に特定することによりＮＡＮＢ肝炎の診断試
験を行うことができる。

上記のことから明らかなように、この発明はすでに明確
に記載した実施方法、実施態様および利用法に限定され
るものではなく、この発明の範囲を逸脱することなく、
当業者ならば成しうるこれらの変形もすべて含むもので
ある。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、流行性非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝炎にかかっているこ
   とが知られている患者由来の糞便のエキスによって人工
   的に感染させたサルの血清から単離したＩｇＭからなる
   抗−非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝炎抗体。 ２、流行性非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝炎にかかっている患
   者由来の糞便のエキスを摂取させることによって人工的
   に感染させたサルの血清を、０．１ＭトリスＮａＣｌ緩
   衝液（ｐＨ８．０）中のデキストランゲルのカラムのク
   ロマトグラフィに付して抗−非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝炎
   ＩｇＭを単離することからなる、抗−非Ａ非Ｂ型ウイル
   ス性肝炎抗体の単離方法。 ３、使用される人工的に感染させたサルの血清が、前記
   糞便エキスを接種して２７日以後に採取された血清であ
   る特許請求の範囲第２項の方法。 ４、固体支持体に固定された抗−非Ａ非Ｂ型ウイルス性
   肝炎ＩｇＭからなる、流行性非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝炎
   の検出に用いうる試薬。 ５、特許請求の範囲第２項もしくは第３項によって単離
   された前記ＩｇＭを、リン酸緩衝液の１ｍｌ当り５０μ
   ｇのオーダーの蛋白質濃度で、特にポリ塩化ビニル板の
   ごとき固体支持体に接触させて、前記ＩｇＭを前記支持
   体に固定することからなる特許請求の範囲第４項の試薬
   の製造方法。 ６、抗−非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝炎ＩｇＭで被覆された
   、特にポリ塩化ビニル板のごとき固体支持体が、さらに
   ０．１％のウシ血清アルブミンと０．１％のツィーン２
   ０とを含有するリン酸緩衝溶液の層で被覆される特許請
   求の範囲第５項の方法。 ７、抗−非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝炎ＩｇＭで被覆された
   プレートで構成されている検出試薬を患者の糞便エキス
   と共に３７℃で１時間培養し、次いで流行性非Ａ非Ｂ型
   ウイルス性肝炎から回復中の患者の血清から精製し、酵
   素で標識をつけたＩｇＧフラクションとともに、適切な
   展開基質の存在下で培養することからなる流行性非Ａ非
   Ｂ型ウイルス性肝炎の診断方法。 ８、前記ＩｇＧフラクションがβ−ガラクトシダーゼで
   標識され、適切な展開基質が好ましくはオルソニトロフ
   ェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドからなる特許請求
   の範囲第７項の方法。 ９、流行性非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝炎を検出するために
   、特許請求の範囲第１項の抗−非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝
   炎ＩｇＭと関連して用いられる、酵素で標識が付された
   、流行性非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝炎から回復中の患者の
   血清由来のＩｇＧ。 １０、流行性非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝炎から回復中の患
   者の血清を、ＤＥＡＥ−トリスアクリルのカラムのクロ
   マトグラフィに付して精製し、次いでこのようにして単
   離したＩｇＧに、適当な酵素、好ましくはβ−ガラクト
   シダーゼで公知の方法によって標識を付けることからな
   る特許請求の範囲第９項のＩｇＧの製造方法。 １１、特許請求の範囲第７項もしくは第８項の診断方法
   を行うのに必要な通常の緩衝液、溶媒および試薬の外に
   、固体支持体上の抗−非Ａ非Ｂ型ウイルス性肝炎ＩｇＭ
   からなる少なくともひとつの診断用試薬、特許請求の範
   囲第９項の酵素で標識が付されたＩｇＧからなる少なく
   ともひとつの試薬および酵素反応を展開するための少な
   くともひとつの適切な基質を有する流行性非Ａ非Ｂ型ウ
   イルス性肝炎診断用キット。