CN111434333B - 包含具有修饰的量的成分的绿茶提取物的用于皮肤美白或预防或改善皮肤皱纹的组合物 - Google Patents
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Abstract
公开了提供一种用于皮肤美白或预防或改善皮肤皱纹的组合物，其包含具有修饰的量的成分的绿茶提取物。更具体地，根据本公开的一方面的提取物和组合物衍生自对皮肤造成较少刺激并且是生态友好的天然植物，因此它们是安全的，并因此所述提取物和组合物可以表现出有效抑制黑色素产生和酪氨酸酶活性并防止或改善皮肤美白的优异效果，并且可以显示出有效抑制MMP‑1表达并防止或改善皮肤皱纹的优异效果。
Description
背景技术
1.领域
本公开涉及用于皮肤美白(whitening)或预防或改善皮肤皱纹的组合物，其包含绿茶提取物，所述绿茶提取物具有修饰的量的成分。
2.相关领域的描述
皮肤老化现象的原因可大体分为两类：内部因素例如细胞的基因变异、结构变化等，以及外部因素例如紫外线、湿度等(Masamitsu Ichihashi,Fragrance Journal,Vol.32,No.5,24-30)。在由这些内部和外部因素损坏的皮肤中，发生例如皮肤再生减少、细胞周围环境改变以及细胞间网络减弱的现象，这导致皮肤结构的分散，并从而发生例如皮肤弹性丧失、角质化、皱纹生成、皮肤通透性降低和皮肤萎缩等现象。
老化的皮肤的最大变化是由更年轻的皮肤中活跃的生长因子的减少引起的。由于生长因子在皮肤的再生过程中充当第一个开关，因此皮肤中生长因子的减少导致皮肤中多种功能的恶化，导致皮肤组分的损失和皮肤结构的分解。
另外，由于紫外线引起的老化现象被称为光老化，并且已知该光老化现象通过紫外线在细胞内生成反应性氧自由基(ROS)，并且活性氧促进蛋白水解酶类(MMP-1、MMP-3和MMP-9等)的合成，所述蛋白水解酶类通过引起炎症反应的信号传导系统降解蛋白，例如胶原蛋白和弹性蛋白，所述胶原蛋白和弹性蛋白是真皮层的弹性纤维(Fisher GJ et al.,Nature,Vol.379,335-339)，从而降低了真皮层的弹性，其引起皮肤皱纹。因此，为了防止这种皮肤老化现象并保持更健康和更有弹性的皮肤，已经稳定地进行了研究活动以开发具有抗皱纹作用的生物活性物质。例如，在1995年，美国FDA批准维甲酸(反式维甲酸)为改善光老化皮肤的药物，并且在1990年代后期作为视黄醇(具有低副作用)开始被用于化妆品原材料中，皱纹改善化妆品已经开始发布。从那时起，衍生自多种植物的女性类激素(hormone-like)物质和抗氧化剂已作为改善皱纹的原材料被引入化妆品中。因此，消费者对与皮肤老化有关的化妆品的兴趣和需求迅速增加，但是合成型功能性化妆品的副作用不断发生，并因此已经开始积极地进行使用有效且无毒的天然产品的化妆品开发的研究。
另一方面，当暴露于紫外线时，皮肤具有物理和化学防御因素，并且具有使由多种光化学反应引起的皮肤疾病最小化的作用机制。皮肤的角质层通过反射和漫射紫外线来减少能量，而黑色素、超氧化物歧化酶(SOD)和其他抗氧化剂则通过吸收渗透到皮肤中的紫外线并减少其能量或通过消除紫外线二次生成的活性氧来防止皮肤疾病。然而，当活体接受超过上述防御因素的大量紫外线或其能力随着身体老化而降低时，会发生多种皮肤疾病。
黑色素在皮肤中的分布和量占皮肤颜色决定因素的最大比例。黑色素在细胞核周围形成帽状结构以保护基因免受紫外线中发挥着重要作用，并在通过消除自由基来保护细胞中的蛋白质中发挥着重要作用。降解这种黑色素的酶类在体内不存在，并且黑色素随着角质细胞老化并充分发挥功能并从表皮上脱落而从皮肤上一起去除。但是，当黑色素的产生超过必需时，其导致色素沉着过多，例如瑕疵、雀斑和斑点，这可能会导致美容上的不良结果。
已知几种影响黑色素产生的因素，并且由紫外线引起的黑色素产生的增加和由此导致的色素沉着在化妆品领域中非常重要。为了防止色素沉着的目的而混入美白化妆品中的药物的基本机制包括：抑制酪氨酸酶的作用、抑制酪氨酸酶的产生、抑制产生黑色素的中间体、抑制黑色素的还原和抑制光氧化、促进黑色素的排出和断绝(cutting)紫外线等。
对于预防和改善皮肤色素异常和色素沉着过多的需求正在增加，并且有必要开发抑制黑色素过多产生的美白产品。其具体实例包括抑制剂，例如曲酸、抑制酪氨酸酶活性的熊果苷、对苯二酚、维生素A、维生素C及其衍生物等。然而，由于诸如美白效果不足、制剂中的稳定性不足和对皮肤的安全性不足的问题已经限制了它们的使用。因此，正在积极地进行对皮肤美白高度有效、易于配制并且对皮肤安全的衍生自天然产物的原材料的研究。
发明内容
本公开的目的是提供衍生自天然植物的组合物，其是无毒的并且对于预防或改善皮肤皱纹有效，以及提供制备其的方法。
另外，本公开的目的是提供衍生自天然植物的组合物，所述组合物是无毒的并且对皮肤美白有效，以及提供制备其的方法。
为了实现上述目的，一方面，本公开提供了一种用于预防或改善皮肤皱纹的组合物，其包含作为有效成分的绿茶提取物，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(gallocatechin gallate)(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(epigallocatechin gallate)(EGCG)。
在另一方面，本公开提供了一种用于皮肤美白的组合物，其包含作为有效成分的绿茶提取物，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在一个另一方面，本公开提供了一种绿茶提取物用于制备用于预防或改善皮肤皱纹的组合物的用途，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在一个另一方面，本公开提供了一种绿茶提取物用于制备用于皮肤美白的组合物的用途，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在一个另一方面，本公开提供了一种绿茶提取物，其用于预防或改善皮肤皱纹，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在一个另一方面，本公开提供了一种绿茶提取物，其用于皮肤美白，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在一个另一方面，本公开提供了一种预防或改善皮肤皱纹的方法，该方法包括向有需要的对象施用绿茶提取物，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在一个另一方面，本公开提供了一种皮肤美白的方法，该方法包括向有需要的对象施用绿茶提取物，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
附图说明
图1显示了实施例1的指定的(notified)绿茶提取物(样品1)的色谱图。
图2显示了根据本公开的一个方面的经高温加工的绿茶提取物(样品2)的色谱图。
图3显示了根据测试实施例2的经高温加工的绿茶提取物的细胞的细胞毒性的测试结果。
图4显示了根据测试实施例3的经高温加工的绿茶提取物对抑制黑色素细胞产生的效果的评价结果。
图5显示了根据测试实施例4的经高温加工的绿茶提取物对抑制酪氨酸酶活性的效果的评价结果。
具体实施方式
在本说明书中，“绿茶提取物”包括衍生自茶的提取物或衍生自茶叶的提取物，所述茶是属于茶(Camellia sinensis)的常绿植物，所述茶叶接种有枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)种并发酵，并且包括通过使用某种溶剂分馏(fractionating)所述提取物而获得的馏分(fraction)，而不管提取方法、提取溶剂、提取成分或提取物的形式。所述茶包括选自以下的一种或多种：茶植物的叶、花、茎、果实、根、枝和根的心材，并且可以优选为叶。另外，提取物的形式可以优选为粉末形式。提取或分馏(fraction)可以使用水、有机溶剂或其混合溶剂进行。作为有机溶剂，可以使用醇、异丙醇、丙酮、己烷、乙酸乙酯、二氧化碳或其两种或更多种的混合溶剂，但不限于此，并且可以在室温进行所述提取或分馏，或者在不破坏或最小化绿茶有效成分的条件下通过升高温度进行所述提取或分馏。该醇可以是C1至C5的低级醇。所述提取或分馏的频率或方法没有特别限制，并且例如，可以使用诸如冷提取、超声提取、回流冷却提取、热水提取等方法。优选地，本公开的绿茶提取物可以通过以下获得：通过冷却或加热来提取或分馏并过滤有效成分，然后将滤液减压并浓缩。
在本说明书中，“表儿茶素”包括表没食子儿茶素(epigallocatechin)(EGC)、(-)表儿茶素(epicatechin)(EC)、(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)和表儿茶素3-O-没食子酸盐/酯(epicatechin 3-O-gallate)(ECG)。
在本说明书中，“表儿茶素差向异构体”包括没食子儿茶素(gallocatechin)(GC)、儿茶素(catechin)(C)、(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和儿茶素没食子酸盐/酯(catechin gallate)(CG)。
在一个方面，本公开可涉及一种用于预防或改善皮肤皱纹的组合物，其包含作为有效成分的绿茶提取物，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在另一方面，本公开可涉及一种用于皮肤美白的组合物，其包含作为有效成分的绿茶提取物，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在另一方面，本公开可涉及一种绿茶提取物用于制备用于预防或改善皮肤皱纹的组合物的用途，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在另一方面，本公开可涉及一种绿茶提取物用于制备皮肤美白的组合物的用途，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在另一方面，本公开可涉及一种绿茶提取物，其用于预防或改善皮肤皱纹，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在另一方面，本公开可涉及一种绿茶提取物，其用于皮肤美白，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在另一方面，本公开可涉及一种预防或改善皮肤皱纹的方法，该方法包括向有需要的对象施用绿茶提取物，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
在另一方面，本公开可涉及一种皮肤美白的方法，该方法包括向有需要的对象施用绿茶提取物，所述绿茶提取物基于提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)。
一方面，可以基于提取物的总重量包含以下量的GCG：4重量％或更多、5重量％或更多、5.3重量％或更多、5.59重量％或更多、5.7重量％或更多、6重量％或更多、7重量％或更多、8重量％或更多、9重量％或更多、10重量％或更多、11重量％或更多、12重量％或更多、13重量％或更多、或14重量％或更多。在另一方面，可以基于提取物的总重量包含以下量的GCG：15重量％或更少、14重量％或更少、13重量％或更少、12重量％或更少、11重量％或更少、10重量％或更少、9重量％或更少、8重量％或更少、7重量％或更少、6重量％或更少、5.7重量％或更少、5.59重量％或更少、5.3重量％或更少、或5重量％或更少。如果包含所述量范围内的GCG，则该组合物可表现出优异的MMP-1抑制活性、黑色素产生抑制活性或酪氨酸酶活性抑制效果。
一方面，可以基于提取物的总重量包含以下量的EGCG：4重量％或更多、5重量％或更多、5.2重量％或更多、5.27重量％或更多、5.5重量％或更多、6重量％或更多、7重量％或更多、8重量％或更多、9重量％或更多、10重量％或更多、11重量％或更多、12重量％或更多、13重量％或更多、或14重量％或更多。在另一方面，可以基于提取物的总重量包含以下量的EGCG：15重量％或更少、14重量％或更少、13重量％或更少、12重量％或更少、11重量％或更少、10重量％或更少、9重量％或更少、8重量％或更少、7重量％或更少、6重量％或更少、5.5重量％或更少、5.27重量％或更少、5.2重量％或更少、或5重量％或更少。
作为另一个实施方案，基于提取物的总重量，提取物中GCG和EGCG的总量可以为30重量％或更少。一方面，基于提取物的总重量，提取物中GCG和EGCG的总量可以为30重量％或更少、25重量％或更少、20重量％或更少、18重量％或更少、16重量％或更少、15重量％或更少、14重量％或更少、12重量％或更少、10.5重量％或更少、10重量％或更少、或9重量％或更少。在另一方面，基于提取物的总重量，提取物中GCG和EGCG的总量可以为8重量％或更多、9重量％或更多、10重量％或更多、10.5重量％或更多、12重量％或更多、13重量％或更多、14重量％或更多、16重量％或更多、18重量％或更多、20重量％或更多、或25重量％或更多。
作为另一个实施方案，基于提取物的总重量，提取物中表儿茶素的量可以为20重量％或更少。一方面，基于提取物的总重量，提取物中表儿茶素的量可以为20重量％或更少、18重量％或更少、16重量％或更少、15重量％或更少、14重量％或更少、12重量％或更少、11重量％或更少、或10重量％或更少。在另一方面，基于提取物的总重量，提取物中表儿茶素的量可以为9重量％或更多、10重量％或更多、11重量％或更多、12重量％或更多、13重量％或更多、14重量％或更多、16重量％或更多、或18重量％或更多。
作为另一个实施方案中，基于提取物的总重量，提取物中8种儿茶素的总量，即提取物中EGCG、(-)-表没食子儿茶素(EGC)、(-)表儿茶素(EC)、表儿茶素3-O-没食子酸盐/酯(ECG)、GCG、没食子儿茶素(GC)、儿茶素(C)和儿茶素没食子酸盐/酯(CG)的总量可以为19至30重量％。一方面，基于提取物的总重量，8种儿茶素的总量可以为19重量％或更多、21重量％或更多、23重量％或更多、24重量％或更多、24.5重量％或更多、25重量％或更多、26重量％或更多、27重量％或更多、28重量％或更多、或29重量％或更多。在另一方面，基于提取物的总重量，8种儿茶素的总量可以为30重量％或更少、29重量％或更少、28重量％或更少、27重量％或更少、26重量％或更少、25重量％或更少、24.5重量％或更少、24重量％或更少、23重量％或更少、或21重量％或更少。
作为另一个实施方案，提取物中GCG:EGCG的重量比可以是1:0.5至2。在一方面，提取物中GCG:EGCG的重量比可以是1:0.5、1:0.8、1:1、1:1.2、1:1.5、1:1.8或1:2。
作为一个另一实施方案，所述提取物可以是通过使用水和C1-C4醇的一种或多种提取一次或多次而获得的提取物。一方面，该醇可以是乙醇。在另一方面，该醇可以是20％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、60％或更多、或70％或更多的乙醇。在另一方面，该醇可以是70％或更少、60％或更少、50％或更少、40％或更少或30％或更少的乙醇。
作为另一个实施方案，在用于预防或改善皮肤皱纹的组合物中绿茶提取物的量相对于所述组合物的总重量可以为1重量％至100重量％。一方面，所述组合物中提取物的量可以为1重量％或更多、10重量％或更多、20重量％或更多、30重量％或更多、40重量％或更多、50重量％或更多、60重量％或更多、70重量％或更多、80重量％或更多、或90重量％或更多。在另一方面，所述组合物中提取物的量可以为100重量％或更少、90重量％或更少、80重量％或更少、70重量％或更少、60重量％或更少、50重量％或更少、40重量％或更少、30重量％或更少、或20重量％或更少。
作为另一个实施方案，有效成分的剂量可以是5mg/kg/天至1000mg/kg/天。一方面，剂量可以是5mg/kg/天或更多、100mg/kg/天或更多、200mg/kg/天或更多、300mg/kg/天或更多、400mg/kg/天或更多、500mg/kg/天或更多、600mg/kg/天或更多、700mg/kg/天或更多、800mg/kg/天或更多、或900mg/kg/天或更多。在另一方面，所述剂量可以是1000mg/kg/天或更少、900mg/kg/天或更少、800mg/kg/天或更少、700mg/kg/天或更少、600mg/kg/天或更少、500mg/kg/天或更少、400mg/kg/天或更少、300mg/kg/天或更少、200mg/kg/天或更少、100mg/kg/天或更少、50mg/kg/天或更少、或10mg/kg/天或更少。
作为一个实施方案，提取物可以抑制MMP-1(基质金属蛋白酶-1)的表达。换句话说，该提取物或组合物可通过抑制MMP-1的表达而表现出预防或改善皮肤皱纹的作用。
作为另一个实施方案，所述提取物可以抑制黑色素的产生，并且作为一个另一实施方案，所述提取物可以抑制酪氨酸酶的活性。换句话说，所述提取物或组合物可通过抑制黑色素的产生或抑制酪氨酸酶的活性而表现出皮肤美白的作用。
作为一个实施方案，所述组合物可以是食品、药物或化妆品组合物。
食品组合物的制剂没有特别限制，但是可以将食品组合物配制成例如片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、溶液如饮料、焦糖、凝胶、条、茶袋等。在各制剂的食品组合物中，除了有效成分外，根据制剂或使用目的，以及何时将该组合物与其他原材料一起应用将产生协同作用，本领域技术人员可以轻而易举地适当地选择通常用于相关领域的成分并进行混合。另外，所述食物可以是健康功能性食物。
可以通过多种方法，例如简单的摄取、饮用、注射施用、喷雾施用或挤压施用来施用所述组合物。
在根据本公开的一方面的食品组合物中，有效成分剂量的确定是在本领域技术人员的水平进行的，并且可以根据多种因素而变化，例如待施用所述组合物的对象的年龄、健康状况、并发症等。
根据本公开的一方面的食品组合物可以是健康功能性食物，例如口香糖、焦糖、糖果、冰淇淋、点心、面包等，以及饮料产品，例如软饮料、矿泉水、酒精饮料等，和功能性食品，包括维生素或矿物质等。
除上述之外，根据本公开的一方面的食品组合物可以包括若干营养补充物、维生素、矿物质(电解质)、调味剂例如合成调味剂和天然调味剂、着色剂和强化剂(enhancer)(奶酪，巧克力等)、果胶酸类及其盐、海藻酸类及其盐、有机酸类、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、丙三醇、醇、用于碳酸饮料的碳酸化剂等。另外，根据本公开的一方面的食品组合物可以包括用于制备果汁饮品和蔬菜饮品的天然果汁和果肉。这些成分可以单独使用或组合使用。此类添加剂的比例并不重要，但是根据本公开的一个方面，每100重量份的组合物，通常包含的添加剂的量为0至约60重量份。
根据本公开的一方面的药物组合物可以口服地、肠胃外地、直肠地、表面地(topically)、透皮地、静脉内地、肌内地、腹膜内地、皮下地等施用。用于口服施用的制剂可以是片剂、丸剂、软胶囊和硬胶囊、颗粒剂、粉剂、细颗粒剂、溶液、乳化剂或小丸剂(pellet)，但不限于此。用于肠胃外施用的制剂可以是溶液、悬浮剂、液体剂、凝胶剂、注射剂、滴剂、栓剂、贴剂或喷雾剂，但不限于于此。所述制剂可以根据相关领域中的典型方法容易地制备，并且可以进一步包含表面活性剂、赋形剂、可湿性粉剂、乳化剂、悬浮剂、用于渗透压控制的盐或缓冲剂、着色剂、香料、稳定剂、抗微生物剂、防腐剂、或其他商业助剂。
根据本公开一方面的组合物可以包含药学上可接受的盐，其中所述盐可以包括(1)由无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成盐；或由有机酸例如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸(2-naphthalenesulfonic acid)、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2,2,2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟萘甲酸(hydroxynaphthoic acid)、水杨酸、硬脂酸和粘康酸形成的酸加成盐；或(2)取代存在于母体化合物中的酸性质子时形成的盐。
根据本公开的一个方面使用的药物组合物的量或剂量可以根据待施用所述组合物的对象的年龄、性别和体重、病理学及其严重程度、给药途径和处方者的决定而变化。基于此类因素的剂量确定是在本领域技术人员的水平进行的。
根据本公开一方面的化妆品组合物可以包含化妆品上或皮肤病学上可接受的介质或基质。这可以在所有适合用于表面应用的制剂中提供，例如溶液、凝胶、固体、糊状无水产品、通过将油相分散到水相中而获得的乳液、悬浮液、微乳液、微胶囊、细颗粒或离子性(脂质体)和非离子性囊状分散剂、或乳霜、皮肤、润肤液(lotion)、粉剂、软膏、喷雾剂或遮瑕棒。这些组合物可以根据相关领域中的典型方法来制备。化妆品组合物也可以以气溶胶组合物的形式使用，所述气溶胶组合物进一步包含以泡沫形式压缩的推进剂。
化妆品组合物的制剂没有特别限制，并且可以根据目的适当选择。例如，化妆品组合物可以以以下制剂制备：例如皮肤润肤液、皮肤柔肤水(softener)、皮肤爽肤水(toner)、润肤液、润肤乳液、滋润润肤液、滋养润肤液、按摩霜、滋养霜、滋润霜、护手霜、粉底、精华、滋养精华、面膜(pack)、肥皂、清洁泡沫、清洁润肤液、清洁霜、清洁水、粉末、身体润肤液、身体霜、身体油、身体清洁剂和身体精华等。
在本公开的制剂是糊剂、霜或凝胶的情况下，可以使用动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶(tragacanth)、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石或氧化锌等作为载剂成分。
在本公开的制剂是粉剂或喷雾剂的情况下，可以使用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末作为载剂成分，特别是在喷雾剂的情况下，该组合物可以进一步包含推进剂，例如氯氟烃(chlorofluorohydrocarbon)、丙烷/丁烷或二甲醚。
在本公开的制剂是溶液或乳液的情况下，使用溶剂、溶剂化剂或乳化剂作为载剂成分，并且其实例包括水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄基醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁基乙二醇油、甘油脂肪酸、聚乙二醇或山梨聚糖的脂肪酸酯。
在本公开的制剂是悬浮液、液体稀释剂例如水、乙醇或丙二醇的情况下，可以使用悬浮剂例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯山梨聚糖酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(Aluminum metahydroxide)、膨润土、琼脂-琼脂或黄蓍胶等作为载剂成分。
在本公开的制剂是含表面活性剂的清洁剂的情况下，可以使用脂肪族醇硫酸盐/酯、脂肪族醇醚硫酸盐/酯、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐/酯、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸(methyltauride)、肌氨酸盐/酯、脂肪酸酰胺醚硫酸盐/酯、烷基酰胺基甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺(fatty acid diethanolamide)、植物油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等作为载剂成分。
除了绿茶提取物之外，化妆品组合物可进一步包含一般化妆品组合物中包含的功能性添加剂和成分。功能性添加剂的实例可包括选自以下的成分：水溶性维生素、油溶性维生素、多肽、多糖、鞘脂和植物提取物。
另外，在该组合物中，可以根据需要适当地混合一般化妆品组合物中包含的上述功能性添加剂以外的成分。待混合的另外包含的成分的实例包括脂肪、保湿剂、润肤剂、表面活性剂、有机和无机染料、有机粉末、紫外线吸收剂、抗微生物剂、消毒剂、抗氧化剂、植物提取物、pH调节剂、醇、着色剂、调味剂、血液循环促进剂、冷却剂(cooling agent)、止汗剂、纯净水等。
[实施例]
在下文中，将参考实施例、测试实施例和制剂实施例更详细地解释本说明书的构成和效果。然而，提供这些实施例仅出于说明的目的，以帮助理解本说明书，并且本说明书的范围(scope)和范围(range)不受此限制。
[实施例1]制备通常指定的绿茶提取物和经高温加工的绿茶提取物
将1000ml的50％乙醇添加到100g的绿茶(Camellia sinensis；济州的O'sulloc)中，然后回流并在60℃搅拌1小时。将通过将样品的温度降低至室温并过滤而获得的溶液减压并蒸馏，以获得20g的通常指定的绿茶提取物的深褐色粉末(GT-LE-35CAT，样品1)(产率23％)。
另一方面，为了制备经高温加工的绿茶提取物，将1000ml的50％乙醇添加至100g的绿茶(Camellia sinensis；济州的O'sulloc)中，然后回流并在60℃搅拌1小时。将其浓缩，然后以1.5kgf/cm2的蒸汽搅拌1-7小时。此后，通过将温度降低至室温、过滤不溶物质、并将其减压并浓缩，从而获得10g经高温加工的绿茶提取物。在此，使用下表1所示的装置测量在各搅拌时间(1-7小时)得到的经高温加工的绿茶提取物中8种儿茶素的量的变化，并确认了在5小时时，通过加热从EGCG向GCG的转化最大，并且8种儿茶素的量不再减少。将所得的10g经高温加工的绿茶提取物(HTP-GTE)用作样品2。
从中获得的两类提取物的分析条件和结果分别示于下表1(样品1和2的组成分析条件)、表2(样品1的组成分析结果)和表3(样品1的组成分析结果)。另外，两类提取物的色谱图如图1(样品1)和图2(样品2)所示。由上可知，已证实了样品2的组成与典型的绿茶提取物的组成不同。具体地，已证实了虽然样品2包含的EGCG(5.27重量％)、EGC(3.53重量％)和总儿茶素(24.41重量％)的量与样品1的相比显著更低，但样品2额外产生了4种样品1中未发现的表儿茶素差向异构体。
表1
表2
表3
(在表2和表3中，GC是没食子儿茶素，EGC是表没食子儿茶素，C是儿茶素，EC是(-)表儿茶素，GCG是没食子儿茶素没食子酸盐/酯，EGCG是表没食子儿茶素没食子酸盐/酯，CG是儿茶素没食子酸盐/酯，以及ECG是表儿茶素3-O-没食子酸盐/酯)
(表2和3的单位均为相对于绿茶提取物(样品1和2)的总重量的相应成分的重量％。)
[测试实施例1]MMP-1(基质金属蛋白酶-1)抑制活性的评价测试
评价了MMP-1抑制活性以证实实施例1的样品1和2的绿茶提取物在抑制MMP-1(其为人类老化皮肤的人类皮肤成纤维细胞中的皮肤组织分解酶)的产生中的作用以及根据EGCG和GCG的重量比以及GCG的量在抑制MMP-1的产生中的作用。具体而言，通过以下步骤进行评价。
1-1.培养细胞系和细胞
在包含10％胎牛血清的DMEM培养基(Dulbecco's modified Eagle's Medium，Gibco 1210-0038)中培养正常的人类真皮成纤维细胞(NHDF；Lonza，瑞士)，并且所有培养均在37℃、5％CO2的培养基中进行。将具有6-9次传代频率的细胞用作年轻细胞，并通过以下方式传代37次获得老化的真皮成纤维细胞：每次传代计算细胞数，然后将细胞总数的1/5新培养。根据EGCG:GCG的比和GCG的浓度，将老化的真皮成纤维细胞用EGCG和GCG处理，或者用样品1或样品2处理。
1-2.测量产生的MMP-1的量
为了证实产生的MMP-1的量，使用了酶联免疫吸附测定(ELISA)方法(Amersham，美国)。收集在步骤1-1中用样品处理的细胞的培养基，并以1000xg离心分离上清液，然后将培养基放入包被有MMP-1抗体的96孔板中，然后将二抗(马红色过氧化物酶，HRP)在室温反应1小时，并用100μL PBS洗涤。通过测量反应后在490nm波长处的吸光度并使用TMB底物溶液(Pierce，美国)确认其颜色形成程度来确认产生的MMP-1的量，并使用以下等式计算MMP-1抑制活性(％)。
MMP-1抑制活性(％)＝(用样品处理的组在490nm的O.D./未用样品处理的组在490nm的O.D.)x 100
结果示于下表4和5。
表4
表5
从表4的结果证实了与典型的绿茶提取物(样品1)相比，经高温加工的绿茶提取物(样品2)具有优异的MMP-1抑制活性，所述经高温处理的绿茶提取物包含5.59重量％的量的GCG，5.27重量％的量的EGCG，11.05重量％的量的表儿茶素，13.36重量％的量的表儿茶素差向异构体，以及24.41重量％的总量的8种儿茶素。特别地，证实了在将老化的成纤维细胞在室温放置24小时然后进行加工的情况下，根据本公开的经高温加工的绿茶提取物的MMP-1抑制活性显着更优异，尽管这8种儿茶素的总量低于典型的绿茶提取物。
另外，从表5的结果证实了，与仅用EGCG处理、仅用GCG处理、或EGCG：GCG的重量比为4:1的情况相比，在EGCG:GCG的重量比为2:1、1.5:1、1:1或1:1.5的情况下显示出优异的MMP-1抑制活性。特别地，在EGCG:GCG的重量比为1.5:1、1:1或1:1.5的情况下，其表现出更优异的MMP-1抑制活性。
结果确认了根据本公开的包含4至15重量％的GCG和4至15重量％的EGCG的经高温加工的绿茶提取物可以通过优异的MMP-1抑制活性有效地预防或改善皮肤皱纹，并且此外，确认了当组合物包含根据本公开的一定重量比的GCG和EGCG时，通过MMP-1抑制活性预防或改善皮肤皱纹的效果将更加提高。
[测试实施例2]经高温加工的绿茶提取物的细胞毒性测试
将从Lonza获得的黑素细胞细胞系(皮肤细胞瘤)以每孔1X105接种到96孔板(FALCON)中，并在37℃、5％CO2的培养箱中培养24小时，然后用实施例1的经高温加工的绿茶提取物(样品2)以10ppm和100ppm的量处理，然后进一步培养48小时。
之后，除去培养基，并使用细胞计数试剂盒-8(Dojindo)证实细胞的存活率。将10μl细胞计数试剂盒-8(Dojindo)溶液添加到100μl RPMI1640(Lonza)中以加工细胞，然后在450nm处确认吸光度，然后定量活细胞的数量。通过以下等式计算细胞数或细胞活力(％)。
细胞活力(％)＝(用样品处理的组的吸光度-仅反应试剂的吸光度)/(未用样品处理的组的吸光度-仅反应试剂的吸光度)×100
结果如图3所示，并证实了10ppm和100ppm的经高温处理的绿茶提取物(样品2)均没有表现出细胞毒性。
[测试实施例3]经高温加工的绿茶提取物抑制黑色素产生的评价
MNT-1细胞是过量产生黑色素(melamine)的人黑素瘤细胞系(Lonza，SWISS)，其以1x106细胞/孔接种在6孔板中，在37℃、5％CO2条件下培养24小时，然后用实施例1的样品1和样品2以10ppm和100ppm的量处理，并在37℃、5％CO 2的培养箱中培养48小时。用500μl裂解缓冲剂(1％NP-40，50mM Tris-HCL；pH 7.5，150mM NaCl)处理培养48小时的细胞，使用细胞刮刀收集在微管中，然后以13,000rpm离心15分钟(Eppendorf，离心机5415R，德国)。之后，使用50μl的1N氢氧化钠分离并溶解沉淀物，然后测量黑色素特有的在450nm波长处的吸光度，并根据以下等式用蛋白质的总量校正黑色素的量。在此，使用未经样品处理的MNT-1细胞作为对照，并且其结果示于图4。
黑色素的量(％)＝吸光度/蛋白质的总量
根据图4的结果，证实了与典型的绿茶提取物(样品1)相比，经高温加工的绿茶提取物(样品2)在抑制黑色素产生方面非常优异。
特别地，在用100ppm的经高温加工的绿茶提取物处理的情况下，抑制黑色素产生的效果显著的高。另外，在用10ppm的经高温加工的绿茶提取物处理的情况下，抑制黑色素产生的效果与用100ppm的典型绿茶提取物处理的情况相似。从该结果证实了，根据本公开的经高温加工的绿茶提取物在抑制黑色素产生方面的效果比典型绿茶提取物优异10倍。
[测试实施例4]经高温加工的绿茶提取物抑制酪氨酸酶活性的评价
根据测试实施例2，将10mM的DOPA(二羟基苯丙氨酸)(当量10μg)添加至10μg的细胞溶解物中，并且通过比较在490nm处的吸光度来测量由酪氨酸酶的作用产生的多巴色素的量。酪氨酸酶活性被计算为与未用样品处理的组的吸光度之比，并然后示于图5。
根据图5的结果，证实了与典型的绿茶提取物相比，根据本公开的经高温加工的绿茶提取物具有非常优异的抑制酪氨酸酶活性的效果。
[制剂实施例1]软胶囊
制备150mg的根据实施例1的样品2，并将其与440mg乳糖、430mg玉米淀粉和2mg硬脂酸镁混合以制备软胶囊填充溶液。之后，与上述分开地，以66重量份的明胶、24重量份的甘油和10重量份的山梨糖醇溶液的比制备软胶囊壳，并用填充溶液填充以制备软胶囊。
[制剂实施例2]片剂
制备150mg的根据实施例1的样品2，将其与15mg维生素E、15mg维生素C、250mg低聚半乳糖、60mg乳糖(milk sugar)和140mg麦芽糖混合，然后用流化床干燥器制粒，然后加入8mg糖酯。通过一般方法将该组合物压片来制备片剂。
[制剂实施例3]饮品
制备80mg的根据实施例1的样品2，将其与9mg维生素E、9mg维生素C、10g葡萄糖、0.6g柠檬酸和25g液体低聚糖混合，然后通过加入400ml经纯化的水进行填充。将其装入瓶中后，将瓶在30℃灭菌4-5秒以制备饮品。
[制剂实施例4]颗粒
通过制备150mg的根据实施例1的样品2来制备颗粒，将其与9mg维生素E、9mg维生素C、250mg无水结晶葡萄糖和550mg淀粉混合，然后使用流化床制粒机将其模制成颗粒，然后将其装入到袋中。
[制剂实施例5]健康食品
制备150mg的根据实施例1的样品2，将其与维生素混合物(70μg维生素A乙酸酯，1.0mg维生素E，0.13mg维生素B1、0.15mg维生素B2、0.5mg维生素B6、0.2μg维生素B12、10mg维生素C，10μg生物素、1.7mg尼古丁酸酰胺(nicotine acid amide)、50μg叶酸)和矿物质混合物(1.75mg硫酸亚铁、0.82mg氧化锌、25.3mg碳酸镁、15mg磷酸二氢钾(potassiumphosphate monobasic)、55mg多元磷酸钾(potassium phosphate polybasic)、90mg柠檬酸钾、100mg碳酸钙、24.8mg氯化镁)混合以制备保健食品。
[制剂实施例6]健康饮料
制备50mg的根据实施例1的样品2，并将其与1000mg柠檬酸、100g低聚糖、2g李子浓缩物、1g牛磺酸和余量的纯化的水混合以制备900mL健康饮料。
[制剂实施例7]安瓿(ample)
制备10mg的根据实施例1的样品2，将其与麦芽糖糊精混合，然后添加15ml的纯化的水，并装入安瓿瓶中。将瓶子消毒以制备液体安瓿。
根据本公开的一方面的提取物和组合物衍生自对皮肤造成较少刺激并且是生态友好的天然植物，因此它们是安全的，并因此所述提取物和组合物可以表现出有效抑制MMP-1表达和预防或改善皮肤皱纹的优异效果。
另外，根据本公开的一方面的提取物和组合物衍生自对皮肤造成较少刺激并且是生态友好的天然植物，因此它们是安全的，并因此所述提取物和组合物可以表现出有效抑制黑色素产生和酪氨酸酶活性和预防或改善皮肤美白的优异效果。
尽管已经针对特定实施方案描述了本公开，但是对于本领域技术人员来说明显的是，在不脱离如所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种改变和修改。
Claims (14)
1.一种绿茶叶提取物用于制备用于预防或改善皮肤皱纹的组合物的用途，所述绿茶叶提取物基于所述提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯(EGCG)，其中基于所述提取物的总重量，EGCG、(-)-表没食子儿茶素(EGC)、(-)表儿茶素(EC)、表儿茶素3-O-没食子酸盐/酯(ECG)、GCG、没食子儿茶素(GC)、儿茶素(C)和儿茶素没食子酸盐/酯(CG)的总量为19至30重量%，其中所述提取物中GCG:EGCG的重量比是1:0.5至2，并且其中基于所述提取物的总重量，EGCG、EGC、EC和ECG的量为20重量%或更少。
2.权利要求1的用途，其中所述提取物是通过使用水和C1-C4醇的一种或多种提取一次或多次而获得的提取物。
3.权利要求1的用途，其中所述提取物在所述组合物中的量相对于所述组合物的总重量为1重量%至100重量%。
4.权利要求1的用途，其中所述提取物的剂量为5mg / kg /天至1000mg / kg /天。
5.权利要求1的用途，其中所述提取物抑制MMP-1 (基质金属蛋白酶-1)的表达。
6.权利要求1至5任一项的用途，其中所述组合物是药物或化妆品组合物。
7. 一种绿茶叶提取物用于制备用于皮肤美白的组合物的用途，所述绿茶提取物基于所述提取物的总重量包含4至15重量％的(-)-没食子儿茶素没食子酸盐/酯(GCG)和4至15重量％的(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐/酯 (EGCG)，其中基于所述提取物的总重量，EGCG、(-)-表没食子儿茶素(EGC)、(-)表儿茶素(EC)、表儿茶素3-O-没食子酸盐/酯(ECG)、GCG、没食子儿茶素(GC)、儿茶素(C)和儿茶素没食子酸盐/酯(CG)的总量为19至30重量%，并且其中基于所述提取物的总重量，EGCG、EGC、EC和ECG的量为20重量%或更少。
8.权利要求7的用途，其中所述提取物中GCG:EGCG的重量比为1:0.5至2。
9.权利要求7的用途，其中所述提取物是通过使用水和C1-C4醇的一种或多种提取一次或多次而获得的提取物。
10.权利要求7的用途，其中所述提取物在所述组合物中的量相对于所述组合物的总重量为1重量%至100重量%。
11. 权利要求7的用途，其中所述提取物的剂量为5mg / kg /天至1000mg / kg /天。
12.权利要求7的用途，其中所述提取物抑制黑色素的产生。
13.权利要求7的用途，其中所述提取物抑制酪氨酸酶的活性。
14.权利要求7至13中任一项的用途，其中所述组合物是药物或化妆品组合物。
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