KR20190047873A - 특정 성분 함량이 증가된 차 추출물을 포함하는 지방대사 이상의 예방 및 개선용 조성물 - Google Patents

특정 성분 함량이 증가된 차 추출물을 포함하는 지방대사 이상의 예방 및 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 명세서는 특정 성분 함량이 증가된 차 추출물을 포함하는 지방대사 이상의 예방 및 개선용 조성물에 관한 것으로서, 본 명세서에 따른 제조방법 및 조성물을 이용하여, 비만을 포함한 지방대사 이상을 부작용 없이 효과적으로 예방 및 치료할 수 있으므로, 관련 수요를 충족하고 해당 산업의 발전을 도모할 수 있을 것이다.

Description

특정 성분 함량이 증가된 차 추출물을 포함하는 지방대사 이상의 예방 및 개선용 조성물{COMPOSITION FOR PREVENTING AND IMPROVING LIPID METABOLISM-RELATED DISORDER CONTAINING TEA EXTRACT WHICH INCLUDES ELEVATED AMOUNTS OF SPECIFIC INGREDIENT}
본 명세서는 특정 성분 함량이 증가된 차 추출물을 포함하는 지방대사 이상의 예방 및 개선용 조성물에 관한 것이다.
비만은 체내에 지방조직이 과다한 상태로, 섭취하는 열량이 소비하는 열량보다 많을 경우 발생하며, 또한 정신및 사회적 요인, 유전, 질병, 약물 등의 다양한 원인으로 발생한다. 2010년 세계 보건기구(WHO)에 따르면, 과체중 성인 인구는 전 세계적으로 약 16억 명, 비만인은 약 4억 명으로 집계되었으며, 매년 260만 명이 비만과 과체중으로 사망한다고 보고되었다. 우리나라의 경우에도 보건복지부와 질병관리본부의 보고에 따르면 성인 비만율은 계속적으로 증가하고 있는 추세이며, 2010년을 기준으로 30.8%(남자 36.3%, 여자 24.8%)로 나타났다. 이처럼 비만 인구는 전 세계적으로 계속적으로 증가하고 있으며, 이에 따른 의료비 부담도 증가하고 있는 추세이다. 비만은 현대인이 가질 수 있는 가장 흔한 질병 중 하나가 되었다.
비만은 식이요법, 규칙적인 운동과 더불어 행동요법과 같은 생활습관의 개선, 및 식욕억제제와 지방 흡수 억제제와 같은 약물을 통해 관리할 수 있다. 비만은 만성 질환이기 때문에 약물치료를 시도하는 경우 장기간의 사용이 필요하며, 현재 국내에서 3개월 이상 장기간 사용이 허가된 제품으로는 식욕억제제인 시부트라민(sibutramine)과 지방분해효소 억제제인 올리스타트(orlistat)가 있다. 그러나 이러한 비만 치료 약물들은 상당수가 중추신경계에 작용하여 식욕을 조절하는 향정신성의약품들이므로 두통 및 구토 등의 부작용을 동반하며 남용우려 등의 문제점이 있다. 비만을 부작용 없이 효과적으로 치료할 수 있는 약물이나 식품에 대한 수요가 지속되고 있는 만큼, 비만을 예방하고 치료할 수 있는 천연물 유래의 제품 발굴이 시급한 실정이다.
대한민국 등록특허 제10-1685876호(2016년12월06일)
본 명세서는 비만을 포함한 지방대사 이상을 예방하고 치료할 수 있는 천연물 유래의 추출물 및 조성물의 발굴을 그 과제로 한다.
상기 과제의 해결을 위해, 본 명세서는 조성물 총 중량을 기준으로, 1 내지 5 중량%의 (-)-갈로카테킨 갈레이트((-)-gallocatechin gallate, GCG), 0.1 내지 0.5 중량%의 (-)-카테킨 갈레이트((-)-catechin gallate, CG), 및 0.8 내지 4중량%의 (-)-에피갈로카테킨 갈레이트((-)-epigallocatechin gallate, EGCG)를 포함하는 녹차 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방대사 이상의 예방 및 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 본 명세서는 (1) 녹차에 수분을 조정하고 바실러스 속 균주를 접종하는 단계; (2) 40 내지 60도씨에서 유지하는 단계; (3) 70 내지 80도씨에서 숙성하는 단계; 및 (4) 물 및 C1 내지 C6의 알코올 중 어느 하나 이상을 가하고 50℃ 내지 80℃에서 추출하는 단계를 포함하는 지방대사 이상의 예방 및 개선용 조성물의 제조방법을 제공한다.
아울러, 본 명세서는 녹차 추출물 내 (-)-갈로카테킨 갈레이트((-)-gallocatechin gallate, GCG) 함량을 극대화시키는 방법을 제공하는 것이기도 하다.
본 발명의 일 측면에 따른 제조방법 및 조성물을 이용하여, 비만을 포함한 지방대사 이상을 부작용 없이 효과적으로 예방 및 치료할 수 있으므로, 관련 수요를 충족하고 해당 산업의 발전을 도모할 수 있을 것이다.
도 1은 본 발명의 일 측면에 따른 특정성분의 함량이 증가된 녹차추출물에 의한 체중증가 억제 효과를 다른 군과 비교한 것이다.
도 2는 본 발명의 일 측면에 따른 특정성분의 함량이 증가된 녹차추출물에 의한 지방조직 무게 감소 효과를 다른 군과 비교한 것을 도시한 것이다.
도 3은 본 발명의 일 측면에 따른 특정성분의 함량이 증가된 녹차추출물에 의한 지방간 개선 효과를 다른 군과 비교한 것이다.
도 4는 본 발명의 일 측면에 따른 특정성분의 함량이 증가된 녹차추출물에 의한 혈중 중성지방 개선 효과를 다른 군과 비교한 것이다.
도 5는 본 발명의 일 측면에 따른 특정성분의 함량이 증가된 녹차추출물에 의한 지방조직 염증반응 개선 효과를 다른 군과 비교한 것이다.
도 6은 본 발명의 일 측면에 따른 특정성분의 함량이 증가된 녹차추출물 내의 성분별 및 조건별 함량 변화를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 일 측면에 따른 특정성분의 함량이 증가된 녹차추출물 내의 총카테킨 함량 변화를 시간별 및 조건별로 나타낸 것이다.
도 8은 본 발명의 일 측면에 따른 특정성분의 함량이 증가된 녹차추출물 내의 GCG와 CG의 함량 변화를 시간별 및 조건별로 나타낸 것이다.
본 명세서에서 “녹차 추출물”은 추출방법, 추출용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 차과에 속하는 상록수인 차(카멜리아 시넨시스; Camellia sinensis)로부터 추출한 것 또는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis spp.)를 접종하고 발효시킨 차잎 등으로부터 추출한 것을 포함하고, 상기 추출한 것을 특정 용매로 분획한 분획물을 포함한다. 상기 차는 차나무 잎, 꽃, 줄기, 열매, 뿌리, 줄기, 및 뿌리의 심재로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상이 포함되며, 바람직하게는 잎일 수 있다. 또한, 상기 추출물의 형태는 바람직하게는 분말형태일 수 있다. 상기 추출 또는 분획은 물, 유기 용매, 또는 이들의 혼합용매를 사용하여 할 수 있다. 유기용매는 알코올, 이소프로판올, 아세톤, 헥산, 에틸아세테이트, 이산화탄소, 또는 이들 중 둘 이상의 혼합용매를 사용할 수 있으나 이에 한정되지는 않으며, 녹차의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출 또는 분획할 수 있다. 상기 알코올은 C1~C6의 저급 알코올일 수 있다. 추출 또는 분획의 횟수나 방법은 특별히 제한되지 않으며, 예를 들어 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출, 열수 추출 등의 방법을 사용할 수 있고, 바람직하게는 냉침 또는 가온하여 유효성분을 추출 또는 분획하고 여과한 다음, 그 여과액을 감압농축하여 본 발명의 녹차 추출물을 얻을 수 있다.
본 명세서에서 "약학적으로 허용 가능"이란 통상의 의약적 복용량(medicinal dosage)으로 이용할 때 상당한 독성 효과를 피함으로써, 동물, 더 구체적으로는 인간에게 사용할 수 있다는 정부 또는 이에 준하는 규제 기관의 승인을 받을 수 있거나 승인 받거나, 또는 약전에 열거되거나 기타 일반적인 약전에 기재된 것으로 인지되는 것을 의미한다.
본 명세서에서 "약학적으로 허용 가능한 염"은 약학적으로 허용 가능하고 모 화합물(parent compound)의 바람직한 약리 활성을 갖는 본 발명의 일 측면에 따른 염을 의미한다.
본 명세서에서 “총카테킨”은 에피카테킨 4종(에피갈로카테킨(EGC), (-)에피카테킨(EC), (-)-에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG), 및 에피카테킨 3-O-갈레이트(ECG))의 총합을 의미한다.
본 발명은 일 측면에서, 조성물 총 중량을 기준으로, 1 내지 5 중량%의 (-)-갈로카테킨 갈레이트((-)-gallocatechin gallate, GCG), 0.1 내지 0.5 중량%의 (-)-카테킨 갈레이트((-)-catechin gallate, CG), 및 0.8 내지 4 중량%의 (-)-에피갈로카테킨 갈레이트((-)-epigallocatechin gallate, EGCG)를 포함하는 녹차 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방대사 이상의 예방 및 개선용 조성물일 수 있다.
일 구현 예로서, 상기 GCG의 함량은 1중량%이상, 2중량%이상, 2.9중량%이상, 2.92중량%이상, 3중량%이상, 3.1중량%이상, 3.12중량%이상, 3.15중량%이상, 3.3중량%이상, 3.5중량%이상, 3.8중량%이상, 4.0중량%이상, 4.2중량%이상, 4.4중량%이상, 4.6중량%이상, 또는 4.8중량%이상일 수 있다. 다른 구현 예로서, 상기 GCG의 함량은 5중량%이하, 4.8중량%이하, 4.6중량%이하, 4.4 중량%이하, 4.2중량%이하, 4중량%이하, 3.5중량%이하, 3.4중량%이하, 3.3중량%이하, 3.2중량%이하, 3.12중량%이하, 3.1중량%이하, 2.95중량%이하, 2.92중량%이하, 2.9중량%이하, 2.51중량%이하, 2.4중량%이하, 2.2중량%이하, 1.5중량%이하, 1.8중량%이하, 1.5중량%이하 또는 1.3중량%이하일 수 있다.
일 구현 예로서, 상기 CG의 함량은 0.1중량%이상, 0.2중량%이상, 0.3중량%이상, 0.31중량%이상, 0.35중량%이상, 0.36중량%이상, 0.38중량%이상, 0.39중량%이상, 0.4중량%이상, 0.42중량%이상, 0.45중량%이상 또는 0.48중량%이상일 수 있다. 다른 구현 예로서, 상기 CG의 함량은 0.5중량%이하, 0.48중량%이하, 0.46중량%이하, 0.44중량%이하, 0.42중량%이하, 0.4중량%이하, 0.39중량%이하, 0.38중량%이하, 0.36중량%이하, 0.35중량%이하, 0.32중량%이하, 0.3중량%이하, 0.29중량%이하, 0.28중량%이하, 0.25중량%이하, 0.2중량%이하 또는 0.15중량%이하일 수 있다.
일 구현 예로서, 상기 EGCG의 함량은 0.8중량% 이상, 0.9중량% 이상, 1.0중량% 이상, 1.1중량% 이상, 1.2중량% 이상, 1.3중량% 이상, 1.4중량% 이상, 1.5중량% 이상, 1.8중량% 이상, 2중량% 이상, 2.2중량% 이상, 2.4중량% 이상, 2.5중량% 이상, 2.6중량% 이상, 2.8중량% 이상, 3중량% 이상, 3.2중량% 이상, 3.4중량% 이상, 3.6중량% 이상, 3.7중량% 이상, 3.8중량% 이상 또는 3.9중량% 이상일 수 있다. 다른 구현 예로서, 상기 EGCG의 함량은 4중량% 이하, 3.9중량% 이하, 3.8중량% 이하, 3.7중량% 이하, 3.6중량% 이하, 3.4중량% 이하, 3.2중량% 이하, 3중량% 이하, 2.8중량% 이하, 2.6중량% 이하, 2.4중량% 이하, 2.2중량% 이하, 2중량% 이하, 1.8중량% 이하, 1.6중량% 이하, 1.4중량% 이하, 1.2중량% 이하, 1.0중량% 이하 또는 0.9중량% 이하일 수 있다.
일 구현 예로서, 상기 조성물 내의 총카테킨의 함량은 조성물 전체 중량 기준으로 10중량% 이하, 8중량% 이하, 7.5중량% 이하, 7.45중량% 이하, 또는 7중량% 이하일 수 있다. 다른 구현 예로서, 상기 총카테킨의 함량은 6중량% 이상, 6.5중량% 이상, 7중량% 이상, 7.4중량% 이상, 7.44중량% 이상, 7.5중량% 이상, 8중량% 이상 또는 9중량% 이상일 수 있다.
상기 GCG, CG, EGCG, 총카테킨의 함량이 상기 범위를 벗어날 경우, 하기하는 실험예의 효과가 발휘되지 않거나, 효과 수준이 일반 녹차 추출물과 비슷해진다.
총카테킨 함량은, 시간에 따라 안정성이 떨어지는 EGCG 때문에 안정성이 문제될 수 있고, 따라서 총카테킨 함량을 기준으로 하는 효능의 경우 유지되기 어려울 가능성이 높다(도 6 참조). 본 발명의 일 측면에 따른 추출물은, 총카테킨 함량은 적으면서도 훨씬 우수한 효과를 발휘하는 녹차추출물에 관한 것으로서, 기존의 일반 녹차 추출물에서는 확인되지 않았던 GCG 성분의 함량을 극대화하여, 기존의 녹차 추출물보다 지방대사 이상에 대한 효과 면에서 현저하게 우수한 결과를 나타내었다(하기 실험예 참조).
일 측면에서, 상기 추출물 내의 EGCG : GCG의 중량비는 2 : 0.5 내지 12.5이상일 수 있다. 일 구현 예로서, 상기 중량비는 2:0.5이상, 2:0.7이상, 2:0.9이상, 2:1이상, 2:1.2이상, 2:1.4이상, 2:1.5이상, 2:1.6이상, 2:1.7이상, 2:1.8이상, 2:2이상, 2:2.2이상, 2:2.4이상, 2:2.6이상, 2:2.8이상, 2:3이상, 2:3.2이상, 2:3.4이상, 2:3.6이상, 2:3.8이상, 2:4이상, 2:4.2이상, 2:4.5이상, 2:4.8이상, 2:5이상, 2:6이상, 2:7이상, 2:8이상, 2:9이상, 2:10이상, 2:11이상 또는 2:12이상일 수 있다. 다른 구현 예로서, 상기 중량비는 2:12.5이하, 2:12이하, 2:11이하, 2:10이하, 2:9이하, 2:8이하, 2:7이하, 2:6이하, 2:5.5이하, 2:5이하, 2:4.8이하, 2:4.6이하, 2:4.4이하, 2:4.2이하, 2:4이하, 2:3.8이하, 2:3.6이하, 2:3.4이하, 2:3.2이하, 2:3이하, 2:2.8이하, 2:2.6이하, 2:2.4이하, 2:2.2이하, 2:2이하, 2:1.8이하, 2:1.6이하, 2:1.4이하, 2:1.2이하, 2:1이하, 2:0.8이하 또는 2:0.6이하일 수 있다. 바람직하게는 2 : 1.5 내지 5일 수 있다.
다른 측면에서, 상기 추출물 내의 GCG : CG의 중량비는 1 : 0.02 내지 0.3일 수 있다. 일 구현 예로서, 상기 중량비는 1:0.02이상, 1:0.03이상, 1:0.04이상, 1:0.05이상, 1:0.08이상, 1:0.1이상, 1:0.12이상, 1:0.15이상, 1:0.18이상, 1:0.2이상, 1:0.23이상, 1:0.26이상 또는 1:0.28이상일 수 있다. 다른 구현 예로서, 상기 중량비는 1:0.3이하, 1:0.28이하, 1:0.26이하, 1:0.24이하, 1:0.22이하, 1:0.2이하, 1:0.18이하, 1:0.16이하, 1:0.14이하, 1:0.12이하, 1:0.1이하, 1:0.08이하, 1:0.06이하, 1:0.04이하 또는 1:0.03이하일 수 있다. 바람직하게는 1 : 0.05 내지 0.3일 수 있다.
상기 EGCG : GCG의 중량비 또는 GCG : CG의 중량비가 상기 범위를 벗어날 경우 하기 지방대사 이상을 예방 및 개선하는 효과가 미미하거나 일반 녹차 추출물과 비슷해질 수 있다.
일 측면에서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 알코올 및 이들의 혼합물 중 어느 하나 이상에 의해 1회 이상 추출한 추출물일 수 있다. 일 구현 예로서 상기 알코올은 에탄올일 수 있다. 다른 구현 예로서, 상기 혼합물의 경우 알코올의 농도는 20%(v/v) 이상, 30%(v/v) 이상, 40%(v/v) 이상, 50%(v/v) 이상, 60%(v/v) 이상 또는 70%(v/v) 이상일 수 있다. 또 다른 구현 예로서, 상기 혼합물의 경우 알코올의 농도는 80%(v/v) 이하, 70%(v/v) 이하, 60%(v/v) 이하, 50%(v/v) 이하, 40%(v/v) 이하 또는 30%(v/v) 이하일 수 있다. 상기 알코올 농도 범위를 벗어날 경우 녹차 내 유효성분이 충분히 추출되지 않거나, 추출된 성분이 변형 및 파괴될 수 있다.
다른 측면에서, 상기 조성물 내 상기 추출물의 함량은 건조중량 기준으로 1중량% 내지 100중량%일 수 있다. 일 구현 예로서, 상기 추출물의 함량은 1중량%이상, 5중량%이상, 10중량%이상, 20중량%이상, 30중량%이상, 40중량%이상, 50중량%이상, 60중량%이상, 70중량%이상, 80중량%이상 또는 90중량%이상일 수 있다. 다른 구현 예로서 상기 추출물의 함량은 100중량%이하, 90중량%이하, 80중량%이하, 70중량%이하, 60중량%이하, 50중량%이하, 40중량%이하, 30중량%이하, 20중량%이하, 10중량%이하, 5중량%이하 또는 3중량%이하일 수 있다.
일 측면에서, 상기 유효성분의 투여량은 건조중량 기준으로 5mg/kg/일 내지 1000mg/kg/일일 수 있다. 일 구현 예로서 상기 투여량은 5mg/kg/일 이상, 10mg/kg/일 이상, 30mg/kg/일 이상, 50mg/kg/일 이상, 70mg/kg/일 이상, 100mg/kg/일 이상, 120mg/kg/일 이상, 150mg/kg/일 이상, 180mg/kg/일 이상, 200mg/kg/일 이상, 250mg/kg/일 이상, 300mg/kg/일 이상, 350mg/kg/일 이상, 400mg/kg/일 이상, 500mg/kg/일 이상, 600mg/kg/일 이상, 700mg/kg/일 이상, 800mg/kg/일 이상 또는 900mg/kg/일 이상일 수 있다. 다른 구현 예로서, 상기 투여량은 1000mg/kg/일 이하, 900mg/kg/일 이하, 800mg/kg/일 이하, 700mg/kg/일 이하, 600mg/kg/일 이하, 500mg/kg/일 이하, 450mg/kg/일 이하, 400mg/kg/일 이하, 350mg/kg/일 이하, 300mg/kg/일 이하, 250mg/kg/일 이하, 200mg/kg/일 이하, 180mg/kg/일 이하, 150mg/kg/일 이하, 100mg/kg/일 이하, 50mg/kg/일 이하, 20mg/kg/일 이하, 10mg/kg/일 이하 또는 8mg/kg/일 이하일 수 있다. 상기 투여량의 범위를 벗어날 경우, 상기 조성물로서 원하는 효과를 달성할 수 없거나, 신체가 감당하기 어려운 급격한 효과가 발생할 수 있다.
일 측면에서, 상기 조성물의 투여경로는 경구투여일 수 있다.
다른 측면에서, 상기 지방대사 이상은 비만, 고지혈증 및 지방간으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나에 기한 것일 수 있다.
또 다른 측면에서, 상기 지방대사 이상은 체중증가, 지방조직 무게 증가, 간조직 내 지방 증가, 혈중 중성 지방 증가 및 지방조직 염증 증가로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 의한 것일 수 있다. 본 발명의 일 측면에 따라, 특정 성분의 함량이 증가된 녹차 추출물은 기존 녹차 추출물에 비해 체중의 증가를 현저하게 억제시키고, 이는 지방 조직 무게의 현저한 감소에 기인한 것이며, 혈중 중성지방 증가를 현저히 억제하고, 간 조직 내 지방을 효과적으로 줄이며, 나아가 지방조직 염증 반응을 현저하게 완화시킴을 확인하였다(하기 실험예 참조).
또 다른 측면에서, 상기 지방대사 이상은 MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1) 발현 증가 또는 지방조직 내 염증에 의한 것일 수 있다. 일 구현 예로서, 상기 조성물은 아디포넥틴 발현을 증가시키는 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따라, 특정 성분의 함량이 증가된 녹차 추출물은 기존 녹차 추출물에 비해 MCP-1의 발현을 현저히 억제하고, 항염증 효능을 가지는 아디포넥틴의 발현은 현저하게 증가시켰다. 따라서, MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1) 발현 증가 또는 지방조직 내 염증에 의한 지방대사 이상(예를 들어, 비만, 체중증가 등)을 효과적으로 예방, 치료 및 개선할 수 있는 것이다.
일 측면에서, 상기 조성물은 식품 또는 약학 조성물일 수 있다.
상기 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 환제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바, 티백 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업계의 통상의 기술자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다. 또한 상기 식품은 건강기능식품일 수도 있다.
상기 조성물은 단순 섭취, 음용, 주사 투여, 스프레이 투여 또는 스퀴즈 투여 등 다양한 방법으로 투여될 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 식품 조성물에 있어서, 상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업계의 통상의 기술자의 수준 내에 있으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 식품 조성물은, 예를 들어, 츄잉껌, 캐러멜 제품, 캔디류, 빙과류, 과자류 등의 각종 식품류, 청량 음료, 미네랄 워터, 알코올 음료 등의 음료 제품, 비타민이나 미네랄 등을 포함한 건강기능식품 제품일 수 있다.
상기 외에, 본 발명의 일 측면에 따른 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 일측면에 따른 식품 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않으나 본 발명의 일측면에 따른 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 60 중량부의 범위에서 포함되는 것이 일반적이다.
본 발명의 일측면에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다. 경구 투여를 위한 제형은 정제(錠劑), 환제(丸劑), 연질 및 경질 캅셀제, 과립제(顆粒劑), 산제, 세립제, 액제, 유탁제(乳濁濟) 또는 펠렛제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여를 위한 제형은 용액제, 현탁제, 유액제, 겔, 주사제, 점적제, 좌제(坐劑), 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 제형은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 용이하게 제조될 수 있으며, 계면 활성제, 부형제, 수화제, 유화 촉진제, 현탁제, 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제, 착색제, 향신료, 안정화제, 방부제, 보존제 또는 기타 상용하는 보조제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 염을 포함할 수도 있는데, 상기 염은 (1) 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산으로 형성되거나; 또는 아세트산, 프로파이온산, 헥사노산, 시클로펜테인프로피온산, 글라이콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일) 벤조산, 신남산, 만델산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 1,2-에테인-디설폰산, 2-히드록시에테인설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캄퍼설폰산, 4-메틸바이시클로 [2,2,2]-oct-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로파이온산, 트리메틸아세트산, tert-부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산과 같은 유기산으로 형성되는 산 부가염(acid addition salt); 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 프로톤이 치환될 때 형성되는 염을 포함할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 상기 약학 조성물의 적용량 또는 투여량은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 유효성분 투여량 결정은 당업계 통상의 기술자의 수준 내에 있다.
본 발명은 다른 측면에서, (1) 녹차에 수분을 조정하고 사카로마이세스속(Saccharomyces sp.), 락토바실러스속(Lactobacillus sp.) 바실러스속(Bacillus sp.) 및 루코노스톡속(Leuconostoc mesenteroides sp.)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주를 접종하는 단계; (2) 40 내지 60도씨에서 유지하는 단계; (3) 70 내지 80도씨에서 숙성하는 단계; 및 (4) 물 및 C1 내지 C6의 알코올 중 어느 하나 이상을 가하고 50℃ 내지 80℃에서 추출하는 단계를 포함하는, 지방대사 이상의 예방 및 개선용 조성물을 제조하는 방법일 수 있다.
본 발명은 또 다른 측면에서, (1) 녹차에 수분을 조정하고 바실러스 속 균주를 접종하는 단계; (2) 40 내지 60도씨에서 유지하는 단계; (3) 70 내지 80도씨에서 숙성하는 단계; 및 (4) 물 및 C1 내지 C6의 알코올 중 어느 하나 이상을 가하고 50℃ 내지 80℃에서 추출하는 단계를 포함하는, 녹차 추출물 내 (-)-갈로카테킨 갈레이트((-)-gallocatechin gallate, GCG) 함량을 극대화시키는 방법에 관한 것일 수 있다.
일 측면에서, 상기 (1) 단계의 균주는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtlis), 락토바실러스 불가리우스(Lactobacillus bulgarius) 및 루코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
일 구현 예로서, 상기 균주는 한국식품연구원 '식품 미생물 유전자은행'으로부터 분양받은 균주이거나, 기타 연구기관 보유군주 또는 상용화된 균주일 수 있으며, 구체적으로 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae, ATCC9763), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei, KFRI000127), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtlis, F4041, F4163), 락토바실러스 불가리우스(Lactobacillus bulgarius, KFRI000344) 및 루코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides, KFRI 818)로부터 선택된 균주일 수 있다.
다른 구현 예로서, 상기 녹차는 건조된 녹차 잎, 예를 들어 수분 함량 5중량% 미만의 건엽을 사용하는 경우, 상기 건엽에 물을 첨가하여 사용할 수 있다. 일 측면에서 상기 물은 물이 첨가된 녹차 잎 총 중량에 대하여 수분 함량이 20중량% 이상, 25중량% 이상, 30중량% 이상, 35중량% 이상, 40중량% 이상, 50중량% 이상, 60 중량% 이상이 되도록 첨가할 수 있다. 다른 측면에서 상기 물은 상기 수분 함량이 70중량% 이하, 65중량%이하, 60중량% 이하, 50중량% 이하, 45중량% 이하, 35중량% 이하, 30중량% 이하가 되도록 첨가할 수 있다. 상기 범위 내에서 균주의 활성을 증진시킬 수 있으며, 녹차 잎의 균일한 품질 유지 및 가공 용이성을 증진시킬 수 있다. 수분 함량이 상기 범위 미만인 경우 녹차 잎의 균일한 품질 유지가 어려울 수 있으며, 상기 범위를 초과하는 경우 녹차 잎끼리 부착되어 가공 공정에 문제가 발생할 수 있고, 최종 제품의 성분 변화의 원인이 될 수 있다.
다른 측면에서, 상기 (2) 단계의 유지 시간은 12시간 내지 120시간일 수 있다. 일 구현 예로서, 상기 시간은 12시간 이상, 24시간 이상, 28시간 이상, 32시간 이상, 34시간 이상, 36시간 이상, 40시간 이상, 48시간 이상, 50시간 이상, 60시간 이상, 80시간 이상 또는 100시간 이상일 수 있다. 다른 구현 예로서 상기 시간은 120시간 이하, 100시간 이하, 80시간 이하, 60시간 이하, 50시간 이하, 48시간 이하, 40시간 이하, 36시간 이하, 34시간 이하, 32시간 이하, 28시간 이하, 24시간 이하 또는 18시간 이하일 수 있다.
다른 측면에서, 상기 (3) 단계의 숙성 시간은 24 내지 60시간일 수 있다. 일 구현 예로서 상기 숙성 시간은 24시간 이상, 26시간 이상, 28시간 이상, 30시간 이상, 32시간 이상, 34시간 이상, 36시간 이상, 40시간 이상, 42시간 이상, 44시간 이상, 46시간 이상, 48시간 이상, 50시간 이상, 52시간 이상, 54시간 이상, 56시간 이상 또는 58시간 이상일 수 있다. 다른 예로서 상기 숙성 시간은 60시간 이하, 58시간 이하, 56시간 이하, 54시간 이하, 52시간 이하, 50시간 이하, 48시간 이하, 46시간 이하, 44시간 이하, 42시간 이하, 40시간 이하, 38시간 이하, 36시간 이하, 34시간 이하, 32시간 이하, 30시간 이하, 28시간 이하 또는 26시간 이하일 수 있다.
일 구현 예로서, 상기 (2) 단계의 유지 시간 및 (3) 단계의 숙성 시간 중 하나 이상은 GCG 또는 CG의 함량을 추적(tracking) 하면서 결정하는 것일 수 있다.
상기 유지 및 숙성 시간을 벗어날 경우 본 발명의 일 측면에 따른 성분 조성을 가지는 추출물이 제조되지 않을 수 있다.
일 측면에서 상기 (2) 단계의 온도는 40℃이상, 42℃이상, 44℃이상, 45℃이상, 48℃이상, 50℃이상, 52℃이상, 54℃이상, 55℃이상, 57℃이상 또는 58℃이상일 수 있다. 다른 측면에서 상기 (2) 단계의 온도는 60℃이하, 58℃이하, 56℃이하, 54℃이하, 52℃이하, 50℃이하, 48℃이하, 46℃이하, 44℃이하 또는 42℃이하일 수 있다. 상기 온도를 벗어나는 경우, 충분한 성분 추출이 어렵거나 추출된 성분의 변성이 일어날 수 있다.
일 구현 예로서, 상기 (3) 단계의 온도는 70℃이상, 72℃이상, 74 ℃이상, 76℃이상 또는 78℃이상일 수 있다. 다른 구현 예로서, 상기 (3) 단계의 온도는 80℃이하, 78℃이하, 76℃이하, 74℃이하 또는 72℃이하일 수 있다. 상기 온도를 벗어나는 경우, 충분한 성분 추출이 어렵거나 추출된 성분의 변성이 일어날 수 있다.
일 구현 예로서, 상기 (4) 단계의 온도는 50℃이상, 52℃이상, 54℃이상, 56℃이상, 58℃이상, 60℃이상, 62℃이상, 64℃이상, 66℃이상, 68℃이상, 70℃이상, 72℃이상, 74℃이상, 76℃이상 또는 78℃이상일 수 있다. 다른 구현 예로서 상기 (4) 단계의 온도는 80℃이하, 78℃이하, 76℃이하, 74℃이하, 72℃이하, 70℃이하, 68℃이하, 66℃이하, 64℃이하, 62℃이하, 60℃이하, 58℃이하, 56℃이하, 54℃이하 또는 52℃이하일 수 있다. 상기 온도를 벗어나는 경우, 충분한 성분 추출이 어렵거나 추출된 성분의 변성이 일어날 수 있어, 최종 결과물의 효과가 현저하게 감소할 수 있다.
이하, 실시예, 실험예, 및 제형예를 들어 본 명세서의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 예는 본 명세서에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 명세서의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.
[실시예 1] GCG 함량이 최대화된 녹차의 제조
신선한 녹차(Camellia sinensis var. Yabukita) 잎으로 만든 녹차(건엽)에 물을 첨가하여 수분 함량을 40중량%으로 조정하였다. 여기에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtillis) 5×106 cfu/g을 접종하고, 50℃에서 3일간 유지시켰다. 이후 80℃에서 36 내지 48시간 숙성하여 GCG 함량이 최대화된 녹차를 제조하였다. 상기 녹차 100g에 50%(v/v) 에탄올 수용액 1000ml를 가하고 60℃에서 3시간 환류추출하여 GCG 함량이 최대화된 녹차추출물(수율 32%)을 얻었다. 다만, 상기 방법은 일 예로서, GCG 함량을 극대화시키기 위한 제조방법이라면 어떤 방법이든 적용이 가능하다.
발효녹차추출물의 카테킨 함량 비교를 위하여 각 샘플을 얼라이언스(Alliance)사의 WATERS 2695 HPLC로 분석하였으며, ODS(C18) 컬럼을 이용하여 분석하였다. 상기 80℃ 에서 유지하는 시간에 따른 GCG를 포함하는 카테킨 함량은 표 1에 나타내었고, 이 과정에서의 GCG함량을 추적(tracking)하며 GCG가 가장 많은 양 존재하는 시간대를 확인하였다. 표 1에서 각 수치는 추출물 총 중량 대비 해당 성분의 중량%를 나타낸 것이다.
시간 EGCG GCG ECG CG
0h 16.88 - 2.7 -
12h 14.03 0.77 2.39 -
24h 7 2.49 0.78 0.19
36h 2.08 3.12 0.42 0.36
48h 2 2.92 0.38 0.31
60h 1.86 2.51 0.33 0.27
(상기 표의 ECG는 에피카테킨 3-O-갈레이트)
그 결과, 36 내지 48시간이 최적임을 알 수 있었고, 5일이 넘어가면 GCG 함량이 현저하게 줄어듦을 확인하였다. 상기 추출물은 일반 녹차 추출물에 비해 현저하게 낮은 EGCG 함량(2.08%) 및 총 카테킨 (7.44%)을 함유하는 반면, 일반 녹차 추출물에 존재하지 않았던 non-epimer 형태의 GCG가 생성되는 것으로 나타났다. 이로 보아, 상기 과정을 통해 특정성분(GCG)의 함량이 증가된 것이고, 이러한 특정성분(GCG)의 함량이 증가된 녹차추출물의 성분 조성은 녹차추출물의 그것과 완전히 다르다고 볼 수 있다.
상기 특정성분(GCG)의 함량이 증가된 녹차추출물에서 GCG의 함량이 1 내지 5 중량%일 때를 기준으로 다른 성분들을 확인한 결과, 총 카테킨은 10중량% 이하, EGCG는 0.8 내지 4중량%로 나타났고, CG는 0.1 내지 0.5중량%인 것으로 나타났다.
효능 비교를 위하여 일반적인 제조방법에 의한 녹차 추출물(예를 들어, 건강기능식품 기준 및 규격에 따른 고시형 녹차 추출물)을 동일한 조건으로 분석하였다. 일반 녹차 추출물과 상기 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물의 성분 함량 비교를 위하여 각 샘플을 얼라이언스(Alliance)사의 WATERS 2695 HPLC로 분석하였으며, ODS(C18) 컬럼을 이용하여 분석하였다. 이러한 분석 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 하기 표의 수치는 추출물 총중량 대비 해당 성분의 중량%(w/w)이다. 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물의 경우 상기 표 1의 36시간에서의 수치를 적용하였다.
조성물 EGC EC EGCG GCG ECG CG 총 카테킨
특정성분 함량이 증가된 녹차추출물 1.10 0.36 2.08 3.12 0.42 0.36 7.44
일반 녹차추출물 10.57 3.05 18.45 - 2.88 - 34.95
(EGC는 에피갈로카테킨, EC는 (-)에피카테킨, ECG는 에피카테킨 3-O-갈레이트)
특정성분 함량이 증가된 녹차추출물에는 일반 녹차추출물에 비해 현저하게 낮은 EGCG(2.08중량%) 및 총 카테킨 (7.44중량%) 을 함유하는 반면, 일반 녹차추출물에 존재하지 않았던 non-epimer 형태의 GCG가 생성되는 것을 알 수 있었다. 이로 보아 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물의 성분 조성은 녹차추출물의 그것과 완전히 다르다고 볼 수 있다.
한편, 시간 및 온도 등의 조건에 따른 각 성분의 안정성을 평가한 결과, 표 3과 같이 EGCG는 일정 기간 이후에 함량이 급감하여 총 카테킨 함량도 그에 따라 저하되는 것으로 나타났으나, GCG 및 CG는 상대적으로 안정적으로 유지되는 것을 알 수 있었다(도 6 내지 도 8 참조).
Figure pat00001
[실험예 1] 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물에 의한 체중증가 억제
상기 실시예 1에서 수득한 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물에 의한 체중증가 억제 효과를 확인하였다.
구체적으로, 8주령 수컷 C57BL/6 생쥐(n=9)를 각 군별로 구분하여 고지방 식이를 섭취하게 하면서 일반 녹차추출물, 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물을 각각 150 mg/kg씩 매일 10주간 경구 투여하고, 일주일 마다 체중을 측정하였다. 일반 녹차추출물 투여군에서 체중감소가 관찰되었으나 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물 투여군에서 체중 감소율이 현저하게 더 큼을 관찰하였다(도 1).
[실험예 2] 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물에 의한 지방조직의 무게량 감소 효과
실험예 1과 동일한 방법으로 실험을 수행하였으며 10주 후 부검 시 부고환지방조직을 적출하여 무게를 측정하였다. 동량의 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물이 일반 녹차추출물에 비해 고지방식이에 의한 지방조직 무게 증가를 더 효율적으로 억제하였음을 알 수 있었다(도 2).
[실험예 3] 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물에 의한 지방간 개선
실험예 1과 동일한 방법으로 실험을 수행하였으며 10주 후 부검 시 간 조직을 적출하여 조직병리분석을 수행하였다. 포름알데하이드로 고정 후 H&E staining을 하여 지방에 축정된 지방을 관찰하였다. 고지방식이로 증가한 간조직 내 지방이 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물에 의해 감소하였으며 이는 동량의 일반 녹차추출물보다 지방간 억제 효능이 뛰어났다(도 3).
[실험예 4] 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물에 의한 혈중 중성지방 개선
실험예 1과 동일한 방법으로 실험을 수행하였으며, 10주 후 부검 시 혈액을 추출한 뒤 원심분리로 혈장만을 추출한다. 혈장에서 중성지방 (triglyceride) 레벨을 측정한 결과, 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물이 고지방식이에 의한 혈중 중성지방 증가를 억제하였으며, 이는 일반 녹차추출물의 효능보다 뛰어났다(도 4).
[실험예 5] 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물에 의한 지방조직 염증반응 개선
비만으로 유도된 지방조직 증가는 지방조직에의 염증반응을 동반하는데 이는 비만과 같은 대사질환을 일으키는데 중요한 원인인자로 지목되고 있다. 실험예1과 동일한 방법으로 실험을 수행하여 10주 뒤 부검하여 지방조직에서 염증반응과 관련된 사이토카인의 발현을 측정하였다. 고지방식이로 증가한 염증성 분비물질인 MCP-1의 발현은 특정성분 함량이 증가된 녹차추출물에 의해 감소하였으며 감소하였던 항염증 효능을 가지는 아디포넥틴의 발현은 증가하였다. 또한 위 효능은 기존 일반 녹차추출물의 효능보다 뛰어남을 관찰하였다(도 5).
[제형예 1] 연질 캡슐
상기 실시예 1에 따라 특정성분이 증가된 추출물을 150mg으로 준비하고, 락토오스 440mg, 옥수수 전분 430mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합하여 연질 캡슐 충진액을 제조하였다. 그리고, 상기와 별도로 젤라틴 66 중량부, 글리세린 24 중량부 및 솔비톨액 10 중량부의 비율로 연질 캡슐 시트를 제조하고 상기 충진액을 충진시켜 연질 캡슐을 제조하였다.
[제형예 2] 정제
상기 실시예 1에 따라 특정성분이 증가된 추출물을 150mg으로 준비하고, 비타민 E 15mg, 비타민 C 15mg, 갈락토올리고당 250㎎, 유당 60㎎ 및 맥아당 140㎎을 혼합한 뒤 유동층 건조기를 이용하여 과립화한 후 당 에스테르(sugar ester) 8㎎을 첨가하였다. 이 조성물을 통상의 방법으로 타정하여 정제를 제조하였다.
[제형예 3] 드링크제
상기 실시예 1에 따라 특정성분이 증가된 추출물을 80mg 준비하고, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 400㎖를 가하여 충진하였다. 병에 충진한 후 30℃에서 4~5 초간 살균하여 드링크제를 제조하였다.
[제형예 4] 과립제
상기 실시예 1에 따라 특정성분이 증가된 추출물을 150mg 준비하고, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 무수결정 포도당 250㎎ 및 전분 550㎎을 혼합한 후, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 뒤 포에 충진하여 과립제를 제조하였다.
[제형예 5] 건강 식품
상기 실시예 1에 따라 특정성분이 증가된 추출물을 150 mg 준비하고, 비타민 혼합물(비타민 A 아세테이트 70 μg, 비타민 E 1.0 ㎎, 비타민 B1 0.13 ㎎, 비타민 B2 0.15 ㎎, 비타민 B6 0.5 ㎎, 비타민 B12 0.2 μg, 비타민 C 10 ㎎, 비오틴 10 μg, 니코틴산아미드 1.7 ㎎, 엽산 50 μg)과 무기질 혼합물(황산제1철 1.75 ㎎, 산화아연 0.82 ㎎, 탄산마그네슘 25.3 ㎎, 제1인산칼륨 15 ㎎, 제2인산칼슘 55 ㎎, 구연산칼륨 90 ㎎, 탄산칼슘 100 ㎎, 염화마그네슘 24.8 ㎎)을 조합하여 건강식품을 제조하였다.
[제형예 6] 건강 음료
상기 실시예 1에 따라 특정성분이 증가된 추출물을 50 mg 준비하고, 구연산 1000 ㎎, 올리고당 100 g, 매실농축액 2 g, 타우린 1 g, 정제수 잔량을 첨가하여 900 mL의 건강음료를 제조하였다.

Claims (17)

  1. 조성물 총 중량을 기준으로, 1 내지 5 중량%의 (-)-갈로카테킨 갈레이트((-)-gallocatechin gallate, GCG), 0.1 내지 0.5 중량%의 (-)-카테킨 갈레이트((-)-catechin gallate, CG), 및 0.8 내지 4 중량%의 (-)-에피갈로카테킨 갈레이트((-)-epigallocatechin gallate, EGCG)를 포함하는 녹차 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방대사 이상의 예방 및 개선용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추출물 내의 EGCG : GCG의 중량비는 2 : 1.5 내지 5인, 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 추출물 내의 GCG : CG의 중량비는 1 : 0.05 내지 0.3인, 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 알코올 및 이들의 혼합물 중 어느 하나 이상에 의해 1회 이상 추출한 추출물인, 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 조성물 내 상기 추출물의 함량은 건조중량 기준으로 1중량% 내지 100중량%인, 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 유효성분의 투여량은 건조중량 기준으로 5mg/kg/일 내지 1000mg/kg/일인, 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 조성물의 투여경로는 경구투여인, 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 지방대사 이상은 비만, 고지혈증 및 지방간으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나에 기한 것인, 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 지방대사 이상은 체중증가, 지방조직 무게 증가, 간조직 내 지방 증가, 혈중 중성 지방 증가 및 지방조직 염증 증가로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상에 의한 것인, 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 지방대사 이상은 MCP-1 발현 증가 또는 지방조직 내 염증에 의한 것인, 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 아디포넥틴 발현을 증가시키는 것인, 조성물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 식품 또는 약학 조성물인, 조성물.
  13. (1) 녹차에 수분을 조정하고 사카로마이세스속(Saccharomyces sp.), 락토바실러스속(Lactobacillus sp.) 바실러스속(Bacillus sp.) 및 루코노스톡속(Leuconostoc mesenteroides sp.)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주를 접종하는 단계;
    (2) 40 내지 60도씨에서 유지하는 단계;
    (3) 70 내지 80도씨에서 숙성하는 단계; 및
    (4) 물 및 C1 내지 C6의 알코올 중 어느 하나 이상을 가하고 50℃ 내지 80℃에서 추출하는 단계;
    를 포함하는, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 지방대사 이상의 예방 및 개선용 조성물을 제조하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 (1) 단계의 균주는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtlis), 락토바실러스 불가리우스(Lactobacillus bulgarius) 및 루코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인, 방법.
  15. 제13항에 있어서, 상기 (2) 단계의 유지 시간은 12시간 내지 120시간인, 방법.
  16. 제13항에 있어서, 상기 (3) 단계의 숙성 시간은 24 내지 60시간인, 방법.
  17. (1) 녹차에 수분을 조정하고 바실러스 속 균주를 접종하는 단계;
    (2) 40 내지 60도씨에서 유지하는 단계;
    (3) 70 내지 80도씨에서 숙성하는 단계; 및
    (4) 물 및 C1 내지 C6의 알코올 중 어느 하나 이상을 가하고 50℃ 내지 80℃에서 추출하는 단계;
    를 포함하는, 녹차 추출물 내 (-)-갈로카테킨 갈레이트((-)-gallocatechin gallate, GCG) 함량을 극대화시키는 방법.
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