CN111505139A - 一种三叶青药材中山柰酚-3-o-芸香糖苷含量的测定方法 - Google Patents

一种三叶青药材中山柰酚-3-o-芸香糖苷含量的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种三叶青药材中山柰酚‑3‑O‑芸香糖苷含量的测定方法，属于化学检测技术领域。本发明使用高效液相色谱法对三叶青药材中山柰酚‑3‑O‑芸香糖苷的含量进行测定，取样量小、提取溶剂用量少、提取溶液不需要浓缩，测定方法简便快速且重复性好，能够对三叶青药材的质量进行准确评价。实施例结果表明，本发明方法所得谱图山柰酚‑3‑O‑芸香糖苷峰与其他峰的分离度大于1.5，说明其分离度好；在线性关系试验中，本发明测定方法进样量在0.004～0.12μg范围内线性关系良好；在重复性试验中，本发明测定方法山柰酚‑3‑O‑芸香糖苷含量的相对标准偏差为2.76％，说明本发明方法重复性良好。

Description

一种三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的测定方法
技术领域
本发明涉及药物中间体生产技术领域，特别涉及一种三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的测定方法。
背景技术
三叶青(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)为葡萄科三叶崖爬藤属多年生常绿藤本植物，是我国特有的珍稀药用植物。三叶青具有清热解毒、消肿止痛、化痰散结的功效，用于治疗高热惊厥、肺炎、肝炎、毒蛇咬伤等症。三叶青主要分布在浙江、江西、福建、湖南、广西、贵州等地。
目前，三叶青药材的质量控制成分为三叶青中黄酮类物质。使用高效液相色谱法对三叶青中黄酮类成分进行测定时，由于三叶青中黄酮类成分种类较多，需要的样品取样量较大，为3.0～4.0g；提取溶剂用量多，为40～50mL，且提取后溶液需要浓缩，测定方法较为繁琐。因此，需要寻找一种新的三叶青药材质量控制成分及其测定方法，以降低样品取样量和提取溶剂用量，并简化测定过程。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的测定方法。本发明通过对三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷进行高效液相色谱测试，取样量小，提取溶剂用量少，方法简单，且能够对三叶青药材的质量进行准确评价。
为了实现上述发明的目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的测定方法，包括以下步骤：
(1)将三叶青粉末与甲醇混合，依次进行超声提取和微滤，所述微滤得到的滤液为供试品溶液；所述三叶青粉末的质量为0.11～0.22g，所述甲醇的体积为5～10mL；
(2)取样所述供试品溶液进行高效液相色谱测试，得到供试品液相色谱测试结果；
所述高效液相色谱测试的条件包括：
色谱柱为CAPCELL PAK C18，所述色谱柱的柱长为250mm，柱径为4.6mm，填料粒径为5μm；
所述高效液相色谱的柱温为30℃；
所述高效液相色谱的流动相A为乙腈，流动相B为纯水；所述流动相A和B的流速为1.0mL/min；
所述流动相的洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序为：
0min时，流动相A与B的体积比为15：85；
30min时，流动相A与B的体积比为30：70；
(3)根据预定的标准曲线和所述步骤(2)得到的供试品液相色谱测试结果，得到所述供试品溶液的理论进样量，所述标准曲线为山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品进样量与液相色谱峰面积之间的线性关系曲线；
(4)根据所述步骤(3)得到的理论进样量和所述步骤(2)的实际进样量，得到三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷的含量。
优选的，所述三叶青粉末的粒度≥40目。
优选的，所述超声提取的功率为300～400W，频率为40kHz，时间为50～60min。
优选的，所述微滤的方法为微孔膜过滤。
优选的，所述微滤用微孔膜为醇溶性微孔膜，孔径为0.45μm。
优选的，所述高效液相色谱测试的进样量为5～10μL。
优选的，所述高效液相色谱测试的检测器为紫外可见光检测器；所述检测器的检测波长为350nm。
本发明提供了一种三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的测定方法，山柰酚-3-O-芸香糖苷在三叶青药材黄酮类成分中含量较高，且是三叶青抗氧化、抗炎和抗肿瘤作用的活性成分。本发明使用三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷作为质量控制成分，通过高效液相色谱法对三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷的含量进行测定，取样量小、提取溶剂用量少、提取溶液不需要浓缩，测定方法简便快速且重复性好，能够对三叶青药材的质量进行准确评价。实施例结果表明，本发明方法所得谱图山柰酚-3-O-芸香糖苷峰与其他峰的分离度大于1.5，说明其分离度好；在线性关系试验中，本发明测定方法进样量在0.004～0.12μg范围内线性关系良好；在重复性试验中，本发明测定方法山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的相对标准偏差为2.76％，说明本发明方法重复性良好。
附图说明
图1为1μL(0.004mg/mL)对照品溶液的HPLC图谱；
图2为3μL(0.004mg/mL)对照品溶液的HPLC图谱；
图3为5μL(0.004mg/mL)对照品溶液的HPLC图谱；
图4为7μL(0.004mg/mL)对照品溶液的HPLC图谱；
图5为10μL(0.004mg/mL)对照品溶液的HPLC图谱；
图6为3μL(0.04mg/mL)对照品溶液的HPLC图谱；
图7为对照品溶液的标准曲线图；
图8为实施例1中供试品溶液的HPLC图谱；
图9为实施例2中供试品溶液的HPLC图谱；
图10为实施例3中供试品溶液的HPLC图谱；
图11为实施例4中供试品溶液的HPLC图谱；
图12为实施例5中供试品溶液的HPLC图谱。
具体实施方式
本发明提供了一种三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的测定方法，包括以下步骤：
(1)将三叶青粉末与甲醇混合，依次进行超声提取和微滤，所述微滤得到的滤液为供试品溶液；所述三叶青粉末的质量为0.11～0.22g，所述甲醇的体积为5～10mL；
(2)取样所述供试品溶液进行高效液相色谱测试，得到供试品液相色谱测试结果；
所述高效液相色谱测试的条件包括：
色谱柱为CAPCELL PAK C18，所述色谱柱的柱长为250mm，柱径为4.6mm，填料粒径为5μm；
所述高效液相色谱的柱温为30℃；
所述高效液相色谱的流动相A为乙腈，流动相B为纯水；所述流动相的流速为1.0mL/min；
所述流动相的洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序为：
0min时，流动相A与B的体积比为15：85；
30min时，流动相A与B的体积比为30：70；
(3)根据预定的标准曲线和所述步骤(2)得到的供试品液相色谱测试结果，得到所述供试品溶液的理论进样量，所述标准曲线为山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品进样量与液相色谱峰面积之间的线性关系曲线；
(4)根据所述步骤(3)得到的理论进样量和所述步骤(2)的实际进样量，得到三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷的含量。
本发明将三叶青粉末与甲醇混合，依次进行超声提取和微滤，所述微滤得到的滤液为供试品溶液。在本发明中，所述三叶青粉末的制备方法优选包括以下步骤：
将三叶青药材依次进行粉碎和过筛，得到三叶青粉末。
本发明对所述粉碎的方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的粉碎方式即可。在本发明中，所述过筛优选为过40～60目筛，所述三叶青粉末的粒度优选≥40目，更优选≥60目。
在本发明中，所述三叶青粉末的质量为0.11～0.22g，优选为0.2g；所述甲醇的体积为5～10mL，优选为10mL。本发明对所述三叶青粉末与甲醇的混合方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的混合方式即可，具体的如搅拌混合。在本发明中，所述超声提取的功率优选为300～400W，更优选为350W；所述超声提取的频率优选为40kHz，时间优选为50～60min，更优选为52～56min。本发明在所述超声提取后，优选将所得溶液冷却至室温并用甲醇补足减失量。本发明使用甲醇作为提取剂，能够将目标组分充分的提取出来。
在本发明中，所述过滤的方式优选为微孔膜过滤，所述微孔膜优选为醇溶性微孔膜，所述微孔膜的孔径优选为0.45μm。
本发明得到所述滤液后，不需要浓缩，所述滤液直接作为供试品溶液进样。
得到供试品溶液后，本发明取样所述供试品溶液进行高效液相色谱测试，得到供试品液相色谱测试结果。在本发明中，所述高效液相色谱测试的进样量优选为5～10μL。在本发明中，所述高效液相色谱测试的条件包括：
色谱柱为CAPCELL PAK C18，所述色谱柱的柱长为250mm，柱径为4.6mm，填料粒径为5μm；
所述高效液相色谱的柱温为30℃；
所述高效液相色谱的流动相A为乙腈，流动相B为纯水；所述流动相的流速为1.0mL/min；
所述流动相的洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序为：
0min时，流动相A与B的体积比为15：85；
30min时，流动相A与B的体积比为30：70。
在本发明中，所述高效液相色谱分析的检测器优选为紫外可见光检测器；所述检测器的检测波长优选为350nm。本发明通过对检测波长筛选、对洗脱程序进行设定，在进行高效液相色谱分离时，洗脱相不需要加酸，山柰酚-3-O-芸香糖苷成分即能得到很好的分离。
得到供试品液相色谱测试结果后，本发明根据预定的标准曲线和所述步骤(2)得到的供试品液相色谱测试结果，得到所述供试品溶液的理论进样量，所述标准曲线为山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品进样量与液相色谱峰面积之间的线性关系曲线。
在本发明中，所述标准曲线的获得方法优选为：
提供山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品溶液；
对不同进样量的对照品溶液进行高效液相色谱分析，得到对照品液相色谱图和山柰酚-3-O-芸香糖苷峰面积；
以峰面积为纵坐标，以山柰酚-3-O-芸香糖苷进样量为横坐标绘制标准曲线。
在本发明中，所述对照品溶液的浓度优选为0.004mg/mL。在本发明中，所述提供山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品溶液优选包括以下步骤：
称取山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品1.6mg，加甲醇溶解定容至1mL，取0.25mL置于10mL容量瓶中加甲醇定容，再取1mL溶液至10mL的容量瓶中加甲醇定容，得浓度为0.004mg/mL的山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品溶液。
在本发明中，对不同进样量的对照品溶液进行高效液相色谱分析时，所选取的对照品溶液的进样量优选为1μL(浓度为0.004mg/mL)、3μL(浓度为0.004mg/mL)、5μL(浓度为0.004mg/mL)、7μL(浓度为0.004mg/mL)、10μL(浓度为0.004mg/mL)和3μL(浓度为0.04mg/mL)；所述对对照品溶液进行高效液相色谱测试时，高效液相色谱测试的条件、检测器种类和检测波长与上文相同，在此不再赘述。
得到对照品液相色谱图和山柰酚-3-O-芸香糖苷峰面积后，本发明以峰面积为纵坐标，以山柰酚-3-O-芸香糖苷进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线。本发明对所述绘制标准曲线的方法没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的绘制标准曲线的方法即可。在本发明中，所述进样量与山柰酚-3-O-芸香糖苷峰面积呈正相关。作为本发明的一个具体实施例，所述标准曲线为Y＝175.74x+2047.3。
得到标准曲线后，本发明根据所述供试品液相色谱图和山柰酚-3-O-芸香糖苷峰面积，以及标准曲线得到供试品溶液中山柰酚-3-O-芸香糖苷进样质量(μg)；得到供试品溶液中山柰酚-3-O-芸香糖苷进质样量后，本发明根据式I计算得到供试品溶液中山柰酚-3-O-芸香糖苷的质量浓度；
Figure BDA0002464929620000061
式I中，C供试品为供试品溶液中山柰酚-3-O-芸香糖苷的质量浓度，mg/mL；
m进样为供试品溶液中山柰酚-3-O-芸香糖苷的进样质量，mg；
V进样为供试品溶液的进样体积，mL；
得到供试品溶液的质量浓度后，本发明根据式II计算得到三叶青粉末中山柰酚-3-O-芸香糖苷的质量含量：
Figure BDA0002464929620000062
式II中，A为三叶青粉末中山柰酚-3-O-芸香糖苷的质量百分含量，％；
C供试品为供试品溶液中山柰酚-3-O-芸香糖苷的质量浓度，mg/mL；
V供试品为供试品溶液的体积，mL；
m三叶青为三叶青粉末的质量，mg。
本发明使用高效液相色谱法对三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷的含量进行测定，取样量小、提取溶剂用量少、提取溶液不需要浓缩，测定方法简便快速且重复性好，能够对三叶青药材的质量进行准确评价。
下面结合实施例对本发明提供的三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的测定方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
专属性实验：
(1)精密称取山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品(购买于成都埃法生物科技有限公司，批号：AF8112493，纯度：98％)1.6mg，加甲醇溶解定容至1mL，取0.25ml置于10mL容量瓶中加甲醇定容，再取1mL溶液至10mL的容量瓶中加甲醇定容，得浓度为0.004mg/mL的山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品溶液。
(2)取三叶青药材饮片适量，粉碎，过60目筛，称取三叶青粉末0.2g，精密称定，置于10mL容量瓶中加甲醇定容，密塞，超声(功率：400W，频率：40kHz)60min，放冷至室温，用甲醇补足减失量，取溶液用醇溶性0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
(3)分别精密吸取对照品溶液1μL(0.004mg/mL)、3μL(0.004mg/mL)、5μL(0.004mg/mL)、7μL(0.004mg/mL)、10μL(0.004mg/mL)和3μL(0.04mg/mL)进行高效液相色谱分析，测定山柰酚-3-O-芸香糖苷峰面积，其中1μL(0.004mg/mL)、3μL(0.004mg/mL)、5μL(0.004mg/mL)、7μL(0.004mg/mL)、10μL(0.004mg/mL)和3μL(0.04mg/mL)对照品溶液的高效液相色谱分析(HPLC)图谱分别如图1～6所示，图1～6中的出峰为山柰酚-3-O-芸香糖苷峰；
其中高效液相色谱分析的参数为：色谱柱：CAPCELLC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相A为乙腈，B为纯水；梯度洗脱(0～30min，85％～70％B)；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；检测器为紫外可见光检测器，检测波长：350nm；进样量：10μL；以峰面积为纵坐标，以山柰酚-3-O-芸香糖苷进样量为横坐标绘制标准曲线；其中线性回归方程数据如表1所示：
表1线性回归方程数据
Figure BDA0002464929620000081
所得标准曲线如图7所示，进样量0.004～0.12μg范围内线性关系良好。
(4)对10μL供试品溶液进行高效液相色谱分析，分析参数与步骤(3)相同，所得HPLC图谱如图8所示，图8中21.456min处出峰为山柰酚-3-O-芸香糖苷峰，由图8可知，所得谱图山柰酚-3-O-芸香糖苷峰与其他峰的分离度大于1.5，说明其分离度好；通过回归方程和式I、式II计算出三叶青粉末中山柰酚-3-O-芸香糖苷的质量百分含量为0.00867％。
实施例2
(1)取三叶青药材饮片适量，粉碎，过60目筛，称取三叶青粉末0.2g，精密称定，置于10mL容量瓶中加甲醇定容，密塞，超声(功率：400W，频率：40kHz)60min，放冷至室温，用甲醇补足减失量，取溶液用醇溶性0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液。
(2)对10μL供试品溶液进行高效液相色谱分析，分析参数与实施例1相同，所得HPLC图谱如图9所示，图9中21.451min处出峰为山柰酚-3-O-芸香糖苷峰，通过回归方程和式I、式II计算出三叶青粉末中山柰酚-3-O-芸香糖苷的质量百分含量为0.00927％。
实施例3
(1)取三叶青药材饮片适量，粉碎，过40目筛，称取三叶青粉末0.2g，精密称定,置于10mL容量瓶中加甲醇定容，密塞，超声(功率：400W，频率：40kHz)55min，放冷至室温，用甲醇补足减失量，取溶液用醇溶性0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
(2)对10μL供试品溶液进行高效液相色谱分析，分析参数与实施例1相同，所得HPLC图谱如图10所示，图10中21.541min处出峰为山柰酚-3-O-芸香糖苷峰，通过回归方程和式I、式II计算出三叶青粉末中山柰酚-3-O-芸香糖苷的质量百分含量为0.00907％。
实施例4
(1)取三叶青药材饮片适量，粉碎，过60目筛，称取三叶青粉末0.2g，精密称定，置于10mL容量瓶中加甲醇定容，密塞，超声(功率：400W，频率：40kHz)60min，放冷至室温，用甲醇补足减失量，取溶液用醇溶性0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
(2)对10μL供试品溶液进行高效液相色谱分析，分析参数与实施例1相同，所得HPLC图谱如图11所示，图11中21.454min处出峰为山柰酚-3-O-芸香糖苷峰，通过回归方程和式I、式II计算出三叶青粉末中山柰酚-3-O-芸香糖苷的质量百分含量为0.00934％。
实施例5
(1)取三叶青药材饮片适量，粉碎，过40目筛，称取三叶青粉末0.2g，精密称定，置于10mL容量瓶中加甲醇定容，密塞，超声(功率：400W，频率：40kHz)60min，放冷至室温，用甲醇补足减失量，取溶液用醇溶性0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
(2)对10μL供试品溶液进行高效液相色谱分析，分析参数与实施例1相同，所得HPLC图谱如图12所示，图12中21.360min处出峰为山柰酚-3-O-芸香糖苷峰，通过回归方程和式I、式II计算出三叶青粉末中山柰酚-3-O-芸香糖苷的质量百分含量为0.00929％。
测试例1
(1)精密度试验
分别取10μL对照品溶液，按实施例1的色谱条件连续进样5次，记录各峰面积于表2中；经计算，山柰酚-3-O-芸香糖苷峰面积的相对标准偏差(RSD)为2.49％(n＝5)，表明本发明使用仪器精密度良好。
表2精密度试验所得各峰面积
进样次数 第1次进样 第2次进样 第3次进样 第4次进样 第5次进样
峰面积 73192 74574 76253 75538 78220
(2)重复性试验
取同一批三叶青(购买于亳州市齐心药业销售有限公司，批号：191022)，平行取样5份，按实施例1的方法制备供试品溶液，按照实施例1的色谱条件进行分析，记录峰面积并计算含量于表3中；经计算，山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的相对标准偏差(RSD)为2.76％(n＝5)，表明本发明所述方法重复性良好。
表3重复性试验所得各峰面积和含量
Figure BDA0002464929620000101
(3)稳定性试验
取实施例1中的供试品溶液，于室温下放置0、6、10、12、24h后，按照实施例1的色谱条件进行分析，记录峰面积于表4中；经计算，山柰酚-3-O-芸香糖苷峰面积的相对标准偏差(RSD)为2.62％(n＝5)，表明本发明供试品溶液在24h内能够保持稳定。
表4稳定性试验所得各峰面积
放置时间h 0 6 10 12 24
峰面积 38271 37106 36988 37895 39437
(4)加样回收率试验
取已知含量的三叶青粉末(批号：191022)5份，精密称定适量，分别加入等量的已知含量的山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品溶液，按照实施例1的方法制备供试品溶液，按照实施例1的色谱条件进行分析，计算加样回收率，记录结果于表5中。经计算，山柰酚-3-O-芸香糖苷平均加样回收率为97.3％，相对标准偏差(RSD)为3.83％(n＝5)。
表5加样回收率试验数据
Figure BDA0002464929620000102
Figure BDA0002464929620000111
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将三叶青粉末与甲醇混合，依次进行超声提取和微滤，所述微滤得到的滤液为供试品溶液；所述三叶青粉末的质量为0.11～0.22g，所述甲醇的体积为5～10mL；
(2)取样所述供试品溶液进行高效液相色谱测试，得到供试品液相色谱测试结果；
所述高效液相色谱测试的条件包括：
色谱柱为CAPCELL PAK C18，所述色谱柱的柱长为250mm，柱径为4.6mm，填料粒径为5μm；
所述高效液相色谱的柱温为30℃；
所述高效液相色谱的流动相A为乙腈，流动相B为纯水；所述流动相A和B的流速为1.0mL/min；
所述流动相的洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序为：
0min时，流动相A与B的体积比为15：85；
30min时，流动相A与B的体积比为30：70；
(3)根据预定的标准曲线和所述步骤(2)得到的供试品液相色谱测试结果，得到所述供试品溶液的理论进样量，所述标准曲线为山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品进样量与液相色谱峰面积之间的线性关系曲线；
(4)根据所述步骤(3)得到的理论进样量和所述步骤(2)的实际进样量，得到三叶青药材中山柰酚-3-O-芸香糖苷的含量。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述三叶青粉末的粒度≥40目。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述超声提取的功率为300～400W，频率为40kHz，时间为50～60min。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述微滤的方法为微孔膜过滤。
5.根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述微滤用微孔膜为醇溶性微孔膜，孔径为0.45μm。
6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱测试的进样量为5～10μL。
7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱测试的检测器为紫外可见光检测器；所述检测器的检测波长为350nm。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115737728A (zh) * 2022-11-17 2023-03-07 浙江理工大学 一种三叶青提取物的应用

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114184700B (zh) * 2021-12-06 2023-08-22 内蒙古民族大学 一种蒙药肋柱花化学成分含量的测定方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107037167A (zh) * 2017-06-16 2017-08-11 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 多指标成分定量测定银杏叶中黄酮类成分含量的方法
CN108414642A (zh) * 2018-03-28 2018-08-17 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 一种舒血宁注射液中黄酮醇苷原型成分的含量测定方法及用途
CN109444275A (zh) * 2018-10-18 2019-03-08 浙江广胜药业有限公司 一种快速筛查紫藤三叶青与青藤三叶青药材的方法
CN109633002A (zh) * 2018-12-26 2019-04-16 成都普思生物科技股份有限公司 一种测定红花中山柰酚-3-o-芸香糖苷含量的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107037167A (zh) * 2017-06-16 2017-08-11 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 多指标成分定量测定银杏叶中黄酮类成分含量的方法
CN108414642A (zh) * 2018-03-28 2018-08-17 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 一种舒血宁注射液中黄酮醇苷原型成分的含量测定方法及用途
CN109444275A (zh) * 2018-10-18 2019-03-08 浙江广胜药业有限公司 一种快速筛查紫藤三叶青与青藤三叶青药材的方法
CN109633002A (zh) * 2018-12-26 2019-04-16 成都普思生物科技股份有限公司 一种测定红花中山柰酚-3-o-芸香糖苷含量的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘帅英等: "HPLC同时测定三叶青中5种黄酮类成分的含量", 《中国现代应用药学》 *
李士敏等: "不同月份三叶青中8种有效成分含量变化", 《中国实验方剂学杂志》 *
李彩凤等: "HPLC法同时测定三叶青块根中6个黄酮类成分的含量", 《中国药房》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115737728A (zh) * 2022-11-17 2023-03-07 浙江理工大学 一种三叶青提取物的应用

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