CN111471659A - 具有去环氧基催化活性的多肽及其编码核酸和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种具有去环氧基催化活性的多肽及其编码核酸和用途。本发明的多肽能够在缓和的条件下催化单端孢霉烯族毒素与谷胱甘肽反应去除环氧基，并产生无毒无害的谷胱甘肽化衍生物，从而实现单端孢霉烯族毒素的解毒和脱毒。本发明的多肽在农业、食品、饲料和医药等领域具有广泛用途。

Description

具有去环氧基催化活性的多肽及其编码核酸和用途
技术领域
本发明涉及多肽领域，具体地涉及一种具有去环氧基催化活性的多肽及其编码核酸 和用途。
背景技术
单端孢霉烯族毒素的基本化学结构是倍半萜烯，因其在第12位碳、第13位碳上形成环氧基，故又称12,13-环氧单端孢霉烯族化合物。自从二十世纪70年代，科研工作者 已经探明单端孢霉烯族毒素的环氧基是主要毒性来源基团。目前，在高碱性条件下可以 体外化学合成去环氧基的单端孢霉烯族毒素衍生物，但由于反应条件苛刻、且效率低下， 很难在工业上应用。另外，从动物肠道微生物中已分离出几种厌氧细菌可以对单端孢霉 烯族毒素进行解毒，但对于作用机制并不清楚，且由于依赖于厌氧条件，实际工业应用 受到很大限制。
发明内容
鉴于现有技术存在的问题，发明人提供一种具有去环氧基催化活性的多肽，其能够 在缓和的条件下催化单端孢霉烯族毒素的环氧基与谷胱甘肽(缩写GSH)反应产生无毒无 害的GSH化衍生物，从而实现单端孢霉烯族毒素的解毒脱毒。至少部分地基于此完成了本发明，具体地，本发明包括以下内容。
本发明的第一方面，提供一种分离的具有去环氧基催化活性的多肽，在15-35℃温度 下所述多肽能够使单端孢霉烯族毒素与GSH在PBS缓冲液中催化反应去除环氧基产生GSH化衍生物。此处，虽然限定了15-35℃的反应温度，但这里仅仅是表征或鉴定多肽在 该条件下具有去环氧催化活性，并不意味着在低于15℃或高于35℃时本发明的多肽不具 有去环氧基催化活性。实际上，本发明的活性多肽催化反应的条件并不局限于上述温度。
本发明的第二方面，提供一种分离的具有去环氧基催化活性的多肽，其包含选自由 下述(1)-(5)组成的组中的一种氨基酸序列：
(1)SEQ ID No.:1-35所示的氨基酸序列，其中SEQ ID No.:1表示来源于长穗偃麦草 十倍体的氨基酸序列，SEQ ID No.:2表示来源于长穗偃麦草二倍体的氨基酸序列，SEQID No.:3-24表示已验证具有原活性的SEQ ID No.:1的突变体序列，SEQ ID No.:25-35表示来源于香柱菌属
Figure BDA0002401430920000011
的不同物种的氨基酸序列。
(2)与(1)中的氨基酸序列的序列同一性为90％以上，优选95％以上，更优选97％以 上，还优选98％以上，进一步优选99％以上，且来源于相同属，优选来源于相同物种的氨基酸序列；进一步优选这些序列组成的多肽仍具有原蛋白酶活性。在某些实施方案中，活性多肽的氨基酸序列与(1)中的氨基酸序列的序列同一性为95％以上，且均来源于香柱菌属。
(3)与(1)或(2)的氨基酸序列相比具有一个或多个氨基酸突变且序列同一性为90％以 上，优选95％以上，更优选97％以上，还优选98％以上，进一步优选99％以上的氨基酸 序列，此处的氨基酸突变包括氨基酸的插入、缺失或替换。
(4)源自(1)-(3)任一项所述的氨基酸序列的部分连续序列，优选具有该部分连续序列 的多肽(或截短多肽)仍具有原多肽的酶催化活性，更优选具有位于(1)-(3)任一项所述的氨 基酸序列N端的部分连续序列，例如，具有从N端起前200至前250个氨基酸序列的多肽，例如具有N端起前208个氨基酸序列的多肽，或具有从N端起前242个氨基酸序列 的多肽。
(5)在(1)-(4)任一项所述的氨基酸序列的N端和/或C端连接其他氨基酸序列的嵌合 序列。即，本发明的活性多肽可以为嵌合多肽。在某些实施方案中，其他氨基酸序列为增强多肽表达或分泌的序列，其实例包括但不限于引导肽、信号肽和转动肽。在某些实施 方案中，活性多肽为全长蛋白的活性片段与其他氨基酸序列的嵌合多肽，其中其他氨基 酸序列为对应于该活性片段之外的来源于同源的其他蛋白的序列，例如结构区或功能区 的序列。例如，当来源于某物种中的蛋白酶全长由A+B两部分组成，与其相同属但不同 物种的另一同源蛋白酶全长对应的由A’+B’两部分组成，且A与A’为同源对应区域，B 与B’为同源对应区域的情况下，嵌合多肽可以由A’+B或A+B’组成。在某些实施方案中， 其他氨基酸序列包含非功能序列，例如连接臂或间隔序列。在某些实施方案中，其他氨 基酸序列为具有独立功能的多肽，其通过非功能序列，例如连接臂或间隔序列与本发明 的活性多肽连接。
在某些实施方案中，本发明的活性多肽具有选自下述至少之一的保守位点：第98位 氨基酸A、第99位氨基酸A。
本发明的第三方面，提供一种分离的活性多肽，其氨基酸序列如下所示：
V1-GDX1X2DIAAX3LQRT-V2- ADYARFNX1NVDX4AFX5AHVX1X6MX6HGLPLDPAX7X4DVX8KAEFVR-V3，其中：
X1表示G或S；
X2表示F或L；
X3表示Y或H；
X4表示A或V；
X5表示T或Q或N；
X6表示L或V；
X7表示T或S；
X8表示T或I；
V1不存在或表示第一可变区，所述第一可变区的氨基酸序列对应与SEQ.ID.No.1中 第92位氨基酸前的连续多个氨基酸序列，且所述第一可变区与该连续多个氨基酸的序列 的序列同一性为80％以上，85％以上，优选90％以上，优选92％以上，更优选95％以上，进一步优选98％以下，例如99％；
V2表示连接臂或表示第二可变区，所述第二可变区的氨基酸序列对应与SEQ.ID.No.1中第105-143位氨基酸之间的连续多个氨基酸序列，且所述第二可变区与该连续多个氨基酸的序列的序列同一性为80％以上，85％以上，优选90％以上，优选92％ 以上，更优选95％以上，进一步优选98％以下，例如99％；
V3不存在或表示第三可变区，所述第三可变区的氨基酸序列对应与SEQ.ID.No.1中 第144位氨基酸之后的连续多个氨基酸序列，且所述第三可变区与该连续多个氨基酸的序列的序列同一性为80％以上，85％以上，优选90％以上，优选92％以上，更优选95％ 以上，进一步优选98％以下，例如99％。
本发明的第四方面，提供一种分离的核酸分子，其编码第一方面或第二方面所述的 多肽。
本发明的第五方面，提供一种分离的核酸分子，其具有选自下述(a)-(e)组成的组中的 一种碱基序列：
(a)SEQ ID No.:36-70所示的序列。其中，SEQ ID No.:36表示来源于长穗偃麦草十倍 体的去环氧酶基因，SEQ ID No.:37表示来源于长穗偃麦草二倍体的去环氧酶基因，SEQ ID No.:38-59表示SEQ ID No.:36序列的突变体，SEQ ID No.:60-70表示来源于香柱菌属 不同物种的同源基因序列。
(b)在(a)中碱基序列的基础上经宿主密码子偏好性改造的序列。为了适应于不同宿 主的需要，可根据简并密码子来对(a)中的碱基序列进行偏好性改造。密码子偏好性改造 一般不改变产物蛋白或多肽的序列。
(c)(a)中所示序列的保守区序列。优选编码活性多肽的保守区序列。需要说明的是碱 基的保守区序列并一定表达或编码活性多肽。只要其为保守区即可用作检测靶标。
(d)与(a)-(c)的序列同一性为95％以上，优选97％以上，更优选98％以上，最优选99％ 以上且来源于相同属，优选相同种的序列；
(e)与(a)-(d)中任一序列的至少一部分互补的序列。互补的序列包括在严格条件下与 这些序列特异性杂交的序列。例如，探针、引物等。
本发明的第六方面，提供一种核酸构建体，其包含本发明第三和第四方面所述的核 酸和可选的调控元件。其中，调控元件的实例包括但不限于启动子、活化子、增强子、操纵子、核糖体结合位点、起始信号、停止信号、cap信号、多腺苷酸化信号和其他涉及转 录或翻译控制的信号等。这些调控元件能够使核酸分子在预期目标细胞(例如，大肠杆菌、 酵母细胞等)中表达。核酸构建体包括能够自我复制的构建体，也包括不能自我复制的构 建体。能够自我复制的构建体的实例包括但不限于载体、质粒等。
本发明的第七方面，提供一种宿主细胞，其包含通过基因工程手段引入的本发明第 三和第四方面所述的核酸，或本发明第五方面所述的核酸构建体。宿主细胞不特别限定， 包括原核细胞、真核细胞。原核细胞的实例包括但不限于大肠杆菌等，真核细胞的实例包括但不限于酵母、植物细胞或动物细胞。
本发明的第八方面，提供一种活性多肽的生产方法。本发明的生产方法包括基因工 程方法和化学合成方法。基因工程方法包括使本发明的核酸在细胞内(例如大肠杆菌)或非 细胞表达系统中表达，从而得到多肽的步骤。化学合成方法可使用目前已知的任何方法。
本发明的第九方面，提供一种用于催化单端孢霉烯族化合物去环氧基反应的方法， 其包括在适于反应的条件使本发明第一和第二方面所述的活性多肽，或者第六方面所述 的宿主细胞与单端孢霉烯族化合物和GSH接触，从而生成GSH化衍生物的步骤。本发 明中适于反应的条件包括1-45℃，优选2-40℃，更优选5-35℃，进一步优选10-30℃的 反应温度；10分钟-36小时，例如10-60分钟、1.5-24小时的反应时间；适当的反应溶液， 例如，PBS溶液或DMSO溶液，4.0-7.5之间，优选4.5-7.0之间的pH。具体的反应条件 需根据酶的来源、酶活性大小、底物浓度、反应量等由本领域人员根据需要而调整，并不 作特别限定。
本发明的第十方面，提供一种谷胱甘肽化衍生物，其具有下述通式(I)所示的结构：
Figure BDA0002401430920000031
其中，R1、R2和R3各自独立地表示氢原子、羟基或由-OCO-R’表示的酯基，其中R’ 为直链或支链C1-C5烷基，R4表示氢原子或羟基，R5表示氢原子、＝O、羟基或由-OCO- R”表示的酯基，其中R”为直链或支链C1-C10烷基。
本发明的第十一方面，提供本发明的谷胱甘肽化衍生物作为评价单端孢霉烯族化合 物去环氧基反应指标的用途。
本发明的第十二方面，提供一种用于评价被单端孢霉烯族化合物污染的样品的解毒 效果的方法，其包括以本发明的谷胱甘肽化衍生物作为评价指标的步骤。
本发明的第十三方面，提供一种用于评价被单端孢霉烯族化合物污染的样品的解毒 效果的方法，其包括以下步骤：
(1)测量所述样品中谷胱甘肽化衍生物含量得到测量值，或测量样品中谷胱甘肽化衍 生物与单端孢霉烯族化合物的比值的步骤；
(2)将测量值或比值与参考值比较的步骤；
(3)根据比较结果评价样品解毒效果的步骤。
在某些实施方案中，此处的参考值为由对照样品得到的结果，或样品在未经处理之 前谷胱甘肽化衍生物的含量，或谷胱甘肽化衍生物的含量与单端孢霉烯族化合物的比值。
本发明的第十四方面，提供一种用于测定多肽去环氧基催化活性的方法，其包括使 用多肽处理标准样品，并测量处理前后标准样品中本发明的谷胱甘肽化衍生物含量，或单端孢霉烯族化合物含量，或谷胱甘肽化衍生物的含量与单端孢霉烯族化合物比值的步骤。其中，标准样品为单端孢霉烯族化合物的标准样品。谷胱甘肽化衍生物的含量与单 端孢霉烯族化合物比值包括谷胱甘肽化衍生物的含量:单端孢霉烯族化合物含量的情况， 也包括单端孢霉烯族化合物含量:谷胱甘肽化衍生物含量的情况。
本发明的第十五方面，提供一种用于鉴定能够影响多肽去环氧基催化活性的化合物 的方法，其包括以下步骤：
a.在适于反应的条件下使多肽与单端孢霉烯族化合物的标准样品接触得到反应体 系，并测量谷胱甘肽衍生物的第一生成速率的步骤；
b.将待测化合物施用至与步骤a相同的反应体系，并测量谷胱甘肽衍生物的第二速率 的步骤，与步骤a相同的反应体系包括反应混合物中各成分及其含量相的另一反应体系， 也包括同一反应体系在不同时间段的情况；
c.比较所述第一生成速率和所述第二生成速率的步骤，当所述第二生成速率小于所 述第一生成速率时，将待测化合物鉴定为多肽活性抑制化合物，当所述第二生成速率大于所述第一生成速率时，将待测化合物鉴定为多肽活性促进化合物，当所述第二生成速 率等于所述第一生成速率时，将待测化合物鉴定为对多肽活性无效的化合物。
本发明的第十六方面，提供本发明的活性多肽在食品加工、饲料加工和制药中的用 途。
本发明的第十七方面，提供本发明的核酸在植物育种、病害防治中的用途。
附图说明
图1FTCD纯化后的SDS-PAGE分析图。
图2酶量对酶促反应的影响。(a)酶促反应底物呕吐毒素(DON)减少情况；(b)酶促反 应生成物DON-GSH生成情况。
图3反应缓冲液pH值对酶促反应的影响。(a)酶促反应底物呕吐毒素(DON)减少情况；(b)酶促反应生成物DON-GSH生成情况。
图4反应温度对酶促反应的影响。(a)酶促反应底物呕吐毒素(DON)减少情况；(b)酶 促反应生成物DON-GSH生成情况。
图5A为LC-HRMS(方法1)DON与GSH体外酶促反应的提取离子流谱图EIC。
图5B为LC-HRMS2(方法2)DON与GSH体外酶促反应获得的DON-GSH的高能碰 撞解离产生的子离子质谱图。
图6A为LC-HRMS(方法1)3-ADON与GSH体外酶促反应的提取离子流谱图EIC。
图6B为LC-HRMS2(方法2)3-ADON与GSH体外酶促反应获得的3-ADON-GSH通 过高能碰撞解离产生的子离子质谱图。
图7A为LC-HRMS(方法1)15-ADON与GSH体外酶促反应提取的提取离子流谱图 EIC。
图7B LC-HRMS2(方法2)15-ADON与GSH体外酶促反应获得的15-ADON-GSH的 高能碰撞解离产生的子离子质谱图。
图8A为LC-HRMS(方法1)NIV与GSH体外酶促反应的提取离子流谱图EIC。
图8B为LC-HRMS2(方法2)NIV与GSH体外酶促反应获得的NIV-GSH的高能碰撞 解离产生的子离子质谱图。
图9A为LC-HRMS(方法1)Fus-X与GSH体外酶促反应的提取离子流谱图EIC。
图9B为LC-HRMS2(方法2)Fus-X与GSH体外酶促反应获得的Fus-X-GSH的高能 碰撞解离产生的子离子质谱图。
图10A为LC-HRMS(方法1)DAS与GSH体外酶促反应提取的提取离子流谱图EIC。
图10B为LC-HRMS2(方法2)DAS与GSH体外酶促反应获得的DAS-GSH的高能碰 撞解离产生的子离子质谱图。
图11A为LC-HRMS(方法1)HT-2与GSH体外酶促反应提取的提取离子流谱图EIC。
图11B为LC-HRMS2(方法2)HT-2与GSH体外酶促反应获得的HT-GSH加合物的高 能碰撞解离产生的子离子质谱图。
图12A为LC-HRMS(方法1)T-2与GSH体外酶促反应提取的提取离子流谱图EIC。
图12B为LC-HRMS2(方法2)T-2与GSH体外酶促反应获得的T2-GSH加合物的高 能碰撞解离产生的子离子质谱图。
图13单端孢霉烯族化合物对人体细胞系活力的影响。不同浓度梯度的DON、3ADON、15ADON、FUS-X、NIV、T-2、HT-2、DAS处理细胞48h后，测定OD450nm。
图14LC-HRMS(方法1)毒素处理转基因酵母提取的离子色谱图。
图15转基因FTCD毕赤酵母的DON耐受性结果。
图16FTCD及同源序列进化树。
图17LC-HRMS(方法1)DON处理FTCD同源序列转基因酵母提取的离子色谱图。 正离子模式提取到DON-GSH加合物，m/z 604.21730(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制， 而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。 另外，对于本发明中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之 间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范 围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可 独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技 术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。除非另有说明，否则“％”为基于重量的百分 数。
本文中，术语“多肽”和“蛋白”可互换使用，是指氨基酸残基的聚合物及其变体和合成的和天然存在的类似物。这两个术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是合成的非天然存在的氨基酸(诸如相应的天然存在的氨基酸的化学类似物)的氨基酸聚合物，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物及其天然存在的化学衍生物。此类化学衍生物包括例如翻译后修饰和降解产物，包括焦谷氨酰、异天冬氨酰、蛋白水解的、磷酸化的、糖基化的、 氧化的、异构化的和脱氨基化的变体。
本文中，术语“活性多肽”是指具有去环氧基酶催化活性的多肽，即将环氧基转化为 其他基团或去除该基团的活性多肽。本文有时也称作“蛋白酶”。
本文中，术语“序列同一性”是指序列在比较窗内在逐个核苷酸基础或逐个氨基酸基础上同一的程度。因此，序列同一性百分比可以通过以下来计算：在比较窗中比较两 个最优比对的序列，确定两条序列中出现的相同的核酸碱基或相同的氨基酸残基的位置 数量以得到匹配位置数，将该匹配位置数除以比较窗中的位置总数(即，窗大小)，并将结 果乘以100以得到序列同一性百分比。
本文中，两序列间的序列同一性或序列相似性(本文可互换使用)的计算通过以下方法 进行。为了确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分比，出于最优比较的目的， 将序列比对(例如，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列中的一个或两者中引入空位以用 于最优比对，出于比较目的，可以不管非同源性序列)。在某些实施方案中，出于比较目 的比对的参照序列的长度是参照序列的全部长度的至少30％，优选至少40％，更优选至少 50％，还优选至少70％、80％、90％，甚至100％。然后比较在对应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当在第一序列的一个位置被与在第二序列的对应位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则所述分子在该位置是同一的。两序列间的同一性百分比 是指所述序列共享的相同位置数的函数，将空位数和每一空位的长度考虑在内，其需要 引入用于两序列的最优比对。两序列间的序列比较和同一性百分比的确定可以利用数学 算法来实现。两氨基酸序列间或核苷酸序列之间的同一性百分比可以利用GCG软件包(可 以在http://www.gcg.com得到)中的GAP程序来确定，也可以利用ALIGN程序(2.0版)来确定。
本文中，术语“第x位氨基酸”或类似表述均以来源于长穗偃麦草十倍体的去环氧酶 的氨基酸序列为位置参考，即以SEQ ID No.:1所示的氨基酸序列为位置参考，除非另有明确说明。类似地，术语“第y位碱基”或类似表述均以来源于长穗偃麦草十倍体的去环 氧酶基因的碱基序列为位置参考，即以SEQ ID No.:36所示的氨基酸序列为位置参考，除 非另有明确说明。
本文中，术语“单端孢霉烯族毒素”或“单端孢霉烯族化合物”是指基本化学结构为倍半萜烯，在第12位碳、第13位碳上形成环氧基的一类化合物的统称。优选地，单端孢霉 烯族毒素具有下述通式(II)所示的结构：
Figure BDA0002401430920000061
其中，R1、R2和R3各自独立地表示氢原子、羟基或由-OCO-R’表示的酯基，其中R’ 为直链或支链C1-C5烷基，例如CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3或CH2(CH3)2，R4表示氢原 子或羟基，R5表示氢原子、＝O、羟基或由-OCO-R”表示的酯基，其中R”为直链或支链 C1-C10烷基，优选为CH3、CH2CH3，还优选为直链或支链C3-C8烷基，更优选CH2CH(C H3)2。在某些实施方案中，单端孢霉烯族毒素包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol, DON)、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-Acetyl-deoxynivalenol,15-ADON)、3-乙酰脱氧 雪腐镰刀菌烯醇(3-Acetyl-deoxynivalenol,3-ADON)、雪腐镰刀菌烯醇(Nivalenol,NIV)、 镰刀菌烯酮-X(FusarenonX，Fus-X)、二乙酰氧基草镰刀菌烯醇(Diacetoxyscirpenol,DA S)、T-2毒素(T-2Toxin,T-2)、HT-2毒素(HT-2Toxin,HT-2)。
本文中，术语“去环氧基催化活性”是指能够将单端孢霉烯族毒素中的环氧基(优选 在第12位碳、第13位碳上形成的环氧基)去除的活性或功能。具体催化过程如下所示：
Figure BDA0002401430920000071
其中，R1-R5的含义与通(I)和(II)中的含义相同。
实施例
一、FTCD活性多肽的制备
1.材料与方法
大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α菌株、表达菌株BL21(DE3)、原核表达载体pET-28a(+) 及质粒pMD19-T-FTCD由本实验室保存，其中质粒pMD19-T-FTCD含有来源于长穗偃麦草 的去环氧基酶基因，其序列如SEQ ID No.36所示。
1.2实验方法
1.2.1通过下述方法构建重组表达载体pET28a-FTCD。
根据表达载体pET28a设计带有NcoI和BamHI酶切位点位点的引物，引物序列如下(下 划线指示酶切位点)：
正向引物：5'-CCATGGCTAGAAATCCACCCATCGTCATCACC-3'
反向引物：5'-GGATCCTCTTCACCTCGGCATACTTGTC-3'
以质粒pMD19-T-FTCD为模版进行PCR扩增。扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测，切胶回收目的片段；用NcoI和BamHI分别将目的片段及pET28a载体进行双酶切，胶回收 后用T4连接酶连接；连接产物转化大肠杆菌DH5α，经菌落PCR和双酶切鉴定得到约900bp 的目的基因和约5000bp的pET28a载体骨架。进一步进行测序验证，结果证明重组表达载 体pET28a-FTCD序列和读码框正确。
1.2.2多肽诱导表达
将重组表达载体质粒pET28a-FTCD转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞；经PCR检测挑取转化平板上的阳性单克隆接种于含50μg/mL Kana的3mL LB培养液的试 管中，37℃220r/min振摇过夜。次日接种于Kana LB培养液中振摇至菌体OD 600为0.6- 0.8。取出1mL培养物，室温离心2min，弃上清，用100μl 1×上样缓冲液重悬菌体沉淀。 向剩余的培养物中加入IPTG至终浓度为0.5mM，37℃220r/min振摇4h，诱导融合蛋白 表达。取出1ml培养物，10000r/min室温离心2min，弃上清，用100μl 1×上样缓冲液重悬 菌体沉淀。剩余培养物4000r/min，离心10min，弃上清，用PBS重悬菌体沉淀；重悬液进 行超声波破碎后，分别取上清液与沉淀液加入上样缓冲液重悬。
1.2.3多肽的纯化
利用Ni柱纯化和利用低压层析系统收集蛋白溶液，并加入透析袋中，使用50mMTris-HCl，0.30M NaCl，pH8.0进行透析过夜。
采用0.5mmol/L IPTG，在37℃条件下震荡4h，诱导蛋白表达，收集菌体并用PBS重悬， 超声波破碎后收集上清，将上清液通过Ni柱和分子筛纯化。SDS-PAGE电泳检测结果表明， 获得了可溶性蛋白形式的多肽，分子量大小约为33kDa，纯化蛋白条带单一，表明纯化效 果较好(参见图1)。
二、多肽体外酶促反应体系建立
1.实验方法：
1.1试剂：0.5mg/ml单端孢霉烯族化合物(DON、3DON、15ADON、FUS-X、NIV、 T2、H-T2、DAS)：1mg单端孢霉烯族化合物，加蒸馏水至2ml，过滤灭菌。
1.2体外酶促反应体系建立
通过对三种不同的影响酶促反应因素的梯度实验，建立FTCD多肽体外酶促反应体系 的最适条件：
(1)反应酶量梯度：1μg、5μg、10μg、25μg、50μg；
(2)多种缓冲液设置pH值梯度：范围为3.0-10.0，磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(pH＝3.0、 4.0、5.0)，磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液(pH＝6.0、7.0)，Tris-磷酸盐缓冲液(pH＝8.0、9.0、 10.0)。
(3)反应温度梯度：4℃、12℃、15℃、20℃、25℃、30℃、37℃、45℃、50℃
2.实验结果：
2.1酶量对酶促反应体系的影响
利用磷酸缓冲液PBS(pH＝7.0)，在25℃条件下，反应时间12h，分别在0h、0.5h、1h、3h、6h取样，进行LC-HRMS分析；通过LC-HRMS一级扫描的面积结果，得到随反应进行 反应底物DON与反应生成GSH加合物这两种物质含量的变化情况，从而得到反应的最适 酶量，参见图2。
通过改变酶量的实验结果表明，酶量1-25μg时，在相同时间内，DON-GSH的生成量与酶的加入量成正相关。当酶量超过25μg时，DON-GSH生成量趋于平稳。因此选择25μg 作为最适试验酶量。
2.2反应体系pH值对酶促反应体系的影响
酶促反应缓冲液pH值梯度实验结果如图3所示。图3表明，在缓冲液pH为6.0时， 生成物DON-GSH的量达到最高值，同时反应底物DON的含量最低，因此适宜缓冲液 pH值在5.0-7.0之间。
3.反应温度对酶促反应体系的影响
根据以上实验结果，在反应缓冲液pH为7.0，加入酶量25μg的条件下，设置温度条件分别为4℃，12℃，15℃，20℃，25℃，30℃，37℃，45℃，50℃，反应时间为24h； 分别在0h、0.5h、1h、6h、12h、24h取样，进行LC-HRMS分析；通过LC-HRMS一级 扫描的面积结果，得到随反应进行反应底物DON与反应生成GSH加合物这两种物质含 量的变化情况，进而得到反应的最适温度。
通过设置不同反应温度实验的结果如图4所示。图4表明，20-25℃时，对酶促反应的影响差异性不显著，生成物含量均能达到最大值；在低于15℃时，DON-GSH的生成 量随温度的降低而减少；在30-37℃时，DON-GSH的生成量与反应温度的增加呈反比， 高于37℃后，LC-HRMS一级扫描检测不到生成物DON-GSH，说明蛋白酶已基本丧失 活性。因此，在20-25℃条件下比较适合酶促反应的进行。
以上实验结果表明，蛋白酶进行体外酶促反应的最适宜条件为：在反应体系中，含有25μg FTCD纯化蛋白，加入适量反应底物后，用pH值为5.0-7.0的缓冲液补加至200μl， 混合后于20-25℃条件下进行反应。
三、活性多肽FTCD催化单端孢霉烯族毒素去环氧基反应
1.实验方法：
1.1体外酶促反应：
将DON、3-DON、15-ADON、NIV、DAS、HT-2、T-2毒素(1mg)分别溶解于新鲜制 备的GSH(30.7mg，100μmol)的PBS缓冲液中，并加入蛋白酶，于20℃水浴锅保温24h。
1.2LC-HRMS(/MS)分析
体外反应液通过0.22μm滤膜过滤后，转移到进样小瓶中准备进行LC-HRMS检测。
使用Thermo ScientificTMQ ExactiveTM组合型四级杆Orbitrap质谱仪。UHPLC系统 (Accela，赛默飞，美国加利福尼亚州圣何塞)与配备有电喷雾电离(ESI)源的Orbitrap联用。 色谱法在反相XBridge C18，内径150×2.1mm，粒径3.5μm(Waters，Dublin，Ireland)上 进行，柱温：35℃。流速为300μLmin-1，进样量3μL。使用U3000液相色谱仪，流动相： A：0.1％乙酸水溶液，B：乙腈；洗脱梯度：0-0.2min，A＝90％；0.2-6min，A递减至10％； 6-8min，A＝10％；8.1min，A递增至90％；8.1-10min，A＝90％。
(1)Full scan全扫描模式：该模式在m/z 200-1000的范围内快速交替正负离子扫描。 正离子模式的ESI接口采用以下设置进行：鞘气，40；辅助气体，10；毛细电压3.8kV； 毛细管温度为350℃。将AGC target设置为2×e5。负离子模式的ESI接口设置为2.9kV； 鞘气，4；辅助气体，0。该模式分辨力设置为70,000。
(2)Full scan+ddms(一级全扫描+自动触发二级)模式的液相方法及色谱条件同上。该 方法交替使用全扫描和MS2扫描，归一化碰撞能设置为20eV，产物离子扫描过程中分辨 率设置为17500。
(3)PRM模式可用于量化样品中毒素及其衍生物的相对丰度。PRM模式筛选母离子后，在归一化碰撞能量(HCID)下诱导解离，随后在Orbitrap中进行子离子的碎片检测， 其分辨力设置为17500。采用归一化碰撞能，所施加的碰撞能量(15、30和45eV)取决于 具体分析物。
LC-HRMS(/MS)分析使用Xcalibur 2.1.0(Thermo Fisher Scientific，美国加利福尼亚圣 何塞)分析数据。采用所提出的生物转化产物的色谱峰形状，保留时间(±0.2分钟)和质量 (±5ppm)对毒素及其衍生物的提取离子色谱图(EIC)进行了研究。根据二级图谱以及物质 基本结构解析中性丢失，推测化学结构。
2.实验结果
2.1FTCD催化DON毒素并转化成谷胱甘肽加合物DON-GSH
图5A为LC-HRMS1(方法1)DON与GSH体外酶促反应的提取离子流谱图EIC。如 图5A所示，以负离子模式从LC-HRMS(Full scan模式)中得到DON的提取离子流谱图 EIC，m/z355.13984(对应[M+CH3COO]-形式，Δ±5ppm)；正离子模式提取到DON-GSH 加合物，m/z604.21707(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)。
图5B为LC-HRMS2(方法2)DON与GSH体外酶促反应获得的DON-GSH的高能碰 撞解离产生的子离子质谱图，[M+H]+(m/z 604.21707，Δ±5ppm)。通过对带正电([M+H]+) 的离子进行靶向HRMS2分析，研究了DON-GSH环氧加合物的MS片段。DON-GSH的 离子碎裂产生m/z299.0939的特征离子，对应于C14H19O5S+。该特征离子可归因于在C- 6处侧链的裂解和除S以外GSH部分的损失。该片段还可以进一步裂解产生 m/z281.08482(C14H17O4S+)，263.07425(C14H15O3S+)和231.10218(C14H15O3 +)。m/z 263.07425 处的产物离子是HRMS2质谱图的基峰，该产物离子在m/z 299.0939的基础上脱去两分子 H2O。
DON-GSH在甘氨酸损失之后，可得到碎片离子m/z 529.18503(C23H33O10N2S+)，也可得到损失脱水谷氨酸的碎片离子475.17466(C20H31O9N2S+)。损失了C-6处侧链的m/z574.20717(C24H36O11N3S+)离子碎片从其GSH部分损失脱水谷氨酸可得到m/z445.16389 的特征离子(C19H29O8N2S+)；也可得到脱去谷氨酰胺的428.13733(C19H26O8NS+)。
产物离子为m/z 308.09108(C10H18O6N3S+，对应GSH的[M+H]+)。该碎片离子损失脱水谷氨酸得到m/z 179.04907(C5H11O3N2S+)；损失谷氨酰胺得到m/z162.02251(C5H9O3NS+)。此外，m/z130.05044(C5H8O3N+)、m/z145.06077(C5H9O3N2 +)的产物离子均与GSH相关。
2.2FTCD催化3-ADON毒素并转化成谷胱甘肽加合物3-ADON-GSH
图6A为LC-HRMS(方法1)3-ADON与GSH体外酶促反应的提取离子流谱图EIC。 如图6A所示，以负离子模式从LC-HRMS(Full scan模式)中得到3-ADON的提取离子流 谱图EIC，m/z 397.15041(对应[M+CH3COO]-形式，Δ±5ppm)；正离子模式提取到3- ADON-GSH加合物，m/z 646.22764(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)。
图6B为LC-HRMS2(方法2)3-ADON与GSH体外酶促反应获得的3-ADON-GSH通 过高能碰撞解离产生的子离子质谱图，[M+H]+(m/z 646.22764，Δ±5ppm)。对带正电 ([M+H]+)的3-ADON-GSH环氧加合物离子进行靶向HRMS2分析：3-ADON-GSH的离子 碎裂会产生m/z323.09539的特征离子，对应于C16H19O5S+。该特征离子可归因于在C-6 处连接的侧链的裂解、脱水以及除S以外GSH部分的损失。该片段还可以进一步裂解产 生m/z，263.07425(C14H15O3S+)和231.10218(C14H15O3 +)。m/z 263.07425处的子离子是 HRMS2质谱图的基峰，该产物离子是在m/z 323.09539离子的基础上于C-3处脱去 CH3COOH。
3-ADON-GSH甘氨酸损失之后，可得到碎片离子m/z 571.19560(C25H35O11N2S+)，其C-6处侧链进一步断裂可产生的m/z 541.18503(C24H33O10N2S+)的碎片离子；脱去1分子 H2O的碎片离子m/z 628.21707(C27H38O12N3S+)损失甘氨酸可得到m/z 553.18503(C25H33O10N2S+)；损失脱水谷氨酸可得到499.17466(C22H31O9N2S+)。
2.3FTCD催化15-ADON毒素并转化成谷胱甘肽加合物15-ADON-GSH
图7A为LC-HRMS(方法1)15-ADON与GSH体外酶促反应提取的提取离子流谱图 EIC。如图7A所示，以负离子模式从LC-HRMS(Full scan模式)中得到15-ADON的提取 离子流谱图EIC，m/z 397.15041(对应[M+CH3COO]-形式，Δ±5ppm)；正离子模式提取到 15-ADON-GSH加合物，m/z 646.22764(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)。
图7B LC-HRMS2(方法2)15-ADON与GSH体外酶促反应获得的15-ADON-GSH的 高能碰撞解离产生的子离子质谱图，[M+H]+(m/z 646.22764，Δ±5ppm)。通过对带正电 ([M+H]+)的离子进行靶向HRMS2分析，研究了15-ADON-GSH环氧加合物的MS片段。 15-ADON-GSH的离子碎裂产生m/z 311.09475的特征离子，对应于C15H19O5S+。该特征 离子可归因于在C-15处连接的侧链CH3COOH的裂解和除S以外GSH部分的损失。
同3-ADON-GSH一样，15-ADON-GSH甘氨酸损失之后，可得到子离子m/z 571.1956(C25H35O11N2S+)。脱去1分子H2O的m/z 628.21707(C27H38O12N3S+)损失甘氨酸 可得到m/z553.18503(C25H33O10N2S+)。损失脱水谷氨酸的可得到m/z 499.17466(C22H31O9N2S+)。
特征离子m/z 440.13736(C20H26O8NS+)损失脱水谷氨酸可得到m/z 311.09475(C15H19O5S+)的碎片离子；特征离子m/z 450.15471(C17H28O9N3S+)损失甘氨酸得 到m/z375.12267(C15H23O7N2S+)子离子，损失脱水谷氨酸得到m/z 321.1121(C12H21O6N2S +)，此外该离子还可以脱去两分子H2O，形成子离子m/z 414.13295(C17H24O7N3S+)，该特 征离子损失甘氨酸可得到m/z 339.10091(C15H19O5N2S+)，损失脱水谷氨酸得到m/z 285.09035(C12H17O4N2S+)。该片段进一步脱水还可以产生m/z 267.07979(C12H15O3N2S+)。 与GSH相关的m/z145.06077(C5H9O3N2 +，Δ±5ppm)特征离子是质谱图的基峰。
2.4FTCD催化NIV毒素并转化成谷胱甘肽加合物NIV-GSH
如图8A所示，以负离子模式从LC-HRMS(Full scan模式)中得到NIV的提取离子流谱图EIC，m/z 371.13366(对应[M+CH3COO]-形式，Δ±5ppm)；正离子模式提取到NIV- GSH加合物，m/z 620.21199(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)。
图8B为LC-HRMS2(方法2)NIV与GSH体外酶促反应获得的NIV-GSH的高能碰撞 解离产生的子离子质谱图，[M+H]+(m/z 620.21199，Δ±5ppm)。通过对带正电([M+H]+)的 NIV-GSH环氧加合物离子进行靶向HRMS2分析，研究其MS片段。NIV-GSH的离子碎 裂产生m/z229.08652的产物离子，对应于C14H13O3 +。该产物离子可归因于在C-6处侧 链的裂解、3分子H2O的断裂以及GSH部分的损失，该结构保留NIV的基本骨架。
NIV-GSH在甘氨酸损失之后，可得到子离子m/z 545.17995(C23H33O11N2S+)。也可得到损失脱水谷氨酸的子离子491.16938(C20H31O10N2S+)。C-6处侧链断裂后形成m/z590.20142(C24H36O12N3S+)，该离子的GSH部分损失脱水谷氨酸可得到m/z 461.15881的 子离子(C19H29O9N2S+)。
[M+H]+形式的GSH损失谷氨酰胺可得到子离子m/z 162.02251(C5H9O3NS+)；损失脱水谷氨酸得到m/z 179.04907(C5H11O3N2S+)，该离子是HRMS2质谱中最突出的产物离子。 此外，子离子m/z 130.05044(C5H8O3N+)和子离子m/z 145.06077(C5H9O3N2 +)均与GSH相 关。
2.5FTCD催化Fus-X毒素并转化成谷胱甘肽加合物Fus-X-GSH
图9A为LC-HRMS(方法1)Fus-X与GSH体外酶促反应的提取离子流谱图EIC。如 图9A所示，以负离子模式从LC-HRMS(Full scan模式)中得到Fus-X的提取离子流谱图 EIC，m/z377.12069(对应[M+Na]+形式，Δ±5ppm)；正离子模式提取到Fus-X-GSH加合 物，m/z662.22255(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)。
图9B为LC-HRMS2(方法2)Fus-X与GSH体外酶促反应获得的Fus-X-GSH的高能 碰撞解离产生的子离子质谱图。通过对带正电([M+H]+)的FusX-GSH环氧加合物离子进 行靶向HRMS2分析，研究其MS片段。FusX-GSH的离子碎裂产生m/z 297.07973的产 物离子，对应于C14H17O5S+。该产物离子可归因于在C-4处侧链的裂解、C-6处侧链的裂 解及除S以外的GSH部分的损失，该结构仅仅保留Fus-X的基本骨架。
FusX-GSH在甘氨酸损失之后，可得到子离子m/z 587.19051(C25H35O12N2S+)。C-6处侧链断裂后形成m/z 632.21198(C26H38O13N3S+)的特征离子损失脱水谷氨酸可得到m/z503.16937(C21H31O10N2S+)的子离子，损失谷氨酰胺可以得到m/z 486.14281(C21H28O10NS +)。其中m/z 503.16937(C24H36O12N3S+)的子离子是HRMS2质谱中最突出的产物离子。
[M+H]+形式的GSH损失谷氨酰胺可得到子离子m/z 162.02251(C5H9O3NS+)；损失 脱水谷氨酸得到m/z 179.04907(C5H11O3N2S+)，此外，子离子m/z 130.05044(C5H8O3N+)和 子离子m/z 145.06077(C5H9O3N2 +)均与GSH相关。
2.6FTCD催化DAS毒素并转化成谷胱甘肽加合物DAS-GSH
图10A为LC-HRMS(方法1)DAS与GSH体外酶促反应提取的提取离子流谱图EIC。 以正离子模式从LC-HRMS(Full scan模式)中得到DAS的提取离子流谱图EIC，m/z 389.15707(对应[M+Na]+形式，Δ±5ppm)；DAS-GSH加合物，m/z 674.25894(对应于 [M+H]+，Δ±5ppm)。
图10B为LC-HRMS2(方法2)DAS与GSH体外酶促反应获得的DAS-GSH的高能碰 撞解离产生的子离子质谱图，[M+H]+(m/z 674.25894，Δ±5ppm)。通过对带正电([M+H]+) 的离子进行靶向HRMS2分析，研究DAS-GSH环氧加合物的MS片段。DAS-GSH的离 子碎裂产生m/z229.12231的产物离子，对应于C15H17O2 +。该产物离子可归因于C-4、C- 15处连接的侧链CH3COOH的裂解、脱水以及GSH部分的损失。
DAS-GSH在甘氨酸损失之后，可得到子离子m/z 599.22690(C27H39O11N2S+)；损失谷氨酰胺，可得到m/z 528.18977(C24H34O10NS+)的子离子；也可得到损失脱水谷氨酸的子离子545.21633(C24H37O10N2S+)；损失了CH3COOH可得到m/z 614.23781(C27H40O11N3S+) 的特征离子。
与GSH相关的m/z 130.05044(C5H8O3N+)、m/z 145.06077(C5H9O3N2 +)、m/z162.02251(C5H9O3NS+)、m/z 179.04907(C5H11O3N2S+)子离子中，失去脱水谷氨酸m/z的特 征离子在179.04907处(C5H11O3N2S+)是质谱图的基峰。
2.7FTCD催化HT-2并转化成谷胱甘肽加合物HT-2-GSH
图11A为LC-HRMS(方法1)HT-2与GSH体外酶促反应提取的提取离子流谱图EIC。 以正离子模式从LC-HRMS(Full scan模式)中得到HT-2的提取离子流谱图EIC，m/z 447.19894(对应[M+Na]+形式，Δ±5ppm)；HT-GSH的加合物，m/z 732.30080(对应于 [M+H]+，Δ±5ppm)。
图11B为LC-HRMS2(方法2)HT-2与GSH体外酶促反应获得的HT-GSH加合物的高 能碰撞解离产生的子离子质谱图，[M+H]+(m/z 732.30080，Δ±5ppm)。通过对带正电([M+H]+)的HT-GSH环氧加合物离子进行靶向HRMS2分析，研究其MS片段。HT-GSH碎裂产 生m/z295.10048的产物离子，对应于C15H19O4S+。该产物离子可归因于C-8处 ((CH3)2CHCH2COOH)的断裂，C-15处CH3COOH的裂解、除S以外GSH部分的损失， 该结构保留了HT-2的基本骨架。而m/z 274.10335是[M+H]+形式的GSH的—SH键断 裂，形成H2S的中性丢失所致。
HT-GSH在C-8、C-15处的侧链断裂之后可得到m/z 570.21226(C25H36O10N3S+)的特征离子，该离子损失甘氨酸可得到m/z 495.18022(C23H31O8N2S+)；损失脱水谷氨酸可得 到m/z 441.16965(C20H29O7N2S+)；损失谷氨酰胺可得到m/z 424.14309(C20H26O7NS+)的碎 片离子。m/z 441.16965处是质谱图的基峰。
此外还检测到与GSH相关的m/z 130.05044(C5H8O3N+)、m/z 145.06077(C5H9O3N2 +)、m/z 162.02251(C5H9O3NS+)、m/z 179.04907(C5H11O3N2S+)离子。
2.8FTCD催化T-2并转化成谷胱甘肽加合物HT-2-GSH
图12A为LC-HRMS(方法1)T-2与GSH体外酶促反应提取的提取离子流谱图EIC。 以正离子模式从LC-HRMS(Full scan模式)中得到T-2的提取离子流谱图EIC，m/z 489.20950(对应[M+Na]+形式，Δ±5ppm)；T2-GSH的加合物，m/z 774.31136(对应于 [M+H]+，Δ±5ppm)。
图12B为LC-HRMS2(方法2)T-2与GSH体外酶促反应获得的T2-GSH加合物的高 能碰撞解离产生的子离子质谱图，[M+H]+(m/z 774.31136，Δ±5ppm)。通过对带正电([M+H] +)的T2-GSH环氧加合物离子进行靶向HRMS2分析，研究其MS片段。T2-GSH碎裂产 生m/z337.11105的产物离子，对应于C17H21O5S+。该产物离子可归因于C-8处、C-15处 所连接侧链的断裂、除S以外GSH部分的损失，该结构保留了T-2的基本骨架。而m/z 274.10335是[M+H]+形式的GSH的-SH键断裂，形成H2S的中性丢失所致。
T2-GSH在C-8、C-15处的侧链断裂之后可得到m/z 612.22283(C27H38O11N3S+)的特征离子，是质谱图的基峰。该离子损失甘氨酸可得到m/z537.19079(C25H33O9N2S+)；损失 脱水谷氨酸可得到m/z 483.18022(C22H31O8N2S+)；损失谷氨酰胺得到m/z 466.15366(C22H28O8NS+)的碎片离子。
同HT2-GSH一样，检测到与GSH相关的130.05044(C5H8O3N+)、m/z 145.06077(C5H9O3N2 +)、m/z 162.02251(C5H9O3NS+)、m/z 179.04907(C5H11O 3N2S+)离子。
3.实验结论
本发明的活性多肽在体外可以高效将单端孢霉烯族毒素(包括DON、3DON、15ADON、FUS-X、NIV、T2、H-T2、DAS等)催化成谷胱甘肽加合物，并且由二级谱图可以知该加 合物的形成破坏了在单端孢霉烯的毒性中起主要作用的环氧环结构，可以大大降低毒素 的毒性。
四、单端孢霉烯族毒素GSH衍生物的细胞毒性试验
1.细胞培养
使用DMEM基础培养基，添加10％的胎牛血清和500μl的青霉素链霉素双抗，在 37℃、5％CO2的恒温培养箱中培养胰腺癌细胞株(PATU8988)、人胚肾细胞293衍生株 (293T)以及人正常食管上皮细胞(HEEC)，待细胞长至瓶壁80％～90％，每2～3d传代一次， 用胰蛋白酶消化收集细胞并传代，根据细胞生长状态，选取对数生长期细胞进行实验。
2.CCK8法测定细胞毒性
使用Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂分析细胞增殖和毒性。将处于对数生长期 的3种细胞株分别接种于96孔板中，每孔100ul(约5×103个细胞)，在37℃、5％CO2的条件下常规培养24h，弃去培养基，并进行分组。每组均设3复孔观察，各组处理方式 如下：空白组(即仅含培养基的调零孔)，对照组(含10％胎牛血清的DMEM培养基)，单 端孢霉烯族化合物及其对应的酶促反应后产生的谷胱甘肽加合物均设定低、中、高三个 浓度梯度。37℃培养48h后，每孔加入10ulCCK8液继续培养。2h后，小心吸弃孔内 培养上清液，通过全波长多功能酶标仪在波长450nm处测出各孔OD值，并计算细胞存 活率。
3.实验结果
以细胞浓度5×107L-1种板，CCK-8法酶标仪检测单端孢霉烯族化合物及其对应的经酶 促反应产生的谷胱甘肽加合物作用48h后胰腺癌细胞株(PATU8988)、人胚肾细胞293衍生 株(293T)以及人正常食管上皮细胞(HEEC)的OD450值。每组均设3复孔观察，各组处理方 式如下：空白组(即仅含培养基的调零孔)，对照组(含10％胎牛血清的DMEM培养基)，单端孢霉烯族化合物及其对应的酶促反应后产生的谷胱甘肽加合物根据文献结果设置相应浓度进行处理。结果如图13所示。
如图13所示，采用相应浓度的单端孢霉烯族化合物(DON、3-ADON、15-ADON、 FUS-X、NIV、T-2、HT-2、DAS)处理48h后，PATU8988、293T以及HEEC的活力均急 剧下降，说明不同的单端孢霉烯族化合物对细胞均具有较大毒性；而单端孢霉烯族化合 物DON、3-ADON、15-ADON、FUS-X、NIV、T-2、HT-2、DAS经反应后产生的相应衍 生物，在对应相同的浓度下细胞活力与空白对照基本一致，说明以上8种单端孢霉烯族 化合物相应的谷胱甘肽加合物对细胞基本没有毒性作用。
通过上述实验发现单端孢霉烯族化合物均能对细胞的活性产生强烈的抑制作用，而 大部分单端孢霉烯族化合物相应的谷胱甘肽加合物在相同的质量浓度下对细胞的活性几 乎没有影响。综上所述，单端孢霉烯族化合物谷胱甘肽加合物生成后，可以极大地减少此类化合物对细胞的毒性作用。
五、表达FTCD活性多肽的宿主细胞及其功能研究
1.酵母表达质粒pPICZαA-FTCD的构建
来源于十倍体长穗偃麦草的去氧基酶基因cDNA长度为865bp(SEQ ID No.:36)，且序列不含Bsp119I和XbaI酶切位点，设计引物序列为：
F：5'-ATTATTCGAAAGAAATCCACCCATCGTCATCACC-3'
R：5'-TTGTTCTAGACTACTTCACCTCGGCATACTTGTC-3'
下划线部分为限制性内切酶位点。该cDNA全基因序列通过PCR获得。PCR产物纯 化后，用Bsp119I、XbaI双酶切，同时酶切表达载体pPICZαA，分别回收载体大片段和 目的基因片段，再将回收的片段用T4 DNA连接酶连接，转化到大肠杆菌DH5α中，经 菌落PCR鉴定后，将阳性单克隆菌液测序进行验证。
2.毕赤酵母的转化
首先利用Sac I将重组质粒线性化，将1ml单链DNA样品煮沸5分钟，然后在冰 上快速冷却。保持冰上。离心酵母感受态，并用移液管除去LiCl。按顺序添加240μl 50％ 聚乙二醇、36微升1M LiCl、25μl 2mg/ml单链DNA、50μl无菌水中的质粒DNA(5- 10μg)。剧烈涡旋每个试管，直到细胞沉淀完全混合(约1分钟)。将试管在30℃孵育30 分钟。在42℃的水浴中热冲击20-25分钟。离心细胞以沉淀。将沉淀重悬于1ml的YPD 中，并在30℃振荡孵育。1小时和4小时后，在含有适当浓度ZeocinTM的YPD平板上 接种25至100μl。将平板在30℃下孵育2-3天。
挑选10个单菌落富集培养，提取酵母染色体DNA，PCR检测阳性重组菌。通常采 用pPICZαA通用引物进行PCR鉴定，若以酵母表达载体pPICZαA为模板，则可以扩增 出588bp左右的目的片段；若以pPICZαA-FTCD为模版，则将扩增出目的条带+588bp大 小的目的片段。
3.酶的表达与毒素处理
将筛选到的阳性酵母单菌落(X33/pPICZαA-FTCD)与阴性酵母单菌落(X33/pPICZαA) 分别接种于25ml的BMGY培养基，28℃～30℃培养至OD600为2-6。室温离心弃去上 清，收集细胞，用BMMY液体培养基重悬细胞至OD600＝1左右，转移至500ml的锥形 瓶中，28℃～30℃培养，每24h向其中加入甲醇至终浓度为0.5％以保持诱导表达。在诱 导48h后，分装菌液5ml到15ml离心管中，并向其中加入多种单端孢霉烯族化合物至终 浓度为25μg/ml，继续诱导48h-72h，收集菌体，用于LC-HRMS分析。
同时在阳性酵母单菌落(X33/pPICZαA-FTCD)与阴性酵母单菌落(X33/pPICZαA)诱导 蛋白表达48h后，添加培养基将其稀释为1、1/5和1/20的培养物(初始OD＝0.01)，在含有浓度为400μm DON与不含DON的YPDA固体培养基上培养5天，观察其生长情况。 比较过表达活性多肽和空白载体的转基因酵母对DON的耐受性。
4.LC-HRMS
将分装的样品离心弃去上清。置于液氮中速冻，加入少许石英砂，用塑料研磨棒研磨后，加入预冷的1.3ml 75％的甲醇水(含有0.1％甲酸)。震荡10s，室温下超声30min， 取上清后转移至一新的离心管中。真空浓缩至干粉状。进样前用100μL 20％乙腈重悬， 通过0.22μm滤膜过滤后，转移到进样小瓶中进行LC-HRMS检测。检测方法与前述相同。
5.实验结果
5.1LC-HRMS结果
LC-HRMS结果如图14所示。以LC-HRMS(Full scan)正离子模式从DON处理表达 活性多肽的酵母中检测到DON-GSH加合物，m/z 604.21730(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)； 在3-ADON处理表达活性多肽的酵母中检测到3-ADON-GSH加合物，m/z 646.22764(对 应于[M+H]+，Δ±5ppm)；在15-ADON处理表达活性多肽的酵母中检测到15-ADON-GSH 加合物，m/z646.22764(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)；在NIV处理表达活性多肽的酵母中 检测到NIV-GSH加合物，m/z 620.21199(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)；在DAS处理表达活 性多肽的酵母中检测到DAS-GSH加合物，m/z 674.25894(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)；在 HT-2处理表达活性多肽的酵母中检测到“HT2-2H”-GSH加合物，m/z 730.28515(对应于 [M+H]+，Δ±5ppm)；在T-2处理表达FTCD的酵母中检测到“T2-2H”-GSH加合物，m/z772.29572(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)。而在相应的对照中均未检测到有GSH加合物 形式的衍生物产生。
LC-HRMS检测结果表明：将去环氧基酶基因转移至毕赤酵母中，可以高效将单端孢霉烯族毒素(包括DON、3-DON、15-ADON、FUS-X、NIV、T-2、HT-2、DAS)催化成谷 胱甘肽加合物。转基因酵母提高了耐毒素的能力，证明FTCD可以以单端孢霉烯族毒素 为底物并将其催化成相应的GSH加合物，从而起到体内解毒作用。
5.2转基因酵母DON耐受性实验结果
在有/无DON的YPDA培养基上比较了过表达FTCD和空白载体的转基因酵母的生 长活力。在酵母培养基上添加一系列稀释度分别为1、1/5和1/20倍的酵母诱导蛋白表达 的培养物(初始OD＝0.01)，并在30℃下生长5天，观察其生长情况。结果如图15所示， 结果发现过表达FTCD的转基因酵母在含DON培养基上的生长活力显著高于空白载体 的转基因酵母。
在转基因酵母的DON耐受性实验中，发现在含有浓度为400μm DON的YPDA培养 基上，含有FTCD的转基因酵母的生长活力明显高于转空白载体的转基因酵母，进一步 说明FTCD能在酵母体内表达，并能催化谷胱甘肽与DON等单端孢霉烯族化合物反应， 进行解毒，从而提高酵母对DON的耐受能力。
六、同源序列基因功能分析
在获得来源于长穗偃麦草的去环氧基酶基因的序列(SEQ ID No.:36)的基础上，通过 NCBI进行blastn比对，在默认参数的情况下，未搜到任何注释的高度同源基因。但根据
Figure BDA0002401430920000151
菌属存在同源基因的信息，发明人联合搜索了其他实验室的基因组数据库，获得 了11条来源于该菌属的序列，其序列分别如SEQ ID No.:60-70所示。如图16所示，这些序 列与长穗偃麦草十倍体的去环氧基酶基因具有90％以上的序列同一性。另外，发明人还从 长穗偃麦草二倍体中分离得到与十倍体的去环氧基酶基因的序列同一性为98％的基因， 其序列如SEQ ID No.:37所示。
利用前述相同的方法将这些基因分别转入酵母细胞表达为对应的蛋白，其氨基酸序 列分别如SEQ ID No.:25-35所示。并利用LC-HRMS进行分析。如图17所示，其他12个同源序列转入毕赤酵母中，经DON处理。LC-HRMS检测显示均有DON-GSH的生成。 RT＝1.68min处存在独立且特异的峰，该峰为C-13处的GSH加合物(通过去环氧基)。在LC- HRMS(方法1)DON处理转基因酵母提取的离子色谱图，正离子模式提取到DON-GSH加合 物，m/z 604.21730(对应于[M+H]+，Δ±5ppm)。
在此述分析的基础上，发明人进一步分析这些同源基因产生的蛋白之间的保守性， 得到具有第25-62位之间的氨基酸序列的多肽片段、具有第92-110位之间的氨基酸序列的 多肽片段和具有第144-184位之间的氨基酸序列的多肽片段。
七、FTCD突变研究
利用诱导基因突变技术(TILLING技术)，对来源于长穗偃麦草十倍体的去环氧酶基 因(SEQ ID No.:36所示的序列)进行随机突变，得到22个氨基酸序列发生改变的突变体。 这些突变体的氨基酸序列分别如SEQ ID No.:3-24所示。经功能分析，在22个突变体中均不同程度地保留了原去环氧基活性。其中存在两个终止突变，分别终止于209位和243 位氨基酸，但这两种终止不会导致该酶的功能完全丢失。因此，表明该酶的功能结构域 主要是N端。
经序列同源性序列分析，发现有两个相对保守的区域，即第92-104位之间的区域和 第144-184位之间的区域。对于这两个保守区的功能，推测可能与催化活性相关的重要区域。在这两个区域之间的区域，在不同物种之间存在较大的变化。因此，推测这两个保 守区之间的区域可能是连接区域。
为了验证上述推测，发明人在前期筛选Tilling群体得到的突变体材料的基础上，设 计一系列缺失突变体来进行验证。具体地，以SEQ ID No.36序列为模版设计相应的含克隆载体同源序列的特异引物，具体突变体类型如下：
表1缺失突变体基因类型
Figure BDA0002401430920000161
注：
Linker1对应于SEQ·ID·No.25中第105-142之间的氨基酸序列；
Linker2对应于SEQ·ID·No.26中第103-141之间的氨基酸序列；
Linker3对应于SEQ·ID·No.28中第107-148之间的氨基酸序列；
Linker4对应于SEQ·ID·No.30中第106-143之间的氨基酸序列；
Linker5为人工序列GGGSGGSGG。
具体实验步骤如下：
1.通过PCR获得上述缺失突变体对应的基因序列，并通过设计好的NcoI和BamHI构建至质粒pET28a，转化到大肠杆菌DH5α中，经菌落PCR鉴定和测序验证。将正确的 重组表达载体质粒转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞，采用0.5mmol/LIPTG， 在37℃条件下震荡4h，诱导蛋白表达，收集菌体并用PBS重悬，超声波破碎后收集上 清，将上清液通过Ni柱和分子筛纯化，并采用BCA蛋白定量法对纯化获得的蛋白质进 行定量。
2.体外酶促反应
将DON、3-DON、15-ADON毒素(1mg)分别溶解于新鲜制备的GSH(30.7mg，100μmol)的PBS缓冲液中，根据几种不同的FTCD缺失突变体的体外纯化蛋白浓度加入等量蛋白， 于25℃水浴锅保温24h。
3.LC-HRMS(/MS)分析
体外反应液通过0.22μm滤膜过滤后，转移到进样小瓶中准备进行LC-HRMS检测。采用PRM模式量化样品中毒素及其衍生物的相对丰度。根据单位时间内底物转化量计算 酶的活力，根据该结果确定不同缺失突变对蛋白活性的影响。将DON、3-DON、15-ADON 毒素(1mg)分别溶解于新鲜制备的GSH(30.7mg，100μmol)的PBS缓冲液中，根据几种不 同的FTCD缺失突变体的体外纯化蛋白浓度加入等量蛋白，于25℃水浴锅保温24h。取 样进行LC-HRMS分析，不同缺失突变对酶活性的影响如表2所示。
表2不同突变体酶活性实验结果
Figure BDA0002401430920000171
由表2可知，缺失1-90氨基酸的突变体，对酶的活性影响较小，而缺失前95个氨 基酸对酶的活性影响较大，酶的活性大大降低，同时缺失前150个氨基酸则表达蛋白无 活性。另一方面，发现包含本发明推测的保守区的序列，即含有92-184氨基酸的突变体， 虽然活性受到影响，但仍然具有较高水平的比酶活。因此，这与推测的内容基本相吻合。
另外，对于推测的连接区域进行的突变结果中，将十倍体偃麦草的该区域序列分别 替换为其他属的对应序列，发现活性基本保持不变。进一步将该区域替换为人工设计的linker序列GGGSGGSGG后，其活性也影响不大。这些结果与预测基本吻合。
2.保守区关键氨基酸的突变分析
在确定酶活性关键区域的基础上，发明人进一步对两个保守区中的氨基酸进行突变， 以期望能发现关键氨基酸。
具体地，通过基因合成获得不同突变组合的基因序列。将这些基因序列在大肠杆菌 中表达并纯化。利用得到的突变多肽进行体外酶促反应，并使用LC-HRMS(/MS)分析得到酶活性。结果如表3所示。
表3保守区氨基酸突变对活性的影响实验
Figure BDA0002401430920000172
Figure BDA0002401430920000181
Figure BDA0002401430920000191
Figure BDA0002401430920000201
Figure BDA0002401430920000211
在FTCD的保守序列中存在一些可变位点，其中第94、95、100、151、155、158、16 2、163、165、174、175和178位的氨基酸变化后，FTCD还能保持一定活性。在这些可变 位点中，不同位点氨基酸变化对FTCD的活性影响也不同，其中第100位和第178位氨基酸 发生变化时，对FTCD的活性影响较大，大约能使活性降低60％左右。其他可变位点变化 后，FTCD的活性还能保持在50％以上。
尽管本发明已经参考示例性实施方案进行了描述，但应理解本发明不限于公开的示 例性实施方案。在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的示例性实施方案做多种调整或变化。权利要求的范围应基于最宽的解释以涵盖所有修改和等同结构与功能。
序列表
<110> 山东农之安生物科技有限公司
<120> 具有去环氧基催化活性的多肽及其编码核酸和用途
<130> BH2000025-1
<141> 2020-03-05
<160> 70
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 281
<212> PRT
<213> Elytrigia ponticum
<400> 1
Met Ala Thr Ser Ala Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Val Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Pro
115 120 125
Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Ile Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Leu Ser Ser Trp Asp
180 185 190
Asp Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Lys Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Met Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Val Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 2
<211> 281
<212> PRT
<213> Elytrigia elongatum
<400> 2
Met Ala Thr Ser Thr Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Ile Gly Asp Ser Leu Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Gln
115 120 125
Gln Leu Leu Phe Pro Leu Ser Glu Ile Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Leu Ser Ser Trp Asp
180 185 190
Asp Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Lys Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Met Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Val Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 3
<211> 281
<212> PRT
<213> Elytrigia ponticum
<400> 3
Met Ala Thr Ser Ala Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Val Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Val Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Pro
115 120 125
Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Ile Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Leu Ser Ser Trp Asp
180 185 190
Asp Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Lys Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Met Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Val Ser Glu Trp
245 250 255
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180 185 190
Asp Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Lys Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Met Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Val Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 18
<211> 281
<212> PRT
<213> Elytrigia ponticum
<400> 18
Met Ala Thr Ser Ala Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Val Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Pro
115 120 125
Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Ile Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Ile Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Leu Ser Ser Trp Asp
180 185 190
Asp Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Lys Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Met Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Val Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 19
<211> 281
<212> PRT
<213> Elytrigia ponticum
<400> 19
Met Ala Thr Ser Ala Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Val Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Pro
115 120 125
Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Ile Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Val Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Leu Ser Ser Trp Asp
180 185 190
Asp Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Lys Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Met Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Val Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 20
<211> 281
<212> PRT
<213> Elytrigia ponticum
<400> 20
Met Ala Thr Ser Ala Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Val Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Val Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Pro
115 120 125
Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Ile Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Leu Ser Ser Trp Asp
180 185 190
Asp Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Lys Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Met Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Val Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 21
<211> 281
<212> PRT
<213> Elytrigia ponticum
<400> 21
Met Ala Thr Ser Ala Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Val Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Pro
115 120 125
Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Ile Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Val Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Leu Ser Ser Trp Asp
180 185 190
Asp Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Lys Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Met Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Val Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 22
<211> 281
<212> PRT
<213> Elytrigia ponticum
<400> 22
Met Ala Thr Ser Ala Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Val Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Val Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Pro
115 120 125
Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Ile Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Leu Ser Ser Trp Asp
180 185 190
Asp Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Lys Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Met Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Val Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 23
<211> 281
<212> PRT
<213> Elytrigia ponticum
<400> 23
Met Ala Thr Ser Ala Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Val Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Pro
115 120 125
Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Ile Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Leu Ser Ser Trp Asp
180 185 190
Asp Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Lys Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Met Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Met Leu Pro Val Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 24
<211> 281
<212> PRT
<213> Elytrigia ponticum
<400> 24
Met Ala Thr Ser Ala Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Val Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Pro
115 120 125
Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Ile Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg His Ala Gly Leu Ser Ser Trp Asp
180 185 190
Asp Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Lys Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Met Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Val Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 25
<211> 280
<212> PRT
<213> Epichloe bromicola
<400> 25
Met Ala Thr Ser Thr Ser Ile Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Thr Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Val Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Gln
115 120 125
Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Thr Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala Asp
130 135 140
Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His Val
145 150 155 160
Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp Val
165 170 175
Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Val Ser Ser Trp Glu Asp
180 185 190
Phe Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Glu Lys Met Met Gln Ser Leu Arg
195 200 205
Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Arg Asp Ala Ser Gly
210 215 220
Pro Phe Leu Leu Gly Gln Lys Ala Thr Tyr Ala Asp Leu Ile Val Gly
225 230 235 240
Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Ala Ser Glu Trp Gln
245 250 255
Glu Val Arg Ala Cys His Gly Ala Val Phe Gly Gln Leu His Asp Ala
260 265 270
Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 26
<211> 279
<212> PRT
<213> Epichloe amarillans
<400> 26
Met Ala Thr Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile Ala Gln
1 5 10 15
Arg Pro Pro Val Thr Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp Lys Ser
20 25 30
Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr Trp Val
35 40 45
Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Leu Pro Ala
50 55 60
Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Thr Asp Phe Asp Thr Leu Pro Ile Ile
65 70 75 80
His Asp Pro Ala Thr Gly Ser Leu Ile Gly Asp Ser Phe Asp Ile Ala
85 90 95
Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp Leu Phe
100 105 110
Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Ala Gly Arg Asp Thr Gln Leu Leu
115 120 125
Ile Pro Leu Ser Glu Val Arg Ala Ala Ser Pro Glu Leu Ala Asp Tyr
130 135 140
Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His Val Gly
145 150 155 160
Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp Val Thr
165 170 175
Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Ala Val Ser Ser Trp Asp Asp Leu
180 185 190
Asp Met Val Gly Asp Ala Arg Asp Lys Met Met Gln Ser Leu Arg Asn
195 200 205
Thr Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Arg Asp Ala Ser Gly Pro
210 215 220
Phe Leu Leu Gly Pro Lys Ala Thr Tyr Ala Asp Leu Ile Val Gly Gly
225 230 235 240
Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Pro Ser Glu Trp Gln Ala
245 250 255
Ala Arg Ala Trp His Gly Ala Val Phe Gly Gln Leu His Asp Ala Leu
260 265 270
Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275
<210> 27
<211> 264
<212> PRT
<213> Epichloe baconii
<400> 27
Met Ala Thr Ser Thr Ser Thr Ser Thr Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile
1 5 10 15
Phe Tyr Asp Ile Ala Gln Arg Pro Pro Val Thr Glu Thr Cys Cys Ala
20 25 30
Val Asn Pro Trp Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro
35 40 45
Tyr Thr Thr Thr Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala
50 55 60
Ser Leu Asn Leu Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Thr Asp Phe
65 70 75 80
Asn Thr Leu Pro Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Gly Ser Leu Val Gly
85 90 95
Asp Ser Phe Asp Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Asp Thr Gln Leu
100 105 110
Leu Ile Pro Leu Ser Glu Val Arg Ala Ala Ser Ser Asp Leu Ala Asp
115 120 125
Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His Val
130 135 140
Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp Val
145 150 155 160
Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Val Ser Ser Trp Asp Asp
165 170 175
Phe Glu Met Ala Gly Glu Ala Arg Glu Lys Met Met Gln Ser Leu Arg
180 185 190
Asn Thr Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Arg Asp Ala Ser Gly
195 200 205
Pro Phe Leu Leu Gly Arg Lys Ala Thr Tyr Ala Asp Leu Ile Val Gly
210 215 220
Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Ala Ser Glu Trp Gln
225 230 235 240
Ala Ala Arg Ala Trp His Gly Ala Val Phe Gly Gln Leu His Asp Ala
245 250 255
Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
260
<210> 28
<211> 286
<212> PRT
<213> Epichloe festucae
<400> 28
Met Ala Thr Ser Thr Ser Thr Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr
1 5 10 15
Asp Ile Ala Gln Arg Pro Pro Val Thr Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn
20 25 30
Pro Trp Lys Thr Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Thr Tyr Thr
35 40 45
Thr Thr Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Gly Val Arg Ala Ser Leu
50 55 60
Asn Val Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Thr Asp Phe Asn Thr
65 70 75 80
Leu Pro Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Gly Ser Leu Ile Gly Asp Ser
85 90 95
Phe Asp Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala
100 105 110
Gly His Leu Phe Pro Pro Leu Pro Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala
115 120 125
Val Gly Arg Asp Met Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Val Arg Ala
130 135 140
Ser Ser Glu Leu Ala Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala
145 150 155 160
Ala Phe Thr Ala His Val Gly Val Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp
165 170 175
Pro Ala Thr Ala Asp Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly
180 185 190
Val Ser Ser Trp Glu Asp Phe Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Glu Lys
195 200 205
Met Met Gln Ser Leu Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe
210 215 220
Arg Arg Asp Ala Ser Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Gln Ala Thr Tyr
225 230 235 240
Ala Asp Leu Ile Val Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu
245 250 255
Pro Ala Ser Glu Trp Gln Glu Val Arg Ala Trp His Gly Ala Val Phe
260 265 270
Gly Arg Leu His Asp Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280 285
<210> 29
<211> 281
<212> PRT
<213> Epichloe gansuensis
<400> 29
Met Ala Thr Ser Thr Ser Thr Ser Ala Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr
1 5 10 15
Asp Ile Ala Gln Arg Pro Pro Val Thr Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn
20 25 30
Pro Trp Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr
35 40 45
Thr Thr Trp Val Glu Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu
50 55 60
Asn Leu Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr
65 70 75 80
Leu Pro Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Gly Ser Leu Ile Gly Asp Ser
85 90 95
Phe Asp Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala
100 105 110
Asp Asp Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Val Val Gly Ser His
115 120 125
Val Gln Pro Phe Ile Pro Leu Ser Asp Ile Arg Ala Ser Glu Phe Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Leu His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Val Ser Ser Trp Glu
180 185 190
Asp Phe Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Glu Lys Met Met Gln Ser Phe
195 200 205
Arg Thr Met Leu Glu Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Arg Asp Ala Thr
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Lys Ala Thr Tyr Ala Asp Leu Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Ala Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Trp His Gly Ala Val Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 30
<211> 281
<212> PRT
<213> Epichloe typhina
<400> 30
Met Ala Thr Ser Ser Thr Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp
1 5 10 15
Ile Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro
20 25 30
Trp Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr
35 40 45
Thr Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn
50 55 60
Val Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu
65 70 75 80
Pro Ile Met His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Ile Gly Asp Ser Phe
85 90 95
Asp Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly
100 105 110
Asp Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met
115 120 125
Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Val Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Val Ser Ser Trp Glu
180 185 190
Asp Phe Glu Met Val Gly Glu Val Arg Glu Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Arg Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Leu Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Ala Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 31
<211> 281
<212> PRT
<213> Epichloe uncinata
<400> 31
Met Ala Thr Ser Ser Thr Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp
1 5 10 15
Ile Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro
20 25 30
Trp Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr
35 40 45
Thr Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn
50 55 60
Val Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu
65 70 75 80
Pro Ile Met His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Ile Gly Asp Ser Phe
85 90 95
Asp Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly
100 105 110
Asp Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met
115 120 125
Gln Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Val Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala
130 135 140
Asp Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His
145 150 155 160
Val Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp
165 170 175
Val Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Val Ser Ser Trp Glu
180 185 190
Asp Phe Glu Met Val Gly Glu Val Arg Glu Lys Met Met Gln Ser Leu
195 200 205
Arg Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Arg Asp Ala Ser
210 215 220
Gly Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Leu Ile Val
225 230 235 240
Gly Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Ala Ser Glu Trp
245 250 255
Gln Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp
260 265 270
Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 32
<211> 280
<212> PRT
<213> Epichloe sylvatica
<400> 32
Met Thr Thr Ser Thr Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Lys Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Lys Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Met His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Leu Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Gly Arg Asp Met Gln
115 120 125
Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Val Arg Ala Ser Pro Glu Leu Ala Asp
130 135 140
Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His Val
145 150 155 160
Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp Val
165 170 175
Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Val Ser Ser Trp Glu Asp
180 185 190
Leu Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Glu Lys Met Met Gln Ser Leu Arg
195 200 205
Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Arg Asp Ala Ser Gly
210 215 220
Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Leu Ile Val Gly
225 230 235 240
Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Ala Ser Glu Trp Gln
245 250 255
Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp Ala
260 265 270
Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 33
<211> 280
<212> PRT
<213> Epichloe aotearoae
<400> 33
Met Ala Thr Pro Thr Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Met His Asp Pro Ala Thr Ser Ser Leu Ile Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Ser Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Ala Arg Asp Thr Gln
115 120 125
Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Ile Arg Ala Ser Ser Glu Leu Ala Asp
130 135 140
Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His Val
145 150 155 160
Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp Val
165 170 175
Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Val Ser Ser Trp Glu Asp
180 185 190
Phe Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Glu Lys Met Met Gln Ser Leu Arg
195 200 205
Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Arg Asp Ala Ser Gly
210 215 220
Pro Phe Leu Leu Gly Gln Arg Ala Thr Tyr Ala Asp Leu Ile Val Gly
225 230 235 240
Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Ala Ser Glu Trp Gln
245 250 255
Glu Ala Arg Ala Cys His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp Ala
260 265 270
Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 34
<211> 275
<212> PRT
<213> Epichloe glyceriae
<400> 34
Met Ala Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile Ala Gln Arg Pro
1 5 10 15
Pro Val Ala Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp Lys Ser Arg Leu
20 25 30
Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr Trp Val Ser Met
35 40 45
Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val Pro Ala Cys Arg
50 55 60
Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro Ile Ile His Asp
65 70 75 80
Pro Ala Thr Gly Ser Leu Ile Gly Asp Ser Phe Asp Ile Ala Ala His
85 90 95
Leu Gln Arg Ala Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp Leu Phe Pro Pro
100 105 110
Gln Glu Leu Asp Tyr Val Val Ala Arg Asp Thr Arg Leu Leu Val Pro
115 120 125
Leu Ser Glu Thr Arg Ala Ser Glu Phe Ala Asp Tyr Ala Arg Phe Asn
130 135 140
Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His Val Gly Leu Met Val His
145 150 155 160
Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp Val Thr Lys Ala Glu Phe
165 170 175
Val Arg Arg Ala Gly Val Ser Ser Trp Glu Asp Phe Glu Leu Val Gly
180 185 190
Glu Ala Arg Glu Lys Met Met Gln Ser Leu Arg Asn Val Leu Gly Asp
195 200 205
Leu Ala Ala Leu Phe Arg Arg Asp Ala Ser Gly Pro Phe Leu Leu Gly
210 215 220
Gln Lys Ala Thr Tyr Ala Asp Leu Ile Val Gly Gly Trp Leu Arg Met
225 230 235 240
Met Arg Ala Thr Leu Pro Ala Ser Glu Trp Gln Glu Ala Arg Ala Trp
245 250 255
His Gly Ala Val Phe Gly Gln Leu His Asp Ala Leu Asp Lys Tyr Ala
260 265 270
Glu Val Lys
275
<210> 35
<211> 280
<212> PRT
<213> Epichloe brachyelytri
<400> 35
Met Ala Thr Ser Thr Ser Thr Ser Thr Pro Ile Ile Phe Tyr Asp Ile
1 5 10 15
Ala Gln Arg Pro Pro Val Thr Glu Thr Cys Cys Ala Val Asn Pro Trp
20 25 30
Lys Ser Arg Leu Ala Leu Asn Phe Lys Ala Val Pro Tyr Thr Thr Thr
35 40 45
Trp Val Lys Met Pro Asp Ile Ser Ser Val Arg Ala Ser Leu Asn Val
50 55 60
Pro Ala Cys Arg Lys Phe Ala Asp Gly Ser Asp Phe Asn Thr Leu Pro
65 70 75 80
Ile Ile His Asp Pro Ala Thr Asp Ser Leu Ile Gly Asp Ser Phe Asp
85 90 95
Ile Ala Ala Tyr Leu Gln Arg Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Ala Gly Asp
100 105 110
Leu Phe Pro Pro Gln Lys Leu Asp Tyr Ala Val Ser Arg Asp Met Gln
115 120 125
Leu Leu Ile Pro Leu Ser Glu Met Arg Ala Ser Ser Glu Leu Ala Asp
130 135 140
Tyr Ala Arg Phe Asn Ser Asn Val Asp Ala Ala Phe Thr Ala His Val
145 150 155 160
Gly Leu Met Val His Gly Leu Pro Leu Asp Pro Ala Thr Ala Asp Val
165 170 175
Thr Lys Ala Glu Phe Val Arg Arg Ala Gly Val Ser Ser Trp Glu Asp
180 185 190
Phe Glu Met Val Gly Glu Ala Arg Glu Lys Met Met Gln Ser Leu Arg
195 200 205
Asn Met Leu Gly Asp Leu Ala Ala Leu Phe Arg Arg Asp Ala Ser Gly
210 215 220
Pro Phe Leu Leu Gly Gln Lys Ala Thr Tyr Ala Asp Leu Ile Val Gly
225 230 235 240
Gly Trp Leu Arg Met Met Arg Ala Thr Leu Pro Ala Ser Glu Trp Gln
245 250 255
Glu Val Arg Ala Trp His Gly Ala Ile Phe Gly Gln Leu His Asp Ala
260 265 270
Leu Asp Lys Tyr Ala Glu Val Lys
275 280
<210> 36
<211> 846
<212> DNA
<213> Tinopyrum_ponticum_(wild_type_for_mutants)
<400> 36
atggccacct ccgcctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac cacctgggtg aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgccagcgtg tcgcaagttc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatccacg accccgcgac cgactccctc gtcggcgact cctttgacat cgccgcctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctcgggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg gcagggacat gccgcagctg ctcatcccgc tgtccgagat tcgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
gtgggcctca tggtccacgg acttcccttg gatcctgcca ccgccgacgt gaccaaggcc 540
gagtttgtgc ggcgcgcggg gctctcatcg tgggacgact tggaaatggt tggcgaggcg 600
cgcgacaaga tgatgcagtc cctccgaaac atgctggggg acctggctgc cttgtttcgg 660
aaagatgcga gcgggccgtt cctgttgggg cagagggcca cgtatgcgga catgattgtc 720
ggtggctggt tgcgcatgat gcgggcgacg ttgccggtga gtgagtggca ggaggcgaga 780
gcctgccacg gagctatctt tgggcagctg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 37
<211> 846
<212> DNA
<213> Tinopyrum_elongatum
<400> 37
atggccacct ccacctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac cacctgggtc aagatgccag atatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgccagcgtg tcgcaagttc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatccacg accccgcgac cgactccctc atcggcgact ccttggacat cgccgcctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctcgggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg gcagggacat gcagcagctg ctcttcccgc tgtccgagat tcgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
gtgggcctca tggtccacgg acttcccttg gatcctgcca ccgccgacgt gaccaaggcc 540
gagtttgtgc ggcgcgcggg gctctcatcg tgggacgact tggaaatggt tggcgaggcg 600
cgcgacaaga tgatgcagtc cctccgaaac atgctggggg acctggctgc tttgtttcgg 660
aaagatgcga gcgggccgtt cctgttgggg cagagggcca cgtatgcgga catgattgtc 720
ggtggctggt tgcgcatgat gcgggcgacg ttgccggtga gcgagtggca ggaggcgaga 780
gcctgccacg gggctatctt tgggcagctg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 38
<211> 846
<212> DNA
<213> Tinopyrum_ponticum
<400> 38
atggccacct ccgcctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac cacctgggtg aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgccagcgtg tcgcaagttc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatccacg accccgcgac cgactccctc gtcggcgact cctttgacat cgccgtctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctcgggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg gcagggacat gccgcagctg ctcatcccgc tgtccgagat tcgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
gtgggcctca tggtccacgg acttcccttg gatcctgcca ccgccgacgt gaccaaggcc 540
gagtttgtgc ggcgcgcggg gctctcatcg tgggacgact tggaaatggt tggcgaggcg 600
cgcgacaaga tgatgcagtc cctccgaaac atgctggggg acctggctgc cttgtttcgg 660
aaagatgcga gcgggccgtt cctgttgggg cagagggcca cgtatgcgga catgattgtc 720
ggtggctggt tgcgcatgat gcgggcgacg ttgccggtga gtgagtggca ggaggcgaga 780
gcctgccacg gagctatctt tgggcagctg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 39
<211> 846
<212> DNA
<213> Tinopyrum_ponticum
<400> 39
atggccacct ccgcctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac cacctgggtg aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgccagcgtg tcgcaagttc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatccacg accccgcgac cgactccctc gtcggcgact cctttgacat cgccgcctac 300
ctgcagcgca cgtatctcgc ctcgggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg gcagggacat gccgcagctg ctcatcccgc tgtccgagat tcgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
gtgggcctca tggtccacgg acttcccttg gatcctgcca ccgccgacgt gaccaaggcc 540
gagtttgtgc ggcgcgcggg gctctcatcg tgggacgact tggaaatggt tggcgaggcg 600
cgcgacaaga tgatgcagtc cctccgaaac atgctggggg acctggctgc cttgtttcgg 660
aaagatgcga gcgggccgtt cctgttgggg cagagggcca cgtatgcgga catgattgtc 720
ggtggctggt tgcgcatgat gcgggcgacg ttgccggtga gtgagtggca ggaggcgaga 780
gcctgccacg gagctatctt tgggcagctg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 40
<211> 846
<212> DNA
<213> Tinopyrum_ponticum
<400> 40
atggccacct ccgcctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac cacctgggtg aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgccagcgtg tcgcaagttc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatccacg accccgcgac cgactccctc gtcggcgact cctttgacat cgtcgcctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctcgggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg gcagggacat gccgcagctg ctcatcccgc tgtccgagat tcgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
gtgggcctca tggtccacgg acttcccttg gatcctgcca ccgccgacgt gaccaaggcc 540
gagtttgtgc ggcgcgcggg gctctcatcg tgggacgact tggaaatggt tggcgaggcg 600
cgcgacaaga tgatgcagtc cctccgaaac atgctggggg acctggctgc cttgtttcgg 660
aaagatgcga gcgggccgtt cctgttgggg cagagggcca cgtatgcgga catgattgtc 720
ggtggctggt tgcgcatgat gcgggcgacg ttgccggtga gtgagtggca ggaggcgaga 780
gcctgccacg gagctatctt tgggcagctg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 41
<211> 846
<212> DNA
<213> Tinopyrum_ponticum
<400> 41
atggccacct ccgcctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac catctgggtg aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgccagcgtg tcgcaagttc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatccacg accccgcgac cgactccctc gtcggcgact cctttgacat cgccgcctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctcgggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg gcagggacat gccgcagctg ctcatcccgc tgtccgagat tcgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
gtgggcctca tggtccacgg acttcccttg gatcctgcca ccgccgacgt gaccaaggcc 540
gagtttgtgc ggcgcgcggg gctctcatcg tgggacgact tggaaatggt tggcgaggcg 600
cgcgacaaga tgatgcagtc cctccgaaac atgctggggg acctggctgc cttgtttcgg 660
aaagatgcga gcgggccgtt cctgttgggg cagagggcca cgtatgcgga catgattgtc 720
ggtggctggt tgcgcatgat gcgggcgacg ttgccggtga gtgagtggca ggaggcgaga 780
gcctgccacg gagctatctt tgggcagctg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 42
<211> 846
<212> DNA
<213> Tinopyrum_ponticum
<400> 42
atggccacct ccgcctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat tcagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac cacctgggtg aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgccagcgtg tcgcaagttc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatccacg accccgcgac cgactccctc gtcggcgact cctttgacat cgccgcctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctcgggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg gcagggacat gccgcagctg ctcatcccgc tgtccgagat tcgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
gtgggcctca tggtccacgg acttcccttg gatcctgcca ccgccgacgt gaccaaggcc 540
gagtttgtgc ggcgcgcggg gctctcatcg tgggacgact tggaaatggt tggcgaggcg 600
cgcgacaaga tgatgcagtc cctccgaaac atgctggggg acctggctgc cttgtttcgg 660
aaagatgcga gcgggccgtt cctgttgggg cagagggcca cgtatgcgga catgattgtc 720
ggtggctggt tgcgcatgat gcgggcgacg ttgccggtga gtgagtggca ggaggcgaga 780
gcctgccacg gagctatctt tgggcagctg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 43
<211> 846
<212> DNA
<213> Tinopyrum_ponticum
<400> 43
atggccacct ccgcctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac cacctgggtg aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgccagcgtg tcgcaagttc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatccacg accccgcgac cgactccctc gtcggcgact cctttgacat cgccgcctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctcgggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg gcagggacat gccgcagctg ctcatcccgc tgtccgagat tcgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
gtgggcctca tggtccacgg acttcccttg gatcctgcca ccgccgacgt gaccaaggcc 540
gagtttgtgc ggcgcgcggg gctctcatcg tgggacgact tggaaatggt tggcgaggcg 600
cgcgacaaga tgatgcagtc cctctgaaac atgctggggg acctggctgc cttgtttcgg 660
aaagatgcga gcgggccgtt cctgttgggg cagagggcca cgtatgcgga catgattgtc 720
ggtggctggt tgcgcatgat gcgggcgacg ttgccggtga gtgagtggca ggaggcgaga 780
gcctgccacg gagctatctt tgggcagctg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 44
<211> 846
<212> DNA
<213> Tinopyrum_ponticum
<400> 44
atggccacct ccgcctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac cacctgggtg aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgccagcgtg tcgcaagttc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatccacg accccgcgac cgactccctc gtcggcgact cctttgacat cgccgcctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctcgggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg gcagggacat gccgcagctg ctcatcccgc tgtccgagat tcgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
gtgggcctca tggtccacgg acttcccttg gatcctgcca ccgccgacgt gaccaaggcc 540
gagtttgtgc ggcgcgcggg gctctcatcg tgggacgact tggaaatggt tggcgaggcg 600
cgcgacaaga tgatgcagtc cctccgaaac atgctggggg acctggctgc cttgtttcgg 660
aaagatgcga gcgggccgtt cctgttgggg cagagggcca cgtatgcgga catgattgtc 720
ggtggctgat tgcgcatgat gcgggcgacg ttgccggtga gtgagtggca ggaggcgaga 780
gcctgccacg gagctatctt tgggcagctg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 45
<211> 846
<212> DNA
<213> Tinopyrum_ponticum
<400> 45
atggccacct ccgcctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcaa aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac cacctgggtg aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgccagcgtg tcgcaagttc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatccacg accccgcgac cgactccctc gtcggcgact cctttgacat cgccgcctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctcgggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg gcagggacat gccgcagctg ctcatcccgc tgtccgagat tcgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
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gagcttgcag actacgcccg cttcaacagc aacgttgacg cagcctttac cgcacacgtg 480
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tttgtgcggc gcgcgggggt ctcgtcgtgg gaggacttcg aaatggttgg tgaggcgcgc 600
gagaagatga tgcagtccct ccggaacatg ctgggggacc tggctgcctt gttccggaga 660
gatgcgagcg ggccgttctt gctgggacag aaggccacct atgcggatct gattgtcggt 720
ggctggctgc ggatgatgcg ggcgacgttg ccggcgagtg agtggcagga ggtgagagcc 780
tgccacgggg ctgtcttcgg gcaactgcat gatgcgctgg acaagtatgc cgaggtgaag 840
tag 843
<210> 61
<211> 840
<212> DNA
<213> Epichloe_amarillans
<400> 61
atggccacct ccacctccac cccaatcatc ttctacgaca tagcccagcg gccccccgtc 60
acagaaacgt gctgcgccgt caacccttgg aaatccagac tggccctcaa cttcaaggcc 120
gtcccctaca caaccacctg ggtcaagatg ccagacatca gcagcgtccg cgccagcctc 180
aacctgccag cgtgtcgcaa gttcgccgac ggcaccgact tcgacaccct gcccatcatc 240
cacgaccccg cgaccggctc cctcatcggc gactccttcg acatcgccgc ctacctgcag 300
cgcacgtatc ccgcctccgg cgccggcgac ctcttccccc cccagaagct cgactacgcc 360
gccggcaggg acacgcagct gctcatcccg ctgtccgagg ttcgcgccgc atccccggag 420
ctcgcagact acgcccgctt caacagcaac gttgacgcag ccttcaccgc gcacgtgggc 480
ctcatggtcc acgggcttcc cttggaccct gccaccgcgg acgtgaccaa ggccgagttt 540
gtgcggcgcg cggccgtctc atcgtgggac gacctcgaca tggttggcga cgcgcgcgac 600
aagatgatgc agtccctccg gaacacgctg ggggacctgg ccgccttgtt tcggagagat 660
gcgagcgggc cgttcttgct gggacccaag gccacgtacg cggatctgat tgtcggtggc 720
tggttgcgca tgatgcgggc gacgttgccg ccgagtgagt ggcaggcggc gagagcttgg 780
cacggggctg tcttcgggca gctgcatgat gcgctggaca agtacgccga ggtgaagtag 840
<210> 62
<211> 795
<212> DNA
<213> Epichloe_baconii
<400> 62
atggccacct ccacctccac ctccacctcc acctccaccc caatcatctt ctacgacata 60
gcccagcggc cccccgtcac agaaacatgc tgcgccgtca acccttggaa atccagactg 120
gccctcaact tcaaggccgt cccctacaca accacctggg tcaagatgcc cgacatcagc 180
agcgtccgcg ccagcctcaa cctgccagcg tgtcgcaagt tcgccgacgg caccgacttc 240
aacaccctgc ccatcatcca cgaccccgcg accggctccc tcgtcggcga ctccttcgac 300
atcgccgcct acctgcagcg cacggacacg cagctgctca tcccgctgtc cgaggttcgc 360
gccgcatcct cggacctcgc agactacgcc cgcttcaaca gcaacgttga cgcagccttt 420
accgcgcacg tgggcctcat ggtccacggg cttcccttgg accctgccac cgcggacgtg 480
accaaggccg agtttgtgcg gcgcgcgggg gtctcatcgt gggacgactt cgagatggca 540
ggcgaggcgc gcgagaagat gatgcagtcc ctccggaaca cgctggggga cctggccgcc 600
ttgtttcgga gagatgcgag cgggccgttc ttgctgggac gcaaggccac gtacgcggat 660
ctgattgtcg gtggctggtt gcgcatgatg cgggcgacgt tgccggcgag tgagtggcag 720
gcggcgagag cttggcacgg ggctgtcttc gggcagctgc atgatgcgct ggacaagtat 780
gccgaggtga agtag 795
<210> 63
<211> 861
<212> DNA
<213> Epichloe_festucae
<400> 63
atggccacct ccacctccac ctccacctcc accccaatca tcttctacga catagcccag 60
cggccccccg tcacagaaac atgctgcgcc gtcaaccctt ggaaaaccag actggccctc 120
aacttcaagg ccgtcaccta cacaaccacc tgggtcaaga tgccagacat cagcggcgtc 180
cgcgccagcc tcaacgtgcc agcgtgtcgc aaattcgccg acggcaccga cttcaacacc 240
ctgcccatca tccacgaccc cgcgaccggc tccctcatcg gcgactcctt cgacatcgcc 300
gcctacctgc agcgcaccta tcccgcctcc ggcgctggcc acctcttccc cccccttccc 360
ccccctcaga agctcgacta cgccgtcggc agggacatgc agctgctcat cccgctgtcc 420
gaggttcgcg catcctcgga gctcgcagac tacgcccgct tcaacagcaa cgttgacgca 480
gcctttaccg cgcacgtcgg cgtcatggtc cacgggcttc ccttggatcc tgccaccgcg 540
gacgtgacca aggccgagtt cgtgcggcgc gcgggggtct catcgtggga ggacttcgaa 600
atggtcggtg aggcgcgcga gaagatgatg cagtccctcc ggaacatgct gggggacctg 660
gccgccttgt ttcggagaga tgcgagcggg ccgttcttgc tgggacagca ggccacgtac 720
gcggatctga ttgtcggtgg ctggttgcgg atgatgcggg cgacgttgcc ggccagtgag 780
tggcaggagg tgagagcttg gcacggggct gtcttcgggc ggctgcatga tgcgctggac 840
aagtatgccg aggtgaagta g 861
<210> 64
<211> 846
<212> DNA
<213> Epichloe_gansuensis
<400> 64
atggccacct ccacctccac ttccgcctcc accccaatca tcttctacga catagcccag 60
cgcccccccg tcacagaaac atgctgcgcc gtcaaccctt ggaaatccag actggccctc 120
aatttcaagg ccgtccccta cacaaccacc tgggtcgaga tgccagacat cagcagcgtc 180
cgcgccagtc tcaacctgcc agcgtgtcgc aaattcgccg acggctccga cttcaatacc 240
ctgcccatca tccacgaccc cgcgaccggc tccctcatcg gcgactcctt cgacatcgcc 300
gcctacctgc agcgcacgta tcccgcctcg ggcgccgacg acctcttccc cccccagaag 360
ctggactacg tagtcggcag ccatgtccag ccgttcatcc cgctgtctga cattcgcgca 420
tcagagtttg cagattacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcacac 480
gtgggcctca tgctccacgg acttcccttg gatcctgcca ccgcggacgt gaccaaggca 540
gaattcgtgc gacgcgccgg ggtctcgtcg tgggaggatt ttgaaatggt tggtgaggcg 600
cgggagaaga tgatgcagtc ctttcggact atgctggagg acctggctgc cttgttccgg 660
agagatgcga ccgggccgtt cttgctggga cagaaggcta cgtatgcgga tctgattgtc 720
ggcgggtggt tgcggatgat gcgcgcgacg ttgccggcga gtgagtggca ggaggcgaga 780
gcttggcatg gggccgtctt cggacaactg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 65
<211> 846
<212> DNA
<213> Epichloe_typhina
<400> 65
atggccacct cctccacctc cacctccacc ccaatcatct tctacgacat agcccagcgg 60
ccccccgtcg cagaaacatg ctgcgccgtc aacccttgga aatccagact ggccctcaac 120
ttcaaggccg tcccctacac aaccacctgg gtcaagatgc cagacatcag cagcgtccgc 180
gccagcctca acgtgccagc gtgtcgtaaa ttcgccgacg gctccgactt caacaccctg 240
cccatcatgc acgaccccgc gaccgactcc ctcatcggcg actccttcga tatcgccgcc 300
tacctgcagc gcacgtatcc cgcctccggc gccggcgacc tcttcccccc ccagaagctc 360
gactacgcag tcggcaggga catgcagctg ctcatcccgc tgtccgaggt ccgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
gtgggcctca tggtccacgg gcttcccttg gatcctgcca ccgcagacgt gaccaaggcc 540
gagtttgtgc ggcgcgcggg ggtctcgtcg tgggaggact tcgaaatggt tggcgaggtg 600
cgcgagaaga tgatgcagtc cctccggaac atgctcgggg acctggctgc cttgtttcgg 660
agagatgcga gcgggccgtt cctgctgggg cagagggcca cgtatgcgga cctgattgtc 720
ggtggctggt tgcgcatgat gcgcgcgacg ttgccggcga gtgagtggca ggaggcgaga 780
gcctgccacg gggccatctt cgggcagctg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 66
<211> 846
<212> DNA
<213> Epichloe_uncinata
<400> 66
atggccacct cctccacctc cacctccacc ccaatcatct tctacgacat agcccagcgg 60
ccccccgtcg cagaaacatg ctgcgccgtc aacccttgga aatccagact ggccctcaac 120
ttcaaggccg tcccctacac aaccacctgg gtcaagatgc cagacatcag cagcgtccgc 180
gccagcctca acgtgccagc gtgtcgtaaa ttcgccgacg gctccgactt caacaccctg 240
cccatcatgc acgaccccgc gaccgactcc ctcatcggcg actccttcga catcgccgcc 300
tacctgcagc gcacgtatcc cgcctccggc gccggcgacc tcttcccccc ccagaagctc 360
gactacgcag tcggcaggga catgcagctg ctcatcccgc tgtccgaggt ccgcgcatca 420
ccagagctcg cagactacgc ccgcttcaac agcaacgttg acgcagcctt taccgcgcac 480
gtgggcctca tggtccacgg gcttcccttg gatcctgcca ccgcggacgt gaccaaggcc 540
gagtttgtgc ggcgcgcggg ggtctcgtcg tgggaggact tcgaaatggt tggcgaggtg 600
cgcgagaaga tgatgcagtc cctccggaac atgctcgggg acctggctgc cttgtttcgg 660
agagatgcga gcgggccgtt cctgctgggg cagagggcca cgtatgcgga cctgattgtc 720
ggtggctggt tgcgcatgat gcgcgcgacg ttgccggcga gtgagtggca ggaggcgaga 780
gcctgccacg gggccatctt cgggcagctg catgatgcgc tggacaagta tgccgaggtg 840
aagtag 846
<210> 67
<211> 843
<212> DNA
<213> Epichloe_sylvatica
<400> 67
atgaccacct ccacctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacaaaac cacctgggtc aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaagg tgccagcgtg tcgtaaattc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatgcacg accccgcgac cgactccctc ctcggcgact ccttcgacat cgccgcctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctccggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg gcagggacat gcagctgctc atcccgctgt ccgaggtccg cgcgtcacca 420
gagctcgcag actacgcccg cttcaacagc aacgttgacg cagcctttac cgcgcacgtg 480
ggcctcatgg tccacgggct tcccttggat cctgccaccg cggacgtgac caaggccgag 540
tttgtgcggc gcgcgggggt ctcgtcgtgg gaggaccttg aaatggttgg cgaggcgcgc 600
gagaagatga tgcagtccct ccggaacatg ctcggggacc tggctgcctt gtttcggaga 660
gatgcgagcg ggccgttcct gctggggcag agggccacgt atgcggacct gattgtcggt 720
ggctggttgc gcatgatgcg cgcgacgttg ccggcgagtg agtggcagga ggcgagagcc 780
tgccacgggg ccatcttcgg gcagctgcat gatgcgctgg acaagtatgc cgaggtgaag 840
tag 843
<210> 68
<211> 843
<212> DNA
<213> Epichloe_aotearoae
<400> 68
atggccaccc ccacctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcgcag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac cacctgggtc aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgccagcgtg tcgcaagttc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatgcacg accccgcgac ctcttccctc atcggcgact ccttcgacat cgccgcctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctcgggcgcc ggcgacctct tcccctccca gaagctcgac 360
tacgcagtcg ccagggacac gcagctgctc atcccgctgt ccgagattcg cgcatcatca 420
gagctcgcag actacgcccg cttcaacagc aacgttgacg cagcctttac cgcgcacgtg 480
ggcctcatgg tccacgggct tcccttggat cctgccaccg ccgacgtgac caaggccgag 540
tttgtgcggc gcgcgggcgt ctcatcgtgg gaggacttcg aaatggttgg cgaggcgcgc 600
gagaagatga tgcagtccct ccggaacatg ctgggggacc tggctgcctt gtttcggaga 660
gatgcgagcg ggccgttcct gctggggcag agggccacgt atgcggacct gattgtcggt 720
ggctggttgc gcatgatgcg ggcgacgttg ccggcgagtg agtggcagga ggcgagagcc 780
tgccacgggg ctatcttcgg gcagctgcat gatgcgctgg acaagtatgc cgaggtgaag 840
tag 843
<210> 69
<211> 828
<212> DNA
<213> Epichloe_glyceriae
<400> 69
atggccacct ccaccccaat catcttctac gacatagccc agcggccccc cgtcgcagaa 60
acatgctgcg ccgtcaaccc ttggaaatcc agactggccc tcaacttcaa ggccgtcccc 120
tacacaacca cctgggtcag catgccagac atcagcagcg tccgcgccag cctcaacgtg 180
ccggcgtgtc gcaaattcgc cgacggctcc gacttcaaca ccctgcccat catccacgac 240
cccgcgaccg gctccctcat cggcgactcc ttcgacatcg ccgcccacct gcagcgcgcc 300
tatcccgcct ccggcgccgg cgacctcttc cccccccagg agctggacta cgtggtcgcc 360
agggacacgc ggctgctcgt cccgctgtcc gagactcgcg catcagagtt cgcggactac 420
gcccgcttca acagcaacgt tgacgcagcc tttaccgcac acgtgggcct catggtccac 480
gggcttccct tggaccctgc caccgcggac gtgaccaagg cggagtttgt gcggcgcgcg 540
ggagtctcgt cgtgggagga tttcgaattg gttggtgagg cgcgcgagaa gatgatgcag 600
tccctccgga acgtgctggg ggacctggct gccttgtttc ggagagatgc gagcgggccg 660
ttcttgctgg gacagaaggc cacgtatgcg gatctgattg tcggtggctg gttgcggatg 720
atgcgggcga cgttgcccgc gagtgagtgg caggaggcga gagcctggca tggcgctgtc 780
ttcgggcagc tgcatgatgc gctggacaag tatgccgagg tgaagtag 828
<210> 70
<211> 843
<212> DNA
<213> Epichloe_brachyelytri
<400> 70
atggccacct ccacctccac ctccacccca atcatcttct acgacatagc ccagcggccc 60
cccgtcacag aaacatgctg cgccgtcaac ccttggaaat ccagactggc cctcaacttc 120
aaggccgtcc cctacacaac cacctgggtc aagatgccag acatcagcag cgtccgcgcc 180
agcctcaacg tgcctgcgtg tcgcaaattc gccgacggct ccgacttcaa caccctgccc 240
atcatccacg accccgcgac cgactccctc atcggcgact ccttcgacat cgccgcctac 300
ctgcagcgca cgtatcccgc ctccggcgcc ggcgacctct tcccccccca gaagctcgac 360
tacgcagtca gcagggacat gcagctgctc atcccgctgt ccgagatgcg cgcatcatca 420
gagctcgcag actacgcccg cttcaacagc aacgttgacg cagcctttac cgcgcacgtg 480
ggcctcatgg tccacgggct tcccttggat cctgccaccg cggacgtgac caaggccgag 540
tttgtgcggc gcgcgggggt ctcatcgtgg gaggatttcg aaatggttgg tgaggcgcgc 600
gagaagatga tgcagtccct ccggaacatg ctgggggacc tggctgcctt gtttcggaga 660
gatgcgagcg ggccgttctt gctggggcag aaggccacgt atgcggatct gattgtcggt 720
ggctggttgc gcatgatgcg ggcgacgttg ccggcgagtg agtggcagga ggtgagagcc 780
tggcacgggg ctatcttcgg gcagctgcat gatgcgctgg acaagtatgc cgaggtgaag 840
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Claims (19)

1.一种分离的具有去环氧基催化活性的多肽，其特征在于，在15-35℃温度下所述多肽能够使单端孢霉烯族毒素的环氧基与谷胱甘肽在PBS缓冲液中催化反应产生谷胱甘肽化衍生物。
2.一种分离的具有去环氧基催化活性的多肽，其特征在于，其包含选自由下述(1)-(5)组成的组中的一种氨基酸序列：
(1)SEQ ID No.:1-35所示的氨基酸序列；
(2)与(1)中的氨基酸序列的序列同一性为90％以上且来源于相同属的氨基酸序列；
(3)与(1)或(2)的氨基酸序列相比具有一个或多个氨基酸突变且序列同一性为90％以上的氨基酸序列；
(4)源自(1)-(3)任一项所述的氨基酸序列的部分连续序列；
(5)在(1)-(4)任一项所述的氨基酸序列的N端和/或C端连接其他氨基酸序列的嵌合序列。
3.根据权利要求1或2所述的多肽，其特征在于，其来源于长穗偃麦草属或香柱菌属。
4.根据权利要求2所述的多肽，其特征在于，当以SEQ ID No.:1所示的氨基酸序列作为位置参考时，所述多肽具有第98位氨基酸A、第99位氨基酸A的保守位点。
5.一种分离的活性多肽，其特征在于，其氨基酸序列如下所示：
V1-GDX1X2DIAAX3LQRT-V2-ADYARFNX1NVDX4AFX5AHVX1X6MX6HGLPLDPAX7X4DVX8KAEFVR-V3，其中：
X1表示G或S；
X2表示F或L；
X3表示Y或H；
X4表示A或V；
X5表示T或Q或N；
X6表示L或V；
X7表示T或S；
X8表示T或I；
V1不存在或表示第一可变区，所述第一可变区的氨基酸序列对应与SEQ.ID.No.1中第92位氨基酸前的连续多个氨基酸序列，且所述第一可变区与该连续多个氨基酸的序列的序列同一性为90％以上；
V2表示连接臂或表示第二可变区，所述第二可变区的氨基酸序列对应与SEQ.ID.No.1中第105-143位氨基酸之间的连续多个氨基酸序列，且所述第二可变区与该连续多个氨基酸的序列的序列同一性为90％以上；
V3不存在或表示第三可变区，所述第三可变区的氨基酸序列对应与SEQ.ID.No.1中第144位氨基酸之后的连续多个氨基酸序列，且所述第三可变区与该连续多个氨基酸的序列的序列同一性为90％以上。
6.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码根据权利要求1-5任一项所述的多肽。
7.一种分离的核酸分子，其特征在于，其具有选自下述(a)-(e)组成的组中的一种碱基序列：
(a)SEQ ID No.:36-70所示的序列；
(b)在(a)中碱基序列的基础上经宿主密码子偏好性改造的序列；
(c)(a)中所示序列的保守区序列；
(d)与(a)-(c)的序列同一性为95％以上且来源于相同属的序列；
(e)与(a)-(d)中任一序列的至少一部分互补的序列。
8.一种核酸构建体，其特征在于，其包含根据权利要求6或7所述的核酸和可选的调控元件。
9.一种宿主细胞，其特征在于，其包含通过基因工程手段引入的根据权利要求6或7所述的核酸，或根据权利要求8所述的核酸构建体。
10.一种根据权利要求1-5任一项所述的多肽的生产方法，其特征在于，包括通过基因工程手段使根据权利要求6或7所述的核酸表达，从而得到多肽的步骤，或者包括通过化学合成手段得到多肽的步骤。
11.一种用于催化单端孢霉烯族化合物去环氧基反应的方法，其特征在于，其包括使根据权利要求1-5任一项所述的多肽或根据权利要求9所述的宿主细胞与单端孢霉烯族化合物和谷胱甘肽接触，从而生成谷胱甘肽化衍生物的步骤；优选地，所述单端孢霉烯族化合物包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇、镰刀菌烯酮-X、二乙酰氧基草镰刀菌烯醇、T-2毒素和HT-2毒素。
12.一种谷胱甘肽化衍生物，其具有下述通式(I)所示的结构：
Figure FDA0002401430910000031
其中，R1、R2和R3各自独立地表示氢原子、羟基或由-OCO-R’表示的酯基，其中R’为直链或支链C1-C5烷基，R4表示氢原子或羟基，R5表示氢原子、＝O、羟基或由-OCO-R”表示的酯基，其中R”为直链或支链C1-C10烷基。
13.根据权利要求12所述的谷胱甘肽化衍生物作为评价单端孢霉烯族化合物去环氧基反应指标的用途。
14.一种用于评价被单端孢霉烯族化合物污染的样品的解毒效果的方法，其特征在于，包括以根据权利要求12所述的谷胱甘肽化衍生物作为评价指标的步骤。
15.一种用于评价被单端孢霉烯族化合物污染的样品的解毒效果的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)测量所述样品中谷胱甘肽化衍生物含量得到测量值，或测量样品中谷胱甘肽化衍生物与单端孢霉烯族化合物的比值的步骤；
(2)将测量值或比值与参考值比较的步骤；
(3)根据比较结果评价样品解毒效果的步骤；
其中所述谷胱甘肽化衍生物为根据权利要求12所述的谷胱甘肽化衍生物；优选地，所述参考值为由对照样品得到的结果，或样品在未经处理之前谷胱甘肽化衍生物的含量，或谷胱甘肽化衍生物的含量与单端孢霉烯族化合物的比值。
16.一种用于测定多肽去环氧基催化活性的方法，其特征在于，包括使用所述多肽处理标准样品，并测量处理前后标准样品中谷胱甘肽化衍生物含量，或单端孢霉烯族化合物含量，或谷胱甘肽化衍生物的含量与单端孢霉烯族化合物比值的步骤；其中所述谷胱甘肽化衍生物为根据权利要求12所述的谷胱甘肽化衍生物，所述标准样品为单端孢霉烯族化合物的标准样品。
17.一种用于鉴定能够影响多肽去环氧基催化活性的化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.在适于反应的条件下使多肽与单端孢霉烯族化合物的标准样品接触得到反应体系，并测量谷胱甘肽化衍生物的第一生成速率的步骤；
b.将待测化合物施用至与步骤a相同的反应体系，并测量谷胱甘肽化衍生物的第二生成速率的步骤；
c.比较所述第一生成速率和所述第二生成速率的步骤，当所述第二生成速率小于所述第一生成速率时，将待测化合物鉴定为多肽活性抑制化合物，当所述第二生成速率大于所述第一生成速率时，将待测化合物鉴定为多肽活性促进化合物，当所述第二生成速率等于所述第一生成速率时，将待测化合物鉴定为对多肽活性无效的化合物。
18.根据权利要求1-5任一项所述的多肽在食品加工、饲料加工和制药中的用途。
19.根据权利要求6或7所述的核酸在植物育种和病害防治中的用途。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101983970A (zh) * 2010-01-28 2011-03-09 江苏省农业科学院 抗呕吐毒素DON单链抗体ScFv及其制备方法与应用
CN106879250A (zh) * 2014-05-06 2017-06-20 兽医研究所 单端孢霉烯脱毒的方法
CN107208077A (zh) * 2015-02-24 2017-09-26 爱尔伯股份公司 裂解镰孢毒素的多肽变体、包含所述多肽变体的添加剂和所述添加剂的用途，以及用于裂解镰孢毒素的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101983970A (zh) * 2010-01-28 2011-03-09 江苏省农业科学院 抗呕吐毒素DON单链抗体ScFv及其制备方法与应用
CN106879250A (zh) * 2014-05-06 2017-06-20 兽医研究所 单端孢霉烯脱毒的方法
CN107208077A (zh) * 2015-02-24 2017-09-26 爱尔伯股份公司 裂解镰孢毒素的多肽变体、包含所述多肽变体的添加剂和所述添加剂的用途，以及用于裂解镰孢毒素的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GUO JUN等: "High-density mapping of the major FHB resistance gene Fhb7 derived from Thinopyrum ponticum and its pyramiding with Fhb1 by marker-assisted selection", 《THEOR APPL GENET》 *
ZHANG XIULI等: "A genetic map of Lophopyrum ponticum chromosome 7E, harboring resistance genes to Fusarium head blight and leaf rust", 《THEORETICAL AND APPLIED GENETICS》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021174950A1 (zh) * 2020-03-05 2021-09-10 山东维赞生物科技有限公司 具有去环氧基催化活性的多肽及其编码核酸和用途

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