CN111455039A

CN111455039A - 一种检测α-地中海贫血的核酸组合物、其基因芯片、其试剂盒及其应用

Info

Publication number: CN111455039A
Application number: CN202010273998.8A
Authority: CN
Inventors: 谢俊; 葛毅媛; 韦薇; 谢龙旭; 蓝莹莹; 杨敏; 黄嘉慧
Original assignee: Beijing Kaipu Medical Laboratory Co ltd; CHAOZHOU HYBRIBIO BIOLOGICAL CHEMICAL CO LTD; Guangzhou Kaipu Pharmaceutical Technology Co ltd; Hybribio Ltd
Current assignee: Beijing Kaipu Medical Laboratory Co ltd; CHAOZHOU HYBRIBIO BIOLOGICAL CHEMICAL CO LTD; Guangzhou Kaipu Pharmaceutical Technology Co ltd; Hybribio Ltd
Priority date: 2020-04-09
Filing date: 2020-04-09
Publication date: 2020-07-28
Anticipated expiration: 2040-04-09
Also published as: CN111455039B

Abstract

本发明公开了一种检测α‑地中海贫血的核酸组合物、其基因芯片、其试剂盒及其应用，涉及生物技术领域，该核酸组合物其包括探针组合1、探针组合2和探针组合3，能同时检测10种α‑地中海贫血基因类型，缺失型α‑地中海贫血基因类型(‑‑^SEA、‑α^3.7、‑α^4.2、‑‑^THAI、‑‑^FIL)和非缺失型α‑地中海贫血基因类型(包括3种点突变型α‑地中海贫血基因类型(α^CSα、α^QSα、α^WSα)和三联体型α‑地中海贫血基因类型(ααα^anti3.7、ααα^anti4.2)，各探针的Tm值相近，能同时进行与样本的杂交反应，不会因为温度的问题而影响杂交的结果，检测的准确性好。

Description

一种检测α-地中海贫血的核酸组合物、其基因芯片、其试剂盒及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种检测α-地中海贫血的核酸组合物、其基因芯片、其试剂盒及其应用。

背景技术

地中海贫血(简称地贫)是由于人体基因突变或者缺失而导致α，β-珠蛋白肽链合成速率的不平衡，从而引起的溶血性贫血。地贫为全世界的高发病率遗传病之一，广泛分布于地中海国家及其他疟疾曾经高发地区。地贫常见的两种类型是α-地贫和β-地贫，但α-地贫的人群携带率远高于β-地贫。

α-地贫是由于常染色体遗传性缺陷，使α珠蛋白基因缺失或功能障碍，导致α珠蛋白肽链合成减少或不合成引起的慢性溶血病。α珠蛋白基因位于第16号染色体短臂末端的α珠蛋白基因簇中，该基因包括二个重复的α基因(α2和α1)、一个胚胎期类α基因(ζ2)、三个假基因(Ψζ1、Ψα2和Ψα1)和一个功能未知的基因(θ1)，全长约30Kb，其排列顺序为：

5′-ζ2-Ψζ1-Ψα2-Ψα1-α2-α1-θ1-3′。

就单倍体而言，地贫可分为三类缺陷：

地贫1，缺失两个基因(--/)；

地贫2，缺失一个基因(-α/)；

以及非缺失性α基因发生点突变或少数几个碱基的缺失(α^Tα或αα^T)。

目前已鉴定的α地贫缺失类型至少36种，东南亚缺失型(--^SEA)、右侧缺失(-α^3.7)和左侧缺失(-α^4.2)是中国人最常见的3种缺失型。非缺失型α地贫点突变类型有30多种，在中国人群中最常见的Constant Spring(CS)、Quong Sze(QS)和Westmead(WS)。然而，随着α-地贫机制的进一步阐明，一些新的α-地贫基因型相继被发现，如--^THAI(泰国型α-地贫)、--^FIL(菲律宾型α-地贫)、三联体型α-地贫(3.7三联体ααα^anti3.7、4.2三联体ααα^anti4.2)等。

--^THAI缺失片段比--^SEA缺失的片段还要长，缺失片段包括α1基因和α2基因，在临床上可以形成中重型α地中海贫血，即泰国型缺失的HbH病和泰国型缺失的巴氏水肿胎。而--^THAI的血液学特征与--^SEA一致，表现为小细胞低色素性贫血，MCV水平降低，MCH量降低等，但由于--^THAI属于少见型α-地贫，不在常规的筛查范围内常常易造成漏检或误检，继而导致泰国型HbH病或泰国型巴氏水肿胎儿的出生。--^FIL与--^THAI同样属于大片段缺失，其缺失的片段也包括α1基因和α2基因，在临床上可能会导致中重型地贫儿的出生。三联体形成是由于在减数分裂形成四分体时同源染色体发生错配和不等交换而导致的，α珠蛋白基因簇上两个高度同源的重复单元中包含的X、Y和Z同源盒。-α^3.7缺失型和3.7三联体ααα^anti3.7是由于同源染色体在Z片段发生错配和不等交换而致，-α^4.2缺失型和4.2三联体ααα^anti4.2是由于同源染色体在X片段发生错配和不等交换而致，三联体型α-地贫均包含三个α基因(包括α2α1的融合基因)，三联体型α-地贫不存在基因量的减少，所以不引起临床表型的改变，临床表型与正常人无明显差异，但当其复合β地贫时会加重地贫症状，可能会导致中重型地贫儿的出生。

地中海贫血症的临床表型多样，可以从正常到需要反复输血，甚至危及生命，导致患者在未成年前夭折甚至死胎。然而，目前该病尚缺乏理想的治疗方法，筛查是降低致病基因在人群中传递及降低患病率最有效的方法。研究和检测地中海贫血是一项很有意义的工作，它对开展地贫人群筛查，遗传咨询和产前诊断有重要的知道意义。对提高人口素质和促进整个社会的经济发展有重要的意义。

α-地贫传统的临床血液学检测方法，如常规参数检测分析、红细胞渗透脆性试验和血红蛋白稳定性试验等特异性不高，较易产生假阴性；而肽链分析、HPLC、ELISA等检测方法由于检测单一、操作繁琐等原因正被技术日益成熟的基因检测所替代。

传统基因诊断技术主要采用Southern印迹杂交方法，其灵敏度高、准确率高，但操作时间长、要求DNA量多、需要同位素等原因使其只用于研究，不能进行大规模筛查。而普通PCR电泳技术，其方法与传统的Southern分子杂交相比操作简易、快速、准确、经济且易推广，为α-地贫基因诊断提供了较为有效的方法，但特异性较低，无法检测出常见的CS、QS、WS点突变，而且易出现假阴性或假阳性。

鉴于此，提出本申请。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测α-地中海贫血的核酸组合物、其基因芯片、其试剂盒及其应用。

本发明提供一种技术方案：

第一方面，本发明实施例提供了一种检测α-地中海贫血的核酸组合物，其包括探针组合1、探针组合2和探针组合3；

所述探针组合1包括探针1～5，探针1～5的序列分别为如SEQ ID No.1～5所示；

所述探针组合2包括探针6～10，探针6～10的序列分别为如SEQ ID No.6～10所示；

所述探针组合3包括探11～12，探针11～12的序列分别如SEQ ID No.11～12所示。

第二方面，本发明实施例提供了一种检测α-地中海贫血的基因芯片，所述基因芯片包括固定载体和固定于所述固定载体上的如前述实施例的核酸组合物。

第三方面，本发明实施例提供了一种检测α-地中海贫血的试剂盒，其包括如前述实施例所述的检测α-地中海贫血的核酸组合物或如前述实施例所述的检测α-地中海贫血的基因芯片。

第四方面，本发明实施例提供了如前述实施例所述的检测α-地中海贫血的核酸组合物、如前述实施例所述的检测α-地中海贫血的基因芯片或如前述实施例所述的检测α-地中海贫血的试剂盒在检测α-地中海贫血相关基因中的应用。

有益效果是：

本发明实施例提供了一种检测α-地中海贫血的核酸组合物，其包括探针组合1、探针组合2和探针组合3，能够用于同时检测10种α-地中海贫血基因类型，5种缺失型α-地中海贫血基因类型(--^SEA、-α^3.7、-α^4.2、--^THAI、--^FIL)和5种非缺失型α-地中海贫血基因类型(包括3种点突变型α-地中海贫血基因类型(α^CSα、α^QSα、α^WSα)和2种三联体型α-地中海贫血基因类型(ααα^anti3.7、ααα^anti4.2)。且探针组合1～3中各探针的Tm值相近，能够同时进行探针与样本的杂交反应，不会因为温度的问题而影响杂交的结果，检测的准确性好。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明验证例1中的检测结构图；

图2为本发明验证例2中样本1～15的实验结果；

图3为本发明验证例2中样本16～30的实验结果；

图4为本发明验证例2中样本31～45的实验结果；

图5为本发明验证例2中样本46～60的实验结果；

图6为本发明验证例2中样本61～75的实验结果；

图7为本发明验证例2中样本76～90的实验结果；

图8为本发明验证例2中样本91～105的实验结果；

图9为本发明验证例2中样本106～120的实验结果。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例中的一种检测α-地中海贫血的核酸组合物、其扩增试剂、其试剂盒及其应用进行具体说明。

本发明实施例提供了一种检测α-地中海贫血的核酸组合物，其包括探针组合1、探针组合2和探针组合3；

所述探针组合1包括探针1～5，探针1～5的序列分别如SEQ ID No.1～5所示。

具体地，探针组合1用于检测突变型α-地中海贫血基因型，包括α^CSN、α^CSM、α^QSN、α^QSM以及α^WSM。CSN为CSM的正常对照，QSN为QSM的正常对照。“探针1～5”用于分别检测α^CSN、α^CSM、α^QSN、α^QSM以及α^WSM的基因型，序列分别为如SEQ ID No.1～5所示。

探针组合2用于检测缺失型α-地中海贫血基因型，具体包括--^SEA、-α^3.7、-α^4.2、--^FIL以及--^THAI，所述探针组合2包括探针6～10，探针6～10分别用于检测--^SEA、-α^3.7、-α^4.2、--^FIL以及--^THAI的基因型，探针6～10的序列分别为如SEQ ID No.6～10所示。

探针组合3用于检测三联体型α-地中海贫血基因型，具体包括ααα^anti3.7和ααα^anti4.2，所述探针组合3包括探11～12用于分别检测ααα^anti3.7、ααα^anti4.2，探针11～12的序列分别如SEQ ID No.11～12所示。

在可选实施方式中，探针组合1～3的探针的针5′或3′端均进行了氨基化处理。

探针组合1～3涵盖了10种α-地中海贫血基因类型，覆盖了99％以上常见的α基因突变位点，具有相近的Tm值，有利于在同一杂交温度下的同步性，不会因为温度的问题而影响杂交的结果，使检查的准确性显著增加。

在可选实施方式中，所述核酸组合物还包括：序列如SEQ ID No.13所示的缺失型α-地中海贫血基因所对应的正常对照探针，和/或序列如SEQ ID No.14所示的显色体系控制探针。

本发明实施例提供了一种检测α-地中海贫血的基因芯片，所述基因芯片包括固定载体和固定于所述固定载体上的如前述任一实施方式所述的核酸组合物。

在可选实施方式中，所述固定载体包括硝酸纤维素、醋酸纤维素、玻璃片、硅胶晶片、尼龙膜、聚丙烯膜和微缩磁珠中的任意一种。

本发明实施例提供了一种检测α-地中海贫血的试剂盒，其包括如前述任一实施方式所述的检测α-地中海贫血的核酸组合物或如前述任一实施方式所述的检测α-地中海贫血的基因芯片。

在可选实施方式中，所述试剂盒还包括引物对1～8，引物对1～8的序列分别如SEQID No.15～30所示。

在可选实施方式中，引物对1～8中，引物的5’端均标记有生物素。

本发明实施例还提供了如前述任一实施方式所述的检测α-地中海贫血的核酸组合物、如前述任一实施方式所述的检测α-地中海贫血的基因芯片或如前述任一实施方式所述的检测α-地中海贫血的试剂盒在检测α-地中海贫血相关基因中的应用。

在可选实施方式中，所述应用不以疾病的诊断或治疗为目的。

在可选实施方式中，所述应用包括采用所述试剂盒中的引物对1～8对待测样品进行PCR扩增后得到的扩增产物与所述核酸组合物或所述基因芯片进行杂交。

在可选实施方式中，所述杂交为导流杂交。

本发明实施例提供的核酸组合物、基因芯片或试剂盒的检测原理为：将探针结合于固相载体上用以和靶序列核酸因杂交而捕捉样品；样品(经引物对扩展后的样品)流经置放于导流杂交装置的固相载体，让靶序列能和探针杂交成结合体；检测与探针形成的复合物，阳性结果提示样品中含有待测靶核酸序列。具体可以采用导流杂交仪对扩增产物进行导流杂交(flow-through hybridization)，然后通过化学显色对结果进行判读来进行地贫的诊断。

实施例1

本实施例提供了一种检测α-地中海贫血的试剂盒，其包括：基因芯片、引物对1～8、基因芯片、PCR缓冲液、dNTPs、MgCl₂、Taq酶和灭菌注射水。

引物对的序列如表1所示，基因芯片包括尼龙膜和固定在尼龙膜上的探针1～12、缺失型α-地中海贫血基因所对应的正常对照探针和显色体系控制探针，探针的序列如表2所示，基因芯片包括用于定位探针的位置标记。

表1引物对序列

备注：引物的5’端均标记有生物素。

表2探针序列

备注：探针13为缺失型α-地中海贫血基因所对应的正常对照探针，探针14为显色体系控制探针。

基因芯片的制备。

(1)探针的点样和排列

在直接寡核苷酸DNA探针(表2中的探针)的固定中，先将DNA探针用探针稀释液(pH8.4的0.5MNa₂CO₃和0.5MNaHCO₃的溶液)混合，进行点样。完成DNA探针的合成之后，启动DNA点样装置，在芯片制作程序的控制下，进行DNA探针的打印。通过DNA打印针每次取一个DNA探针，通过三维定点传递装置将DNA探针传递到指定的点样位置。完成一次打印后，荷样打印针清洗、干燥，进行下一轮探针的点样，依次类推，直至所有DNA探针传递点样完毕。

各探针在基因芯片上的具体分布位置见表3，本发明的基因芯片总共16个格子，其中左下角的两个格子为空白，没有探针；其他位点每个格子对应一条探针。

表3基因芯片

Bio	NP	CSN	QSN
				α<sup>3.7</sup>	α<sup>4.2</sup>	CSM	QSM
SEA	FIL	THAI	WSM
				anti3.7	anti4.2	-	-

备注：NP为缺失型α-地中海贫血基因所对应的正常对照探针；Bio为显色体系控制探针。

(2)DNA探针的固定方法

对尼龙膜进行处理，首先放入0.1M HCl溶液中浸泡30秒钟，然后把已除去残余溶液的膜放入20％的EDAC溶液中浸泡15分钟，最后放在洗膜盘中用200mL的纯化水冲洗10秒钟，此步骤重复3次，再放到吸水纸上除去多余的残液。转入温度为20℃、湿度为45％的烘干箱内烘干12小时。将已烘干的尼龙膜用Kimwipes纸隔开，转入封口薄膜袋中，放进点膜间的冰箱中，贮藏在4℃的温度下，备用。

通过微量移液设备将上述制备好的探针分别点在上述的尼龙膜上，每滴0.4μL。点膜结束后，将膜放置于室温15分钟，进行反应。然后将膜转入0.1M NaOH溶液中浸泡10分钟，停止反应。将洗好的膜转入温度为20℃、湿度为45％的烘干箱内烘干12小时，即制得基因芯片。

实施例2

一种检测缺失型α-地中海贫血基因的检测方法，其包括采用实施例1提供的试剂盒对待测样品进行检测。

(1)PCR扩增

采用实施例1中的引物对对待测样品进行PCR扩增，PCR反应液44μL，DNA加样量6μL，总反应体积为50μL。PCR扩增的反应体系具体如表4和表5所示。

表4地贫多重PCR反应体系A

备注：Q-solution为基因扩增的辅助试剂。

表5地贫多重PCR反应体系B

试剂名称	加入体积(μL)/1反应
		10×PCR Buffer	5
5×Q-solution	10
		25mM MgCl<sub>2</sub>	3
25mM dNTPs	0.8
		100μM引物对7的上游引物	0.2
100μM引物对7的下游引物	0.2
		100μM引物对8的上游引物	0.2
100μM引物对8的下游引物	0.2
		100μM引物对5的上游引物	0.15
100μM引物对5的下游引物	0.15
		100μM引物对6的上游引物	0.15
100μM引物对6的下游引物	0.15
		灭菌注射水	23.3
Taq酶	0.5

备注：引物的5’端均标记有荧光素。

PCR扩增程序为：95℃热启动15min，98℃变性40sec、64℃退火70sec、72℃延伸150sec，共35个循环，最后一步72℃延伸5min。

本实施例在同一个条件下扩增α-地贫基因，减少了PCR仪的需求量，减少了操作步骤，降低了成本，能够同时检测缺失型α-地贫、突变型α-地贫和三联体型α-地贫。

利用基因芯片进行检测。

将获得的地贫扩增产物在95℃下变性5～10分钟，迅速转移到冰水混合物中，放置2分钟。然后加入到预先温浴到42℃的0.8mL杂交液(2×SSC/0.1％SDS)中，混合后加入杂交仪的反应孔中，应用于制得的基因芯片，42℃杂交30分钟，然后用溶液WB1(0.5×SSC/0.1％SDS，42℃温浴)清洗3～4遍。加入0.5mL封阻液(0.25％脱脂奶粉，0.05％硫柳汞)，25℃封闭5分钟。抽干后加入0.5mL的酶标液(TBS中溶解的带有链霉亲和素标记的AP酶)，酶标5分钟。用0.8mL溶液A(TBS，0.1％Tween20及0.05％叠氮钠)清洗4遍，然后加入0.5mL的显色液(NBT/BCIP)，避光显色5分钟。最后用溶液B冲洗3遍，晾干，分析显色情况，判读结果。

验证例1

用自提的人外周血样本DNA进行实验，选取的基因类型包含本申请试剂盒所有的位点。

实验方法

采用实施例1提供的试剂盒，按照实施例2提供的检测方法，进行检测。检测结果请参照附图1和表6。

表6判读结果

样本编号	已知型别	试验试剂检测结果	结论
				1	-α<sup>3.7</sup>/αα	-α<sup>3.7</sup>/αα	一致
2	-α<sup>4.2</sup>/αα	-α<sup>4.2</sup>/αα	一致
				3	--<sup>SEA</sup>/αα	--SEA/αα	一致
4	--<sup>FIL</sup>/αα	--<sup>FIL</sup>/αα	一致
				5	--<sup>THAI</sup>/αα	--<sup>THAI</sup>/αα	一致
6	α<sup>CS</sup>α/αα	α<sup>CS</sup>α/αα	一致
				7	α<sup>QS</sup>α/αα	αQSα/αα	一致
8	α<sup>WS</sup>α/αα	α<sup>WS</sup>α/αα	一致
				9	ααα<sup>anti3.7</sup>	ααα<sup>anti3.7</sup>	一致
10	ααα<sup>anti4.2</sup>	ααα<sup>anti4.2</sup>	一致

由附图1可知，观察整张膜条上出现的蓝紫色斑点：空白对照检测结果膜条只有Bio点有蓝紫色斑点出现；若在点突变或缺失检测探针处出现显色强度与相应的正常对照探针相近的蓝紫色斑点，则该位点为地贫点突变或缺失的杂合子；若在点突变或缺失检测探针处出现蓝紫色斑点，而相应的正常对照探针处未出现蓝紫色斑点，则该位点为地贫点突变或缺失的纯合子；若在三联体检测探针处出现蓝紫色斑点，则该位点为地贫三联体类型；若仅在正常对照探针处出现蓝紫色斑点，则待检样品没有上述α-地贫点突变、缺失或三联体。

验证例2

验证本申请提供的试剂盒的准确性和特异性。

采用实施例1提供的试剂盒，按照实施例2提供的检测方法，以120份临床样本DNA类型作为准确性、特异性参考品，DNA浓度均在20-40ng/μL，并与5组现有技术进行对照实验。

根据本申请实施例2的检测方法，在在博日基因扩增仪上PCR扩增，然后在凯普医用核酸分子杂交仪HB-2012A上进行杂交，对测试品进行检测，具体操作按照试剂盒使用说明书进行，其检测结果与金标准测序的结果进行对比，判断准确率和特异性。实验结果请参照附图2～9和表7。

需要说明的是，附图2中为样本1～15的实验结果，附图3为样本16～30的实验结果，附图4为样本31～45的实验结果，附图5为样本46～60的实验结果，附图6为样本61～75的实验结果，附图7为样本76～90的实验结果，附图8为样本91～105的实验结果，附图9为样本106～120的实验结果。

其中，附图2～9均包括15个基因芯片的测试结果，每个基因芯片包括有16个方格，每个方格代表的探针请参照表3，不再赘述。

表7实施例的检测结果

5组对照例的检测结果请参照表8。

表8对照例的检测结果

由检测结果可知，本发明试剂盒检测120例临床样本，其检测结果与金标准测序结果对比，准确率为100％；对非本发明试剂盒检测范围的β-地贫和非缺失型α-地贫基因型阳性(β-地贫：41-42M/N、654M/N和非缺失型α-地贫：II-55M/N)和阴性样本，本发明试剂盒检测结果均为阴性，阴性符合率为100％，特异性为100％。

验证例3

验证本申请实施例提供的试剂盒的检测灵敏度。

实验方法

样本设置：以10份杂合样本DNA类型作为灵敏度参考品，10份基因组(-α^3.7/αα、-α^4.2/αα、--^SEA/αα、--^THAI/αα、--^FIL/αα、ααα^anti3.7、ααα^anti4.2、α^CSα/αα、α^QSα/αα、α^WSα/αα)DNA浓度均设置为10±5ng/μL、80±5ng/μL。

检测方法：使用实施例1提供的试剂盒，按照实施例2提供的检测方法，在博日基因扩增仪上扩增，然后在凯普医用核酸分子杂交仪HB-2012A上进行杂交，对测试品进行检测，每份测试品测定20次，具体操作按照试剂盒使用说明书进行。

实验结果

试剂盒灵敏度实验结果见表9。

备注：以下“+”表示各阳性结果的深浅程度，“+++”表示深浅正常；“++”表示相对较浅。

表9灵敏度的实验结果

由表9可知，10种基因组检测位点(--^SEA、-α^3.7、-α^4.2、--^FIL、--^THAI、CS、QS、WS、ααα^anti3.7、ααα^anti4.2)杂合样本浓度为10±5ng/μL和80±5ng/μL时，杂交结果清晰，因此本试剂盒对样本的最低检出量定为10±5ng/μL。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 广东凯普生物科技股份有限公司

广州凯普医药科技有限公司

北京凯普医学检验实验室有限公司

潮州凯普生物化学有限公司

<120> 一种检测α-地中海贫血的核酸组合物、其基因芯片、其试剂盒及其应用

<160> 30

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

ccagcttaac ggtat 15

<210> 2

<211> 14

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

cagcttgacg gtat 14

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

gcacgcctcc ctggacaa 18

<210> 4

<211> 13

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

tgtccgggga ggc 13

<210> 5

<211> 13

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

gaggcctgca cca 13

<210> 6

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

cagcctcccg actagc 16

<210> 7

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

gaaaaaactc aggcaca 17

<210> 8

<211> 13

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

gcgaaactcc gcc 13

<210> 9

<211> 14

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

ccgactccgc taaa 14

<210> 10

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

aggtgcagat ccaagg 16

<210> 11

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

attcaacctc ctctgg 16

<210> 12

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

ctcctcacac ccacc 15

<210> 13

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

aggaggaacg gctac 15

<210> 14

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

tccaagggga aactgatct 19

<210> 15

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

cctcgccaag tccaccc 17

<210> 16

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

accaggaagg gccggtg 17

<210> 17

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

atctgggctc tgtgttctc 19

<210> 18

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

cccacgttgt gttcatggc 19

<210> 19

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

cctcgccaag tccaccc 17

<210> 20

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

agcactctag ggtccagcg 19

<210> 21

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

tttacccatg tggtgcctc 19

<210> 22

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

cgttggatct tctcatttcc c 21

<210> 23

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

aggctatggt gggcaaat 18

<210> 24

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

aacctttatc tgccacatgt agc 23

<210> 25

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

ccattcctca gcgtgggtg 19

<210> 26

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

gagtgcaaat tcccctgga 19

<210> 27

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

acctccattc tccaaccac 19

<210> 28

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

gggcccgttg ggagg 15

<210> 29

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

ttgcaccggc ccttcctg 18

<210> 30

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

actggctgaa agggatgca 19

Claims

1.一种检测α-地中海贫血的核酸组合物，其特征在于，其包括：探针组合1、探针组合2和探针组合3；

所述探针组合1包括探针1～5，探针1～5的序列分别如SEQ ID No.1～5所示；

2.根据权利要求1所述的检测α-地中海贫血的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物还包括：序列如SEQ ID No.13所示的缺失型α-地中海贫血基因所对应的正常对照探针，和/或序列如SEQ ID No.14所示的显色体系控制探针。

3.一种检测α-地中海贫血的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片包括固定载体和固定于所述固定载体上的如权利要求1或2所述的核酸组合物。

4.根据权利要求3所述的检测α-地中海贫血的基因芯片，其特征在于，所述固定载体包括硝酸纤维素、醋酸纤维素、玻璃片、硅胶晶片、尼龙膜、聚丙烯膜和微缩磁珠中的一种。

5.一种检测α-地中海贫血的试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求1或2所述的检测α-地中海贫血的核酸组合物或如权利要求3或4所述的检测α-地中海贫血的基因芯片。

6.根据权利要求5所述的检测α-地中海贫血的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括引物对1～8，引物对1～8的序列分别如SEQ ID No.15～30所示。

7.如权利要求1或2所述的检测α-地中海贫血的核酸组合物、如权利要求3或4所述的检测α-地中海贫血的基因芯片或如权利要求5或6所述的检测α-地中海贫血的试剂盒在检测α-地中海贫血相关基因中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，应用不以疾病的诊断或治疗为目的。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，应用包括：将所述试剂盒中的引物对1～8对待测样品进行PCR扩增后得到的扩增产物与所述核酸组合物或所述基因芯片进行杂交。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述杂交为导流杂交。